LY TRÍCH CHẤT CHIẾT THÔ TRONG NGUYÊN LIỆU BẰNG CÁC DUNG MÔI KHÁC NHAU .... Ly trích chất chiết thô từ nguyên liệu lá ngũ sắc sử dụng 2 loại dung môi khác nhau dưới sự hỗ trợ của sóng siê
LY TRÍCH CHẤT CHIẾT THÔ TRONG NGUYÊN LIỆU BẰNG CÁC
Tổng quan tài liệu
Hình 1.1 Lá cây ngũ sắc o Đặc điểm thực vật :
Cây hoa ngũ sắc, thường cao khoảng 2 mét, mọc thẳng đứng hoặc xiêu vẹo và tạo thành bụi rậm trong nhiều môi trường khác nhau Thân cây có gai, cành dài, lá mọc đối và có mùi nồng khi vò nát Loài L camara có hoa lưỡng tính với nhiều màu sắc khác nhau, cho thấy khả năng thích nghi cao, có thể sống trong nhiều hệ sinh thái khác nhau.
Cây ngũ sắc, có nguồn gốc từ Trung Mỹ, đã lan rộng ra khắp các vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới trên toàn thế giới, bao gồm Châu Phi, Nam Âu, Trung Đông, Ấn Độ, và nhiều khu vực khác như Úc, New Zealand và Hoa Kỳ Tại Việt Nam, cây thường được trồng làm cảnh hoặc mọc dại ở các khu vực như ven rừng, bãi hoang, ven đường, đồi trung du và bờ biển Cây ngũ sắc không chỉ mang lại vẻ đẹp cho môi trường mà còn có nhiều công dụng hữu ích.
Hoa ngũ sắc, hay còn gọi là Lantana, được sử dụng để điều trị nhiều bệnh lý như sốt kéo dài, quai bị, phong thấp và đau xương Ngoài ra, hoa còn có tác dụng hỗ trợ điều trị lao và hạ huyết áp Lá của cây thường được dùng để đắp lên vết thương, loét, hoặc để cầm máu, cũng như điều trị ghẻ lở, viêm da và chàm Lá có thể sử dụng tươi hoặc sấy khô Nghiên cứu tại Ấn Độ cho thấy lá Lantana có đặc tính kháng khuẩn, diệt nấm và diệt côn trùng L camara cũng được ứng dụng trong y học cổ truyền để điều trị các bệnh như ung thư, ngứa da, bệnh phong, thủy đậu, sởi, hen suyễn và loét.
Chiết xuất từ lá (LE) và hoa (FE) của L camara đã được nghiên cứu về hàm lượng polyphenol và tiềm năng chống oxy hóa, với sự hiện diện của các hợp chất như tannin, steroid, flavonoid, phlobatannin, quinon, phenol, caumarin, và alkaloid Trong đó, alkaloid và flavonoid có hàm lượng cao hơn trong LE, trong khi phenol xuất hiện ở cả FE và LE Terpenoid và saponin chỉ có trong FE, với saponin được biết đến như một chất chống oxy hóa tự nhiên, kích thích apoptosis trong tế bào khối u Quinone từ thực vật thể hiện hoạt động chống oxy hóa vượt trội so với các chất tổng hợp Các hợp chất như anthraquinone, coumarin và anthocyanin có nhiều hoạt tính sinh học, bao gồm kháng khuẩn, chống oxy hóa, chống viêm và chống ung thư Steroid giúp ổn định các gốc tự do, trong khi các hóa chất thực vật từ L camara có khả năng ức chế sự phát triển của các tác nhân gây bệnh thực vật.
1.1.2 Phương pháp ly trích bằng sóng siêu âm
Chiết xuất với sự hỗ trợ siêu âm (UAE) sử dụng năng lượng sóng siêu âm, có tần số cao hơn dải tần nghe được của con người (20 Hz đến 20 kHz) Những sóng này tạo ra chu kỳ nén và phản xạ, gây dịch chuyển và đánh bật các phân tử khỏi vị trí ban đầu Tại cường độ cao, áp suất âm trong quá trình phản xạ vượt quá lực hấp dẫn giữa các phân tử, tạo ra bọt khí Những bong bóng này phát triển qua quá trình hợp nhất và tan vỡ trong giai đoạn nén, sinh ra nhiệt độ và áp suất cao cục bộ, từ đó thúc đẩy các phản ứng sinh hóa xung quanh.
