nghiên cứu thành phần hóa học cây mã đề

Plantago major L. tên thường gọi là cây Mã đề, thuộc họ Mã đề (Plantaginaceae) là loại cây mọc hoang và được trồng phổ biến ở nhiều nơi trên khắp nước ta và nhiều nước trên thế giới. Đây là một cây dược liệu được dùng phổ biến, các bộ phận đã được sử dụng riêng biệt trong điều trị bệnh cho các vị thuốc khác nhau như: Xa tiền tử (Semen Plantaginis), Lá mã đề (Folium Plantaginis) hay Mã đề thảo (Herbal Plantaginis). Nó mang nhiều tác dụng dược lý có giá trị: tác dụng lợi tiểu, chữa ho, tác dụng kháng sinh, chữa lỵ cấp và mãn tính, tác dụng làm hưng phấn thần kinh,... ngoài ra lại ít độc với cơ thể sinh vật. Do đó, các vị thuốc từ cây Mã đề đã được quan tâm nghiên cứu và đã được tiêu chuẩn hoá trong sử dụng, các tiêu chuẩn về kiểm nghiệm dược liệu từ Mã đề có trong từ điển quốc gia. Như đã biết, tác dụng chữa bệnh của dược liệu được quy định bởi hoạt tính sinh, dược học của các hợp chất hoá học có trong đó. Mặc dù cây Mã đề đã được nghiên cứu nhiều cả về thành phần hoá học và hoạt tính sinh học, song cho đến nay nó vẫn đang thu hút được sự quan tâm đặc biệt của các nhà nghiên cứu trên thế giới. Với mong muốn góp phần tìm hiểu cây Mã đề, chúng tôi đã thực hiện đề tài: “Nghiên cứu thành phần hoá học cây Mã đề (Plantago major L., Plantaginaceae)”.

MỞ ĐẦU

Việt Nam có một thảm thực vật rất phong phú với hơn 12.000 loài bao gồm 2500 chi và 300 họ Nhiều loài trong đó đã được sử dụng từ lâu trong các lĩnh vực khác nhau của cuộc sống, đặc biệt là dùng làm thuốc chữa bệnh

Plantago major L tên thường gọi là cây Mã đề, thuộc họ Mã đề

(Plantaginaceae) là loại cây mọc hoang và được trồng phổ biến ở nhiều nơi trên khắp nước ta và nhiều nước trên thế giới Đây là một cây dược liệu được dùng phổ biến, các bộ phận đã được sử dụng riêng biệt trong điều trị bệnh cho các vị

thuốc khác nhau như: Xa tiền tử (Semen Plantaginis), Lá mã đề (Folium Plantaginis) hay Mã đề thảo (Herbal Plantaginis) Nó mang nhiều tác dụng

dược lý có giá trị: tác dụng lợi tiểu, chữa ho, tác dụng kháng sinh, chữa lỵ cấp và mãn tính, tác dụng làm hưng phấn thần kinh, ngoài ra lại ít độc với cơ thể sinh vật Do đó, các vị thuốc từ cây Mã đề đã được quan tâm nghiên cứu và đã được tiêu chuẩn hoá trong sử dụng, các tiêu chuẩn về kiểm nghiệm dược liệu từ Mã

đề có trong từ điển quốc gia

Như đã biết, tác dụng chữa bệnh của dược liệu được quy định bởi hoạt tính sinh, dược học của các hợp chất hoá học có trong đó Mặc dù cây Mã đề đã được nghiên cứu nhiều cả về thành phần hoá học và hoạt tính sinh học, song cho đến nay nó vẫn đang thu hút được sự quan tâm đặc biệt của các nhà nghiên cứu trên thế giới Với mong muốn góp phần tìm hiểu cây Mã đề, chúng tôi đã thực

hiện đề tài: “Nghiên cứu thành phần hoá học cây Mã đề (Plantago major L.,

Plantaginaceae)”

Theo hướng nghiên cứu này, luận văn có những nhiệm vụ sau:

1.Tách chiết và khảo sát sự có mặt của các lớp chất có trong cây Mã đề

(Plantago major L.).

