Khóa luận tốt nghiệp Bảo vệ thực vật: Khảo sát khả năng ức chế của dịch chiết thực vật đối với nấm Colletotrichum spp. gây bệnh thán thư trên xoài ở tỉnh Đồng Tháp

gây bệnh than thư trên xoài.Nội dung 1: Kết quả phân lập từ 20 mẫu bệnh bao gồm mẫu thân, và mẫu lá thutại vườn xoai thuộc xã Bình Thạnh và xã Mỹ Hiệp, huyện Cao Lãnh, tỉnh Đồng Tháp cho

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HÒ CHÍ MINH

KHOA NÔNG HỌC

KHOÁ LUẬN TÓT NGHIỆP

KHAO SÁT KHẢ NĂNG ỨC CHE CUA DỊCH CHIET

THUC VAT DOI VOI NAM Colletotrichum spp.

GAY BENH THAN THU TREN XOAI

O TINH DONG THAP

NGANH: BAO VE THUC VAT

KHOA: 2019 — 2023

MA SO SINH VIEN: 19145201

SINH VIEN THUC HIEN: PHAM ANH DUY

KHAO SÁT KHẢ NĂNG ỨC CHE CUA DỊCH CHIẾT

THỰC VAT DOI VỚI NAM Colletotrichum spp.

GAY BENH THAN THU TREN XOAI

O TINH DONG THAP

Tac gia PHAM ANH DUY

Khóa luận được đệ trình dé đáp ứng yêu cầu thực hiện

khóa luận tốt nghiệp ngành Bảo Vệ Thực vật

HƯỚNG DAN HỘI DONGPGS TS NGUYÊN NGỌC BẢO CHÂUPGS TS NGUYEN BAO QUOC

Tp Hồ Chí Minh, tháng 05 năm 2024

LỜI CẢM ƠN

Con xin khắc ghi công ơn to lớn đã sinh thành, dưỡng dục của cha mẹ Cảm ơncha mẹ và những người thân trong gia đình đã tạo mội điều kiện tốt nhất cho con, lànguồn động lực dé cho con có thể vượt qua mọi khó khăn, vấp ngã và có được như ngày

hôm nay.

Tôi xin gửi những lời kính trọng và lòng biết ơn sâu sắc nhất đến quý thầy côkhoa Nông học - Trường Dai học Nông Lâm Thành phó Hồ Chi Minh đã tận tình truyềnđạt những kiến thức và kinh nghiệm quý báu, luôn tạo điều kiện quan tâm, giúp đỡ vàrèn luyện trong suốt quá trình học tập tại trường cũng như trong quá trình thực hiện khoá

luận.

Đặc biệt, tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến PGS TS Nguyễn Bảo Quốc vàPGS TS Nguyễn Ngọc Bảo Châu cùng với đó là KS Nguyễn Thị Phụng Kiều đã tậntình hướng dẫn, truyền đạt cho tôi nhiều kiến thức chuyên môn và nhiều kinh nghiệmquý báu trong suốt quá trình thực hiện khoá luận

Bên cạnh đó tôi không quên gửi lời cảm ơn đến anh Nguyễn Mai Nghiệp, cácanh chị và các bạn tại phòng thí nghiệm Bệnh học và Chuẩn đoán thuộc bộ môn Côngnghệ Sinh học, Trường Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh đã luôn hỗ trợ vàgiúp đỡ tôi hoàn hoàn thành khoá luận.

Cuối cùng tôi xin gửi lời cảm ơn đến tập thê lớp DH19BV đã cùng tôi đồng hành,gắn bó trong suốt 4 năm học tập và nghiên cứu ở trường Đại học Nông Lâm Thành phố

Colletotrichum spp gây bệnh than thư trên xoài.

Nội dung 1: Kết quả phân lập từ 20 mẫu bệnh bao gồm mẫu thân, và mẫu lá thutại vườn xoai thuộc xã Bình Thạnh và xã Mỹ Hiệp, huyện Cao Lãnh, tỉnh Đồng Tháp

cho kết quả thu được 14 mẫu Colletotrichum spp gây bệnh than thư trên xoài với tan

suất xuất hiện của mẫu quả là 90,0%, mẫu lá là 0% Định danh được các mẫu nam qua

đặc điểm hình thái bao tử thấy được nhân gây bệnh than thư trên xoài là nam

Colletotrichum spp.

Nội dung 2: Đánh giá hiệu lực ức chế của dich chiết thuốc doi, lá trầu không vahỗn hợp dịch chiết thuốc doi và lá Trầu không đối với nam Colletotrichum spp gây bệnhthán thư trên xoài trên môi trường PDA đã cho thấy tại các mức nồng độ dịch chiết càngcao thì khả năng phát triển của nam cảng thấp so với nghiệm thức đối chứng sau 8 ngàytheo đối đối với nam Colletotrichum spp Dịch chiết lá trầu không cho hiệu lực ức chếnam Colletotrichum spp đạt 100% từ mức nồng độ 1,1% Trong khi đó, dịch chiết thuốcdoi cho hiệu lực ức chế hoàn toàn đạt 100% tại mức nông độ 11% Ngược lại, khi phốitrộn hỗn hợp dịch lá trầu không và thuốc dòi theo tỉ lệ 1:9 ở mức nồng độ 9% đạt hiệu

lực ức chế là 100%

Nội dung 3: Đánh giá hiệu lực ức chế của dịch chiết thuốc dòi, lá trầu không và

hỗn hợp dịch chiết thuốc đòi và lá trầu không đến sự nảy mầm cả bào tử nấmColletotrichum spp gây hại trên xoài ở các mức nồng độ sau 8GSC và 24GSC, lần lượt

là ở dịch chiết lá trau không ở mức nồng độ 0,3% và 0,9% đạt 87,7%, 98,8% lúc 8GSC;0,3% và 0,9% đạt 68,0%, 90,0% lúc 24GSC, đối với dịch chiết thuốc đòi ở mức nồng

độ 3% va 9% đạt 39,2%, 88,8% lúc 8GSC; 3% và 9% đạt 29,0%, 79,6% lúc 24GSC,

1H

cuối cùng ở hỗn hợp dịch chiết lá trầu không và thuốc dòi theo tỉ lệ 1:9 ở mức nồng độ1% và 7% đạt 76,7%, 85,5% lúc 8GSC; 1% và 7% đạt 68,3%, 81,0% lúc 24GSC

Từ các kết quả thí nghiệm của ba loại dịch chiết có khả năng ức chế nắm bệnh cóhiệu quả đối với nắm Colletotrichum spp gây bệnh than thư trên xoài

MỤC LỤC

Trang tae 1

LÊN CAM Noengguig ha tnHA H1 GIHGI010184850030010100301007G000.0.0.G1010:009400009300N/00/.G01901800068/0700800đ 1iTOE © Toca ccreerneeennwennse rere iiiTHÁNH BAM TH KH, TT TA cence oenninennicnesarnninetnmc viiiDANH SACH CAC HINH ui sessssssssssssesssssnessssnessssnecessniseessinseessneeessnseessneseenneeteen ixDANH SÁCH CAC BANG 0 0 sssssssssesssssesesseeesnnesestesessneecsnseecnnecessnesesnseessnesesneesnneeennees xGIỚI THIỆU - 2 ¿+ S+SE+SE+E£SE+EE+E£EE£EE2EEEE2E125212112111211211111121111121111111111 11 xe 1Đất vn OO sccesnernererenrreraecraveyasieemecmmem ereernanre pe 1000 100004834001000/1001100704000/4000 000016 1Mục tiêu đề tài - 5 s25 2122122122121212121212121212121212121211212122122122 xe $Yêu cẦÒU 2-52 S22212212212212212212212212121111111111111111111121112111112121212111 21 re 2

1.1.5 Dac o0 101776 44 61.1.6 Tình hình xuất, nhập khẩu của cây xoài trong nước và quốc tế - 6

TU TT SẼ KT a ere 61.1.2: TTOTIE 066 wesc z6 82066655200102/6980856G210801246008396GxEĐB aru cee REET 71.2 Tổng quan về nam Colletotrichum spp., bệnh than thư trên cây trồng §1.2.1 Giới thiệu về nam Colletotrichum spp . 2:©22-52-©52222225222222+22+22+z2zzzzsce 8

V

1.2.2 Các nghiên cứu về nam Colletotrichwum SỤp - -5 -5-552-22255255225522522+z>5+2csz<: 91.2.3 bệnh than thư trên cây trồng 22 2¿222222E2EE2EE2EE22EE2EE2E1 221221 2E.crrree 9

1.2.3.1 Sự gây hại của bệnh than thư trên xoài - 5-25 <2< << 10 1.2.4 Biện pháp phòng, trừ bệnh than thư trên xoài - - ¿5-22 c+<2cc+ccces 10 1.2.4.1 Bién phap camh sa 10 L2A2 Bien phap eG HOG ung nhá Eg 1000116080138 131918080330614E09055886E38880900408:800330151053150313385 088 11

LAA Bienr pap 6a WO esses cascmsacrsencsmassenepens sep saaheaaeepnsinay sneaverrneasaunees: tae: 12

1.3 Tổng quan về dịch chiết thực vật - 2 22222+2E22E222E22E222122322222212222222-e 121.3.1 Khái niệm Khái niệm về dich chiết thực vật 2 22¿2222z2z+2z2zzzzzzze- 121.3.2 Tổng quan về cây thuốc đòi (Pouzolzia zeylanica L.) -2 2-55z©552 12

LÄ Z1 ESvdim Trgu vội Teens r cree rneer nance tenon ede vonnebenemcnbantionestnes 121.3.2.2 Công dụng thảo mộc cây thuốc đòi 2 2¿222222+2222EE2EE2E+2ZEzE+zzxrzex 131.3.3 Tổng quan về cây trầu không ( Piper betle L ) 2 22©-225255+22sz22>zsz5s22 141.4.3.1 Đặu điểm lung vật Hục «xe can 2.201.120 0 0 121.4 07 0 141.3.3.2 Công dụng thảo mộc cây trầu không - 2-22 222S£2S22EE2EE22EZ2EEzEzzzxzzez 15Chương 2 PHƯƠNG PHAP VA VAT LIEU THÍ NGHIỆM + 17

