LUẬN văn THẠC sĩ nghiên cứu chiết xuất phân lập một số hợp chất từ phân đoạn dịch chiết nước của lá cây khôi đốm (sanchezia nobilis hook f)

dP rm ac y, VN U ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC ======  ====== an NGUYỄN THỊ HIỀN ho ol of M ed ic ine NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ PHÂN ĐOẠN DỊCH CHIẾT NƯỚC CỦA LÁ CÂY KHÔI ĐỐM (Sanchezia nobilis Hook.f) Co py rig ht @ Sc KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC HÀ NỘI – 2019 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ac y, an dP rm NGUYỄN THỊ HIỀN VN U ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC of M ed ic ine NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ PHÂN ĐOẠN DỊCH CHIẾT NƯỚC CỦA LÁ CÂY KHÔI ĐỐM (Sanchezia nobilis Hook.f) Sc ho ol KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC KHÓA: QH 2014.Y ThS BÙI THỊ XUÂN Co py rig ht @ NGƯỜI HƯỚNG DẪN: TS VŨ ĐỨC LỢI HÀ NỘI – 2019 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CẢM ƠN ac y, VN U Em xin chân thành cảm ơn TS Vũ Đức Lợi – Chủ nhiệm Bộ môn Dược liệu – Dược học cổ truyền, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội ThS Bùi Thị Xuân, Giảng viên Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, người Thầy tận tâm hướng dẫn, hết lòng bảo tạo điều kiện giúp đỡ em suốt q trình học tập, nghiên cứu hồn thành khố luận dP rm Em xin chân thành cảm ơn đề tài khoa học công nghệ cấp Đại học Quốc gia Hà Nội, mã số: QG.18.20 hỗ trợ kinh phí tạo điều kiện cho em hồn thành khóa luận tốt nghiệp ine an Em xin chân thành cảm ơn Thầy cô Bộ môn Dược liệu – Dược cổ truyền Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi, giúp đỡ em q trình học tập hồn thành khóa luận tốt nghiệp ed ic Em xin gửi lời cảm ơn đến tất quý Thầy cô Khoa Y Dược dạy dỗ, trang bị kiến thức cho em suốt năm theo học trường of M Em xin trân trọng cảm ơn Ban Lãnh đạo Khoa Y Dược – Đại học Quốc gia Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt thời gian học tập nghiên cứu trường Hà Nội, ngày 31 tháng năm 2019 Sinh viên Nguyễn Thị Hiền Co py rig ht @ Sc ho ol Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình, người ln theo sát động viên, quan tâm tạo điều kiện giúp hồn thành khóa luận LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com STT Tên đầy đủ Kí hiệu, viết tắt 1 13 VN U DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, VIẾT TẮT Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton H -NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer d Doublet dd Doublet of doublet EtOH ESI-MS Phổ khối ion hóa phun mù điện tử HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation HSQC Heteronuclear Single Quantum Correlation 10 IC50 11 MeOH 12 m/z 13 NMR ed ic ine an Ethanol M Nồng độ ức chế 50% (Half maximal inhibitory concentration) s TLC Khối lượng/điện tích Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Singlet Sắc ký lớp mỏng Co py rig ht @ Sc 15 Methanol of ho ol 14 dP rm ac y, C -NMR LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Hình vẽ VN U DANH MỤC HÌNH ẢNH Tên hình vẽ Trang Hình 1.1 Hình ảnh hoa Khơi đốm ac y, Hình 1.2 Đặc điểm vi phẫu thân Hình 1.4 Đặc điểm bột thân Hình 1.5 Đặc điểm vi phẫu bột dP rm Hình 1.3 Đặc điểm vi phẫu 12 Hình 2.1 Hình ảnh hoa Khơi đốm 17 an Hình 1.6 Cơng thức cấu tạo hợp chất phân lập từ Khơi đốm 21 22 Hình 3.3 Cấu trúc hợp chất NX1 24 Hình 3.4 Cấu trúc hợp chất NX2 26 M Hình 3.2 Sơ đồ phân lập hợp chất từ phân đoạn dịch chiết nước ed ic ine Hình 3.1 Sơ đồ chiết xuất phân đoạn từ Khôi đốm 28 Co py rig ht @ Sc