Khảo sát Ảnh hưởng của các Điều kiện nuôi cấy Đến hoạt tính Ức chế Α glucosidase của nấm cộng sinh Địa y graphis sp

Những enzyme œ- vai tò chính là thủy phan carbohydrate dé chuyén thành dạng đường đơn glucose chế œeglueosidase có tác dụng ức chế chức năng của enzyme, làm chậm sự phân ăn [2], Kiểm soá

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

‘TRUONG DAI HOC SU PHAM THANH PHO HO CHi MINH TRAN TH] HOA QUYEN

KHAO SAT ANH HUONG CUA CAC DIEU KIEN NUOICAY DEN HOAT TINH UC CHE a-GLUCOSIDASE

CUA NAM CONG SINH DIA Y Graphis sp

KHOA LUAN TOT NGHIEP

NGANH SU PHAM SINH HQC

“THÀNH PHO HO CHi MINH - 2024

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

‘TRUONG DAI HOC SU PHAM THANH PHO HO CHi MINH

‘TRAN TH] HOA QUYEN

KHAO SAT ANH HUONG CUA CAC DIEU KIEN NUOICAY DEN HOAT TINH UC CHE a -GLUCOSIDASE

CUA NAM CONG SINH DIA Y Graphis sp

KHOA LUAN TOT NGHIEP

NGANH SU PHAM SINH HQC

‘ONG DAN KHOA HQC

'TS Trần Thị Minh Định

“THÀNH PHO HO CHÍ MINH - 2024

Lời đầu tiên em xin chân thảnh cảm ơn cô giáo ~ TS Trần Thị Minh Định,

cô đã tâm huyết, tận tâm hướng dẫn, giúp đỡ em trong suốt quá trình nghiên cứu

và thực hiện đề ti Cô đã có những trao đổi và góp ý để em có thể hoàn thẳnh tốt

để tải nghiên cửu nảy

Để hoàn thành khóa luận này, m xin gửi li cảm ơn đến các Quý Thả

Khoa Sinh học, Trường Đại học Sư phạm Thành phổ Hỗ Chí Minh đã tạo cơ hội cho em được học tập, rên luyện và ích lũy kiến thức, kỹ năng để thục hiện khóa hận

Em xin cảm ơn các thấy cô Trung tâm Khoa học và Công nghệ sinh học

Trường Đại học Khoa học Tự nhiền và Khoa Hóa học Trường Đại Học Sư phạm Thành Phố Hồ Chi Minh đã hỗ rợ chúng em trong quả trình thực biện để tải Xin cảm ơn các bạn của phòng nghiên cứu Vĩ sinh, dù rất bận rộn với học tập và công việc đã nhiệt tỉnh giúp đỡ, hỗ rợ em

Cuối cùng, em xin cảm ơn gia đình, bạn bè đã luôn động viên và tạo điều kiện tốt nhất để em có thể nỗ lực hoàn thành tốt bài nghiên cứu

TP Hồ Chí Minh, ngày 02 tháng 05 năm 2024 SINH VIÊN Trần Thị Hoa Quyền

-4 Nội đụng nghiên cứu

5 Đối tượng nghiễn cứu,

6 Thời gian và địa điểm nghiền cứu,

CHUONG 1 TONG QUAN

1.1 Téng quan vé enzyme a-glucosidase

12 Tổng quan về bệnh đái tháo đường,

TL, Địa ý và hoại tính sỉnh họ của chúng

Lãi Địa y

1.3.2, Địa y thuộc chỉ Graphis

1.3.3 Hoat tinh te ch enzyme a-glucosidase ct diay 1.4 Thube de ché enzyme a-glucosidase trong đề tị đãi tháo đường 15 Ảnh hướng của môi trường nuôi cấy đến nắm cộng sinh dia y 1.6 Tình hình nghiên cứu trong và ngoài nước

CHƯƠNG 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Thigt bj vi hoa chit

3.1.1 Thiết bị

3.12, Hồn chất

3.2.Môi trường nuôi nắm

3.3 Phương pháp nghiên cứu,

->.1 Phương pháp nuôi nắm cộng inh địa y 2.3.2, Phuong phip to cao thd ethyl acetate 2.3.3, Phuong pháp khảo sắt hoạt tính ức chị enzyme «glucosidase 2.3.4 Phương pháp xử lý số liệu

2.4 Quy trình thực hiện

Chương 3, KẾT QUÁ VÀ THẢO LUẬN

3.1 Kết quả nuôi nắm

3.2 KẾt quả tạo cao

3.3 Ảnh hưởng của nguồn carbon đến hoạt tinh tre ché a-glucosidase

3.4 Ảnh hưởng của pH đến hoạt tính ức ché a-glucosidase

3.5 Ảnh hưởng của nhiệt độ đến hoạt tính ức chế -glucosidase

ĐANH MỤC CÁC CHỮ VIỆT TÁT

ABTS 2, 2-Azino-Bis-3-Ethylbenzothiazotine-6-

Sulfonic acid

NIDDM "Bệnh nhân tiêu đường không phụ thuộc insulin

IM "Bệnh nhân tiêu đường phụ thuộc insulin

ĐANH MỤC CÁC HÌNH

Hình 1.3 Địa y fruticose [7] vs vs "