Tạo bọt âm thanh (acoustic cavitation) là cơ chế chính trong quá trình chiết xuất hỗ trợ siêu âm, giúp phân mảnh, xói mòn cục bộ và hình thành lỗ rỗng trong tế bào thực vật Các bong bóng tạo ra sóng xung kích, gia tăng tốc độ và hiệu quả phân mảnh cấu trúc tế bào, từ đó thúc đẩy sự hòa tan của các thành phần hoạt tính sinh học Siêu âm không chỉ tăng khả năng hấp thụ nước mà còn cải thiện khả năng tiếp cận của dung môi đối với các hợp chất hoạt tính, đồng thời nâng cao chỉ số trương nở của ma trận mô thực vật, dẫn đến sự gia tăng hiệu quả chiết xuất Sự gia tăng sản lượng khai thác của UAE là kết quả của sự tác động tổng hợp từ nhiều cơ chế khác nhau.
Vật liệu và phương pháp nghiên cứu
1.2.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu
Thời gian: 8 giờ ngày 5/11/2024 Địa điểm: Phòng BIO 304, tòa A2, Viện nghiên cứu Công nghệ Sinh học và Môi trường, trường Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh
Vật liệu nghiên cứu: bột lá ngũ sắc đã được xay nhuyễn
Dụng cụ, thiết bị và hóa chất:
Dụng cụ: hủ thủy tinh đựng mẫu, bình thủy tinh hút ẩm, cốc đong, giấy lọc, đĩa thủy tinh, muỗng, phễu lọc, pipet thủy tinh,…
Thiết bị: tủ sấy, cân điện tử, bồn sóng siêu âm
Hóa chất: dung môi acetone và ethyl acetate
Hình 1.2 Mẫu lá cây ngũ sắc 1.2.3 Phương pháp nghiên cứu
1.2.3.1 Xác định độ ẩm nguyên liệu thông qua phương pháp sấy
Để bắt đầu, cân 2g mẫu Lá Ngũ Sắc và cho vào chén thủy tinh đã được sấy khô ở nhiệt độ 105˚C Sau đó, làm nguội chén trong bình hút ẩm chứa silicagel Đừng quên cân khối lượng của chén trước khi cho mẫu vào.
Hình 1.3 Mẫu lá ngũ sắc được cân
Bước 2: Đem sấy chén và mẫu ở 105˚C đến khối lượng không đổi
Để xác định độ ẩm của nguyên liệu, bước thứ ba là để nguội mẫu trong bình hút ẩm có chứa silicagel, sau đó cân tổng khối lượng của chén và mẫu Ghi nhận số liệu và thực hiện các phép tính cần thiết để xác định độ ẩm chính xác.
1.2.3.2 Ly trích chất chiết thô từ nguyên liệu lá ngũ sắc sử dụng 2 loại dung môi khác nhau dưới sự hỗ trợ của sóng siêu âm
Bước 1: Chuẩn bị 1 bình erlen, tiến hành cân 1g mẫu lá ngũ sắc vào mỗi bình
Bước 2: Đong tiếp 15 mL dung dịch ethyl acetate cho vào bình thứ nhất, đong tiếp 15 mL dung dịch acetone cho vào bình thứ 2
Bước 3: Bịt kín miệng bình (hạn chế sự bay hơi của dung môi) và đưa bình vào bồn sóng siêu âm trong 15 phút
Bước 4: Gấp giấy lọc và tiến hành cân, ghi nhận khối lượng thu được
Bước 5: Tiến hành lọc dịch chiết lần đầu tiên, sau đó lặp lại quy trình ở bước 2 và 3 bằng cách thêm 15 mL dung môi ethyl acetate vào bình thứ nhất và 15 mL acetone vào bình thứ hai Tiến hành xử lý siêu âm trong 15 phút để tối ưu hóa quá trình chiết xuất.
Bước 6: Lọc lần 2 đối với phần bã còn lại (phần bã cần được lọc tối đa có thể tránh sự thất thoát lớn trong quá trình ly trích)
Bước 7: Tiến hành sấy phần bã cho đến khi khối lượng ổn định, ghi lại hình ảnh và số liệu thu được Dựa vào khối lượng bã sau khi sấy, đánh giá hiệu suất chiết của hai dung môi thông qua các kết quả tính toán.