ho ol of Hình 3.5 Cấu trúc hợp chất NX3 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Bảng biểu VN U DANH MỤC BẢNG BIỂU Tên bảng biểu Trang Khối lượng cắn phân đoạn dịch chiết ethanol từ Khôi đốm 20 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ NMR NX1 chất tham khảo 23 Bảng 3.3 Dữ liệu phổ NMR NX2 chất tham khảo 25 Bảng 3.4 Dữ liệu phổ NMR NX3 chất tham khảo 27 Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ic ine an dP rm ac y, Bảng 3.1 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MỤC LỤC VN U LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, VIẾT TẮT ac y, DANH MỤC HÌNH ẢNH DANH MỤC BẢNG BIỂU dP rm MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Vị trí phân loại đặc điểm thực vật chi Sanchezia an 1.1.1 Vị trí phân loại ine 1.1.2 Đặc điểm thực vật phân bố chi Sanchezia ed ic 1.2 Tổng quan lồi Khơi đốm 1.2.1 Đặc điểm loài Khôi đốm M 1.2.2 Đặc điểm vi phẫu of 1.2.3 Đặc điểm bột ho ol 1.2.4 Phân bố 1.2.5 Thành phần hóa học Sc 1.2.6 Tác dụng sinh học 12 1.2.7 Công dụng 15 @ CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 ht 2.1 Đối tượng nghiên cứu 17 rig 2.1.1 Nguyên vật liệu 17 py 2.1.2 Trang thiết bị, dụng cụ 17 Co 2.2 Phương pháp nghiên cứu 18 2.2.1 Phương pháp chiết xuất phân lập hợp chất 18 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 2.2.2 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất 19 VN U CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 20 3.1 Kết chiết xuất phân lập hợp chất 20 ac y, 3.1.1 Chiết xuất cao toàn phần phân đoạn 20 3.1.2 Phân lập hợp chất 21 dP rm 3.2 Kết xác định cấu trúc hợp chất 23 3.2.1 Hợp chất NX1: 4',5,7-Trihydroxy-3',5'-dimethoxyflavon 23 3.2.2 Hợp chất NX2: Kaempferol-3-O--L-arabinofuranosid 24 3.2.3 Hợp chất NX3: Kaempferol-3-O-β-D-glucopyranosid 26 an 3.3 Bàn luận 29 ine 3.3.1 Về chiết xuất cao toàn phần phân đoạn từ Khôi đốm 29 ed ic 3.3.2 Về phân lập xác định cấu trúc hợp chất 29 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 34 Co py rig ht @ Sc ho ol of M TÀI LIỆU THAM KHẢO LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MỞ ĐẦU dP rm ac y, VN U Nằm vùng nhiệt đới gió mùa, khí hậu nóng ẩm quanh năm nên Việt Nam có hệ sinh thái vơ phong phú, đa dạng, với tiềm to lớn tài nguyên dược liệu (thực vật, động vật, khống vật) nói chung tài ngun thuốc nói riêng Bên cạnh đó, Việt Nam có y học dân tộc lâu đời với tri thức sử dụng loại dược liệu, thuốc có giá trị dùng để chữa bệnh thông thường nan y M ed ic ine an Hiện nay, không Việt Nam mà giới, với xu hướng “trở thiên nhiên” việc sử dụng thuốc từ dược liệu người dân ngày gia tăng, có tác động có hại phù hợp với qui luật sinh lý thể Theo tổ chức y tế giới (WHO), khoảng 80% dân số giới dựa vào thuốc có nguồn gốc tự nhiên chăm sóc sức khỏe cộng đồng Vì vậy, thuốc sử dụng thảo dược đối tượng nhà khoa học nghiên cứu cách đầy đủ chất hoạt chất có cỏ thiên nhiên Từ đó, định hướng cho việc nghiên cứu, chiết xuất để tìm loại thuốc hay đường tổng hợp để tạo chất có hoạt tính việc chữa trị nhiều loại bệnh Co py rig ht @ Sc ho ol of Cây Khơi đốm có tên khoa học Sanchezia nobilis Hook.f hay Sanchezia speciosa Leonard, ngồi cịn có nhiều tên gọi khác Xăng sê, Ngũ sắc, thuộc chi Sanchezia (họ Ơ Rơ Acanthaceae) [1] Trên giới nghiên cứu tác dụng chống viêm, chống oxy hóa, chống tăng sinh tế bào in vitro, tác dụng kháng khuẩn [37,39] Ở Việt Nam, dân gian ta truyền sử dụng Khôi đốm vị thuốc quý để chữa bệnh viêm dày, cách chữa bệnh cần lấy vài tươi rửa ăn với chút muối cắt đau lập tức, dùng thời gian khỏi hẳn sắc