Chiết xuất, phân lập và xác định cấu trúc của một số hợp chất từ rễ cây xáo leo (paramignya scandens (griff ) craib), họ cam (rutaceae) khóa luận tốt nghiệp dược sĩ

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI PHAN THỊ THẮM CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CỦA MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ RỄ CÂY XÁO LEO (Paramignya scandens (Griff.) Craib), HỌ CAM (Rutaceae) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2023 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI PHAN THỊ THẮM 1801622 CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CỦA MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ RỄ CÂY XÁO LEO (Paramignya scandens (Griff.) Craib), HỌ CAM (Rutaceae) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS TS Nguyễn Hoàng Tuấn PGS TS Đỗ Thị Hà Nơi thực hiện: Khoa Dược liệu, Dược học cổ truyền – Trường Đại học Dược Hà Nội Khoa Hóa phân tích Tiêu chuẩn – Viện Dược liệu HÀ NỘI – 2023 LỜI CẢM ƠN Trong trình nghiên cứu thực khóa luận Khoa Hóa Phân tích - Tiêu chuẩn - Viện Dược liệu Bộ môn Dược liệu - Trường Đại học Dược Hà Nội, em nhận nhiều quan tâm, hỗ trợ giúp đỡ q báu từ Thầy Cơ, gia đình bạn bè Lời đầu tiên, tất lòng chân thành, em xin bày tỏ biết ơn sâu sắc tới: PGS TS Nguyễn Hoàng Tuấn, người nhà giáo đáng kính, người dẫn dắt định hướng em đến với nghiên cứu khoa học, thầy tạo điều kiện hỗ trợ em nhiều suốt trình thực khóa luận PGS TS Đỗ Thị Hà, người ln tận tình hướng dẫn, quan tâm, bảo, truyền động lực cho em suốt trình thực đề tài Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới ThS Nguyễn Thị Thu, ThS Vũ Thị Diệp, Dược sĩ Nguyễn Trà My nhà khoa học Khoa Hóa Phân tích - Tiêu chuẩn Viện Dược liệu nhiệt tình giúp đỡ em mặt từ ngày đầu thực khóa luận hoàn thành Những tháng ngày nghiên cứu Viện Dược liệu giúp em trưởng thành hoàn thiện thân kiến thức lẫn kỹ sống Em xin cảm ơn đề tài Nghị định thư Việt – Hàn (2019 – 2022) “Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư điều hịa miễn dịch số thuốc Việt Nam” tạo điều kiện hỗ trợ kinh phí để em thực đề tài Em xin gửi biết ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè ln sát cánh, động viên, giúp đỡ để em hồn thành đề tài khóa luận Cuối cùng, em xin trân trọng cảm ơn Ban Giám hiệu toàn thể Thầy Cô giáo, cán Trường Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện dạy dỗ em suốt khoảng thời gian học tập trường Em xin kính chúc Thầy Cơ ln mạnh khỏe cơng tác tốt Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 05 tháng 06 năm 2023 Sinh viên Phan Thị Thắm MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ ĐẶT VẤN ĐỀ .1 CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Paramignya 1.1.1 Vị trí, phân loại phân bố 1.1.2 Đặc điểm thực vật chi Paramignya 1.1.3 Thành phần hóa học 1.1.4 Tác dụng dược lý .11 1.1.5 Công dụng 13 1.2 Tổng quan Xáo leo (Paramignya scandens) .14 1.2.1 Đặc điểm thực vật phân bố Xáo leo 14 1.2.2 Thành phần hóa học 14 1.2.3 Tác dụng sinh học .15 1.2.4 Công dụng 15 CHƯƠNG II: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Đối tượng nghiên cứu .16 2.2 Hóa chất dung môi 16 2.3 Máy móc, trang thiết bị nghiên cứu 17 2.4 Nội dung nghiên cứu 17 2.5 Phương pháp nghiên cứu 17 2.5.1 