Hình 2.1 Kết quả nuôi nam Graphis sp Ở các thời điểm 20 Hình 2.2 Quy trình thực hiện đề tải 2

Hình 3.2 Đỗ thị thể hiện sự tương quan giữa tỷ lệ ức chế enzyme a-glucosidase

với logarit của nồng độ cao chiết từ sinh khối nắm được nuôi ở môi trường 24°C

DANH MYC CAC BANG

Bảng 2.1 Các thiết bị sử dụng trong dé tài " sa:

Bảng 2.2 Các hóa chất được sử dụ

Bảng 23 Các môi trường nôi nắm cộng inh địa y Graphis sp Error! Bookmark not defined,

Bảng 3.L Sinh khối khô và khối lượng cao cthylaeetfe tạo thành của nắm

Bảng 32 Kết quả đo ODas của thí nghiệm khảo sát nh hưởng của nguồn

Bing 3.3 Ty Ig % te ché enzyme acglucosidase eta che miu cao chide ethyl acetate tr nh khối nắm được nuôi trên môi trường có nguồn catbon khác

Bảng 3.4, Kết quả đo ODas của

'ehiệm khảo sát ảnh hưởng của pH đến hoạt

Bang 3.5 Tỷ lệ % ức chế cnzyme d-glucosidase của các mẫu cao chiết ethyl

acetate tr sinh khối nắm được mudi trên mỗi trường có độ pH khác nhan 29

Bang 3.6 Kết quá đo OD4os của thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng của nguồn

Bảng 3.7 Tỷ lệ % te ché enzyme a-glucosidase ca cde miu cao chiét ethyl acetate ti sinh khối nắm được nuôi trên môi trường có nhiệt độ khác nhau 31

tiết insulin hoặc đề kháng với insulin hoặc cả hai, dẫn đến rồi loạn quan trọng

chuyên hoá đường, đạm, mỡ, chất khoáng [1]

Khi mắc bệnh đái tháo đường, bệnh nhân tăng lượng đường ích tụ trong máu 'Nếu lượng đường trong mẫu luôn ở mức cao sẽ lâm gia tăng các nguy cơ bệnh lí

tìm mạch, đồng thời gây tôn thương ở nhiều cơ quan bộ phận khác như thần kinh,

mắt, thận và nhiều bệnh lí nghiêm trọng khác [1]

Cée loai carbohydrate như tỉnh bột không thể được bắp thu qua đường tiêu

hoá ở dạng nguyên bản, do đó chúng bị phân giải thành glucose và hip thy nhờ

hoại động của các enzyme trong nước bọt và đường tiêu hoá, a-Glucosidase là một trong những enzyme quan trọng trong quá trình phân giải này Những enzyme œ- vai tò chính là thủy phan carbohydrate dé chuyén thành dạng đường đơn glucose chế œeglueosidase có tác dụng ức chế chức năng của enzyme, làm chậm sự phân

ăn [2], Kiểm soát bảm lượng glucose trong máu là một mục tiêu quan trọng để điều đường là lâm giảm lượng đường trong máu bằng tie ché enzyme a-glucosidase [3] Địa y là dạng cộng sinh giữa tảo và nắm, có thể sống ở nhiều nơi trên đất, đá,

thân cây và trong nhiều điều kiện môi trường khắc nghiệt, khô hạn hay giá lạnh, khảo sắt thành phần hoá học của địa y trên thể giới cho thấy nó chứa một lượng

lớn chất biến đường sơ cấp (mofeim, amino acid, polyol, carotenoid,

polysaccharide, vitamin) va thir (depside, depsidone, dibenzofuran, steroid,

terpene ) Trong đó, một số chất đặc thủ chỉ có ở địa y Nghiên cửu vỀ hoạt tỉnh sinh học của các chất từ địa y cũng cho thấy khả năng kháng khuẩn, ức chế enzyme

cplucosidase, kháng vi, kháng nắm, kháng oxy héa,khing ung th Cée công trình nghiên edu ctng da tim ra duge nim edn sinh dia y Graphis sp 06 hoại tính ức chế arglucosidase

Một số nghị

nguồn dinh đưỡng carbon ảnh hưởng quan trọng đến hoạt tính sinh học của nắm

n cứu cho thấy điều kiện nuôi cấy như nhiệt độ, pH môi trường,

công sinh địa y Nghiên cứu này nhằm mục đích tiến hành khảo sắt ảnh hưởng của

các điều kiện nuôi cấy đến hoạt tính ức chế œ-glucosidase của nấm cộng sinh địa

y Gaphis sp

2 Mục tiêu nghiên cứu

Khảo sốt ảnh hưởng của các điều kiện nuôi cấy đến hoạt tính ức chỗ a- glueosidase của nắm cộng sinh địa y Graphis sp

