Khảo sát Ảnh hưởng của vitamin c trong dịch Ép thịt quả sơ ri chua lên một số chỉ tiêu sinh lí chuột nhắt trắng Đực mus musculus var albino bị nhiễm Độc chì

thận, lách cổ định tong [ormaldehyde 109:...28 "Đổ thị thể hiện độ tăng trọng của chuột tai ede nghiệm thức thử nghiệm Đồ thị thể hiện số lượng hồng cầu của chuột tại các nghiệm thức thử

BQ GIAO DUC VA DAO TAO TRUONG DAI HQC SU PHAM THANH PHO HO CHi MINH

Lữ Hồng Vân

KHAO SAT ANH HUONG CUA VITAMIN C

TRONG DICH EP THIT QUA SO RI CHUA LEN MOT SO CHi TIEU SINH Li

CHUOT NHAT TRANG DUC

(Mus musculus var albino) B] NHIEM BOC CHI

LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC

Thành phố Hồ Chí Minh - 2024

BQ GIAO DUC VA DAO TAO

TRUONG DAI HQC SU PHAM THANH PHO HO CHi MINH

Lữ Hồng Vân

KHẢO SÁT ẢNH HƯỚNG CỦA VITAMIN C

TRONG DICH EP THIT QUA SƠ RI CHUA

LEN MOT SO CHi TIEU SINH Li

CHUOQT NHAT TRANG DUC (Mus musculus var albino) BY NHIEM DOC CHI Chuyén nganh : Sinh thai hoc

Mã số : 8420120

LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS NGUYÊN THỊ THƯƠNG HUYÈN

Thành phố Hồ Chí Minh - 2024

Tôi xin cam đoan luận văn này là công trình nghiên cửu của tôi dưới sự hướng

dan khoa học của PGS TS Nguyễn Thị Thương Huyền Luân văn thạc sĩ với đề tài tiêu sinh lí chuột nhất trắng đực (Mus musculus var albino) bj nhiém độc chỉ” là

một phần trong công trình nghiên cứu của đề tài cơ sở mã số CS.2022.19.14TD

do PGS TS Nguyễn Thị Thương Huyền chú nhiệm

Kết quả trình bày trong luận văn là trung thực và chưa được các tác giả khác công bồ trong bắt kì công trình nào

Các trích dẫn về kết quả nghiên cửu của những tác giả khác trong luận văn đều

có nguận gốc rõ ràng theo đúng quạ' định

TP Hỗ Chí Minh, ngày f1 tháng 03 năm 2024 HỌC VIÊN

Lữ Hồng Vân

Tôi xin chân thành cảm ơn sự hỗ trợ kinh phí từ để tài cấp cơ sở mã sổ

CS.2022.19.14TĐ do PGS TS Nguyễn Thị Thương Huyễn chủ nhiệm Tôi xin gửi lời cảm ơn đến Cé PGS TS Nguyễn Thị Thương HH

nhiễu ý kiển quý bảu, hướng dẫn tôi trong quá trình thực hiện luận văn

Tâi xin cảm ơn Tập thể cán bộ của phòng thí nghiệm Giái phẫu - Sinh lí Người

& Động vật, Phòng Sau đại học, Khoa Sinh học, Trường Đại học Sư phạm Thành phổ Hà Chỉ Minh đã tạo điều kiện cho tôi thực hiện luân văn

cảm ơn đến em Lâm Lê Thu Quý - học viên cao học, Lý Viễn

en đã cho tôi Tôi xin gửi lò

Triệu Quang, Nguyễn Thị Thuỳ Dương, Hà Văn Phước, Nguyễn Kim My - sinh viên K45 và K46 đã hỗ trợ tôi trong quá trình thực hiện các thí nghiệm

Tôi xin trân trọng cảm ơn các Phả giáo sư, Tiển xĩ trong Hội đồng đánh giá đã

đọc và góp ý cho luận văn của tôi

TP Hồ Chí Minh, ngày 11 thắng 03 năm 2024 HỌC VIÊN

Lữ Hồng Vân

1.1.2 Nhiễm độc và ảnh hướng của chỉ

1.2, Tổng quan về chuột nhất trắng (Mus musculus var albino) 12.1 Vị trí phân loại

1.2.2 Đặc điểm hình thái và sinh lí

1.2.3 Đặc điểm sinh lí huyết học

1.2.4 Đặc điểm các chỉ số sinh hoá máu chuột

1.2.5 Đặc điểm cấu trúc mô gan, thận, lách chuội

1.3 Sơ lược về quả sơ rỉ

Chương 2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu

2.1.1 Thời gian nghiên cứu

2.1.2 Địa điểm nghiên cứu

2.2 Vật liệu nghiên cứu

2.2.2 Cơ sở chọn nông độ dịch ép sơ rỉ

2.4.3 Phương pháp đánh giá độ tăng trọng của chuột 2.4.3 Phương pháp thu dịch ép thịt quả sơ rỉ chua

3.4.4 Phương pháp cho chuột uống chì, vitamin C và địch ép thịt quả sơ rỉ 23 3.4.5 Phương pháp thu máu chuột để khảo sát các chỉ số huyết học 3.4.6 Phương pháp xác định số lượng tế bào máu chuột 2.4.7 Phương pháp xác định chỉ số hemoglobin

Chương 3 KẾT QUÁ VÀ BÀN LUẬN

3.1 Tác dụng của địch ép quả sơ rỉ chua lên độ tăng trọng ở chuột nhiễm chỉ 29 3.2 Tác dụng của kêu ép thịt in sơ rỉ chua lên một số chỉ số Huệ học ở chuột

3.2.1 Tác động đối

3.3.2, Tác động đối với bạch cầu chuột

3.2.3 Tác động đổi với tiểu cầu và thời gian đông máu 3.2.4, Tác động đối với chi sé hemoglobin va hematocrit

3.3, Tác dụng của dịch ép thịt quả sơ rỉ chua lên một số cl

3.3.6, §GPT (ALT), 2c can oe 46

3.4 Tác dụng của dịch ép thịt quả sơ rỉ chua lên một số nội quan ở chuột nh nhiễm chi

3.4.1 Ảnh hưởng lên gan

Phụ lục 2 - Chỉ số sinh lí máu chuột

Phụ lục 3 - Chỉ số sinh hoá máu chuột

Phụ lục 4 - Cấu trúc một số nội quan

Phụ lục 5 - Kết quả phân tích hàm lượng vitamin C trong dịch ép thịt quả sơ rỉ Phụ lục 6 - Chấp thuận của hội đồng đạo đức trong nghiên cứu trên động vật PL23

Bang 1.1 Thành phần các chất có trong 100 g thịt quá sơ rỉ

Bảng 2.1 Dụng cụ, thiết bị nuôi chuột

Bảng 2.2 Dụng cụ, thiết bị lấy máu chuột và làm tiêu bản máu Bảng 2.3 Hoá chất sử dụng

Bang 3.1 Tác động của chì và khả năng kháng độc tính chì của dich ép sơ rỉ đối với các tiêu chí được khảo sát sau 8 tuần

Qué so ri chua gidng Brazil mua tai Gd Cong, Tién Giang

Sơ đồ bố trí thí nghiệm tổng thể của nghiên cứu

Hình minh hoạ đo kich thước hỗng cầu bằng phần mềm S-EY]

Hình minh hoạ mẫu gan thận, lách cổ định trong formaldehyde 10% 28

nghiệm qua các tuần nuôi 3

Đổ thị thể hiện số lượng bạch cầu của chuột tại các nghiệm thức thử

nghiệm qua các tuần nuôi e-csse« waa

Đề thị thể hiện số lượng tiếu cầu của chuột tại các nghiệm thức thir

nghiệm qua các tuẫn nuôi

Đỗ thị thể hiện thời gian đông máu của chuột tại các nghiệm thức thử

Đỗ thị thể hiện hàm lượng hemoglobin của chuột tại các nghiệm thức

Đồ thị thể hiện chi sé hematocrit cua chuột tại các nghiệm thức thir nghiệm qua các tuần nuôi

