nghiên cứu sự biến động về vi sinh vật trên đối tượng chim yến nuôi tại các vùng nam trung bộ và tây nguyên. khảo sát sự nhạy cảm kháng sinh trên loài vi sinh vật đã phân lập được

Tuy vậy, vẫn chưa có nhiều những công trình nghiên cứu về các loại vi sinh vật có trên loài chim này để có được những bước phòng ngừa hay hạn chế các tác nhân gây ảnh hưởng đến sự phát t

loài chim này có từ khi nào Chúng ta chỉ có thể tìm hiểu về lịch sử hình thành chim yến từ lịch sử về sự tiêu thụ tổ chim yến hãy quay về người Trung Hoa, trong suốt 1.500 triều đại nhà Đường (618-907 sau công nguyên) Người ta tin rằng tổ yến được các thủy thủ đường biển mang về tư vùng Nan Vang, (vùng phía Nam của Trung Quốc), và sau đó giới thiệu vào cung vua Trung Quốc như một món ăn cao lương mỹ vị của hoàng tộc Từ thời điểm đó người ta mới biết về chim yến là loài động vất quý hiếm vì giá trị tổ yến do giải nước yến kết tinh mang lại rất cao mặc

dù loài chim này đã có trước đó rất lâu

Trong suốt trong thời đại đó chỉ có các Đế Vương và các quan chức hoàng triều mới có cơ hội thưởng thức món tổ yến này Mãi cho đến cuối triều đại này, người dân thường mới được giới thiệu về chim yến và tổ yến, giá trị cũng như nhu cầu về tổ yến đã tăng lên kể từ khi đó do sự khan hiếm và dinh dưỡng cao của tổ yến

Từ các tài liệu đó cho thấy rằng có 1 sự hiểu biết đang được tiến triển về các loài chim yến xuyên thời gian Còn về tài liệu trong vòng năm 1587 cho thấy rằng

số lượng chim yến, tổ yến được nhập vào Trung Quốc như một sự đánh thuế Vào năm 1618 theo nhiều tài liệu cho thấy rằng số lượng nhập khẩu tăng quá nhiều đến nỗi số lượng đánh thuế bị sụt giảm Vào thời đó tổ chim yến được ưa chuộn như 1 thức ăn quý giá bỡi cư dân của 2 tỉnh Guangdong and Fujian ở Trung Quốc Kể từ khi đó nhiều tài liệu phủ kín cả những nơi xuất phát nguồn gốc chim yến

Hàng trăm năm sau đó tổ chim yến cũng dần dần được chấp nhận như một loại thức ăn quý giá của Trung Quốc Ngày càng được chấp nhận rộng rãi bởi người Hoa vì có tính năng chữa bệnh rất hiệu quả

Dựa vào các nhà nghiên cứu hiện đại, lượng protein chứa trong tổ yến có khả năng kích thích sự sống của con người tươi trẻ lại thì cũng tự triệt tiêu trong chính

tổ yến Các nhà nghiên cứu cho biết tổ chim yến chứa một lượng các yếu tố phát triển biểu bào Nguồn nước trong tổ chim yến kích thích một cách trực tiếp sự phát

nhanh chóng (như phụ nữ mang thai hay trẻ em đang phát triển…), và còn kích thích sự phát triển phân chia tế bào trong phạm vi miễn dịch

Với những giá trị về cả dinh dưỡng lẫn kinh tế như trên, nên ngày nay, nghề nuôi chim yến đang rất phát triển ở không chỉ các nước trên thế giới, mà ngay ở Việt Nam cũng đang rất rầm rộ ở các tỉnh miền Trung và Nam bộ Tuy vậy, vẫn chưa có nhiều những công trình nghiên cứu về các loại vi sinh vật có trên loài chim này để có được những bước phòng ngừa hay hạn chế các tác nhân gây ảnh hưởng đến sự phát triển của loài yến Để từ đó, tạo ra các loại tổ yến thượng hạng nhất cung cấp phục vị nhu cầu của con người

Ý thức được xu hướng trên mà em đã chọn đề tài: “Nghiên cứu sự biến động

về vi sinh vật trên đối tượng chim yến nuôi tại các vùng Nam Trung Bộ và Tây Nguyên Khảo sát sự nhạy cảm kháng sinh trên loài vi sinh vật đã phân lập được”

Đề tài này được thực hiện với các mục tiêu sau:

 Phân lập và đinh danh các loại vi khuẩn hiện diện trên đối tượng chim yến nuôi bằng các thử nghiệm sinh hóa

 Khảo sát tính nhạy cảm kháng sinh của loài vi sinh vật đã phân lập được

học và Môi trường, Trường Đại học Nha Trang đã luôn quan tâm, chỉ bảo và giảng dạy nhiệt tình, giúp cho tôi có được những kiến thức quý báu trong suốt thời gian học tập tại trường

Tôi xin dành lời cảm ơn sâu sắc nhất đến Ths Lê Nhã Uyên, Bộ môn Công nghệ Sinh học, Viện Công nghệ Sinh học và Môi trường, đã định hướng, dìu dắt và tận tình hướng dẫn tôi trong suốt thời gian tôi thực hiện đồ án tốt nghiệp này

Tôi xin chân thành cảm ơn đến chị Trương Thị Thu Thủy, cán bộ quản lý phòng thí nghiệm Công nghệ Sinh học, đã tạo mọi điều kiện tốt nhất để tôi hoàn thành đề tài

Cuối cùng, tôi bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến gia đình, bạn bè, những người luôn quan tâm giúp đỡ, động viên, đồng thời là chỗ dựa tinh thần rất lớn giúp tôi hoàn thành tốt mọi công việc được giao trong suốt thời gian học tập và thực hiện đồ án vừa qua

Nha Trang, tháng 7 năm 2012

Sinh viên

Huỳnh Ngọc Hoàng Trang

MỤC LỤC

Trang

LỜI MỞ ĐẦU

LỜI CÁM ƠN

DANH MỤC BẢNG BIỂU iv

DANH MỤC HÌNH KÝ HIỆU CÁC CỤM TỪ VIẾT TẮT v

KÝ HIỆU CÁC CỤM TỪ VIẾT TẮT vii

LỜI MỞ ĐẦU 1

CHƯƠNG I : TỔNG QUAN 1

1.1 Tổng quan về chim yến 1

1.1.1 Giới thiệu các đặc điểm về chim yến 1

1.1.1.1 Hình dạng và kích thước của chim yến 1

1.1.1.2 Tập quán sinh sống của chim yến 2

1.1.1.3 Sự phân bố địa lý của chim yến ở Việt Nam và trên thế giới 3

1.1.2 Tiềm năng kinh tế 4

1.1.3 Phân loại chim yến 6

1.1.4 Yến sào 7

1.1.5 Giá trị dinh dưỡng của tổ chim yến 8

1.1.6 Giá trị thị trường của tổ chim yến 9

1.1.7 Tình trạng khai thác yến sào ở Việt Nam và trên thế giới 9

1.1.8 Phân loại yến sào 10

1.1.8.1 Phân loại theo nguồn gốc 10

1.1.8.2 Phân loại theo màu sắc 11

1.1.8.3 Phân loại theo quan niệm dân gian 12

1.1.9 Phân biệt tổ yến thật và giả 12

1.2 Tổng quan về vi sinh vật 13

1.2.1 Sự sinh trưởng của vi sinh vật và các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt động sống của vi sinh vật 14

1.2.2 Một số vi sinh vật thường gặp trên động vật có lông vũ 16

1.3 Tổng quan về kháng sinh 21

1.3.1 Đặt điểm chung về chất kháng sinh 21

1.3.2 Định nghĩa chất kháng sinh 22

1.3.3 Đơn vị kháng sinh 22

1.3.4 Hoạt tính kháng sinh đặc hiệu 22

1.3.5 Phổ kháng khuẩn của kháng sinh 23

1.3.6 Cơ chế tác dụng của kháng sinh 23

1.3.7 Phân loại kháng sinh 24

CHƯƠNG II : VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25

2.1 Vật liệu 25

2.1.1 Mẫu 25

2.1.2 Phương pháp lấy mẫu và chuẩn bị mẫu 25

2.1.2.1 Mục đích và yêu cầu của việc lấy mẫu 25

2.1.2.2 Lấy mẫu 25

2.1.3 Trang thiết bị và dụng cụ thí nghiệm 26

2.1.3.1 Thiết bị chuyên dùng 26

2.1.3.2 Hóa cất, môi trường và thuốc thử (xem ở phần phụ lục) 26

2.2 Phương pháp nghiên cứu 27

2.3 Phân lập và định danh vi khuẩn bằng các thử nghiệm sinh hóa 27

2.3.1 Phân lập vi khuẩn 27

2.3.2 Định danh vi khuẩn phân lập được bằng các thử nghiệm sinh hóa 36

2.3.2.1 Vi khuẩn E.coli 36

2.3.2.1 Vi khuẩn Salmonella 39

2.3.2.2 Vi khuẩn Vibrio 42

2.4 Phương pháp xác định khả năng mẫn cảm của vi khuẩn E.coli phân lập được đối với một số loại khái sinh thông dụng 43

CHƯƠNG III : KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 46

3.1 Phân lập vi khuẩn và định danh vi khuẩn bằng các thử nghiệm sinh hóa

46

3.1.1 Vi khuẩn Escherichia coli 46

3.1.2 Vi khuẩn Vibrio 51

3.1.3 Vi khuẩn Salmonella 53

3.1.4 Đặc điểm hình thái tế bào vi khuẩn bằng phương pháp nhuộm Gram57 3.1.4.1 Vi khuẩn E.coli 57