2.Phân tách các phần chiết và phân lập một số thành phần chính

3.Khảo sát cấu trúc một số chất phân lập được

Chương 1 : TỔNG QUAN TÀI LIỆU

Plantago major L đã được sử dụng làm thuốc từ hàng thế kỷ nay Đây

là một cây dược liệu mang nhiều tác dụng dược lý có giá trị: tác dụng lợi tiểu, tác dụng chữa ho, kháng sinh, chữa lỵ cấp và mãn tính, tác dụng làm hưng phấn thần kinh, làm lành vết thương, chống viêm, giảm đau, chống oxy hoá, kháng sinh yếu, điều biến miễn dịch và chống loét ngoài ra lại ít độc với cơ thể sinh vật Theo kinh nghiệm sử dụng lưu truyền trong dân gian, các bệnh dùng mã đề

để điều trị bao gồm: bệnh có liên quan tới da, cơ quan hô hấp, cơ quan tiêu hoá,

di truyền, chuyển hoá, chống ung thư, giảm đau và chống nhiễm khuẩn Về thành phần hoá học, trong cây có chứa polysaccarit, lipid, dẫn xuất của axit caffeic, flavonoid, iridoid glycosid, alkaloid, terpennoid và các axit hữu cơ

1.1 THỰC VẬT HỌC [1, 2, 3 ]

1.1.1 HỌ MÃ ĐỀ (PLANTAGINACEAE).

Họ Mã đề, danh pháp khoa học: Plantaginaceae Juss., là một họ thực

vật có hoa trong bộ Hoa môi (Lamiales) Chi điển hình là Plantago L.

Họ Plantaginaceae nghĩa rộng (sensu lato) là một họ đa dạng, phổ biến

toàn cầu, nhưng chủ yếu tại các khu vực ôn đới Nó bao gồm chủ yếu là các cây thân thảo, cây bụi và một ít cây thủy sinh có rễ mọc trong đất (chẳng hạn chi

Callitriche) Lá của chúng mọc thành vòng xoắn hoặc mọc đối, các lá có dạng lá

đơn hay lá kép Cấu trúc và hình dạng của hoa rất đa dạng Một số chi có 4 đài hoa và 4 cánh hoa, những loài khác có từ 5-8 đài/cánh hoa, chẳng hạn chi

Sibthorpia Hoa của phần lớn các chi là đối xứng theo nhiều mặt phẳng Tràng

hoa thông thường có 2 môi Trong một số chi, bộ nhị được hình thành trước tràng hoa Quả là dạng quả nang, thường nứt ra tại các phần chia giữa các ngăn

Trong chi Veronica phần phân chia này theo chiều dài; trong các loài của chi Antirrhinum thì khi quả nứt nó giải phóng phấn hoa thông qua các lỗ ở đầu bao

phấn; hoặc nó có thể xoay chuyển thông qua đường tuần hoàn ngang xung quanh bao vỏ

1.1.2 CHI MÃ ĐỀ.

Họ Plantaginaceae (nghĩa rộng) bao gồm khoảng 90 chi và khoảng 1.700

loài

Chi Mã đề (danh pháp khoa học: Plantago) là một chi chứa khoảng 200

loài thực vật nhỏ, không dễ thấy, được gọi chung là Mã đề Phần lớn các loài là

cây thân thảo, mặc dù có một số ít loài là dạng cây bụi nhỏ, cao tới 60 cm Lá của chúng không có cuống, nhưng có một phần hẹp gần thân cây, là dạng giả-cuống lá Chúng có 3 hay 5 gân lá song song và tỏa ra ở các phần rộng hơn của phiến lá Các lá hoặc là rộng hoặc là hẹp bản, phụ thuộc vào từng loài Các cụm hoa sinh ra ở các cuống thông thường cao 5-40 cm, và có thể là một nón ngắn hay một cành hoa dài, với nhiều hoa nhỏ, được thụ phấn nhờ gió Các loài mã đề

bị ấu trùng của một số loài thuộc bộ Cánh vẩy (Lepidoptera) ăn lá

Các loài Mã đề mọc ở nhiều nơi trên thế giới, bao gồm châu Mỹ, châu Á, Australia, New Zealand, châu Phi và châu Âu Nhiều loài trong chi phân bổ rộng khắp thế giới như là một dạng cỏ dại