3 Phạm vỉ nghiên cứu

Để tải chỉ ế ảnh khảo sắt ảnh hưởng của các điều kign ngudn carbon, pH

và nhiệt độ đến hoạt tính ức chế a-glucosidase của nắm cộng sinh địa y Graphis

”

4 Nội dung nghiên cứu

~ Nuôi cấy nắm cộng sinh địa y Gmuphiy sọ

~ Tạo cao chyl acetat từ sinh khối nắm

~ Khảo sát hoạt tính ức ché enzyme a-glucosidase ca cao ethyl acetate

5, Đối tượng nghiên cứu

Loài nắm này đã được phân lập và lưu trữ ở phòng thí nghiệm Sinh hod — Vi

sinh với mã số UE-MYO8 Lodi nắm này được phân lập từ mẫu địa y thu tỉnh Trả Vĩnh vào tháng 3 năm 2023 Mẫu địa y được định danh bởi Tiên sĩ Võ Thị Phi Giao, Khoa Sinh học ~ Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên,

Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh và được lưu

Khoa hge tự nhiên, Đại học Quốc gia Thành phố Hỗ Chỉ Minh với mã số UE-L014

6 Thời gian và địa điểm nghiên cứu

Để tài được tiến hành từ tháng 10/2023 - 3/2024 tại Phỏng thí nghiệm Vĩ sinh

~ Sinh hoá, Khoa Sinh học, Trường Đại học Sư phạm Thành phổ Hỗ Chí Minh

lữ tại Trường Đại học

1.1 Téng quan vé enzyme a-glucosidase

trao đổi chất

Trong cơ thể sống (các ế bảo) luôn luôn xây ra quả

sự sống không còn tồn tại Quá trình trao đổi của

Sự trao đổi chất ngừng thị

một chất là tập hợp của rất nhiều các phản ứng hóa học phức tạp Các phản

ứng này có liên quan chặt chẽ với nhau và điều chỉnh lẫn nhau Emzymelà hợp

chất protein xúc tác cho các phản ứng hóa học đó Chúng có khả năng xúc tác

đặc hiệu các phân ứng hóa học nhất dịnh và đảm bảo cho cúc phan img xiy

ra theo một chiều hướng nhất định với tốc độ nhịp nhàng trong cơ thể sống

Enzyme có trong hầu hết các loại ế bảo của cơ thể sống Chính do những tác tác sinh học (bioeatalysators) nhim phân biệt với các chất xúc tác hóa học

esohydrolysis, xúc ác phân ứng thủy phân ign kết ø á-glyeoside ở đầu tận

củng không khử của carbohydrate giải phóng các phân tử a-D-glucose Chất

nền đặc trơng của snzyme ø-glucosidase là các đaechadde, oligosaccharide, các aryl- và akyl-a-glucopyranoside khác [42], [43] Enzyme a-glucosidase la

một trong nhiing enzyme thudec lép glycoside hydrolase Glycoside hydrolase

carbohydrate, mét trong những liên kết mạnh nhất được tìm thấy ở các

polymter tự nhiên Các enzymme này có khả năng bẻ gãy các liên kết glycoside

nhanh hơn 107 lần so với phản ứng không có enzyme xúc tác [22]}

Khi thức ăn được hấp thu vào cơ thẻ thĩ các carbohydrate trong thúc ấn được thủy phân thành những phân ử đường nhỏ hơn bởi những erzyme ở một non Tiến trình phân hóa này đồi hỏi tụy tạng phải tết rà chzym€ d-amylase

dũng để phá vỡ các phân tử catbohydrat lớn thành olisaecharid Enzyme ø- elucosidase & ming ruột non lại tiếp ục phân hóa các oiisaechaid thành các phân tử đường nhỏ hơn nữa rồi mới thẳm thấu vào mắu [21], [23] Tĩnh bột bị thủy phân dưới xúc tác của enzymme ø-amlas tạo thành cúc phân

tử đường maltose Sau đó các phân tử đường maltose tiếp tục bị thủy phân

bởi enzyme a-glueosidase tạo thành các phan tr dmg glucose lim tang him

lượng đường glueose trong máu Dưới tác động cao chiết sẽ làm ức chế sự

thủy phân tính bột thành đường malotse, đường maltose không bị thủy phân thành các phân tử đường glucose [21]