Kết quả và thảo luận
1.3.1 Kết quả o Thí nghiệm xác định độ ẩm nguyên liệu thông qua phương pháp sấy
Công thức xác định độ ẩm : W% = 𝑤1 –𝑤2
Trong đó : W : độ ẩm mẫu thử (%)
W 1 : khối lượng của mẫu thử và chén trước khi sấy (g)
W2 : khối lượng của mẫu thử và chén sau khi sấy (g)
6 m : khối lượng của mẫu thử trước khi sấy (g) Kết quả ghi nhận được trước khi sấy:
Khối lượng chén lúc đầu : mchén 1 = 20,1034 g mchén 2 = 31,2 g Khối lượng mẫu cân lần 1 : mbanđầu1= 2,0238 g
Khối lượng mẫu cân lần 2: mbanđầu2 = 2,0047 g
Kết quả ghi nhận được sau khi sấy:
Khối lượng chén và mẫu 1 sau sấy: W2.1!,9293g
Khối lượng chén và mẫu 2 sau sấy: W2.2= 33,0089g
Ta có công thức độ ẩm:
Độ ẩm trung bình của mẫu lá ngũ sắc nhóm thực hiện là 9,63%, trong khi đó, kết quả tính toán cho thấy độ ẩm là 9,47% Thí nghiệm chiết xuất chất chiết thô từ lá ngũ sắc đã sử dụng hai loại dung môi khác nhau.
Công thức tính hàm lượng chất chiết thô :
𝑚1 × 100 Trong đó : m1 : khối lượng nguyện liệu khô ban đầu
.m2 : khối lượng bã khô còn lại trên giấy lọc
Bảng 1.1 Số liệu ghi nhận cho thí nghiệm so sánh hiệu suất chiết thô của 2 loại dung môi
Số liệu ghi nhận Ký hiệu Giá trị
Khối lượng mẫu lá ngũ sắc ban đầu cân lần 1 m 1.1 1,0008 g
Khối lượng mẫu lá ngũ sắc ban đầu cân lần 2 m 1.2 1,0004 g
Khối lượng giấy lọc 1 m giấy lọc 1 0,7853 g
Khối lượng giấy lọc 2 m giấy lọc 2 0,8049 g
Khối lượng mẫu sau sấy của giấy lọc 1 m bã + giấy lọc 1 1,6377 g
Khối lượng mẫu sau sấy giấy lọc 2 m bã + giấy lọc 2 1,6323 g
Khối lượng bã khô còn lại (giấy lọc 1) m 2.1 0,8524 g
Khối lượng bã khô còn lại (giấy lọc 2) m 2.2 0,8274 g
Vì khối lượng ban đầu của mẫu còn chứa độ ẩm nên cần tính lại khối lượng lúc sau: m1.1 khô= (100 - W ) x m1.1 ,37% x 1,0008 = 0,9044 g m1.2 khô= (100 - W ) x m1.2 = 90,37% x 1,0004 = 0,9041 g
Hàm lượng chất chiết thô (%, hiệu suất chiết cao)
1.3.2 Thảo luận o Thí nghiệm xác định độ ẩm nguyên liệu thông qua phương pháp sấy Độ ẩm ở mức vừa phải, phù hợp với các yêu cầu bảo quản lâu dài trong nhiều trường hợp, đặc biệt là các sản phẩm khô Mức độ ẩm dưới 10% có thể giúp hạn chế sự phát triển của nấm mốc và vi sinh vật, giúp mẫu ổn định và dễ bảo quản
8 o Thí nghiệm ly trích chất chiết thô từ nguyên liệu lá ngũ sắc sử dụng 2 loại dung môi
So sánh hiệu quả chiết xuất giữa hai dung môi Ethyl acetate và Acetone dựa trên độ phân cực cho thấy dung môi Acetone mang lại hiệu suất chiết cao hơn Cụ thể, mẫu bột lá ngũ sắc chiết bằng Acetone đạt hiệu suất 8,48%, trong khi mẫu bột lá ngũ sắc chiết bằng Ethyl acetate chỉ đạt 5,75%.
