Nghiên cứu bào chế gel thụt đại tràng từ quả bồ kết việt nam và đánh giá một số tác dụng khóa luận tốt nghiệp dược sĩ

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI BÙI THỊ THU TRANG NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ GEL THỤT ĐẠI TRÀNG TỪ QUẢ BỒ KẾT VIỆT NAM VÀ ĐÁNH GIÁ MỘT SỐ TÁC DỤNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2023 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI BÙI THỊ THU TRANG Mã sinh viên: 1801699 NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ GEL THỤT ĐẠI TRÀNG TỪ QUẢ BỒ KẾT VIỆT NAM VÀ ĐÁNH GIÁ MỘT SỐ TÁC DỤNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS.TS Nguyễn Mạnh Tuyển Nơi thực hiện: Bộ môn Dược học cổ truyền Khoa DL-DHCT HÀ NỘI – 2023 LỜI CẢM ƠN Trước trình bày phần nội dung đề tài khóa luận mình, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến người suốt thời gian qua hỗ trợ, động viên giúp đỡ em hồn thành cách tốt khóa luận tốt nghiệp Trước tiên, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến người thầy đáng kính em: PGS.TS Nguyễn Mạnh Tuyển – Trưởng Khoa Dược liệu – Dược học cổ truyền, Trưởng Bộ môn Dược học cổ truyền – Trường Đại học Dược Hà Nội Thầy không tạo điều kiện thuận lợi giúp em hồn thành khóa luận mà hướng dẫn cho em dần hình thành tư khoa học, độc lập, tự chủ nghiên cứu Em xin gửi lời cảm ơn đến thầy giáo, cô giáo anh chị kỹ thuật viên Khoa Dược lý – Dược lâm sàng – Trường Đại học Dược Hà Nội, đặc biệt cô Nguyễn Thu Hằng cô Nguyễn Nữ Hải Yến bảo giúp đỡ em nhiều mặt kiến thức chuyên môn trình thực đề tài Em xin bày tỏ lòng biết ơn đến hai bạn thỏ hi sinh khoa học, giúp em hồn thành tốt khóa luận Em xin chân thành cảm ơn tới ThS Nguyễn Khắc Tiệp, giảng viên Khoa Công nghệ Sinh học – Trường Đại học Dược Hà Nội giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho em thực khóa luận Sự hỗ trợ thầy góp phần khơng thể thiếu để em hồn thiện đề tài Em xin gửi biết ơn tới toàn thể thầy cô Trường Đại học Dược Hà Nội dạy dỗ em suốt khoảng thời gian học tập trường Em xin kính chúc thầy ln mạnh khỏe công tác tốt Cuối cùng, em muốn cảm ơn gia đình, bạn bè, em cảm ơn chị Lê Hương Giang nhóm nghiên cứu mơn Dược học cổ truyền, đặc biệt bạn Trần Thị Vân, người bạn thân suốt năm năm đại học, chia sẻ buồn vui, giúp đỡ động lực ngày em suốt trình nghiên cứu Bằng tất yêu quý biết ơn, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới bạn Nguyễn Văn Anh, Vũ Anh Minh, Trần Ngọc Phan nhiệt tình giúp đỡ em suốt thời gian làm nghiên cứu khoa học Các bạn gương sáng để em noi theo đời sinh viên học tập nghiên cứu khoa học trường Hà Nội ngày tháng năm 2023 Sinh viên Bùi Thị Thu Trang MỤC LỤC DANH MỤC HÌNH ẢNH DANH MỤC CÁC BẢNG ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan đại tràng Đại tràng - Cấu tạo chức 1.1.1.1 Vị trí đại tràng 1.1.1.2 Cấu tạo đại tràng 1.1.1.3 Chức đại tràng Đặc điểm đường dùng thuốc - trực tràng Thuốc nhuận tràng 1.2 Tổng quan dạng bào chế gel Khái niệm Tá dược tạo gel thân nước Đặc điểm tá dược tạo gel thân nước Kỹ thuật bào chế gel 1.2.4.1 Phương pháp hòa tan 1.2.4.2 Phương pháp trộn đơn giản Tiêu chuẩn chất lượng gel 10 1.3 Tổng quan Bồ kết Việt Nam 10 Đặc điểm thực vật phân bố 10 1.3.1.1 Đặc điểm thực vật 10 1.3.1.2 Phân bố, thu hái chế biến 11 Thành phần hóa học 11 Tác dụng sinh học công dụng 12 1.3.3.1 Tác dụng công dụng dân gian 12 1.3.3.2 Nghiên cứu hoạt tính sinh học 13 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 2.2 Đối tượng nghiên cứu 14 Hố chất, ngun liệu, thiết bị động vật thí nghiệm 14 Hoá chất nguyên liệu sử dụng 14 Thiết bị nghiên cứu 14 Động vật thí nghiệm 15 2.3 Nội dung nghiên cứu 15 Nghiên cứu công thức điều chế gel thụt đại tràng từ Bồ kết Việt Nam 15 Đánh giá số tác dụng gel 15 2.4 Phương pháp nghiên cứu 15 Phương pháp chiết xuất Saponin 15 Nghiên cứu công thức điều chế gel từ cao Bồ kết Việt Nam 16 2.4.2.1 Lựa chọn tá dược 16 2.4.2.2 