Khảo sát Ảnh hưởng của Điều kiện nuôi cấy Đến hoạt tính Ức chế enzyme Α glucosidase của nấm cộng sinh Địa y nigrovothelium inspersotropicum

Ti adi %4 ức chế enzyme a-glucosidase cita cao chi tử sinh khối nắm được nuôi ở điều kiện có ánh sing trong tuẫn 3 Bảng 3.5, Tỉ lệ % ức chế enzyme a-glueosidase của cao chiết D-glue

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

TRUONG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHÓ HÒ CHÍ MINH

LÊ NGUYÊN CAO DƯƠNG

KHAO SAT ANH HUONG CUA DIEU KIEN NUOLCAY DEN HOAT TINH UC CHE ENZYME a - GLUCOSIDASE CUANAM CONG SINH BIA Y Nigrovothelium inspersotropicum KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP

NGÀNH SƯ PHẠM SINH HỌC

THÀNH PHÓ HỖ CHÍ MINH - 2024

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

TRUONG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHÓ HÒ CHÍ MINH

LÊ NGUYÊN CAO DƯƠNG

KHAO SAT ANH HUONG CUA DIEU KIEN NUOLCAY DEN HOAT TINH UC CHE ENZYME a - GLUCOSIDASE CUANAM CONG SINH BIA Y Nigrovothelium inspersotropicum KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP

m xin gửi lời cảm on sâu sắc đến cô TS, Tein Thị Minh Định - người đã tận

nh giáp đỡ, hướng dẫn em tron suốt quả tình học tập, nghiên cứu và hoàn thiện

khóa luận này

Em xin chân thành cảm ơn Trường, Phòng Đào tạo, các thầy cô trong Khoa Sinh

thí Minh đã tạo điều kiện thuận lợi học - Trường Đại học Sư phạm Thành phí

cho em thực hiện khóa luận này

"Bên cạnh đó, em cũng xin chân thành cảm ơn các thầy cô ở phòng Hóa học phân tích = Khoa Hóa học - Trường Đại học Sư phạm Thành phó Hồ Chí Minh, các thầy

cô ở Trung tâm Khoa học và Công nghệ Sinh học Trường Đại học Khoa học tự nhiên hiện khóa luận tốt nghiệp

“Qua đây, em cũng xin bảy tỏ lòng cảm ơn đến gia đình, người thân và bạn bè đặc biệt là những bạn thực hiện nghiên cứu ở phòng Sinh hóa ~ Vĩ sinh đà nhiệt tỉnh

giúp đỡ em trong suối thời gian thụ hiện khóa luận này

TP, Hồ Chí Minh, ngày 17 thẳng 05 năm 2024 SINH VIÊN

Lê Nguyễn Cao Dương

2 Mục tiêu nghiên cứu

-4 Nhiệm vụ nghiên cứu

Chương 1 TÔNG QUAN 4

1.2 Tổng quan vé enzyme a — glucosidase

L3 Tông quan về địa y và ảnh hưởng của điều kiện muỗi cấy đến hoạt ín sinh hoe

Chương 2 VẬT LIỆU VA PHUONG PHAP NGHIEN CUU, 12

2.2 Thiết bị và hóa chất 12

2.22 Héa chit

3.3 Phường pháp nghiên cía,

2.3.1 Phương pháp tạo môi trường và nuôi nắm,

2.3.2, Phuong php tao cao ethyl acetate

2.33, Phuong phip xée dinh hoat tink te ché enzyme a ~ glucosidase

2.3.4 Phương pháp xử lí số liệu

2.4 Quy trình thực hiện

Chương 3 KẾT QUÁ VÀ THẢO LUẬN

3.1 Kết quả nuôi nắm và tạo cao ethyl acetate

3.2 Ảnh hường của nguồn carbon đến hoạttính ức chế enzyme rglucosidase 3.3 Ảnh hưởng của điều kiện chiếu sắng đến hot tinh ie ché enzyme ae

ICBN International Code of Botanical Nomenclature

AIDS Acquired Immuno Deficiency Syndrom

Sor 6 wh Cao chỉ € nuôi tuần trên môi trường,

Sor 6 wan MYA thay is sucrose bing during sorbitol

Sor 8 tuần im được nuôi § tuần trên môi trường

TA thay 'đường sucrose bing đường sorbilol

Cao chiết nằm được nuôi 10 tuần trên môi tường

Sor 10 tuần ‘MYA thay đường sucrose bằng đường sorbitol Sor I2 tần Cao chiết nắm được nuôi 12 tuần trên môi trường