Ethyl acetate là dung môi ít phân cực độ phân cực trung bình có chỉ số phân cưc (PI
Acetone có độ phân cực cao hơn ethyl acetate, với chỉ số phân cực lần lượt là 0,355 và 0,228 Kết quả nghiên cứu cho thấy acetone có hiệu suất chiết cao hơn khi chiết xuất từ mẫu bột lá ngũ sắc, cho thấy rằng các hợp chất trong lá này, như polyphenol và flavonoid, dễ hòa tan hơn trong dung môi có độ phân cực cao Do đó, acetone có khả năng chiết xuất các hợp chất phân cực tốt hơn ethyl acetate, dẫn đến hiệu suất chiết cao hơn.
PHÂN TÁCH SẮC TỐ THỰC VẬT BẰNG KỸ THUẬT SẮC KÝ CỘT
Tổng quan tài liệu
2.1.1 Giới thiệu kỹ thuật sắc ký cột
Sắc ký cột là quá trình phân tách diễn ra trong một cột hở dựa vào sự hấp phụ khác biệt của các hợp chất với pha tĩnh
Pha tĩnh: vật liệu rắn có khả năng hấp phụ tốt, thường được sử dụng là silica gel (SiO2), alumina (Al2O3)
Pha động: dung môi hoặc hỗn hợp dung môi
2.1.2 Giới thiệu về cây sài đất
Cây sài đất (Wedelia chinensis), còn gọi là húng trám hay cúc dại, thuộc họ Cúc, là loại cây thân thảo mọc bò, có thể dài đến 40cm với lớp lông trắng bao phủ Lá cây hình bầu dục, có lông mịn ở cả hai mặt, mép lá răng cưa và mọc đối xứng Hoa sài đất có nhiều cánh màu vàng, mọc từ đầu ngọn và nách lá, trong khi quả rất nhỏ và không có lông Cây thường mọc hoang dại ở Ấn Độ, Malaysia và tại Việt Nam, chúng thường thấy ở ven đường, bãi đất trống Cây sài đất chứa nhiều hợp chất sinh học có lợi cho sức khỏe như phenolic.
The plant compounds found in the herb include various phytochemicals such as caffeic acid, chlorogenic acid, tannins, and flavonoids like wedelolactone, apigenin, luteolin, quercetin, and kaempferol, along with alkaloids, terpenoids, steroids, coumarins, and essential oils like methyl cinnamate These compounds exhibit a range of colors, with phenolic compounds like caffeic acid appearing light yellow to light brown, and chlorogenic acid showing light yellow or pale green hues Flavonoids present different shades, from the light yellow of wedelolactone to the bright yellow of apigenin, while luteolin can vary from yellow to light orange or red Tannins are typically brown or yellow-brown, and terpenoids range from yellow to brown Alkaloids and steroids are generally light yellow or colorless, while coumarins are white to light yellow The essential oil methyl cinnamate is light yellow or colorless The herb, known for its diverse phytochemical profile, offers various health benefits.
Hoạt chất phenolic trong cây sài đất có khả năng chống viêm hiệu quả, giúp điều trị các bệnh ngoài da như ngứa, rôm sảy, viêm da cơ địa, eczema và mụn trứng cá.
- Bảo vệ gan: hoạt chất demethylwedelolactone, wedelolactone có tác dụng bảo vệ chức năng gan
- Chống viêm, kháng khuẩn, giảm đau: nhờ thành phần hoạt chất Aspirin, Morphine, Indomethacin,…
Hoạt chất isoflavone trong sài đất có khả năng hỗ trợ điều trị tình trạng thiếu hụt estrogen, giảm thiểu xuất huyết tử cung, bảo vệ niêm mạc dạ dày và ngăn ngừa quá trình oxy hóa.
