Hoàng khắc long nghiên cứu chiết xuất, phân lập và xác định cấu trúc một số hợp chất từ quả bồ kết việt nam khóa luận tốt nghiệp dược sĩ

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI HOÀNG KHẮC LONG NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ QUẢ BỒ KẾT VIỆT NAM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2023 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI HOÀNG KHẮC LONG Mã sinh viên: 1801421 NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ QUẢ BỒ KẾT VIỆT NAM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: 1.TS Hà Văn Oanh 2.ThS Đinh Thị Vân Nơi thực hiện: Bộ môn Dược học cổ truyền Khoa: DL-DHCT HÀ NỘI - 2023 LỜI CẢM ƠN Trong trình thực khóa luận này, em nhận nhiều quan tâm, giúp đỡ, động viên, bảo tận tình từ gia đình thầy bạn bè Đầu tiên với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới T.S Hà Vân Oanh, người dìu dắt em từ ngày đầu làm khóa luận, tận tinh giúp đỡ bảo, tạo điều kiện tốt cho em thực khóa luận Em xin chân thành cảm ơn PGS.TS Nguyễn Mạnh Tuyển, ThS.Đinh Thị Vân, ThS Lê Hương Giang tận tâm hướng dẫn, giúp đỡ em, tạo điều kiện tốt cho bọn em làm khoá luận Em xin cảm ơn tới thầy cô giáo Trưởng Đại học Dược Hà Nội tạo mơi trưởng học tập, tận tình giảng dạy truyền tải cho em tri thức quý báu suốt năm học Cuối em xin cảm ơn gia đình bạn bè ln bên cạnh động viên, giúp đỡ để em tiếp tục thực hồn thành khóa luận Do sức ép mặt thời gian nên khố luận em khơng tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận đóng góp thầy để hồn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 05 tháng 06 năm 2023 Sinh viên Hoàng Khắc Long MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Gleditsia 1.1.1 Vị trí phân lồi 1.1.2 Đặc điểm thực vật 1.1.3 Phân bố 1.1.4 Thành phần hóa học .4 1.1.5 Tác dụng Công dụng 10 1.2 Tổng quan loài Gleditsia australis 12 1.2.1 Đặc điểm thực vật 12 1.2.2 Phân bố 13 1.2.3 Thành phần hoá học .13 1.2.4 Công dụng bồ kết Việt Nam 14 CHƯƠNG II: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Đối tượng nghiên cứu 15 2.2 Hóa chất, dung môi 15 2.3 Máy móc, trang thiết bị nghiên cứu 15 2.4 Nội dung nghiên cứu 15 2.5 Phương pháp nghiên cứu 16 2.5.1 Phương pháp chiết cao xuất cao toàn phần 16 2.5.2 Phương pháp chiết xuất cao phân đoạn .16 2.5.3 Phương pháp phân lập hợp chất 17 CHƯƠNG III THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 21 3.1 Chiết cao toàn phần cao phân đoạn từ bồ kết .21 3.2 Kết phân lập số hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat 21 3.3 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập 24 3.4 Bàn luận .29 3.4.1 Về kết chiết xuất cao toàn phần cao phân đoạn .29 3.4.2 Về kết phân lập hợp chất .29 CHƯƠNG IV KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 32 4.1 Kết luận 32 4.2 Kiến nghị 32 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO 33 DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC 36 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu, chữ viết tắt Phổ 13 C-NMR H-NMR Tiếng Anh Tiếng Việt Carbon 13 Nuclear Magnetic Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Resonance Spectroscopy carbon 13 Proton Nuclear