Xác định tỷ lệ tá dược 17 2.4.2.3 Thiết lập công thức gel 17 2.4.2.4 Khảo sát số tiêu chất lượng gel 17 Đánh giá số tác dụng 18 2.4.3.1 Đánh giá ảnh hưởng gel Bồ kết lên nhu động ruột thỏ cô lập 18 2.4.3.2 Đánh giá tác dụng kháng khuẩn 20 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 22 3.1 Kết chiết xuất Saponin từ Bồ kết Việt Nam 22 3.2 Nghiên cứu công thức điều chế gel 22 Xác định tỷ lệ tá dược 22 Thiết lập công thức gel 23 Khảo sát số tiêu chất lượng 24 Xây dựng quy trình điều chế 25 3.2.4.1 Đặc điểm thành phẩm 25 3.2.4.2 Sơ đồ quy trình điều chế 27 3.3 Đánh giá số tác dụng sinh học gel 29 Đánh giá ảnh hưởng gel Bồ kết lên nhu động ruột thỏ cô lập 29 3.3.1.1 Ảnh hưởng dịch chiết Bồ kết biên độ nhu động ruột 29 3.3.1.2 Tác dụng đối kháng với Atropin dịch chiết Bồ kết nhu động ruột thỏ cô lập 30 Đánh giá tác dụng kháng khuẩn 32 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1-1 Minh họa thành phần đại tràng Hình 1-2 Giới hạn ống hậu mơn trực tràng [36] Hình 1-3 Minh họa trực tràng Hình 1-4 Sơ đồ tóm tắt điều chế gel phương pháp hòa tan Hình 1-5 Sơ đồ tóm tắt điều chế gel phương pháp trộn đơn giản Hình 1-6 Bồ kết Việt Nam 10 Hình 1-7 Cơng thức hóa học Saponin [2] 12 Hình 1-8 Cơng thức hóa học acid oleanolic [29] 12 Hình 1-9 Cơng thức hóa học acid echinoxystic [29] 12 Hình 2-1 Sơ đồ quy trình chiết xuất 15 Hình 2-2 Sơ đồ quy trình tinh chế 16 Hình 2-3 Mơ hình invitro ruột thỏ lập [41] 20 Hình 2-4 Phương pháp xác định MIC 21 Hình 3-1 Phản ứng tạo bọt 24 Hình 3-2 Phản ứng Liebermann - Burchard 24 Hình 3-3 pH gel 25 Hình 3-4 Quy trình điều chế 27 Hình 3-5 Nhãn bao bì gel Bồ kết 28 Hình 3-6 Ảnh hưởng dịch chiết Bồ kết biên độ nhu động ruột 29 Hình 3-7 Minh họa ảnh hưởng dịch chiết Bồ kết biên độ nhu động ruột 30 Hình 3-8 Tác dụng đối kháng dịch chiết Bồ kết Atropin 31 Hình 3-9 Minh họa tác dụng đối kháng dịch chiết Bồ kết Atropin 32 Hình 3-10 E.coli (mặt trước) 33 Hình 3-11 S.aureus (mặt trước) 33 Hình 3-12 E.coli (mặt sau) 33 Hình 3-13 S.aureus (mặt sau) 33 Hình 3-14 Khả diệt khuẩn theo nồng độ 34 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Hóa chất nguyên liệu sử dụng 14 Bảng 2.2 Chỉ tiêu chất lượng gel 17 Bảng 3.1 Thử nghiệm tỷ lệ tá dược tạo gel 22 Bảng 3.2 Thử nghiệm tỷ lệ tá dược tạo gel 22 Bảng 3.3 Tỷ lệ tá dược lựa chọn 23 Bảng 3.4 Công thức gel Bồ kết 23 Bảng 3.5 Kết khảo sát tiêu gel Bồ kết 24 Bảng 3.6 Kết khảo sát tiêu độ đồng khối lượng 25 Bảng 3.7 Nguyên liệu điều chế 1000 tuýp gel 27 ĐẶT VẤN ĐỀ Táo bón vấn đề tiêu hóa phổ biến toàn giới, ảnh hưởng đến lứa tuổi [27], [43] Một phân tích gộp cho thấy tỷ lệ chung mắc táo bón vơ mạn tính giới năm 2020 10,1%, kết đánh giá dựa tiêu chuẩn ROME IV (là tiêu chuẩn chẩn đoán rối loạn chức tiêu hóa) [23] Táo bón gây ảnh hưởng tiêu cực đến sức khỏe Khi thay đổi lối sống khơng giải tình trạng táo bón, thuốc nhuận tràng phương pháp điều trị [27], [40] Nghiên cứu dạng thuốc dùng theo đường trực tràng có lịch sử lâu đời, khoảng 500 năm trước cơng nguyên, Hypocrat viết việc sử dụng thuốc theo đường trực tràng Trải qua nhiều kỷ, việc sử dụng thuốc theo đường khơng có tiến đáng kể, năm 1930, nước châu Âu, người ta bắt đầu ý đến ưu điểm thuốc dùng theo đường trực tràng sử dụng dạng thuốc thay thuốc uống, trường hợp dược chất có mùi vị khó chịu, dễ gây nơn, dược chất gây kích ứng mạnh dược chất bị phá hủy dịch dày hay dược chất bị chuyển hóa nhanh gan [1] Hiện nay, xu hướng sử dụng thuốc có nguồn gốc thiên nghiên ngày ưa chuộng tính an tồn mà đem lại Việt Nam đất nước thiên nhiên ưu với 12000 lồi thực vật, có 6000 lồi dùng làm thuốc [12], [16] Quả Bồ kết Việt Nam từ lâu nhân dân sử dụng làm thuốc, tác dụng nhuận tràng đề cập [14] Trên giới có số nghiên cứu tác dụng khác ứng dụng để làm thuốc loài Bồ kết [30], [32], nhiên nghiên cứu tác dụng nhuận tràng, dạng thuốc dùng theo đường trực tràng, chế chưa thật đầy đủ Vì vậy, nhằm mục đích