vũ hồng hạnh tiếp tục nghiên cứu chiết xuất bào chế chế phẩm gel thụt đại tràng từ quả bồ kết và xây dựng một số chỉ tiêu chất lượng

Bảng 3.1 Cảm quan mẫu dược liệu chế biến bằng các phương pháp Bảng 3.2 Kết quả đo hàm ẩm % ở các mẫu dược liệu chế biến bằng phương pháp nướng Bảng 3.3 Kết quả đo hàm ẩm % ở các mẫu dược

MỘT SỐ CHỈ TIÊU CHẤT LƯỢNG

KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

HÀ NỘI – 2024

Nơi thực hiện:

1 Bộ môn Dược học cổ truyền Khoa Dược liệu – Dược học cổ truyền

HÀ NỘI - 2024

Lời cảm ơn

Trước tiên, em xin được gửi lời cảm ơn và biết ơn sâu sắc tới PGS TS Nguyễn

Mạnh Tuyển – Phó Hiệu trưởng Trường Đại học Dược Hà Nội, Trưởng khoa Dược liệu

– Dược học cổ truyền, Trưởng bộ môn Dược học cổ truyền – Trường Đại học Dược Hà Nội, người đã tận tình hướng dẫn, chỉ bảo, tạo điều kiện cho em được làm khoá luận tốt nghiệp tại bộ môn Nhờ sự góp ý và kiểm tra tiến độ nghiêm túc của thầy, em đã hoàn thành khoá luận thành công

Em xin gửi tới DS HVCH Trần Văn Đức cùng Ths Lê Hương Giang đã hướng

dẫn, giúp đỡ em trong quá trình lên kế hoạch và làm thực nghiệm đề tài Em cũng xin gửi lời cảm ơn tới các thầy cô giáo đã tận tình truyền đạt những kiến thức quan trọng và bổ ích, không chỉ là nền tảng trong quá trình thực hiện khoá luận mà là còn là hành trang cho chặng đường phía trước

Ngoài ra, em cũng xin cảm ơn Ban lãnh đạo Trường Đại học Dược Hà Nội, cũng như các khoa và các phòng ban đã tạo điều kiện, cơ sở vật chất để em có thể hoàn thành tốt việc thực nghiệm

Xin được gửi lời cảm ơn tới gia đinh, bạn bè cùng nhóm thực nghiệm nghiên cứu khoa học, bạn Đặng Đăng Dương, sinh viên lớp PK75 đã bên cạnh em ủng hộ, hỗ trợ trong quá trình thực hiện đề tài

Do kiến thức và khả năng thực hành còn nhiều hạn chế nên khoá luận vẫn còn những thiếu sót nhất định Em rất mong nhận được những đóng góp của các thầy cô để khoá luận tốt nghiệp của em được hoàn thiện hơn

Cuối cùng, em xin kính chúc các thầy cô giáo, Ban lãnh đạo nhà trường cùng các thầy cô tại các Khoa và các phòng ban dồi dào sức khoẻ và thành công trong sự nghiệp

Em xin chân thành cảm ơn!

Sinh viên

Vũ Hồng Hạnh

1.2.2 Các phương pháp chiết xuất cao Bồ kết từ quả Bồ kết 9

1.3 Phương pháp bào chế gel bồ kết 10

CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12

2.1 Đối tượng nghiên cứu 12

2.1.1 Nguyên liệu 12

2.1.2 Dung môi, hoá chất 12

2.1.3 Dụng cụ 12

2.2 Phương pháp nghiên cứu 13

2.2.1 Xây dựng quy trình lựa chọn nguyên liệu và chế biến quả bồ kết 13

2.2.2 Quy trình chiết xuất tạo cao khô Bồ kết 14

2.2.2.1 Chiết tạo cao khô Bồ kết – Quy mô 100g Bồ kết/ mẻ 14

2.2.2.2 Chiết tạo cao khô Bồ kết – quy mô 500g Bồ kết/ mẻ 14

2.2.2.3 Chế tạo cao khô Bồ kết – quy mô 2kg Bồ kết/ mẻ 15

2.2.2.4 Chế tạo cao khô Bồ kết- quy mô 10kg Bồ kết/ mẻ 15

2.2.3 Quy trình bào chế gel thụt đại tràng từ quả Bồ kết 15

2.2.3.1 Công thức và quy trình chung điều chế gel thụt đại tràng 15

2.2.3.2 Bào chế gel thụt đại tràng quy mô 50 đơn vị/ lô 16

2.2.3.3 Bào chế gel thụt đại tràng quy mô 200 đơn vị/ lô 17

2.2.3.4 Bào chế gel thụt đại tràng quy mô 2000 chế phẩm/ lô 18

2.2.4 Một số chỉ tiêu chất lượng 18

2.3.4.1 Một số chỉ tiêu chất lượng dược liệu Bồ kết 19

2.3.4.2 Một số chỉ tiêu chất lượng cao Bồ kết 20

2.3.4.3 Một số chỉ tiêu chất lượng gel thụt đại tràng Bồ kết 21

CHƯƠNG 3 THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 23

3.1 Lựa chọn phương pháp chế biến quả Bồ kết 23

3.1.1 Cảm quan, hình thái 23

3.1.2 Độ ẩm 233.2 Nâng cấp quy mô chiết cao Bồ kết 24

3.2.1 Đánh giá độ ổn định của 2 phương pháp chiết cao Bồ kết giàu saponin ở quy mô 100g/ mẻ 24

3.2.2 Nâng cấp ổn định quy trình chiết cao Bồ kết giàu Saponin ở quy mô 500g/ mẻ 253.2.3 Nâng cấp ổn định quy trình chiết cao Bồ kết giàu Saponin ở quy mô 2kg/mẻ 263.2.4 Nâng cấp ổn định quy trình chiết cao Bồ kết giàu saponin quy mô 10kg/mẻ 273.3 Nâng cấp quy mô bào chế gel thụt đại tràng từ Bồ kết 28

3.3.1 Đánh giá tính ổn định và quy trình bào chế gel thụt đại tràng từ Bồ kết quy mô 50 chế phẩm/ lô 28

3.3.2 Nâng cấp ổn định quy trình bào chế gel thụt đại tràng từ Bồ kết quy mô 200 chế phẩm/ lô 29

3.3.3 Đánh giá tính ổn định của quy trình bào chế gel thụt đại tràng, quy mô 2000 chế phẩm/ mẻ 30

3.4 Khảo sát một số chỉ tiêu chất lượng 31

3.4.1 Một số chỉ tiêu chất lượng dược liệu Bồ kết 31

3.4.1.1 Mô tả 31

3.4.1.2 Độ ẩm 31

3.4.1.3 Định tính 31

3.4.1.4 Định lượng theo phương pháp cân 32

3.4.2 Một số chỉ tiêu chất lượng cao Bồ kết 32

3.4.2.1 Mô tả 32

3.4.2.2 Độ ẩm 32

3.4.2.3 Độ tan 32

3.4.2.4 Định tính 32

3.4.2.5 Định lượng Saponin toàn phần theo phương pháp cân 33

3.4.3 Một số chỉ tiêu chất lượng gel thụt đại tràng Bồ kết 34

3.5.1 Lựa chọn nguyên liệu và phương pháp chế biến Bồ kết 36

3.5.2 Nâng cấp quy mô bào chế cao khô Bồ kết 37

3.5.3 Quy trình bào chế gel thụt đại tràng Bồ kết 37

3.5.4 Xây dựng tiêu chuẩn 38

3.5.4.1 Tiêu chuẩn của dược liệu Bồ kết 38

3.5.4.2 Tiêu chuẩn cao khô Bồ kết 38

3.5.4.3 Tiêu chuẩn gel thụt đại tràng Bồ kết 38

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT

DĐVN V Dược điển Việt Nam V EtOH Ethanol (C2H5OH) RSD Độ lệch chuẩn tương đối TT Thuốc thử