Biểu đồ thể hiện giá trị bilirubin T? của chuột tại các nghiệm thức thí nghiệm qua các tuần nuôi

Biểu đỗ thẻ hiện giá trị bilirubin D? của chuột tại c: nghiệm thức thí

nghiệm qua các tuần nuôi

Biểu đỗ thẻ hiện giá trị lirubin I của chuột tại các nghiệm thức thí nghiệm qua các tuần nuôi

qua các tuần nuôi 45

Biểu đồ thể hiện chỉ số AL.T của chuột tại các nghiệm thức thí nghiệm

.46 Biểu đồ thể hiện giá trị creatinin/Serum của chuột tại các nghiệm thức nghiệm qua các tuần nuôi

thử nghiệm qua các tuần nuôi Cấu trúc mô gan chuột ở các nghiệm thức sau 4 tuần thí nghiệm Cấu trúc mô gan chuột ở các nghiệm thức sau 8 tuin thi nghiệm S3

Cấu trúc mô thận chuột ở các nghiệm thức sau 4 tuần thí nghiệm 56 Cấu trúc mô lách chuột ở các nghiệm thức sau 4 tuần thí nghiệm 60

Cấu trúc mô lách chuột ở các nghiệm thức sau 8 tuần thí nghiệm 61

1 Lí đo chọn đề tài

Trong thời đại ngày nay, vẫn để ö nhiễm mỗi trường, đặc biệt là sự ô nhiễm bởi

các kim loại nặng tử chất thải công nghiệp, đã trở thành một thách thức ngày càng

trằm trọng [1] Vấn đề này không chí là cấp bách mà còn đe doa nghiêm trọng đến

sức khoẻ con người và gây ảnh hưởng tiêu cực đến hệ sinh thái Trong số các kim

động công nghiệp [2|

Chỉ có thể xâm nhập vào môi trưởng từ nhiễu nguồn khác nhau, gây ảnh hưởng đáng kế đến sức khoẻ cúa cả con người và động vật Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng Đổi với con người, chì gây tôn thương hệ thông thẳn kinh, giám tuổi thọ hồng cẩu,

đến thiểu máu; là

giải trừ chúng qua nước tiểu là nguyên nhân dẫn đến bệnh gout;

mạch và tăng huyết áp [2] Nó cũng có thể ánh hưởng đến các cơ quan quan trọng tốn thương hệ thông thần kinh, giảm khá năng sinh sản và phát triển, đặc biệt là làm

giảm tỉ lệ sống của con non [3] [4]

Để giải quyết vẫn để ô nhiễm chì nghiên cứu về chì và các hợp chất tự nhiên trở nên càng quan trọng Trong số các hợp chất này, vitamin C đang thu bút sự quan vitamin € côn đồng vai trỏ quan trọng trong việc kháng độc tính của kim loại nặng bằng cách giảm hắp thụ chúng vảo cơ thể và thậm chí giúp đào thải chúng ra khỏi cơ thể, như đã được chứng minh trong các nghiên cứu

“Trong bối cảnh này, việc khám phá tiểm năng của vitamin C từ nguồn trái cây

tự nhiên trở nên hết sức quan trọng Trái cây như sơ rỉ, cam ôi, chanh, là những nguồn vitamin dỗi đảo, trong đó sơ rỉ nổi bat voi ham lượng vitamin C cao nhất, tới

1677 mg/100 g thịt quả [5] Khả năng trồng cây sơ rí ở Việt Nam, đặc biệt là loại sơ

ri chua giống Brazil, đễ đàng và có thể cho trái quanh năm, tạo điều kiện thuận lợi

phổ biến và tiện lợi trong việc bảo vệ sức khoẻ khỏi tác động tiêu cực của kim loại

nặng Sự ưa chuộng vitamin C tử trái cây tự nhiên không chỉ hỗ trợ sức khoẻ con

chúng ta có thể chấp nhận và tận dụng những phương pháp tự nhiên để báo vệ môi

trường sống của chúng ta

Nghiên cứu về tác động của vitamin C từ quả sơ rỉ chua giống Brazil đối với chi

này không chỉ quan trọng với việc bảo vệ sức khoẻ con người mà còn hỗ trợ duy trì nhiên cũng đồng thời thúc đấy sự phát triển bền vững và sự cân nhắc đổi với môi

trường

'Với những lí do trên, dé tai “Khảo sát ảnh hưởng của vitamin C trong dịch ép thịt quả sơ rỉ chua lên một số chỉ tiêu sinh lí chuột nhắt tring dye (Mus musculus var albino) bị nhiễm độc chì

2, Mục tiêu nghiên cứu

Đánh giá được khả năng của vitamin C trong địch ép thịt quả sơ rỉ chua trong

được thực hiện

việc giảm độc tính chì đối với một số chí tiêu sinh lí chuột nhất trắng nhằm cung cấp

thông tin hữu ích về khả năng ing dung vitamin C tử dịch ép quá sơ rỉ trong việc bảo

vệ động vật khi chúng bị nhiễm chi

3, Đối tượng nghiên cứu

Độ tăng trọng, một số chỉ số huyết học, mô gan, thận và lách của chuột nhất tring due (Mus musculus var albino) bj nhiém độc chì

Vi in C tr dich ép thjt qua so ri

Khách thể nghiên cứu: chuột nhất trắng đực 6 tuần tuổi

4 Nội đung nghiên cứu

~ Khảo sắt ảnh hưởng của vitamin C trong dịch ép quả sơ ri chua lên độ tăng trọng của chuột bị nhiễm độc chì

~ Khảo sát ánh hưởng của vitamin C trong dịch ép thịt quả sơ rỉ chua lên chỉ số

huyết học của chuột bị nhiễm độc chỉ gồm:

+ Hàm lượng hemoglobin (Hb), hematoerit (HCT), thời gian đông máu, đường kính hồng cầu;

+ Chỉ số sinh hoá máu

~ Khảo sát ánh hưởng của vitamin C trong dịch ép thịt quả sơ rỉ chua lên cấu trúc mô gan, thận, lách của chuột bị nhiễm độc chỉ

5 Phạm vi nghiên cứu

- Khảo sát 03 nồng độ (20, 30 và 40 mg/kg thé trọng) dịch ép quả sơ rỉ chua giống Brazil mua tại huyện Gò Công, tính Tiền Giang và 01 nồng độ chì (70 mg/kg thể trọng); 01 nồng độ vitamin C thương mại (30 mg/kg thể trọng)

~ Chỉ tiêu sinh lí: khối lượng cơ thẻ, số lượng tế bào máu (hồng cầu, bạch cẳu tiểu âu), ¡ số i gi

transaminase (AST), Alanine aminotransferase (ALT), Bilirubin (BIL) Urea nitrogen

{BUN), Creatinine), mức độ tôn thương mô học của gan, thận, lách

- Nhuém Hematoxylyn and Eosin (H&E) các mẫu mô của gan, thận, lách (mỗi nghiệm thức chọn 3 con chuột ngẫu nhiên)

~ Thời gian nghiên cứu: 8 tuằn/lô thí nghiệm

- Thí nghiệm được chia làm 6 nhóm với 5 nghiệm thức và 1 đổi chứng với cùng một nẵng độ chi, cùng một thời gian nghiên cứu, với độ tin cậy 95%

~ Mỗi nhóm gồm 9 chuột Vậy cỡ mẫu là 9 x 6 = 54 chuột

1.1 Tông quan về chì

1.1.1 Sơ lược về chì

Chì một nguyên tổ thuộc nhóm IV trong bảng hệ thống tuần hoàn các nguyên

tố hoá học, không chỉ là một kim loại nặng mà còn là một chất độc hại có tác động