tìm hiểu cơng thức điều chế dạng gel thuốc từ Bồ kết Việt Nam, dùng đường trực tràng tác dụng nó, để có thêm tri thức, nâng cao giá trị sử dụng thuốc dựa kinh nghiệm dân gian kiến thức bào chế nghiên cứu, khoá luận tốt nghiệp: “Nghiên cứu điều chế gel thụt đại tràng từ Bồ kết Việt Nam đánh giá số tác dụng” thực với hai mục tiêu sau: Nghiên cứu công thức bào chế gel thụt đại tràng, khảo sát số tiêu chất lượng Đánh giá giá tác dụng nhuận tràng tác dụng kháng khuẩn chế phẩm gel Bồ kết CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan đại tràng Đại tràng - Cấu tạo chức 1.1.1.1 Vị trí đại tràng Đại tràng hay gọi ruột già, phần gần cuối hệ thống tiêu hóa, nằm ổ bụng [18] Đại tràng tạo nên khung hình chữ U ngược, vây quanh tiểu tràng (ruột non) [4], [18] Đi từ phải sang trái, đại tràng gồm thành phần sau: Hình 1-1 Minh họa thành phần đại tràng “Manh tràng ruột thừa; kết tràng, kết tràng bao gồm: kết tràng lên, góc kết tràng trái, kết tràng ngang, góc kết tràng phải, kết tràng xuống, kết tràng xích ma; trực tràng ống hậu môn” [4], [15], [18] 1.1.1.2 Cấu tạo đại tràng - Manh tràng ruột thừa: Manh tràng nơi ruột non đổ vào đại tràng, ngắn Hình dạng manh tràng giống hình túi Giữa ruột non manh tràng có van hồi manh tràng Van giữ cho chất ruột già khơng chảy ngược lại lên ruột non Ruột thừa có hình dạng giống giun, dài khoảng – 13 cm, trung bình khoảng cm Thực tế ruột thừa di tích cịn sót lại q trình tiến hóa người vượn người Ruột thừa phần đầu manh tràng thối hóa thành [4], [18] - Kết tràng: Kết tràng lên từ manh tràng, dọc theo bên phải ổ bụng Cho đến gặp gan, cong sang trái tạo nên góc kết tràng phải Tiếp theo kết tràng ngang Kết tràng ngang ngang qua ổ bụng Đi từ góc gan đến phía lách cong xuống tạo thành góc kết tràng trái Kết tràng xuống chạy thẳng dọc trái ổ bụng xuống để nối với kết tràng xích ma Kết tràng xích ma có hình chữ S, với hai đầu cố định phần di động [4], [18] - Trực tràng: Atropin + Bồ kết 0.03 μg/ml Atropin + Bồ kết 0.0625 μg/ml Atropin + Bồ kết 0.125 μg/ml Atropin + Bồ kết 0.25 μg/ml Hình 3-9 Minh họa tác dụng đối kháng dịch chiết Bồ kết Atropin Nhận xét: Dịch chiết Bồ kết có tác dụng đối kháng với tác dụng giảm nhu động Atropine Tác dụng phụ thuộc liều, biên độ nhu động tăng dần nồng độ dịch chiết Bồ kết tăng dần Đánh giá tác dụng kháng khuẩn - Phương pháp khuếch tán đĩa thạch Tiến hành: Tiến hành thử nghiệm với nồng độ 500, 400, 300, 200, 100 mg/ml (1000 mg/ml khơng hịa tan nước) 32 Hình 3-10 E.coli Hình 3-11 S.aureus (mặt trước) (mặt trước) Hình 3-12 E.coli Hình 3-13 S.aureus (mặt sau) (mặt sau) E coli chụp từ trước sau : khơng có S aureus chụp từ mặt trước mặt sau vịng vơ khuẩn với tất nồng độ Đường kính vịng vơ khuẩn thử nghiệm (500-100 mg/ml) 2,32(±0.12), 2,18(±0.03), 2,00(±0,04) 1,89(±0,12) mm tương ứng với nồng độ 500, 400, 300 200 mg/ml, nồng độ 100 mg/ml khơng có vịng vơ khuẩn 33 - Phương pháp xác định MIC: Thử nghiệm với dãy nồng độ 250, 200, 125, 100, 62.5, 50, 31.25, 25… mg/ml Kết : MIC (mg/ml) MBC (mg/ml) S aureus 125 200 E coli 200 >250 Khả diệt khuẩn theo nồng độ Các mẫu pha loãng PBS, cấy đĩa thạch TSA, ủ 37°C, 24h, để xác định lượng vi sinh vật sống mẫu Lượng vi sinh vật bị tiêu diệt so sánh với lượng vi sinh vật ban đầu mẫu (106 CFU/ml) Hình 3-14 Khả diệt khuẩn theo nồng độ - Kết : Mẫu có tác dụng với S.aureus, hai nồng độ 200 250 mg/ml có khả diệt log CFU/ml VSV (trên 99,9%) Với E coli, tác dụng hơn, diệt log CFU/ml VSV (dưới 90%) - Nhận xét : Mẫu có hoạt tính kháng VSV, nhiên không mạnh, tác dụng mạnh S aureus E coli Nếu thực gel có tác dụng kìm/diệt khuẩn, nên cân nhắc việc thực với nồng độ ≥200 mg cao/ml gel Nếu thực nồng độ nhỏ hơn, mẫu khơng có tác động kìm/diệt khuẩn, khơng đánh giá tác dụng kìm/diệt khuẩn Hiện mẫu gel Bồ kết khoảng 13 mg/ml, khơng có tác dụng kìm/diệt khuẩn BÀN LUẬN Về công thức điều chế gel thụt đại tràng 34 Cho đến chưa có nhiều đề tài