Phương pháp định tính nhóm chất thường gặp mẫu dược liệu 17 2.5.2 Phương pháp chiết xuất .20 2.5.3 Phương pháp phân lập hợp chất 21 2.5.4 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất 23 CHƯƠNG III: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 25 3.1 Kết định tính nhóm chất thường gặp có dược liệu 25 3.2 Kết chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc hợp chất 26 3.2.1 Kết chiết xuất 26 3.2.2 Kết phân lập 27 3.2.3 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập 29 3.3 Bàn luận .34 3.3.1 Về kết định tính .34 3.3.2 Về kết chiết xuất .34 3.3.3 Về kết phân lập hợp chất 35 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .38 Kết luận 38 Kiến nghị 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT STT Ký hiệu, chữ Tiếng Anh Tiếng Việt viết tắt 1 13 C-NMR Carbon 13 Nuclear Magnetic Resonance Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon 13 Spectroscopy H-NMR Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton Tế bào ung thư phổi A549 Ac Acetyl BMDC Bone marrow-derived dendritic Tế bào gai có nguồn cell gốc từ tủy xương br d Broad doublet br s Broad singlet CC Column chromatography CDCl3 Cloroform-d 10 COX-2 Cyclooxygenase-2 11 CTCT 12 d Doublet 13 DCM Dicloromethan 14 dd Doublet of doublets 15 DL Dược liệu 16 DM Dung môi 17 DPPH Sắc ký cột Công thức cấu tạo 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl 18 EtOAc Ethyl acetate 19 EtOH Ethanol 20 Hela Human cervical carcinoma cell Dòng tế bào ung thư biểu mô cổ tử cung người lines 21 Hep-G2 Human hepatocellular Dòng tế bào ung thư biểu carcinoma cell lines mô gan người 22 HMBC Heteronuclear Multiple Bond Phổ tương tác dị hạt nhân Correlation qua nhiều liên kết 23 HSQC Heteronuclear single quantum Phổ tương tác dị hạt nhân qua liên kết coherence Concentration at Nồng độ ức chế 50% 24 IC50 Inhibitory 50% 25 IL Interleukin 26 iNOS Inducible Nitric oxide synthase Kích thích tổng hợp oxid nitric Hằng số tương tác (đơn vị Hz) 27 J 28 KB Human epithelial carcinoma Dịng tế bào ung thư biểu cell lines mơ người 29 KB-vin Vincristine subline 30 LPS Lipopolysaccharide 31 LU-1 Lung adenocarcinoma cell line 32 m Multiplet 33 m/z resistant KB Dịng tế bào ung thư biểu mơ kháng vincristin Dịng tế bào ung thư biểu mơ tuyến phổi Khối lượng/điện tích 34 MCF-7 Human breast cancer cell line 35 MeOH Methanol 36 MIC Minimum Dòng tế bào ung thư vú Inhibitory Nồng độ ức chế tối thiểu Concentration 37 MLC Minimum Lethal Concentration Nồng độ diệt khuẩn 38 MS Mass spectrometry Phương pháp phổ khối lượng 39 PG E2 Prostaglandin E2 40 SKLM 41 SK-Mel-2 Human melanoma cell line Dịng tế bào u ác tính hắc tố người 42 TLC Thin Layer Chromatography Sắc ký lớp mỏng 43 TLTK 44 TNF-α 45 TT Thuốc thử 46 v/v Thể tích/thể tích 47 δ Độ dịch chuyển hóa học (đơn vị ppm) Sắc ký lớp mỏng Tài liệu tham khảo Tumour necrosis factor α Yếu tố hoại tử khối u-α DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Các hợp chất phân lập từ loài thuộc chi Paramignya Bảng 3.1 Kết định tính nhóm chất phản ứng hóa học 25 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ hợp chất XL6 chất tham khảo 30 Bảng 3.3 Dữ liệu phổ hợp chất XL7 chất tham khảo 32 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo hợp chất 1-22 Hình 1.2 Cơng thức cấu tạo hợp chất 23-37 Hình 1.3 Công thức cấu tạo hợp chất 38-44 Hình 1.4 Cơng thức cấu tạo hợp chất 45-50 10 Hình 1.5 Cơng thức cấu tạo hợp chất 51-63 10 Hình 1.6 Cơng thức cấu tạo hợp chất 64-67 11 Hình 2.1 Dược liệu Xáo leo 16 Hình 3.1 Tóm tắt q trình chiết xuất cao tổng cao phân đoạn từ rễ Xáo leo 27 Hình 3.2 Sắc ký đồ cao phân đoạn 28 Hình 3.3 Tóm tắt q trình phân lập hợp chất từ phân đoạn EtOAc .29 Hình 3.4 Cấu trúc hợp chất XL6 32 Hình 3.5 Cấu trúc hợp chất XL7 33 13 N M Cuong et al (2015), "Paratrimerins A and B, Two New Dimeric Monoterpene-Linked Coumarin Glycosides from the Roots and Stems of Paramignya trimera", Chemical and Pharmaceutical Bulletin (Tokyo), 63(11), pp 945-949 14 Phu H Dang et al (2017), "Two acridones and two coumarins from the roots of Paramignya trimera", Tetrahedron Letters, 58(16), pp 1553-1557 15 TH Duong et al (2016), "Coumarins and acridon alkaloids from the roots of Paramignya trimera", VNU Journal of Science: Natural Sciences and Technology, 32(4), pp 115-123 16 Porntip Jantamat et al (2019), "Cytotoxicity and apoptosis induction of coumarins and carbazole alkaloids from Clausena harmandiana", Molecules, 24(18), pp 3385 17 Vijaya Kumar et al (1998), "Coumarins from Paramignya monophylla root bark", Phytochemistry, 49(1), pp 215-218 18 Vijaya Kumar et al (1995), "Coumarins from stem bark of Paramignya monophylla", Phytochemistry, 38(3), pp 805-806 19 Vijaya Kumar et al (1991), "Tirucallane derivatives from Paramignya monophylla fruits", Phytochemistry, 30(4), pp 1231-1233 20 V A Le Thi et al (2021), "Phytochemical Screening and Potential Antibacterial Activity of Defatted and Nondefatted Methanolic Extracts of Xao Tam Phan (Paramignya trimera (Oliv.) Guillaum) Peels against Multidrug-Resistant Bacteria", Scientifica (Cairo), 2021, pp 4233615 21 B T T Linh et al (2015 ), "Investigation on chemical constituents of the chloroform extract of the stem of Paramignya trimera [ Oliver) Burkill (Rutaceae] ", Vietnam Anal Sci Soc, 20, pp 297-302 22 David John Mabberley (1998), "Australian Citreae with notes on other Aurantioideae (Rutaceae)", Telopea, 7(4), pp 333-344 23 Mohammad Bagher Majnooni et al (2019), "Antiangiogenic effects of coumarins against cancer: From chemistry to medicine", Molecules, 24(23), pp 4278 24 MK Nguyen et al (2013), "Study on acute toxicity, hepatoprotective activity and cytotoxic activity of Paramignya trimera (Oliv.) Guillaum", Tap Chi Duoc Lieu, 1, pp 18 25 N H Phan et al (2015), "Anti-inflammatory tirucallane saponins from Paramignya scandens", Chemical and Pharmaceutical Bulletin (Tokyo), 63(7), pp 558-64 26 Nguyen Huu Toan Phan et al (2014), "Two tirucallane derivatives from Paramignya scandens and their cytotoxic activity", Phytochemistry Letters, 9, pp 78-81 27 K T Quan et al (2021), "Paratrimerins J-Y, Dimeric Coumarins Isolated from the Stems of Paramignya trimera", J Nat Prod, 84(2), pp 310-326 28 A Senthilkumar et al (2009), "Phytochemical analysis and antibacterial activity of the essential oil of Clausena anisata (Willd.) Hook f ex Benth", Int J Integr Biol, 5(2), pp 116-120 29 Ninh The Son (2018), "Notes on the genus Paramignya: phytochemistry