GT Gleditsia triacanthos MEGT Chiết xuất methanol từ quả không hạt Gledisia

triacanthos

MTS50 Nồng độ sống trung bình BFGT Phân đoạn n-butanol của Gleditsia triacanthos

GSE Chiết xuất ethanol của Gleditsia spina

Bảng 3.1 Cảm quan mẫu dược liệu chế biến bằng các phương pháp Bảng 3.2 Kết quả đo hàm ẩm (%) ở các mẫu dược liệu chế biến bằng phương

pháp nướng Bảng 3.3 Kết quả đo hàm ẩm (%) ở các mẫu dược liệu chế biến bằng phương

pháp sao Bảng 3.4 Kết quả đo hàm ẩm (%) ở các mẫu dược liệu chế biến bằng phương

pháp sấy Bảng 3.5 Kết quả đánh giá độ ổn định của quy trình chiết cao Bồ kết giàu

saponin ở quy mô 100g/ mẻ Bảng 3.6 Kết quả đánh giá quy trình chiết xuất cao Bồ kết quy mô 500g/ mẻ Bảng 3.7 Kết quả đánh giá độ ổn định của quy trình chiết xuất cao Bồ kết ở

quy mô 2kg/ mẻ Bảng 3.8 Kết quả đánh giá quy trình chiết cao Bồ kết quy mô 10kg/ mẻ Bảng 3.9 Kết quả đánh giá đồng đều khối lượng chế phẩm gel thụt đại tràng

từ Bồ kết Bảng 3.10 Kiểm soát khối lượng nguyên liệu ở quy mô 50 chế phẩm/ lô Bảng 3.11 Kiểm soát khối lượng nguyên liệu quy mô 200 chế phẩm/ lô Bảng 3.12 Kết quả định tính dược liệu Bồ kết

Bảng 3.13 Hàm lượng saponin tổng trong các mẫu dược liệu theo phương pháp

cân Bảng 3.14 Kết quả đo độ ẩm của Cao khô Bồ kết Bảng 3.15 Kết quả định tính cao Bồ kết giàu saponin Bảng 3.16 Hàm lượng saponin toàn phần trong cao theo phương pháp cân Bảng 3.17 Kết quả định tính gel thụt đại tràng từ Bồ kết

Bảng 3.18 Kết quả đo pH mẫu gel thụt đại tràng từ Bồ kết

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ

Hình 2.1 Sơ đồ quy trình bào chế gel thụt đại tràng Hình 3.1 Hình ảnh mẫu Bồ kết nướng

Hình 3.2 Hình ảnh mẫu Bồ kết sao Hình 3.3 Hình ảnh mẫu Bồ kết sấy Hình 3.4 Sơ đồ quy trình chiết xuất cao Bồ kết quy mô 500g /mẻ Hình 3.5 Sơ đồ quy trình chiết xuất cao Bồ kết quy mô 2kg/ mẻ Hình 3.6 Sơ đồ quy trình chiết xuất cao Bồ kết quy mô 10kg/ mẻ Hình 3.7 Kết quả phản ứng tạo bọt của dược liệu

Hình 3.8 Kết quả phản ứng tạo màu của Bồ kết Hình 3.9 Kết quả phản ứng tạo bọt của cao khô Bồ kết Hình 3.10 Kết quả phản ứng tạo màu Liebermann – Burchard cao khô Bồ

kết Hình 3.11 Kết quả phản ứng tạo bọt của gel Hình 3.12 Kết quả phản ứng tạo màu của gel

ĐẶT VẤN ĐỀ

Táo bón là một vấn đề phổ biến và xảy ra ở mọi lứa tuổi, từ trẻ sơ sinh tới người già Táo bón là hiện tượng rối loạn cảm giác đại tiện, phân trở nên rắn, mỗi lần đi đại tiện cần có sự trợ giúp, số lần đi ngoài ít hơn 3 lần/ tuần [5] Với tỷ lệ mắc những năm gần đây tăng với 76,47% của nhóm tuổi từ 61 tới 80 tuổi, đây là một trong những triệu chứng rất phổ biến của bệnh lý hệ thống tiêu hoá và cũng là triệu chứng xuất hiện trong nhiều bệnh lý ở cơ quan khác [7]

Táo bón không chỉ gây ra các vấn đề về sức khoẻ mà còn ảnh hưởng tới tinh thần người bệnh, nếu xảy ra thường xuyên sẽ khiến bệnh nhân cảm thấy khó chịu, mệt mỏi, chán ăn, sụt cân, điều này ảnh hưởng lớn tới sức khoẻ Táo bón kéo dài có thể gây ra tình trạng bệnh lý khác như trĩ, sa trực tràng, ung thư trực tràng, chảy máu, rách hậu môn, có thể làm tăng nguy cơ nhồi máu não hoặc xuất huyết não ở người cao tuổi có bệnh lý tim mạch [24] Hiện nay để điều trị táo bón thường kết hợp thụt tháo phân trước khi điều trị duy trì, và điều trị duy trì bằng thuốc kèm chế độ ăn và huấn luyện đi ngoài [4] Trong đó, phương pháp chữa bệnh đại tràng bằng các loại thảo dược tự nhiên được xem là phương pháp an toàn, hiệu quả và ít tác dụng phụ

Nghiên cứu về các dạng thuốc dùng tại đường trực tràng đã xuất hiện từ lâu đời, 500 năm trước công nguyên, Hypocrat đã viết về cách sử dụng thuốc bằng đường trực tràng, hơn 300 năm sau, Galen đã áp dụng tẩy cho bệnh nhân bằng đường trực tràng bằng cách đặt viên thuốc chế bằng xà phòng vào trực tràng của bệnh nhân Trải qua nhiều thế kỉ, cho đến những năm 30 của thế kỉ XIX, người ta mới chú ý nhiều tới những ưu điểm của thuốc dùng theo đường trực tràng và sử dụng dạng thuốc này thay cho đường uống, trong trường hợp dược chất có mùi vị khó chịu, dễ gây nôn, dược chất gây kích ứng mạnh hoặc dược chất bị phá huỷ bởi dịch dạ dày, hoặc bị chuyển hoá nhanh tại gan Người ta đã sử dụng dụng cụ thụt trong nhiều thế kỉ để loại bỏ phân ở đại tràng, hiện nay, các chế phẩm gel thụt đại thường được sử dụng trong các trường hợp táo bón, điều trị tình trạng ứ đọng phân, chuẩn bị cho quá trình nội soi đại tràng và phẫu thuật Dạng bào chế này thuận tiện cho bệnh nhân sử dụng tại nhà, và hiện nay thường có sẵn tại các hiệu thuốc mà không cần kê đơn

Việt Nam là đất nước có nguồn tài nguyên dược liệu phong phú, là một trong những nước sở hữu nguồn cây thuốc dồi dào nhất thế giới với hơn 6000 loài có thể dùng làm thuốc[5] Từ lâu, quả Bồ kết đã được người Việt Nam sử dụng để làm thuốc, trong đó, cũng được đề cập tới tác dụng nhuận tràng, mà theo Đỗ Tất Lợi, phương pháp sử dụng quả bồ kết để thụt tháo đã được sử dụng từ những năm 70 của thế kỉ trước [8]