nghiên cứu cụ thể công thức điều chế gel thụt đại tràng từ Bồ kết Việt Nam Trên thị trường có nhiều sản phẩm có tác dụng nhuận tràng với đa dạng dạng bào chế khác nhau, đa số loại thuốc sử dụng theo đường uống Nhận thấy thuốc dùng theo đường trực tràng có ưu điểm vượt trội so với đường uống, trường hợp dược chất có mùi vị khó chịu, dễ gây nơn, dược chất gây kích ứng mạnh dược chất bị phá hủy dịch dày hay dược chất bị chuyển hóa nhanh gan Thông tin từ tài liệu cổ tác dụng nhuận tràng lồi Bồ kết, đó, Saponin thành phần tác dụng Chính lý trên, khóa luận tiến hành nghiên cứu cơng thức điều chế gel thụt đại tràng từ Bồ kết Việt Nam, có tác dụng nhuận tràng, dùng đường trực tràng, đạt ưu điểm trội tính an tồn, dễ sử dụng, tác dụng nhanh, giá thành rẻ, thân thiện với người dùng, phù hợp với xu hướng sử dụng thuốc có nguồn gốc thiên nhiên Về lựa chọn dung môi tá dược, dựa vào đặc tính tan nước dược chấtcao Bồ kết giàu Saponin, khóa luận lựa chọn dung mơi hịa tan nước tá dược bào chế gel thân nước (hydrogel), cụ thể CMC với ưu điểm: hồ tan trộn với nước, giải phóng hoạt chất nhanh, hoạt chất dễ tan nước, thể chất tương đối ổn định, bị thay đổi theo điều kiện thời tiết, không bị trơn nhờn dễ rửa nước Tuy nhiên, lựa chọn tá dược này, nhóm nghiên cứu lưu ý đến khả dễ bị nấm mốc vi khuẩn xâm nhập, nhóm cải thiện cách cho thêm chất bảo quản Nipagin với nồng độ 0.2% Ngoài ra, lưu ý đến khả dễ bị khô cứng, nứt mặt trình bảo quản dạng thuốc gel sử dụng tá dược CMC, nhóm nghiên cứu thêm vào chất giữ ẩm Glycerin vào công thức thuốc, với tỷ lệ 10% Về tỷ lệ tá dược cơng thức, nhóm nghiên cứu cố định tỷ lệ tá dược bảo quản giữ ẩm, đảm bảo tỷ lệ tá dược nằm khoảng giới hạn cho phép, đồng thời đảm bảo cho tá dược tan hết dung mơi Sau tiến hành thử nghiệm nồng độ khác tá dược CMC tìm cơng thức phù hợp tiêu chí Về cảm quan, cơng thức gel phải có độ sệt vừa phải, khơng có bọt khí, u cầu gel phù hợp phải vừa bám dính tốt niêm mạc trực tràng, đồng thời dễ tách khỏi tuýp vỏ gel tiến hành thụt Sau xác định tỷ lệ tá dược phù hợp, nhóm nghiên cứu tiến hành tính toán để lựa chọn liều dùng cao Bồ kết, đảm bảo phù hợp với liều Bồ kết công bố theo Dược điển Việt Nam Dược điển Trung Quốc Dựa tài liệu thực tế nghiên cứu chiết xuất, Saponin từ Bồ kết chiếm khoảng 10% dược liệu, nhóm nghiên cứu lựa chọn liều cao Bồ kết, cụ thể 0.12g cho cơng thức gel thử nghiệm Khi có cơng thức gel thử nghiệm hoàn chỉnh, đẩy đủ thành phần dược chất tá dược, nhóm nghiên cứu tiếp tục khảo sát theo tiêu chí cơng bố Dược điển Việt Nam V, độ đồng nhất, đồng khối lượng, định tính, 35 cảm quan, tất tiêu đạt tiêu chuẩn Vì dạng gel thụt đại tràng, dùng trực tiếp trực tràng, nhóm nghiên cứu tiến hành đo pH gel, đảm bảo gel khơng gây kích ứng niêm mạc chỗ, thêm tiêu pH vào yêu cầu chất lượng gel Về giới hạn nhiễm khuẩn, khơng có phịng thí nghiệm dụng cụ tiến hành đạt đầy đủ tiêu dược điển, khóa luận chưa tiến hành kiểm nghiệm yêu cầu Sau kiểm nghiệm đạt tiêu, nhóm nghiên cứu tiếp tục tìm hiểu việc đóng gói, dán nhãn, thiết kế nhãn theo quy định Bộ Y tế, đảm bảo yêu cầu thông tin nhãn, có tính thẩm mỹ dễ nhận diện Tóm lại, khóa luận nghiên cứu cơng thức điều chế gel thụt đại tràng từ Bồ kết Việt Nam, dùng đường trực tràng, có tỷ lệ tá dược phù hợp, kiểm nghiệm gel đạt tiêu chuẩn Nhóm nghiên cứu tiến hành đóng gói gel vào tuýp 9g, thiết kế nhãn gel theo quy định Về đánh giá tác dụng gel 2.1 Về mơ hình đánh giá tác dụng nhuận tràng Thí nghiệm tiền lâm sàng cung cấp thông tin khả nhuận tràng sản phẩm nghiên cứu trước thử nghiệm người cần thiết Để đánh giá hoạt tính nhuận tràng, có số mơ hình phát triển sử dụng, mơ hình nghiên cứu có đặc điểm riêng Tuy nhiên, nhiều thí nghiệm tốn kém, thời gian dẫn đến việc sử dụng động vật thí nghiệm cách khơng cần thiết Do đó, việc lựa chọn mơ hình thử nghiệm tiền lâm sàng, có khả thích hợp để đánh giá hoạt tính nhuận tràng sản phẩm