1.3 Tổng quan về bệnh đái tháo đường

Bệnh đái tháo đường là bệnh rối loạn chuyển hóa không đồng nhất, có đặc

ccủa insula, hoặc cà hai Tầng glueose mạn tính trong thời gian dải gây nên

những rối loạn chuyển hóa carbohydrate, protide, lipide, gây tốn thương ở

nhiễu cơ quan khắc nhan, đặc biệt ở tìm và mạch mắn, thân, mắt, thần kinh {19}, (20),

Trong những năm 1999, 2003 và 2006, Uy ban chuyên gia của Hội Đá tháo đường Mỹ, Hội Đi tháo đường Châu Âu phân loại như sau: DTD type I: té bảo ý sinh kháng th bị ph hy v gây thiểu hụt insulin tuyệt đổi, được chia làm hai thể là do cơ chế tự miễn và không tự miễn, không phụ

thuộc kháng thể kháng bạch cầu ở người (Human Leucocyst Antigen: HLA)

(20)

DTD type 2: đặc trưng bởi kháng insulin, gidm gt insulin, ting sản xuất

glucose tir gan va bat thường chuyển hóa mỡ Béo phì đặc biệt mỡ nội lạng

hoặc béo phì trung tâm là phổ biến nhất trong ĐTĐ type 2 [19], [20]

Các loại đái thio đường khác có thể do thiểu hụt chức năng tế bảo đ truyền, thiểu họt hoạt động insulin do di truyền, cúc bệnh tuyỂn tụy ngoại tiết, các

bệnh nội tết như hội chứng đa nộ tiết tr mi, Cushing, uf bao tét glucagon tủy thượng thân, cường giáp, Ế bảo tiế somatin, u vỏ thượng thận, BT

do thuốc hoặc hỏa chất, do nhiễm trừng, hoặc các type ĐT do trung gian tự miễn như hội chứng Sft-Man, Down, Klinerfelter và Tuer [19], [20)}

DTD thai nghén là ĐTĐ phát hiện lần đầu lúc mang thai và phần lớn

sau khi sinh glucose mắu trở về bình thường, một số ít in triển thành ĐTĐ

type 2 ĐTP thai kỳ có xu hướng gặp ở phụ nữ thửa cân, béo phì, nhiều tuổi hay phụ nữ sinh đẻ nhiễu lần [19], [20],

DTD thé LADA (Latent Autoimmune Diabetes in Adulthood) là DTD

tự miễn nhưng xảy ra ở người lớn [20],

Gần đây, người ta khám phá ra não có sản xuất insulin, Thiểu insulin và

glucose trong máu cao là những yếu tổ chính ánh hưởng xấu đến chức năng trạng này được để cập như DTD type 3 [19], [20],

“Theo Liên đoàn Đái tháo đường Thể giới (IDF), nim 2015 toàn thể giới có 415

:79) bị bệnh ĐT, tương đương cứ 11 người cé 1

triệu người (trong độ tuổi

người bị DTD, đến năm 2040 con số này sẽ là 642 triệu, tương đương cứ 10 người cổ Ì người bị ĐTĐ Bên cạnh đó, cùng với việc tăng sử dụng thực phẩm

không thích hợp, it hoặc không boạt động thẻ lực ở trẻ em, bệnh DTĐ túyp 2

đang có xu hưởng tăng ở cả trẻ em, trở thành vấn đề sức khỏe cộng đồng

hàng đầu gây bệnh tìm mach, mi Iba, suy thận, và cất cụt chỉ Nhưng một điều đăng khả quan, có tối 7

chậm xuất hiện bệnh bằng tuân thủ lỗi sống lành mạnh, dinh dưỡng hợp lỷ và

tăng cường luyện tập thể lực [19], [20]

trường hợp ĐTĐ tuýp 2 có thể dự phòng hoặc làm

Ở Việt Nam, năm 1990 của thế kỷ trước, tỷ lệ bệnh ĐTD chỉ là 1,1% (ở thành

2.25% (ở thành phổ Hồ Chí Minh), 0.96%% (thành phố Huổ), nghiên cứu năm 2012 của Bệnh viện Nội tiết trung ương cho thấy: tỷ lệ hiện

chưa duge chin đoán trong cộng đồng là 63,6% Tỷ lệ rối loạn dung nap 2003) Theo két qué dita tra STEPwise vé cde yéu ổ nguy cơ của bệnh không

lệ ĐTĐ toàn quốc là 4,1%, tiền ĐTP là 3,6% [19]

1.3 Địa y và hoạt tính sinh học của chúng

13.1 Diay

Địa y là kết guả của sự cộng sinh giữa nắm và to Tảo cung cấp chất dinh dường cho nắm nhờ quả trình quang hợp, ngược lại nắm cung cấp nước và muối đất, đó, thân cây lá cây trong điều kiện môi trường từ vũng khô hạn đến vùng giá

lạnh Tuy nhiên, địa y cũng rất nhạy cảm với những thay đổi của môi trường, đặc

biệt là sự ô nhiễm Do vậy địa y được xem như chỉ thị của sự thay đổi môi trường, BỊ:

Địa y không thuộc về giới thực vật, vì nó không có cấu trúc tế bảo đặc trưng

của thực vật và cũng không có cầu trúc mô, cơ quan của thực vật 5] Địa y cũng

không phải là loài nắm, vì bên cạnh các tế bảo nắm, địa y còn có các tế bảo tảo lục

hoặc vĩ khuẩn lam chứa chất diệ lục Tuy nhiên, do diay luôn phải có nắm trong thành phần của mình nên ta có thể xếp địa y vào giới nắm [S]

“Theo nghiên cửu của Đại học Harvard địa y không ảnh hưởng đến cây trồng khi bảm trên chúng Dịa y gắn kết với cây nhờ vào sự hợp tác giữa nắm và to,

của các nhà bảo tổn sinh học, Nhiễu nước đã hạn chế việc khai thắc địa y và xây dạng khu bảo tổn để bảo vệ loài đặc biệt này

Các cuộc khảo sát, nghiên cửu chuyên sâu đã chứng minh chiết xuất dung môi thô và các hợp chất phân lập từ địa y có hiệu quả rong việc ức chế một số

enzyme nhu amylase, lipase, lipoxygenase, aromatase, cyclooxygenase, trypsin, B-

glueoronidase, prolyl endpeptidase, monoamine oxidase, urease, tyrosinase,

xanthine oxidase, thioredoxin reductase, glucosidase, topoisomerase, elastase tuy,

Phosphodicstrase, telomerase vi acctycholinesterase Cie cht ehuyén ha cia

địa y như usnie acid và các dẫn xuất của nó, lobaric acid, physodic acid, ramalin,

protolichestrnie aig, saline acid, aranorn, everic acid, zeorin,dffactc acd, psoromic acid, methyl frorcinolcarboxylate, methylorelinate vi anziic acid da nhân t iệu đẫy hứa hẹn về khả năng ức chế hoạt động của một sốenzyrme có liên

quan đến một số bệnh hoặc một số rồi loạn trong cơ thể Các loài địa y có thé được

muôi cấy in vimo trong môi trường tỗi ưu để phân lập các chắt ức chế enzyme ở

quy mô lớn hơn và phát triển các nguồn trị liệu về các bệnh liên quan đến các

mỹ phẩm, xà phông, nước hoa

Hiện có 3 loại địa y chính: Địa y foliose (dang phi), dia y Euicose (dạng

sợi), địa y crustose (dang kham) [4]

Hinh 1.2 Địa y foliose (7)

Bie y fruticose ¢6 thé o6 dang diy chuyển, te, cây bụi, Nhiễu loại dia y frueose cỏ các nhánh trò có lõi ở giữa và một số khác cổ nhánh rồng ở giữa Các loại khác có nhánh phẳng mọc lộn xộn với nhau [4])

Hình 1.3 Di lja y fruticose [7] Địa y crustose chỉ có một lớp vỏ bên ngoài Chúng tạo ra một lớp vỏ trên các

"bể mặt như đá, đất, ô tô hoặc mái nhà Địa y cruatose có nhiều màu sắc như vàng, cam, đỏ, xám và xanh lục Chúng được dính vào giá thể [4]

Hinh 1.4 Dia y erustose [8] Địa y có tốc độ tăng trường rất châm, Địa y dang vay ting 0,1 mm dén 10mm mỗi năm, trong khí địa y dạng lã tăng 2 đến 4 cm mỗi năm Địa y để bị tổn hại bởi ô nhiễm không khí và thường phải đi xa các thành phổ để tìm thấy [4]

ja y thuộc chỉ Graphis

‘ving nhigt di Hiện nay, ho Graphidaceae được xem là họ địa y lớn thir hai của

ngành Ascomycota với hơn 2500 loài đã được báo cáo và dự đoán có gin 5000 loài tên thể giới [9]

Hinh 1.5 Bia y thuge chi Graphis [10] Chi Graphis 1a mot wong những chỉ địa y lớn nhất với hon 370 loai da được

"báo cáo trên thể giới, trong đó mỗi năm có khoảng hơn 10 loài được phát hiện và

"báo cáo mỗi năm Một số loi có thể kể đến như Graphis japonica, G seripta, G proserpens, G epiphloea, G renschiana, {11}

sinh học địa y Graphis sp

Chất ức chế cazyme là những chất lâm giảm tốc độ phân ứng do cnzyme xii te, Hoạt động eda mt enzyme 6 thé giết chết một mằm bệnh hoặc điều enzyme, chúng cũng được sử dụng như là chất diệt cỏ và thuốc trừ sâu Không

phải tắt cả các phân tử liên kết với enzyme đều là chất ức ché enzyme, những

chất hoạt ha liên kết với các enzyme va lim ting hoạt tính enzyme ma

chúng liên kết Sự liên kết của một chất ức chế có thể ngăn chặn một cơ chất

di vio trang tim hoạt động của enzyme và gây trở ngại cho các phản ứng xúc không thuận nghịch [24]