MYA thay đường suerose bằng đường sorbitol

; Cao chigtndm durge nudi 6 twin trên mỗi trường

Man 6 tuần MYA thay dung sucrose bing during mannitol

Man Suda Gao chidt nim duge nadi 8 win én moi tng

MYA thay đường sucrose bằng đường mannitol

Man 10 wan Cao chiết nắm được nuôi 10 tuần trên môi tường MYA thay đường sucrose bằng đường mannitol

Deglu 8 tuần

Sáng 10 tuần

nắm được nuôi 8 tuần ring MAYA 6th lon cig sing 12 engl Cao chiết nấm được nuôi 10 tuần trên môi trường MYA với thời gian chiều sáng 12 tiếng/ngày

Sáng 12 tuần

Tối 12 tuần Cao chiế nấm được muỗi 2 uẫn rên mồi trường

MYA hoàn toàn trong bóng

DANH MỤC CÁC HÌNH

Hình 1.1 Địa y Nigrovothelium inspersotropicum [ST]

Hình 2.1 Quy trình thực hiện đề tải

Hình 3,1 Khuẩn lạc nắm được nuôi ở các môi trường trong 6 tuẫn Hình 3.3 Khuẩn lạc nắm được mui ở các môi trường rong 10 tuần

Hình 3.4 Khuẩn lạc nắm được nuôi ở các môi trường trong 12 tuần Hình 3.5 Đỗ thị tương quan giữa log10 nồng độ cao sáng 8 tuần với ti lệ phần tăm

Hình 3.6 Đỗ thị tương quan giữa log10 nồng độ cao D-glucose 8 twin véi tí lệ phần

Hình 37 Đỗ thị tương quan giữa log10 nồng độ acatbose với lệ phần trăm ức chế

Bảng 2.1 Các thiết bị sử dụng trong đề tài 12 Bảng 2.2, Các hóa chất được sử dụng để tạo môi trường nuôi nắm, l3 Bảng 2.3 Các hóa chất được sử dụng tạo cao chiết và thử hoạt ính ức chế enzyme

Bảng 2.4 Thể ch cao nắm pha loãng ở nồng độ 200 qgimL_ M4 Bảng 3.1 Khối lượng sinh khối khô và cao chiết nắm thú được 3

Bảng 3.2 Khả năng ức ché enzyme a-glucosidase ca cao chiết nim N,

ispersotropicum môi cấy trên môi trường MYA khắc nhau về nguồn carbon 23 Bảng 3.3 Tig (%6) te ché enzyme a-glucosidase cacao chit nim N

ấy trên mỗi trường MYA khác nhau về thôi gian chiếu sing

25

inspersotropicum nuôi

Bang 3.4 Ti

adi %4) ức chế enzyme a-glucosidase cita cao chi tử sinh khối nắm

được nuôi ở điều kiện có ánh sing trong tuẫn 3

Bảng 3.5, Tỉ lệ (%) ức chế enzyme a-glueosidase của cao chiết D-glueose 8 tuần 28 Bảng 3.6

Bảng 3.7, Kết quả phân tích tương quan phi tuyển tính giữa tỷ lệ ức chế enzyme a ệ (4) ức chế cnzyme a-glucosidase của acarbose 30 glueosidasc với nồng độ cao chiết nắm E tuần và thôi gian chiếu sing 12 hingủy 38 Bảng 3.3 Kết quả phân tích tương quan phi tuyn tính giữa tỷ lệ ức chế enzyme a=

glucosidase véi néng độ cao chiết nắm § tuần trên môi trường chứ đường D-glucose

39

Bảng 3.1 Kết quả phân tích tương quan phi tuyến tính giữa tỷ lệ tre ché enzyme ơ-

Lí do chọn đề tài

Bệnh đái thảo đường (ĐTĐ) là một căn bệnh mạn tỉnh, xảy ra khi tuy không sản xuất đủ insuin hay cơ thể sử dụng không hiệu quả insulin do tụy sản xuất làm cho DTD typ 1, DTD tujp 2 va ĐTD thai kì [2] Trong đó, ĐTĐ tuýp 2 được xem như

với sức khỏe toàn cầu do

một cuộc khủng hoàng tỉ lệ người mắc cao nhất và ngày cảng có nhiều thanh thiếu niên mắc phải [3] Các biến chứng gặp phải khi mắc bệnh DTĐ bao gồm bệnh tim mạch, bệnh thận, rối loạn chức năng và suy yếu các cơ quan khác nhau, đặc biệt là mắt, thần kinh, tm và mạch máu [) [5] Theo Tổ chức Y tế Thể giới (WHO), ĐTĐ tuýp 2 có ti lệ người mắc cao nhất chiếm 90%% đến 95% tông số người mắc bệnh ĐTP trên toàn thể giới Độ tuổi mắc DTD tuýp 2 phổ biển nhất là những người trên 45 tụ nhưng hiện nay, ngày càng có