25L IN G1 Gung S160 CU ws ssseesiessie1461X11165611681036300610G363NEGSGSLEHE34S888113980SGESHGGH930.4G80386938001E 17

2.2 Thời gian và địa điểm nghiên CU ccc cece cece cess eesseesseeeseessessstecsessseesseesteesneestees 17

2.2.1 Thời gian nghiền GỨU -. - s-< ss<s °2422 nh ng H01 0304.0850 522.0502001” 17

2.2.2 Địa điểm nghiên CHU cecceccsecssssesssessssecssessessessesessussuesnsssssssessessessesessesseeseeees 1

2:5 (VIỆT Liew tt ti HHIỂH ssiszasziseeybsseoos9802S503I2%095SEBMREWSESSEiD/SHĐGMGSG4G07879S875039908n/E0n88P.DcE2SEE 17

2.3.1 Nguỗồn mẫu - 2-2 ©2222122E22E1221251221221121122112112211211211211211211211211 21c 17

2.3.2 Dung cu va thiét bi may MOC eee cece 18 2.3.3 mOi trudng SU 00 1 18

DA Phiten e pháp: Chl HEHÏỆH”snsauesiaetiiitisgaiiaodlitttsebsiliHsEiSS(G48S8849480ã0I5S.38838xSi38gi20888 8806 182.4.1 Nội dung 1: Phan lập nam va định danh nam Colletotrichum spp gây bệnh thanthu trên xoài bang đặc điểm hình thái -2- 22 ©2222222222EE22EE2EE2EE2EESEEzErsrxrres 182.4.1.1 Phương pháp phân lập nam từ mẫu bệnh 2 2¿ 222z+2E2+2z+2zzzzzzzzz2 19

0 1006.5290i1-8 {09.1 202.4.1.2 định danh nắm gây bệnh than thư gây hại trên xoài bang đặc điểm hình thái 20

2.4.2 Nội dung 2: Đánh giá khả năng ức chế của dịch chiết cây thuốc doi, dịch chiếttrầu không đến nắm Colletotrichum spp gây bệnh than thư trên xoài 21AD) phương ghey bổ trí Hi web Oe seseccacnccccsceecscenmunneremannanmenanens BÀI

221.22 pRướng phap ñghẲÄiÊD CW c6 xcsce xen n0 on 014334895150165E1430660043364834004 0160413 23 2.4.2.3 chi ti6u ion nố 24

2.4.3 Nội dung 3: Ảnh hưởng của dịch chiết thuốc dồi, trầu không và hỗn hợp dịch chiếtthuốc doi và Trầu không đến sự nảy mam cả bào tử nam Colletotrichum spp Gây hại

EGLO 8 uioit05992512S01Q8ESI2NGLSEBHLSSHIRIEEEIARSSGSRREESNGRRESRCERESESbGESIBRS)4NGĐBEG03508835822)E8SI2B8080/21988g89 25

2.5 phương pháp xử lý số LGU oes eecceccsseccssecssecesneccsseessscesnecesseessecessecssssesnesenseessecentes 25Chương 3 KET QUA VÀ THẢO LUAN ocs sess ssssssssosssosssosesssesssessecesessessseesssesueestees 263.1 Kết quả phan lập va định danh nam Colletotrichum spp gây bệnh than thư trên xoàiEmmds iiểm idổt th eer 263.1.1 Phân lập nam Colletotrichum spp gây bệnh than thư trên xoài 263.1.2 Định danh nam Colletotrichum spp gây bệnh than thư trên xoài bằng đặc điểm

PE ocr acs 12-1 2207.107 de: 0y 7t Le ziEsi 3 2E: t0 crnerrEresretEaiktererexreesieẻ 27

33.1 Kết quả đánh giá hiệu lực ức chế của dịch chiết thuốc doi đối với nam

Tất liệu Tham KỈ vee cnsnc vee se crear romney errr ney neeunmereneaeenieey 45 PHÙ LG ccseesumemnssasnaxonssss centrations tesareumeasn'natreantens at ni sonecap neues sewnwen wutventasaresweunanenene 49

vil

DANH SÁCH CHỮ VIET TAT

Chir viét tat Viết đầy đủ

Cs: Cong su

DC: Đối chứng

ĐH: Đại Học

GSC giờ sau cay

LLG Lan lap lai

NSXL: Ngày sau xử lí

NT: Nghiệm thức

PDA Potato Dextrose Agar

SX —TM -DV: Sản xuất — Thương mại — Dịch vụ

DANH SÁCH CÁC HÌNH

Hinh.1.1 Thuốc đòi Pouzolzia ZOVIANICE 000 880095575 13Hình 1.2 Lá trầu không (Piper betle I.,.) -2-©2¿©222S++SE2EE22E2EE2EE2EESzxzrrsrxrrei 15Hình 3.1 kết quả phân lập từ mẫu bệnh Hình thái nắm Collettruchum spp Quan sát dướikính hiển bvi Olymus (CX23) vi độ phóng đại 40X; (A):mặt trước đĩa namColletotrichum spp mọc trên môi trường PDA 8 ngày sau cấy: (B): mặt sau đĩa nam

0 27//2/2///2/71/.8)9UAPnn58— + 26

Hình 3.2 Hình thái sợi nam, bào tử và giác bám của nắm Colletotrichum spp quan satdưới kính hiển vi Olympus (CX23) độ phóng đại 40X -2-©22- 55225522: 28Hình 3.3 kết quả lây bệnh nhận tạo trên quả xoài sau 5 ngày và tái phân lập lại, (A): quả

bị nhễm bệnh khi lây bệnh trên quả; (B): mặt dưới dia nam Colletotrichum spp sau khitái phân lập sau 8 ngày; (C): bao tử nắm Colletotrichum spp sau khi tái phâp lập 29Hình 3.5 Ảnh hưởng của dịch chiết thuốc dòi đến sự phát triển đường kính tản nắmColletotrichum spp ở thời điềm 8 ngày sau cấy -2-522222222c222zrerrcrrrerrees 32Hình 3.6 Ảnh hưởng của dịch chiết lá trầu không đến sự phát triển đường kính tản nắmColletotrichum spp ở thời điểm 8 ngày sau cấy 22©52 222 2222222222222E2zce, 35Hình 3.7 Ảnh hưởng của hỗn hợp địch chiết thuốc dòi và lá trầu không đến sự phát triểnđường kính tản nắm Colletotrichum spp ở thời điểm 8 ngày sau cấy - 37Hình 3.8 Ảnh hưởng của dịch chiết đến sự nảy mam bào tử nam Colletotrichum spp.tại thời điểm 8 GSC (A): đối chứng ban dau; (B): đối chứng 8GSC; (C): dịch chiết thuốcdoi 3%; (D): dịch chiết thuốc dồi 9%; (E): dịch chiết lá trầu không 0,3%; (F): dịch chiết

lá trầu không 0,9%; (G): hỗn hợp dịch chiết 1%; (H): hỗn hợp dịch chiết 7% 42Hình 3.9 Ảnh hưởng của dich chiết đến sự nảy mầm bào tử nam Colletotrichum spp.tại thời điểm 24 GSC Trong đó (A): đối chứng ban đầu; (B): đối chứng 24GSC; (C):dịch chiết thuốc doi 3%; (D): dịch chiết thuốc déi 9%; (E): dịch chiết lá trầu không0,3%; (F): dich chiết lá trầu không 0,9%; (G): hỗn hop dịch chiết 1%; (H): hỗn hợp dich0.777 42

1X

DANH SÁCH CÁC BANG

Bảng 2.1 Kí hiệu vườn, mẫu và vị trí thu mẫu bệnh thán thư trên xoài ở tỉnh Đồng Tháp

Bảng 2.2 Thí nghiệm: Đánh giá hiệu lực ức chế của dịch chiết trầu không đến sự pháttriển đường kính tản nắm Colletotrichtm SỤ -5-22-©222©22552252z222+z22zz22zzc5zze: 32Bảng 2.3 Thí nghiệm: Đánh giá hiệu lực ức chế của dịch chiết cây thuốc đòi đến sự pháttriển đường kính tản nam Colletotrichum SpỤ . 5-2:©22©52©5255255225225252z>zz25z<2 22Bảng 2.4 Thí nghiệm: Đánh giá hiệu luc ức chế của hỗn hop dịch chiết cây thuốc doi va

dịch chiết lá trầu không đến sự phát triển đường kính tan nam Colletotrichum spp .23

Bang 3.1: Số mẫu nắm Colletotrichum spp phân lập được từ 2 vườn xoài ở huyện CaoLãnh, tỉnh Đồng Tháp - 2-2-2 22SS+2E2E122E22212212231221221122122112112211211221211 21121 e6 27Bang 3.2 Ảnh hưởng của nông độ dịch chiết thuốc doi đến đường nắm Colletotrichumspp nuôi cay trên môi trường PDA ở thời điểm 8 ngày sau cấy i (mm) 3ÏBảng 3.3 Ảnh hưởng của nồng độ dịch chiết trau không đến đường nam Colletotrichumspp nuôi cấy trên môi trường PDA ở thời điểm 8 ngày sau cay (mm) 34Bảng 3.4 Ảnh hưởng của hỗn hợp dịch chiết thuốc đòi và lá trầu không đến sự pháttriển đường kính tan nam Colletotrichum spp nuôi cấy trên môi trường PDA ở thời điểm