khơ thay nước chè uống ngày [3] Tuy nhiên, nghiên cứu thành phần hóa học lồi Việt Nam giới cịn ít, có số cơng bố cho thấy có chứa số nhóm chất như: flavonoid, glycosid, carbohydrat, alcaloid, steroid, phenolic, saponin tannin [36] Việc nghiên cứu sâu thành phần hóa học tác dụng sinh học Khôi đốm chứng minh kinh nghiệm sử dụng lồi dân gian, hướng đến việc tìm kiếm hợp chất có hoạt tính sinh học, xây dựng LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ic ine an dP rm ac y, VN U phương pháp phân tích hợp chất có dược liệu góp phần nâng cao giá trị tiềm Khôi đốm kho tàng thuốc Việt Nam Vì vậy, đề tài: “Nghiên cứu chiết xuất, phân lập số hợp chất từ phân đoạn dịch chiết nước Khôi đốm (Sanchezia nobilis Hook.f.)” thực với mục tiêu: Chiết xuất, phân lập số hợp chất từ phân đoạn dịch chiết nước Khôi Đốm Xác định cấu trúc hợp chất phân lập LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Bảng 3.4: Dữ liệu phổ NMR NX3 chất tham khảo [18] CH 78,2 6'' CH2 62,7 78,4 ho ol of 5'' ac y, VN U δHXa,c (ppm) (Mult, J=Hz) 6,18 (d; 1,8) 6,38 (d; 2,1) 8,05 (d; 9,0) 6,87 (dd; 2,1; 8,7) 6,87 (dd; 2,1; 8,7) 8,04 (d; 9,0) 5,23 (d;7,5) 3,40 (dd; 7,2; 10,0) 3,25-3,40 (m) 3,25-3,40 (m) 3,20 (ddd; 2,1; 5,1; 3,45 (m) 7,5) 3,72 (dd; 2,0; 11,5) 3,71 (dd; 2,1; 11,7) 3,51 (dd; 5,5; 12,0) 3,51 (dd; 5,4; 11,7) an dP rm δHNX3 (ppm) (Mult, J=Hz) 6,24 (d; 2,0) 6,41 (d; 2,0) 8,08 (d; 9,0) 6,90 (d; 9,0) 6,90 (d; 9,0) 8,08 (d; 9,0) 5,25 (d;7,5) 3,46 (m) 3,24 (m) 3,36 (m) ine δCXa,b ppm 159,1 135,5 179,5 163,0 99,9 166,0 94,8 158,5 105,7 122,8 132,3 116,1 161,5 116,1 132,3 104,1 75,7 78,4 71,3 ed ic δCNX3 ppm 159,2 135,6 179,6 163,1 100,1 166,3 94,7 158,6 105,6 122,7 132,4 116,2 161,6 116,2 132,4 104,1 75,6 78,5 71,4 M Vị trí DEPT C C C C C CH C CH C 10 C 1' C 2' CH 3' CH 4' C 5' CH 6' CH 1'' CH 2'' CH 3'' CH 4'' CH 62,6 aĐo CD OD , b125 MHz, c500 MHz chất tham khảo [18] @ Sc Hợp chất NX3 phân lập dạng bột màu vàng nhạt Trên phổ khối lượng APCI-MS hợp chất NX3 xuất pic ion giả phân tử m/z 449,1 tương ứng với hợp chất có cơng thức phân tử C21H20O11 ht Phổ H-NMR NX3 xuất cặp tín hiệu doublet δH 6,24 Co py rig (1H, d, J=2,0Hz; H-6) δH 6,41 (1H, d, J=2,0Hz; H-8) điển hình cho hai proton vị trí C-6 C-8 vịng A hợp chất flavonol Cặp tín hiệu doublet khác δH 6,90 (2H, d, J=9,0Hz; H-3', H-5') δH 8,08 (2H, d, J=9,0Hz; H-2', H-6') đặc cho vịng thơm para Tín hiệu proton anomer δH 5,25 (1H, d, J=7,5Hz; H-1'') gợi ý phân tử hợp chất NX3 27 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com có mặt gốc đường of M ed ic ine an dP rm ac y, VN U Trên phổ C-NMR DEPT hợp chất NX3 xuất 21 nguyên tử carbon, có 11 nhóm methin nhóm methylen Trong tín hiệu δC 104,1; 75,6; 78,5; 71,4; 78,2 62,7 tương ứng với C-1'', C-2'', C-3'', C-4'', C-5'' C-6'' khẳng định có mặt nhóm glucopyranosyl tín hiệu 15 ngun tử carbon thuộc vào khung flavonol có vịng B para So sánh liệu phổ NMR hợp chất NX3 với hợp chất kaempferol-3O-β-D-glucopyranosid [18] thấy gần hồn tồn phù hợp Tương tác HMBC tín hiệu proton δH 5,25 (H-1'') với tín hiệu carbon δC 135,6 (C-3) gợi ý nhóm O-β-D-glucopyranosyl gắn vào vị trí số Từ liệu phổ trên, cho phép kết luận hợp chất NX3 có tên kaempferol-3-O-β-Dglucopyranosid Co py rig ht @ Sc ho ol Hình 3.5 Cấu trúc hợp chất NX3 28 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 3.3 Bàn luận VN U 3.3.1 Về chiết xuất cao toàn phần phân đoạn từ Khôi đốm an dP rm ac y, Đề tài chiết xuất cao tồn phần từ Khơi đốm phương pháp chiết lạnh: ngâm nhiệt độ phịng ngày với dung mơi EtOH 80% Phương pháp có ưu điểm