nhiều trẻ em và thanh thiểu niên mắc bệnh nảy [6], nguyên nhân gây bệnh có thể Li

do yếu tổ đ truyễn, bó phì, chế độ ăn uống không hợp li hoc ít vận động thể chất

[7] Các nguyên nhân đặc trưng như béo phì, giảm sự hoạt động của insulin hay những

bắt thường ở Ế bảo tuyễn tuy trong tiết insulin làm gia tăng lượng glucose trong

máu gây ĐTĐ tuýp 2 [8] Vi vay, nguyên tắc điều trị chung cho các bệnh nhân mắc

ĐTP tuýp 2 bên cạnh chế độ ăn uống hợp li kết hợp với tập luyện thể dục thể thao

;ử mức sinh lý bình thường [I0]

Enzyme a-glucosidase li mt enzyme quan trong tham gia vào bước cuối cũng

trong qué trinh tiéu héa carbohydrate a-Glucosidase thiy phan polysaccharides va

oligosaccharides thanh glucose; do d6, dé kiém soát lượng đường huyết sau khi ăn cẩn phải ức chế enzyme a-glucosidase nhằm làm chậm quá trình thủy phân

carbohydrate gi phóng glacose, giảm hấp thu glucose rong miu [11] Hign nay một ei

số loại huốc được sử dụng rộng rãi trong điều trị ĐTD tuƒp 2 có tác dụng ức chế

enzyme a-glucosidase nhu acarbose, voglibose, miglitol [12], [13] Việc sử dụng các

loại thuốc này uy có hiệu quả cao ong điều trì ĐTĐ nhưng vẫn uôn iểm ẫn một số

tắc dạng phụ có th xảy rà như viêm gan, suy thận hay các bệnh liên quan đến hệ tiêu

hóa [13], [14] Do đó, việc tìm kiểm các hợp chất ức chế enzyme a-glucosidase, các

loại thuốc thay thể có nguồn gốc từ thảo dược, địa y nhằm thay thể cúc loi thuốc

điều trị ĐTĐ thông thường đang rất được quan tâm và nghiên cứu [15],

Địa y được tạo thành từ mỗi quan hệ cộng sinh giữa nắm (myeobiont)- thường

là nắm túi hoặc nắm đảm - với một hoặc nhiều loại tảo (pholobionf)« thường là tảo

lam hoặc tảo lục đơn bảo, để tạo thành cơ thể thống nhất với các đặc tính sinh lý và

-S00 loại

nắm cộng sinh địa y [16] vậy nên tiềm năng khai thắc các hợp chất chuyển hỏa thứ

từ nắm cộng sinh (mycobiont) của chúng [17], [18] Trên thể giới có hơn Ï cấp phụ vụ cho y học là rắt lớn Nắm cộng sinh địa y với các hợp chất chuyển hóa tuýp 2 [I9] Trong các điều kiện môi trưởng nuôi cấy khác nhau các nắm cộng sinh

có thể tạo ra những hợp chất chuyển hóa thứ cấp khác nhau [20] Myeobiont với da dạng thành phần loài, tạo nên sự đa dạng các sản phẩm chuyển hóa thứ cấp có thể nghiên cứu về hoạt tính sinh học của nắm chỉ Nigrovorielin; bên cạnh đó khả năng thuộc lớn vào điều kiện mỗi trường nuôi cấy chúng VI vậy, cần thiết phải có các iia mycobiont chi Nigrovothelium

han théy duge tinh ep thiét, dé tii “Khao sat anh hudng của điều kiện nuôi

sấy đến hoạt tính ức chế enzyme a-glucosidase cia Nam cộng sinh địa y

“Nigrowotielium inspersotropieum” được thực hiện

2 Mục tiêu nghiên cứu

Khảo sát ảnh hưởng cña điều kiện muối cấy đến hoạt tinh ức chế enzyme ø- glneosidase của nắm cộng sinh địa y N.inspersomropicum

3 Đi tượng nghiên cứu

Nim e6ng sinh diay N,inspersotropicum đã được phân lập từ trước và được

lưu trừ tại phỏng Sinh hóa — Vĩ sinh với mã số UE ~ MY06 Loài nắm này được phân

lập từ mẫu địa y được thu từ Thị xã Kiến Tường Tỉnh Long An (10.766858, 105.940441) vào tháng 5 năm 2022, Mẫu nắm cộng sinh này thuộc bộ sưu tập nắm công sinh địa y cia TS Trin Thị Minh Định tại Khoa Sinh học, Trường Đại học Sư