8 ngay sau ào 36Bảng 3.5 Hiệu lực ức chế (%) sự nảy mam bao tử Colletotrichum spp cua dich chiétthuốc đối ở cñc nông G6 khác TÍN: co canciceceniresarannvniiciennsnenmrinarnnmemenies 39Bảng 3.6 Hiệu lực ức chế (%) sự nay mầm bào tử Colletotrichum Spp của dịch chiết látrâu không ở:cáe nồng độ khác nhau ~ SE.Eiireereoi 40Bảng 3.6 Hiệu lực ức chế (%) sự nảy mam bao tử Colletotrichum spp của hỗn hợp dịch

chiết lá trầu không và thuốc doi ở các nồng độ khác nhau 5:25: 41

GIỚI THIỆU

Đặt vân đê

Xoài (Mangifera indica) là một loại quả quý được người tiêu dùng ưa chuộngbởi hương vị phong phú, đậm đà rất đặc trưng Cây được biết đến là giống cây có nguồngốc nhiệt đới, xoài là một trong những loại trái cây nhiệt đới chính được trồng tại ViệtNam, chỉ đứng sau chuối Việt Nam là nước sản xuất xoài lớn thứ 13 thế giới với tổngdiện tích trồng trong cả nước khoảng hơn 87.000 ha, năm 2020, tổng sản lượng xoài củaViệt Nam đạt 893,2 ngàn tan, tăng 6,5% so với cùng kỳ năm trước Xoài được trồngnhiều nhất ở khu vực Đồng bằng sông Cửu Long, chiếm khoảng 48% tổng điện tích xoài

cả nước, năm 2020 đạt 567.732 tắn

Hiện nay có rất nhiều giống xoài được trồng phô biến ở Việt Nam như: xoài Cát

Chu, xoài Cát Hòa Lộc, xoài Đài Loan, Xoài keo, Trong đó, Xoài Cát Hòa Lộc có quả

to, tròn hoặc hơi bầu dục, với màu vỏ quả vàng cam hoặc vàng sáng Vỏ quả dày, cứng,giúp bảo vệ quả xoài bên trong Một điểm đặc trưng của giống xoài Cát Hòa Lộc là vịngọt đậm, thơm mạnh vả mọng nước Thịt quả màu vàng, mềm, có hạt nhỏ và có kếtcau mịn Một điểm đặc trưng của giống xoài Cát Hòa Lộc là vị ngọt đậm, thơm mạnh

va mong nước Thịt quả mau vàng, mềm, có hạt nhỏ và có kết cau mịn Với hương viđặc trưng và giá trị dinh dưỡng cao, xoài Cát Hòa Lộc đã trở thành một thương hiệu xoài

nôi tiếng và được ưa chuộng không chỉ trong nước mà còn trên thị trường quốc tế

Nhưng hiện nay do những thay đổi về thời tiết làm một số bệnh hại trên xoài cóchiều hướng gia tăng và gây hại nặng, bệnh thán thư là một trong những bệnh hại nguyhiểm và phổ biến nhất trên cây xoài, do nam Colletotrichum spp gây ra (Ploet, 2003),bệnh gây hại trước và sau thu hoạch làm cho chất lượng bị sụt giảm, không đảm bảođược yêu càu thương mại dẫn đến thất thu cho người nông dân

Quá trình biến đối khí hậu cùng với sự phát triển của ngành nông nghiệp Nhucầu về thuốc bảo vệ thực vật (BVTV) vì thé cũng ngày một tăng theo Dé giảm thiêu táchại của thuốc BVTV tới môi trường, xu hướng sử dụng các thuốc BVTV sinh học cónguồn gốc thảo mộc ngày một phô biến hơn (Phạm Trung Hiếu, ctv, 2021) Việc sửdụng các thuốc BVTV sinh học hoặc các sản phẩm có nguồn gốc từ sinh học nhằm hạn

chế việc kháng thuốc, an toàn cho con người và động vật, môi trường còn làm giảm chiphí sản xuất.

Nên đề tài “ khảo sát khả năng ức chế của dịch chiết thực vật đối với namColletotrichum spp gây bệnh than thư trên cây xoài ở Đồng Tháp” được thực hiệntại tường Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh

Đề tài được thực hiện từ tháng 08/2023 đến tháng 05/2024 trong phạm vi phòngthí nghiệm RIBE 302 — 304 (Bệnh học và Chân đoán), Khoa Khoa học Sinh học, trườngĐại hoc Nông Lâm thành phó Hồ Chí Minh

CHƯƠNG 1

TỎNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 Tong quan về cây xoài

1.1.1 Nguồn gốc và sự phân bố cây xoài

Cây xoài (Mangifera indica), loại cây trồng nhiệt đới có nguồn gốc từ An Độ

và được trồng phổ biến ở Việt Nam

Có 3 vùng có thể được coi là nơi phát sinh của cây xoài, khu vực Ấn Độ vàĐông Dương, vùng biên giới An Độ và Myanmar và khu vực Đông Nam A, trong cácnước Đông Nam Á thì Thái Lan cũng được xem là nơi xoài bắt Nguồn, xoài không phải

là một cây trồng bản địa ở Indonesia, nó chỉ được đưa và trồng ở một vài hồn đảo trongthới gian gần đây (Bompard, 2009)

Có thể ở các vùng giáp ranh như Miến Điện, Việt Nam, Malaysia, Lào,Campuchia Đến nay, trên thé giới có tới gần 90 nước trồng xoai với diện tích hàng triệuhecta Việt Nam cũng có thể là một trong những nơi xuất xứ của xoài Ngoài nhữngchứng cứ do nhiều tác giả viết, còn có chứng cứ thực tế là xoài có mặt ở khắp nơi trongnước, với nhiều giống xoài dại lâu năm ở những vùng còn hoang sơ như đọc theo sôngsuối, theo biên giới Việt - Lào và xoài có cả ở nơi dân cư đông đúc như ngoại thành HàNội Một bằng chứng nữa là xoài ở Việt Nam, Malaysia, Indonesia, Philippin thường

thuộc nhóm đa phôi, còn ở An Độ, Pakistan, Bangladesh phan lớn là đơn phôi, theo một

nghiên cứu trong số 325 giống xoài ở miền Nam Án Độ thì có tới 315 giống là đơn phôi

(Nguyễn văn Luật, 2009)

Theo Nguyễn Văn Kế (2014), xoài được trồng ở khoảng 100 nước và vùng lãnhthé khác nhau, trong đó Châu A chiếm 80%, Châu Mỹ 13%, Châu Phi 7% Ở Châu A,xoài được trông chủ yêu ở Đông Nam A và Trung Quốc Ở Việt Nam, xoài được trông

ở hầu hết các tỉnh và tập trung nhiều nhất ở các tỉnh Nam Bộ: Đồng Tháp, Tiền Giang,Đồng Nai

Theo Niêm Giám Thống Kê của Tổng cục Thống Kê (2011), điện tích xoài đượcgieo trồng ước tính khoảng 86.400 ha và diện tích thu hoạch là 71.800 ha, riêng tinhĐồng Tháp có khoảng 9.100 ha (Hoàng Quốc Tuan, 201 1)

1.1.2 Phân loại

Xoài tên khoa học Mangiferra indica L Thuộc họ Anacardiaceae, ho nay conbao gồm các cây như cóc (spondias cytherea Sonn), Điều (Anacardium occidentale L),

Quéo (Mangifera reba Piere),

1.1.3 Phân loại khoa học cây xoài

Theo trung tâm dt liệu thực vật Viet Nam (2018), xoài được phân loại như sau: Giới: Plante

Loài: Mangifera india

1.1.4 Đặc điểm thực vat hoc

1.1.4.1 Than va tan

Xoài là dai mộc, tán rộng, cay trồng bằng hạt có thé cao tới 30 — 40 m và có thésông từ 100 — 300 năm, nhưng nếu là cây ghép thì tan hẹp và thấp (10 — 15 m), câymau cỗi Tan có dạng hình cầu, nhiều cành Than san sùi và có các vết nứt dọc theothân cây Các biện pháp kỹ thuật cần áp dụng như cắt tỉa, trồng dày dé khống chế chiềucao và đường kinh tán cây giúp cho việc chăm sóc, bao trái, thu hoạch dễ dàng hơn

Phần lớn rễ phân bố ở tang đất từ 0 — 50 cm ở những vùng có mực nước ngầmthấp hay đất cát, rễ có thé ăn rất sâu (6 — 8 m) Tuy nhiên, phan lớn rễ tập trung trongphạm vi cách gốc khoảng 2 m Ở Pakistan khi đào bộ rễ cây xoài 18 tuổi thấy bộ rễ ăn

xa tới 9 m, nhưng phần lớn rễ tập trung trong phạm vi cách gốc 2 m, xuống sâu chỉthấy có rễ cái và những rễ này có thé ăn sâu tới 6 — 8 m

Trồng xoài bằng hạt và cây ghép có gốc cây là thực sinh thì rễ cọc phát triển ănthắng xuống tầng sâu của đất Trồng bằng cành chiết hoặc cành giâm thì rễ mọc ra xungquanh gốc tạo hệ rễ chùm, không có rễ cọc, bộ rễ này không ăn sâu bằng rễ cây thực

1.1.4.4 Phát hoa và hoa xoài

Xoài được trồng bằng hạt sau 6 — 8 năm mới bat đầu ra hoa (riêng đối với xoàiBưởi ra hoa sớm hơn, khoảng 3 năm tuổi thì cây ra hoa) Đối với xoài ghép thôngthường sau 3 năm xoài ra hoa Hoa mọc thành chùm, phát hoa có 2 kiểu tùy giống; kiểuhình tháp nhọn có cuống chính dài khoảng 30 — 50 cm, đường kính phan lớn có dạngđáy hẹp khoảng 20 — 30 em, kiểu hình nón có cuống chính ngắn và đường kính đáyrộng Số lượng nhảnh bên thay đổi tùy thuộc vào giống và tình trạng dinh dưỡng củacây Một phát hoa xoài có rất nhiều hoa, khoảng vài trăm đến vài ngàn hoa, gồm hoađực và hoa cái Hoa thụ phấn chủ yêu nhờ côn trùng, và sự thụ phan phụ thuộc vào thờitiết

1.1.4.5 Trái và hạt

Xoài thuộc loại qua nhân cứng Trái xoài có nhiêu dạng: tròn, bau dục, dai Vỏ trái có màu từ xanh đên vàng và đỏ Hạt xoài có bao cứng, ngoài bao hạt có nhiêu xơ.