Từ năm 2022, Bộ môn Dược cổ truyền cùng DS Trần Thị Vân và DS Bùi Thị Thu Trang đã nghiên cứu, chiết xuất tạo cao Bồ kết Việt Nam và điều chế gel thụt đại tràng từ quả Bồ kết Việt Nam Tuy nhiên, ở Việt Nam chưa có nghiên cứu chuyên sâu về nâng

cấp quy mô chiết cao Bồ kết và nâng cấp quy mô bào chế gel thụt đại tràng từ Bồ kết Việt Nam cũng như nghiên cứu về xây dựng các tiêu chuẩn chất lượng dược liệu Bồ kết, cao Bồ kết và gel thụt đại tràng từ quả Bồ kết

Vì vậy, khoá luận tốt nghiệp: “Tiếp tục nghiên cứu, chiết xuất, bào chế chế phẩm

gel thụt đại tràng từ quả Bồ kết và xây dựng một số chỉ tiêu chất lượng” được thực

hiện với mục tiêu sau: 1 Nghiên cứu nâng cấp quy mô quy trình chiết xuất cao Bồ kết từ quả Bồ kết Việt Nam

2 Nghiên cứu nâng cấp quy mô quy trình bào chế gel thụt đại tràng Bồ kết 3 Xây dựng một số chỉ tiêu chất lượng cho nguyên liệu, thành phẩm cao và thành phẩm gel thụt đại tràng từ quả Bồ kết

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN

1.1 Tổng quan về cây Bồ kết 1.1.1 Tên khoa học

Bồ kết, hay còn được biết tới tên gọi khác là Tạo giác, Trư nha tạo, Tạo giác thích, màn khét [6], [8], [14]

Bộ phận dùng:

- Quả Bồ kết - Tạo giác: Fructus Gleditsiachiae [8] - Hạt Bồ kết - Tạo giác tử: Semen Gleditsiachiae [8] - Gai Bồ kết - Tạo giác thích: Spina Gleditsiachiae [8]

Vị trí phân loại của Bồ kết trong giới thực vật, theo phân loại của Takhtajan Armen (2009)[31]

Giới: Thực vật (Plantae) Ngành: Ngọc lan (Magnoliophyta)

Lớp: Ngọc lan (Magnoliopsida) Phân lớp: Hoa hồng (Rosidae)

Bộ: Đậu (Fabales) Phân họ: Vang (Caesalpinioideae)

Họ: Đậu (Fabales) Chi: Gleditsia

Loài: : Gleditsia australis F.B.Forbes & Hemsl[16]

1.1.2 Đặc điểm thực vật

Bồ kết là cây thân gỗ sống lâu năm, cao 6-8m, trên thân có những túp gai có phân nhánh dài từ 3 tới 10 cm, gai to, cứng, dài tới 10-15cm, có từ 3 tới 5 gai phụ, thân chính ít gai hơn cành[3], [8] Trên thân non có lông che chở và các nốt sần màu vàng Cành có hình dạng mảnh, hình trụ, khúc khuỷu Lá kép lông chim 2 lần chẵn, mọc so le, cuống chung có lông và rãnh dọc, 6-8 đôi lá chét, hình trứng dài, trung bình 25mm, rộng 15mm Hoa màu trắng, đều, đơn tính hoặc lưỡng tính cùng gốc, mọc thành hình bông, dài 10-15cm, tràng 5 cánh, hoa đực có 10 nhị và không có bầu, hoa lưỡng tính có 5 nhị và bầu có nhiều lông đựng noãn [8]

Quả giáp màu vàng nâu, dài 10-12cm, rộng 1,5-2,0cm, hơi cong hình lưỡi liềm hay thẳng, quả mỏng, có những nơi có hạt thì nổi phình lên, trên mặt quả có phủ một lớp phấn màu xanh nhạt Quả có từ 7 tới 10 hạt, hạt màu vàng nhạt Nhiều tế bào thành dày hoá gỗ hình tròn hay là hình bầu dụng hoặc hình không đều, đường kính 15μm đến 53μm

Nhiều sợi thường xếp thành bó, đường kính sợi khoảng 10 μm đến 35 μm, thành hơi hoá gỗ, được bao quanh bởi các tế bào mô mềm chứa tinh thể calci oxalat hình lăng trụ, và có một vài sợ cụm tinh thể, đi kèm bó sợi thường có các tế bào dày hình gần vuông Các tinh thể calci oxalat hình lăng trụ dài 6 μm tới 15 μm, những bó tinh thể có đường kính từ 6 μm tới 14 μm Nhiều tế bào mô mềm có thành hoá gỗ, có nhiều lỗ (hốc) và ống trao đổi Tế bào biểu bì vỏ quả màu nâu đỏ, hình đa giác, thành tương đối dày, có lớp cutin gợn vân dạng hạt[3], [6], [14]

1.1.3 Phân bố, thu hái, chế biến

- Phân bố

Thế giới: Chi Gleditsia phân bố chủ yếu ở Trung Á Đông Nam Á, Nam Mỹ và

Bắc Mỹ và đặc biệt phân bố nhiều ở các tỉnh phía nam Trung Quốc[8] Buneau và cộng

sự đã chỉ ra trên thế giới có 12 loài thuộc chi Gleditsia [19]

Gleditsia amorphoides (Griesb.) Taub

Gleditsia aquatica Marshall

Gleditsia australis F.B Forbes & Hemsl (Bồ kết Việt Nam)

Gleditsia caspica Desf

Gleditsia delavayi Franchet

Gleditsia fera (Lour.) Merr

Gleditsia ferox Desf

Gleditsia japonica Miq

Gleditsia macraranthan Desf

Gleditsia microphylla H.D Gordon

Gleditsia sinensis Lam

Gleditsia triacanthos L Theo thực vật chí Trung Quốc, xác định được 16 loài thuộc chi Gleditsia Nghiên

cứu của Hagar Ashraf và cộng sự chỉ ra có 14 loài thuộc chi này [22] Việt Nam: Cây Bồ kết mọc hoang và được trồng tại nhiều tỉnh miền Bắc nước ta, cả ở đồi núi và vùng đồng bằng Cây thường thấy ở một số nơi như Hà Nội, Hải Phòng, Quảng Ninh, Hà Nam, Thanh Hoá, Nghệ An… Riêng đảo Cát Bà (Hải Phòng) có tới 40.000 cây, sản lượng Bồ kết hàng năm cho tới 40 tấn quả Bồ kết Ở Tây Nguyên, cây bồ kết được trồng để tạo bóng và chắn gió cho cà phê Ở Việt Nam hiện nay hiện diện 3

loài thuộc chi Gleditsia [6]

 Gleditsia rolfei Viral y Soler

 Gleditsia papachycarpa Bal ex Gagn

 Gleditsia australis F.B.Forbes & Hemsl

- Thu hái, chế biến

Mùa bồ kết bắt đầu từ tháng 10, trong 2 tháng 10 và 11, khi quả chín, nông dân thu hái và phơi hoặc sấy khô Khi mới hái, quả có màu xanh hoặc hơi vàng, khi phơi và để lâu vài ngày, quả chuyển dần sang màu đen bóng

Gai Bồ kết có thể thu hái quanh năm, nhưng tốt nhất là vào tháng chín đến tháng ba năm sau, hái về phơi khô hoặc nhân lúc gai còn đang tươi[8]

1.1.4 Tác dụng dược lý

Các loài thuộc chi Gleditsia đã được sử dụng rộng rãi từ nhiều thế kỉ để chữa bệnh

Nhiều nhà nghiên cứu hiện đại đã sử dụng các phương pháp nghiên cứu hiện đại để xác

nhận tác dụng chữa bệnh của chi Gleditsia, theo các ghi chép truyền thống Các nghiên cứu về hoạt tính sinh học đã chỉ ra các hợp chất được chiết xuất từ chi Gleditsia thể hiện

nhiều tác dụng dược lý như ức chế sự phát triển của khối u, chống viêm, chống tăng lipid máu, chống HIV, chống dị ứng, kháng khuẩn, kháng nấm, giảm đau, kháng đột biến và chống oxy hoá [17], [19], [27]