Vật liệu và phương pháp nghiên cứu
2.2.1 Hóa chất, dụng cụ và thiết bị
Nguyên liệu: Bột cây sài đất xay nhuyễn
Hóa chất: Hexane, aceton, silica gel 60,…
Dụng cụ: becher, ống nghiệm, pipet Pasteur, bông thủy tinh, ống đong,…
Thiết bị: Máy siêu âm
Bước 1: Chuẩn bị dịch chiết sắc tố
Cân 1 g bột cây sài đất xay nhuyễn cho vào becher, thêm 10 mL hỗn hợp dung môi hexane: aceton (8:2) Đem hỗn hợp đi siêu âm trong 5 phút, sau đó gấp giấy lọc đặt lên phễu và lọc lấy dịch chiết
Bước 2: Chuẩn bị cột sắc ký
Sử dụng pipet Pasteur làm cột, đặt một lớp bông thủy tinh ở đáy pipet Cân 0,75 g silica gel 60 (kích thước hạt 635−1700 mesh) vào cốc thủy tinh khô, sau đó thêm 3 mL hexan và ngâm trong 5-10 phút để thực hiện phương pháp nhồi cột ướt Dùng pipet hút hỗn hợp và từ từ cho vào pipet Pasteur, gõ nhẹ để không khí không bị giữ lại khi silica gel lắng xuống, đảm bảo toàn bộ silica gel dính trên thành cột sẽ rơi xuống Kiểm tra tốc độ nhỏ giọt của cột khoảng 1 giọt/giây.
Bước 3: Đưa mẫu vào cột
Khi thực hiện quá trình sắc ký, hãy pha động cách bề mặt pha tĩnh khoảng 1 mm và thêm 1 mL hỗn hợp dịch chiết chứa các sắc tố vào cột dọc theo thành, đồng thời tránh làm xao động bề mặt pha tĩnh Tiếp theo, tiếp tục cho pha động n-hexane qua cột, đảm bảo không để cột khô.
Nhóm carotenoid màu vàng cam được tách ra và thu vào ống nghiệm, sau đó sử dụng dung môi 70% n-hexan và 30% aceton để rửa giải diệp lục tố chlorophyll.
Hình 2.2 Cân bột cây sài Hình 2.3 Dịch chiết Hình 2.4 Cân silicagel Hình 2.5 Đưa mẫu lên cột
Kết quả và thảo luận
Sau khi tiến hành dịch chiết mẫu cây sài đất qua hệ thống sắc ký cột, chúng tôi đã thu được hai loại sắc tố thực vật quan trọng: chlorophyll có màu xanh lá cây và carotenoid có màu vàng cam.
Hình 2.6 Kết quả phân tách sắc tố thực vật
Carotenoid là sắc tố có độ phân cực thấp, trong khi silica gel có độ phân cực cao, dẫn đến tương tác yếu giữa chúng Điều này khiến carotenoid màu vàng cam chảy qua cột sắc ký nhanh hơn và được thu vào ống nghiệm trước Ngược lại, chlorophyll có độ phân cực cao, tạo ra lực tương tác mạnh hơn, làm tăng thời gian giữ lại chlorophyll trong cột sắc ký Để rửa giải chlorophyll, cần sử dụng dung môi phân cực với tỷ lệ 70% n-hexan và 30% aceton.
PHÂN TÁCH SẮC TỐ THỰC VẬT BẰNG KỸ THUẬT TLC
Tổng quan tài liệu
Sắc ký lớp mỏng là kỹ thuật tách chất thông qua việc cho pha động di chuyển qua pha tĩnh, nơi đã chấm hỗn hợp cần tách Pha tĩnh là chất hấp phụ được chọn lựa phù hợp với yêu cầu phân tích, được trải thành lớp mỏng đồng nhất và cố định trên các phiến kính hoặc kim loại Pha động là hệ dung môi đơn hoặc đa thành phần, di chuyển trên bản mỏng dưới tác động của lực mao quản Trong quá trình này, các cấu tử trong mẫu thử di chuyển theo hướng pha động với tốc độ khác nhau, tạo ra một sắc ký đồ trên lớp mỏng.
Phương pháp sắc ký lớp mỏng sử dụng pha tĩnh là một lớp mỏng chất hấp phụ như silica gel, aluminium oxit hoặc cellulose, được phủ trên bề mặt chất trơ Pha động là dung dịch cần phân tích hòa tan trong dung môi thích hợp, được hút lên bản sắc ký qua mao dẫn, giúp tách các thành phần trong dung dịch dựa trên tính phân cực của chúng.