Nudi edy nim N inspersotropicum

— Tạo cao ethyl acetate sinh khdi nắm

~ Khao sit hoat tin ie ché enzyme aeglicosidase eta cao ethyl acetate

5 Pham vi nghiên cứu

ĐỀ tải tiễn hành khảo sắt hoạt nh ức chế emzymme rglucosidasc nắm cộng sinh địa y AI inspersotmpicum môi cấy trên môi trường MYA cơ bản trong điều kiện

sắng/tối và môi trường MYA đã thay đối thành phin duémg (sorbitol, mannitol va D-

gÌnepse)

ĐỀ ải được tiến hành từ tháng 10/2023 = 3/2024 tụi Phòng thí nghiệm Vi sinh ~ Sinh hoá, Khoa Sinh học, Trường Đại học Sư phạm Thành phổ Hồ Chí Minh.

Chung 1 TONG QUAN

- Tổng quan về bệnh đái tháo đường

Bệnh ĐT là một căn bệnh mạn tính, xảy m khi ty không sản xuất đủ insin

hay cơ thể sử dụng không hiệu qua insulin do tụy sản xuất làm cho nồng độ glucose

tong mâu (glucose huyết tăng cao [1] Lượng đường huyết tăng cao kéo đãi sẽ gây

lần kinh [5] Bệnh ĐTĐ

g đầu trên toàn thổ giới, do vậy bệnh

co quan khác nhau, đặc biệt ở tìm, mạch máu, thận, mắt và tl

à một trong những ng n nhân gây tử vong hà

nhân cần được chẳn đoán, phát hiện và điều trị theo đúng nguyên tắc để đảm bảo sức

khoẻ và chất lượng cuộc sống [21]

ĐĐTĐ được phân thành ba loại phổ biển là ĐTP tuýp 1, DTD «usp 2 và ĐTĐ

thai kỉ [6]: trong đó, ĐTĐ tuýp 2 được xem như một cuộc khủng hoảng đối với sức

khỏe toàn cầu do có lệ người mắc cao nhất và ngày cảng có nhiều thanh thiểu niên

mắc phải [3] ĐTĐ tuýp 1, được gây ra bởi sự phá hủy tế bảo ÿ đảo tuy, thường dẫn

đến thiểu nsulin tuyệt đối ĐTĐ tuýp 2 do giảm chức nã lự của tế bảo fi tuy tiền triển trên nén ting đề kháng insulin, DTD thai kỳ được chấn đoán vào giai đoạn thứ hai bệnh ĐTP [22]

‘Theo Té chức Y tế Thể giới (WHO), DTD tuýp 2 có tỉ lệ người mắc cao nhất chiếm 90% đến 95% tổng số người mắc bệnh ĐTP trên toàn thể giới Độ tuổi mắc căng bệnh nảy ngảy cảng trẻ hóa, nguyên nhân có thể do yếu tổ di truyền, béo phi, ring, cơ chế của sự khang insulin bao gdm cde thy thé insulin bi rối loạn chức năng, vận chuyển glucose hoặc chuyển héa glucose, Phin lớn các bệnh nhân ĐTĐ tuýp 2

sẽ tăng sản xuất tiết insulin để kiêm soát nông độ ølucose huyết Nhưng sau đó, nêu

tỉnh trạng dư thừa chất dinh dưỡng vẫn tiếp diễn, glucose huyết vẫn ti tục tăng cao

cùng với sự ting cao của các acid béo tự đo, sẽ tác động âu cực đến chức năng tế

bảo tuyển tụy, Hậu quả làm tế bảo B giảm tiết insulin [24], [25]

"Người mắc bệnh ĐTĐ, nếu không được chăm sóc và điều ị đúng cách, sẽ gặp

phải các bệnh và biển chứng nguy hiểm, lâu dài có thể dẫn đến tử vong Đối với các

biển chứng mạn tính, người bệnh cần được kiểm tr sức khoẻ thường xuyên Bệnh lý võng mạc do ĐTĐ cũng cần được khám mắt toàn diện và đo thị lực định kỳ hằng

Š sau, Nhìn năm, để có hể kiểm soát được tiên triển bệnh và giảm nguy cơ mũ loà chung, các biến chứng do bệnh ĐTĐ để lại sẽ ảnh hưởng đến sức khoẻ và chất lượng

cuộc sống của người bệnh, nêu không được điều trị tích cực sẽ gây ra hậu quả nặng

nề [6] [27]

1.2 Tổng quan vé enzyme a ~ glucosidase

Enzyme a-lucosidase (EC 3.2.1.20) li enzyme ngoại bảo (exoenzyme), bao gồm một nhóm các enzyme như maltase, glucoinvertase, glucosidosuerase, maltase-

slucoamylase, ø-glueopyranosidase, -D-glueosidase, ø-glucoside hydrolase, o-1,4-

glueosidase,rdislueoside, glueohydrolase [28], [29] xúc tắc cho quả trình thủy phân liên kết ø=l.4-plyeoside giải phóng øcglucose khỏi đầu Không khử của cơ chất [30]