1.1.3 MÃ ĐỀ LỚN (PLANTAGO MAJOR L.) [1,3]

Mã đề lớn, (tên của loài này xuất phát từ việc nó hay mọc ở vết chân ngựa kéo xe; mã là ngựa, đề là móng chân); các tên gọi khác như mã đề thảo, nhả én, dứt (Thái), suma (Thổ)

Tên khoa học: Plantago major L., Plantago asiatia L., thuộc Giới: Plantae; Ngành: Magnoliophyta; Lớp Magnoliopsida; Bộ Lamiales; Họ Plantaginaceae; Chi Plantago L

Mã đề là một loại cỏ sống lâu năm, thân ngắn, lá mọc thành cụm ở gốc, phiến lá hình thìa hay hình trứng, có gân dọc theo sống lá và đồng quy ở ngọn và gốc lá Hoa mọc thành bông, có cán dài xuất phát từ kẽ lá Hoa đều, lưỡng tính, đài 4, xếp chéo, hơi đính nhau ở gốc Tràng màu nâu gồm 4 thuỳ nằm xen kẽ ở giữa kẽ lá đài Nhị 4, chỉ nhị mảnh, dài, 2 lá noãn chứa nhiều tiền noãn Quả hộp trong chứa nhiều hạt nhỏ tròn hay bầu dục, màu nâu đen bóng Mã đề là cây ưa sáng, ưa ẩm và có khả năng chịu hạn nhẹ Mã đề mọc hoang và được trồng tại nhiều nơi ở nước ta Thường trồng bằng hạt ở nơi đất ẩm vào mùa xuân

Thu hoạch Mã đề thường vào tháng 5-8, thu hái vào lúc cây đang ra hoa, nhổ cả cây về, bỏ gốc rễ và các lá sâu úa, đem rửa sạch, để ráo nước, sau đó đem phơi hoặc sấy khô Thu hoạch hạt Mã đề thường vào tháng 7-8, thu hái vào những ngày khô ráo, cắt lấy những bông quả đã già, đem phơi hay sấy khô, rồi

vò xát, sàng sẩy sạch rồi lấy hạt và tiếp tục phơi khô

Cây mã đề ( Plantago major L.)

1.2 ỨNG DỤNG [1, 2, 10, 23, 26].

1.2.1 TÁC DỤNG CHỮA BỆNH

Các loài trong chi Plantago thường được sử dụng làm thuốc Chúng có

tác dụng làm se, giải độc, kháng trùng, chống viêm nhiễm, cũng như làm dịu chứng viêm, long đờm, cầm máu và lợi tiểu Sử dụng ngoài, dạng thuốc đắp từ lá

là có ích đối với các vết cắn của côn trùng, chứng phát ban do sơn độc, các chỗ

lở loét nhỏ cũng như nhọt Sử dụng trong, nó dùng để điều trị ho và viêm phế

quản dưới dạng chè, thuốc sắc hay xi rô Hạt của Plantago psyllium là có ích để

điều trị táo bón, ruột kết co cứng, bổ sung chất xơ dinh dưỡng và bệnh túi thừa,

hạ thấp cholesterol và kiểm soát bệnh đái đường

Theo y học cổ truyền, Mã đề có vị ngọt, nhạt, tính hàn, không độc, vào 3 kinh can, thận và tiểu trường, có tác dụng tiêu viêm, phong nhiệt, lợi tiểu, chữa

ho, làm long đờm, sáng mắt, thuốc bổ Mã đề thường được dùng chữa sỏi niệu, nhiễm trùng đường tiết niệu, viêm thận, cảm lạnh ho, viêm khí quản, viêm ruột, viêm kết mạc cấp, viêm gan Lá sắc hoặc nấu cao uống làm thuốc thông tiểu, chữa ho lâu ngày, viêm khí quản, tả lỵ, đau mắt đỏ Lá tươi sắc uống chữa lỵ cấp

và mãn tính; Giã nát đắp mụn nhọt, làm mụn nhọt nhanh chóng vỡ mủ và mau lành Hạt Mã đề chữa phù thũng, thấp tả, mắt đỏ, ho do phế nhiệt Cả cây nấu cao đặc bôi trị bỏng hoặc lấy cây non, tươi sắc lấy nước uống chữa cao huyết áp