đáng kẻ đến môi trưởng sinh thái Với hai trạng thái oxy hoá bên, chính là Pb (II) và

Pb (1V) cùng với bốn đồng vị bền gồm ?"*Pb, ?%Pp, 2P và ?'*Ph, chì thường tổn tại chủ yếu dưới đạng ion PbÊ* trong các hợp chất vô cơ và hữu cơ Chỉ là kim loại nặng (M = 207,1; d = 11,3 g/cm”) màu xanh xám, nồng chảy ở nhiệt độ 327,5"C và sôi ở nhiệt độ 1744°C Chì không chỉ dễ cán mỏng, dé định hình sống hằng ngày Trong công nghiệp, chỉ được sử dụng đa dạng như dủng lảm son tác trong sản xuất polymer Tuy nhiên, sự lạc quan về ứng dụng chỉ đã dẫn đến việc nhất là chi pha trong xăng [6]

Chì không chỉ độc hại đổi với sức khoẻ con người mà còn gây ảnh hướng đặc biệt đối với động vật và môi trường nói chung Tính độc của chì có thể gây bệnh ung hoạt hằng ngày Nguyên tắc xác định nước uống và nước sinh hoạt có chửa chì hay nghiệp Điều nảy đặt ra nhu cầu đặc biệt cho những người sống gần các khu công

nghiệp phải thưởng xuyên kiểm tra nồng độ chỉ trong máu nhằm xác định mức độ

nhiễm và thực hiện các biện pháp xử lí kịp thời Tiêu chuẩn an toàn về hàm lượng chì [7] và 0.015 mg/L, theo Cơ quan bảo vệ môi trường Hoa Kì (EPA) |§] Đối với trẻ khoẻ và phòng tránh các tác động tiêu cực của chỉ [8]

"Theo thông kê thể giới có tới 360 nghề sử dụng chì và hợp chất chỉ vô cơ Qua các nghề nghiệp đó, chỉ đã xâm nhập vảo cơ thể Chì chiếm tới 70% trọng lượng ắc

hop chat của chỉ rất cao và đây là nguồn gây nhiễm độc chì nhiễu nhất ở Việt Nam [9]

Nhiễm độc chì không do nghề nghiệp: những người sống gần hoặc trong các khu vực có những cơ sở sản xuất bình điện ở nước ta có nguy cơ cao phải đối mặt với

ô nhiễm chì Ngoài ra, một nguyên nhân khác là nguồn nước như ở miễn Bắc nước cacbonat báo vệ ống nước, dẫn đến việc chỉ hoà tan trong nước Một nguồn tiềm ẩn

khác là từ đồ chơi trẻ em được sơn chất màu làm từ muối chì, như ở Mi va Úc, làm

cho trẻ em tiếp xúc, nhai nuốt các đồ chơi này có thể bị nhiễm độc chỉ Cuối cùng, khoẻ [9]

Ngộ độc chỉ dưới mức tử vong thường được biểu hiện qua các tác động trên hệ thẳn kinh, mắt chức năng thận và thiếu máu Các tác động lên hệ thần kinh và thận thường được nhận ra chỉ trong giai đoạn đã nhiễm độc chỉ rõ ràng Chỉ ngăn chặn đường dẫn truyền xung thắn kinh và kìm hãm việc giải phóng acetylcholine Bệnh

heme (C+H»$O¿N:Fe), Ở động vật có vú, tế bào ở đầu ống dẫn thận là các mô thận bị ảnh hưởng nghiêm trọng nhất |6]

Theo Bộ Y tế Việt Nam, khi trẻ em hít phải chì, ở nông độ thắp 1 mg/mỶ, chỉ trong thời gian một ngày (sau đó thôi không tiếp xúc nữa) thì chưa bị ngộ độc ngay,

mà chỉ biểu hiện rõ sau vài tuần Nếu chi di vio co thé voi néng 46 0,1 mg/m* trong

nhiều ngày liên tục thì sẽ nhiễm độc mãn tính [10]

Đối với người lớn, hấp thụ 10 mg chỉ dưới dạng kim loại một lẫn trong một ngày, gây nhiễm độc nặng sau vài tuần Nếu hấp thụ 1 mg chì hằng ngày sau nhiều

ngày, có thể gây nhiễm độc mãn tính; ở mức độ 1 000 mẹ chỉ vào cơ thể một lẫn sẽ

sây tử vong [6]

nhất chết ngay; nêu nồng độ chì là 182 mg/m), thỏ chết sau 18 giờ [6] 1.1.3 Tình trạng ô nhiễm chì hiện nay

Ô nhiễm chỉ trong không khí và trong đất là vấn đề đáng quan tâm ở nhiễu nơi, không chỉ ở các khu công nghiệp, khu dân cư mà còn ở các khu vui chơi, giải trí

Để hạn chế mức độ ô nhiễm Việt Nam đã ban hành QCVN 03-MT:2015/BTNMT — nông nghiệp, lâm nghiệp, dân sinh, công nghiệp, thương mại và dịch vụ lẫn lượt là nhằm đảm bảo an toàn cho sức khoé con người và báo vệ môi trưởng khỏi tác động tiêu cực của ô nhiễm chì

Nghiên cửu "Phân tích hiện trạng ô nhiễm chì trong đắt và khả năng đi chuyển vào nước ngầm quanh khu công nghiệp” của Nguyễn Thị Lan Bình Nguyễn Trung

Hoàng cho thấy: hàm lượng chỉ trong đất mặt khảo sát được nằm trong khoảng 23

mg/kg dén 35 mg/kg, nhỏ hơn quy chuẩn về hảm lượng chi trong dit có nguy cơ gây nhiên, đối với hảm lượng chì bị rửa thái vào nước, kết quá trung bình vượt hơn 60 lần

lượng an toản nảy cũng được quy định trong QCVN 8-2:2011/BYT vẻ giới hạn ô nhiễm kim loại nặng trong thực phẩm [12]

Theo Báo điện tử chính phủ báo động tình trạng ngộ độc chì bùng phát: theo

thống kê của Trung tâm Chỗng độc (Bệnh viện Bạch Mai) trong hai năm 2011 đến

độc kim loại chỉ, trong đó cỏ 750 trẻ có lượng chỉ trong máu ở mức 10 mg/dL Một

như lảng Đông Mai, xà Chí Đạo, huyện Văn Lâm, Hưng Yên Tại đây, hầu hết người

lớn và trẻ em trong làng được xét nghiệm đều có lượng chỉ trong máu cao hơn mức cho phép Trong khi đó, theo báo cáo của Tổng cục Môi trường (Bộ Tài nguyên và

nhiễm chì rất lớn cho con người [13]

1.2 Tông quan về chuột nhat trang (Mus musculus var albino) 1.2.1 Vị trí phân loại

Giống: Chuột Mus Linnaeus, 17&5

Loài: Chuột tring Mus musculus Linnaeus, 1785

Nồi: Chuột nhất tring Mus musculus var albino Linnaeus, 1785 1.2.2 Đặc điễm hình thái và sinh lí

Chuét nhat tring Mus musculus var albino c6 binh dang twong tự chuột nhắt

nha, dic trng boi: long ngdin mau tring, mat sang, tai vénh, dudi dai, migng thayén, cập ở ngực bụng và hai cặp ở bụng Kích thước chuột nhắt trắng khá nhó, con mới khoảng 18 - 35 g, và dài khoảng 12 - 15 cm tính từ mũi đến đuôi Mỗi ngày, chuột trống khoảng 6 - 7 mL, nước, và duy trì thân nhiệt 37°C [15], [16] Chuột hoạt động mạnh nhất vào buồi tối, thuộc loài sống vẻ đêm Nhung trong môi trường phòng thí nghiệm hoạt động đáng kể cũng được quan sát vào ban ngày Chuột thường tìm kiểm hang và làm tô, do đỏ nên cung cấp đủ chất độn cho chuồng

và các vật liệu làm tổ là quan trọng Chuột có tí lệ khối lượng cơ thẻ trên diện tích bề mặt nhỏ, điều này giúp chuột duy trì nhiệt độ cơ thể [16].

