51 Hình 4.1 :Sự thay đổi họat tính enzyme cố đònh theo thời gian Vậy sau khoảng hơn 3,5 giờ hoạt tính enzyme sẽ giảm đi 50% – Hệ số tương quan giữa thờigian (X) và hoạt tính amylase (Y) r = 0,97 Thời gian phản ứng thủy phân tinh bột và hoạt tính amylase có tương quan nghòch. – Phương trình hồi qui tuyến tính giữa X và Y : y = 0.0092 x + 0,0022 Nhận xét – Thời gian mất hoạt tính enzyme diễn ra nhanh, vì vậy cho thấy để tăng hiệu quả sử dụng enzyme cần tăng điều kiện nhiệt độ gần với điều kiện nhiệt độ tối ưu của enzyme để tăng khả năng thủy giải của enzyme. Yếu tố nhiệt độ, yếu tố hoạt hóa quan trọng của enzyme. 4.4 Thí nghiệm sử dụng enzyme cố đònh trong thiết bò dòng chảy liên tục tuần hoàn Vì đây là thí nghiệm bước đầu ứng dụng enzyme cố đònh với dòng chảy liên tục do đó chưa có những khảo sát sâu sắc về thiết bò có dòng chảy tuần hòan liên tục. Kết quả ban đầu thu được chỉ mang tính tham khảo, mức độ chính xác chưa cao. 0 0.001 0.002 0.003 0.004 0.005 0.006 1 2 3 4 5 6 1.5 2 2.5 3 3.5 1 52 Lần chạy thiết bò đầu tiên : (với dung dòch tinh bột 0,5%). Sau 1 giờ lấy 25 ml hỗn hợp sản phẩm thêm vào 10 ml dung dòch NaOH 0.5N để làm bất hoạt – amylase, thêm nước cho đủ 50 ml. Lấy ra 5ml hỗn hợp vừa pha loãng để đònh lượng lượng đường maltose sinh ra sau phản ứng thủy phân tinh bột theo phương pháp Wilistatettet Schudel. Kết quả thu được : V t : 21 ml. V 0 : 22,5 ml. Hàm lượng đường maltose sinh ra : 0,013 g. Hoạt tính enzyme cố đònh : 0.0036 Sau 2 giờ tiến hành đo lượng đường maltose như trên ta thu được kết quả : V t : 20,7 ml. V 0 : 22,5 ml. Hàm lượng đường maltose sinh ra X : 0,015 g. Hoạt tính enzyme cố đònh : 0.0043 Lần chạy thiết bò thứ hai Sau 1 giờ tiến hành đo lượng đường maltose như trên ta thu được kết quả : V t : 21,3 ml. V 0 : 22,5 ml. Hàm lượng đường maltose X : 0,01 g. Hoạt tính enzyme cố đònh : 0.0029 Sau 2 giờ tiến hành đo lượng đường maltose như trên ta thu được kết quả : V t : 19,8 ml. V 0 : 22,5 ml. Hàm lượng đường maltose X : 0,023 g. Hoạt tính enzyme : 0.0065 53 Lần chạy thiết bò thứ ba Sau 1 giờ tiến hành đo lượng đường maltose như trên ta thu được kết quả : V t : 21,1 ml. V 0 : 22,5 ml. Hàm lượng đường maltose sinh ra : 0,012 g. Hoạt tính enzyme : 0.0034. Sau 2 giờ tiến hành đo lượng đường maltose như trên ta thu được kết quả : V t : 21 ml. V 0 : 22,5 ml. Hàm lượng đường maltose sinh ra : 0,013 g. Hoạt tính enzyme : 0.0036 Sau 3 giờ tiến hành đo lượng đường maltose như trên ta thu được kết quả : V t : 21 ml. V 0 : 22,5 ml. Hàm lượng đường maltose sinh ra : 0,013 g. Hoạt tính enzyme : 0.0036 Như vậy, sau ba lần sử dụng trong khoảng thời gian 2 giờ thì hoạt tính enzyme không ổn đònh. Từ kết quả trên cho thấy hiệu quả sử dụng enzyme rất thấp có thể do nguyên nhân sau : – Kích thước cột cố đònh chưa phù hợp, vận tốc dòng chảy nhanh chưa đủ thời gian thủy phân tinh bột. – Cột được nhồi quá nhiều enzyme, các hạt enzyme cố đònh chồng chất lên nhau quá khít hạn chế diện tích tiếp xúc giữa cơ chất và enzyme. 