“Chất ức chế không thuận nghịch thường phản ứng với enzyme va thay đỗi nó về mặt hóa học, Những chất ức chế đó làm thay đổi dự lượng các acid

thuận nghịch liên kết không đồng hóa trị và theo những kiểu khác nhau tủy

thuộc vào lên kết chất ức chế-enzymme, phúc enzyme-cơ chất hoặc cả hai CChấtứe chế thuận nghịch liên kết với enzyme bằng các trơng tác không

đồng hóa trị chẳng hạn như liên kết hydrogen, tương tác kị nước và liên kết

on Nhiễu liên kết yêu giữa các chất ức ch và trung tâm hoạt tỉnh mạnh m

và đặc biệt Ngược lại, đối với các cơ chất và chất ức chế không thuận nghịch,

các chất ức chế thuận nghịch thường không trải qua phán ứng hóa học khi

liên kết với enzyme và có thể dễ đảng loại bỏ bằng cách pha loãng hoặc thẳm

tách [24],

CCó 4 kiểu của ức chế enzyme thuận nghịch, chúng được phân chỉa dựa

theo tác động của sự thay đổi nồng độ chất nền của enzyme trên chắt ức chế:

~ Ứe chế cạnh tranh (eompetiive inhibidon): cơ chất và chất ức chế không liên kết với enzyme cũng một lúc Điều này có th là do chất ức chế tranh giữa cơ chất và chất ức chế cạnh tranh vào trung tâm hoạt động của

enzyme Diy I log ức ch có thể được khắc phục bằng nổng độ đủ cao của

cơ chất bởi vì những chất ức ch cạnh tranh thường có cầu trúc tương tự như cắu trúc của cơ chất thật

~ Ứe chế kháng cạnh tranh (uncompetitive inhibition): chat tre ché chỉ

kết hợp với phúc enzymme-cơ chất mà không kết hợp với enzyme tự do Đây

là một đạng ức chế mà các liên kết của chất ức chế với enzyme làm giảm

n kết của ehzyme-cơ chất

hoạt tính của nó nhưng không ảnh hưởng đến

Kết quả là mức độ của sự ức chế chỉ phụ thuộc vào nồng độ của chất ức chế,

~ Ứe chế không cank tranh (noncompetitive inhibition): chit te ché két hợp với enzyme ở vị tí khác với vị trí kết hợp của cơ chất tạo thành phúc

enzyme-cơ chất-chất ức chế không bị chuyển hóa tiếp Như vậy, cnzyme có

thể đồng thời kết hợp cả chất ức chế và cơ chất Cơ chất và chất ức chế không dụng kim him bằng cách tăng nồng 46 ca chit

- Ức chế hỗn tạp (mixed inhibition): là chất ức chế không những liên kết

cả phức hợp enzyme-cơ chất tạo thành

với enzyme tự đo mà côn liên kết vớ

phúc hợp enzyme-chất ức chắ-cơ chất nên không tạo được sản phẩm Hiện

tượng ức chế chỉ phụ thuộc vào nồng độ chất ức chế Tốc độ ức chế cực đại

đo được khi không có chất ức chế là cao hơn khi có mặt chất ức chế [24]

Chất ức chế ø-glucosidase hiện có bao gồm acarbose, voglibose và

mũglitol Acarbose là một pseudotetrasaccharide chứa nitø Voglibose là một dẫn xuất valiolamine và miglieol là một dẫn xuất đeoxynojitimycin Cả acatbose và voglibose đều có nguồn gốc ví sinh vit, trong khi miglitol có nguồn gốc tổng hợp Acarbose và voglibose hoạt động chủ yếu ở ruột vì cả hai đều không được bắp thu đáng kể (aearbose < 2%; voglibose, khoăng 3% dén 5%) [25] Hoại tính ức chế enzyme acglucosidase có thể giúp điều trị bệnh tiểu đường bằng

chuyển hoá địa y; bao gồm các

cách sử dụng các hợp chất có nguồn gốc là cÍ

tri cia methylorsellinate (2,4-dihydroxy-6-methylbenzoate), dihydroxy-3,6-dimethylbenzoate) và Zeorin

ứng dụng di

methyl-J-orinolcatboxylate (2/

(6,22-hopanediol) [12]

#lucosidase mạnh và có trong các phương pháp điều trị bệnh tiểu đường, béo phì,

"Đó là methylorsellinate hoặc 2,4-dihydroxy-6-methylbenzoate được phân lập từ

Vain methyl-f-orinolcarboxylate hoặc 2,4-dihydroxy-3,6-dimethylbenzoate được phan lip tit Cladonia sp thude Stereocaulan alpinum Laur và zeorin hoặc 6,22- hopanediol phân lập từ Cladonia sp [12]