Ca chit ajc trig cia enzyme œ ~ glucosidase niy li oligosaccharide, disaccharide, enzyme thuộc lớp glycoside hydrolase (GH) - một lớp các enzyme thường tách các ligm két glycoside gita hai phan tir carbohydrate [32]

Enzyme a-glucosidase duge chia thinh hai nhém GH-13 vi GH-31; enzyme thuộc nhóm GH-13 được phát hiện nhiễu ở vỉ khuẩn; còn enzyme thuộc nhôm GH-

31 thường gặp ở những sinh vật bậc cao [30] Enzyme d-glucosidase có nguồn gốc

rất phong phủ, ừ nhiễu loài sinh vật (vi khuẩn, nắm mốc, động vật và thực vật nên

tính đặc hiệu cơ chất của họ enzyme cũng đa đạng hơn Các enzyme œ-glucosidase

được phân chỉa thành ba loại chính dựa trên tính đa dạng đặc hiệu của cơ chất Loại

nhu p-nitrophenyl a-D-glucopyranoside (pNPG) Enzyme logi II va I thi nguge Iai,

hoại động mạnh hơn trên các holoside và có hoại tính thấp đối với các glyeoside [33]

Carbohydrate li mt trong ba chất dịnh dưỡng da lượng quan trong vi cin tht

trong chế độ ăn của mỗi người bên cạnh protein và lipid [34] Thực phẩm giàu tỉnh

bột là nguồn cưng cấp carbohydrte chủ yếu cho cơ thể Ở người, enzyme ø-

glucosidase được tìm thấy trên tế bào ruột ở hỗng tràng của ruột non, khi carbohydrate

từ thúc ăn được đưa vào cơ thể ruột non sẽ tế ra enzymme øralueosidase để hủy phân carbohydrate thành những phân tử giueose nhỏ hơn rồi thẳm thấu vào máu [35] Do

Vậy

thủy phân carbohydrate va làm chậm sự thắm thấu glueose vào máu từ đồ ngăn chặn bằng việc ức chế hoạt động của enzyme ø-glucosidase có thể làm giảm quá trình

tình trạng tăng đường huyết sau bữa ăn [19] Đây là một trong những phương pháp

điều tị ĐTĐ tuýp 2 hiệu quả nhất

Thube te ché enzyme a-glucosidase(a-glucosidae inhibitors - AGIs) là thuốc

ức chế sự hếp thu carbohydrte từ ruột non, từ đổ tác dụng làm giảm lượng đường huy

[36] Hầu hết các AGIs có thể gắn vào vị trí liên

+ sau bữa ăn nên có thể được sử dụng trong điều trị bệnh nhân mắc ĐTĐ loại 2

carbohydrate cla a-glucosidase

vi chủng có cầu trúc giống với disaecharide hoặc oligosaccharide Phúc hợp này có

ái lực mạnh hơn so với phức hợp carbohydrate-glucosidase, tạo ức chế cạnh tranh,

dẫn đến hot động của œ-glucosidase trong niềm mạc của ruột nonbị ức chế [28] Khi thu carbohydrate, vige tigu hóa và hắp thu châm carbohydrste lâm cho chỉ số đường

nghiên cứu năm 2021 [37]

“Aearbose làm chậm quá tình tiêu hóa carbohydrate bằng cách ức chế cạnh tranh

với enzyme a-glucosidase 6 ruột non, dẫn đến làm giảm đường huyết sau ăn [12], rất

hiệu quả trong điều tỉ ĐTĐ nhưng vẫn luôn tiềm ấn một số tắc dụng phụ có thể xảy việc tìm kiếm các hợp chất ức chế enzymme ø-glueosidase, các loại thuốc thay th có

đang rất được quan tâm và nghiên cứu [13]

“Tổng quan về địa y và ảnh hưởng của điều kiện nuôi cẤy đến hoạt tính sinh học cũa nấm công sinh địa y

Địa y được tạo thành từ mỗi quan hệ cộng sinh giữa nắm (myeobion) - thường

à nắm túi hoặc nắm đảm - với một hoặc nhiều loại tảo (photobiond) - thường là vỉ khuẩn lam hoặc tảo lục đơn bio, tạo thành cơ thể thống nhất với các đặc tính sinh

lý và sinh thái riêng [I6], Nhĩng sợi nắm kết xung quanh các tế bảo tảo nhằm đảm

nước, COs, m

bảo cung vô cơ để tảo quang hợp và giúp tảo không bị khô

Song song đó, tảo cũng quang hợp cung cấp chất hữu cơ cho nắm và chính nó sử

dụng [38] Môi trưởng sống của địa y rất đa dạng, chúng có thể sống trên đắt đá, vách

núi, thân cây, cảnh cây, đồng cỏ, các khu vực ven biễn, rừng mưa nhiệt đới hay én

