Vi khuân Colifom thuộc Gram âm, không tạo bảo tử, oxydase âm tính, dạng que, hiếu khí và yêm khí khi phát triển trong môi trường muối mặt hoặc các tác nhân hoạt động bè mặt khác có đặc t
Trang 1TRUONG ĐẠI HỌC CÔNG THƯƠNG TP HO CHi MINH
KHOA CONG NGHE THUC PHAM
TU NGAY 04 THANG 03 DEN NGAY 21 THANG 03
HO VA TEN: PHAN THI THUY VI
MSSV: 2022200045
SDT: 0923704907
NHÓM: 010110109004 - 12DHDB01
TỎ: 8
Trang 2MỤC LỤC
BÀI 1: ĐỊNH LƯỢNG E COLI VÀ COLIFORM TRONG NƯỚC BẰNG PHƯƠNG PHÁP MÀNG LỌC 2222221222212 1.1 naia 3
1 Cơ sở lý thuyẾt à nh nh errrerrerree 3
1.1 Tông quan về Coliform và Escherichia coli set srtrtrirrrrrrrrrirrrieo 3
1 Cơ sở lý thuyết 1.1 Cơ sở lý thuyết về trực khuẩn gram âm - 7c 15
2, Hóa chất, môi trường, dụng cụ và thiết bị óc cv nh rie 15
_—3 Cách tiến hành tt nh nh 111111111 E.1kE 16 3.1 Tiêu chí đánh giá Bảng 3.1 Tiêu chí đánh giá phân tích: .À - -cccscsrsrrerersrrree 17
lì số nố ẽ ẽẽ ẽ :.-.SB—¬.BH, ,.)H,HHHH 18 Bai 3 PHAT HIEN SALMONELLA TRONG THUY SAN VA SAN PHAM THUY SAN BANG
"9h 8n ố ẽ ẽ ẽ ẽ.ẽ.ẻ -4‹{£AđRA H)HẬ)H, : 23 1.1 Tông quan về vi khuẩn Salnonella .+ 2+©++222++E++tEEEEeEEkxrrrrrrrrrkrrrrkrrrrrrree 23
2.2 Dung Cay, 900006 4A4d.H.), H.HẶH 24
2.3 Trình bày cách vận hành các thiết bị . - c2 22tr errtxrrrrrrrrrtkrrrrrrrrrrerrrrrree 24
ko tide Wale oo ố.ố ẽ ẽ ẽ ẽ ẽ ẽ.ẽ A , 28
lì số nố ẽ ẽẽ ẽ :.-.SB—¬.BH, ,.)H,HHHH 30 Bai 4: PHAT HIEN DOC TO AFLATOXIN TRONG THUG PHAM BANG PHƯƠNG PHAP
Trang 3ky ¡600000510000 (oôô - ‹ẲẴÂÀ|ộ: H,)ỤDHẬ), 33
0 00200) (0 ‹-däÄdẴäẬÃŒ., Hp)H , HĂH 33
5, THANH PHAN BO KIT . 225c 22222221221 E22 TC TE.EE T.TTEerrrrrke 33
6 HOA CHAT —- DỤNG CỤ - THIẾT BỊ - 5 2222 2tr2 tr tre 33
7.1 Điều kiện phân tích 2222+©2+tS22Y+t2EEE22EEE271E E2 E71 E1 re 34
7.2 Chuan bj thudc thik TC co nẽ 34 7.3 Xử lý mẫU - tt nh nh 1111111111111 34
7.4 Phân tích mẫu bằng phương pháp ELLISA - 2-2552 255c22 z222+erecrxrerrrerrrreree 35
8 CAC THONG SO CONG BO
9, TINH TOAN HAM LUQNG AFLATOXIN cccssscssssessossecssscccsssecsssescssecssssecsssecssssessssesessesesssessses 38
BAI 1: DINH LUONG E COLI VA COLIFORM TRONG NUGOC BANG
PHUONG PHAP MANG LOC
1 Cơ sở lý thuyết
1.1 Tổng quan vé Coliform va Escherichia coli
Trang 4Vi khuân Colifom thuộc Gram âm, không tạo bảo tử, oxydase âm tính, dạng que, hiếu khí
và yêm khí khi phát triển trong môi trường muối mặt (hoặc các tác nhân hoạt động bè mặt khác có đặc tính ức chế sự phát triển tương tự) và thường có khả năng lên men lactose tạO
ra axit và aldehyt trong 48 giờ khi ủ ở nhiệt độ (36 + 2)°C Vi khuẩn này cũng có enzym
B-galactosidaza