đơn giản, dễ thực hiện, thiết bị đơn giản, rẻ tiền thu khối lượng cắn toàn phần đạt 6% so với lượng dược liệu ban đầu Cắn tồn phần sau chiết lỏng – lỏng với dung mơi có độ phân cực tăng dần n-hexan, ethyl acetat thu ba phân đoạn n-hexan, ethyl acetat và dịch chiết nước, đem cất thu hồi dung môi áp suất giảm cô cách thủy nhiệt độ 600C thu cắn phân đoạn với khối lượng đạt 0,368% ; 1,152% ; 1,064% so với nguyên liệu khô ban đầu 3.3.2 Về phân lập xác định cấu trúc hợp chất M ed ic ine Kết phân lập hợp chất từ phân đoạn dịch chiết nước Khôi đốm thu tỉnh Nam Định Cấu trúc hợp chất xác định thông qua kết đo nhiệt độ nóng chảy, góc quay cực riêng, phổ khối, phổ cộng hưởng hạt nhân so sánh với liệu công bố hợp chất liên quan Ba hợp chất xác định 4',5,7-Trihydroxy-3',5'-dimethoxyflavon of (NX1), Kaempferol-3-O--L-arabinofuranosid (NX2), Kaempferol-3-O-β-Dglucopyranosid (NX3) Co py rig ht @ Sc ho ol 4',5,7-trihydroxy-3',5'-dimethoxyflavon: Đây chất lần phân lập từ Khôi đốm nói riêng chi Sanchezia nói chung, flavonoid tìm thấy chủ yếu loại cỏ ngũ cốc khác thuộc họ Poaceae, lúa mì, lúa mạch, tre, yến mạch, ngơ, gạo phát với hàm lượng cao họ Huperziaceae [33,42] Hợp chất có nhiều tác dụng sinh học biết đến chống viêm, chống oxy hóa, chống dị ứng, chống vi rút ức chế hình thành khối u [16,33] ức chế phát triển ung thư biểu mô đại trực tràng [32], ung thư vú [11] Các chế phân tử liên quan đến hợp chất ngày làm rõ 4',5,7trihydroxy-3',5'-dimethoxyflavon làm giảm phản ứng viêm tế bào đơn nhân máu ngoại vi người (hPBMC) thông qua điều chỉnh đường tín hiệu TLR4/NF-κB/STAT, p38MAPK PI3K/AKT [46,47] hay 29 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com dP rm ac y, VN U chế liên quan đến ung thư vú ung thư trực tràng thông qua ức chế hoạt động cyclooxygenase P-glycoprotein [12,33] Năm 2016, Jang Mi Han cộng tiến hành nghiên cứu in vitro cho thấy tiềm hợp chất liên quan đến ức chế hình thành khối u thơng qua việc ngăn chặn kép yếu tố tăng trưởng nội mô mạch máu VEGFR2 protein HIF-1α [16] Năm 2017, từ loài Casearia arborea (Salicaceae), Augusto L Santos cộng cho thấy hợp chất có tác dụng điều trị bệnh nhiễm ký sinh trùng Leishmania gây tác dụng điều hòa miễn dịch tế bào chủ kích thích đại thực bào sản xuất NO (oxit nitric) [42] Kaempferol-3-O--L-arabinofuranosid: Là flavonoid phân of M ed ic ine an lập từ số loài thuộc họ khác Rubus rigidus var camerunensis họ Rosaceae [34], Polygonum aviculare họ Polygonaceae Đây lần hợp chất phân lập từ Khôi đốm chi Sanchezia Hợp chất có tác dụng chống viêm, ức chế phát triển tế bào ung thư [54], tác dụng chống oxy hóa [34], [38], hoạt động bảo vệ thần kinh chống độc tính glutamate gây tế bào HT22 [50] khả gây độc tế bào dòng tế bào ung thư gan HepG2 [30] Năm 2014, từ phận mặt đất loài Polygonum aviculare, Hyo Hyun Yang cộng tiến hành đánh giá khả chống lão hóa nguyên bào sợi người (HDFs), kết cho thấy kaempferol-3-O--L-arabinofuranosid làm giảm β- py rig ht @ Sc ho ol galactosidase liên quan đến lão hóa, dấu ấn sinh học sử dụng rộng rãi lão hóa tế bào Kết nghiên cứu góp phần hướng đến phát triển chất bổ sung chế độ ăn uống mỹ phẩm để ngăn ngừa lão hóa bệnh liên quan đến tuổi tác [51] Dựa nghiên cứu có cho thấy hợp chất có khả ngăn ngừa viêm gan cách vơ hiệu hóa đường tín hiệu TLR4/NF-κB [54] năm 2018, Fang-Xue Zhang cộng đánh giá tác dụng chống viêm mơ hình gây bệnh Parkinson chuột lipopolysaccharide (LPS) gây ra, kết cho thấy hợp chất làm giảm đáng kể việc sản xuất LPS gây cytokine tiền viêm vùng đồi hải mã chuột tế bào hình ống nghiệm