54 Phần 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Enzyme cố đònh là một bước phát triển cao của ngành công nghệ enzyme, nó làm tăng cao hiệu quả sử dụng enzyme dễ dàng tách ra khỏi phản ứng, có thể ngưng quá trình ở bất cứ giai đoạn nào, sử dụng được nhiều lần, có độ bền vững cao, hoạt tính ổn đònh hơn khi có sự thay đổi của nhiệt độ, pH, điều này thuận lợi trong quá trình tự động, liên tục và sản xuất công nghiệp. Việc nghiên cứu cố đònh enzyme – amylase bằng kỹ thuật nhốt “gel” đã mang lại những kết quả ban đầu để đánh giá hoạt tính của enzyme cố đònh. Ở nhiệt độ thường, tiến hành phản ứng với dung dòch hồ tinh bột 0.5% sau 1 giờ, hoạt tính của enzyme cố đònh giảm đi 32.5% so với hoạt tính của enzyme hòa tan. Ảnh hưởng của nhiệt độ đến hoạt tính của enzyme cố đònh được ghi nhận theo bảng sau : Nhiệt độ ( 0 C) Nhiệt độ phòng 50 60 70 Hoạt tính enzyme (UI) 0.0052 0.0083 0.0095 0.0149 Sự thay đổi hoạt tính của enzyme cố đònh theo thời gian trong thí nghiệm theo bảng sau : Thời gian (giờ) 1 1.5 2 2.5 3 3.5 Hoạt tính (UI) 0.0052 0.0052 0.0045 0.0043 0.0035 0.0030 – Trong nội dung của khóa luận, cũng đã tiến hành khảo sát ban đầu khả năng ứng dụng của hạt gel cố đònh enzyme trong thiết bò tuần hoàn liên tục. 55 Kết quả thu được : Lần chạy thiết bò đầu tiên Thời gian Sau 1 giờ Sau 2 giờ Hàm lượng đường maltose 0,013 0,015 Hoạt tính enzyme 0,0036 0,0043 Lần chạy thiết bò thứ hai Thời gian Sau 1 giờ Sau 2 giờ Hàm lượng đường maltose 0,010 0,023 Hoạt tính enzyme 0,0029 0,0065 Lần chạy thiết bò thứ ba Thời gian Sau 1 giờ Sau 2 giờ Sau 3 giờ Hàm lượng đường maltose 0,012 0,013 0,.013 Hoạt tính enzyme 0,0034 0,0036 0,0036 – Đối với dạng thiết bò tuần hoàn liên tục, kết quả khảo sát cho thấy mức độ chính xác chưa cao. Do những giới hạn về thời gian và sự tham khảo kết quả thí nghiệm của các nhà nghiên cứu trước. Vì vậy chưa đưa ra được những số liệu tương ứng giữa kích thước thiết bò và vận tốc dòng chảy. 5.2. ĐỀ NGHỊ – Cần có những nghiên cứu sâu sắc hơn về hoạt tính của enzyme cố đònh, các yếu tố ảnh hưởng như nhiệt độ, pH đến hoạt tính của enzyme. Đặc biệt là đối với dạng thiết bò liên tục cần có những khảo sát về kích thước thiết bò, vận tốc dòng chảy, thể tích hạt gel. Từ đó có thể đưa ra được mô hình thí nghiệm cân đối hướng tới những ứng dụng rộng rãi ở qui mô công nghiệp. 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHẦN TIẾNG VIỆT 1. Nguyễn Đức Lượng, 2002.Công nghệ vi sinh tập 2, vi sinh vật học công nghiệp. NXB đại học quốc gia TP. Hồ Chí Minh. 2. Nguyễn Đức Lượng, Cao Cường, Nguyễn Ánh Tuyết, Lê Thò Thủy Tiên, Tạ Thu Hằng, Huỳnh Ngọc Oanh, Nguyễn Thúy Hương, Phan Thò Huyền, 2004, Công nghệ enzyme. NXB đại học quốc gia Tp. HCM. 3. Nguyễn Thò Tiết, 2000, Enzyme cố đònh. Chuyên đề nghiên cứu sinh, Viện Sinh Học Nhiệt Đới. 4. Nguyễn Quốc Hiến, Võ Tấn Thiện, Lê Xuân Thám 1995. Nghiên cứu chế tạo chế phẩm Progesteron thải chậm bằng kỹ thuật polymer hóa bức xạ. Tạp chí dược học số 239. 5. Lê Ngọc Tú, Lâm Chi, 1983. Những hiểu biết mới về enzyme. NXB KHKT Nông Nghiệp. 6. Lê Ngọc Tú, La Văn Chứ, Nguyễn Lân Dũng 1982. Enzyme vi sinh vật tập I. NXB KHKT Hà Nội. PHẦN TIẾNG ANH 7. R. Lafferty, 1983. Enzyme technology 8. D. Trevan, 1980. Immobilized enzyme 9. W. Gerhartz, 1990. Enzyme in industry . : V t : 21 ml. V 0 : 22,5 ml. Hàm lượng đường maltose sinh ra : 0,013 g. Hoạt tính enzyme cố đònh : 0.00 36 Sau 2 giờ tiến hành đo lượng đường maltose như trên ta thu được kết quả :. quả : V t : 21,3 ml. V 0 : 22,5 ml. Hàm lượng đường maltose X : 0,01 g. Hoạt tính enzyme cố đònh : 0.0029 Sau 2 giờ tiến hành đo lượng đường maltose như trên ta thu được kết quả : . V t : 21 ml. V 0 : 22,5 ml. Hàm lượng đường maltose sinh ra : 0,013 g. Hoạt tính enzyme : 0.00 36 Sau 3 giờ tiến hành đo lượng đường maltose như trên ta thu được kết quả : V t : 21