3.1.4.2 Vi khuẩn Vibrio 58

3.1.4.3 Vi khuẩn Salmonella 58

3.1.5 Nấm men, nấm mốc 59

3.1.6 Kết quả xác định khả năng mẫn cảm của các chủng E.coli phân lập được với các loại kháng sinh thông dụng 60

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 63

TÀI LIỆU THAM KHẢO 64 PHỤ LỤC

DANH MỤC BẢNG BIỂU

Bảng 2.1 Địa điểm lấy mẫu để phân lập 25

Bảng 2.2 Bảng tiêu chuẩn đánh giá vòng vô khuẩn 45

Bảng 3.1 Số mẫu vi khuẩn E.coli được phân lập từ phân chim yến 46

Bảng 3.2 Kết quả thử nghiệm IMViC của các mẫu nghi ngờ E.coli 47

Bảng 3.3 Số mẫu nghi ngờ là vi khuẩn Vibrio được phân lập từ phân chim yến 51

Bảng 3.4 Kết quả thử nghiệm sinh hóa của các mẫu nghi ngờ Vibrio 52

Bảng 3.5 Số mẫu vi khuẩn Salmonella được phân lập từ phân chim yến 54

Bảng 3.6 Kết quả thử hoạt tính của các mẫu nghi ngờ là Salmonella 54

Bảng 3.7 Kết quả định lượng nấm men, nấm mốc tổng số 59

Bảng 3.8 Kết quả xác định khả năng mẫn cảm của E.coli đối với một số loại kháng sinh thông dụng 61

DANH MỤC HÌNH

Hình 1.1 Chim Yến 1

Hình 1.2 Bản đồ phân bố của chim yến tại các tỉnh miền Trung và miền Nam 4

Hình 1.3 Tổ Yến 7

Hình 1.4 Khai thác Yến trong hang 10

Hình 1.5 Đường cong sinh trưởng của vi sinh vật 16

Hình 1.6 Tổng số vi khuẩn hiếu khí qua các nồng độ pha loãng 17

Hình 1.7 Coliforms 17

Hình 1.8 Escherichia Coli 18

Hình 1.9 Staphylococcus aureus 19

Hình 1.10 Salmonella 19

Hình 1.11 Vibrio Cholera và Vibrio parahaemolyticus 20

Hình 1.12 Nấm Saccharomyces Cerevisiea 21

Hình 1.13 Vị trí tác dụng chính của một số chất kháng sinh 23

Hình 2.1 Sơ đồ cách tiếp cận các nội dung nghiên cứu của đề tài 27

Hình 2.2 Sơ đồ pha loãng mẫu 28

Hình 2.3 Sơ đồ quy trình phát hiện và định danh E.coli 30

Hình 2.4 Sơ đồ quy trình phát hiện và định danh V.brio 32

Hình 2.5 Sơ đồ quy trình phát hiện và định danh V.brio 34

Hình 3.1 Khuẩn lạc nghi ngờ là E.coli được phân lập trên môi trường EMB 46

Hình 3.2 Kết quả thử nghiệm Indol dương tính của E.coli 48

Hình 3.3 Kết quả thử nghiệm MR dương tính của E.coli 49

Hình 3.4 Kết quả thử nghiệm VP âm tính của E.coli 49

Hình 3.5 Kết quả thử nghiệm Citrate âm tính của E.coli 50

Hình 3.6 Khuẩn lạc nghi ngờ là ibrio parahaemolyticus trên môi trường TCBS 51

Hình 3.7 Kết quả thử nghiệm KIA của các mẫu nghi ngờ Vibrio 52

Hình 3.8 Khuẩn lạc nghi ngờ là Salmonella trên môi trường XLD 54

Hình 3.9 Kết quả thử nghiệm KIA của các mẫu nghi ngờ Salmonella 55

Hình 3.10 Kết quả thử nghiệm Citrate dương tính của các mẫu nghi ngờ là Salmonella 55

Hình 3.11 Kết quả theo thứ tự từ trái sang phải của các mẫu nghi ngờ Salmonella là:

Manniltol(+), Glucose(+), Saccharose(-), Urease(-), Sorbitol(+) 56

Hình 3.12 Tế bào vi khuẩn E.coli sau khi nhuộm gram và quan sát dưới kính hiển vi ở độ

KÝ HIỆU CÁC CỤM TỪ VIẾT TẮT

AP W Alkaline Peptone Water

BPW Buffer Pepton Water

BGBL Brilliant Green Lactose Bile Salt

CFU/ML Colyny Forming Unit per mililit: số đơn vị khuẩn lạc trên mililit

EMB Eosin Methylene Blue Lactose

MP-VP Methyl Red-Voges Proskauer

TCBS Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose

TSA Trypticase Soy Agar

SDA Sabouraud’s Dextrose Agar

SCA Simmons Citrate Agar

XLD Xylose Lysine Desoxycholate Agar

CHƯƠNG I : TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan về chim yến

1.1.1 Giới thiệu các đặc điểm về chim yến

1.1.1.1 Hình dạng và kích thước của chim yến

Chim yến có hình dạng bề ngoài và kích thước giống với các loài chim én Nhiều loài yến có hình dáng đặc trưng, với đuôi ngắn và chẻ, các cánh dài cụp về phía sau, trông tương tự như trăng lưỡi liềm Chúng có mỏ ngắn, miệng rộng, chân nhỏ và yếu, với đôi cánh dài hình lưỡi liềm Chân của chim yến được phủ bằng lớp

da trần và bị thoái hóa, nên không bao giờ đậu trên mặt đất, dây diện, trên cây, chỉ bám vào các bề mặt thẳng đứng Thân chim yến to bằng thân chim sẻ nhưng có sải cánh rộng hơn sải cánh chim bồ câu Kích thước các loài yến dao động từ nhỏ như ở yến lùn (Collocalia troglodytes) chỉ cân nặng 5,4g và dài 9cm (3,7 inch) đến yến đuôi nhọn tía (Hirundapus celebensis) cân nặng 184g và dài 25 cm (10inch) Như chúng ta đã biết, trọng lượng một con chim yến ở Việt Nam nặng từ 15 đến 20gr Không quá chênh lệch giữa chim bố và chim mẹ Do được sống ở trong vùng nhiệt đới luôn có thức ăn là côn trùng bay trong không khí nên chim yến ít thay đổi trọng lượng cơ thể giữa các mùa

Hình 1.1 Chim Yến

1.1.1.2 Tập quán sinh sống của chim yến

Chim yến thường sinh sống ở đảo hay tại các đô thị có điều kiện phù hợp với tập quán sinh sống của chúng Với những đặc tính trên, chim yến có khả năng bay rất giỏi và sức chịu đựng dẻo dai Chim yến thường bay theo những tuyến đường tròn nhưng chỉ theo một hướng

Yến là loài chim bay ở trên không nhiều nhất, chúng bắt côn trùng làm thức

ăn trong khi đang bay, thậm chí có thể ngủ và giao phối khi đang bay Thật ra chim yến là loại chim bay nhanh nhất hiện nay vì chúng có thể bay liên tục trong 40 giờ Ngoại trừ những khi ngủ, xây tổ hay cho chim non ăn, chim yến không bao giờ đậu lại một chỗ hay nghỉ ngơi

Chim yến bay suốt ngày, có khi xa tổ hơn 200km, tối lại trở về mà không bao giờ lạc nhà, lạc tổ Tuy nhiên, chúng rất nhạy cảm với sự thay đổi ánh sáng, nhiệt

độ, và độ ẩm bên trong nơi chúng làm tổ Nếu những yếu tố này không phù hợp chúng sẽ bỏ đi nơi khác và không bao giờ quay trở lại nữa

Yến sống thành từng cặp và rất chung thủy, chim yến chỉ có một vợ một chồng, chỉ khi nào bạn đời chết mới kiếm con khác thay thế hoặc chết theo vì buồn nhớ bạn tình Mỗi lần đẻ hai trứng và do cả hai chim trống lẫn chim mái ấp Thời gian ấp trứng kéo dài từ 21 - 29 ngày

Chim non được bố mẹ cho ăn ngày 3 lần, mỗi phần mồi sống nặng từ 0,6 - 1gr, trong đó chứa khoảng 250 - 350 con côn trùng đang sống hoặc còn tươi nguyên

để mớm cho lũ con của mình Bởi vậy, nếu tính toán số lượng bọ rầy và các loại côn trùng hại lúa khác mà chim yến tiêu diệt là rất lớn

Vì vậy, chim yến là loài thiên địch rất quý, là trợ thủ cho sản xuất nông nghiệp bền vững bởi thức ăn của nó là các loại côn trùng: rầy nâu, rầy xanh đuôi đen, kiến vàng, mối, ruồi muỗi, các loại chân khớp… Hàng ngày chim yến cần mẫn săn bắt côn trùng từ sáng sớm cho đến tối mịt Sau khi nở, chim con ở lại tổ trong thời gian 43-45 ngày trước khi đủ lông đủ cánh sống đừi tự lập Chim yến có tuổi thọ từ 10 – 20 năm