Hạt xoài có 2 loại: hạt đa phôi (xoài Đông Nam Á) và hạt một phôi (xoải Ấn Đội

1.1.5 Đặc điểm sinh thái

Theo Lê Thanh Phong (2001), một số đặc điểm sinh thái của cây xoài như sau:Khí hậu: Xoài có thé chịu được nhiệt độ từ 4-10°C đến 46°C, nhưng tốt nhất ở 24-27°C Nhiệt độ cao gây hại cho sự sinh trưởng của cây, nếu âm độ không khí thấp Dù

có khả năng chiu hạn, xoài rất cần nước dé cho sản lượng cao Sản lượng xoài tươngquan chặt với lượng mưa hằng năm Xoài có thé mọc ở độ cao dưới 1200 m, nhưng tốtnhất từ 600 m trở xuống Trồng càng cao, xoài tré hoa càng muộn, cứ lên cao 120 m(hay tăng 1° vĩ độ) thì cây trỗ hoa trễ hơn 4 ngày

Đất: Xoài mọc tốt trên nhiều loại đất, nhưng tốt nhất là đất cát hay thịt pha cát,thoát thủy tốt; có thủy cấp không sâu quá 2,5 m So với những cây ăn trái nhiệt đớikhác, xoài có lẽ là cây chịu úng tốt nhất Dat nhẹ, kém màu mỡ giúp cây dé cho nhiềuhoa và đậu trái; trong lúc đất màu mỡ, đủ nước chỉ giúp cây phát triển tốt, nhưng cho

it trái Xoài chịu được pH từ 5,5 - 7,0 Dat chua (pl=5) làm cây phát triển kém

1.1.6 Tình hình xuất, nhập khẩu của cây xoài trong nước và quốc tế

1.1.6.1 Quốc tế

Theo tổng giám đốc hiệp hội các nhà sản xuất và xuất khẩu xoài Pê-ru (APEM),

trong năm tài chính 2017-2018 Pê-ru đã xuất khẩu 200 nghìn tan xoài, tăng 11% so vớinăm tài chính 2016-2017 Năm tài chính 2017-2018 vừa mới kết thúc, đây là mức kỷ

lục mới về xoài xuât khâu của Pê-ru.

Theo Cục Xuất nhập khẩu thuộc Bộ Công Thương Việt Nam năm 2018, trongnăm tài chính 2017-2018, 65% lượng xoài xuất khâu của Pê-ru được xuất khẩu sangthị trường châu Au (tăng từ mức 60% trong năm tài chính 2016-2017) Lượng hangxuất khẩu sang Hoa Kỳ chỉ chiếm 30%, giảm so với mức 35% trong năm tài chính

lân, Ch¡i-lê, Trung Quốc, Nhật Ban va Hàn Quốc Thị phần xuất khâu tới Hoa Kỳ giảm

do tuyết rơi nhiều ở bờ biến phía đông của Hoa Kỳ vào cuối năm 2017 làm hạn chếvận chuyên các lô hàng tới Hoa Kỳ Vì vậy, các nhà xuất khâu Pê-ru đã chuyên hưởngsang các thị trường truyền thống trong khu vực châu Âu

Theo CBI (2018), Châu Âu nhập khẩu phần lớn xoài từ các nước đang phát triển

Từ năm 2013 đến năm 2017, nhập khẩu xoài châu Âu (bao gồm măng cụt và ôi) từ cácnước đang phát triển tăng từ 461 triệu Euro lên 737 triệu Euro Nguồn cung còn lại từcác nước ngoài châu Âu khác như Israel hay Hoa Kỳ, và được bồ sung từ xoài đượcsản xuất ở châu Âu của Tây Ban Nha Ở châu Au, nước nhập khẩu xoài tươi hàng đầu

từ các nhà cung cấp không thuộc châu Âu là Hà Lan, tiếp theo là Đức và Anh Năm

2017, Ha Lan là nước chịu gần 28% nhập khẩu xoài của châu Âu

Trong những năm gần đây, Úc xuất khâu khoảng 8% sản lượng (4.500-5.000tấn năm), trong đó sang bốn thị trường chính (chiếm 80%) là Hongkong (2012-2013:1.932 tan), New Zealand (2012-2013: 595 tan), Singapore (2012-2013: 570 tan) và Cáctiểu vương quốc A rap thống nhất (UAE) (2012-2013: 483 tan) Tuy nhiên, trong mùa

vụ xoài 2014-2015, xuất khẩu xoài tăng tới 30% so với cùng kỳ năm trước, đạt 7.000tan, do Úc mở được thị trường Mỹ và Indonesia Với hai thị trường mới có dân số 600triệu dân, Úc dự kiến sẽ xuất khâu khoảng 8.000 — 10.000 tấn trong năm 2016/2017 và

kỳ vọng xuất khâu được 20% sản lượng trong 5 năm tới

1.1.6.2 Trong nước

Ngày 19/9/2016, chuyến xoài đầu tiên của Việt Nam đã vượt qua được hang raokiểm dịch nghiêm ngặt của Úc và được tiêu thụ tại hệ thống siêu thị NP Supermarket

ở Thành phố Perth, Tây Uc và được quảng cáo là “Vua của xoài xanh — Lan đầu tiên

có mặt ở Perth” Xoài xanh Việt Nam được ban với giá $14.99/kg Day là loại xoài daxanh Cao Lãnh (Đồng Tháp)

Theo Trung tâm Xúc tiến Đầu tư - Thương mại - Du lịch Tiền Giang (2018),trong 5 tháng đầu năm 2018, xuất khâu xoài đạt kim ngạch lớn thứ 4 sau các mặt hàngthanh long, sầu riêng và nhãn, đạt 124,52 triệu USD, chiếm 9,7% tỷ trọng trong tôngkim ngạch xuất khẩu quá và quả hạch, tăng so với 6,2% tỷ trọng trong 5 tháng đầu năm

2018 và ghi nhận tốc độ tăng trưởng 84,5% Việt Nam xuất khẩu xoài sang 39 thi

trường trên thế giới trong 5 tháng đầu năm 2018 Trong đó, xuất khâu sang thị trườngTrung Quốc dat 111,79 triệu USD, chiếm 89,8% tỷ trọng trong tông kim ngạch xuấtkhẩu xoài, tăng so với 82,9% tỷ trọng trong 5 tháng đầu năm 2017 và ghi nhận tốc độtăng trưởng 99,8% Đảng chú ý, xuất khâu xoài sang nhiều thị trường tăng trưởng trong

5 tháng đầu năm như Nga tăng 341%, đạt 724 nghìn USD; Thái Lan tăng 359 9% Pháp

tăng 304,5%; UAE tăng 339,7%.

1.2 Tong quan về nắm Colletotrichum spp., bệnh than thư trên cây trồng

1.2.1 Giới thiệu về nắm Colletotrichum spp

Đặc điểm: Nam Colletotrichum spp được mô tả có 11 loài (Von Arx, 1957);Sutton, 1973 Nhưng có trên 1000 loài với hình thái khác nhau trong giống này so vớinhưng mô tả trước đây, phần lớn chúng trùng tên (Alexopoulos và Mims, 1979) Theo

Baxter và cs (1985), Colletotrichum spp được giới thiệu có 21 loài trong đó có 6 loài

gây bệnh than thư là Colletotrichum coccodes, Colletotrichum dematium,

Colletotrichum gloeosporioides, Colletotrichum graminicola, Colletotrichum falcatum

và Colletotrichum capsici (theo tông hợp của Sharma, 1989)

Soi nam: Nội sinh, soi nam mảnh, phân nhánh, không mau, có vách ngăn, sợi

nâm có nội bào và gian bảo, nhiêu hạt dâu được sản xuât trong mỗi tê bào của hệ sợi

nâm; khi chín sợi nầm trở nên sậm và bệnh xoăn lại thành dạng chât nên nhỏ lớp ngoài cùng.

Sinh san: Colletotrichum spp chỉ sinh san vô tinh bằng bào tử đính, bao từ đỉnhphát triển trên cuống bao từ trong dang thé trái là cụm cuống bào tử Cụm cuống bào

từ có dang đĩa phẳng, mặt sau có cau trúc phan mịn, mỗi cụm cuống bào tử gồm lớpchất nền, bề mặt sản sinh cuống bào từ trong suốt Cuống bao tử, lông dài cứng, thuônnhọn, không phân nhánh và đa bào cấu trúc như tơ cứng Ngoài ra, cũng có một vàiloài có hoặc không có lòng củng có thé được kiểm soát bởi sự thay đổi độ âm Sự hìnhthành một số lớn của bao từ gầy nut gãy trên biéu bì vật chủ, gặp điều kiện thuận lợi,mỗi bào tử mọc từ một đến nhiều ông mam dé hình thành hệ sợi nam; Dia bám là dạng

Nó có thê ở tận cùng hoặc chen giữa sợi nâm và tôn tại trong thời gian dài và khi tách

ra chúng cũng mọc mam dé hình thành sợi nam mới

1.2.2 Các nghiên cứu về nắm Colletotrichum spp

Gardes va Bruns (1993) áp dụng dữ liệu trình tự ADN dé phân loại cấp loài, đãnhận diện được sự biến đồi vùng ITSI của rDNA giữa 6 loài trong chi Colletotrichumspp và phát hiện ra hiện tượng đa hình trong cùng một vùng của các loài trong phứchợp loài Colletotrichum gloeosporioides từ các ky chủ khác nhau Nắm Colletotrichumspp rất đa dạng về loài và chứa các phức hợp loài Hiện nay, ước tính có khoảng trên

100 loài đã được nhận diện (Damm và cs,2012).