Ngoài Trung Quốc và Việt Nam, Plantago major L cũng được sử dụng

ở nhiều nước khác trên thế giới trong điều trị nhiều loại bệnh (bảng 1) bao gồm các bệnh về da, bệnh nhiễm khuẩn, bệnh hệ tiêu hoá, hệ hô hấp, tuần hoàn, bệnh chuyển hoá, chống ung thư, giảm đau và làm lành vết thương

Bảng 1: Ứng dụng P major trong điều trị bệnh

Các bệnh ngoài da: áp xe, mụn, chống viêm,

sưng đau do côn trùng đốt,cắn, thâm tím, bỏng,

viêm da, chống nhiễm khuẩn cho vết thương hở,

làm mềm những phần da bị chai cứng, nổi ban

đỏ, cầm máu vết thương, mẩn ngứa, chống tạo

mủ cho bệnh chốc lở, làm nhanh liền vết thương

hở

rễ, lá, hạt, toàn cây, dịch chiết nước

Các bệnh hô hấp: chữa ho, hen suyễn,

viêm phế quản, cảm lạnh, thối tai, tác dụng long

đờm, các bệnh phổi, viêm họng

lá, rễ, hạt, toàn cây,dịch chiết nước

Các bệnh tiêu hoá: tả, táo bón, lỵ, viêm loét dạ

Dày, viêm lợi, sâu răng, viêm miệng

lá, rễ, hạt, toàn cây, dịch chiết nước, dịch chiết cồn

Các bệnh hệ sinh dục- tiết niệu: rối loạn kinh

nguyệt, sỏi thận, đau bàng quang, nhiễm khuẩn

niệu đạo, viêm âm đạo

lá, rễ, hạt, toàn cây, dịch chiết nước

Bệnh liên quan tới hệ tuần hoàn và tim: chống

tan máu, tăng lọc máu, dùng cho người bị tiểu

đường, tác dụng lợi tiểu, phù, trĩ, cao huyết áp

lá, rễ, hạt, toàn cây, dịch chiết nước

Bệnh hệ thần kinh: hạ sốt, giảm đau, chữa sốc

tâm lý, suy nhược thần kinh, giảm đau răng

lá, rễ, hạt, toàn cây, dịch chiết nước

Chống ký sinh trùng, giải độc: tẩy giun, chữa

sốt

Rét, rắn cắn

toàn cây, lá, dịch chiết nước

1.2.2 MỘT SỐ BÀI THUỐC DÂN GIAN TỪ MÃ ĐỀ

1 Trị viêm đường tiết niệu, đái rắt đái buốt:

Thử nghiệm trên động vật thực nghiệm đối với một số plantaglucid từ

Mã đề như galactoarabinan, galactan cho thấy các chất này có tác dụng chữa loét

ở liều 1,5-3 g/ngày Ở liều 1 mg/kg, các plantaglucid này làm giảm tỷ lệ loét ở dạ dày chuột gấp 20 lần so với không điều trị; có tác dụng làm tăng tiết dịch vị ở chó; làm giảm tỷ lệ nhiễm khuẩn và chống co thắt đường ruột ở thỏ; làm giảm phản ứng viêm, phù nề gây bởi formalin và dextran

Một số dạng pectin đã este hoá có phân tử lượng lớn (46-48 kDa) có tác

dụng hoạt hoá đại thực bào ở người (in vitro) làm tăng sinh TNFα

(tumornecrosis α )

1.3.2 LIPIT

Một số axit béo phân lập được từ P.major được hệ thống lại ở bảng dưới

đây:

Bảng 2: Axit béo phân lập từ hạt P.major

Bảng 3: Axit béo phân lập từ lá P major

AXIT BÉO HÀM LƯỢNG (%)

O H

O H

O

OH

OH O

OH

N N

N N O

O O

OH

O

O O

O

OH OH C

H3

OH

OH

axit acteoside axit plantagoside

Plantagoside có tác dụng ức chế sinh arachidonic axit trong quá trình phù nề tai chuột, chống viêm, ức chế 7-lipoxygenaza, 15-lipoxygenaza, cAMP phosphodiesteraza và tác dụng chống oxy hoá đồng thời có tác dụng kháng sinh