Thế nhưng điểm đặc biệt nhất với loại chim yến này là tổ của chúng Đến mùa chúng cùng nhau làm tổ bằng những sợi nước bọt trắng và phớt hồng, gọi là tổ yến Tổ yến trông giống như bàn tay co lại, như hình dáng của 1/4 trái banh có đường kính 3-5 cm Một bên tổ được gắn vào tường (tường trong động đá đối với yến hoang dã hoặc thân gỗ nhân tạo trong các trang trại/nhà nuôi yến), bên kia tổ là nơi yến đậu Còn phần trong tổ là nơi đựng trứng hoặc chỗ ở của chim con

Tuy nhiên, chất liệu cấu thành tổ yến mới chính là đặc tính phân biệt chim yến với những loại chim khác trên thế giới Ngay sau khi giao hợp, chúng tự rút ra những sợi nước dãi (nước bọt) dài và mọng ra khỏi những tuyến nước bọt bên dưới lưỡi Chính những sợi bọt này đóng một vai trò quan trọng trong việc làm tổ

Tổ chim yến được xây trong mùa sinh sản và do con trống xây trong 35 ngày Tổ yến bao gồm nhiều phiến mỏng được dệt từ nhiều sợi tơ bằng nước bọt chim yến và bện vào nhau Theo nghiên cứu của các nhà khoa học Hồng Kông, chất lượng tổ yến trong nhà không thua gì tổ yến ngoài đảo Yến nuôi trong nhà mỗi năm

có thể cho đến 04 đợt tổ, trong khi yến ở ngoài đảo chỉ cho 01 - 02 đợt Tổ chim yến làm lần đầu kéo dài trong 4 tháng, bị thợ yến khai thác, chim lại làm tổ lần 2, 3 khoảng 1 tháng Tổ yến thường có màu trắng hoặc hồng, đỏ

Theo các nhà khoa học thì màu sắc của tổ không liên quan đến bản thân con chim bố mẹ mà chủ yếu là do môi trường Tổ yến Khánh Hoà có khối lượng nhỏ hơn tổ yến Bình Ðịnh và Ðà Nẵng Ở Bình Ðịnh, xí nghiệp khai thác yến sào Quy Nhơn khai thác lần đầu vào tháng 4 Mỗi năm bình quân thu hoạch 3 lần, thông thường ở mỗi hang yến có khoảng 2.000 - 3.000 tổ Hang càng ít tổ thì mật độ tổ yến cách nhau càng thưa, cũng như loài ong, khoảng cách của tổ yến trong mỗi hang cho thấy loài chim yến cũng khá kỷ luật trong việc xây dựng quy hoạch nơi ăn chốn ở của mình

1.1.1.3 Sự phân bố địa lý của chim yến ở Việt Nam và trên thế giới

Các loài yến phân bố rộng khắp trên thế giới trong khu vực ôn đới và nhiệt đới, nhưng khi tới mùa đông thì các loài yến sống ở vùng ôn đới di trú về vùng

nhiệt đới Chim yến có tổ ăn được chỉ tập trung ở Sri Lanka, tây nam Ấn Ðộ hoặc Indonesia, Malaysia, Brunei, Philippines, Campuchia và Việt Nam.

Hình 1.2 Bản đồ phân bố của chim yến tại các tỉnh miền Trung và miền Nam

Ở nước ta, chim yến làm tổ ở các đảo trong Vịnh Hạ Long, Quảng Bình, Ðà Nẵng (Cù Lao Chàm), Quảng Ngãi (Sa Huỳnh), Bình Ðịnh (bán đảo Phương Mai), Khánh Hoà, Phan Rang, Kiên Giang và Vũng Tàu, Côn Ðảo, Long An, Tiền Giang, Bạc Liêu, Cà Mau… Ước tính số lượng chim yến hiện nay lên đến hàng triệu con

1.1.2 Tiềm năng kinh tế

Xuất hiện và phát triển tại Việt Nam từ 7 năm nay, nghề nuôi yến đang trở thành một nghề mang lại thu nhập cao cho nhiều hộ dân và doanh nghiệp Tại hội

thảo “Chim Yến: Nguồn lợi không tự nhiên mà có” diễn ra sáng 19/20008 tại thành

phố Hồ Chí Minh, nhiều chuyên gia đánh giá đây là nghề có tiềm năng lớn trong tương lai tại Việt Nam do nguồn cung hiện vẫn chưa đáp ứng được lượng cầu

Từ lâu, một số hộ dân tại Tiền Giang, Quảng Ngãi đã đưa chim yến vào nuôi, đến năm 2005, nhiều doanh nghiệp tư nhân đã nhanh chóng phát triển nghề nuôi yến Năm 2005, sản lượng yến khai tác tại Việt Nam đạt khoảng 3,5 tấn Đến năm

2009 sản lượng này tăng lên 4,5 tấn

Chất lượng sản phẩm từ nghề nuôi chim yến tại Việt Nam được đánh giá cao trên thị trường trong và ngoài nước Hiện tại, giá trị tổ yến được sánh như "vàng trắng", giá của tổ yến nhà này đang dao động từ 1400 - 1800 USD/kg (cao hơn cả bạc là 1.100 USD/kg) Tuy giá cao nhưng hiện tại cung không đáp ứng đủ cầu

Tiềm năng nuôi chim yến tại Việt Nam đang rất lớn Tuy nhiên, do một số điều kiện mà nghề nuôi yến của chúng ta còn bị hạn chế trong khi thị trường tiêu thụ đang được mở rộng thì sản xuất của chúng ta chưa theo kịp Giá của các sản phẩm này tăng nhanh trong vòng 2 năm qua”, ông Lê Danh Hoàng, Giám đốc điều hành Công ty Chấn Hưng (trung tâm yến sào Hoàng Yến) nói

Để thành công trong nghề nuôi chim yến, ngoài việc nắm vững kiến thức về

kỹ thuật, người nuôi cần lựa chọn địa điểm tốt cho việc xây dựng nhà yến Hiện nay

có khoảng hàng ngàn nhà nuôi yến với tỉ lệ chim vào làm tổ từ 60-70% Phó giáo

sư, tiến sĩ Nguyễn Khoa Diệu Thu cho rằng tình hình nuôi yến của nước ta đang gần giống với Malaysia năm 2001 Nếu được chú trọng đầu tư đúng cách, nghề nuôi chim yến sẽ rất có tiềm năng phát triển và mang lại nguồn thu lớn cho đất nước

Nuôi chim yến trong nhà đang mở ra triển vọng mới cho Việt Nam, loại

“vàng trắng” thiên nhiên này có khả năng xuất khẩu mang về hàng trăm triệu đô la

Mỹ Các nước Indonesia, Malaysia, Thái Lan phát triển thành ngành công nghiệp nuôi chim yến thu lợi khổng lồ Tại hội thảo khoa học "Nuôi yến trong nhà" do Viện khoa học công nghệ Phương Nam tổ chức, các chuyên gia khẳng định đầu tư nuôi chim yến đúng quy trình kỹ thuật thì khả năng thành công cao hơn thất bại

PGS.TS Huỳnh Văn Hoàng, viện trưởng Viện khoa học công nghệ Phương Nam cho biết, Việt Nam có nhiều thuận lợi và tiềm năng phát triển nghề nuôi chim yến trong nhà như các nước Indonesia, Malaysia, Philippines hay Thái Lan Hiện Indonesia có trên 200.000 căn nhà yến, Thái Lan có trên 70.000, Malaysia có trên 35.000… trong khi Việt Nam hiện chỉ có khoảng 3.000 - 5.000 căn quy mô nhỏ lẻ,

tự phát Sản lượng tổ yến của Indonesia 105 tấn, Thái Lan 35 tấn, Malaysia 12 tấn… Việt Nam hiện có khoảng 4,5 tấn, trong đó Công ty yến sào Khánh Hòa chiếm 70% nhưng chủ yếu là tổ yến tự nhiên, thu hoạch từ các đảo

TS Lê Võ Định Tường (Viện công nghệ Hóa học) khẳng định, chim yến là đặc sản độc quyền của vùng biển Đông Nam Á, loài chim yến làm tổ có giá trị kinh

tế cao chỉ có vùng biển này vì vậy các nước trong vùng tận dụng ưu thế đẩy mạnh phát triển nghề nuôi chim yến xuất khẩu Tại Malaysia, chính phủ cho xây dựng

những vùng nuôi chim yến tập trung quy mô công nghiệp, xây dựng “chung cư chim yến” đến 20 tầng vừa khai thác yến vừa bán trả góp cho các nhà đầu tư

Nuôi chim yến không cần quỹ đất lớn, có thể xây nhà nuôi ở vùng đất kém màu mỡ, không sản xuất nông nghiệp được Thức ăn chim yến là các loại côn trùng nên góp phần tiêu diệt loài gây hại Một cặp chim yến có khả năng cho thu nhập 1 triệu đồng/năm, vòng đời chim yến là 12 năm, tương ứng 12 triệu đồng Anh Nguyễn Trọng Nghĩa (Bình Thuận) cho biết, một căn nhà yến diện tích 5 x 20 m, thiết kế 2 tầng và đầu tư thiết bị kỹ thuật khoảng 1 - 1,5 tỷ đồng (tùy loại), nếu đúng yêu cầu kỹ thuật thì năm đầu tiên có thể thu hoạch 1 kg/tháng Sau 3 năm, khả năng

có thể thu hoạch 2 - 5 kg/tháng (24 - 60 kg/năm), với giá thu mua yến thô tại nhà khoảng 35 triệu đồng/kg, nhà đầu tư có thể thu về 840 triệu đến 2,1 tỷ đồng/năm (thu hồi được vốn và có lãi) Các chuyên gia đều cho rằng, Việt Nam có điều kiện nuôi chim yến cho tổ chất lượng tốt hơn cả Indonesia và Malaysia Nhiều nhà đầu

tư Malaysia, Đài Loan đã và đang tìm cách sang xây nhà yến tại Việt Nam (trong đó

có một số căn tại Cần Giờ (TP.HCM), Kiên Giang đang cho thu hoạch tốt)

1.1.3 Phân loại chim yến

Vực ( domain) : Eukaryota

Giới ( regnum) : Animalia

Ngành (phylum) : Chordata

(không phân hạng) Craniata

Phân ngành ( subphylum) : Vertrbrata

Phân thứ ngành ( infraphylum) : Gnathostomata

Liên lớp ( superclass) : Tetrapoda

Lớp (class) : Aves

Phân lớp (subclass) : Neornithes

Phân thứ lớp ( infraclass) : Neoaves

(không phân hạng) Cypselomoephae

Bộ ( ordo) : Apodiformes

Họ ( famillia) : Apodidae

1.1.4 Yến sào

Hình 1.3 Tổ Yến

Yến sào hay tổ chim Yến là tên một loại thực phẩm - dược phẩm nổi tiếng được làm bằng tổ chim yến Yến sào là một thứ đặc sản của tự nhiên được con người khai thác từ khoảng thế kỷ 16

Khi vào mùa làm tổ, yến bố mẹ chọn được vị trí ưng ý cho mình, sau đó làm dấu và tiến hành xây tổ Khi tuyến nước bọt của chim tiết ra chất sợi trong suốt, chúng dùng lưỡi của mình để xây tổ lên vách đá Nước bọt vừa ra khỏi miệng, gặp gió sẽ khô cứng ngay Chim làm tổ trong một thời gian nhất định Vào khoảng tháng ba, tháng tư âm lịch tuyến nước bọt của chim yến bố mẹ phát triển mạnh, lượng nước bọt tiết dịch nhiều, do đó kích thước tổ yến lớn lên nhanh chóng Khi chiếc tổ đã hoàn thành, chim bố mẹ nằm vào lòng tổ để quẹt nước bọt lên mép tổ, sau đó là lòng tổ tạo ra một lớp xốp mịn để đẻ trứng Tổ chim yến làm lần đầu kéo dài trong 4 tháng, bị thợ yến khai thác, chim lại làm tổ lần 2, 3 khoảng 1 tháng Tổ yến thường có màu trắng hoặc hồng

Đây là món cao lương mỹ vị của các quốc gia Đông Á như Nhật Bản, Triều Tiên, Trung Quốc, Việt Nam và nhiều quốc gia khác Ở Việt Nam, yến sào được xếp vào hàng Bát Trân Món súp yến sào được mệnh danh là "món trứng cá Cavia của phương Đông" Món yến sào đã được người Trung Hoa tiêu thụ từ cách đây 400 năm Món súp yến sào trông giống như chất keo a dao được nấu với gia vị

có bổ sung thêm một ít tinh bột, đường

Trên thế giới có hàng trăm loài chim yến Riêng chim yến cho tổ ăn được chỉ

có 04 loài, để nuôi trong nhà và khai thác tổ yến chỉ có 02 loài là yến tổ trắng (Aerodramus Fuciphagus) và yến hàng (Aerodramus Geranicus), yến hàng là loại được nuôi phổ biến

Tổ yến được chia ra làm 4 loại: yến huyết, yến quang, yến thiên, và yến địa

1.1.5 Giá trị dinh dưỡng của tổ chim yến

Tổ yến là một loại glycoprotein tự nhiên với giá trị dinh dưỡng 345 kilocalo/100 gram Khoa học hiện đại đã giải mã được thành phần trong tổ yến Yến sào chứa hàm lượng protein cao (45-55%), trong đó chứa 18 loại axit amin, một số axit amin có hàm lượng rất cao như aspartic acid (4,69%), proline (5,27%) có tác dụng tái tạo tế bào cơ, các mô và da; có những axit amin không thể thay thế như cystein, phenylalamine (4,50%) có tác dụng tăng cường trí nhớ, tăng dẫn truyền xung động thần kinh, tăng hấp thu vitamin D từ ánh sáng mặt trời; tyrosine và acid syalic (8,6%) có tác dụng phục hồi nhanh khi cơ thể bị nhiễm xạ hay tổn thương hồng cầu, glucosamine giúp phục hồi sụn bao khớp trong những trường hợp thoái hóa khớp, lipit chỉ có 0,3% và có sự hiện diện của nhiều nguyên tố vi đa lượng, vitamin…

Yến sào chứa 31 nguyên tố vi lượng cần thiết cho sự phát triển của trẻ và bồi dưỡng cho người già Yến sào giàu canxi và sắt, có các nguyên tố có lợi cho thần kinh và trí nhớ như mangan, brôm, đồng, kẽm Có nguyên tố kích thích tiêu hóa như crôm, nguyên tố chống lão hóa, chống tia phóng xạ như se-len Yến sào chứa đường galactose mà không có chất béo Các cuộc nghiên cứu cho thấy tổ yến có chứa một hàm lượng như nhân tố tăng trưởng da Phụ nữ muốn có làn da đẹp, giữ mãi nét thanh xuân nên ăn yến bởi có chứa threonine là chất hình thành elastine và collagene của da, giúp da không bị lão hóa Hiện nay yến sào đang được nghiên cứu điều trị nhiễm HIV-AIDS vì nó kích thích sinh trưởng những tế bào bạch cầu

có tác dụng sinh kháng thể Nó cũng được khuyên dùng cho bệnh nhân ung thư sau

xạ trị, bệnh nhân sau mổ giúp cơ thể phục hồi nhanh

Chủ yếu là tổ yến được coi như một chất liệu làm chậm lại tiến trình lão hóa, một tác nhân làm trẻ lại Ngoài ra tổ yến còn có tác dụng làm giảm cơn đau phổi, tiêu đàm và giảm ho Theo kết quả của những cuộc nghiên cứu mới đây, người ta tìm thấy trong tổ yến có loại chất đạm đặc biệt Đấy là loại chất đạm có hoạt tính sinh học có tác dụng phục hồi đối với cơ thể con người Nước trích ra từ tổ yến cũng có thể trực tiếp kích thích sự tăng trưởng hay tái sinh tế bào và gia tăng tác dụng của sự phân bào

Ngoài ra chất đạm hoạt tính trong tổ yến còn được dùng làm chất bổ dưỡng cho những người bị yếu hệ thống tiêu hóa (ví dụ: người cao tuổi) và một số người rất cần sự phát triển và tái sinh tế bào nhanh chóng (ví dụ: phụ nữ có thai, trẻ em đang trong thời kỳ phát triển) Một trong những cuộc nghiên cứu mới được công bố gần đây đã khẳng định tổ yến có chứa một hàm lượng cao chất đạm-đường có thể hòa tan trong nước Chất này có tác dụng giúp việc phân bào trong hệ thống miễn nhiễm của con người

1.1.6 Giá trị thị trường của tổ chim yến

Tổ yến có giá trị kinh tế rất cao, hiện nay giá trị thị trường từ 3.000 đến 4.000 USD/kg yến đảo, 1.400-1.800 USD/kg yến nhà Yến sào là một trong những món ăn được làm từ động vật đắt đỏ nhất, ở Hồng Kông giá của một bát canh tổ yến khoảng 60 USD

1.1.7 Tình trạng khai thác yến sào ở Việt Nam và trên thế giới

Tổ yến đã trở thành một mặt hàng bổ dưỡng đắt nhất, chính vì lẽ đó mà từ sau năm 1997, nghề nuôi yến đã bùng nổ thực sự tại các nước Đông Nam Á Tính đến tháng 5/2005, Indonesia đã trở thành nước sản xuất tổ yến nhiều nhất thế giới với hơn 200.000 nhà yến (khoảng 120 tấn), Thái Lan đứng thứ 2 với hàng trăm ngàn nhà yến (40 tấn); Malaysia đứng thứ 3 với 10.000 nhà yến (20 tấn) Riêng Malaysia, trong vòng 5 năm (2001-2005), số nhà yến tăng lên 10 lần (từ 1.000 lên 10.000), sản lượng tăng gấp 2 lần (từ 10 tấn lên 20 tấn) Tư liệu thống kê mới đây của 8 thành phố phía bắc Malaysia cho thấy, mỗi nơi có từ 300-800 cửa hiệu chuyển

sang nuôi yến Năng suất một nhà yến hai tầng có tổng diện tích 262 m2 là 2.800 tổ/3 tháng (112 kg/năm) Còn ở Thái Lan, các vùng nuôi yến chính nằm dọc bờ biển phía Tây Nam: Surat Thani, Sri Thamarat, Phatthalung, Samut Sakhon… Tại thị trấn Pak Phanang gần khu rừng ngập mặn lớn nhất Thái Lan, chỉ trong vòng 5-7 năm cũng đã hình thành một “phố chim yến”, hiện nay đã có trên 400 nhà nuôi yến kết hợp với phát triển du lịch