Là mầm bệnh thực vật, các loài Colletotrichum spp chủ yêu được mô tả là gây

ra bệnh thán thư, mặc dù các bệnh khác cũng được báo cáo như bệnh thối đỏ mía, bệnhquả cả phê, bệnh thối ngọn dâu tây và chuối, và đốm nâu trên đậu đũa Các triệu chứngbệnh thán thư bao gồm các vết hoại tử giới hạn, thường trũng trên lá, thân, hoa và quả,cũng như thối ngọn và thân, cháy la (Lenne, 2002; Agrios, 2005) Nhiều loài đượcsinh ra từ hạt giống và có thê tồn tại tốt trong đất bằng cách phát triển tự nhiên trên cácmảnh thực vật chết, có thé lây lan qua sự phát tán bào tử trong nước và truyền qua

không khí (Nicholson và cs, 1980).

1.2.3 bệnh thán thư trên cây trồng

Nam Colletotrichum spp gây ra bệnh than thư trên các loại cây trồng như: xoài,cầu riêng, nhãn, cà phê, ớt, chuối, dâu tây, nho Thán thư là bệnh nguy hiểm trên câytrồng Colletotrichum spp gây bệnh than thư thường tan công ngọn non, lá non, hoa vàtrái với những triệu chứng điển hình như: trên hoa, bệnh làm rụng hoa; ở lá, đốm bệnh

có màu xám nâu, tạo ra các đốm cháy: ngọn, cảnh non có các đốm bệnh màu nâu xám,vùng bị bệnh sẽ khô đi làm cho rụng lá và khô chết đọt; trên trái , vỏ trái có những démđen hoi tròn hay bau dục, lõm vào Bệnh này thường xuất hiện ở những mô dang pháttriển và cả những mô trưởng thành, gây hai cả trước và sau thu hoạch Nam

Colletotrichum spp Có thé xâm nhập và không biểu hiện ngay ma chỉ khi có điều kiện

có lợi mới gây bệnh Bệnh than thư do nam Colletotrichum spp gây hại chủ yêu ởnhững bộ phận xa mặt đất, tuy nhiên rễ và thân củ cũng có khả năng nhiễm bệnh

1.2.3.1 Sự gây hai của bệnh than thư trên xoài

Bệnh gây ra lụi hoa, lá và trong một số trường hợp nghiêm trọng, cây héo ngọn;

theo Arauz (2000).

Theo Nguyễn Văn Kế (2001), bệnh thán thư gây hại ở đọt non, lá non, hoa, trái,trên phiến lá vết bệnh den tròn có góc cạnh làm bản lá biến dạng Nắm Colletotrichumspp thuộc nhóm nam ki sinh không bắt buộc Soi nam trong suốt, bao tử có dạng trứnghoặc hình chữ nhật thuôn Chiều dài bào tử nam từ 10 — 15 um và chiều rộng từ 5 — 7

um Tại các vết bệnh trên trái, khối bao tử có màu hồng Nam Colletotrichum spp tạicác mô bị nhiễm bệnh tập trung thành chùm màu vàng nhợt nhạt và nằm bên dưới biểu

bì Nam có tơ cứng, ngắn, cuống bào tử thăng

Theo Nguyễn Văn Huỳnh, Võ Thanh Hoàng (1997), bệnh thán thư hại xoài donam Colletotrichum gloeosprioides gây ra Bệnh khá phố biến và khá trầm trọng ởnhiều khu vực trồng xoài, làm rụng lá, khô chết dọt, rụng bông, khô vỏ trái Mầmbệnh lưu tồn trong cảnh lá bị bệnh (Lợi, Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, 2004)(Đinh Thị Vân) (Huyện Thảo, 2012.) sẽ phát triển mạnh nhất trong các tháng có mưanhiều khi trời có nhiều sương, bệnh sẽ phát triển gây hại làm rụng bông nhiều

1.2.4 Biện pháp phòng, trừ bệnh thán thư trên xoài

sự thông thoáng trong vườn.

Bon phân cân đối, hợp lí: nên bón phân cân đối và hợp lí theo quy trình kỹ thuậtcanh tác xoài, liều lượng và loại phân tùy thuộc vào từng loại đất và điều kiện sinhtrưởng của cây, khả năng cho trái của vụ trước Cần bón nhiều phân hữu cơ đã được ủ

oai mục.

Bon phân hữu cơ, phân chuồng hoại mục là biện pháp căn bản nhất dé cây xoàisinh trưởng bền vững, cung cấp nhiều vi lượng cho cây để bù đắp lại lượng thiếu dokích thích ra hoa trái vụ, tạo sự thông thoáng cho đất dé các vi sinh vật có lợi trong đấthoạt động tốt, giúp dễ quản lí sâu bệnh hại, tắng cường khả năng đề kháng cho cây.

Tưới nước: nên thiết kế hệ thông tưới để quản lí tốt nguồn nước, tránh mầmbệnh lây lan, tránh tưới phun lên tán cây khi trong vườn có nhiều mầm bệnh thán thư.Biện pháp vệ sinh đồng ruộng có vai trò quan trọng trong việc phòng bệnh thán thư donam Colletotrichum spp Cần tiễn hành các biện pháp kĩ thuật như cắt tỉa cành, tạo tánthông thoáng giúp cây ngăn cản sựu phát sinh và phát triển của nam Colletotrichumspp., đồng thời cũng giúp việc phun thuốc và phán tán của thuốc trừ bệnh dé dang hơn,

từ đó làm tăng hiệu quả phòng trừ nam bằng các biện pháp khác Trong vườn, nguồnbệnh có mặt khắp nơi và khi gặp điều kiện thuận lợi nhanh chóng phát triển thành dịchbệnh do vậy cần làm cỏ trong vườn, tiêu hủy các nguồn bệnh và thu gom các cànhbệnh, cành sau khi cắt tỉa.

Tránh tạo các vét thương cơ giới cho cây trong quá trình chăm sóc và sau thuhoạch cũng cần được lưu ý bởi sự xâm nhiễm và gây hai của nắm Colletotrichum spp

Là thông qua những tốn thương trên bề mặt cây Sử dụng giống chống chịu với bệnh

và cây non sạch bệnh.

1.2.4.2 Biện pháp cơ học

Tia cành tạo tán đóng vai trò quan trọng , giúp cây sinh trưởng, phát triển tốt,giảm bệnh hại trên cây Đối với cây trong thời kì kiến thiết cơ bản: tia cành tạo tán giúpcây có tán nhỏ, đều, thông thoảng, giúp cây quang hợp tốt, loại bỏ được cành lá bệnh

Đối với cây trong thời kì kinh doanh: nên cắt bỏ những cành sâu bệnh nặng nhất

là vào giai đoạn sau thu hoạch, khi có lá non bị nhiễm nhiều Thu gom tất cả các tàn

dư sau khi cắt tỉa hoặc sau khi thu hoạch dé giảm mam bệnh trong vườn

1.2.4.3 Biện pháp sinh học

Trong vườn nên bón nhiều phân hữu cơ và cung cấp nam đối khángTrichoderma vừa giúp phân hủy chất hữu cơ nhanh, vừa diệt mầm bệnh hiện diện trênxác bã thực vật có trên và trong đất Sử dụng chất kích kháng có chứa Salicylic acid

II

phun trên trái vào thời điểm 20 -25 ngày trước thu hoạch và tiến hành bao trái bằngbao chuyên dùng (trong điều kiện không bao trái thì nên phun Salicylic vào thời điểm

20 ngày và 10 ngày trước khi thu hoạch).

1.2.4.4 Biện pháp hóa học

Theo Nguyễn Văn Huỳnh, Võ Thanh Hoàng (1997), phương pháp phòng trừ

bệnh thán thư hại xoài: tiêu hủy cành lá bị bệnh dé tránh lây lan, trong mùa mưa có thểphun định kỳ các nhóm thuốc gốc đồng như Bordeaux 1%, Copper-zin C, Copper-B,Zinep, nhúng trái trong nước nóng 50°C có pha Benmyl 0,05% dé phòng ngừa bệnhphát triển trong quá trình sau thu hoạch

1.3 Tổng quan về dịch chiết thực vật

1.3.1 Khái niệm Khái niệm về dịch chiết thực vật

Dịch chiết thực vật là loại tinh dầu sản xuất từ nguồn nguyên liệu là các loại

cây, vỏ cây, rễ cây, lá, hoa quả theo phương pháp hữu cơ, không phân bón hoá học,

thuốc tăng trưởng, thuốc sâu trong quá trình gieo trồng, thu hoạch và chế biến Thôngthường được tạo ra trong quá trình chưng cất tách các hợp chất dầu và nước của nhàmáy bằng cách hấp các loại tỉnh dầu là các loại dầu tập trung cao có mùi thơm mạnh.Những tinh dầu này rất dé bị phân huỷ dưới tác động oxy hoá và ánh sáng nên chúng

ít gây độc hại cho môi trường sinh thái (Nguyễn Trần Oánh và cs, 2007)

1.3.2 Tong quan về cây thuốc doi (Pouzolzia zeylanica L.)

Cây thuốc dòi có tên khoa học là: Powzolzia zenlanica L., thuộc họ Urticaceae,trong nhân gian còn có tên khác là bọ mắm, thuốc vòi

Thuốc dòi là cây ưa ầm, hơi chịu bóng, thường mọc lẫn với các loại cây kháctrong vườn, ven đường đi và vùng nương rẫy Cây phân bố rộng rãi khắp các vùng đồngbằng, trung du và của miền núi; tập trung nhiều ở các quốc gia nhiệt đới như Việt Nam,Trung Quốc, Lào, Thái Lan, Ấn Độ theo Viện được Liệu (2006)

1.3.2.1 Đặc điểm thực vật học

Thuốc doi là cây thân thảo, cao khoảng 12 đến 50 cm, sống quanh năm, thânđứng thang, hướng lên, thường có vài nhánh mềm Thân rễ thường có mau, cành cây

thường ngắn có lông cứng Lá dai 4-9 cm, rộng 1,5-2,5 cm; moc so le, hiếm khi mọcđối có lá kèm, hình mác, hep, gân lá và hai mặt đều có lông cứng đặc biệt ở mặt dưới.Gan lá có ba gân nổi rõ, xuất phát từ cuống Cudng lá dài 5mm có lông trắng Cum hoathường có hoa đực và hoa cái, mọc thành xim co ở kẻ lá Hoa cái mang bầu nhụy dạngelip hoặc hình thoai, đường kính 0,8-1 mm Quả có đường kính 1,5-1,8 mm, bao hoa mang lông, quả mang 9 dường gân hoặc 4 cạnh, đỉnh quả có 2 nhánh như 2 răng nhọn.Quả có màu trắng, sáng hoặc màu vàng tối hoặc màu sáng nâu hình trứng, ra hoa vòatháng 7-8, cho quả khoản tháng 8-9 Đỗ Tat Lợi (2004), vườn dược liệu (2006).