- Ức chế sự phát triển khối u Các nghiên cứu kéo dài từ những năm 2000 tới nay đã chỉ ra các loài thuộc chi

Gleditsia có hiệu quả trong việc chống lại các khối u liên quan tới các bệnh ung thư như

tế bào ung thư vú, u nguyên bào gan, ung thư vòm họng, ung thư tuyến tiền liệt, ung thư ruột kết, ung thư thực quản, ung thư dạ dày, ung thư biểu mô tế bào vảy họng miệng

Nghiên cứu sớm nhất về tác dụng chống tăng sinh khối u được thực hiện vào 2002 với nghiên cứu của Chow và cộng sự thực hiện đối với 4 dòng tế bào khối u rắn (MCF-7, MDA-MB231, tế bào HepG2 và SLMT-1), chỉ ra rằng dịch chiết từ quả Bồ kết

Gleditsia sinensis thể hiện sự ức chế tăng trưởng đáng kể với các giá trị MTS50 trong khoảng từ 16μg/ml tới 20μg/ml so với cisplatin đối chứng dương tính trong khoảng từ

22μg/ml tới 28μg/ml Cơ chế chỉ ra rằng, có lẽ dịch chiết ethanol của Gleditsia sinensis

(20μg/ml) có thể làm tăng lượng DNA oligonuclesomal trong tế bào MDA-MB231 với khoảng thời gian tăng dần từ 4 tới 24 giờ, và nhận thấy rằng có thể sự phân mảnh DNA dẫn tới sự chết các tế bào khối u đã tồn tại Bằng phương pháp đếm tế bào học dòng chảy – Flow Cytometry sử dụng đầu cuối dUTP qua trung gian tranferase đã phát hiện

ra dịch chiết Gleditsia sinensis có thể gây ra apoptosis theo thời gian và phụ thuộc vào

liều lượng Chow và cộng sự tiếp tục công bố vào năm 2003, từ nghiên cứu cho thấy,

dịch chiết từ quả Bồ kết Gleditsia sinensis có hoạt tính chống ung thư mạnh, ức chế tế

bào CML K562 (MTS50 18±1,6μg/ml) và tế bào AML-60 AML (MTS50 12±1,3μg/ml) trong bệnh bạch cầu tuỷ xương mãn tính và bệnh bạch cầu tuỷ xương cấp tính [27]

Trong 12 năm tiếp theo tới năm 2015, 18 nghiên cứu độc lập được công bố, chỉ ra

rằng dịch chiết và các chất được chiết xuất từ các loài thuộc chi Gleditsia đã chỉ ra cơ

chế và kết quả trong việc ức chế sự tăng trưởng của các tế bào trong các bệnh u nguyên bào gan (HepG2), ung thư vòm họng (CNE-2), ung thư tuyến tiền liệt (LNCap), ung thư

ruột kết (HCT 116), ung thư ruột kết (HT29), ung thư biểu mô vảy thực quản (SLMT–1), ung thư dạ dày (SNU-5), ung thư dạ dày (BCG-823), ung thư biểu mô tế bào vảy miệng KB, ung thư gan (Bel-7402), ung thư phổi (A549) và ung thư cổ tử cung tế bào Hela [27]

Chiết xuất ethanol của GS (GSE) được thử nghiệm tác dụng hạ đường huyết trên chuột mắc tiểu đường tuýp 2 do streptozotocin Kết quả cho thấy GSE có thể cải thiện bệnh tiểu đường tuýp 2 và khả năng chống oxy hoá, do tăng hoạt tính chống oxy hoá trong huyết tương chuột mắc bệnh tiểu đường [28]

Sang và cộng sự (2024) đã phân lập được polysaccharid trong Gleditsia galactomannans, thể hiện hoạt tính ức chế mạnh mẽ với α- glusidae và α- amylase và

có khả năng kết dính với cholate Do vậy, polysaccharid này được đánh giá có tiềm năng

trong các ứng dụng in vitro đối với tăng đường huyết và tăng lipid máu [29]

- Tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm Nhiều nghiên cứu trên ống nghiệm đã chứng minh rằng quả Bồ kết có tác dụng ức chế các chủng vi khuẩn như:

 Cầu khuẩn

 Trực khuẩn lỵ shigella

 Trực khuẩn thương hàn, phó thương hàn

 Trực khuẩn mủ xanh và phẩy khuẩn tả Dịch chiết từ quả Bồ kết bằng hỗn hợp dung môi dầu hỏa – ether với phương pháp khuếch tán thuốc trong môi trường nuôi cấy, ở nồng độ 0,343g/ml có tác dụng ức chế tụ cầu khuẩn B

Dịch chiết từ quả Bồ kết bằng cloroform với nồng độ 0,55g/ml có tác dụng ức chế liên cầu khuẩn Hỗn hợp flavonoid và saponaretin chiết từ quả Bồ kết có tác dụng kháng virus, hỗn hợp saponin có tác dụng chống trùng roi âm đạo Dịch chiết nước từ quả Bồ kết trên có tác dụng ức chế một số nấm gây bệnh ngoài da [8],[6],[17]

- Chữa kiết lỵ, táo bón:

Quả Bồ kết có thành phần saponin, giúp tăng co bóp nhu động ruột, có tác dụng thông tiện, kích thích hoạt động ở nhu động ruột giúp nhuận tràng, đồng thời chứa hoạt chất trị khuẩn lỵ rất hiệu quả Vì thế, Bồ kết được dùng nhiều để chữa các chứng bệnh tiêu hóa đầy hơi, khó tiêu, táo bón, kiết lỵ [1], [8]

- Chống viêm, chống dị ứng: Các đặc tính chống dị ứng và chống viêm của chiết xuất EtOH 70% từ quả Bồ kết được đánh giá bằng các mô hình thử nghiệm khác nhau, có tác dụng ức chế phụ thuộc vào liều, phản ứng phản vệ thụ động qua da tương đồng ở chuột và sốc phản vệ toàn thân ở chuột qua trung gian là các chất vận mạch histamin và serotonin được tiết ra từ tế bào mast và bạch cầu ái kiềm Để giải thích về cơ chế làm giảm phản ứng dị ứng ngay lập tức, thí nghiệm đã quan sát thấy những tác động đối với việc giải phóng histamine từ tế bào mast và hoạt động gây viêm của các chất trung gian Kết quả cho thấy thử

nghiệm in vitro với liều 20-50 µg/ml thể hiện sự ức chế đáng kể và mạnh hơn đối với sự

giải phóng histamin từ tế bào mast phúc mạc chuột và làm giảm rõ rệt phản ứng trên da do histamin và serotonin gây ra ở chuột với liều 0,5 và 1,0g/kg Những phát hiện này cho thấy các hoạt động chống dị ứng của Bồ kết được thể hiện bằng cách giảm giải phóng các chất trung gian như histamine từ tế bào mast và làm suy yếu hoạt động gây viêm của các chất trung gian hóa học [21]

Acid echynocystic chiết xuất từ quả Bồ kết được chứng minh là có khả năng chống viêm, chống oxy hóa, giảm đau trong các bệnh khác nhau [20]

Trong Y học cổ truyền Việt Nam, Bồ kết được dùng để đun nước gội đầu, tẩy ố trên quần áo lụa, len ố màu, ngoài ra còn có có các bài thuốc quý [9]