Sắc ký lớp mỏng được sử dụng rộng rãi trong nhiều lĩnh vực:
- Xét nghiệm độ tinh khiết của các hóa chất phóng xạ trong dược khoa
- Xác định các sắc tố trong tế bào thực vật
- Phát hiện thuốc trừ sâu, thuốc diệt côn trùng trong thức ăn, hoặc
- Nhận biết những hóa chất trong một chất cho sẵn, kiểm tra sự giống và khác nhau giữa
2 hợp chất, số lượng các hợp chất
- Giám sát các phản ứng hữu cơ
Vật liệu và phương pháp nghiên cứu
3.2.1 Hóa chất, dụng cụ và thiết bị thí nghiệm
Nguyên liệu : dịch chiết sắc tố lá sài đất
Dụng cụ : bản mỏng silica gel F254, cốc thủy tinh, ống đong, bình ly giải, đầu típ micropipet và các dụng thí nghiệm khác
Hóa chất : dung môi acetone và n-hexan
Bước 1: Chuẩn bị dịch chiết sắc tố
Cân 1 g bột cây sài đất xay nhuyễn cho vào becher, thêm 10 mL hỗn hợp dung môi hexane: aceton (8:2) Đem hỗn hợp đi siêu âm trong 5 phút, sau đó gấp giấy lọc đặt lên phễu và lọc lấy dịch chiết
Bước 2: Chuẩn bị bản mỏng
Gạch ngang một đường thẳng trên bề mặtbản mỏng silica gel F254, tạo điểm xuất phát Bước 3: Đưa dịch chiết lên bề mặt bản mỏng silica gel
Để thực hiện quá trình sắc ký, đầu pipet được dựng lên để chấm vào dịch chiết sắc tố (5 – 15 µl), sau đó chấm lên một điểm trên đường kẻ ngang đã vạch trước Chờ cho mẫu khô, rồi tiếp tục chấm vết thứ hai trùng với vết đầu tiên Có thể chấm nhiều lần trên một điểm để đảm bảo đủ lượng dịch chiết cần thiết cho quá trình sắc ký Bước tiếp theo là chuẩn bị dung môi ly giải (pha động).
Chuẩn bị hai loại dung môi bằng cách pha aceton : hexan với hai tỉ lệ là 3:7 và 4:6 (khoảng
10 – 20 mL dung môi mỗi loại )
Bước 5: Đưa bản mỏng vào bình ly giải
Cho hai bản mỏng silica gel vào hai bình ly giải chứa dung môi với tỷ lệ khác nhau và đậy kín miệng bình để ngăn bay hơi Quan sát mức dung môi dâng lên, khi đạt trước điểm kết thúc 3 mm thì lấy ra để đo khoảng cách và ghi nhận kết quả.
Kết quả và thảo luận
Hình 3.1 Đưa dịch chiết cây sài đất lên bản mỏng
Hình 3.2 Kết quả sắc ký bản mỏng
Hình 3.3 Sắc ký bản mỏng sử dụng pha động Acetone:hexan (3:7)
Hình 3.4 Sắc ký bản mỏng sử dụng pha động Acetone:hexan (4:6)
Rf = 𝑎 𝑏 Trong đó : a : quãng đường di chuyển của sắc tố (cm) b: quãng đường di chuyển của dung môi (cm)
Rf : hệ số di chuyển (cm)
Bảng 3.1 Hệ số Rf của các sắc tố trong mẫu
Acetone:hexan(3:7) Acetone:hexan(4:6) Độ dài cột dung môi 5,25 5,25
Hình ảnh quan sát cho thấy sự phân tích các sắc tố thực vật có sự khác biệt về khoảng cách và khả năng phân tách giữa hai loại pha động với tỷ lệ khác nhau Pha động với tỷ lệ Acetone:hexan (3:7) cho khả năng phân tách sắc tố tốt hơn so với tỷ lệ Acetone:hexan (4:6), với các vệt tách biệt rõ ràng và giá trị Rf không quá gần nhau Rf ở tỷ lệ 3:7 thấp hơn 4:6, cho thấy khả năng giữ các sắc tố lâu hơn và lực liên kết cao hơn.
Carotene có độ phân cực thấp nhất, cho phép nó hòa tan dễ dàng trong pha động không phân cực (hexan:acetone) và di chuyển nhanh chóng với quãng đường xa nhất Trong khi đó, Xanthophyll, mặc dù ít phân cực hơn nhưng chứa oxy, có độ phân cực cao hơn carotene, dẫn đến khả năng di chuyển xa hơn nhưng chậm hơn Chlorophyll a ít phân cực hơn Chlorophyll b, do đó di chuyển nhanh hơn và chiếm vị trí trước Chlorophyll b trên bản.