Các nghiên cứu từ trường Đại học Dược Quảng Đông cho khả năng giảm khối

áp xe gây ra bỡi staphylococcus aureus trên chuột (Kai-Ying, 2012) Cũng tai đây,người ta tiến hành thử nghiệm tượng tut trên những con chuột bị loét da doStaphylococcus aureus Thuộc doi (Pouzolzia zeylanica (L.) Benn.) cho thấy khả nănggiảm sưng, làm lành vết loét nhờ khả năng làm giảm Interleukin-1 (Xu-Yang, 2012)

13

Các dịch chiết từ Pouzolzia zeylanica var microphylla có tác dụng chống viêm và giảmđau đặc biệt ở các phân loại dịch chiết chloroform, n-butanol và nước (Yangfen, 2013)

Năm 2009, Hou Zhao Liang đã nhận được bằng phát minh điều trị viêm tủxương từ dược liệu, trong đó có thuốc doi (Pouzolzia zeylanica (L) Benn.)

Tại trường Đại học Chitagong, Băng la đét nhiều nghiên cứu về hoạt tính khángkhuân của dịch chiết cồn Pouzolzia zeylanica (L.) bằng phương pháp đĩa (cup-plate)cho thay dịch chiết nồng độ 1 mg/ml cho hoạt tinh kháng khuẩn trên cả vi khuẩn gram

dương lẫn gram âm như: Bacillus subtilis, Bacillus megaterium, Staphylococcusaureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Shigella va Salmonella typhi

dysentariae Đặc biệt là hoạt tinh khang khuan tốt đối với Staphylococcus aureus vàEscherichia coli Tính kháng khuẩn trên hai chủng này cũng đã được đề cập đến trongnghiên cứu của Lê Thanh Thuỷ (2007), tính chất này được thử trên các hoạt chất đãđược phân lập từ Pouzolzia zeylanica là vixetin và isovixetin.

Tác dụng chống oxy hóa: Li và cs (2011) đã chiết xuất bằng nhiều dung môitrên Pouzolzia zeylanica như aceton, etyl acetat, ete dầu hỏa với hai trường hợp chiếc

xuất ở nhiệt độ thường và nhiệt độ lạnh Nhóm tác giả đã chứng minh rằng, hoạt tính

chống oxy hóa khá mạnh tỷ lệ với hàm lượng phenol toàn phần trong dịch chiết

1.3.3 Tổng quan về cây trầu không (Piper betle L)

Cây trầu không được trống ở khắp nơi trong nước ta để lấy lá ăn trầu Nó cònđược trồng tại nhiều nước khác ở châu Á, vùng nhiệt đới như Malaysia, Indonesia,Philippines Làm thuốc người ta cũng dùng lá trầu không hái như đối với lá dùng ăntrau (Đỗ Tat Lợi, 2004)

1.3.3.1 Đặc điểm thực vật học

Trầu không là một loại lay mọc leo, thân nhắn Lá mọc so le, cuống có be, dai

1,5 - 35cm, phiến lá hình trái xoan, dài 10-13cm, rộng 4,5-9cm, phía cuống hình tim

(đối với những lá phía gốc) đầu lá nhọn, khi soi lên thay rất nhiều điểm chứa tinh dấurất nhỏ, gần lá thường 5 Hoa khác gốc mọc thành bông Quả mọng không có vài sótlại (Đỗ Tat Lợi, 2004)

1.3.3.2 Công dụng thảo mộc cây trầu không

Năm 1956, Bộ môn ký sinh Trường đại học y dược Hà Nội có nghiên cứu thấytrầu không có tác dụng kháng sinh rất mạnh đối với các loại vi trùng: Tụ cầu, Subtilit

và trực trùng Coli (Y học tạp chí số 4, tháng 11/ 1956) Năm 1961, Phòng đông y thựcnghiệm thuộc Viện vi trùng học cũng thí nghiệm lại và cũng xác định tính chất khángsinh bay hơi của lá trầu không Một số bệnh viện của ta đã dùng cao nước trầu khôngthí nghiệm điều trị bệnh viêm cận răng (paradentose) có kết quả (Đỗ Tat Lợi,2004)

Lá trầu không (Piper betle L.) là nguồn nguyên liệu tiềm năng trong phòng trừbệnh hại cây trồng Trong lá trầu không chứa các hoạt chất có tác dụng kháng nắm và

vi khuân rất mạnh bao gồm hydroxychavicol, hydroxychavicol acetate, chavibetol

allyryrocatechol, piperbetol, methylpiperbetol, piperol A va piperol B.

Theo Singburaudom (2015), dịch chiết thô từ lá trau không có kha năng ức chếtốt đến sự nảy mam của bao tử và sự phát triển sợi nam của một số loại nam hai câytrồng như Coilefomichưm gioeosporiodes, Colletotrichum capsici, Fusariumoxysporum và Pyricularia oryzae Sử dụng dịch chiết lá trầu không ở nồng độ pha

15

loãng 1% đã ức chế 100% sự phát triển sợi nắm của 4 loại nắm trên trong điều kiện in

vitro.

Theo Ngô Mai Vi, Nguyễn Văn Viên (2015), dịch chiết lá trau không có khanăng ức chế tốt nam gây bệnh đốm đen ở nồng độ 3% — 9% , hạn chế sựu phát triểncủa bệnh trên đồng ruộng, góp phần nâng cao năng suất, phẩm chất của cây đậu âytrầu không đang được nghiên cứu và tìm hiểu như một nguồn được liệu có nhiều côngdụng Thành phần hoạt chất sinh học từ lá trầu không rất đa dạng với 12 hợp chấtpolyphenol, bao gồm 1 hợp chất phenylpropanoid, 5 hợp chất cinnamoyl và 6 dẫn xuấtflavonoid Hydroxychavicol là hợp chất chính được tìm thấy trong cả 2 cách chiết xuất

lá trầu không bằng nước và ethanol Một số nhóm chất chuyền hóa đã được tìm thấytrong lá trầu không như các hợp chat phenolic, cụ thể là phenylpropanoid, flavonoid Các hợp chất này có khả năng kháng ôxy hóa cao và tác dụng kháng sinh mạnh đối vớimột số vi khuẩn, nam

Ở khu vực Đông Nam A, lá trau không được xem như một loài thực vật có công

hiệu trong việc chữa trị các bệnh sâu răng và nha chu Đặc biệt trong y học cô truyền

Việt Nam, lá trầu không được sử dụng với mục đích giúp chắc răng, chữa viêm mủ chânrăng và tri sâu răng.

Chương 2

PHƯƠNG PHÁP VÀ VẬT LIỆU THÍ NGHIỆM

2.1 Nội dung nghiên cứu

Nội dung 1: Phân lập và định danh nam Colletotrichum spp gây bệnh than thưtrên xoài bằng đặc điểm hình thái

Nội dung 2: Đánh giá khả năng ức chế của dịch chiết cây thuốc dòi, dịch chiếttrầu không đến nắm Colletotrichum spp gây bệnh than thư trên xoài

Nội dung 3: Ảnh hưởng của dịch chiết thuốc đồi, trầu không và hỗn hợp dịchchiết thuốc doi và lá Trầu không đến sự nảy mam cả bao tử nam Colletotrichum spp

gây hại trên xoải.

2.2 Thời gian và địa điểm nghiên cứu

2.2.1 Thời gian nghiên cứu

Đề tài được tiến hành từ tháng 08 năm 2023 đến tháng 05 năm 2024

2.2.2 Địa điểm nghiên cứu

Đề tài được thực hiện trong phạm vi phòng thí nghiệm RIBE 302 — 304 (Bệnhhọc và Chân đoán), Khoa Khoa học Sinh học, trường Đại học Nông Lâm thành phố Hồ

2.3.2 Dụng cụ và thiệt bị máy móc

Dung cụ thí nghiệm trong phòng: dia petri, lam, nước cat, ống đong, dao cấy đèn

côn, côn 70°, côn 96° Tât cả dụng cụ và môi trường đêu được vô trùng.

Các trang thiết bị gồm: cân điện tử (PX OHAUS), bếp điện Sunhouse, dia petri,

tủ cấy vi sinh, kính hiển vi (CX23, Olympus, Japan), may hap khử trùng (MC40L, ALP,

Japan), lò vi sóng,

2.3.3 Môi trường sử dụng

Môi trường WA (môi trường Water Agar): Dun sôi 500 mL nước cất, sau đóthêm vào 20 gram agar nấu cho đến khi tan hết agar và thêm nước cất vào cho đến khidung dịch vừa đủ 1000 mL Hấp khử trùng bằng nồi hap ở nhiệt độ 121°C, 1 atm trong

20 phút sau đó đồ ra đĩa petri (mỗi đĩa 15 mL dung dịch)

Môi trường PDA (môi trường Potato Dextrose Agar): 200 gram khoai tây đã lột

vỏ rửa sạch, thái nhỏ, nau trong 500 mL nước cat cho đến khi khoai tây mềm, lọc bỏ bã,thêm 20 gram đường dextro và 20 gram agar vào nấu cho đến khi hoà tan hoàn toàn,thêm nước cat vào cho đến khi dung dịch vừa đủ 1000 ml Hap khử trùng bằng nồi hap

ở nhiệt độ 121°C, 1 atm trong 20 phút sau đó đô ra dia petri (mỗi đĩa 15 mL dung dịch).2.4 Phương pháp thí nghiệm

2.4.1 Nội dung 1: Phân lập nam và định danh nắm Colletotrichum spp gây bệnhthán thư trên xoài bằng đặc điểm hình thái

Phương pháp thu thập mẫu bệnh

Mẫu được thu thập trên tại các xã Bình Thạnh, Mỹ Hiệp tại huyện Cao Lãnh tỉnh

Đồng Tháp Tiến hành thu thập mẫu bệnh trên các bộ phận như lá, quả bị nhiễm bệnh,

tại mỗi xã thu 1 vườn, mỗi vườn chọn ra 3 cây có triệu chứng nhiễm bệnh thu 10 mẫu

trên mỗi vườn, vườn được thu mẫu cách ly thuốc ít nhất 14 ngày

Vườn thuộc xã Mỹ Hiệp tiến hành thu § mẫu quả và 3 mẫu lá, vườn thuộc xãBình Thạnh tiến hành thu 7 mẫu quả và 2 mẫu lá Khi thu chọn những mẫu có triệu

chứng của bệnh như phan lá có vết cham đen, có dấu hiệu bị xoắn lại, có những đốm

góc cạnh màu nâu đỏ, đô với quả chọn quả cô đôm bệnh nâu đen, hơi tròn hoặc lõm sâu.