and biological activity", Bulletin of Faculty of Pharmacy, Cairo University, 56(1), pp 1-10 30 Chung-Ren Su et al (2008 ), "Anti-HBV and cytotoxic activities of pyranocoumarin derivatives ", Bioorganic & Medicinal Chemistry, 17(16), pp 6137-6143 31 Armen Takhtajan (2009), Flowering Plants 32 Simplice Joel Ndendoung Tatsimo et al (2015), "LC-MS guided isolation of antibacterial and cytotoxic constituents from Clausena anisata", Medicinal Chemistry Research, 24, pp 1468-1479 33 N Trong Le et al (2020), "Biological Activities of Essential Oils from Leaves of Paramignya trimera (Oliv.) Guillaum and Limnocitrus littoralis (Miq.) Swingle", Antibiotics (Basel), 9(4) 34 Hoang Le Tuan Anh et al (2017), "Anti-inflammatory coumarins from Paramignya trimera", Pharmaceutical biology, 55(1), pp 1195-1201 35 Tianshung Wu et al (1983), "Acridone Alkaloids VI The Contituents of Citrus depressa Isolation and Structure Elucidation of New Acridone Alkaloids from Citrus genus", Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 31(3), pp 895-900 36 Takemura Yuko et al (1996 ), "Studies on the constituents of Yalaha Structures of a new acridone alkaloid and two new coumarins", Chemical and pharmaceutical Bulletin, 44(4), pp 804-809 37 Ngadjui Bonaventure Tchaleu et al (1989), "Prenylated coumarins from the leaves of Clausena anisata", Journal of natural products, 52(2), pp 243-247 38 C Wattanapiromsakul et al (2000), "Flavanone, triterpene and chromene derivatives from the stems of Paramignya griffithii", Phytochemistry, 55(3), pp 269-273 39 Nguyen Huu Toan Phan et al (2015), "Anti-inflammatory tirucallane saponins from Paramignya scandens", Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 63(7), pp 558-564 40 Zeyuan Luo et al (1986), "Biologically active coumarins from Enkleia siamensis", Journal of natural products, 49(6), pp 1161-1162 PHỤ LỤC Phụ lục Tiêu thực vật mẫu nghiên cứu i Phụ lục Phiếu kết giám định mẫu dược liệu ii Phụ lục Hình ảnh kết định tính iii Phụ lục Dữ liệu phổ hợp chất XL6 iv Phụ lục Dữ liệu phổ hợp chất XL7 viii PHỤ LỤC 1: TIÊU BẢN THỰC VẬT CỦA MẪU NGHIÊN CỨU i PHỤ LỤC 2: PHIẾU KẾT QUẢ GIÁM ĐỊNH MẪU DƯỢC LIỆU ii PHỤ LỤC HÌNH ẢNH KẾT QUẢ ĐỊNH TÍNH Hình ảnh kết định tính phản ứng hóa học PHYTOSTEROL ACID AMIN ĐƯỜNG KHỬ COUMARIN Phản ứng mở đóng vòng Quan sát huỳnh quang Phản ứng Diazo lacton FLAVONOID Phản ứng cyanidin Phản ứng với FeCl3 SAPONIN Phản ứng tạo bọt Phản ứng với kiềm POLYSACCHARID Phản ứng Salkowski iii PHỤ LỤC DỮ LIỆU PHỔ CỦA HỢP CHẤT XL6 Cấu trúc hóa học hợp chất XL6 Phụ lục 4.1: Phổ 1H-NMR (CDCl3, 600 MHz) XL6 Phụ lục 4.2: Phổ 13C-NMR (CDCl3, 150 MHz) XL6 Phụ lục 4.3: Phổ HMBC XL6 Phụ lục 4.4: Phổ MS XL6 iv Phụ lục 4.1: Phổ 1H-NMR (CDCl3, 600 MHz) XL6 Phụ lục 4.2: Phổ 13C-NMR (CDCl3, 150 MHz) XL6 v Phụ lục 4.3: Phổ HMBC XL6 vi Phụ lục 4.4: Phổ MS XL6 vii PHỤ LỤC DỮ LIỆU PHỔ CỦA HỢP CHẤT XL7 Cấu trúc hóa học hợp chất XL7 Phụ lục 5.1: Phổ 1H-NMR (CDCl3, 600 MHz) XL7 Phụ lục 5.2: Phổ 13C-NMR (CDCl3, 150 MHz) XL7 Phụ lục 5.3: Phổ HMBC XL7 Phụ lục 5.4: Phổ HSQC XL7 viii Phụ lục 5.1: Phổ 1H-NMR (CDCl3, 600 MHz) XL7 Phụ lục 5.2: Phổ 13C-NMR (CDCl3, 150 MHz) XL7 ix Phụ lục 5.3 Phổ HMBC hợp chất XL7 x Phụ lục 5.4 Phổ HSQC hợp chất XL7 xi