sản), chủ kì động dục kéo đài từ 3 - 5 ngày, thời gian mang thai trung bình 20 ngày, bình từ 1 - 3 năm, với mức tối đa là 4 năm Điều phân biệt giới tính giữa chuột cái và với con cải thường có kích thước ngắn hơn con đực [15], [16]

1.3.3 Đặc điểm sinh lí huyết học

Thể tích máu trung bình của chuột trưởng thành chỉ dao động từ 2 - 2,75 mL Huyết học là lĩnh vực nghiên cứu về máu và thưởng tập trung vào việc khảo sát các thành phần tế bào máu, bao gồm hồng cầu, bạch cầu và tiểu cẳu, với các đặc điểm sau [15] [I6]:

Hỗng cầu: có dạng hình đĩa hai mặt lõm, đường kính 5,5 - 6 tưn, dày 1,5 - 2,5

am số lượng trung bình 5 - 9.5*10° tế bào/mmŸ máu chiếm 30 - 49% khỗi lượng

máu trong cơ thẻ Hồng cầu chuột có tuổi thọ khoảng 30 - 52 ngày Sự gia tăng số

lượng tế bào hồng cầu cỏ liên quan đến vẫn để mắt nước của cơ thể trong khi giảm

lượng hồng câu có thể do xuất huyết, tăng tan máu hoặc giảm sản xuất tế bào máu

117]

Bạch cầu: số lượng trung bình tử 3 - 14,2*10° tế bào/uL, được phân thành các loại: bạch cẩu trung tính (0,46 - 2,20*10° tế bào/pLL), bạch cầu ưa acid (0 - 3,38*10?

11/20*10° tế bào/LL) và bạch cầu mono (0,40 - 1,43*10° tế bào/u1.) Bạch cầu chịu

trách nhiệm quan trọng trong hệ thống miễn dịch, đặc biệt là trong các phản ửng viêm

và nhiễm trùng [15] Sự giảm bạch cầu có thẻ xuất phát tử vấn đề trong tuỷ xương,

sự di chuyển vào mô, hoặc tăng quá trình phá huỷ Chuột thường tăng cường số lượng

tế bào bạch cầu để đối phó với các tình trạng viêm [17]

Tiểu cẩu: nguồn gốc từ tủy xương, có nhiều hình dạng khác nhau, đường kính

tiểu cầu dao động từ 1 - 4 um; số lượng trung bình tử 1 084 - 1 992*10Ÿ tiểu cầu/uL;

cạnh không đều, với các góc nhọn và các phẫn của xúc tu nhô ra; sau khi nhuộm tế

trình hình thành cục máu đông và cằm máu Chúng có vai trò phản ứng quan trọng

khí xảy ra tốn thương tế bào nội mô, bằng cách kích hoạt, kết tụ, và cung cấp bễ mặt

xúc tác cho các yêu tố đồng máu [15] Sự tăng vả giảm tiểu cầu chuột có thẻ xuất phát

từ các vấn đề trong tuỷ xương, gây giám sản xuất hoặc tăng sự phá huỷ Tăng hay

giảm sản xuất tiểu cầu chuột còn thường xảy ra do chắn thương đối với các tế bào tuỷ xương chịu trách nhiệm cho sản xuất tiêu cầu [I7]

Chỉ số Hemoglobin và hematocrit ở chuột có giá trị trung bình lần lượt là từ 10/9 - 16,3 g/úL, và 39 - 49%

1.3.4 Đặc điểm các chỉ số sinh hoá máu chuột

Các chỉ số sinh hoá được xét nghiệm để đo mức độ tổn thương gan thường là các men gan [16]:

- Alanine aminotransferase (ALT hoặc SGPT): chú yếu ở gan, giá trị trung bình từ 26 - 120 U/L

- Aspartate aminotransferase (AST hoặc SGOT): c6 ở gan, tim, cơ xương giá trị trung bình từ 69 - 191 U/L

~ Bilirubin (BIL): dị hoá heme hay khi tắc nghẽn mật, BIL toàn phần (T2) BIL gidn tiép (1) trung bình 0,1 - 0/7 mg/dL

Ngoài ra, còn có các chỉ số sinh hoá đo mức độ tổn thương thận [16]:

- Urea nitrogen (BUN): cha yéu ở thận, giá trị trung binb tir 19 - 34 mg/dL

~ Creatinine: chủ yếu ở thận, giá trị trung bình từ 0,5 - 0.8 mg/dL 1.2.5 Đặc điểm cấu trúc mô gan, thận, lách chuột

1.2.5.1 Cấu trúc mô gan

Hệ thống gan đóng vai trò thiết yếu trong quá trình trao đôi chất, sản xuất enzyme tiêu hoá, tổng hợp hormone, lưu trừ mặt và loại bỏ độc tố Gan có nhiều chức nang khoảng 2 g (chiếm khoáng 6% trọng lượng cơ thế) Gan của loài gặm nhằm bạo

ẳm 4 thuỷ: thuỷ phải thuỳ trung gian, thuỷ trái và thuỷ đuôi [15]

Các phần gan chuột được nhuộm bằng quy trình hematoxylin va cosin (H&E) cho thấy các tế bảo tương tự như với các loài động vật có vú khác Các vùng cửa,

chứa các thành phẫn của bộ ba gan, tức là một hoặc nhiễu nhánh nhỏ của tĩnh mach

cửa, một nhánh của động mạch gan và một ông mật nhỏ cùng với các mạch bach

huyết và một lượng rất nhỏ mô liên kết Sự hiện diện của các vùng cửa cùng với các

š cấu trúc dạng thùy của g : Các tế bảo gan được sắp xếp thành các tắm hoặc dây và được nhìn thấy tỏa ra từ các

tế bảo được ngăn cách bằng các mao mạch hình sin Các hạt nhân được nhuộm màu đôi khi bai nhân lớn hình tròn đến hơi bầu dục [19]

1.2.5.2 Cắu trúc mô thận

Ở động vật hữu nhũ đều có hai quả thận mỗi bên, thận có chức năng như một

cơ quan bải tiết chính để loại bỏ chất thải từ quá trình trao đối chất ra khỏi cơ thể 120] Thận chuột có cắu tạo gồm xoang thận và nhu mô thận (phẩn vỏ và phần tuỷ) Thận có các tiểu đơn vị là các neuphron gồm có tiểu cầu thận, ống lượn gần, quai

từ các neuphron [15]

1.2.5.3 Cấu trác mô lách

Lach có vai trò lọc máu và trung gian của các phản ứng miễn dịch Lách ở chuột

có cấu tạo một xoang rõ rệt, Lách có dãy mô liên kết từ mép ngoài vào, chia lách

tạo hiển vi của lách chiếm phần lớn là tủy đỏ (80 - 90% thể tích) và tủy trắng [15] Nhìn chung, kim loại nặng, đặc biệt là chỉ, thưởng gây tổn thương cho cấu trúc

mô gan, thận và lách cúa chuột Mức độ tổn thương phụ thuộc vào liễu lượng và thời

liệu có thể giúp giảm thiều mức độ tổn thương do độc tính của kim loại nặng là rắt

quan trọng

1.3 Sơ lược về quả sơ rỉ

Giới: Thực vat Plantae

Chỉ: Sơ rì Malpighia

Loài: Sơ ri Malpighia glabra L [23]