thơng qua việc vơ hiệu Co hóa TLR4/NF-κB Như vậy, kaempferol-3-O--L-arabinofuranosid có tác dụng cải thiện tình trạng viêm thần kinh LPS gây ra, chống lại thối hóa 30 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com VN U thần kinh thông qua việc cản trở đường tín hiệu TLR4/NF-κB Điều cho thấy tiềm chiến lược trị liệu tương lai để điều trị Parkinson cách an toàn hiệu [53] dP rm ac y, Kaempferol-3-O-β-D-glucopyranosid: flavonoid biết đến có nhiều lồi thực vật tơ hồng, dâu tằm, trà xanh, rau má, hồng, rau đay, muồng trâu, thuốc (cam thảo, đỗ trọng), phân bố họ thực vật Ebenaceae, Rosaceae Eucommiaceae [17,41] Hợp chất biết đến với nhiều tác dụng dược lý đáng kể chống viêm, chống oxy hóa, chống ung thư, bảo vệ thần kinh, có tác dụng với bệnh nhân đái tháo đường, chống viêm loét dày [41] M ed ic ine an Các nhà khoa học tiến hành nghiên cứu kaempferol-3-O-β-Dglucopyranosid xác định chế cho tác dụng bảo vệ, chống lại phản ứng dị ứng mơ hình gây hen dị ứng ovalbumin chuột Đó hợp chất có tác dụng ức chế bạch cầu toan làm giảm số lượng bạch cầu toan mô phổi [29] Theo nghiên cứu gần cho thấy điều trị kaempferol-3-O-β-D-glucopyranosid có tác dụng ức chế phá hủy phế nang, làm mở rộng đường thở mô hình gây viêm chuột ovalbumin [21] py rig ht @ Sc ho ol of Hợp chất báo cáo có khả ức chế nhiều dịng tế bào ung thư dòng tế bào ung thư bạch cầu (HL-60) [10], tế bào ung thư gan (HepG2, Huh-7 H22) [27], tế bào ung thư da (HaCaT, A375P SK-MEL2) [52] tế bào ung thư phổi (A549 H1299) [13] Năm 2018, J Zhang cộng nghiên cứu mơ hình tổn thương da tia UV dòng tế bào da HaCaT người ống nghiệm mơ hình thực nghiệm chuột Babl/c cho thấy kaempferol-3-O-β-D-glucopyranosid chất chống ung thư đầy tiềm việc phòng ngừa điều trị bênh tổn thương da tia cực tím UV gây - tiền thân ung thư biểu mơ tế bào vảy da, hợp chất có khả ức chế đặc hiệu mục tiêu phân tử đích p38 MAPK gây độc tính thấp [52] Co Các nghiên cứu cho thấy kaempferol-3-O-β-D-glucopyranosid có khả chống oxy hóa khả ức chế stress oxy hóa gây nội độc tố, 31 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ac y, VN U thông qua việc điều chỉnh đường tín hiệu TLR4-PKCβ2-NADPH, từ dẫn đến chết theo chương trình biểu mô tăng bạch cầu toan [14] Năm 2013, từ dịch chiết dâu tằm, Jiwon Choi công số hợp chất phân lập kaempferol-3-O-β-D-glucopyranosid có tác dụng bảo vệ lớn nhất, chống lại stress oxy hóa mơ hình tan máu tế bào hồng cầu người gốc tự AAPH gây ngăn ngừa suy giảm GSH hồng cầu [40] Sc ho ol of M ed ic ine an dP rm Trên mô hình gây độc tế bào thần kinh 6-hydroxydopamine (6OHDA) lồi giun Caenorhabditis elegans Haifeng Li cơng tiến hành, kết cho thấy kaempferol-3-O-β-D-glucopyranosid làm giảm thối hóa thần kinh giun C Elegans tăng vịng đời giun Nó làm giảm nồng độ ROS, ức chế peroxid hóa lipid tăng hoạt động enzym SOD GPx Hơn nữa, có khả tăng cường enzym acetylcholinesterase làm giảm mức độ phiên mã gen egl-1 liên quan đến chết tế bào thần kinh [26] Một nghiên cứu khác đánh giá tác dụng kaempferol-3-O-β-D-glucopyranosid hệ thống thần kinh trung ương mơ hình chuột cho thấy hợp chất có tác dụng đáng kể lên hoạt động trao đổi chất chuột làm giảm hoạt động tự phát, tăng tỷ lệ số giấc ngủ, rút ngắn thời gian ngủ chuột điều trị natri pentobarbital với liều thấp liều ngưỡng kéo dài thời gian ngủ với natri pentobarbital liều cao liều ngưỡng Ngoài ra, hợp chất làm giảm tần suất, mức độ co giật Như vậy, việc sử dụng kaempferol-3-O-β-Dglucopyranosid điều trị góp phần cải thiện bệnh lý liên quan đến hệ thần kinh trung ương tương lai [28] Co py rig ht @ Năm 2012, M.Ke cộng cho thấy kaempferol-3-O-β-Dglucopyranosid có tác dụng chống tăng đường huyết Nó giúp ngăn ngừa bệnh bệnh võng mạc tiểu đường, biến chứng nặng nề đái tháo đường cách giảm biểu mức yếu tố tăng trưởng nội mô mạch máu (VEGF) võng mạc làm giảm bớt tác động gây nồng độ glucose máu cao [20] Đánh giá tác dụng chống viêm lt dày mơ hình gây lt chuột nhóm Klein-Júnior LC cộng liều uống 32 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com VN U kaempferol-3-O-β-D-glucopyranosid 30 mg/kg sử dụng cho chuột có tác dụng làm giảm phần trăm diện tích tổn thương, tổng diện tích tổn thương số loét dày [22] Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ic ine an dP rm ac y, Cả hợp chất chưa công bố cơng trình khoa học trước Khơi đốm, chi Sanchezia nói chung Vì vậy, đóng góp đề tài, làm phong phú tri thức thành phần hóa học Khôi đốm chi Sanchezia Tuy nhiên, nghiên cứu đề tài bước đầu, tạo sở cho việc nghiên cứu sâu Khôi đốm; bổ sung tư liệu cho việc sử dụng làm thuốc dân gian, phục vụ cho lĩnh vực kiểm nghiệm dược liệu sau 33 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ VN U Kết luận: Sau trình nghiên cứu thực nghiệm, đề tài khóa luận thu số kết sau : dP rm ac y, + Chiết xuất, phân lập: Đã sử dụng phương pháp chiết ngâm với dung môi EtOH 80% phương pháp sắc ký cột để chiết xuất phân lập hợp chất từ Khôi đốm + Xác định cấu trúc hợp chất phân lập được: Thơng qua kết đo nhiệt độ nóng chảy, góc quay cực riêng, phổ khối phổ cộng hưởng hạt nhân, xác định cấu trúc hợp chất: 4',5,7-trihydroxy-3',5'(NX1), kaempferol-3-O--L-arabinofuranosid (NX2), an dimethoxyflavon ine kaempferol-3-O-β-D-glucopyranosid (NX3) Đây lần hợp chất phân lập từ Khôi đốm Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ic Kiến nghị: + Tiếp tục triển khai phân lập hợp chất khác từ loài Sanchezia nobilisHook.f + Dựa kết nghiên cứu thành phần hóa học, cần nghiên cứu xác định hàm lượng hoạt chất phận đánh giá tác dụng sinh học loài tác dụng chống viêm giảm đau, chống loét dày tác dụng sinh học khác 34 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com TÀI LIỆU THAM KHẢO VN U Tiếng Việt Nguyễn Tiến Bân, (2003), Danh mục loài thực vật Việt Nam, Nhà xuất Nông nghiệp, tr 272-273 ac y, Phan Văn Chiêu, (2011), Đông nam dược nghiệm phương, Nhà xuất Thuận Hóa, tr 856 dP rm Nguyễn Trung Hịa, (2012), Đơng y tồn tập, Nhà xuất Thuận Hóa, tr 1234-1235 Phạm Hồng Hộ, (2000), Cây cỏ Việt Nam, Nhà xuất trẻ, tr 39 an Đỗ Tất Lợi, (2001), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, tr 518-520 ine Nguyễn Thị Mai, (2017), "Nghiên cứu thành phần hóa học Xăng sê", Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ Đại học, Khoa Y Dược, ĐHQGHN M ed ic Bùi Thị Xuân, Vũ Đức Lợi, Vũ Thị Mây cộng sự, (2018), "Một số hợp chất phân lập từ Khôi đốm (Sanchezia nobilis Hook.f.)", Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, 34 (1), tr 42-47 of Tiếng Anh ho ol Abd-Ellah A., Mohamed K., Backheet E., et al., (2014), "Cinnamyl Alcohol, Benzyl Alcohol, and Flavonoid Glycosides from Sanchezia nobilis", Chemistry of Natural Compounds, 50 (5) ht @ Sc Ahmed E Abd-Ellah, Khaled M Mohamed, Enaam Y Backheet and Mahmoud H Mohamed, (2006), "Macro-and micromorphology of Sanchezia nobilis Hook cultivated in Egypt: leaf, stem and flower", Bulletin Pharmaceutical Sciences, Vol 29, Part 2, pp 300-327 Co py rig 10 Burmistrova O, Quintana J, Diaz J G, Estevez F, (2011), "Astragalin heptaacetate-induced cell death in human leukemia cells is dependent on caspases and activates the