Kết luận : các sắc tố phân tách tốt nhất ở tỷ lệ pha động Acetone:hexan (3:7) Vì thế Acetone:hexan (3:7) là pha động tối ưu hơn trong thí nghiệm này
Bài tập sắc ký đồ yêu cầu xác định nồng độ của một số hợp chất trong chiết xuất quả cà phê bằng kỹ thuật sắc ký lỏng pha đảo với cột C18 Trong đó, việc định lượng axit protocatechuic là một phần quan trọng của quá trình phân tích này.
Bảng 1 Thời gian phát hiện và diện tích peak của chất chuẩn ở bốn nồng độ
STT Nồng độ (Concentration) Diện tích của peak (Area)
Hình 1 Biều đồ đường chuẩn Protocatechuic acid
Ta thu được phương trình đường chuẩn tương ứng: y = 14.372x – 2.2918 (R 2 = 0.9998) Trong đó : y : diện tích peak x: nồng độ chất cần tính trong mẫu (mg/L)
Nồng độ axit Protocatechuic trong 6 mẫu chiết xuất từ quả cà phê được phân tích bằng kỹ thuật sắc ký lỏng pha đảo – cột C18 lần lượt là 2.96 mg/L, 5.38 mg/L, 5.87 mg/L, 4.94 mg/L, 6.42 mg/L và 5.66 mg/L Kết quả này cho thấy sự biến đổi nồng độ axit Chlorogenic trong các mẫu cà phê.
Bảng 2 Thời gian phát hiện và diện tích peak của chất chuẩn ở bốn nồng độ
STT Nồng độ (Concentration) Diện tích của peak (Area)
Hình 2 Biều đồ đường chuẩn Chlorogenic acid y = 20.008x - 9.7092 R² = 0.9996
Ta thu được phương trình đường chuẩn tương ứng: y = 20.008x – 9.7092 (R 2 = 0.9996) Trong đó : y : diện tích peak x: nồng độ chất cần tính trong mẫu (mg/L)
Nồng độ axit chlorogenic trong 6 mẫu chiết xuất từ quả cà phê được phân tích bằng kỹ thuật sắc ký lỏng pha đảo với cột C18 lần lượt là 15.29 mg/L, 28.64 mg/L, 29.48 mg/L, 29.38 mg/L, 43.18 mg/L và 38.96 mg/L Đồng thời, việc định lượng axit caffeic cũng được thực hiện với các giá trị tương ứng.
Bảng 3 Thời gian phát hiện và diện tích peak của chất chuẩn ở bốn nồng độ
STT Nồng độ (Concentration ) Diện tích của peak (Area)
Hình 3 Biều đồ đường chuẩn Caffeic acid
Ta thu được phương trình đường chuẩn tương ứng: y = 21.456x – 4.1538 (R 2 = 0.9997) Trong đó : y : diện tích peak x: nồng độ chất cần tính trong mẫu (mg/L)
Nồng độ axit chlorogenic trong 6 mẫu chiết xuất từ quả cà phê được phân tích bằng kỹ thuật sắc ký lỏng pha đảo – cột C18 lần lượt là 15.29 mg/L, 28.64 mg/L, 29.48 mg/L, 29.38 mg/L, 43.18 mg/L và 38.96 mg/L Kết quả phân tích cho thấy mối quan hệ tuyến tính với phương trình y = 21.456x - 4.1538 và hệ số xác định R² = 0.9997.
BẢNG PHÂN CÔNG CÔNG VIỆC
Họ và tên MSSV Công việc được giao Tiến độ tham gia
Nguyễn Vương Huyền Trâm 21126213 Chỉnh sửa nội dung, tham gia viết báo cáo
Nguyễn Dương Phương Yến 21126593 Tổng hợp nội dung, tham gia viết báo cáo
Huỳnh Thị Kim Tuyến 21126567 Tham gia viết báo cáo, ghi nhận số liệu thí nghiệm
Lã Chí Đan 21126296 Tham gia viết báo cáo, ghi nhận hình ảnh thí nghiệm
Nguyễn Thị Thùy 21126529 Tham gia viết báo cáo, ghi nhận kết quả