Một số flavonoit đã phân lập từ P.major bao gồm: lutein 7-glucosit,

hispidulin glucuronit, luteolin diglucosit, apigenin glucosit, nepetin glucosit, luteolin 6-hydroxy 4’-methoxy 7-galactosit, plantaginin, homoplantaginin

O O

O

O H

H H H O H H

OH

O H

OH

OH O

OH OH 8

2'

5' 6' 6

Tác dụng sinh học nổi bật của nhóm chất flavonoit là khả năng chống oxy hoá, diệt trừ gốc tự do hoạt động gây bệnh, ức chế quá trình peoxy hoá lipit, ngoài ra còn nhiều tác dụng quan trọng khác bao gồm cả tác dụng chống virut,

kháng khuẩn, chống ung thư, Đặc biệt, một số flavonoit từ P.major như

planaginin, homoplantaginin và luteolin 7-glucosit có tác dụng ức chế HIV-

reverse transcriptaza (in vitro)

OH O OH

OH

O OH

O CH3O

O

OH

OH OH OH

Luteolin 7-O-β-D-glucopyranozit

O

O O

O

CH3O

O O H

OH OH

O H

OH

O O

O

O H

gardoside axit geniposidic

Aucubin có tác dụng chống viêm, chống co thắt, giải độc đối với trường hợp ngộ độc nấm, tác dụng bảo vệ gan gây bởi α-amanitin và CCl4, ức chế virus viêm gan B

1.3.7 TERPENOIT.

Một số triterpenoit phân lập được từ lá P.major bao gồm: axit oleanolic,

axit ursolic, 18 β- glycyrrhetinic axit và sitosterol Ursolic axit có tác dụng ức chế cyclooxygenase-2 và cyclooxygenase-1 là các enzym xúc tác sinh tổng hợp

prostaglandin (in vitro) Axit ursolic và axit oleanolic có tác dụng bảo vệ gan,

chống ung thư, hạ mỡ máu

O O

O

O O

OH

OH

ức chế protein kinase C, kìm hãm HIV-1 protease.

Axit oleanolic có tác dụng sinh học: chống viêm khớp, chống độc, chống rối loạn gan và tăng cường hệ miễn dịch của cơ thể Gần đây, hoạt tính kháng HIV được phát hiện do khả năng ngăn cản quá trình sao mã của virus HIV-1 ở tế bào H9

1.3.8 VITAMIN

Bảng 4: Một số vitamin có trong P.major

VITAMIN NGUỒN HÀM LƯỢNG

Từ P.major phân lập được một số axit hữu cơ: axit fumaric, axit

syringic, axit vanillic, axit p-hydroxy benzoic, axit ferulic, axit p-coumaric, axit gentisic, axit salicylic, axit benzoic và axit cinamic

OH OH O

O

OH O

CH3

O C

H3

O

O CH3O

H

O OH

axit fumaric axit syringic axit vanillic

O O

O

O

OH O

OH

OH O OH

axit ferulic axit p-coumaric axit gentisic axit salicylic

1.4 TÁC DỤNG DƯỢC LÝ [13, 19-22, 25-30]

Trên thế giới, P.major được sử dụng để chữa nhiều bệnh khác nhau, các

tác dụng này được quan tâm tìm hiểu bởi nhiều nhà nghiên cứu trên khắp thế giới Nhiều nghiên cứu tác dụng sinh học đã được tiến hành nhằm giải nghĩa tác dụng chữa bệnh này Dưới đây là kết quả công bố mà chúng tôi thu thập được:

1.4.1 Tác dụng chống loét.

Nghiên cứu đánh giá khả năng chống loét của P.major thực hiện trên

mô hình gây loét dạ dày chuột bằng cách nhúng nước gây stress, sau đó điều trị

bằng dịch chiết từ P.major Kết quả cho thấy ở nhóm chuột điều trị bằng cặn

chiết (metanol-nước) với liều lượng 1.2g/kg giảm 40% hiện tượng loét so với nhóm chuột đối chứng không điều trị Đối với cặn chiết từ dịch chiết nước, tác dụng này là 37%, ở cặn từ dịch chiết metanol là 29%