Chữa ho: Quả Bồ kết 1g, Quế chi 1g, Đại táo 4g, Cam thảo 2g, Sinh khương 2g, thêm nước khoảng 600ml, sắc còn 200ml, chia 3 lần uống trong ngày

Chữa đờm suyễn kéo lên, ngực căng, thở gấp: Hạt Bồ kết đốt, hạt củ cải sao (2 vị bằng nhau), tán bột, viên với mật ong, uống mỗi lần 4g, ngày uống từ 2- 3 lần

Trị chứng ngạt mũi, khó thở: 15g quả Bồ kết đem đi đốt, tới khi có mùi thơm cho khói xông vào mũi, bài thuốc này giúp giảm ngạt mũi, dễ thở nhanh chóng

Chữa trĩ: cho 15 quả Bồ kết vào nước đun sôi kỹ, đổ ra chậu, thêm nước cho đỡ nóng, cho người bệnh ngồi vào trong chậu để ngâm Khi nước nguội, lấy tay đẩy cho trĩ thụt vào, băng lại để giữ Đồng thời lấy 5 quả Bồ kết tẩm sữa nướng giòn, tán mịn, hoà với mật cho vừa dẻo Viên hỗn hợp trên thành từng hạt như hạt đậu, ngày uống 20 viên, dùng hết thuốc là một liệu trình, dùng 2 tới 3 liệu trình

Theo Đỗ Tất Lợi, quả Bồ kết (bỏ hạt hoặc đốt ra than, hoặc tán nhỏ thành viên hay thuốc bột) có vị cay, mặn, tính ôn, hơi độc, quy vào 2 kinh phế và đại tràng Quả Bồ kết được sử dụng để chữa bí đại tiện và trung tiện sau khi mổ, có thể dùng cho cả trẻ em và người lớn, có tác dụng trong vòng 5 phút sau khi thông khoan Lấy ¼ quả bồ kết nướng thật vàng, đừng nướng cháy quá hoặc sống quá, bỏ hột rồi đi tán thành bột nhỏ Lấy đầu canulơ đã nhúng qua dầu hoặc vaselin, chấm vào bột Bồ kết đã chuẩn bị, sau đó cho vào hậu môn sâu khoảng 3-4 cm, tiếp tục làm 3-4 lần, sau 2 đến 5 phút sau bệnh nhân có thể đi ngoài được [8]

1.2 Các phương pháp chiết xuất tạo cao từ quả Bồ kết 1.2.1 Nguyên tắc chung

Chiết tách là bước đầu tiên và có vai trò lớn trong việc thu hồi và làm sạch các chất có hoạt tính sinh học từ nguyên liệu thô Trong quả Bồ kết, sản phẩm chính thu được sau quá trình tách chiết là các loại Saponin, tuy vậy do bản chất của Saponin là một chất có độ phân cực cao, không dễ bay hơi dẫn đến những thách thức trong việc tìm ra các biện pháp hiệu quả trong quá trình tách chiết Chính vì vậy, rất nhiều các biện pháp chiết Bồ kết đã được thử nghiệm, cụ thể như các phương pháp chiết xuất truyền thống như ngâm ấm, đun cách thủy, chiết nóng hồi lưu, với hiệu suất chiết xuất trong các phương pháp này phụ thuộc phần lớn vào khả năng tan của nguyên liệu trong dung môi Cùng với đó là các biện pháp chiết xuất hiện đại như chiết xuất bằng sóng siêu âm, hỗ trợ vi sóng hay chiết dung môi nhanh, với các kỹ thuật đều có những ưu điểm và nhược điểm riêng biệt [8], [10], [30], [32]

Dai Yue và các cộng sự đã tìm phương pháp chiết và sắc ký cột để chiết Saponin toàn phần từ quả Bồ kết Phương pháp được sử dụng để thu được Saponin toàn phần của quả Bồ kết là sắc ký cột nhựa macroporous và chiết với dung môi hữu cơ Phương pháp trên sử dụng dung môi hữu cơ, không có lợi cho việc bảo vệ môi trường, đồng thời lượng mẫu mất đi lớn [34]

Để đạt được hiệu suất chiết tối ưu đồng thời đáp ứng được các tiêu chí về chi phí, an toàn và bảo vệ môi trường đòi hỏi phải có những nghiên cứu cụ thể để lựa chọn được phương pháp chiết xuất phù hợp Trong quá trình tách chiết, các bước được tiến hành lần lượt là: Quá trình tiền xử lý, chiết xuất và sau đó là tinh chế sản phẩm [11]

1.2.2 Các phương pháp chiết xuất cao Bồ kết từ quả Bồ kết

Thành phần chính của Bồ kết là saponin, đâu là các hợp chất có tính phân cực mạnh, do đó có thể tan trong các dung môi phân cực như nước, ethanol, methanol, và một số dung môi khác như dimethyl sulfoxid, dioxan, acid acetic, pyridin Các saponin mạch đường dài thường tan tốt trong nước, nhưng ít tan trong các dung môi không phân cực như aceton, ether, hexan Điều này mở ra các lưu ý khi lựa chọn dung môi chiết [27], [30]

Lựa chọn dung môi chiết xuất phù hợp là một phần quan trọng trong chiết xuất saponin từ quả Bồ kết Nước thường được sử dụng làm dung môi hoà tan saponin với hiệu suất tốt nhất, nhưng có nhược điểm là hoà tan các tạp chất khác như đường và tinh bột Vì vậy, để loại bỏ các tạp chất này, cần sử dụng các dung môi khác hoặc kết hợp nước với dung môi khác

Cồn là dung môi hòa tan Saponin rất tốt, độ thường được sử dụng với độ cồn là 40-90%, Tuy nhiên, cần lưu ý một số trường hợp của các Saponin acid (Saponin triterpenoid), có thể bị chuyển hóa thành alkyl este dưới tác dụng của cồn, vì vậy, cần lưu ý khi sử dụng cồn làm dung môi chiết [10], [14], [15], [37]

Có 2 nhóm kỹ thuật chiết xuất chính được sử dụng để thu saponin từ quả Bồ kết: công nghệ chiết xuất truyền thống và công nghệ chiết xuất hiện đại Các phương pháp truyền thống như ngâm, chiết soxhlet, chiết hồi lưu thường sử dụng lượng lớn dung môi và thời gian chiết kéo dài Trong khi đó, các phương pháp hiện đại như chiết siêu âm, chiết vi sóng, chiết bằng chất lỏng siêu tới hạn thường tiết kiệm năng lượng và sử dụng nguyên liệu tái tạo Bên cạnh những ưu điểm, phương pháp hiện đại đòi hỏi vốn đầu tư lớn và có thể khó triển khai trên quy mô công nghiệp [2], [10], [25]

Cho đến nay, trên thế giới chưa có nhiều nghiên cứu được thực hiện nhằm khảo sát ảnh hưởng của điều kiện chiết xuất nhóm hợp chất Saponin từ quả Bồ kết Tuy nhiên, trong các nghiên cứu về tác dụng sinh học của Bồ kết, nhiều quy trình chiết xuất khác nhau đã được thực hiện để chuẩn bị các mẫu thử Các quy trình chiết xuất được sử dụng trong các nghiên cứu trên thế giới về Bồ kết rất đa dạng về phương pháp, dung môi, điều kiện chiết xuất… Có thể nhận thấy điểm chung của các quy trình sử dụng là đều khá đơn giản Bồ kết thường được chiết xuất với dung môi nước, ethanol và methanol thông qua nhiều phương pháp khác nhau như ngâm ấm, chiết nóng, chiết soxhlet, chiết siêu âm Các nghiên cứu đó đã cho thấy rằng với các phương pháp chiết, dung môi chiết, điều kiện chiết xuất khác nhau thì sản phẩm chiết sẽ có đặc điểm và hoạt tính sinh học khác nhau Ngoài ra, các nghiên cứu cũng chỉ ra như các yếu tố như thời gian, nồng độ dung môi sử dụng, tỉ lệ dược liệu – dung môi và số lần chiết cũng sẽ ảnh hưởng tới hiệu suất chiết của Saponin [21]