MAPK pathway", Cancer Letters, 309 (1), pp 71-77 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com VN U 11 Cai H, Hudson E A, Mann P, Verschoyle R D, et al, (2004), "Growth-inhibitory and cell cycle-arresting properties of the rice bran constituent tricin in human-derived breast cancer cells in vitro and in nude mice in vivo", British Journal of Cancer, 91 (7), pp 1364-1371 dP rm ac y, 12 Cai H, Al-Fayez M, Tunstall R G, Platton S, et al, (2005), "The rice bran constituent tricin potently inhibits cyclooxygenase enzymes and interferes with intestinal carcinogenesis in ApcMin mice", Molecular Cancer Therapeutics, (9), pp 1287-1292 an 13 Chen M, Cai F, Zha D, Wang X, et al, (2017), "Astragalin-induced cell death is caspase-dependent and enhances the susceptibility of lung cancer cells to tumor necrosis factor by inhibiting the NF-small ka, CyrillicB pathway", Oncotarget, (16), pp 26941-26958 ed ic ine 14 Cho I H, Gong J H, Kang M K, Lee E J, et al, (2014), "Astragalin inhibits airway eotaxin-1 induction and epithelial apoptosis through modulating oxidative stress-responsive MAPK signaling", BMC Pulmonary Medicine, 14, pp 122 of M 15 Ellah A E A., Mohamed K M., Backheet E Y., et al., (2013), "Matsutake alcohol glycosides from Sanchezia nobilis", Chemistry of Natural Compounds, 48 (6), pp 930-933 Sc ho ol 16 Han J M, Kwon H J, Jung H J, (2016), "Tricin, 4',5,7-trihydroxy3',5'-dimethoxyflavone, exhibits potent antiangiogenic activity in vitro", International Journal of Oncology, 49 (4), pp 1497-1504 rig ht @ 17 Han S, Hanh Nguyen T T, Hur J, Kim N M, et al, (2017), "Synthesis and characterization of novel astragalin galactosides using betagalactosidase from Bacillus circulans", Enzyme Microbial Technology, 103 pp 59-67 Co py 18 Hyoung Ja Kim, Eun-Rhan Woo, and Hokoon Park, (2004), "A Novel Lignan and Flavonoids from Polygonum aviculare", Journal of Natural Products, 57 (5), pp 581-586 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com VN U 19 Jean-Yves Meyer, Christophe Lavergne, (2004), "Beautés fatales: Acanthaceae species as invasive alien plants on tropical Indo-Pacific Islands", Diversity and Distributions, 10 pp 333–347 dP rm ac y, 20 Ke M, Hu X Q, Ouyang J, Dai B, et al, (2012), "The effect of astragalin on the VEGF production of cultured Muller cells under high glucose conditions", Biomedical Materials and Engineering, 22 (1-3), pp 113-119 21 Kim Y H, Choi Y J, Kang M K, Park S H, et al, (2017), "Astragalin Inhibits Allergic Inflammation and Airway Thickening in OvalbuminChallenged Mice", Journal of Agricultural and Food Chemistry, 65 (4), pp 836-845 ed ic ine an 22 Klein-Junior L C, Santin J R, Lemos M, Silveira A C, et al, (2013), "Role of gastric mucus secretion, oxinitrergic system and sulfhydryl groups on the gastroprotection elicited by Polygala cyparissias (Polygalaceae) in mice", Journal Pharmacy Pharmacology, 65 (5), pp 767-776 of M 23 Kong C, Xu X, Zhou B, Hu F, et al, (2004), "Two compounds from allelopathic rice accession and their inhibitory activity on weeds and fungal pathogens", Phytochemistry, 65 (8), pp 1123-1128 ho ol 24 Leonard E C., (1926), "Notes on the genus Sanchezia", Journal of Washington Academy of Sciences, 16 pp 484-492 Sc 25 Leonard E C., Smith L B., (1964), "Sanchezia and related American Acanthaceae", 66 (768), pp 313-343 rig ht @ 26 Li H, Shi R, Ding F, Wang H, et al, (2016), "Astragalus Polysaccharide Suppresses 6-Hydroxydopamine-Induced Neurotoxicity in Caenorhabditis elegans", Oxidative Medicine and