1.4.2 Tác dụng chống ung thư.

Các nghiên cứu trên động vật thực nghiệm cho thấy P.major có tác

dụng phòng chống ung thư, chống di căn ung thư, phòng ung thư vú, không có tác dụng trên bệnh bạch cầu cấp Nghiên cứu trên chuột gây ung thư tử cung bằng cách lây nhiễm virus herpes, sau 60 tuần 93,3% chuột không điều trị xuất

hiện khối u, trong khi đó chỉ có 18,2% chuột điều trị bằng dịch chiết từ P.major

xuất hiện khối u Tác dụng ở trên chủ yếu là do sự tăng cường hệ miễn dịch hơn

là tác dụng trực tiếp lên virus, bởi vì dịch chiết từ P.major có tác dụng tốt điều trị

nhiễm virut herpes trên lâm sàng song lại không có tác dụng lên virus herpes trong nghiên cứu in vitro Tương tự đối với vi khuẩn gây bệnh, trên lâm sàng

dịch chiết từ P.major có tác dụng tốt điều trị các trường hợp nhiễm khuẩn song

không có tác dụng ức chế các vi khuẩn gây bệnh trên in vitro

1.4.3 Tác dụng điều biến miễn dịch.

Theo nghiên cứu của Basaran và cộng sự, dịch chiết từ lá P.major có

tác dụng điều biến miễn dịch

1.4.4 Nghiên cứu chống nhiễm khuẩn (in vitro).

Dịch chiết methanol có tác dụng ức chế Salmonnella typhimurinum, S aureus và M.phlei, ức chế nấm F tricuictum và M gypseum, C albicans và S cerevisiae Dịch chiết 50% methanol có tác dụng ức chế S aureus, B.subtilis, S.dysenteriae và E coli Dịch chiết 70% methanol có tác dụng ức chế S flexneri,

S aureus, S sonnei, E coli, Esherichia ‘crim’ và M smegmatis

Chữa lỵ amip do có tác dụng chống giardiaTác dụng chống sốt rét : ức chế Plasmodium falciparum, được sử dụng

ở Tanzania chữa sốt rét

Chống virus: không chống herpes và polio virus, chống bovine corona virus, bovine herpes virus type I, bovine parainfluenza virus type III, bovine rotavirus, bovine respiratory syncytial virus, vaccinia virus và vesicular stomatitis virus

1.4.5 Chống viêm và giảm đau

Dịch chiết nước từ bột lá P major có tác dụng chống viêm, các nghiên

cứu cũng chỉ ra rằng tác dụng này có liên quan tới tác dụng ức chế sinh tổng hợp prostaglandin, tác dụng ức chế sinh tổng hợp cyclooxygenase Các nghiên cứu

cũng cho thấy dịch chiết từ P.major có tác dụng giảm đau, an thần.

1.4.6 Tác dụng chống oxy hoá và loại gốc tự do gây bệnh.

Các nghiên cứu cho thấy phần chiết giàu flavonoid từ P.major có tác

dụng chống oxy hoá, ức chế peoxy hoá lipid màng tế bào gan, bảo vệ gan

1.4.7 Tác dụng lợi tiểu.

Kết quả nghiên cứu của Casceres và cộng sự, cho thấy nước tiểu ở chuột tăng 108±44% sau 6h, nghiên cứu sử dụng bột lá mã đề với liều lượng 1g/kg trọng lượng

Chương 2: THỰC NGHIỆM

2.1 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Để phân tích và phân tách các phần chiết của cây đã sử dụng các phương pháp:

Sắc kí lớp mỏng (TLC): Thực hiện trên bản mỏng tráng sẵn silica gel

Merck 60 dày 0,25 mm trên nền nhôm Thuốc thử hiện màu là dung dịch vanilin/H2SO4 1% và đèn tử ngoại bước sóng 366 nm

Sắc kí cột (CC): Sắc kí cột đựoc thực hiện dưới trọng lực của dung môi

Chất hấp phụ cho sắc kí cột là silica gel (cỡ hạt 63-100 μm), được nhồi theo phương pháp nhồi ướt

Kết tinh phân đoạn được sử dụng trong việc tinh chế các chất.