Magnetic Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Resonance proton EtOAc Etyl acetat EtOH Ethanol V/V Thể tích / thể tích TLC Thin layer Chromatography RP-C18 Reversed Phase C-18 GSE Cao chiết Gleditsia sinensis WEGST Cao chiết nước gai Gleditsia sinensis Lam ROS Reactive oxigen species Sắc ký lớp mỏng Các dạng oxi phản ứng mạnh DCM Dicloromethan MeOH Methanol HPLC High-performance liquid chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Cấu trúc số Saponin phân lập từ chi Gleditsia Bảng 1.2 Cấu trúc số Saponin phân lập từ G caspica Desf Bảng 1.3 Cấu trúc số Flavonoid từ chi Gleditsia Bảng 1.4 Cấu trúc số hợp chất phenolic từ chi Gleditsia Bảng 3.1 So sánh liệu NMR hợp chất GE1 với tài liệu tham khảo Bảng 3.2 So sánh liệu NMR hợp chất GE2 với tài liệu tham khảo DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Hình 1.1 Cây bồ kết Việt Nam Hình 2.1 Tóm tắt quy trình chiết xuất cao tồn phần cao phân đoạn Hình 3.1 Quy trình chiết xuất cao tồn phần cao phân đoạn Hình 3.2 Quy trình phân lập chất từ cao ethyl acetat Hình 3.3 Hình ảnh sắc ký hợp chất GE1 Hình 3.4 Hình ảnh sắc ký hợp chất GE2 Hình 3.5 Hợp chất GE1 Hình 3.6 Hợp chất GE2 ĐẶT VẤN ĐỀ Mối quan tâm toàn giới việc sử dụng thuốc ngày tăng tác dụng có lợi chúng khám phá để phát triển loại thuốc Nguồn tri thức dân tộc thuốc rộng lớn truyền cảm hứng cho nghiên cứu sản phẩm có nguồn gốc tự nhiên Cây thuốc người dân địa sử dụng tồn giới, đóng vai trị quan trọng việc điều trị bệnh cho người động vật Gần đây, phần lớn loại thuốc đại phát triển dựa cách sử dụng/ứng dụng tri thức dân tộc học chúng Vai trò sản phẩm tự nhiên việc phát triển thuốc ngày tăng, khơng hợp chất có hoạt tính sinh học sử dụng trực tiếp làm tác nhân điều trị mà chúng sử dụng làm nguyên liệu thô để tổng hợp thuốc làm mơ hình sở cho hợp chất có hoạt tính sinh học Tuy nhiên, việc xác nhận sử dụng thực vật loại thuốc đòi hỏi nhiều nghiên cứu, để đặt nguồn tài nguyên mức độ quan trọng sản phẩm dược phẩm thơng thường Hơn nữa, có phần nhỏ số loài thực vật biết đến toàn giới nghiên cứu khoa học với tiềm sử dụng chăm sóc sức khỏe Việc sử dụng chi Gleditsia làm thuốc có từ 2000 năm trước Bên cạnh việc kết hợp với kinh nghiệm tác phẩm kinh điển viết danh y Trung Quốc Thần Nông thảo kinh, Thang Dịch Bản Thảo, Đường Bản Thảo, nhà khoa học ngày tập trung nghiên cứu nhằm tìm hoạt chất, tác dụng dược lý chi Gieditsia giúp cải thiện chất lượng sống người [1].Cây bồ kết (Gleditsia australis Hemsl.) loại tự nhiên phổ biến miền Bắc miền Nam Việt Nam, có nguồn cung cấp dồi Trong lĩnh vực y học đại, bồ kết áp dụng số bệnh viện để chữa trị nhiều bệnh bí đại, trung tiện sau mổ tắc ruột, phù hợp cho người lớn trẻ em Ngoài ra, bồ kết sử dụng trường hợp mắc phong, ý thức, viêm họng, hen suyễn, mụn nhọt, viêm tuyến vú đau nhức [2] Các nghiên cứu tác dụng dược lý bồ kết có khả kháng khuẩn mạnh, bao gồm kháng vi khuẩn trực khuẩn, vi khuẩn shigella, vi khuẩn thương hàn, vi khuẩn mủ xanh vi khuẩn phẩy khuẩn tả Tuy nhiên, việc sử dụng bồ kết y học đòi hỏi nghiên cứu xác minh hiệu an toàn, nên thực hướng dẫn chuyên gia y tế Vì vậy, nhằm mục đích chuẩn hóa nguồn dược liệu sâu vào nghiên