1.4 Thuốc ức ché enzyme a-glucosidase trong diéu tr] dai tháo đường

Mục đích khi điều trị bằng thuốc ức chế alpha-glucosidase ở bệnh nhân tiêu đường

là giảm lượng đường huyết sau bữa ăn và giảm mức độ chênh lệch giữa mức

glucose tố đa và ốithiễu sau bữa ăn Việc giảm đường huyết sau bữa ăn sẽ cổ lợi

ở những bệnh nhân mắc bệnh tiêu đường không phụ thuộc insulin (NIDDM) và

din đến giảm Llemogldbin (HbA) Việc giảm dao động giữa mức glueose su bữa

ăn sẽ có tác dụng ở bệnh nhân tiểu đường phụ thuộc insulin

Thuốc ức chế alpha-glueosidase làm giảm nồng độ insulin trong huyết tương ở

Lượng carbohydrate thoát vào đại tràng phụ thuộc vào hảm lượng carbohydrate

trong chế độ ăn, iễu lượng alpha-ghucosidase Thuốc ức chế glucosidase được sử bắt đầu với liễu rắt thắp và tăng dẫn từ từ [5]

Việc sử dụng thực tế các chất ức chế alpha-glucosidase trong điều tri bệnh tiễu

đường đựa trên kiến thức về cơ chế tác dụng, hiệu quả của chúng trong việc cải thiện kiểm soát đường huyết và các tác dụng phụ của chúng Bởi vì tác dụng mạnh mẽ nhất của các thuốc này là tăng glucose huyết tương sau

bữa ăn, nên chúng được coi là phương pháp điều trị đầu tiên cho những người mắc

bệnh tiểu đường, lệ những người có tỉnh trạng tăng đường buyết sau bữa ăn cao hơn đáng kể so với tăng đường huyết lúc đói [26]

1.5 - Ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy đến nắm cộng sinh địa y

Sự cỏ mặt của sắt, glucose, magi trong mỗi trưởng tăng trưởng là điều cần thiết để phân lập thành công các loại nắm cộng sinh địa y [13]

Vi

xử lí vật liệu trước khi phân lập nấm có thê ảnh hưởng đảng kê đến kết

“quả Ví dụ, việc xữ lí sau thụ hoạch không phù hợp có thể ạo ra các loi nắm khác

ban đầu hoặc các phương pháp khử trùng bề mặt không đảm bảo có thể tạo điều

kiện cho nắm bám lỏng lẻo trên bề mặt [13]

Có ít nghiên cứu cho đến thời điểm hiện ại so sinh thành phần môi trường ảnh hưởng đến sự phát triển của nắm cộng sinh địa y trong nuôi cấy [I3]

Nắm công sinh địa y bị ảnh hưởng bởi môi trường có các hợp chất vô cơ và hữu cơ và giầu các chất dính dưỡng khác nhau, chẳng hạn như đường, hợp chất

kim loại, axit amin và vitamin [ H3]

Sir mit cia ethylendiamintetraacetic acid (EDTA) va potassium hydroxide

trong môi trường làm giảm đáng kế khả năng phân lập thành công nắm cộng sinh

địa y Mặt khác, các hợp chất kẽm và manganese cũng rất quan trọng đổi với sự

phát triển của chúng [13]

1.6 Tình hình nghiên cứu trong và ngoài nước

“Trên Thể giới có nhiều nghiên cứu điều tị bệnh tiêu đường từ nguồn gốc thảo dược

như: nghiên cứu của Hminh sieh et al cho thấy cao chiết nước từ edy Flemingia

“macmuplpll cỗ khả năng ức ché enzyme «ghicosidase and aldose reductase Vi giá trị ICS0 lần lượt là 153,92 + 0,20 pg/mL and 79,36 + 3,20 jigimL [27] : cây thuốc Leptadenia hastata (Pers.) decne & Châu Phí có khả năng ức chế hoạt động

cia enzyme a-glicosidase Hin hagt li 69,81% and 37,02% đối với dịch tích từ

methanol và nước [28]; cao chiết cthanol từ lá Orthosiphon stamineus có khả năng

tic ché enzyme a-amylase vi ø-glueosidase với giá tị ICS0 lần lượt là 36,70 mgml

và 4.63 mg/ml [29], Cao chiết từ thân của cây Acacia nilotica có khả năng ức chế:

glucosidase and aldose reductase véi gid tri 1C50 lần lượt là § ngĩmi, và 7⁄5

g/mL [30]; cao chiết methanol từ lá của cây Psiduøm guajava cho thấy có kha

là 96,3% và

ning ite ché enzyme a-amylase vt a glucosidase vi kha ning ie 9.4% [31]; lá cây Pieralina nữida (StapD) được trích bằng aecton có khả năng ức 3,0 mgfmL lá cây Morinda lucida Benth (Nigeria), dich trích nước cổ khả nãng