Escherichia coli (E coli) la mét trong những vi sinh vật thường gặp trong môi trường Nhiều người không coi E coli là vi sinh vật gây bệnh do thực phẩm song những nghiên cứu gần đây cho thấy một số chủng của chúng thực Sự có khả năng gây bệnh lây lan qua
thực pham rat nghiém trong
E coli la vi khuẩn Colifom, nó có khả năng sinh ra indol tir trytophan trong (21 + 3) giờ
tại (44,0 +0,5)°C có enzym B-galactosidaza: Vi khuân này khá phô biến trong tự nhiên và
đặc biệt trong đường tiêu hóa của người người và động vật Chúng thuộc loại glucose và lactose duong tinh, indol và methyl red duong tinh song cé phan ing VP va citrate 4m tinh Đánh giá ô nhiễm do phân là một yếu tô quan trọng đánh giả chất lượng một khu vực nước
và đánh giá rủi ro đối với sức khỏe con người Kiểm tra mẫu nước về sự tồn tại của E coli, thường sống trong ruột của người và các động vật máu nóng khác sẽ cung cấp những chỉ báo cho sự ô nhiễm đó Kiểm tra vi khuân Coliformm thường gặp khó khăn vì một số Coliform không sông trong ruột mà sống trong đất và nước mặt Do vậy, sự tôn tại của vi khuân coliform dù không có nguồn góc từ sự nhiễm bản do phân, có thể chỉ báo sai cho việc xử lý Việc nhận dạng các chủng đã được phân lập có thê chỉ ra nguồn góc của chúng 1.2 Phạm vi áp dụng
Phương pháp này tham chiếu theo ISO 9308-1:2014 dùng để phát hiện và định lượng
Coliformm và E coli trong nước dùng cho sinh hoạt
ml mau
2 Hóa chất, môi trường, dụng cụ và thiết bị
a Hóa chất-môi trường
Trang 5
sTT | Tên vật tư (hóa chất, vật tư tiêu | Đặc tính kỹ DVT Số Ghi
Broth)
Bang 1: Danh mực hóa c nát, môi trường bài thí nghiệm
Tính toán hóa chất cần dùng, qui trình pha
Pha hóa chất: ( pha nửa thề tích ) nước+ hóa chất -> khuấy -> đun -> đo pH -> chính pH -
> phân phôi -> bịt bằng nút bông -> hấp tiệt trùng
5 Dau tip trang (Đâu típ mới, sử 100001 al) 450 dau tip,
Trang 6
`,
“s*
Bảng 2: Danh mực dựng cạ, thiết bị Trình bày cách vận hành các thiết bi
1 Nồi hấp
% Hình ảnh thiết bị
s* Cách vận hành
Bước 1: Cung cấp nguồn điện, bật công tắc sang vị trí On
Bước 2: Đây thanh gạt sang vị trí UNLOCK và mở nồi hấp
Bước 3: Kiểm tra mực nước trong nòi hấp, mực nước bằng đáy lồng lớn là đạt (dùng
nước cất 1 lần)
Model thiét bi: Ndi hap tiệt trùng hirayama hv-85
Trang 7
Bước 4: Kiểm tra mực nước trong binh xa hoi ( nam trong khoang Low va High) Bước 5: Đặt lông hấp vào nồi và đóng nắp lai Day thanh gat sang vi tri LOCK dé khoa
+ Hình ánh vận hành thiết bị của tô/cá nhân
Bước 5: Tiến hành cây
Bước 6: Vệ sinh tu cay
Bước 7: Chiếu UV trong 30 phút
Bước 8: Tắt tủ cấy, rút phích cắm khỏi nguồn điện.