Một số phương pháp cụ thể đã được thực nghiệm như sau:

Theo Jia Yuanyin và cộng sự: quả Bồ kết, sấy khô, nghiền nhỏ, dùng cồn 75% chiết siêu âm 3 lần, mỗi lần 6ml/g nguyên liệu, thời gian chiết là 2 giờ, lọc, gộp dịch lọc, cô dưới áp suất giảm đến mật độ tương đối 1.20-1.35 (đo ở 50°C), và thu được dịch chiết Saponin thô Quá trình tinh chế và tách nhựa macroporous, tỷ lệ ưu tiên của chiết xuất Saponin thô vào cột và thêm nước để hòa tan mẫu: nước là 1: 5 (g: mL), và tỷ lệ tải mẫu và nhựa thích hợp là 1:20 (g:g) [36]

Theo Yue Dai và các cộng sự: Cân 1kg bột thô Bồ kết, thêm 6,5 lít ethanol 60%, đun hồi lưu trong 2 giờ, lặp lại ba lần, gộp dịch chiết ethanol, cô quay thu được dung dịch đậm đặc, dịch chiết thu được cô đặc 3 lần bằng 500ml cloroform, sau đó chiết 3 lần bằng 500ml n-butanol, gộp các dịch chiết n-butanol, cô quay thu dịch chiết khô Sau thử nghiệm định tính thông thường, chiết xuất khô chứa 60,5% Saponin được xác định bằng phép đo quang phổ tử ngoại [33]

Theo Su Liuhua: Nghiền nhỏ dược liệu khô của quả Bồ kết, thêm 5-8 lần lượng dung dịch nước - cồn có hàm lượng carbon thấp, chiết xuất bằng siêu âm 2-3 lần và lọc để thu được dịch chiết, cô đặc dịch chiết bằng thiết bị cô quay cho đến khi không còn mùi cồn, cho vào cột nhựa xốp, lần đầu tiên được rửa bằng nước hoặc dung dịch EtOH 10-20% để loại bỏ tạp chất, sau đó rửa giải với dung dịch EtOH 55-70% và thu dịch rửa giải; EtOH được thu hồi từ dịch rửa giải dưới áp suất giảm, lọc qua màng siêu lọc và dịch lọc được cô đặc qua màng lọc nano và sấy khô để thu được Saponin Sáng chế có ưu điểm là ô nhiễm thấp, chi phí thấp và năng suất cao, sản phẩm thu được không có dư lượng dung môi và có thể được sử dụng trực tiếp trong sản xuất thực phẩm và thuốc [35]

Theo Nguyễn Đức Tài: Quả Bồ kết sấy khô, bỏ hạt, bẻ nhỏ chiết nước ba lần với 5ml/g, đun sôi 2 giờ, gộp dịch chiết cô cách thủy tới dạng cao lỏng (1:1), thêm 300ml aceton lọc thu tủa, thêm 250ml EtOH 90% hòa tan tủa Tẩy màu bằng than hoạt hai lần và cô cách thủy đến cắn thu Saponin tinh khiết [12]

Theo Trần Thị Vân: Quả Bồ kết được sấy khô, bẻ nhỏ, chiết với nước 3 lần, mỗi lần 45 phút, với tỉ lệ dung môi: dược liệu lần lượt là 5:1, 4:1, 3:1 Gộp dịch chiết, cô cách thuỷ tới dạng cao lỏng (1:1), thêm 300ml EtOH 90%, lọc loại tủa Dịch lọc được đun nóng, loại tạp bằng than hoạt tính (3 lần, mỗi lần 2g) Cô quay loại dung môi, sau đó sấy khô ở 50°C tới khi đạt thể chất cao khô[13]

1.3 Phương pháp bào chế gel bồ kết

Hiện nay các chế phẩm từ Bồ kết chủ yếu là các chế phẩm gel dầu gội đầu, dung dịch rửa chén, có chứa thành phần tá dược CMC, lauryl sulfat, các chất bảo quản Tuy nhiên, hiện nay chưa có nghiên cứu nào bào chế dạng gel dùng tại niêm mạc cho chi Gleditsia

Theo Nguyễn Đức Tài và Bùi Thị Thu Trang, chế phẩm gel thụt đại tràng từ Bồ kết được bào chế theo công thức

Bảng 1.1 Công thức chế phẩm gel thụt đại tràng từ Bồ kết STT Tên nguyên liệu Số lượng cho 1 đơn vị

1 Cao Bồ kết 0,12g 2 CMC 0,09g 3 Nipagin 0,018g 4 Glycerin 0,9g 5 Nước cất vừa đủ 9,00g 6 Tuýp nhựa 1 7 Bao bì 1 Với quy trình bào chế được thể hiện như sau: Cân đong các thành phần trong công thức, ngâm trương nở CMC tới khi tạo dung dịch đồng nhất Hoà tan hoàn toàn Nipagin trong Glycerin và nước, rồi phối trộn với dung dịch CMC đã ngâm trương nở Cuối cùng, thêm bột cao Bồ kết và phối trộn tới đồng nhất

CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu

2.1.1 Nguyên liệu

Tiến hành khảo sát chiết cao trên 3 mẫu quả Bồ kết (Gleditsia australis.B Forbes

& Hemsl) được thu hái tại các địa điểm sau và thời gian sau: - Ngõ 90, đường Yên Lạc, xã Cần kiệm, huyện Thạch Thất, Thành phố Hà Nội,

thu hái vào 24/8/2022 (Mẫu 1)

- Số 18, ngõ 79, đường Yên Lạc, xóm Hoà Bình, thôn Yên Lạc 2, xã Cần Kiệm,

huyện Thạch Thất, Thành phố Hà Nội, thu hái vào 23/7/2022 (Mẫu 2)

- Số 96, đường Yên Lạc, xóm Hoà Bình, xã Cần Kiệm, huyện Thạch Thất, Thành

phố Hà Nội, thu hái vào 17/8/2022 (Mẫu 3)

Với nâng cấp quy mô quy trình chiết xuất tạo cao khô Bồ kết, sử dụng mẫu quả Bồ kết thu hái tại số 96, đường Yên Lạc, xóm Hoà Bình, thôn Yên Lạc 2, xã Cần Kiệm, huyện Thạch Thất, Thành phố Hà Nội Mẫu quả sau khi thu hái được xử lý và phơi khô tại Bộ môn Dược cổ truyền – Trường Đại học Dược Hà Nội Các mẫu dược liệu được thu hái và bảo quản trong túi zip để làm thực nghiệm

Sử dụng mẫu cao khô Bồ kết thu được từ các quy trình nâng quy mô để làm nguyên liệu cho quá trình nâng cấp quy trình bào chế sản phẩm gel thụt đại tràng

2.1.2 Dung môi, hoá chất

Bảng 2.1 Dung môi, hoá chất

Dung môi, hoá chất Nguồn gốc Tiêu chuẩn

Ethanol 96% Việt Nam NSX Cloroform Trung Quốc NSX Anhydrit acetic Trung Quốc NSX Acid sulfuric đặc Trung Quốc NSX Ethyl ether Trung Quốc NSX n-butanol Trung Quốc NSX CMC Trung Quốc NSX Glycerin Trung Quốc NSX Nipagin Trung Quốc NSX