đới, thậm chí cả những môi trường khắc nghiệt như Bắc Cực hay sa mạc [39] Tốc

độ tăng trưởng của địa y rất châm [40]

Tên của địa y được đặc theo tên của nắm cộng sinh tạo nên chúng, điều này

được quy định trong Bộ luật về Danh pháp thực vật quốc tế (ICBN) [41] Địa y được

phân loại thánh 3 dạng cơ ban: dang khim, dang soi vi dia y phiến Dạng khảm

(erustose) bám chặt vào bề mặt của giá thể Giá thể có thẻ là đá hoặc vách đá, thân

cây khác Địay phiến (flioxe) thường cỏ đạng như lá, tần của chúng có thể phân ra

thành nhiều thùy Dạng sợi (fruticose) cấu trúc hình sợi, với nhiều sợi hợp lại tạo

thành hình dáng giống dạng cây bụi nhỏ [42]

Địa y sinh sản vô tính với hai hình thức sinh sản Đầu tiên là ỉnh sản sinh dưỡng bằng mim phần ~ các hạt nhỏ, tròn, màu xanh xâm, gồm một đến ha tế bảo ảo và

địa y giả chết, phân hủy thành một số mảnh nhỏ có thể phát triển thành địa y mới

"Ngoài ra, tảo và nắm có các hình thức sinh sản riêng: tảo sinh sản theo kiểu phân đôi thành quả thể chứa bảo tử túi bên trong) Bảo tử nắm sẽ nảy mầm thành sợi nắm và khi gặp tảo thích hợp hình thành địa y mới [43]

“Các hợp chất chuyển hóa thứ cắp của địa y chủ yêu đến từ myeobiont [17], 18] nhưng mycobion lại có tốc độ sinh trưởng và phát triển chậm vì vậy dé thu được sinh

khối mong muốn cần phải cải tiễn điều kiện và môi trường mỗi cấy [44] Đa số

myeobiont thuộc ngành nắm túi (Ascomycota), một số khác thuộc ngành nắm đảm

(Basidiomyeota) [45] Trên thể giới có hơn 13.500 loại nắm cộng sinh địa y [46] vây

nên tiềm năng khai thác các hợp chất chuyển hóa thứ cắp của chúng nhằm phục vụ

cho y học là rất lớn

Đã có hơn 1,050 hợp chất chuyên hóa thứ cắp từ địay được xác định vàhẳu hết

các hợp chất thứ cấp này đều đặc trưng cho nắm cộng sinh (mycobiont) của địa y

[47] Cac hop chất chuyển hỏa thứ cấp từ địa y và myeobiont được xem như một

ngudn dược liệu phong phú nhờ vào khả năng kháng khuẩn, kháng oxy hóa, chống

viêm, giảm đau, chống nắng [48] [49] Ngoài ra, một số loài địa y đã được phát dia y côn được biết đến như làm sinh vật chỉ thịô nhiễm không khi, nguồn thức ăn

chính vào mùa đông cho tuần l

› sóc bay, chuột lưng đỏ và nhiễu loại động vật không,

xương sống Nhiễu loài chim sử dụng địa y làm vật liệu làm tỏ Một số loại địa y tir

lâu đã được người dân Bắc Âu và Bắc Mỹ sử dụng làm thực phẩm; lâm thuốc để điều

trị một số bệnh như DTD, ho, chita vét thương và các bệnh đa liễu [51], [52]

Xăm 2021, Gregor Pichler và các cộng sự đã công bổ bài báo trong d6 đảnh giả

ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy đến sự sinh trưởng của nắm cộng sinh địa y X

parieina Cụ thễ nẫm X.parisina được môi trong mỗi trường Lilly-Barnett (LBM) thay thé 1% D.glueose bằng 3% D-glueose và 3% D-manniol, cho thấy sự tăng sinh khối nắm tươi ần lượt là 22% và 26 sau 8 tun mudi ey [53] [Nam 2013, Kim cùng các cộng sự đã công bổ bài bảo về "Ảnh hưởng của ảnh

sing đến quá trình sinh trưởng và tổng hợp các hợp chất thứ cắp của nắm Fusarium

raminearum Nắm E sranineurim được nuôi trong điều kiện chiễu ảnh ing tring

liên tục và trong bóng tối hoàn toàn Kết quả thí nghiệm cho thấy rằng ánh sáng có