Hình 1.4 Khai thác Yến trong hang

Sản xuất tổ yến ở Việt Nam dựa vào các hang động tự nhiên, tập trung ở 3 tỉnh Khánh Hòa, Quảng Nam và Bình Định, với tổng sản lượng khoảng 3,7-3,8 tấn/năm Gần đây, đã có thêm một số địa phương thành công trong nghề nuôi yến lấy tổ như: Đà Nẵng, Nha Trang (Khánh Hoà), Tuy Hoà (Phú Yên), Ninh Thuận,

Gò Công (Tiền Giang) và phát hiện ra nhiều vùng chim yến kéo đến làm tổ trong nhà ở Quảng Ngãi, Kiên Giang, Bạc Liêu, Cà Mau, Tiền Giang, Tp Hồ Chí Minh… Hiện nay, dự án nuôi chim yến lấy tổ đã đạt được những kết quả khả quan Một số

cơ sở tư nhân cũng đã thành công trong quản lý nhà yến cũ, xây dựng nhà yến mới

và ấp nở nhân tạo

1.1.8 Phân loại yến sào

1.1.8.1 Phân loại theo nguồn gốc

 Tổ Yến Hoang/Trong Ðộng (Wild/Cave Nest)

Hai loài yến thường sống trong các hang động là loài yến Fuciphaga (dân gian gọi là yến hàng) và yến Maxima (yến tổ đen) Nhưng chỉ có loại tổ yến của yến

hàng là được biết dưới tên Wild/Cave Nest (Yến Hoang/Trong Ðộng) trên thị trường Có thể vì do tính chất nguy hiểm của việc lấy tổ yến trong hang động nên loại tổ yến này thường có giá cao nhất so với các loại tổ yến khác trên thị trường

Tổ yến trong động, với những điều kiện tự nhiên trong động, thường có hình dạng giống như 1 cái chén, thân dầy và chân cứng Hình dạng tổ giống như chén sẽ giúp bảo vệ trứng hoặc yến non không bị các loài vật khác ăn mất và thời tiết Chân tổ yến cần cứng để có thể gắn chặt vào tường vì các hang động thường có độ ẩm cao

Tổ yến loại này được tìm thấy ở Việt Nam, Thái Lan, Malaysia và Indonesia

 Tổ Yến Trong Nhà (House Nest)

Tổ Yến hang của loài yến Esculanta là loại tổ yến thường thấy ở các nhà nuôi yến trong nhà Việc nuôi yến đòi hỏi vốn đầu tư rất lớn, thời gian dụ yến lâu dài và đặc biệt là không thể cho yến ăn bằng thức ăn nhân tạo do bản chất chim yến hoang đã và chỉ có thể bắt công trùng khi đang bay Tùy theo màu sắc tổ yến, tổ yến trong nhà thường là trắng ngà, tổ yến có thể được thu hoạch từ 1-4 lần một năm Chim yến sinh sản quanh năm

1.1.8.2 Phân loại theo màu sắc

Lý do tại sao tổ yến có màu khác nhau vẫn còn là một đề tài tranh luận Theo dân gian Việt Nam người ta tin rằng những con chim yến già hoặc chim Yến trong mùa thức ăn thiếu phải dùng máu của mình hòa cùng nước bọt để xây tổ Điều này

lý giải cho mầu sắc đỏ hoặc hồng cũng như độ nở kém của Yến huyết so với Bạch yến Tuy nhiên nhiều giả thuyết về điều kiện nhiệt độ, độ ẩm hoặc thức ăn của yến tạo ra yến huyết vẫn đang được nghiên cứu Ngoài ra khi tổ Bạch yến được làm trên các vách đá có màu đỏ và thấm nước rỉ ra từ các khe đá cũng tạo ra màu đỏ của tổ Yến Tuy nhiên loại Yến huyết do vách đá này có độ nở khi ngâm nước tương

đương với Bạch yến (tức 7 – 9 lần)

 Huyết Yến (Blood Nest)

Ðây là loại tổ yến có màu đỏ tươi và là loại có giá cao nhất trong số các màu

vì hiếm hoi và có nhu cầu tiêu thụ cao Không phải cơ sở sản xuất nào cũng có loại

tổ yến này Và nếu có đi chăng nữa thì loại huyết yến cũng chỉ có thể thu hoạch 1-2

lần trong năm với tỉ lệ rất nhỏ mà thôi Số lượng Huyết Yến và Hồng Yến chiếm chưa đầy 10% tổng sản lượng tổ yến trên thị trường thế giới

 Hồng Yến (Pink Nest)

Giống như Huyết Yến về giá cả và sự hiếm hoi, Hồng yến có màu cam nhưng màu sắc có thể thay đổi từ màu vỏ quýt đến màu vàng lòng đỏ trứng gà Màu càng đậm thì giá càng cao

 Bạch Yến (White Nest)

Bạch Yến là loại tổ yến thông dụng nhất trên thị trường Mỗi năm có thể thu hoạch 3-4 lần Số lượng Bạch Yến (bao gồm cả 3 loài yến kể trên) bán trên thị trường thế giới chiếm khoảng 90% tổng số lượng tổ yến trên thị trường

1.1.8.3 Phân loại theo quan niệm dân gian

Nghề khai thác yến tại Việt Nam đã có hàng trăm năm tuổi và đóng góp không nhỏ vào nguồn thu của các địa phương được thiên nhiên ban tặng sản vật này Những người thợ yến và buôn bán yến chuyên nghiệp thường phân biệt theo đẳng cấp như:

- Huyết (Đỏ, do vị trí chim yến làm tổ, tổ dần dần chuyển sang màu đỏ)

- Hồng (Màu hồng, do vị trí chim yến làm tổ, tổ dần dần chuyển sang màu hồng)

- Quan (To, khoảng 10g trở lên)

- Thiên (Ở trên cao, tổ trắng, từ 8 – 10g)

- Bài (Yến nhỏ hơn 6- 7g)

- Địa (Nằm dưới cùng của vách núi, đen, bẩn)

- Vụn (Tổ yến bị vỡ do khai thác hoặc vận chuyển)

1.1.9 Phân biệt tổ yến thật và giả

Ðể tránh "tiền mất tật mang", các chuyên gia đã có một số kinh nghiệm như sau: Cần quan sát tổ yến thật bằng mắt một lần trong đời Thông thường yến sào vẫn được bán trong các siêu thị lớn, hoặc nhà hàng, khách sạn và cơ sở sản xuất, chế biến yến sào Về màu sắc, yến thật là loại yến trắng màu đục ngà, có lúc hơi ngả

màu vàng vì ngấm nước biển Loại tổ yến thật thường có màu vàng da cam, màu đỏ, hoặc đỏ da cam Tổ yến giả thường có màu sắc trắng, trong đó được làm bằng chất aga (rau câu) hoặc bằng keo Algenate trộn lẫn với tinh bột mì (sắn) Về mùi vị, tổ yến thật có mùi vị tanh, mùi ẩm mốc Tổ yến giả rất khó đạt được thứ mùi vị đặc trưng này, chúng thường có mùi lạ, hăng hắc hoặc mùi khác với yến thật Khách hàng khi mua yến cần thử bằng cách ngâm một ít yến vào nước Nếu tổ yến giả các loại tinh bột, khi gặp nước sẽ nhão ra Tổ yến thật khi ngâm hoặc nấu đảo không tan nhão, mà từng sợi yến vẫn nguyên vẹn Một cách nữa là lấy tổ yến cho vào dung dịch iốt, nếu là giả sẽ chuyển sang màu xanh, do tinh bột tác dụng với iốt biến thành màu xanh Ðối với yến huyết - yến sào có màu đỏ, hồng thì khi nhúng một ít vào nước trà (chè xanh) nếu gặp yến giả nhuộm oxyt sắt thì chúng sẽ phản ứng hoá học

và đen sẫm lại Hoặc khi ngâm trong nước, tổ yến giả nhuộm phẩm màu sẽ bị mất màu, tan trong nước, còn tổ yến thật dù có đem nấu chín trong nước sôi 1000C vẫn còn nguyên màu sắc

1.2 Tổng quan về vi sinh vật

Vi sinh vật là thuật ngữ khoa học chung để chỉ tất cả cơ thể sống và tổ chức sống có kích thước nhỏ bé, muốn quan sát được phải dùng kính hiển vi Vi sinh vật phân bố rộng rãi trong thiên nhiên, trong đất, trong nước và trong không khí

Nguồn dinh dưỡng của vi sinh vật hết sức đa dạng, có thể nói rằng hầu hết các chất trong thiên nhiên, từ một số chất vô cơ đơn giản đến các chất hữu cơ phức tạp đều có thể bị chuyển hóa bởi các loài vi sinh vật tương ứng