ức chế enzyme ø- amylase vả ø-glucosidase với giá trị IC50 tương ứng là 2,3

mgimlL và 2,0 mgimL [32]: dịch trích cthanol từ tri 7erminaliz capprapa L cô

khả năng ức chế hoạt động của enzyme ø-glucosidase với giá trị ICS0 là 3,02 ppm

{33]: địch tích của lá cây thuốc lã có khả năng ức chế enzyme ø-amylase và ø=

từ vỏ của trái chôm chôm có khả năng ức chế hoạt động của hai enzyme a-amylase

và a-glueosidase với ức chế là 7.3% và 96,66% [32]; Cao chiết từlá măng cầu ta thấy ha hợp chất có khả năng chống được viêm loễt ở quả măng cầu ta là 5 - 67-

dimetoxy-

1,3-diol va (IR, 38) -6,7- dimetoxy-2-methyl-1,2,

diol [36]; cay mướp đẳng được sử dụng không chỉ như một loại rau mã côn được methyl-l

Deguchi Y và cv đánh giá khả năng kiểm soát glueos máu sau ăn trên

khi ăn một bữa ăn cho thấy mức đường máu sau ăn 30, 60, 120 phút giảm hơn so

với những người tham gia chỉ uống nước sau khi ăn một bữa ăn [4l] Khảo sắt thành phần hóa học vả hoạt tính ức chế enzyme alpha glucosidase của loài địa y Parmotrema tinctorum của tác giả Đồng Phan Sỹ Nguyên đã xác cthyl aeetale ở địa y Parmotrema tinctorum [14],

Sử dụng các phương pháp chiết xuất và sắc kỹ đã cô lập được từ cao ethyl

acetate của cây địa y Parmotrema tỉnctorwm năm hợp chất Bằng các phương pháp

phổ nghiệm và so sinh với ải iệu tham khảo, hợp chất 1 là methyorselimite, hợp chất 2 được xác định là hợp chit mới, hợp chất 3 là Tinctorin B, hợp chất 4 được xic dinh la C42-spiroterpenoid mei, § gần giống với hợp chất 4, ngoại trừ việc thay thé methyl keton bing methyl este

Ade

“Thử hoạt tính ức chế enzyme a-glucosidase trên cao chiết và một số hợp chất được phân lập từ cao cty] aeette của loài dia y Parmorrema tinctorum

‘Vé hoat tinh sinh hoe, hai hợp chat (2), (3) thể hiện hoạt tính ức ché enzyme

‘eglucosidase higu quả và mạnh hơn chất đôi chứng dương acarbose (168,0 nM)

với giả trị ICS0 lần lượt là 74,5 và 98,2 uM

‘Nam 2020, Tatipamula và cộng sự bảo cáo một nghiền cứu cao chit thy! aeetate của địa y Graplis qjarckeriï cho thẫy khả năng làm tan cục máu đông, kháng viêm ở mức độ vừa phải [15]

"Nghiên cứu của V B Tatimapula vio nim 2018 cho thdy cao ethyl acetate

từ địa y Graphis ajarekarii có hoạt ính kháng oxy hoá và bệnh tiểu đường Giá trị

IC 50 của ~ Diphenyl — 1 - picrylhydrazyl (DPPH)

Nghien eitu duge chiét xudt tho eta dia y Grathis tetralcularis thé hign hot

tính kháng khuẩn, với gi tị nông độ ức chế tối thiêu (MIC) trong khoảng 100 —

acremonidin E (1) va gratisin A (2) va B (3) Acremonidin E (1) thể hiện hoạt tính

kháng lao với giá trị MIC Ia $0 pgimL va thé hign dée ính tế bảo đối với các đồng

gravisins A (2) và B (3) không có hoạt tính trong các thử nghiệm này [17]

CHUONG 2 VAT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Thiết bị và hóa chất

Thermo Genesys 20

Scilogex (Mỹ)

3⁄2 Môi trường nuôi nắm

Để tài sử dụng môi trường nuôi nắm là môi trường sabouraud được pha theo

sông thức với 1000 mĩ nước cắt đàng 10 g peptone, 40 ¢ D-glucose va 15 g agar Đối với môi trường sabouraud thay đổi nguồn carbon, 40 g D-glucose sẽ được

thay lần lượt bằng 40 g manitol hoặc 40 g sorbitol hose 40 g sucrosel; đổi với môi

trường sabouroad thay đổi điều kiện pH, môi trường sibourand được diều chỉnh

pH ở pH5, pHó, pHT, đối với môi trường sabouroad thay đối điều kiện nhiệt độ,

nắm cộng inh địay Gruphis sp được môi trong các điều kiện nhiệt độ I8"C, 24"

và 3ứC,