cứu làm rõ thành phần hóa học bồ kết để có thêm tri thức nâng cao giá trị sử dụng thuốc, đề tài “Chiết xuất, phân lập số hợp chất từ bồ kết Việt Nam” thiết lập với mục tiêu: - Chiết xuất cao tổng cao phân đoạn n-hexan, etylacetat, n-butanol từ bồ kết Việt Nam - Phân lập chất từ phân đoạn etyl acetat xác định cấu trúc hợp chất CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Gleditsia 1.1.1 Vị trí phân lồi Chi Gleditsia phân loại sau: Giới (Kingdom) - Thực vật (Planta) Ngành (Phylum) - Ngọc lan (Magnoliophyta) Lớp (Class) - Ngọc lan (Magnoliophyta) Phân lớp (Subclass) - Hoa hồng (Rosidae) Bộ (Order) - Đậu (Fabales) Họ (Family) - Đậu (Fabaceae) Phân họ (Sub-family) - Vang (Caesalpinioideae) Chi (Genus) - Bồ kết (Gleditsia) [1-3] 1.1.2 Đặc điểm thực vật Cây rụng bụi, thân cành thường có gai nhọn, cuống có rãnh; lá, thường chét, có mép hình cưa nhọn trịn; kèm nhỏ, rụng sớm; hoa đơn tính lưỡng tính, xanh lục trắng xanh, thường mọc kẽ lá, cụm hoa chùm chùy; bẹ hình sợi, mặt ngồi có lơng, mặt nhẵn; cánh hoa – 5, dài đài thủy; nhị hoa – 10, nhô ngồi; bầu trên, khơng cuống cuống ngắn, vịi nhụy ngắn, đầu nhụy nằm đỉnh; hay nhiều nỗn; có vỏ dẹt, thẳng, uốn cong hình xoắn, hay nhiều hạt hình trứng hình elip, dẹt gần hình trụ [4] 1.1.3 Phân bố Phần lớn lồi thuộc chi Gleditsia tìm thấy vùng Đông Nam Á, Bắc Mỹ, Đông – Nam Mỹ phía Nam Caucasus Ở Việt Nam bồ kết mọc hoang trồng nhiều nhiều tỉnh miền bắc nước ta Riêng đảo Cát Bà (Hải Phịng) có tới 40.000 cây, Hàng năm 40 bồ kết [1] Ở Việt Nam có lồi: Gleditsia rolfei (tạo giác), Gleditsia pachycarpa (bồ kết dày) Gleditsia australis (chùm kết, bồ kết, tạo giác, bổ kết nhỏ) [3] DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Đỗ Tất Lợi (2004) , Những thuốc thuốc Việt Nam NXB Y hoc,tr 732733 Bộ Y Tế (2007) , Dược điển Việt Nam V: tr 1086-1088 Phạm Hoàng Hộ (1999) , Cây cỏ Việt Nam tr 838-850 Thực vật Chí Trung Quốc (2007) Gleditsia Tiếng Anh Miyase, T., et al (2009)., Bisdesmosidic saponins from fruits of Gleditsia caspica Desf 37 Zhang, Z., et al., (1999) Four new triterpenoidal saponins acylated with one monoterpenic acid from Gleditsia sinensis J Nat Prod, 62(5): p 740-5 Yu, J., et al.(2019), Anti-breast cancer triterpenoid saponins from the thorns of Gleditsia sinensis 33(16): p 2308-2313 Zhang, Z., et al.(1999), Gleditsiosides N-Q, new triterpenoid saponins from Gleditsia sinensis J Nat Prod, 62(6): p 877-81 Lim, J.-C., et al.(2005), Antimutagenic Constituents from the Thorns of Gleditsia sinensis Chemical & pharmaceutical bulletin, 53: p 561-4 10 Li, W.-H., et al.( 2007), A new anti-HIV lupane acid from Gleditsia sinensis Lam Journal of Asian natural products research, 9: p 551-5 33 11 Melek, F., et al.( 2014), Caspicaosides E-K, triterpenoid saponins and cytotoxic acylated saponins from fruits of Gleditsia caspica Desf Phytochemistry, 100 12 Zhou, L., et al.( 2007), Two ellagic acid glycosides from Gleditsia sinensis Lam with antifungal activity on Magnaporthe grisea Nat Prod Res, 21(4): p 303-9 13 Mohammed, R.S., et al.(2014), Flavonoid constituents, cytotoxic and antioxidant activities of Gleditsia triacanthos L leaves Saudi J Biol Sci, 21(6): p 547-53 14 Zhou, L., et al.