Vi sinh vật vô cùng phong phú cả về thành phần và số lượng Chúng bao gồm các nhóm khác nhau có đặc tính khác nhau về hình dạng, kích thước, cấu tạo

và đặc biệt khác nhau về đặc tính sinh lý, sinh hoá

Dựa vào đặc điểm cấu tạo tế bào, người ta chia ra làm 3 nhóm lớn:

- Nhóm chưa có cấu tạo tế bào bao gồm các loại virus

- Nhóm có cấu tạo tế bào nhưng chưa có cấu trúc nhân rõ ràng (cấu trúc nhân nguyên thuỷ) gọi là nhóm Procaryotes, bao gồm vi khuẩn, xạ khuẩn và tảo lam

- Nhóm có cấu tạo tế bào, có cấu trúc nhân phức tạp gọi là Eukaryotes bao gồm nấm men, nấm sợi , một số động vật nguyên sinh và tảo đơn bào

Hoạt động sống của vi sinh vật có vai trò rất quan trọng trong các chu trình chuyển hóa vật chất trong thiên nhiên Vì vậy chúng rất cần thiết đối với sự vận động của hệ sinh thái Vi sinh vật đóng vai trò vô cùng quan trọng trong thiên nhiên cũng như trong cuộc sống của con người Sự tồn tại, sinh trưởng và phát triển của vi sinh vật có mối liên hệ mật thiết đối với hoạt động sống của con người Ngày nay vi sinh vật đã được ứng dụng hết sức rộng rãi trong hàng loạt lĩnh vực khác nhau như trong công nghiệp thực phẩm, hóa học, y học, nông nghiệp và bảo vệ môi trường

Tuy vậy, vẫn có những vi sinh vật có thể gây hại cho môi trường, động vật

và kể cả con người Một số là tác nhân gây bệnh, gây ra các bệnh như: uốn ván, sốt

thương hàn, tả, gây ra bởi các loài vi khuẩn như Streptococcus, Staphylococcus, Salmonella hay nhiều loài Gram âm khác Trong bài này, chúng tôi tìm hiểu về

những vi sinh vật trên đối tượng chim yến nuôi để có được cái nhìn tổng quan nhất

về những ảnh hưởng của nó đến đối tượng này

1.2.1 Sự sinh trưởng của vi sinh vật và các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt động sống của vi sinh vật

Sự sinh trưởng quần thể vi sinh vật được nghiên cứu bằng cách phân tích đường cong sinh trưởng trong một môi trường nuôi cấy vi sinh vật theo phương pháp nuôi cấy theo mẻ (batch culture) hoặc trong một hệ thống kín Trong một mẻ nuôi cấy thích hợp vi khuẩn thường tăng trưởng theo 4 giai đoạn chính là :

 Giai đoạn tiềm phát (Lag phase) : Đây là thời gian tính từ khi vi khuẩn được cấy vào môi trường cho đến khi chúng bắt đầu sinh trưởng Trong giai đoạn này, vi khuẩn phải thích nghi với môi trường mới, các tế bào chưa phân cắt nhưng thể tích

và khối lượng tăng lên rõ rệt do có sự tăng các thành phần mới của tế bào, chúng tổng hợp mạnh mẽ DNA và các enzyme chuẩn bị cho sự phân bào Giai đoạn tiềm phát dài hay ngắn liên quan đến bản thân từng loại vi sinh vật và tính chất của môi trường

 Giai đoạn logarit (Log phase) hay pha chỉ số (Exponential Phase) : Trong giai đoạn này vi sinh vật sinh trưởng và phân cắt với nhịp độ tối đa so với bản tính

di truyền của chúng nếu gặp môi trường và điều kiện nuôi cấy thích hợp Nhịp độ sinh trưởng của chúng là không thay đổi trong suốt giai đoạn này, các tế bào phân đôi một cách đều đặn, số lượng tế bào tăng theo lũy thừa, thời gian thế hệ đạt tới hằng số, quá trình trao đổi chất diễn ra mạnh mẽ nhất

 Giai đoạn ổn định (stationary phase) hay pha cân bằng : Qua giai đoạn Logarit sự sinh trưởng của quần thể cuối cùng sẽ dừng lại, tốc độ sinh trưởng cũng như trao đổi chất của vi khuẩn giảm, đường cong sinh trưởng đi ngang Nồng độ vi khuẩn trong giai đoạn ổn định thường vào khoảng 109/ml Số lượng tế bào chết cân bằng với số lượng tế bào sinh ra Một số nguyên nhân khiến vi khuẩn chuyển qua pha cân bằng như : chất dinh dưỡng cạn kiệt, nồng độ oxi giảm ( đối với vi khuẩn hiếu khí ), các chất độc tích lũy, pH thay đổi, …

 Giai đoạn tử vong (Death phase) : Việc tiêu hao chất dinh dưỡng và việc tích lũy các chất thải độc hại sẽ làm tổn thất đến môi trường sống của vi sinh vật, làm cho số lượng tế bào sống giảm xuống, số tế bào chết vượt số tế bào sinh ra Đó

là đặc điểm của giai đoạn tử vong Giống như giai đoạn logarit, sự tử vong của quần thể vi sinh vật cũng có tính logarit (tỷ lệ tế bào chết trong mỗi giờ là không đổi) Một số vi khuẩn chứa các enzyme tự phân giải tế bào Số khác có hình dạng tế bào

bị thay đổi do thành tế bào bị hư hại nhiều

Nếu lấy thời gian nuôi cấy là trục hoành và lấy số logarit của số lượng tế bào sống làm trục tung sẽ có thể vẽ được đường cong sinh trưởng của các vi sinh vật sinh sản bằng cách phân đôi Đường cong này có 4 giai đoạn (phases) khác nhau

Sự sinh trưởng và phát triển của vi sinh vật liên quan chặt chẽ với các điều kiện môi trường bên ngoài, chịu ảnh hưởng rất lớn đối với các nhân tố vật lý, hóa học của môi trường sống Các điều kiện này bao gồm hàng loạt các yếu tố tác động qua lại với nhau Các yếu tố môi trường có thể ảnh hưởng thuận lợi hay bất lợi đến

vi sinh vật Ảnh hưởng bất lợi sẽ dẫn đến tác dụng ức khuẩn hoặc diệt khuẩn

Dưới tác dụng ức khuẩn của yếu tố môi trường, tế bào ngừng phân chia, nếu loại bỏ những yếu tố này khỏi môi trường, vi sinh vật lại tiếp tục sinh trưởng và phát triển Khi có mặt chất diệt khuẩn, vi sinh vật ngừng phát triển và chết nhanh chóng

Hình 1.5 Đường cong sinh trưởng của vi sinh vật

Tác động gây hại của các yếu tố bên ngoài lên tế bào vi sinh vật thể hiện ở những biến đổi sau :

 Phá hủy thành tế bào

 Biến đổi tính thấm của màng tế bào chất

 Thay đổi đặc tính keo của nguyên sinh chất

 Kìm hãm hoạt tính của các enzyme

 Hủy hoại quá trình sinh tổng hợp

Hiểu biết về ảnh hưởng của các nhân tố môi trường đối với sự sinh trưởng của vi sinh vật giúp ích rất nhiều cho việc khống chế vi sinh vật cũng như đối với việc nghiên cứu sự phân bố sinh thái của vi sinh vật

1.2.2 Một số vi sinh vật thường gặp trên động vật có lông vũ

Dựa trên một số tài liệu về hệ vi sinh vật trong đường ruột của động vật máu nóng, chúng tôi đưa ra một số loại vi sinh vật thường gặp nhất:

 Tổng số vi khuẩn hiếu khí

Hình 1.6 Tổng số vi khuẩn hiếu khí qua các nồng độ pha loãng

Vi khuẩn hiếu khí là vi khuẩn tăng trưởng và hình thành khuẩn lạc trong điều kiện có sự hiện diện của oxi phân tử

 Coliforms

Hình 1.7 Coliforms

Coliforms là những trực khuẩn gram âm, không sinh bào tử, hiếu khí hoặc kỵ

khí tùy ý, có khả năng lên men lactose sinh acid, sinh hơi ở 370C trong 24 – 48 giờ

Trong thực tế phân tích, Coliforms còn được định nghĩa là các vi khuẩn có khả năng

lên men và sinh hơi trong khoảng 48 giờ khi được ủ ở 370C trong môi trường canh Lauryl Sulphate (LSB) và canh Brilliant Green Lactose Bile Salt (BGBL) Nhóm

Coliforms hiện diện rộng rãi trong tự nhiên, trong ruột người và động vật Coliforms

được xem là nhóm vi sinh vật chỉ thị, số lượng hiện diện của chúng trong thực phẩm, nước hay các loại môi trường được dùng để chỉ thị khả năng hiện diện của

các vi sinh vật gây bệnh khác

 Escherichia Coli (E Coli)

Hình 1.8 Escherichia Coli

E.coli là trực khuẩn Gram âm, hiếu khí hoặc kị khí tùy ý Vi khuẩn này hiện

diện một cách tự nhiên trong ruột của chúng ta cũng như của thú vật Vi khuẩn

E.coli thường nhiễm vào đất, nước, thịt, rau, quả, sữa… từ phân của động vật Có cả hằng trăm chủng huyết thanh (serotypes) E.coli