Khi chọn lá không chọn lá quá già hoặc quá non, tiến hành làm sạch bụi ban và cho vàotúi nilon ghi thông tin người lay mau, ngày lay mẫu, tên cây ký chủ, dia chỉ nơi lấy mau,tên mẫu bệnh, triệu chứng và dấu hiệu của cây bị bệnh

Phương pháp bảo quản mẫu bệnh

Áp dụng phương pháp quản lý thực vật của Roger Shivas và Dean Beasley(2005): Sử dụng túi giấy dé lay và giữ mẫu bệnh, gói mẫu cần thận tránh va đập và hơi

nước ngưng tụ, dùng bút ghi chú thông tin mẫu thu được

Bảng 2.1 Kí hiệu vườn, mẫu và vị trí thu mẫu bệnh thán thư trên xoài ở tỉnh Đồng Tháp

~

Ẩ

Mã > mau , Vị trí, địa điêm , - Kí hiệu mầu

-SỐ Giông bệnh/ Vị trí thu mau

thu mau bénh

vuon vuon

DT1 Xa Bình Thanh Cat chu 10 Qua, lá BTI-BII0

ĐT2 Xã Mỹ Hiệp Cát chu 10 Quả, lá MH1-MHI0

Tên mau được đặt theo thứ tự: Tên xă lay mẫu VD: BT (Bình Thạnh)

2.4.1.1 Phương pháp phân lập nắm từ mẫu bệnh

Phương pháp phân lập nắm từ mẫu bệnh

Áp dụng phương pháp của Burgess và cs (2009) cho việc phân lập nam trên môitrường PDA, WA và lưu trữ trong điều kiện vô trùng

Mẫu bệnh được cấy vào dia petri ở 4 điểm theo hình chữ nhật, bang cách cắt ởnơi tiếp giáp giữ mô bệnh va mô khoẻ thành từng miếng nhỏ khoảng 1 - 2 mm cho vào

cồn etyl 70° trong 15 — 20 giây, va rita qua nước cat vô trùng 3 lần, sau đó thấm khô

bằng giấy thấm vô trùng Cay mẫu lên môi trường WA, sau khi cay xong nên đặt ngượcđĩa petri để tránh đọng hơi nước trên bề mặt môi trường cấy, tiếp đến đặt đĩa petri trongđiều kiện nhiệt độ phòng (25°C - 28°C) Khi các sợi nam bat đầu xuất hiện từ các mẫu

19

cấy tiến hành cay chuyền đỉnh sợi nam lên môi trường PDA Làm thuần mẫu nam bằngcách tiếp tục cấy đỉnh sinh trưởng của sợi nam.

Phương pháp lây bệnh nhân tạo theo quy tắc Koch

Áp dụng phương pháp theo Burgress và cs (2009) tiến hành lây bệnh nhân tạo

Được thực hiện trên quả xoài , tiến hành tạo vết thương hở sau đó cắt hạch nam gắn lên

vết thương đã tạo ở trước đó

Tiến hình trên 3 quả xoài cát chu không bị nhiễm bệnh, trong đó quả xoài cát chuđược tạo 2 vết thương hở bao gồm: vị trí 1 với nắm Colletotrichum spp và vị trí 2 khôngtạo vết thương hở với nam Colletotrichum spp Lap lại tương tự trên quả thứ 2 và 3 sau

đó đặt trong va theo dõi liên tục trong 8 ngày.

Các bước chủng Koch:

Trước khi lây nhiễm nhân tạo, các trái được rửa sạch dưới vòi nước chảy mạnh,

sau đó được nhúng vào trong dung dịch côn trong 1 phút vớt ra dé khô tự nhiên, cuốicùng trái được vô trùng bằng đèn cực tim trong 15 phút dé loại bỏ mầm bệnh tiềm anbên ngoài vỏ trái.

Các trai được tạo vết thương ở 2 vi trí trên phần má trái bằng cách chụm một bó

kim cúc (đường kính lỗ kim 0,5 mm), mỗi vị trí tạo 1 vết thương sâu 2 mm

Dùng que cấy hoặc kim tiêm chọc vào trái đối chứng nhưng không lây bệnh

Dung parafilm hoặc mang nilon bọc vết thương hoặc vj trí lay bénh

Tạo âm cho trái mỗi ngày

Kiểm tra và so sánh trái được lây bệnh với trái đối chứng Quan sát và ghi nhận

các triệu chứng và so sánh những triệu chứng này với các triệu chứng đã quan sát trên

đồng ruộng

2.4.1.2 Định danh nắm gây bệnh thán thư gây hại trên xoài bằng đặc điểm hình

thái

Quan sát những đặc điểm hình thái bào tử của nắm Colletotrichum spp.: màu sắc,

hình thái bào tử, kích thước bào tử: đo chiều dài, chiều rộng bào tử

Đặc điểm của giác bám: Một mảnh môi trường PDA được đặt trên đĩa Petri vôtrùng Bao tử nam được cấy vào cạnh của miếng môi trường và một lamen vô trùng

được đặt lên trên mảnh môi trường Đĩa được ủ 7 ngày ở 25° C cho tới khi đĩa áp hình

thành ở mặt dưới của lamen (Cai và cs, 2009).

Ghi nhận hình dạng và kích thước của giác bám Quan sát dưới kính hiển viOlympus BX40 vật kính 100X để đo kích thước bào tử và giác bám và đặc tính sinh học

cả từng chủng nắm dựa theo khoá phân loại nam của Sutton (1995)

2.4.2 Nội dung 2: Đánh giá khả năng ức chế của dịch chiết cây thuốc đòi, dịchchiết trầu không đến nam Colletotrichum spp gây bệnh than thư trên xoài

2.4.2.1 Phương pháp bố trí thí nghiệm:

Thí nghiệm đơn yếu tô được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên với 6 nghiệm

thức, mỗi nghiệm thức có 3 lần lặp lại, mỗi lần lặp lại 3 đĩa petri, gồm: (NT1 dén NTS:

thi nghiệm hiệu lực ức chế ở 5 mức nồng độ của dịch chiết, NT6 là nghiệm thức đốichứng (nước cất)

BÀI

Bảng 2.2 Thí nghiệm: Đánh giá hiệu lực ức chế của dịch chiết trầu không đến sự phát

triên đường kính tan nam Cojlefofrichum spp.

Nghiệm thức Hoạt chất Nồng độ (%)

NTI Dịch chiết lá trầu không 0,3

NT2 Dich chiết lá trau không 0,5

NT3 Dịch chiết lá trầu không 0,7

NT4 Dịch chiết lá trầu không 0,9

NT5 Dịch chiết lá trầu không 1,1

NT6 Nước cat 0

Bang 2.3 Thi nghiém: Danh giá hiệu lực ức chế của dịch chiết cây thuốc dòi đến sự

phát triển đường kính tan nắm Colletotrichum spp

Nghiệm thức Hoạt chất Nồng độ (%)

NTI Dịch chiết cây thuốc doi 3

NT2 Dich chiết cây thuốc doi 5

NT3 Dịch chiết cây thuốc doi 7

NT4 Dịch chiết cây thuốc dòi 9

NT5 Dich chiết cây thuốc đòi 11

NT6 Nước cat 0

Bảng 2.4 Thí nghiệm: Đánh giá hiệu lực ức chế của hỗn hợp dịch chiết cây thuốc dòi

và dịch chiét lá trâu không đên sự phát triên đường kính tan nam Co/letotrichum spp.

Lá trầu không được trực tiếp thu tại vườn trầu thuộc xã Ea Tiêu, huyện Cư Kuin,tỉnh Dak Lak và được định danh bang cách tham chiếu với tài liệu tham khảo (Shukla,

R., 2015) Thu lá bánh tẻ, lành lặn không bị sâu Thu lá sạch vào những ngày khô ráo, khoảng từ 7 — 10 giờ sáng.

Thu nhận dịch chiết:

Các hoạt chất kháng nắm của thuốc đòi và lá trầu không được chiết xuấtbằng dung môi methanol

Nguyên liệu thuốc đòi và lá trầu không thu về được rửa sạch loại bỏ bụi ban, dé

ráo Nguyên liệu được cắt nhỏ, phơi khô và nghiền thành bột ở dạng riêng rẽ Bột (1kg)

được ngâm với 5 lit ethanol 90° ở nhiệt độ phòng trong 24 giờ Sau đó hỗn hợp bột đượclọc lấy dịch chiết, cuối cùng dịch chiết được loại dung môi bằng máy cô quay đề thu cao

cao chiết Quá trình ngâm được lặp lại 7 lần Cao chiết được hòa tan với tỉ lệ 1 gram cao

23

chiết trong 1 mL methanol (nồng độ được xem là 100%) Sau đó pha loãng dịch chiếtgốc với nước cất ở các nồng độ khác nhau khi tiến hành bồ tri thí nghiệm.