ảnh hướng đến quá trình sinh trưởng và sinh tổng hợp các hợp chất thứ cắp ở nắm

E graminearamm (54)

Tang quan vé nim N.inspersotropicum

Địa y chi Nigrovothelium li dia y dang khim (crustose) [58], gdm 3 loài N

bullatum, N inspersotropicum va N tropicum [56] Chỉ địa y Nigrovothelium được

Lacking vi cae edn sir đặ tên vào năm 2016

Địa ý N inspersotropicum 18 mot trong 3 loài dia y chi Nigrovorhelium được ptroot& Diederich phan loai vio nim 2017 Nigrovothelium inspersotropicum phân

cây ánh vàng đến hơi nâu vàng, bên trên có các quả thể (ascomata) có dạng hình cầu,

mẫu den, đường kính khoảng 0,45 ~ 0,6 mm [S8]

Hình 1.1 Địa y Nigrovothelium inspersotropicum [59]

Tình hình nghiên cứu trong và ngoài nước

Nắm cộng inh địa y với các hợp chất chuyển hóa thứ cấp của chúng được xem

là một nguồn thay thể có tiềm năng trong điều trị ĐTĐ tuýp 2 [19] Một số hợp chất

chuyển hóa thứ cấp được chiết xuất từ nắm cộng sinh địa y có hoạt tính ức chế enzyme

a-glueosidase như meylorselimate, 2a-dihydroxy-6-metbylbenzoate, methyl;Ø-

salazinic acid va usnic acid, flavonoid, [60], [35],

Nam 2014, Kanunaratne và các cộng sự đã công bỗ nghiên cứu về một số hợp

chất được tách chiết từ địa y Cladonia sp lan lượt là Zeorin, methyl/-

orcinolearboxylate vi methylorscllimate với hoạt tỉnh ức chế enzyme œrglueosidase

cao hơn nhiều lần so với acarbose; trong đó hợp chất zeorin thể hiện khả năng ức chế

enzyme mạnh vớ giá tị Co là 100,0 + 0,3 ngômL so với aearbose cổ giá tri ICs li 00,0 + 10,4 g/mL Từ nghiên cứ rên, nhôm tác giả khẳng định các hợp chất này

dự kiến trong tương lai sẽ là nguồn nguyên liệu có tiềm năng ứng dụng trong điều trị

bệnh DTD tuýp 2 [61]

Năm 2016, Huỳnh Thư cùng các cộng sự đã đánh giá khả năng ức chế enzyme

a-glueosidmse từ cao chiết của I1 loài địa y tại vườn Quốc gia Bidonp - Núi Bà tỉnh Lâm Đồng, Kết quả nghiên cứu cho thấy 4 loài Usnew peetinata, U flammea, U Julvoreagens, U baileyi (gi tej ICao lẫn lượt là 75.23 pg/mL, 104,84 pgimL, 140,66

nhiều so với acarbose 0,2 Ư/mL (giá trị ICso là 3597.12 pg/mL) Từ kết quả nghiên

cứu, nhóm lắc giả đưa ra luận chiết xuất methanol của 4 loại địa y tên sẽ là sự thay thể tuyệt vời cho thuốc ức chế ø-glucosidase thông thường [62] Năm 2021, Muzaffer Mukemre và cộng sự đã công bố bài báo “Hoạt tính sinh học và thành phẩn hóa học của địa y chỉ Xaahoria từ Thổ Nhĩ Kỷ” Trong nghiên cứu, nhóm tác giả tập trung vào ba đối tượng địa y là X candelaria, X elegans vi X parieina KẾt quả khảo sắt hoạt tính ức chế enzyme a-glucosidase cho thấy X cung cấp hợp chất thứ cắp mới ứng dụng trong điều tị ĐTĐ tuýp 2 [52]

[Nam 2022, Maulidiyah và các công sự đã công bổ nghiên cứu của mình về hợp

chất usnie acid (C¡sH,«O;) phan lap tir dia y Usnea sp., sau khi thử hoạt tính ức chế:

enzyme aeglueosidase cho thấy acid uenie cổ hoạt tích ức chế enzyme orglucosidase

với giá trị ICø là 106,78 g/mL Nghiên cứu cũng kết luận usnie acid phân lập từ

Usnea sp 6 tiềm năng lớn trở thành nguồn hợp chất thiên nhiên ứng dụng làm thuốc trì ĐTP tuýp 2 trong tương lai 3]