Cấu trúc của các hợp chất được khảo sát nhờ sự kết hợp các phương pháp phổ:

Phổ hồng ngoại (IR) được ghi trên máy Impac 410-Nicolet FT- IR.

Phổ khối lượng (EI-MS, 70eV) ghi trên máy Hewlett Packard HP 5890,

Serie II

Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1 H-NMR, 13 C-NMR được ghi trên máy

Brucker Avance-500 MHz, chuẩn nội TMS (tetrametyl silan), độ chuyển dịch

hoá học được biểu thị bằng ppm, hằng số J tính theo Hz.

2.2 ĐIỀU CHẾ CÁC PHẦN CHIẾT TỪ CÂY MÃ ĐỀ

2.2.1 Mẫu thực vật

Mẫu nghiên cứu là phần trên mặt đất của cây mã đề (P major L.), được

thu hái vào tháng 7 tại Quỳnh Phụ, Thái Bình Mẫu sau khi lấy về được rửa sạch, phơi trong bóng râm rồi đem sấy khô ở nhiệt độ 40-50°C, sau đó đem vò thật nhỏ Phần nguyên liệu thu được đem ngâm chiết với etanol 95%, sau đó được phân bố chọn lọc với các dung môi thích hợp Các dung môi được dùng là ete dầu hoả 30-600, etyl axetat, n-butanol.

2.2.2 Điều chế các cặn chiết

800 g bột khô nguyên liệu được ngâm với etanol 95% ở nhiệt độ phòng trong 3 ngày Sau đó lọc lấy dịch chiết, cặn bã lại được ngâm tiếp với etanol 95% Quá trình này được lặp lại 2 lần Các dịch chiết được gộp lại, và cất loại etanol ở 60°C dưới áp suất thấp đến khi còn 200 ml Pha loãng dịch chiết etanol với 200 ml nướccất rồi chiết lần lượt với các dung môi có độ phân cực tăng dần: ete dầu hoả 30-600, etyl axetat, n-butanol Các dịch chiết ete dầu hoả, etyl axetat,

n-butanol được làm khan bằng Na2SO4 Lọc bỏ Na2SO4 và cất loại hết dung môi

ta thu được các phần cặn chiết tương ứng

Bảng 5: Hiệu suất các phần cặn chiết từ cây mã đề

* Tính theo khối lượng mẫu khô ban đầu

2.3 PHÂN TÁCH CÁC PHẦN CHIẾT TỪ CÂY MÃ ĐỀ.

2.3.1 Phần chiết ete dầu hoả

Phân tích phần chiết ete dầu hoả (PMD) bằng TLC

TT Phần chiết Khối lượng (g) Hiệu suất*(%)

Dùng capila đưa chất lên bản mỏng tráng sẵn DC Aluflolien 60F254

Merck Sau đó tiến hành khảo sát sắc kí lớp mỏng trong các hệ dung môi sau: diclomethan/ etyl axetat; n-hexan/ etyl axetat; diclomethan/ axeton

Sự phân tách đạt kết quả tốt khi triển khai trong hệ dung môi: n-hexan/

1) Phần cặn chiết ete dầu hoả gồm nhiều chất phức tạp

2) Một số vệt màu hồng tím khi phun với vanilin- axit sunfuric; hơ nóng có hàm lượng tương đối phù hợp cho việc phân tách

Phân tách cặn chiết ete dầu hoả bằng phương pháp sắc kí cột.

Chuẩn bị mẫu: cho 15g silica gel vào một cối sứ Hoà tan 10g cặn ete dầu

hoả trong axeton rồi dùng công tơ hút nhỏ từ từ lên silica gel Đợi cho dung môi bay hơi bớt, ta dùng chày sứ trộn đều cho đến khi silica gel tơi ra Tiếp tục tẩm chất lên silica gel, trộn đều Quá trình được lặp lại cho đến khi tẩm xong chất và silica gel đã khô tơi có màu xanh đen

Chuẩn bị cột sắc kí

Cân 50g silica gel (cỡ hạt 63-100 μm), cho vào cốc, đổ dung môi hexan vào, khuấy cho hết bọt khí rồi nhồi vào cột, dùng qủa bóp cao su gõ nhẹ cho đến khi trong cột không còn bọt khí, dùng đũa thuỷ tinh dàn đều mặt cột, sau