nghiên cứu, giúp đảm bảo kết tiền lâm sàng hợp lệ có ý nghĩa trước thử nghiệm người Các mơ hình thử nghiệm tiền lâm sàng thường sử dụng để đánh giá tác dụng nhuận tràng, phân loại thành hai nhóm dựa mục đích sàng lọc hay xác minh Các mơ hình sàng lọc chủ yếu nhằm khám phá tiềm nhuận tràng sản phẩm, sau tiếp tục đánh giá thêm Trong mơ hình xác nhận thiết kế để xác minh hoạt tính nhuận tràng sản phẩm Các mơ hình sàng lọc liên quan đến thí nghiệm tiến hành điều kiện sinh lý, sử dụng để xác định ban đầu khả nhuận tràng sản phẩm nghiên cứu, nghĩa xác định chúng có tác dụng nhuận tràng hay khơng Liên quan đến khía cạnh đạo đức, mơ hình sàng lọc thường cung cấp liệu sơ bộ, giúp biện minh cho thử nghiệm giảm thiểu số lượng động vật cần thiết thử nghiệm xác nhận Trong khóa luận này, nhóm nghiên cứu lựa chọn mơ hình đánh giá ảnh hưởng cao Bồ kết biên độ co thắt nhu động ruột, mơ hình sử dụng chủ yếu cho mục đích sàng lọc, để xác định sản phẩm có chất kích thích hoạt động nhuận tràng 36 Với hệ thống bể nuôi cô lập, trơn ruột tế bào ruột hoạt động giống ruột nguyên vẹn thể Trong đoạn ruột bị cắt bỏ, co thắt xảy thông qua hoạt động tế bào kẽ, tế bào điều hòa nhịp tim nằm tròn dọc, thơng qua việc tạo sóng chậm điện sinh học tự phát Hoạt động co bóp điều chỉnh hệ thống thần kinh ruột (ENS), gây chất kích thích dẫn truyền thần kinh Thuốc nhuận tràng kích thích kích thích trực tiếp đám rối thần kinh ruột, dẫn đến co thắt nhu động Sự co thắt ruột quan sát thấy sử dụng chất có hoạt tính nhuận tràng kích thích Do hệ thống đơn giản, thuận tiện hoạt động khơng có tác động từ bên ngồi, ví dụ hormone tuần hoàn hệ thần kinh bên ngoài, nên phản ứng hiệu với chất thử nghiệm Với mơ hình này, đoạn ruột sử dụng nhiều thí nghiệm mơ phản ứng với chất cảm ứng co bóp Mơ hình thí nghiệm bao gồm đoạn ruột riêng biệt (dài khoảng 2- cm), bể nuôi ruột cô lập chuyển đổi lực căng kết nối với hệ thống máy tính để hiển thị Các đường cong nồng độ-lực căng đo được, tăng lên có chất gây co bóp chất có hoạt tính nhuận tràng kích thích Tuy nhiên, mơ hình sử dụng với chất có đặc tính ưa nước hịa tan tốt nước, đoạn ruột phân lập, hồn tồn chìm hệ thống bể ni lập Trong khóa luận này, nhóm nghiên cứu tiến hành đánh giá ảnh hưởng cao Bồ kết, có khả tan tốt nước Về chế làm tăng nhu động ruột dịch chiết Bồ kết Khả co bóp nhu động ruột điều chỉnh phần hệ thống thần kinh ruột số hormone Do đó, tiền xử lý với chất chủ vận chất đối kháng thụ thể đường ruột biết, giúp xác định chế cụ thể hoạt động nhuận tràng kích thích sản phẩm nghiên cứu Trong khóa luận này, nhóm nghiên cứu tiến hành tiền xử lý mô Atropin (chất đối kháng thụ thể muscarinic), để xác định xem tác dụng nhuận tràng sản phẩm có phải phản ứng qua trung gian thụ thể hay không Kết cho thấy cho thấy dịch chiết Bồ kết có tác dụng đối kháng với tác dụng giảm nhu động Atropin Tác dụng phụ thuộc liều, biên độ nhu động tăng dần nồng độ dịch chiết Bồ kết tăng dần Khi tăng dần đến khoảng nồng độ 0.125 μg/ml 0.25 μg/ml, thấy dù nồng độ dịch chiết Bồ kết tăng dần, cường độ co thắt không tiếp tục tăng Điều giải thích sau bị ức chế Atropin, kết hợp với dùng liều dịch chiết Bồ kết, nhu động ruột yếu dần, khó co bóp mạnh mẽ ban đầu, kết có sai lệch Từ bước đầu nhận thấy tác dụng kích thích dịch chiết Bồ kết khơng phải qua thụ thể muscarinic Có thể tiếp tục thí nghiệm để xác định chế cụ thể hơn, ví dụ tiền xử 37 lý mô mepyramine (chất đối kháng thụ thể histamin H1), methysergide (chất đối kháng thụ thể serotonin), ondansetron (cũng chất đối kháng thụ thể serotonin), để xác định xem sản phẩm có phụ thuộc vào thụ thể hay khơng Hay ví dụ khác thuốc chẹn kênh canxi verapamil nifedipine sử dụng làm tiền xử lý để xác định liệu sản phẩm nghiên cứu có tác động thơng qua kích thích kênh canxi dẫn đến co thắt ruột hay không Tuy nhiên, thời gian nghiên cứu có hạn, nhóm nghiên cứu chưa tiến hành xác minh thụ thể 2.2 Về mơ hình đánh giá tác dụng kháng khuẩn Sau tiến hành đánh giá tác dụng nhuận tràng, nhóm nghiên cứu tiếp tục quan tâm đến khả kháng khuẩn gel Nhận thấy cơng dụng gel ngồi tác dụng tẩy xổ, nhuận tràng, dùng để thụt tháo đại tràng cho bệnh nhân trước mổ, nội soi trực tràng, quy trình cần đảm bảo vơ trùng Do đó, gel có thêm tác dụng kháng khuẩn thật hữu ích Mặt khác, tác dụng kháng khuẩn Saponin từ lâu đề cập Từ đó, nhóm nghiên cứu tiếp tục đánh giá tác dụng kháng khuẩn gel thành phẩm Gleditsia dựa đánh giá tác dụng kháng khuẩn cao Bồ kết giàu Saponin Có nhiều phương pháp sử dụng để đánh giá hoạt tính kháng khuẩn, phương pháp khuếch tán, phương pháp sắc ký lớp mỏng (TLC), phương pháp pha loãng, phương pháp xét nghiệm phát quang sinh học ATP,… phương pháp có ưu, nhược điểm khác [22] Trong khóa luận này, nhóm nghiên cứu sử dụng phương pháp khuếch tán đĩa thạch với mục đích xác định sơ nhạy cảm hay đề kháng vi khuẩn cao chiết Phương pháp mang lại nhiều lợi so với phương pháp khác tính đơn giản, chi phí thấp, khả kiểm tra số lượng lớn vi sinh vật dễ dàng giải thích kết Nhóm nghiên cứu tiến hành thử nghiệm với nồng độ 100, 200, 300, 400, 500 mg/ml (nồng độ 1000 mg/ml khơng hịa tan nước) đạt kết sau : với E.coli, khơng có vịng vơ khuẩn với tất nồng độ thử nghiệm (100-500 mg/ml), với S aureus, có vịng vơ khuẩn với đường kính vịng vơ khuẩn 2,32(±0.12), 2,18(±0.03), 2,00(±0,04) 1,89(±0,12) mm tương ứng với nồng độ 500, 400, 300 200 mg/ml, nồng độ 100 mg/ml khơng có vịng vơ khuẩn Tuy nhiên, ức chế phát triển vi khuẩn khơng có nghĩa làm chết vi khuẩn nên phương pháp không phân biệt tác dụng diệt khuẩn kìm khuẩn Hơn nữa, phương pháp khuếch tán đĩa thạch không phù hợp để xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC), khơng thể định lượng lượng chất kháng khuẩn khuếch tán vào mơi trường thạch Nhóm nghiên cứu lựa chọn sử dụng phương pháp với mục đích chủ yếu để khảo sát sơ tính kháng khuẩn cao chiết Bồ kết Sau xác định sơ nhạy cảm vi khuẩn với mẫu cao chiết, nhóm nghiên cứu tiếp tục xác định MIC nồng độ tối thiểu ngăn chặn phát triển chủng 38 vi khuẩn phân lập MBC nồng độ tối thiểu dẫn tới giết chết vi khuẩn phân lập, từ tiếp tục đánh giá khả diệt khuẩn theo nồng độ Kết cho thấy chế phẩm có tác dụng với S aureus, hai nồng độ 200 250 mg/ml có khả diệt log CFU/ml VSV ( trêm 99,9%) Với E coli, tác dụng hơn, diệt log CFU/ml VSV (dưới 90%) Từ kết trên, khóa luận đưa nhận xét mẫu có hoạt tính kháng vi sinh vật, nhiên không mạnh, tác dụng mạnh S aureus E coli Nếu thực gel có tác dụng kìm/diệt khuẩn, nên cân nhắc việc thực với nồng độ ≥200 mg cao/ml gel Nếu thực nồng độ nhỏ hơn, mẫu khơng có tác động kìm/diệt khuẩn, khơng đánh giá tác dụng kìm/diệt khuẩn Hiện mẫu gel Bồ kết khoảng 13 mg/ml, khơng có tác dụng kìm/diệt khuẩn Mặc dù kết đánh giá cho thấy mẫu gel Bồ kết khơng có tác dụng kìm/diệt khuẩn nồng độ 13mg/ml tính theo dược chất cao Bồ kết giàu Saponin, khóa luận sơ khảo sát khả kháng khuẩn, xác định MIC, MBC khả diệt khuẩn theo nồng độ cao Bồ kết Từ đó, gợi phương hướng, ý tưởng thực nghiên cứu cơng thức điều chế gel, có tác dụng kháng khuẩn từ Bồ kết Việt Nam tương lai 39 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT KẾT LUẬN Khoá luận tốt nghiệp với chủ đề “Nghiên cứu điều chế gel thụt đại tràng từ Bồ kết Việt Nam đánh giá số tác dụng” hoàn thành mục tiêu nghiên cứu cụ thể sau: - Nghiên cứu công thức điều chế gel thụt đại tràng từ Bồ kết khảo sát số tiêu chất lượng gel Về công thức gel thụt đại tràng, khóa luận thiết lập cơng thức gel hoàn chỉnh, cụ thể sau: Cao Bồ kết 0,12g CMC 0,09g Nipagin 0,018g Glycerin 0,90g Nước cất vừa đủ 9,00g Về tiêu chất lượng, khóa luận khảo sát số tiêu chất lượng, gồm có độ đồng nhất, độ đồng khối lượng, phản ứng định tính phát Saponin gel, thể chất, màu sắc, mùi vị gel, kết cho thấy tiêu đạt, pH 5,45 phù hợp cho chế phẩm gel dùng chỗ niêm mạc trực tràng - Đã đánh giá