Năm 2023, Alfredo Torres-Benitez cùng các cộng sự đã thực hiện nghiên cứu

khả năng ức chế enzyme œ-glueosidase của ba loại địa y phân bổ ở vùng ôn đói và

vùng cực lần lượt la Placopsis contortuplicata, Ochrolechia frigida va Umbilicaria

antartica Két quả của nghiên ciru cho thiy loi O,frigida o6 hoạt tính tốt nhất (giá

tr] ICs» ft 160,015 pg/mL.) so vei giá tr IC et acarbose (206,614 + 0,008 jig/ml),

Ha loài còn lại có hoat tinh thip hom, wi gid tr] ICs Hin lat li 139,56 + 0,056 vi 151,94 + 0,022 pil [64)

2.1 Vật liệu nghiên cứu

Nắm cộng sinh diay N inspersotropicum đã được phân lập từ trước và được

lu trở ti phòng Sinh hóa ~ Vì sinh với mã số UE = MY06, Loài nắm này được phân 105.940441) vào thing 5 nam 2022 Miu nắm cộng sinh này thuộc bộ sưu tập nắm

công sinh địa y của TS Trin Thj Minh Dinh tai Khoa Sinh học, Trường Đại học Sư

Bảng 2.1 Các thiết bị sử dụng trong đề tài

Môi trường MYA Môi trường MYA thay đổi nguồn carbon

Malt extract: 10g | Maltextaet:10g | Maltextraet 10g | Maltextraet 10g Yeast extract: 4g | Yeastextract: 4g | Yeastextract: 4g | Yeast extract: 4 g Sucrose: 100 | D-glucose: 100g | Sorbitol: 100g | Mannitol: 100 g

Nude edt: 11 | Nudeedt: 11 | Nude edt: 11 Nude edt: 11

Bảng 2.3 Các hóa chất được sử dụng tạo cao chiết và thử hoạt tính ức chế

-nzyme ø-glueosidase

3 p-nitrophenyl-D-glucopyranoside ‘Sigma Aldrich, MY

7 Sodium carbonate AR, Trung Quốc

2.3 Phương pháp nghiên cứu

2.3.1 Phuong pháp tạo mỗi trường và nuôi nắm

Đề tải chỉ sử đụng 1 loại môi trường nuôi nắm là môi trường MYA được pha theo công thức với 1000 mÍẴ nước cắt sẽ ding 10 g malt extract, 4g yeast extract, 100

sg sucrose vi 20 g agar Déi với môi trường MYA thay đổi ngụ carbon, 100g sucrose

sở được thay lần lượt bằng 100 g D-glueose hoặc 100 g sorbitol hode 100 g mannitol

trường được pha và cho vào e bình tam giác hoặc inh schott, hap trong ndi

bắp tiệt tring 6 121°C trong 20 phút Mơi trường sau khi ắp tiệt tring sẽ được để

nguyên trong bình tam giác đến khi đơng lại và nguội hiin là cĩ thể sử dụng để nuơi Sau khi đã chuẩn bị mơi trường, nắm từ đĩa giống ban đầu được cắt nhỏ và

chuyển qua mỗi trường mới: nắm được nut trong thoi gian 6; E; 10 và 12 tuần với nhiệt độ 22% Nắm được nu và khảo sắt hoạt tính ở các nghiệm thite:(1) mudi trén MYA hồn tồn trong bĩng tối, (2) nuơi trên mơi trường MYA chiều sáng trung bình

12 tiếng/ngày, (3) nuơi trên mơi trường MYA thay đổi nguồn carbon từ suerose thành D-glucose, (4) nuơi trên mơi trường MYA thay đổi nguồn carbon từ suerose thành mannitol

3.3.2, Phương pháp tạo cao ethyl aeetate

Nắm sa khi được nuơi ong khoảng thồi gian 6; 8; 10; 12 tuần sẽ th sinh khối

tươi Sau đồ sinh khối nắm được sấy khơ trong tủ sấy ở nhiệt độ từ 60°C khi khơ

hồn tồn Sinh khối ấm khơ được xay nhuyễn va ngim trong dung méi ethyl acctate

với tỉ lệ 1:2 Nắm được ngâm và lọc lấy dung mí lên tục mỗi ngày cho đến khi dung

mơi ong suất Cao nắm được thụ li bằng cách cơ quay su đĩ để bay hơi đang mơi

tự nhiền

3.3.3, Phương pháp x: lịnh hoạ ie chE enzyme a — glueosldase

Dé Kho sit hoa inh te ché enzyme a— glu dase 20 mẫu cao nắm được

pha lộng ở nồng độ 200 ug/mL với DMSO va dém phosphate

Bảng 2.4 Thể tích cao chiết nắm pha lỗng ở nồng độ 200 g/mL

'Tên cao chiết Khối lượng cao (mg) Thể te mee “

'Tên cao chiết Khối lượng cao (mg) The Gch DMSO