Cây sơ rỉ (Malpighia glabra L.) là cây có nguồn gốc từ Nam, Trung Mỹ và được

du nhập vào Việt Nam Cây sơ rỉ là một trong những loại cây ăn quả được trồng ở

Gd Cong bao gồm Gò Công Tây, Gò Công Đông và thị xã Gò Công, tỉnh Tiên Giang chua, chiếm gần 600 ha diện tích Riêng trái sơ ri chua là mặt hàng xuất khẩu có giá vitamin C [24] Hàm lượng vitamin € ở quả sơ rỉ cao (đạt tới 4.68 g/100 thịt quả)

cao hơn cam đến 20 - 80 lẫn theo [23]: thậm chí có thể đạt tới 1677 mẹ/100 g thịt

quả ngoài ra còn chứa nhiễu giá trị đỉnh dưỡng khác [5] Bên cạnh đó, quả sơ rỉ tươi uống chế biến tử quả sơ ri được dùng trị viêm họng, kiết lj tiêu chảy và rối loạn chức [25] Theo nghiên cứu được công bổ vào năm 2018 cho thấy nước ép quả sơ ri không melanin, từ đó làm trắng đa, mà còn có khả năng ngăn ngừa và chữa trị các bệnh

nhiễm trùng da [26] Vì thế, việc sử dụng nước ép quả sơ ri được khuyến khích như

một giải pháp hữu ích bảo vệ da và sức khoẻ tổng thể cho con người Dịch ép quả sơ rỉ là một hỗn hợp có chửa nhiễu thành phẩn, trong đó có hàm lượng vitamin C Theo nghiên cứu của Moura và cộng sự, thanh phan các chất trong dich ép quả sơ rỉ từ 100 g thịt quả được mô tả ở Bảng 1.1 [27]

Vitamin C, hay L-Aseorbie acid, là chất kháng oxy hoá tốt, tan trong nước Cơ thể không tự tông hợp vitamin C nên nguồn cung cấp chính là trái cây và rau [28] Lượng vitamin C bắp thụ vào cơ thể đao động tir 70 - 90% lượng vitamin C đưa vào,

gồm kháng oxy hoá, sinh tổng hợp collagen, hỗ trợ hệ miễn dịch và giảm tỉ lệ mắc

quy và từ vong Đồng thời, vitamin C hỗ trợ quá trình tái tạo mô và hạn chế các tác

động tiêu cực của stress oxy hoá trong các bệnh ung thư Vitamin C cũng cần thiết

số aciđ amin cũng như vitamin khác Thiếu hụt vitamin C có thể gây nên nhiều vẫn miễn địch, vitamin C đỏng vai trò quan trọng trong việc giảm triệu chứng viêm, hỗ

trợ chống lại nhiễm trùng và duy trì sự cân bằng trong hệ thông miễn dịch Thiểu hụt

vitamin C có thể dẫn đến nhiều vấn đề khác nhau như thiếu máu, xuắt huyết mao bám trong mạch máu (gây xơ vữa động mạch) [32], [33] Ngoài ra, vitamin C còn kích thích gan sản xuất các enzyme giải độc [34] Nghiên cứu trên chuột được công

bố vào năm 2006 cũng cho thấy việc bổ sung vitamin C không chỉ làm giảm lượng

chỉ tích tụ trong máu, mà còn bảo vệ cơ thể khỏi những tác động có hại của nhiễm độc chi, bao gm ca chi acetate và các hoá chất chứa chì khác [35] Tóm lại, vitamin C không chỉ là một chất kháng oxy hoá mạnh mả còn đóng vai trò quan trọng trong nhiễu khía cạnh của sức khỏe con người cũng như của động vật

1.5 Tông quan về các nghiên cứu trên thế giới và ở Việt Nam 1.5.1 Các nghiên cứu trên thế giới

Nam 2011, Mahmoud Shaban El-Neweshy va Yasser Said El-Sayed đã công bố kết quả nghiên cửu vẻ tính hiệu quả của vitamin C (20 mg/kg thé trong) trong viée kháng độc tính của chì (20 mg/kg thé trong/ngay) trong 60 ngày: nhóm bị nhiễm chì kết hợp vitamin C có cấu trúc mô học của gan, thận, não và tình hoàn chuột trở về thoái hoá, tiêu não bị phù các mô tỉnh hoàn ngừng sản xuất tỉnh trùng); nhóm sử dụng vitamin C và chỉ đã giảm hãn mức độ tôn thương nghiêm trọng ở trên [36] Năm 2014, Aldahmash và EI-Nager cho thấy rằng vitamin C liều cao (500 mg/kg) có tác dụng như chất chống oxy hoá làm giảm độc tính của chì (acetate chỉ vào tế bào gan, cấu trúc của tế bảo gan vả lách bình thường [37] Năm 2015, IE Osifo và công sự đã nghiên cứu tác động của vitamin C trong việc thải độc gan ở chuột nhiễm chì Khi cho chuột uống cả chì acetate 100 mg/kg

thể trọng và vitamin C 100mg/ kg thé trong nhan thấy có sự giảm men gan so với

chuột nhiễm chì [38]

Năm 2017, Sharaf và cộng sự đã cho thấy vitamin C (30 mg/kg thể trọng/ngày)

đã ngăn chặn tác động gây hại của các kim loại nặng chỉ acetate (20 mạ/kg thể tiểu cẩu, AST, ALT, ALP, ure, creatin và làm giảm số lượng hồng cầu, Hb, protein

chứng (nuôi theo chế độ bình thưởng) khi được uống vitamin C kết hợp với chì [39]

Nam 2018, Mohamed abdul Haye Autiii cùng các cộng sự khi nghiên cứu vai trò của vitamin C chống lại độc tính do chỉ gây ra đối với gan và lá lách ở chuột vai trò kháng độc tinh do chi acetate (10 mg/kg thể trọng/ngày) gây ra ở gan và lách chuột trưởng thành [21]

Nam 2020, Datonye Dennis Alasia cùng với cộng sự cũng đã nghiên cứu đảnh giá tác động của vitamin C vả E đổi với chức năng thận và mỗ của chuột nhiễm chi

Ti lệ tăng trọng, của nhóm bổ sung 10 mg/ml chỉ acctate và 200 mg/ 2ml vitamin C

thận ở nhóm bố sung chỉ cao hơn so với nhóm bé sung ca chi vi vitamin C [40] Cũng trong năm 2020, Shumaila Mumtaz và cộng sự đã nghiên cứu và cũng cho thấy vài trò của vitamin C, vitamin E va t6i là những chất chống oxy hoá có tác dụng

hạn chế độc tính của chì phục hồi một phần các bộ phận bị ảnh hướng bởi chỉ như tinh hoàn, gan, não, thận và xương [22]

Năm 2022, nghiên cứu của Usmasi và cộng sự cho thấy, chuột Wistar đực bị nhiém chi acetate (190 mg/kg thé trong) trong 6 tuần đã cỏ những dấu hiệu tiêu cực bào, thê tích trung bình của hồng cầu, hảm lượng Hb, lượng hemoglobin trung bình lượng tiêu cầu; đông thời tăng số lượng bạch cầu Tuy nhiên, khi dùng chùm ngây

(Mlemo) ở hai liễu lượng (250 và 500 mg/kg thể trọng) và acid ascorbic (S0 và 100

mg/kg) đã có hiệu quá cải thiện độc tính gây ra bởi chỉ Trong đó, với sự kết hợp của cho kết quá vượt trội so với sự kết hợp giữa liều 100 mg/kg thé trong voi 500 mg/kg

thể trọng, tương ứng [41]

Với những nghiên cứu trên cho thấy vitamin C có tác hoạt tính chống oxy hoá

mạnh chống lại hoạt tính của chỉ vả được khuyến khích tiêu thụ thực phẩm giàu vitamin € đẻ giảm thiệt hại do nhiễm độc chì

1.5.2 Các nghiên cứu ở Việt Nam

2017-2023: Có các công trình nghiên cứu vẻ tác động ảnh hưởng của kim loại

tu trúc mô lách của chuột nhất trắng nặng (asen, chì, kẽm) lên chỉ số huyết học v