Trang 84 Hình ảnh vận hành thiết bi cua té/ca nhan
Bước 1: Kiểm tra và vệ sinh tủ sây
Bước 2: Mở cửa tủ sấy cho vật liệu vào và đóng lại ( Mở cửa tủ: kéo thanh tay cảm qua
phải, đóng cửa tủ: làm ngược lại )
Bước 3: Cắm nguồn điện, Bật nút OFF/ON để mở máy ( chờ 5 giây mới tiến hành cai chương trình )
Bước 4: Nhắn phím mũi tên ({† |) dé cài I trong 3 chương trình ( PI, P2,P3), chờ 5s đề
xác nhận
Bước 5: Nhắn phím X/W xuất hiện 2 đèn vàng nhấp nháy để cài nhiệt độ Sấy ( Dùng mũi tên (†|) để cài nhiệt độ)
Bước 6: Nhắn phím X/W xuất hiện 2 đèn vàng nhấp nháy để cài thời gian sảy ( Dùng
mũi tên ({ |) để cài thời gian)
Bước 7: Nhắn phím X/W xuất hiện 2 đèn vàng nhấp nháy để cải thời gian chờ bắt đầu sấy ( Dùng mũi tên (†L) để cài thời gian)
Bước 8: Chờ 5 giây để máy lưu thông số vừa cài đặt
Bước 9: Khi đạt nhiệt độ sấy màn hình nhấp nháy liên tục hai thông số đã cài đặt, khi
thời gian cài đặt về “0” thì kết thúc quá trình sấy Tắt ta say, lay vat liu say ra Bước 10: Vệ sinh tủ sấy sạch sẽ
4% Hình ảnh vận hành thiết bị của tổ/cá nhân
4 Tủ ấm
4% Hình ảnh thiết bị
Trang 9
+ Model thiết bị : Ta am INCUCELL 111
% Cách vận hành:
Bước 1: Mở cửa tủ ám cho vật liệu ấm vào và đóng lại
Bước 2: Cắm nguồn điện sau đó chờ 10 giây rôi bật nút ON/OFF đề mở máy
Bước 3: Nhắn phím mũi tên ({† |) chọn chương trình P3, chờ 5 giây để xác nhận Bước 4: Nhắn phím X/W để cài nhiệt độ giữ âm, phím mũi tên († |)
đề điều chính nhiệt độ
Bước 5: Nhắn phím X/W đề cài thời gian giữ ấm, , phím mũi tên (†|) đê điều chính thời
gian, néu chạy liên tục thì cài bằng 0 ( . )
Bước 6: Chờ 5 giây đề máy lưu thông số Vừa cài
Bước 7: Khi đạt nhiệt độ giữ âm màn hình nhấp nháy liên tục 2 thông số đã cài, khi thời
gian về “0” thì kết thúc quá trình giữ âm Tắt tủ ấm, lầy mẫu ra
Trang 10Tráng bằng cồn và nước cất — bật công tắc để xả nước —đặt màng lọc —đô mẫu — Xả nước — lầy mẫu đặt vao dia petri
s* Hình ảnh vận hành thiết bị của tổ/cá nhân
Bước 1: Mở tủ, cho mẫu cần quay vào trong
Bước 2: Đóng cửa tủ, điều chinh nhiệt độ và thời gian phù hợp
Bước 3: Khi thời gian về “0”, lầy mẫu ra và đóng cửa lại
Hình ảnh vận hành thiết bị của tô/cá nhân
8 Bế điều nhiệt
Trang 11- Xoay núm theo chiều kim đồng hồ đề tăng giá trị cài đặt, theo chiều ngược lại để giám
- Nhà Set, chờ 5 giây để bẻ xác nhận nhiệt độ cài đặt
Bước 5: Khi bẻ bắt đầu gia nhiệt, biểu wong: sẽ nhấp nháy và duy trì trong suốt
quá trình 6n nhiệt đề ôn định nhiệt độ
Bước 6: Kết thúc quá trình sử dụng: nhân nút ON/OFFE, rút phích cắm, xả nước, vệ sinh
bẻ và khu vực thao tác
+ Hình ảnh vận hành thiết bị của tô/cá nhân
3 Cách tiến hành
Bước 1: Chuân bị mẫu
- _ Lấy 200ml mẫu nước, cho vào nhà vệ sinh trong vòng 30 phút rồi lay đem ra lọc Bước 2: Lọc mẫu
- Lọc 100ml mẫu nước Đặt mản lọc trên môi trường thạch chromoGel™ E coli- Coliform va u & 36°C trong 24h, dam bao khéng có không khí ở dưới
Bước 3: Ú và phân biệt
Trang 12- Sau khi loc 6 bude 2 dat man loc trén dia agar chromoGel™ E coli-Coliform và ủ 36°C trong 24h
Bwéc 4: Bém khuan lạc