( 2007), Antibacterial phenolic compounds from the spines of Gleditsia sinensis Lam Nat Prod Res, 21(4): p 283-91 15 Gao, J., X Yang, and W Yin (2016), From Traditional Usage to Pharmacological Evidence: A Systematic Mini-Review of Spina Gleditsiae Evid Based Complement Alternat Med, 2016: p 3898957 16 Ang, L., et al (2020), Herbal medicine and pattern identification for treating COVID-19: a rapid review of guidelines Integr Med Res, 9(2): p 100407 17 Chow, L.M.C., et al.( 2003.), Gleditsia sinensis fruit extract is a potential chemotherapeutic agent in chronic and acute myelogenous leukemia Oncology Reports, 10(5): p 1601-7 18 Ryu, S., K.M Park, and S.H Lee (2016.), Gleditsia sinensis Thorn Attenuates the Collagen-Based Migration of PC3 Prostate Cancer Cells through the Suppression of α2β1 Integrin Expression Int J Mol Sci, 17(3): p 328 19 Li, K., et al.(2017), Dihydrofisetin exerts its anti-inflammatory effects associated with suppressing ERK/p38 MAPK and Heme Oxygenase-1 activation in lipopolysaccharide-stimulated RAW 264.7 macrophages and carrageenaninduced mice paw edema International immunopharmacology, 54: p 366-374 20 Inhibitory Effect of Mast Cell-dependent Anaphylaxis by Gleditsia sinensis 21 Li, W.-H., et al.( 2007), A new anti-HIV lupane acid from Gleditsia sinensis Lam 9(6): p 551-555 22 Kim, H.-J., C.-B Jin, and Y.-S Lee (2007), Isolation and Antioxidative Activities of Caffeoylquinic Acid Derivatives and Flavonoid Glycosides from Leaves of Sweet Potato (Ipomoea batatas L.) Biomolecules and Therapeutics, 15 34 23 Li, W.-H., et al.(2007), A new anti-HIV lupane acid from Gleditsia sinensis Lam 2007 9(6): p 551-555 24 Nguyễn Thị Hồi, Lê Thị Ni Na (2011), Tạp Chí Y Duợc Học, Huế, tr 64-70 25 Lou, H., et al.( 2021), A Review on Preparation of Betulinic Acid and Its Biological Activities Molecules, 26(18) 26 Choung, W.-J., et al (2017), Enzymatic Synthesis of a Novel Kaempferol-3-O-βd-glucopyranosyl-(1→4)-O-α-d-glucopyranoside Using Cyclodextrin Glucanotransferase and Its Inhibitory Effects on Aldose Reductase, Inflammation, and Oxidative Stress Journal of Agricultural and Food Chemistry, 65(13): p 2760-2767 27 Muni Swamy, G., et al.( 2022) , Astragalin, (3-O-glucoside of kaempferol), isolated from Moringa oleifera leaves modulates leptin, adiponectin secretion and inhibits adipogenesis in 3T3-L1 adipocytes Arch Physiol Biochem, 128(4): p 938-944 28 Riaz, A., et al.(2018), Astragalin: A Bioactive Phytochemical with Potential Therapeutic Activities Adv Pharmacol Sci, 2018: p 9794625 35 DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC Phụ lục Dữ liệu phổ 1H-NMR hợp chất GE1 Phụ lục Dữ liệu phổ 13C-NMR hợp chất GE1 Phụ lục Dữ liệu phổ 1H-NMR hợp chất GE2 Phụ lục Dữ liệu phổ 13C-NMR hợp chất GE2 Phụ lục Kết giám định tên khoa học Bồ kết Phụ lục Tiêu Bồ kết 36 Phụ lục 1: Dữ liệu phổ 1H-NMR hợp chất GE1 37 38 Phụ lục 2: Dữ liệu phổ 13C-NMR hợp chất GE1 39 40 Phụ lục 3: Dữ liệu phổ 1H-NMR hợp chất GE2 41 42 Phụ lục 4: Dữ liệu phổ 13C-NMR hợp chất GE2 43 Phụ lục 5: Kết giám định tên khoa học Bồ kết 44 Phụ lục 6: Tiêu Bồ kết 45 46 47