giá tác dụng nhuận tràng thay đổi nhu động ruột thỏ cô lập tác dụng kháng khuẩn chế phẩm gel Bồ kết Về tác dụng nhuận tràng nhu động ruột thỏ cô lập, kết cho thấy dịch chiết Bồ kết có tác dụng làm tăng biên độ nhu động ruột từ mức liều 0,0625 µg/ml Về tác dụng kháng khuẩn, kết cho thấy mẫu có tác dụng tốt S.aureus, xác định MIC 125mg/ml, MBC 200mg/ml Gel Bồ kết có nồng độ khoảng 13mg/ml, khơng có tác dụng kìm hay diệt khuẩn, cân nhắc thực gel có tác dụng kháng khuẩn từ nồng độ 200mg cao/ml gel trở lên ĐỀ XUẤT Do thời gian thực đề tài có hạn đề tài nghiên cứu công thức điều chế gel thụt đại tràng từ Bồ kết Việt Nam, nên cịn nhiều hạn chế Vì vậy, nhóm nghiên cứu đưa đề xuất sau: - Tiếp tục nghiên cứu chế tác dụng thuốc, khả đối kháng thụ thể khác nhau, để chứng minh chế cụ thể gel Bồ kết 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bộ môn Bào chế (2021), Giáo trình Bào chế Sinh dược học, Vol 2, Trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội, tr.1-6, tr.17-23, tr.38-43, tr.61-70 Bộ môn Dược liệu (2004), Bài giảng Dược liệu, Vol 1, Trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội, tr.231-233 Bộ môn Dược liệu (2006), Thực tập Dược liệu, Trường Đại học Dược Hà Nội, tr.931 Bộ Y tế, Thông tin tờ hướng dẫn sử dụng thuốc "déMon", Cục Quản lý Dược, Công ty cổ phần Granstar Quốc Tế Bộ Y tế (2013), Thông tin tờ hướng dẫn sử dụng thuốc "Microclismi", Cục Quản lý Dược, Zeta Farmaceutici S.p.A Bộ Y tế (2014), Thông tin tờ hướng dẫn sử dụng thuốc "Forlax", Ipsen Beaufour Industrie, France, Cục Quản lý Dược Bộ Y tế (2014), Thông tin tờ hướng dẫn sử dụng thuốc "Stiprol", Cục Quản lý Dược, Công ty cổ phần Dược Hà Tĩnh Bộ Y tế (2018), Dược điển Việt Nam V, Nhà xuất Y học Bộ Y tế (2018), Thông tin tờ hướng dẫn sử dụng thuốc "Duphalac", Abbott Laboratories (Singapore) Private Limited, Cục Quản lý Dược 10 Bộ Y tế (2018), Thông tư 01/2018/TT-BYT, Cục Quản lý dược 11 Phạm Hoàng Hộ (1999), Cây cỏ Việt Nam, Vol 1, Nhà Xuất Trẻ 12 Nguyễn Thị Kim Liên, Lê Xuân Trường Trần Văn Thành (2018), "Bào chế gel vi nhũ tương từ cao khô Rau đắng đất [Glinus oppositifolius (L.) Aug DC., Molluginaceae]", Khoa học Y - Dược, tr.12-13 13 Đỗ Tất Lợi (2006), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà Xuất Y học, Hà Nội, tr.732-734 14 GS.TS.BS.Trịnh Văn Minh (2010), Giải phẫu người Vol 2, Nhà Xuất Giáo dục Việt Nam, tr.413-419 15 Bộ môn Giải phẫu (2006), Giải phẫu người, Nhà Xuất Y học, Hà Nội, tr.262267 16 Phương Nga (2019), Cây thuốc - vốn quý từ thiên nhiên, Sở Y tế Hà Nội, Y học cổ truyền 17 Phạm Thị Kiều Oanh, Phan Nữ Hoàng Oanh Hoàng Xuân Thế (2021), "Nghiên cứu khả ức chế tăng sinh vi khuẩn Propionibacterium acnes gel mồng tơi (Basella alba L.) diếp cá (Houttuynia cordata Thunb.)" 21, tr.100-113 18 Nguyễn Quang Quyền (2012), Bài giảng Giải Phẫu Học, Vol 2, Nhà Xuất Y học, Chi nhánh Thành phố Hồ Chí Minh, tr.168-173 19 Nguyễn Đức Tài (2003), Góp phần nghiên cứu tác dụng dược lý thuốc xổ Microlax.BK từ bồ kết (Fructus Gleditschiae) Việt Nam, Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ, Trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội 20 Viện Dược liệu (2006), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Vol 1, Nhà Xuất Khoa học Kỹ thuật, tr.245-247 Tiếng Anh 21.Agency Medicines&Healthcare products Regulatory (2016),British Pharmacopoeia, The Stationery Office 22 Balouiri M., Sadiki M., et al (2016), "Methods for in vitro evaluating antimicrobial activity: A review", J Pharm Anal, 6(2), pp 71-79 23 Barberio B., Judge C., et al (2021), "Global prevalence of functional constipation according to the Rome criteria: a systematic review and meta-analysis", Lancet Gastroenterol Hepatol, 6(8), pp 638-648 24 Dilbato Dinbiso T., Deressa F B., et al (2022), "Antimicrobial Activity of Selected Ethnoveterinary Medicinal Plants of Southern Region, Ethiopia", Infect Drug Resist, 15, pp 