-_ Để kiểm tra những khuân lạc nghỉ ngờ sẽ có màu hồng đến đỏ Khuẩn lạc E coli sẽ
co mau xanh đậm đên tím
4 Tính toán kết quả
a Kết quả đếm
Bang 3: Két quad dém khuan lac
Stt | Mẫu | Môi trường | Phương | Số Mô tả hình thái Số Mô tả hình thái
phân tích pháp khuẩn | khuẩn lạc coliform | khuẩn | khuẩn lạc E.coli
khuan Gram 4m
Là Vi khuẩn Gram Kích thước trung
âm hình que không bình từ 2 đến 3
có nội bào tử và là micromet X 0,5
vi khuân di chuyên micromet; trong được hoặc không di những điều kiện
sinh) vi khuân có thé rat dài như
soi chi Rat it
chung E coli co v6, nhung hau h ét
có lông và co kha năng di động Giải thích sự hình thành các đặc điểm khuẩn lạc đặc trưng Coliform, E.coli trên môi
Trang 131 | Mẫu | Thạch Màng
Là Vi khuân khuân Gram âm
âm hình que bình từ 2 đên 3 không có nội micromet X 0,5
£ | Mẫu | Thạch TM Đêm Ậ vì khuản di U p : những điều kiến : nước | chromoGel nến Se | chuyén dic | in | khéng thich hop
‘ ©) Oo hoac khéng ‘a oO (ví dụ trong môi
-'4.!1 - | sinh) vi khuan có
chi Rat it chung
Bang 5: Két qua tinh
stt Mẫu | Phương Tiêu | Số khuẩn | CFU/ml [Sá | CFU/ml
Trang 14Nhan biét duoc khuan lac Coliforms va E.coli
Các kỹ năng đã học được
Sử dụng được thiết bị hiện đại: máy lọc vỉ sinh trong phòng thực hành phân tích vi
sinh thực phẩm 2
Thực hiện nuôi cấy vi sinh vat trong tủ cay,
._ Ý thức an toàn trong phòng thí nghiệm phân tích vi sinh vật học
Lau tay bằng côn
Lau bàn bằng còn trước khi thực hiện thí nghiệm
Mặc áo blouse, gải nút áo
Không đeo phụ kiện, trang sức
Đeo khâu trang than trong phòng thí nghiệm
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Trang 153-Tiêng nước ngoài
Bai 2: Dinh danh trực khuẩn Gram âm — Định danh Salmonella spp băng test API
20E của Biomeroux
1 Cơ sở lý thuyết _ -
1.1 Cơ sở lý thuyết về trực khuẩn gram 4m
Trực khuân Gram âm gôm các loài vĩ khuân hình que (gậy), bắt màu hông khi nhuộm
Gram, thường không sinh nha bảo, có tiên mao (chu mao) Có nhiêu loài gây bệnh cho
ngu0i va gia suc nhu Salmonella, Escherichia, Shigella, Proteus Phản ứng catalase
đương tính, không di động hay di động nhờ tiên mao ở cực Gôm có các họ như sau:
Vibrionaceae, Pasteurellaceae, Enterobacteriaceae (Salmonella, Escherichia, Klebsiella, Yersinia)
1.2 Phạm vi áp dụng ;
Phương pháp này tham chiêu theo TCVN 4829 : 2005 (ISO 6579;2002) va thyc hién strip định danh GN A dé dinh danh Salmonella spp
1.3 Nguyén tac
Phương pháp này chỉ dùng đê định tính và kết luận phát hiện hay không phát hiện
Salmonella trên lượng mâu đã lây
Quy trình phát hiện Salmonella bắt buộc phải qua bốn giai đoạn và phải sử dụng chủng đôi chứng trong toàn bộ quá trình phân tích
Tiền tăng sinh: mẫu được tiền tăng sinh trong môi trường tăng sinh không chọn lọc
(BPW) ủ ở 37C trong khoảng I8 giờ
Tăng sinh: Sau giai đoạn tiền tăng sinh, dịch mẫu được chuyên qua môi trường tăng sinh chọn lọc RVS ủ ở 41,5°C và MKTTn ủ ở 37C trong khoảng 24 giờ
Phân lập: cấy ria dịch mẫu từ môi trường tăng sinh chọn lọc sang hai môi trường rắn