Kết quả bước đầu cho thấy được các tác động của các nhân tổ này lên sự biến động

số lượng tế bào máu chuột, tốn thương mö gan, thận và lách chuột |42] [43] [44]

'Trong đỏ, nghiên cứu về ảnh hưởng của chì lên chuột nhất trắng có hai công bố gần đây nhất

Năm 2023, nghiên cứu của Nguyen và cộng sự cho thấy, khi chuột nhiễm độc chi (50, 70 và 90 mạ/kg thẻ trọng) đều bị giám khỏi lượng cơ thể, giảm bán kính và

xổ lượng hồng cầu, tăng số lượng bạch cầu và tiểu cầu; các chi sé AST, ALT va BUN

thận bị tôn thương, mô lách có hiện tượng tuỷ đỏ xâm lắm tuỷ trắng Trong đó, nồng Cũng trong năm 2023, nghiên cửu của Hỗ Hữu Duy, Hỗ Linh Kiểu Nhi, Võ

Thanh Vinh, Nguyễn Thị Thương Huyền cho thấy, với chuột nhiễm chì nitrat (70 cầu, tiểu cẩu tăng sơ với nghiệm thức đối chứng và so với thời điểm ban đầu thí

đó, khi sử dụng dịch ép tỏi LY Son (250 mg/kg thé trọng cơ thể) đã cho thấy có tác hematocrit) va cdu trúc mô học của gan và thận dưới tác động của chỉ Tuy nhiên, tác

trúc mô học của lách [45]

Cho đến thời điểm này vẫn chưa tìm thấy công trình nghiên cứu vẻ tác dụng kháng độc tính chì của dịch ép thịt quả sơ rỉ trên mô hình chuột nhất trắng 1.5.3 Nhận định tình hình nghiên cứu

Trong tình hình hiện nay, chúng ta đang chứng kiến sự quan ngại về tác động tiêu cực của chỉ đối với sức khỏe, đặc biệt lả trong môi trưởng sống Tử những nghiên

cứu đã công bố, đã thu được thông tin quan trọng vẻ tác động độc hại của chỉ đối với

chuột và đồng thời nhận thức được tiểm năng giám độc tính cúa chì thông qua sự ứng dụng vitamin C thương mại và điều này đã tạo nên một khoảng trống về thông tin

liên quan đến việc sử dựng nguồn vitamin C tự nhiên Điều này mở ra cơ hội cho một

nghiên cứu mới, liệu dịch ép từ quả sơ rỉ, một nguồn vitamin C tự nhiên, có thể chống vào kiến thức khoa học vẻ khả năng ứng dụng của vitamin C tự nhiên, mà côn hướng độc tính của chỉ trong môi trường sống hàng ngày

Chuong 2 PHUONG PHAP NGHIEN CUU

2.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu

3.1.1 Thời gian nghiên cứu

Luận văn được thực hiện từ tháng 10/2022 đến tháng 8/2023 3.1.2 Địa điểm nghiên cứu

‘Thi nghiệm được thực hiện tại phòng thí nghiệm Giải phẫu - Sinh lí Người & Động vật, Khoa Sinh học, Trường Đại học Sư phạm Thành phố Hỗ Chí Minh Mẫu gan thận và lách được nhuộm H&E ở phòng Giải phẫu bệnh của Phòng khảm đa khoa Đại Phước, Quận 1 1, Thành phố Hỗ Chí Minh 3.2 Vật liệu nghiên cứu

Chuột thí nghiệm: Chuét nbit tring dye (Mus musculus var albino)

Quả sơ rỉ chua giống Brazil vừa chín tới được mua tại Gò Công, Tiền Giang (Hình 2.1) và được vận chuyển vé phòng thí nghiệm Các quả sơ rỉ này được dùng dé

thu dich ép dùng cho thí nghiệm

Hình 2.1 Quả sơ rỉ chưa giống Brazil mua tại Gò Công, Tiền Giang.

Kế thừa kết quả nghiên cứu của để tài cơ sở mã số CS.2019 19.29 của Nguyễn

"Thị Thương Huyền cho thấy với nỗng độ chì 70 mg/kg thể trọng có ảnh hướng rõ rệt

thận, lách chuột [46] Do đó, nông độ chì 70 mg/kg thé trong (tir chi nitrate) duge

chọn làm mô hình đánh giá tác dụng của dịch ép quá sơ rỉ trong việc kháng độc tính chỉ trên chuột nhất trắng

3.2.2 Cơ sở chọn nông độ dịch ép sơ rỉ

'Theo nghiên cứu của Ayinde vả cs (2012) đã sử dung acid ascorbic (40 mg/kg thể trọng) giúp tỉnh hoàn chuột có cấu trúc vi thẻ bình thưởng khi bị nhiễm chì [47]

có tác dụng kháng độc tính của chi [48] Sharaf và es (2017) khi sử dụng vitamin C

cho thay vitamin C (27 mg/kg thé trong) c6 téc dung kháng độc tính của chỉ [21] Kết

quá thực hiện thim dé 3 néng d6 dich ép quả sơ ri là 20, 30 va 40 mg/kg thé trong khảo sát cho nghiên cứu này, Bên cạnh đó, vitamin C tinh khiét (30 mg/kg thé trong) được chọn làm đối chứng dương cho nghiên cứu này

3.2.3 Dụng cụ và hoá chất thí nghiệm

Bảng 2.1 Dụng cụ, thiết bị nuôi chuột

Bảng 2.2 Dụng cụ, thiết bị lấy máu chuột và làm tiêu bản máu

Bảng 2.3 Hoá chất sử dụng

4 Hayem: 25 g 25 gNas$ gNaCl NaCl ác cất vừa i500 đủ mL

~ Dung dịch bạch cẩu Lazarus: 10 mL acid acetic nguyén chit + 20 giot xanh methylen 1% + nước cất vừa đủ 200 mL

~ MgSO, 14%: 5,74 ø bột MgSO:.7H:O + 197 mL nude

- HCI 0,1N: 8,6 mL HCI nguyén chat + nude cit vira dit 1 lit

~ Dung địch thuốc nhuộm Giemsa: 7,6 g Giemsa + 750 mL methanol + 250 mL glycerine

- Vitamin C tinh khiét: L-Ascorbic acid (dạng bột) pha nồng 46 30 mg/kg thé trong

- Dung dich formaldehyde cé dinh mau: formaldehyde 10% + KH:PO: (4 g/1 000

mL) + NasHPOs (6,5 g/1 000 mL)

2.3 Bố trí thí nghiệm

Chuột đạt tiêu chuẩn làm thí nghiệm được phân chia vào các nghiệm thức đánh

dấu theo thứ tự có định ớ đuôi cho từng con ở từng nghiệm thức Thí nghiệm gồm 54 chuột, chia làm 6 nghiệm thức (9 chuộưnghiệm thức), bao gồm: Nghiệm thức 1 - Đối chứng (ĐC): chuột được uống nước máy khử trùng clo bình thường

Nghiệm thức 2 - Đối chứng âm (Pb): chuột được uống nước pha Pb từ chì nitrate với nằng độ 70 mg/kg thể trọng

Nghiệm thức 3 - Đối chứng dương (PbVC): chuột uống chì với nồng độ 70 mg/kg thé trong + vitamin C tính khiết nông 4 30 mg/kg thé trong Nghiệm thức 4 (PbSR20): chuột uống chì với nồng độ 70 mg/kg thể trọng + dịch ép sơ rï nồng độ 20 mg/kg thể trọng

Nghiệm thức 5 (Pb§R30): chuột uống chì với nồng độ 70 mg/kg thể trọng + dịch ép sơ ri ndng 46 30 mg/kg thể trọng

Nghiệm thức 6 (PbSR40): chuột uống chì với nồng độ 70 mg/kg thể trọng + dịch ép sơ rỉ nồng độ 40 mg/kg thể trọng