2.1.3 Dụng cụ

- Máy cô quay: BÜCHI R-220, Thụy Sĩ - Máy cất quay chân không IKA, RV-8V - Máy siêu âm Elmasonic S

- Máy gia nhiệt BATHS HH-S2, BATHS HH-S4 - Bếp hồng ngoại

- Tủ sấy Memmert, tủ sấy Shellab, tủ sấy Wiseven - Cân phân tích Adapter, cân kĩ thuật Precisa, cân xác định độ ẩm - Máy siêu âm Elmasonic S

- Máy khuấy từ gia nhiệt Jenway - Bộ nồi inox 304 dung tích 15L, 17L - Bộ nồi chiết inox 304 dung tích 100L có gia nhiệt - Bộ dụng cụ chiết hồi lưu

- Pipet pasteur, pipet có bầu - Bình cầu đáy tròn, bình định mức các loại - Ống nghiệm, ống đong (5ml-1000ml), ống ly tâm, cốc có mỏ, đũa thuỷ tinh, phễu lọc, rây

2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Xây dựng quy trình lựa chọn nguyên liệu và chế biến quả bồ kết

Quy trình lựa chọn phương pháp chế biến quả Bồ kết Tiến hành chế biến mẫu 3 mẫu bồ kết từ 3 vùng trồng bằng phương pháp nướng, sao, sấy ở 100°C trong 1 giờ Tiến hành so sánh các mẫu với các chỉ tiêu: hình thái, hàm ẩm

Với phương pháp nướng, tiến hành như sau: Tiến hành nướng các mẫu Bồ kết ở 60°C trong từ 2 tới 3 phút Tiến hành so sánh các mẫu về các chỉ tiêu cảm quan, hình thái và hàm ẩm

Với phương pháp sao, tiến hành như sau: Các mẫu Bồ kết được cân cùng 1 lượng đều nhau, tiến hành sao ở nhiệt độ 400°C tới khi ngả màu nâu cánh gián, có mùi thơm

Với phương pháp sấy, tiến hành như sau: Các mẫu Bồ kết được cân cùng lượng đều nhau, được sấy trong tủ sấy tĩnh ở 100°C trong 1 giờ

Tiến hành khảo sát khoảng nhiệt độ và thời gian sấy phù hợp cho mẫu dược liệu Bồ kết, khảo sát 2 quá trình sấy: 100°C trong 1 giờ và 150°C trong 45 phút, vừa sấy vừa đảo, 15 phút tiến hành đảo dược liệu 1 lần

Phương pháp: - Sấy ở 100°C: Cân 200g Bồ kết, đem đi sấy trong tủ sấy tĩnh tại 100°C trong 1 giờ, sau 15 phút tiến hành đảo mẫu 1 lần

- Sấy ở 150°C: Cân 200g Bồ kết, đem đi sấy trong tủ sấy tĩnh tại 150°C trong 45 phút, sau 15 phút tiến hành đảo 1 lần

Tiến hành so sánh các mẫu về hình thái, cảm quan, hàm ẩm quả

2.2.2 Quy trình chiết xuất tạo cao khô Bồ kết

Theo DĐVNV, cao khô dược liệu được định nghĩa là khối hoặc bột khô, đồng nhất, nhưng dễ hút ẩm Cao khô không được có độ ẩm lớn hơn 5% Cao Bồ kết chiết nước được tiến hành theo 3 giai đoạn:

Giai đoạn 1: Chiết tách Giai đoạn 2: Loại tạp Giai đoạn 3: Thu hồi dung môi và sấy tạo sản phẩm cao khô

2.2.2.1 Chiết tạo cao khô Bồ kết – Quy mô 100g Bồ kết/ mẻ

Để khảo sát ảnh hưởng của độ đậm đặc của dịch chiết tới quá trình loại tạp và tạo sản phẩm cao khô, tiến hành chế tạo cao khô theo 2 phương pháp sau:

Phương pháp 1: Cô dịch chiết tới 1/10 thể tích Cân 100g quả bồ kết đã được sấy, bẻ làm 2 hoặc 3, chiết nóng bằng cách đun cách thuỷ, mỗi lần 45 phút (tính từ lúc dịch chiết đạt nhiệt độ 80°C), dung môi là nước tinh khiết, tỷ lệ dung môi: dược liệu ở ba lần chiết lần lượt là 5:1, 4:1, 3:1 Lọc và gộp dịch chiết, cô cách thuỷ tới khi thể tích còn 1/10 (120ml) Thêm 300ml EtOH 90%, lọc loại tạp, cô quay loại cồn, cô đặc và sấy tạo cao khô, thu được cao Bồ kết giàu saponin

Phương pháp 2: Cô dịch chiết tới khi đạt tỷ trọng tương đối 1,10-1,20 (nhiệt độ phòng)

Cân 100g Bồ kết đã sấy, bẻ làm 2 hoặc 3, chiết nóng bằng cách đun cách thuỷ, mỗi lần 45 phút (tính từ lúc dịch chiết đạt nhiệt độ 80°C), dung môi là nước tinh khiết, tỷ lệ dung môi: dược liệu ở ba lần chiết lần lượt là 5:1, 4:1, 3:1 Lọc và gộp dịch chiết, cô cách thuỷ tới khi thể tích đạt tỉ trọng 1,10- 1,20 ở nhiệt độ phòng Thêm 10 lần thể tích EtOH 96%, lọc loại tạp, cô quay loại cồn, cô đặc và sấy tạo cao khô, thu được cao Bồ kết giàu saponin

Tiến hành so sánh các mẫu về lượng tạp xuất hiện trong các quy trình, khối lượng cao khô từ 2 phương pháp

2.2.2.2 Chiết tạo cao khô Bồ kết – quy mô 500g Bồ kết/ mẻ

Tiến hành khảo sát phương pháp 2 phương pháp chiết sau: Phương pháp 1: Cô dịch chiết tới 1/10 thể tích

Cân 500g quả Bồ kết đã sấy, bẻ làm 2 hoặc 3, chiết nóng bằng cách chiết trực tiếp bằng nồi chiết inox 304, mỗi lần 45 phút (tính từ lúc dịch chiết đạt nhiệt độ 60°C), dung môi là nước tinh khiết, tỷ lệ dung môi: dược liệu ở ba lần chiết lần lượt là 5:1, 4:1, 3:1 Lọc và gộp dịch chiết, cô cách thuỷ tới khi thể tích còn 1/10 (600ml) Thêm 300ml EtOH 90%, lọc loại tạp, cô quay loại cồn, cô đặc và sấy tạo cao khô, thu được cao Bồ kết giàu saponin

Phương pháp 2: Cô dịch chiết tới khi đạt tỷ trọng tương đối 1,10-1,20 (nhiệt độ phòng)

Cân 500g quả Bồ kết đã sấy, bẻ làm 2 hoặc 3, chiết nóng bằng cách đun trực tiếp bằng nồi chiết inox 304, mỗi lần 45 phút (tính từ lúc dịch chiết đạt nhiệt độ 60°C), dung môi là nước tinh khiết, tỷ lệ dung môi: dược liệu ở ba lần chiết lần lượt là 5:1, 4:1, 3:1 Lọc và gộp dịch chiết, cô cách thuỷ tới khi thể tích đạt tỉ trọng tương đối 1,10- 1,20 Thêm 10 lần thể tích EtOH 96%, lọc loại tạp, cô quay loại cồn, cô đặc và sấy tạo cao khô, thu được cao Bồ kết giàu saponin

Tiến hành so sánh các mẫu về lượng tạp xuất hiện trong các quy trình, khối lượng cao khô từ 2 phương pháp