6225-6235 25 Elouafy Youssef, Mortada Salma, et al (2023), "Bioactivity of Walnut: Investigating the Triterpenoid Saponin Extracts of Juglans regia Kernels for Antioxidant, Anti diabetic, and Antimicrobial Properties", Progress in Microbes and Molecular Biology 6(1) 26 Elsvier (2021), Mosby's 2021 Nursing Drug Reference, Elsevier, pp 727-728 27 Greger Lindberg MD, PhD, Saeed S Hamid MD Peter Malfertheiner, MD, et al (2011), "World Gastroenterology Organisation Global Guideline Constipation—A Global Perspective", J Clin Gastroenterol, 45 28.Hamambulu Pharaoh, Mathew-Goma Fastone, et al (2021), "Effects of Steganotaenia Araliacae Root Extract on Contractile Function of Isolated Rat Ileum", Journal of Preventive and Rehabilitative Medicine, 3(2), pp 32-41 29 Health Department of Hong Kong Chinese Materia Medica Standarts, The People's Republic of China, Hong Kong Special Administrative Region 30 Jung M A., Song H K., et al (2023), "Gleditsia sinensis Lam aqueous extract attenuates nasal inflammation in allergic rhinitis by inhibiting MUC5AC production through suppression of the STAT3/STAT6 pathway", Biomed Pharmacother, 161, pp 114482 31 Klancnik A., Piskernik S., et al (2010), "Evaluation of diffusion and dilution methods to determine the antibacterial activity of plant extracts", J Microbiol Methods, 81(2), pp 121-126 32 Lai P., Du J R., et al (2011), "Aqueous extract of Gleditsia sinensis Lam fruits improves serum and liver lipid profiles and attenuates atherosclerosis in rabbits fed a high-fat diet", J Ethnopharmacol, 137(3), pp 1061-1066 33 Linda Anne Silvestri PhD, RN, Angela E Silvestri PhD, APRN, FNP-BC, CNE (2016), Saunders Comprehensive Review for the NCLEX-RN Examination, ELSEVIER, 34 Loyd V Allen Jr, PhD, Howard C Ansel PhD Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, United States of America 35 McGraw-Hill (2017), Goodman and Gilman's The Pharmacological basis of Therapeutics, The McGraw-Hill/Medical, pp.1328-1336 36 Michael J Winner Stanney W Ashley (2019), Maingots's abdominal operations, McGraw-Hill Education 37 O Soetan k., A Oyekunle M., et al (2006), "Evaluation of the antimicrobial activity of saponins extract of Sorghum Bicolor L Moench", African Journal of Biotechnology, 5, pp 2405-2407 38 Pal G K., Pal Pravati (2006), Textbook of Practical Physiology, Orient BlackSwan, pp 420-424 39 Paul J Sheskey Walter G Cook, Colin G Cab (2017), Handbook of Pharmaceutical Excipients 8th, Pharmaceutical Press and the American Pharmacists Association, UK, USA, pp.604-608 40 Portalatin M., Winstead N (2012), "Medical management of constipation", Clin Colon Rectal Surg, 25(1), pp 12-19 41 Pruksakorn Patiwat Kongdang Dumnoensun, Koonrungsesomboon Nut (2022), "Review Article Preclinical experimental models for assessing laxative activities of substances/products under investigation: a scoping review of the literature", Am J Transl Res, pp 698-717 42 Ravi Lokesh, V Manasvi, et al (2016), "Antibacterial and Antioxidant Activity of Saponin from Abutilon Indicum Leaves", Asian Journal of Pharmaceutical and Clinical Research, 9(3), pp.344-347 43 Suares N C., Ford A C (2011), "Prevalence of, and risk factors for, chronic idiopathic constipation in the community: systematic review and meta-analysis", Am J Gastroenterol, 106(9), pp 1582-91; quiz 1581, 1592 44 WHO (2011), "The World Health Organization, Department of Reproductive Health and Research at World Health Organization, Geneva, Switzerland " 45 Zhou L., Li D., et al (2007), "Antibacterial phenolic compounds from the spines of Gleditsia sinensis Lam", Nat Prod Res, 21(4), pp 283-91 Tiếng Trung 46 (2015), 中华人民共和国药典, 中国医药科技出版社, 国家药典委员会 编, 页21 47 编 陈奇 (2012), 中药药理研究方法学, 人民卫生出版社, 页322-343 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Tiêu thực vật Bồ kết nhỏ (Gleditsia australis F.B Forbes & Hemsl) Phiếu giám định tên khoa học Tiêu thực vật