“Thí nghiêm đ theo sơ đồ Hình 2.2, ĐỀ tài được Hội đồng dao dit nghiên cứu trên động vật (ACUCUS) chấp thuận với mã số hỗ số 1170B/KHTN- ACUCUS ngiy 19 thing 1 năm 2019 (Phụ lục 5)

3.4.1 Phương pháp chăm sóc chuột

Chuột nhất trắng đực (Äfus musculus var albino) 4 tuần tuổi được mua từ Viện

Pasteur, Thanh phd Hồ Chỉ Minh, sau đó nu

(lỗng kính có kich thước 30x19x19 cm’, lót trấu, đậy bằng nắp inox (4 - 5

con/chudng); chu kì sáng tối được giá lập với 12 giờ sáng và 12 giờ tối, nhiệt độ 27 - trong 2 tuần đạt trọng lượng từ 19 - 21 g (6 tuần tuổi)

in định ở điều kiện phòng thí nghiệm

Chuột được cho ăn viên thức ăn tổng hợp dành riêng cho chuột mua tử Viện

Sinh học Nhiệt đới (Thành phô Hồ Chí

và 17 giờ hàng ngày, sử dụng nguồn nước máy cung cấp cho phòng thí nghiệm

inh) Nước uống được thay vào lúc 07 giờ

Chuông nuôi còn được thay trấu sau mỗi chu kì 2 - 3 ngày/lần đẻ đảm bảo môi trường sạch sẽ và thuận lợi cho sự phát triên của chuột

3.4.2 Phương pháp đánh giá độ tăng trọng của chuột

Trong quá trình thực hiện thí nghiệm, khỏi lượng cơ thẻ từng con chuột được

xác định bằng cân điện tử tương ứng với từng nghiệm thức ở thời điếm khác nhau, bao gồm thời điểm ban đầu (tuần 0) và sau mỗi khoảng thời gian 2 tuần (tuần 2, tuần

4, tuần 6 và tuần §) trong thời gian thực hiện thí nghiệm Độ tăng trọng của chuột tại

thời điểm khảo sát được tính bằng khối lượng cơ thẻ chuột tại thời điểm khảo sát trừ

thực hiện đánh giá vả phân tích tốc độ tăng trọng của chuột qua các mốc thời gian

trong suốt giai đoạn thí nghiệm

2.4.3 Phương pháp thư dịch ép thịt quả sơ rỉ chua

Quả sơ rỉ chua giống Brazil được mua từ huyện Gò Công, tỉnh Tiền Giang, sau

h, để ráo nước và cho vào túi nilon trữ đông ở -20*C nhằm đảm bảo mẫu quả sơ rỉ chua cùng điều kiện trong suốt thời gian thí nghiệm Quy trình thu dịch

đó được rửa sạ

ép thịt quả sơ rỉ được thực hiện mỗi ngảy bằng cách lẫy số lượng quả sơ sỉ vừa đủ, rã qua giấy lọc để lược bỏ phần hạt còn sót lại Dịch ép này được sử dụng đẻ định lượng

được định lượng bằng phương pháp chuẩn độ tại phòng thí nghiệm Dựa trên kết quả đảm bảo nồng độ khảo sắt chính xác (20, 30 vả 40 mg/kg thé trọng) Dữ liệu này được

sử dụng đẻ cho chuột uống theo từng nghiệm thức và theo khối lượng cơ thể chuột

3.4.4 Phương pháp cho chuột uỗng chì, vitamin € và dịch ép thịt quả sơ rỉ Trong nghiên cứu này, dung dịch chì và dung dịch vitamin C tỉnh khiết được chuẩn bị để nghiên cứu ảnh hưởng của chúng tôi với chuột Dung dịch chì nitrate

vitamin C tỉnh khiết được pha với nước cất, đàm bảo nông độ tương ứng với nông độ

khảo sát là 30 mg/kg thể trọng

Dung dịch chì, địch ép sơ ri, vitamin € tình khiết được cho chuột uống bằng

cách dùng xi lanh 1 mL gin voi dau kim chuyên dụng (đầu kim số 8) bơm trực tiếp

đê quản chuột Thời g ông chỉ Sac giờ 6 giờ - 7 giờ sáng hàng ngảy, trước khi cho chuột ăn 30 phút Thời gian cho uống giờ

Để theo đối tắc động của các chất nghiên cứu, chúng tôi tiến hành quan sát và ghỉ nhận các dấu hiệu bất thường của chuột sau lần uống chỉ cũng như dịch ép và tính chính xác và đảng tin cậy cúa đữ liệu thu thập

2.4.5 Phương pháp thu máu chuột để khảo sát các chỉ số huyết học

Trước khi lấy máu, cho chuột nhịn đói, cân khối lượng cơ thể chuột trước khi

lay máu Chu kì 4 tuẳn/lẳn, lấy máu ở tĩnh mạch đuôi chuột để khảo sát chỉ số huyết học (tế bào máu, Hb, HCT, kích thước hông cầu và thời gian đồng mảu) Cho chuột vào 1

falcon nhựa 50 ml, để lộ đuôi chuột ra phía ngoài Dùng bông gòn tắm cồn 70° sát

trùng, dùng kim trích lấy máu ở tĩnh mạch đuôi của chuột

Các phương pháp này đều thực hiện theo hưởng dẫn trong Giáo trình thực hành Sinh lí học người và động vật, trong đó số lượng tiêu cầu được xác định theo phương

pháp Fonio [49], cụ thể như sau:

- Đối với hồng cầu: hút máu vào ống trộn hỏng cầu đến vạch 0,5 (tránh làm bot khí lọt vào trong cột máu); hút dung dịch hồng cầu đến vạch 11 (máu đã được pha

loãng 200 lần); dùng ngón tay bịt đầu đưới ống hút và gỡ ống cao su ra khỏi ống trộn,

dịch pha loãng; bỏ 3 - 4 giọt đầu tiên và châm đầy 2 buồng đếm đã được chuẩn bị sẵn

dư

vi, kiểm tra sự phân bố hồng cầu dưới vật kính x10, nếu chưa phân bố đểu sẽ thực vật kính x40 bằng cách chính rõ nét, dùng phần mễm S-EYE quay mản hình vỉ trưởng ính hiển vi, đợi 3 phút để hỗng cầu lắng xuống: đưa buồng đến lên kính hiển

sau đó lấy trung bình các lần đếm (A) Như vậy, số lượng hồng cầu trong 1 mmỶ máu {N) được tính theo công thức; N = (A x 4000 x 200) ; 80 = A x 10000

~ Đối với bạch cẩu: hút máu vào ống trộn bạch cầu đến vạch 0.5 (tránh làm bọt khí lọt vào trong cột máu); hút dung dịch bạch cầu đến vạch 11 (máu đã được pha

loãng 20 lẫn); dùng ngón tay bịt đầu dưới ông hút và gỡ ống cao su ra khỏi ống trộn, dịch pha loãng; bỏ 3 - 4 giọt đầu tiên và châm đẩy 2 buồng đếm đã được chuẩn bị sẵn

vi, kiểm tra sự phân bổ bạch câu dưới vật kính x10, nếu chưa phân bổ đều sẽ thực

dưới vật kính x40 bằng cách chỉnh rõ nét Các bạch cầu có nhân và màng, các bạch

bình các lần đếm (B) Như vậy số lượng bạch cầu được tính theo công thức:

N= (B x 4.000 x 20): 400 = B x 200

~ Đổi với tiểu cầu (sử dụng phương pháp Fonio): lấy lame thứ nhất, nhỏ giọt dung dịch MgSO, lén lame, nho gigt máu vào chỗ đã có giọt MgSO; trước đó; lấy đầu này sang đầu kia với tốc độ vừa phải với góc nghiêng 30 - 45° (máu được dàn đều thành lớp mỏng trên lame 1), dé tiêu bản khô ên; cố định tiêu bản bằng cách

sử dụng methanol nhỏ bao đều trên tiêu bản, sau đỏ để đứng tiêu bản trên giá cho

methanol chay hét và đẻ tiêu bản khô tự nhiên; nhuộm tiêu bán: tiêu bản máu đã có