Đa số đều là những chủng hiền, tuy nhiên cũng có vài chủng rất dữ, chẳng hạn

như E.coli 0157:H7 có thể được tìm thấy trong ruột và trong phân của các loài gia súc, đặc biệt là trong phân bò E Coli là một trong 4 chủng thuộc Coliforms tồn tại khá phổ biến trong tự nhiên, đặc biệt là đường tiêu hóa của người và động vật E Coli phát triển ở 440C có khả năng sinh Indol, acid, không sinh acetone, không dùng citrate làm nguồn carbon

 Staphylococcus aureus

Staphylococcus aureus là vi khuẩn hiếu khí hay kỵ khí tùy ý, hình cầu, gram

dương, có thử nghiệm coagulase, phản ứng Dnase, phosphatease dương tính, có khả năng lên men và sinh acid từ mannitol, trehalose, sucrose

Hình 1.9 Staphylococcus aureus

Staphylococcus aureus có mặt phổ biến ở mọi nơi, nhưng chủ yếu được phân

lập từ da và màng nhầy của người và động vật máu nóng

Staphylococcus aureus có khả năng chống chịu cao đối với các chất như :

Hg2Cl, Tellusite, Neomycin, Polymycin…

Staphylococcus aureus không sinh bào tử, không di động, lên men manniltol

sinh sắc tố vàng, chịu mặn (NaCl 7,5%) và có khả năng làm đông huyết tương

 Salmonella

Hình 1.10 Salmonella

Salmonella là trực trùng gram âm, hiếu khí và kỵ khí tùy ý, có khả năng di động,

không tạo bào tử, lên men glucose và mannitol sinh acid nhưng không lên men saccharose và lactose, không sinh indol, không phân giải urea, không có khả năng tách nhóm amine trừ tryptophane, hầu hết các chủng đều sinh H2S

Giống Salmonella là vi sinh vật đường ruột Enterobacteriaceae có hơn 2.400

kiểu huyết thanh

Salmonella kém đề kháng với điều kiện bên ngoài, bị phá hủy bởi quá trình tiệt

trùng bằng phương pháp Pasteur, tia bức xạ và đun sôi nấu kĩ Tuy nhiên

Salmonella có thể sống sót trong một thời gian dài ở các thực phẩm khô và ướp

lạnh Do đó khi làm tan thực phẩm đông lạnh vi khuẩn này dễ phát triển trở lại Chúng phát triển tốt ở nhiệt độ 60C – 420C, thích hợp nhất ở 350C – 370C, pH từ

6 – 9 và thích hợp nhất ở pH = 7,2 Ở nhiệt độ từ 180C – 400C vi khuẩn có thể sống đến 15 ngày Đun sôi nước 600C trong 10 phút hay 1000C trong 2 phút đã diệt được

hầu hết Salmonella Chúng bị tiêu diệt bởi phenol 5%, cloramin1% và clorua thủy

ngân 0,2% trong 5 phút

Sự xâm nhiễm Salmonella vào cơ thể vật chủ và gây bệnh được thực hiện chủ

yếu qua đường tiêu hoá với biểu hiện phổ biến nhất là gây tiêu chảy, đôi khi là thương hàn và phó thương hàn

Hình 1.11 Vibrio Cholera và Vibrio parahaemolyticus

Vibrio là vi sinh vật gram âm, hình que, hai đầu không đều nhau tạo thành hình

dấu phẩy, di động, sống kị khí tùy ý, có phản ứng catalase và oxidase dương tính, lên men glucose nhưng không sinh hơi, không sinh H2S Trừ Vibrio Cholerae hiện

diện trong nước ngọt, tất cả các loài Vibrio đều cần muối để tăng trưởng và thường

xuyên được phân lập từ các vùng nước ven biển

 Nấm men và nấm mốc:

Nấm men và nấm mốc là nhóm vi sinh vật rất đa dạng, đây là nhóm có nhân thật, có vách tế bào là lớp vỏ chitin, có nhân và các bào quan khác Tất cả các loài nấm men và nấm mốc đều thuộc nhóm vi sinh vật dị dưỡng, chúng cần nguồn carbon hữu cơ để cung cấp năng lượng từ môi trường bên ngoài Hầu hết nấm men

và nấm mốc đều thuộc nhóm vi sinh vật ưa mát, nhiệt độ thích hợp cho chúng phát triển là khoảng 20 – 280C, chỉ một số ít trong số này ưa lạnh hay ưa nóng

Hình 1.12 Nấm Saccharomyces Cerevisiea

Có thể phân biệt nấm men và nấm mốc theo các khái niệm đơn giản sau: nấm mốc

là vi nấm dạng sợi, sinh bào tử hoặc sinh khuẩn ty; nấm men là những tế bào đơn tính, phát triển theo kiểu nảy chồi, thỉnh thoảng có thể tồn tại ở dạng khuẩn ty giả trong đó các tế bào kết nhau thành chồi Đơn vị để hình thành khuẩn lạc của nấm mốc

và nấm men là mầm để tạo thành khuẩn lạc khi nuôi cấy trong môi trường

1.3 Tổng quan về kháng sinh

1.3.1 Đặt điểm chung về chất kháng sinh

Kháng sinh là một nhóm thuốc thiết yếu trong y học hiện đại Nhờ các thuốc kháng sinh mà y học đã có thể loại bỏ được các dịch bệnh nguy hiểm như dịch hạch,

tả, thương hàn và điều trị hiệu quả nhiều loại bệnh gây ra bởi các vi khuẩn

Thuật ngữ "chất kháng sinh" lần đầu tiên được Pasteur và Joubert (1877) sử dụng để mô tả hiện tượng kìm hãm khả năng gây bệnh của vi khuẩn Bacillus

anthracis trên động vật nhiễm bệnh nếu tiêm vào các động vật này một số loại vi

khuẩn hiếu khí lành tính khác Babes (1885) đã nêu ra định nghĩa hoạt tính kháng khuẩn của một chủng là đặc tính tổng hợp được các hợp chất hoá học có hoạt tính kìm hãm các chủng đối kháng

Mặc dù vậy, trong thực tế mãi tới năm 1929 thuật ngữ " Chất kháng sinh"

mới được Alexander Fleming mô tả một cách đầy đủ và chính thức trong báo cáo chi tiết về penicillin Thập kỷ 40 và 50 của thế kỷ XX đã ghi nhận những bước tiến vượt bậc của ngành công nghệ sản xuất kháng sinh còn non trẻ

1.3.2 Định nghĩa chất kháng sinh

Chất kháng sinh được hiểu là các chất hoá học xác định, không có bản chất enzyme, có nguồn gốc sinh học (trong đó phổ biến nhất là từ vi sinh vật), với đặc tính là ngay ở nồng độ thấp (hoặc rất thấp) đã có khả năng ức chế mạnh mẽ hoặc tiêu diệt được các vi sinh vật gây bệnh mà vẫn đảm bảo an toàn cho người hay động vật được điều trị

1.3.3 Đơn vị kháng sinh

Năng lực tích tụ kháng sinh của chủng hay nồng độ chất kháng sinh thường được biểu thị bằng một trong các đơn vị là: mg/ml, g/ml, hay đơn vị kháng sinh

UI/ml (hay UI/g, International Unit)

Đơn vị của mỗi kháng sinh được định nghĩa là lượng kháng sinh tối thiểu pha trong một thể tích quy ước dung dịch có khả năng ức chế hoàn toàn sự phát triển của chủng vi sinh vật kiểm định đã chọn

1.3.4 Hoạt tính kháng sinh đặc hiệu

Hoạt tính kháng sinh đặc hiệu là đặc tính cho thấy năng lực kìm hãm hay tiêu diệt một cách chọn lọc các chủng vi sinh gây bệnh, trong khi không gây ra các hiệu ứng phụ quá ngưỡng cho phép trên người hoặc động vật được điều trị

Đặc tính này được biểu thị qua hai giá trị là: Nồng độ kìm hãm tối thiểu

(Minimun Inhibitory Concentration - viết tắt là MIC) và nồng độ diệt khuẩn tối

thiểu (Minimun Bactericidal Concentration - viết tắt là MBC), xác định trên các đối

tượng vi sinh vật gây bệnh kiểm định lựa chọn tương ứng cho mỗi chất kháng sinh

1.3.5 Phổ kháng khuẩn của kháng sinh

Phổ kháng khuẩn của chất kháng sinh biểu thị số lượng các chủng gây bệnh

bị tiêu diệt bởi kháng sinh này Theo đó, chất kháng sinh có thể tiêu diệt được nhiều loại mầm bệnh khác nhau được gọi là chất kháng sinh phổ rộng, chất kháng sinh chỉ tiêu diệt được ít mầm bệnh là chất kháng sinh phổ hẹp

1.3.6 Cơ chế tác dụng của kháng sinh

Cơ chế tác dụng lên vi sinh vật gây bệnh (hay các đối tượng gây bệnh khác - gọi tắt là mầm bệnh) của mỗi chất kháng sinh thường mang đặc điểm riêng, tùy thuộc vào bản chất của kháng sinh đó, trong đó, những kiểu tác động thường gặp là:

 Làm rối loạn cấu trúc thành tế bào hay ức chế sự thành lập vách tế bào

 Rối loạn chức năng điều tiết quá trình vận chuyển vật chất của màng tế bào chất hay ức chế nhiệm vụ của màng tế bào

 Làm rối loạn hay ức chế quá trình sinh tổng hợp protein

 Rối loạn hay ức chế quá trình tổng hợp Acid Nucleic, hoặc tương tác đặc hiệu với những giai đoạn nhất định trong các chuyển hóa trao đổi chất (Hình 1.10)

Hình 1.13 Vị trí tác dụng chính của một số chất kháng sinh

1.3.7 Phân loại kháng sinh

Càng ngày người ta càng phát hiện thêm nhiều kháng sinh mới Ngoài thị trường, tên gọi rất khác nhau dễ làm người ta nhầm lẫn Nhưng trong các thuốc kháng sinh này, có nhiều thuốc có cấu trúc hoá học giống nhau, do đó chúng có chung cơ chế tác động và hoạt phổ tương tự nhau Dựa trên cơ sở của tính đặc hiệu dược lý người ta có thể xếp kháng sinh theo các họ như sau:

CHƯƠNG II : VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Vật liệu

2.1.1 Mẫu

Lấy mẫu phân chim yến nuôi tại một số vùng Nam Trung Bộ và Nha Trang

để xác định một số vi sinh vật

Bảng 2.1 Địa điểm lấy mẫu để phân lập

1 06/03/2012 Đường Thống Nhất

2 25/05/2012 Bình Phước và Trảng Bom-Đồng Nai

2.1.2 Phương pháp lấy mẫu và chuẩn bị mẫu

2.1.2.1 Mục đích và yêu cầu của việc lấy mẫu

Trong kiểm nghiệm vi sinh, đây là những công đoạn thực hiện ở bên ngoài phòng thí nghiệm nhưng lại là công đoạn quan trọng trong quá trình thử nghiệm Mọi sai sót trong công đoạn này (ví dụ mẫu không đủ, mẫu bị nhiễm bẩn từ môi trường bên ngoài, bị nhiễm bẩn từ dụng cụ, bị biến đổi do các quá trình lý hóa, sinh học diễn ra trong quá trình bảo quản mẫu) đều có thể dẫn đến những sai lệch nghiêm trọng kết quả thử nghiệm Do vậy việc thực hiện công đoạn này nghiêm túc

và đúng quy cách sẽ góp phần không nhỏ vào sự chính xác của kết quả thử nghiệm

Việc lấy mẫu phải đảm bảo các điều kiện sau :

 Mẫu lấy phải đại diện được nơi lấy mẫu và được nhận dạng rõ ràng

 Hàm lượng các chất hay các vi sinh cần xác định không được biến đổi từ khi lấy mẫu đến khi phân tích

2.1.2.2 Lấy mẫu

Cần phải xem xét những nhu cầu về cung cấp dụng cụ cho lấy mẫu, quá trình công việc lấy mẫu và vận chuyển mẫu tới phòng thí nghiệm (thời gian, tuyến đường, điều kiện nhiệt độ vận chuyển, phương thức vận chuyển và các tài liệu liên

quan) và đưa ra quy trình khử trùng Ngoài ra cần phải chuẩn bị tốt và thuận tiện cho công tác vận chuyển và bảo vệ nhân viên, hệ thống thông tin phải đảm bảo thông suốt trong quá trình vận chuyển mẫu xét nghiệm Về nguyên tắc, cần thu mẫu sao cho mẫu thu được phải có tính ngẫu nhiên và đại diện

Thao tác thực hiện:

Dùng tăm bông vô trùng lấy mẫu phân chim được nhốt trong các thùng carton và đã được lót sẵn giấy vô trùng, sau đó cho vào các ống chuyên dụng đã có sẵn dung dịch vận chuyển để bảo quản mẫu, rồi đưa ngay về phòng thí nghiệm để tiến hành các xét nghiệm

2.1.3 Trang thiết bị và dụng cụ thí nghiệm

- Thước đo vòng vô khuẩn

- Dụng cụ đặt khoanh giấy kháng sinh (Dispensing apparatus)

2.2 Phương pháp nghiên cứu

Quy trình thực hiện được sơ đồ hóa trong hình 2.1

Hình 2.1 Sơ đồ cách tiếp cận các nội dung nghiên cứu của đề tài

2.3 Phân lập và định danh vi khuẩn bằng các thử nghiệm sinh hóa

2.3.1 Phân lập vi khuẩn

 Mẫu phân chim được pha loãng như sau :

- Rót 9 ml dung dịch nước muối sinh lý đã hấp khử trùng vào các ống nghiệm

- Hút 1 ml dịch mẫu phân chim được chứa trong các ống efpendoft 1,5ml bỏ vào ống nghiệm chứa nước muối sinh lý trên ta được mẫu với nồng độ 10-1, rồi đưa lên máy vortex để trộn đều

Hình 2.2 Sơ đồ pha loãng mẫu

- Từ ống nghiệm 10-1, pha loãng ra ống nghiệm có nồng độ thấp hơn 10-2 bằng cách hút 1 ml từ ống nghiệm 10-1 cho vào 9 ml dung dịch nước muối sinh lý đã hấp khử trùng ở ống nghiệm khác, rồi đưa lên máy vortex để trộn đều, thu được ống nghiệm có độ pha loãng mẫu 10-2, tiếp tục làm tương tự, ta có các ống nghiệm có độ pha loãng mẫu 10-3 → 10-8 Làm tương tự với các mẫu còn lại

a) Phân lập vi khuẩn Escherichia coli

các khuẩn lạc đặc trưng Thử nghiệm các khuẩn lạc đặc trưng là E.coli bằng các thử

nghiệm iMViC

Bố trí thí nghiệm

 Tăng sinh :

- Lấy các ống nghiệm pha loãng ở trên, mỗi ống lấy 1 ml dịch mẫu ở nồng độ 10-1vào ống nghiệm chứa 5 ml môi trường tăng sinh BGBL đã được hấp khử trùng Làm tương tự với các nồng độ 10-2, 10-3 Trước khi cấy cần phải khi rõ nồng độ pha loãng, mỗi nồng độ làm lặp lại 2 lần Lặp lại với các mẫu còn lại Mọi thao tác đều thực hiện trong điều kiện vô trùng trong tủ cấy, bên cạnh ngọn lửa đèn cồn Sau khi cấy xong, nuôi trong tủ ấm 44.0±0.50C trong vòng 24 giờ thì tiến hành quan sát kết quả

 Phân lập :

- Sau khi nuôi vi khuẩn ở nhiệt độ 44.0±0.50C trong vòng 24 giờ thì ta ghi nhận các ống nghiệm có phản ứng dương tính tức là các ống nghiệm có hiện tượng môi trường chuyển đục và sinh hơi

Dùng thạch EMB trong bình tam giác đã hấp khử trùng và làm nguội đến khoảng 500C thì tiến hành đổ môi trường vào các đĩa petri 1 lớp mỏng vừa phải, và

để thạch thật khô Nhúng que cấy vòng vào cồn 960, hơ nóng trên ngọn lửa đèn cồn

để khử trùng que cấy, để nguội Tiếp đến, dùng que cấy vòng, lấy sinh khối vi khuẩn từ các ống nghiệm dương tính được ghi nhận ở trên, cấy ria thành ba đường trên đĩa thạch cho đến khi các khuẩn lạc thuần được tạo ra

Mỗi ống dương tính ta cấy ria sang hai đĩa EMB, và phải ghi rõ nồng độ của

nó Sau khi cấy, lật ngược đĩa thạch lại, bao gói bằng giấy báo và nuôi trong trong

tủ ấm ở 37±1.00C trong vòng 24±3 giờ thì đọc kết quả Làm tương tự cho các mẫu dương tính còn lại Sau khi nuôi cấy ở 37±1.00C trong vòng 24±3 giờ thì các khuẩn lạc xuất hiện Khuẩn lạc có đặc điểm màu tím, ánh kim, tròn, bờ đều, đường kính

khoảng 0.5 mm là khuẩn lạc đặc trưng của E.coli trên môi trường EMB Chọn

khuẩn lạc có hình thái điển hình đem cấy chuyển trên môi trường TSA để tạo khuẩn lạc thuần để sử dụng cho các thử nghiệm sinh hóa

Lưu ý, hơ và khử trùng que cấy sau mỗi lần cấy dịch, mọi thao tác đều được tiến hành trong điều kiện vô trùng trong tủ cấy, bên cạnh ngọn lửa đèn cồn

Hình 2.3 Sơ đồ quy trình phát hiện và định danh E.coli b) Phân lập Vibrio

Chọn các ống canh (+) (sinh hơi)

Cấy vào môi trường thạch EMB

Ủ 370C trong 24 giờ

Thử nghiệm IMViC ++

Chọn khuẩn lạc điển hình cấy vào các môi trường tryptone, MR-VP, SCA Ủ ở 370C trong 24 giờ Chọn khuẩn lạc điển hình,cấy vào TSA

Ủ trong 370C