2.2.2.3 Chế tạo cao khô Bồ kết – quy mô 2kg Bồ kết/ mẻ

Phương pháp: Cô dịch chiết tới khi đạt tỷ trọng tương đối 1,10-1,20 (nhiệt độ phòng)

Cân 2kg Bồ kết đã sấy, bẻ làm 2 hoặc 3, chiết nóng bằng cách đun trực tiếp bằng nồi chiết inox 304, mỗi lần 45 phút (tính từ lúc dịch chiết đạt nhiệt độ 60°C), dung môi là nước tinh khiết, tỷ lệ dung môi: dược liệu ở ba lần chiết lần lượt là 5:1, 4:1, 3:1 Lọc và gộp dịch chiết, cô cách thuỷ tới khi thể tích đạt tỉ trọng tương đối 1,10- 1,20 ở nhiệt độ phòng Thêm 10 lần thể tích EtOH 96%, lọc loại tạp, cô quay loại cồn, cô đặc và sấy tạo cao khô, thu được cao Bồ kết giàu saponin

Đánh giá về khối lượng cao thu được, hàm lượng saponin toàn phần trong cao theo phương pháp cân

2.2.2.4 Chế tạo cao khô Bồ kết- quy mô 10kg Bồ kết/ mẻ

Cân 10kg quả Bồ kết, sấy ở 100°C trong 60 phút, có 15 phút đảo 1 lần Sau đó bẻ làm đôi hoặc ba, chiết nóng 3 lần trong nồi chiết cao 100l sử dụng inox 304, mỗi lần chiết 45 phút (tính từ lúc đạt 60 °C), dung môi là nước tinh khiết, tỷ lệ dung môi: dược liệu ở ba lần chiết lần lượt là 5:1, 4:1, 3:1 Lọc và gộp dịch chiết, cô cách thuỷ tới khi thể tích đạt tỉ trọng 1,10- 1,20 Thêm 10 lần thể tích EtOH 96%, lọc loại tạp, cô quay loại cồn, cô đặc và sấy tạo cao khô, thu được cao Bồ kết giàu saponin

Đánh giá khối lượng cao thu được, hàm lượng saponin toàn phần trong cao theo phương pháp cân

2.2.3 Quy trình bào chế gel thụt đại tràng từ quả Bồ kết

2.2.3.1 Công thức và quy trình chung điều chế gel thụt đại tràng

- Công thức bào chế cho 1 chế phẩm

Bảng 2.2 Công thức gel thụt đại tràng từ Bồ kết STT Tên nguyên liệu Số lượng cho 1 đơn vị

1 Cao Bồ kết 0,12g 2 CMC 0,09g 3 Nipagin 0,018g

4 Glycerin 0,9g 5 Nước cất vừa đủ 9,00g 6 Tuýp nhựa 1 7 Bao bì 1 - Quy trình điều chế gel

Hình 2.1 Sơ đồ quy trình bào chế gel thụt đại tràng

Mô tả quy trình bào chế - Kiểm tra nguyên phụ liệu, các tiêu chuẩn của nguyên phụ liệu, tính toàn vẹn của nguyên phụ liệu

- Chuẩn bị phòng pha chế Phòng pha chế phải đạt yêu cầu về vệ sinh: lau sạch bàn pha chế, rửa sạch các dụng cụ pha chế và tráng, lau lại bằng cồn 30° trước khi pha chế

- Cân, đong các thành phần - Ngâm trương nở hoàn toàn CMC trong nước - Hoà tan Nipagin bằng nước nóng, sau đó phối hợp với glycerin và cao Bồ kết cho đồng nhất

- Phối hợp hỗn hợp trên vào CMC đã được ngâm trương nở - Thêm nước vừa đủ khối lượng

- Kiểm nghiệm bán thành phẩm: đạt các chỉ tiêu về tính chất, màu sắc, mùi, pH… - Đóng vào tuýp, dán nhãn

2.2.3.2 Bào chế gel thụt đại tràng quy mô 50 đơn vị/ lô

- Công thức bào chế

Bảng 2.3 Công thức gel thụt đại tràng quy mô 50 đơn vị/ lô

STT Tên nguyên liệu Số lượng cho 50 đơn vị 1 Cao Bồ kết 6,0g

2 CMC 4,5g 3 Nipagin 0,9g 4 Glycerin 45g 5 Nước cất vừa đủ 450,0g 6 Tuýp nhựa 50 chiếc 7 Bao bì 50 chiếc - Mô tả quy trình bào chế

 Ngâm trương nở 4,5g CMC trong 150g nước cất tới khi trương nở hoàn toàn

 Hoà tan 0,9g Nipagin trong 7ml nước nóng, thêm 45g Glycerin, hoà tan hoàn toàn Phân tán đều Bột cao Bồ kết đã nghiền mịn, tạo thành dung dịch đồng nhất

 Phối hợp hỗn hợp trên với CMC đã ngâm trương nở, khuấy trộn đều, để yên cho hết bọt khí,

 Kiểm nghiệm bán thành phẩm: đạt các chỉ tiêu về màu sắc, tính chất, pH

 Đóng lọ, dán nhãn

 Đánh giá về các chỉ tiêu cảm quan, độ trong, độ đồng đều khối lượng

2.2.3.3 Bào chế gel thụt đại tràng quy mô 200 đơn vị/ lô

- Công thức lô

Bảng 2.4 Công thức lô sản xuất gel thụt đại tràng quy mô 200 đơn vị/ lô STT Tên nguyên liệu Số lượng cho lô 200 đơn vị

1 Cao Bồ kết 24g 2 CMC 18g 3 Nipagin 3,6g 4 Glycerin 180g 5 Nước cất vừa đủ 1.800g 6 Tuýp nhựa 200 chiếc 7 Bao bì 200 chiếc

- Quy trình bào chế:

 Ngâm trương nở CMC: Ngâm trương nở 18g CMC trong 1300ml nước Sử dụng máy khuấy từ, tốc độ 300v/ phút, rắc từ từ CMC và khuấy tới khi trương nở hoàn toàn

 Hoà tan hoàn toàn 3,6g Nipagin trong 200g nước cất đã đun nóng, thêm 180g glycerin, khuấy trộn tới khi tan hoàn toàn Cao Bồ kết được nghiền nhỏ, được phối trộn vào để tạo thành dung dịch đồng nhất

 Phối trộn hỗn hợp trên vào dung dịch CMC đã ngâm trương nở, trộn đều tới đồng nhất

 Kiểm nghiệm bán thành phẩm về: màu sắc, độ trong, pH

 Đóng lọ, dán nhãn

 Đánh giá về các chỉ tiêu cảm quan, độ trong, độ đồng đều khối lượng

2.2.3.4 Bào chế gel thụt đại tràng quy mô 2000 chế phẩm/ lô

- Công thức lô

Bảng 2.5 Công thức bào chế gel thụt đại tràng quy mô 2000 chế phẩm/ lô STT Tên nguyên liệu Số lượng cho lô 2000 đơn vị

1 Cao Bồ kết 240g 2 CMC 180g 3 Nipagin 36g 4 Glycerin 1800g 5 Nước cất vừa đủ 18000g 6 Tuýp nhựa 2000 chiếc 7 Bao bì 2000 chiếc

- Quy trình bào chế:

 Ngâm trương nở CMC: Điều chế CMC có nồng độ xấp xỉ 1%

 Hoà tan Nipagin trong nước cất và glycerin, đun nóng

 Phối hợp hỗn hợp trên vào dung dịch CMC đã ngâm trương nở, khuấy đều

 Phối hợp với cao khô bồ kết đã tán mịn tới đồng nhất

 Kiểm nghiệm bán thành phẩm: pH, cảm quan