định được ngâm trong dung dịch Giemsa đã pha từ Giemsa mẹ với tỉ lệ 1 Giemsa me nước cắt một góc nghiêng đến khi nước trong, không còn phai màu, để khô mẫu tự

nhiên; dùng vật kính x40 xem lướt qua tiêu bản, chọn chỗ nào có tiểu cầu và hồng

cầu đều để đếm tiều cầu vật kinh x100 dưới dầu Ccdre Tiêu cầu trên tiêu bản nhuộm trong 1 000 hồng cẩu có bao nhiêu tiêu cầu (C), và căn cứ vào số lượng hồng cầu xDJ/I 000

2.4.7 Phương pháp xác định chỉ số hemoglobin

Cho dung địch HCI 0,1N vào huyết sắc kể Sahli với vạch thắp nhất Hút máu

chuột vào pipette Sahli đến vạch 0,02 mL Sau đó cho ngay vào huyết sắc kế Sahli có sẵn chứa HCI 0,1N Thôi nhẹ cho máu

rửa hết máu trong pipette Dùng đùa thuỷ tinh của bộ huyết sắc kế khuấy đều, để yên

đt nhằm để chỏ HCI t4¿ dụng với máu thành dung dich hematin chloty

ống lắng xuống đáy, hút HCI lên ống để

có màu nâu sim

Đặt ống huyết sắc kế vào giá, dùng pipette nhỏ từng giọt nước cất vào và khuấy đều bằng đũa thuỷ tình Nhỏ từng giọt cho đến khí quan sát thấy 3 ống trên giá có mực dung dịch trong ống và ghi nhận kết quả Đây là nồng độ Hb trong máu với đơn

vi g% (trong 100 g dung dịch chứa số gram Hb)

2.4.8 Phương pháp xác định chỉ số hematocrit

Dùng kim trích máu ở tỉnh mạch đuôi chuột, để giọt máu tròn: nghiêng miệng ống mao quản cho tiếp xúc với giọt máu để máu vào ống mao quản Khi máu đã được quản (HỊ)

Dùng parafil quấn chặt 2 đầu ng mao quản (phẩn tiếp xúc với máu ở tĩnh mạch đuôi chuột); đặt ông mao quản chứa máu vào ống quay li tâm, với tốc độ 3 200 vòng

26

trong 15 phút: dùng thước kẹp điện tử đo phần huyết tương bên trên (H2) Chi sé hematocrit của mẫu máu được tính theo công thức (H1-H2)/H1*100% 2.4.9 Phương pháp xác định kích thước hồng cầu

định tiêu cầu) được quan sát dưới kính

Tiêu bản máu (đã chuẩn bị ở phần

hiển vị ở vật kính x40 có gắn phần mềm S-EYE kết nối laptop Thực hiện đo bán kính

của từng hồng cầu bằng phần mèm S-EYE, mỗi nghiệm thức lấy ngẫu nhiên các lame

tiêu bản và đo 300 hông cầu Kết quả được xuất dưới dạng file excel ở dưới hình ảnh

(Hình 2.3)

Hình 2.3 Hình minh hoạ đo kích thước hồng cầu bằng phần mềm S-EYE

2-4.10 Phương pháp đánh giá chỉ số sinh hoá máu chuột Kết thúc 4 và § tuần thí nghiệm, chuột được nhịn đói từ 8 - 12 giờ (qua đêm)

Chuột được gây mê bằng cách tiêm ketamin kết hợp voi xylazine (liều 0,1 mL⁄/10 g

thể trọng) vào cơ đủi, thực hiện thu nhận máu từ tĩnh mạch hốc mắt (mouse orbital

sinus) chuột bởi ống hernatocriL cho vào ống đựng mẫu máu có chất chống đông

EDTA Mẫu máu được li tâm 3 500 vòng trong 30 phút ở nhiệt độ phòng (27 - 28°C);

thu phần huyết tương phục vụ cho việc xét nghiệm các chí số sinh hoá máu Huyết (thường trong 24 giờ) Mẫu huyết thanh được đến Trung tâm xét nghiệm Hoà Hảo,

Thành phố Hồ Chí Minh đẻ phân tích các chỉ số cần cho thí nghiệm Các chỉ số gồm men gan (AST va ALT), bilirubin, urea nitrogen, creatinin 3.4.11 Phương pháp thu nhận gan, thận và lách chuột

“Thực hiện ngay sau 4 tuẫn và sau tuẫn cuối cùng của chu kì lấy máu (tuần §)

Sau khi thu nhận máu để thu huyết tương chuột trải qua cái chết nhãn đạo Giải phẫu

chuột theo mỗi nỗng độ tương ứng với mỗi nghiệm thức đánh giá hình thái tổng quát

các cơ quan nội tạng (ruột, gan, thận, lách) dựa trên những đặc điểm cám quan như

sự đồng Creatinine: hay xơ gan ở gan: sự phù, sưng tím ở thận: sự phù nễ ở lá lách KH:PO‹ (0/0294 M) và Na›HPO: (0,0458 M) trước khi được chuyên đến phòng Giải phẫu bệnh của Phỏng khám Đa khoa Đại Phước Quận 11 Thành phổ Hồ Chí Minh chuột để nhuộm, mỗi lát cắt có độ dày 5 - 6 am Dánh giá mức độ tôn thương mô học Trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh thông qua tiêu bản nhuộm H&E dưới kính hiển vi đảo ngược (TU, Nikon)

3.4.12 Phương pháp xử lí thẳng kê

‘Tit ca số liệu của đề tải được xử lí theo các thuật toán xác xuất thống kê trên máy tính bằng phần mềm GraphPad Prism Phân tích phương sai một yếu tố (One thức lả 0,05 Phân tích phương sai hai yếu tố (Two - way Anova) vẻ thời gian và nghiệm thức thí nghiệm Dùng hàm Tukey để kiểm định các số liệu

Chương 3 KẾT QUÁ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Tác dụng của dịch ép quả sơ rỉ chua lên độ tăng trọng ở chuột nhiễm chì

nặng để đảm bảo sự đồng nhất về khối lượng cơ thẻ Trung bình cân nặng của chúng là

19,79 + 0.52 g (phụ lục 1.2) Điều quan trọng là các chuột này đã đáp ứng điều kiện thí

nghiệm Các chuột nảy được phân ngẫu nhiên thành 6 nghiệm thức (9 chuộƯnghiệm thức, p > 0,05) Kết quả độ tăng trọng của chuột được thể hiện ở Hình 3 1, 3.2

kiểm tra cân

Hình 3.1 Kết quả thể hiện sự khác biệt — Hình 3.2 Đồ thị thế hiện độ tang

về độ tăng trọng trung bình giữa các trọng của chuột tại các nghiệm nghiệm thức (kiểm định Tukey) thức thử nghiệm qua các tuần nuôi

Ghi chi: khác biệt giên 2 nghuệm thức ão sánh có ý nghĩa

Khí 95% Cũ lệch cả vẻ I pháo trái hoặc phải của giá trị 0:

Hình 3 , 3.2 cho thấy sự khác biệt vẻ độ tăng trọng trung bình giữa các nghiệm

thức, cụ thể:

Sau 2 tuần thí nghiệm độ tăng trọng trung bình ở các nghiệm thức tăng mạnh và

có sự khác biệt rõ rột, độ tăng trọng theo thứ tự giảm dần ở các nghiệm thức lần lượt là

ở nghiệm thức Pb độ tăng trọng thập nhất so với các nghiệm thức còn lại (p < 0,001)