Phương pháp tiến hành

Ảnh hưởng của dịch chiết đến sự phát triển đường kính tản nắm được xác định

theo Yao va Tian (2005).

Chuẩn bị môi trường PDA được hấp khử trùng trong nôi hap ở nhiệt độ 121°Ctrong 20 phút Dịch thốc doi và dịch chiết lá trầu không được hoa trộn với môi trườngPDA (40 — 55°C) từ nồng độ gốc là 100% dé đạt được dung dich có nồng độ tương thích

là với đối chứng là mẫu 0% dịch chiết cho vào đĩa petri ÿ9 vô trùng tổng thể tích 15mL/đĩa (ghi kí hiệu loại dịch chiết, nồng độ, nghiệm thức, lần lặp lại và ngày tiến hành

thí nghiệm ở nắp đậy đĩa petri) Cây khoanh nắm (đường kính 5 mm) vào trung tâm đĩa,

mặt nam úp xuống mặt môi trường PDA, dan kín xung quanh đĩa bang parafilm

2.4.2.3 Chỉ tiêu theo dõi

Đường kính trung bình tan nam: Do đường kính tản nắm ở thoi điển 8 ngày sau

cấy Colletotrichum spp được theo dõi định kì 48 gid/lan, lay chi tiéu 6 2, 4, 6, 8 ngay

sau cay (NSC) cho đến khi tan nam (tan sợi) phat triển chạm vào thành đĩa ở nghiệmthức đối chứng thì ngưng quá trình đo Do đạc bằng thước kẻ có đơn vị mm, đường kínhtan nam được tính bằng cách đo hai đường chéo vuông góc và lấy giá trị trung bình

Đường kính trung bình của tan nam (tản sợi) được tính bằng công thức:

d= (d1 + d2)/2

Trong đó:

d: là đường kính trung bình tản nắm (tản sợi) (mm)

d1, d2: là đường kính vuông góc của tản nắm (tản sợi) (mm)

Hiệu lực ức chế của dịch chiết đối với nam Colletotrichum spp được tính theo

công thức sau:

=<T x100

Cc

Trong đó: I là hiệu lực ức chế (%); C là đường kính tản nam mẫu đối chứng(mm);T là đường kính tản nắm của nghiệm thức (mm)

Nếu I > 60% thì nam mam cảm với dịch chiết

Nếu 10% < I< 60% thi nam phản ứng trung bình với dịch chiết

Nếu I < 10% dịch chiết không có khả năng ức chế nam

2.4.3 Nội dung 3: Ảnh hưởng của dịch chiết thuốc dồi, trầu không và hỗn hợp

Ũ oK RK ye x ^ K 2 À 2 x > A

dịch chiét thudc doi va Trâu không dén sự nay mam cả bao tu nam

Colletotrichum spp gay hai trén xoai.

Phuong phap tién hanh

Anh hưởng của dịch chiết đến sự nay mam bao tử được tiến hành trên lam kínhlõm (Croninva cs, 1996) Ở mỗi nồng độ khảo sát của dịch chiết, cho 40 pl vào phanlõm của lam Cho 10 pl dịch bào tử (nồng độ 10! bao tử/m]) lên lam, đậy lam kính vanuôi ở 28°C trong bóng tối Sau 8 giờ và 24 giờ tiến hành đếm số lượng bào tử nảy mầmtrong tong số 100 bào tử dưới kính hiển vi với độ phóng đại 40X Thí nghiệm được lặplại 3 lần

Tỷ lệ ức chế nảy mầm của dịch chiết sinh học lên bào tử nam được tinh theo công

thức: Tỷ lệ ức chế (%) =[(Tổng số bao tử nay mầm ở công thức đối chứng — Tổng sốbao tử nảy mam ở công thức thí nghiệm )/Téng số bao tử nảy mam ở công thức đối

chứng)x100.

2.5 Phương pháp xử lý số liệu

Các số liệu thu thập được tính toán bằng phần mềm Microsoft Excel 2010

Phân tích ANOVA và trắc nghiệm phân hạng bằng phần mềm SAS 9.1

Các trình tự được phân tích bằng phần mềm Bioedit và kiểm tra mức độ tươngđồng của mẫu nam với chủng đã được công bồ trên cở sở dit liệu GenBank bang phần

mềm BLAST đề xây được cây phát sinh loài bằng phần mềm MEGA 11

25

Chương 3

KET QUA VA THẢO LUẬN

3.1 Kết qua phân lập và định danh nắm Colletotrichum spp gây bệnh than thưtrên xoài bằng đặc điểm hình thái

3.1.1 Phân lập nam Colletotrichum spp gây bệnh than thư trên xoài

Quá trình thu mẫu tiến hành tại 2 vườn trồng xoài cát chu, với tổng số mẫubệnh thu được là 20 mẫu và được bảo quản theo phương pháp quản lí bệnh mẫu thựcvật của Roger và cs, (2005) Sau đó dược chuyền về phòng thí nghiệm tiến hành phânlập trên môi trường WA và làm thuần trên môi trường PDA cho được kết quả

Hình 3.1 kết quả phân lập từ mẫu bệnh Hình thái nắm Collettruchum spp Quan sátdưới kính hiển bvi Olymus (CX23) vi độ phóng đại 40X; (A):mặt trước đĩa namColletotrichum spp mọc trên môi trường PDA 8 ngày sau cấy; (B): mặt sau đĩa

nam colletotrichum spp

3.1.2 Định danh nấm Colletotrichum spp gây bệnh than thư trên xoài bằng đặcđiểm hình thái.

Sau khi phân lập 20 mẫu bệnh và làm thuần, thu được 14 mẫu Colletotrichum

spp (hình 3.1), mẫu sau khi phân lập được đặt trong tủ định ôn với mức nhiệt độ 28+1°

C Kết quả phân lập và làm thuần cho thấy: tản nam trên môi trường PDA

Bang 3.1: Số mẫu nam Colletotrichum spp phân lập được từ 2 vườn xoài ở huyện Cao

Lãnh, tỉnh Đông Tháp

SO mau nam

Ma : S Mẫu

, — Vị trí, địa điểm , colletotrichum

sô : Giông bệnh thu Loại thu

thu mầu spp phân lập

vườn /vườn

được

ĐTI Xã Bình Thạnh Cat chu 7 Qua 6

ĐTI Xã Binh Thanh Cat chu 2 La 0

ĐT2 Xã Mỹ Hiệp Cát chu 8 Qua 8

DT2 Xã My Hiệp Cát chu 3 Lá 0

Tổng 20 14

Dựa vào kết qua bang 3.1 cho thay, mẫu nam Colletotrichum spp được phân lập

từ mẫu quả có tần suất xuất hiện cao nhất chiếm 90%, mau nam Colletotrichum spp.được phân lập từ mẫu quả, mau lá không phân lập ra được nam Colletotrichum spp

Soi nam mảnh mau trắng xám đến đen, mọc bung cao và đều Tản nam mautrắng xám đến xám đen, mép tròn đều Mặt trên đĩa nam mau trắng, có những vòng trònđồng tâm (hình 3.1 A) Mặt sau màu xám đến nâu đen, có những vòng tròn đồng tâmmàu xám đều nhau (hình 3.1 B) Bào tử trong suốt, đơn bào, hình trụ ngắn hai đầu hơitròn hoặc một đầu tròn và một đầu hơi nhọn Kích thước trung bình 5,5 — 14,38 x 3,63

— 6,63 wm (hình 3.2 B-C).Giác bám có dạng hình trứng ngược, hình chuy hay hình

2

dạng không xác định, màu nâu nhạt đến nâu thẫm, vách mỏng, bên trong có nhiều chấtnhân màu vàng phân bố bất định Kích thước trung bình 6,25 — 12,38 x 6 — 7,88 um(hình 3.2 D-E) mẫu nam Colletotrichum spp có su tương đồng về mặt hình thái củacác loài Colletotrichum spp được Sutton (1995) mô tả lại

Hình 3.2 Hình thái sợi nam, bào tử và giác bám của nam Colletotrichum spp

Quan sát dưới kính hiện vi Olympus (CX23) độ phóng dai 40X(A): Hình thái sợi nam Colletotrichum spp.; (B-C): Bào tử nam (Fungal

spores); (D-E): nay mam hình thành giác bám

3.1.3 Kết quả lây bệnh nhân tạo theo quy tắc Koch

Nhằm khẳng định chủng nam Colletotrichum spp phân lập được là tác nhân ngâybệnh thán thư trên cây xoài Sau khi tái nhiễm và phân lập được kết qảu như

Hình 3.3 kết quả lây bệnh nhận tạo trên quả xoài sau 5 ngày và tái phân

lập lại, (A): quả bị nhễm bệnh khi lây bệnh trên quả; (B): mặt dưới đĩa

nam Colletotrichum spp sau khi tái phân lập sau 8 ngày; (C): bào tử

nam Colletotrichum spp sau khi tái phâp lậpKết qua lây nhiễm Collettrichum spp lên quả xoài giống từ nguồn Colletotrichumspp đã được phân lập ở mục 3.1.1 và kết quả phân lập lại tác nhân gây bệnh đã ghi nhậnđược triệu chứng của vết bệnh, sự phát triển, hình dang, mau sắc của tan nắm và hìnhthái bào tử tương đồng với kết quả phân lập nguồn bệnh gây bệnh là Colletotrichum spp

có ý nghĩa thống kê ở mức 999%

Kết quả bang 3.2, sau 8 ngày theo dõi sự phát triển của nắm Colletotrichum spp.Nghiệm thức sử dụng dịch chiết gừng ở nồng độ 11% cho đường kính tan nam khôngphát triển, hiệu lực ức chế cao nhất đạt 100% Trong khi đó, nghiệm thức sử dụng mứcnồng độ thí nghiệm là 3% có đường kính tản nam dat 74,8 mm, tương ứng với hiệu lực

ức chế thấp nhất đạt 6,6% Tiếp theo ở các mức nồng độ 5,0%; 7% và 9% có đường kính

29