chọn lọc (XLD và HE), ủ ở 37C trong khoảng 24h
Phục hồi: Chọn khuẩn lạc nghi ngờ trên môi trường XLD hoặc HE cấy sang NA/TSA, ủ
ở 37C trong khoảng 24 giờ
Khang định: Thực hiện trên strip định danh gồm I2 giếng, ủ ở 37C trong khoảng 24h
2 Hóa chất, môi trường, dụng cụ và thiết b i
a-Hóa chất-môi trường
e Dung dich dém peptone (BPW)
e Rappaport-Vassiliadis Soya Pepton (RVS) Selenit xystin / Tetrathionat (TT)
e Xylose Lysine Desoxycholate (XLD)
Trang 16e Hektoen Entric Agar (HE)
e Tryptone Soya Agar (TSA)
e Strip dinh danh GN A
e Dia giay oxidase, dau khoang
b-Dung cu, thiét bi
e Mau thuc pham
e Ticay vô trùng
¢ Micropipet: 1000ul dau típ tương ứng
e May dap mau
Mẫu được tiền tăng sinh trong môi trường tăng sinh không chọn lọc (BPW) ủ ở 37C + 3h trong khoảng 18h + 3h
Bước 2 Tăng sinh chọn lọc
Trộn đều dịch tiền tăng sinh, chuyền 0,Iml vào ống nghiệm chứa LŨml môi trường RVS,
ủở41,Š + I°C trong 24 + 3h; đồng thời chuyên lmÌ vào ông nghiệm chứa IŨm) môi
trường MKTTn, ủ ở 37 + IC trong 24 + 3h Cân thận không được đề vượt quá nhiệt
độ ủ tối đa (42,5°C)
Bước 3 Phân lập
Dùng que cay vòng cây phân lập từ mỗi canh thang tăng sinh chọn loc RVS va MKTTn lên mỗi đĩa thạch chứa môi trường chọn lọc XLD và HE Sau khi cấy, lật ngược các đĩa sao cho đáy hướng lên trên và ủ ở 37C + IŨC trong 24 +3h
Sau khi ủ 24 + 3h, kiểm tra các đĩa về sự có mặt của các khuẩn lạc điện hình và các khuẩn lạc không điện hình mà có thể nghi ngờ là Salmonella Đánh dấu các vị trí của chúng trên đáy đĩa Trên môi trường XLD khuẩn lạc Salmonella điển hình có màu hồng trong suốt, có hoặc không có tâm màu đen Trên môi trường HE khuẩn lạc Salmonella
điện hình có màu xanh lam, có hoặc không có tâm đen
Trang 17Bước 4 Phục hồi trên môi trường dinh dưỡng NA/TSA
Đánh dấu 1 khuẩn lạc điển hình hoặc nghi ngờ từ mỗi đĩa trên môi trường phân lập XLD
va HE cay ria lén NA/TSA U 637 + IC trong 24 +3h
Buéc 5 Dinh danh bang strip GNA
Thực hiện thử nghiệm oxidase trước khi thực hiện strip dinh danh Dung que cay bang platin iridi hoac dia thuy tinh, lay một phần dịch cấy tinh khiết từ thạch NATSA và chấm lên giấy lọc đã làm âm bằng thuốc thử oxidase hoặc str dung dia giay oxidase co ban san Phép thử được coi là dương tính nêu màu chuyên sang màu tim hoa ca, màu đc tím hoặc tím sẵm trong 10 giây Phép thử âm tính khi giấy thử oxidase không đổi màu Thực hiện strip định danh GN A khi thử nghiệm oxidase cho kết quá âm tính Chọn khuân lạc trên NA/TSA, hòa trộn khuẩn lạc trong 3ml nước muối sinh lý
Dung pipet v6 trùng, nhỏ 3-4 giọt (100ul) dịch vĩ khuẩn vào mỗi giếng Phủ 1 lớp dầu khoáng lên trên các giếng 1, 2, 3 va 9 U strip 6 37C trong 24 gid
Sau khi ủ, thêm 2 giọt thuốc thử kowac”s vào giếng 8, đọc kết qua sau 60 giây; thêm ] giọt thuốc thử VPI và I giọt thuốc thử VP2 vào giêng 10, đọc kết quả sau 15-30 phút; thêm I giọt thuốc thử TDA vào giếng 12 và đọc kết quả sau 60 giây
Bảng 3 Bảng hướng dẫn đọc kết quả
dương
Trang 19
YP GEL GLU | MAN INO SOR | RHA SAC MEL | AMY œ
ONPO ADH LOC | ODC CIT HyS | URE TDA IND