Cellular Longevity , 2016 pp 4856761 Co py 27 Li W, Hao J, Zhang L, Cheng Z, et al, (2017), "Astragalin Reduces Hexokinase through Increasing miR-125b to Inhibit the Proliferation of Hepatocellular Carcinoma Cells in Vitro and in Vivo", Journal of Agricultural and Food Chemistry, 65 (29), pp 5961-5972 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com VN U 28 Li X, Tang Z, Fei D, Liu Y, et al, (2017), "Evaluation of the sedative and hypnotic effects of astragalin isolated from Eucommia ulmoides leaves in mice", Natural Product Research, 31 (17), pp 2072-2076 ac y, 29 Liu J, Cheng Y, Zhang X, Zhang X, et al, (2015), "Astragalin Attenuates Allergic Inflammation in a Murine Asthma Model", Inflammation, 38 (5), pp 2007-2016 dP rm 30 Liu J X, Di D L, Wei X N, Han Y, (2008), "Cytotoxic diarylheptanoids from the pericarps of walnuts (Juglans regia)", Planta Medica, 74 (7), pp 754-759 ine an 31 Loi Vu Duc, Tung Bui Thanh, Ha Vu Hoang and Tuyen Nguyen Manh, (2016), "Phytochemical and anti-inflammatory effect from the leaf of Sanchezia speciosa Leonard growing in Vietnam", Journal of Chemical and Pharmaceutical Research, (7), pp 309-315 of M ed ic 32 Malvicini M, Gutierrez-Moraga A, Rodriguez M M, GomezBustillo S, et al, (2018), "A Tricin Derivative from Deschampsia antarctica Desv Inhibits Colorectal Carcinoma Growth and Liver Metastasis through the Induction of Specific Immune Response", Molecular Cancer Therapeutics, 17 (5), pp 966-976 ho ol 33 Mi Li , Yunqiao Pu , Chang Geun Yoo , Arthur J Ragauskas, (2016), "The occurrence of tricin and its derivatives in plants, Green Chemistry", Green Chemistry, 18 (6), pp 1439–1454 ht @ Sc 34 Nguelefack T B, Mbakam F H, Tapondjou L A, Watcho P, et al, (2011), "A dimeric triterpenoid glycoside and flavonoid glycosides with free radical-scavenging activity isolated from Rubus rigidus var camerunensis", Archives of Pharmacal Research, 34 (4), pp 543-550 Co py rig 35 Nusrat Shaheeen, Muhammaduzair, Bashir Ahmad Ch and Alamgeer, (2017), "Invitro Cytotoxicity Of Sanchezia Speciosa Extracts On Human Epithelial Cervical Cancer (Hela) Cell Line", Acta Poloniae Pharmaceutica Drug Research, 74 (5), pp 1389-1394 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com VN U 36 Parvin S., Rafshanjani M A S., Kader M A., et al., (2015), "Preliminary phytochemical screening and cytotoxic potentials from leaves of Sanchezia speciosa Hook f", International Journal of Advances in Scientific Research, (3), pp 145-150 dP rm ac y, 37 Paydar M., Wong Y L, Moharam B A, Wong W F, et al, (2013), "In vitro anti-oxidant and anti-cancer activity of methanolic extract from Sanchezia speciosa leaves", Pakistan Journal of Biological Sciences, 16 (20), pp 1212-1215 an 38 Phan V K, Nguyen T M, Minh C V, Nguyen H K, et al, (2010), "Two new C-glucosyl benzoic acids and flavonoids from Mallotus nanus and their antioxidant activity", Archives of Pharmacal Research, 33 (2), pp 203208 ed ic ine 39 Rafshanjani M., Parvin S., Kader M., et al., (2014), "In vitro antibacterial, antifungal and insecticidal activities of ethanolic extract and its fractionates of Sanchezia speciosa Hook f", International Research Journal Pharmacy, (9), pp 717-720 of M 40 Rasul A, Millimouno F M, Ali Eltayb W, Ali M, et al, (2013), "Pinocembrin: a novel natural compound with versatile pharmacological and biological activities", Biomedical Reseach International, 2013 pp 379850 Sc ho ol 41 Riaz A, Rasul A, Hussain G, Zahoor M K, et al, (2018), "Astragalin: A Bioactive Phytochemical with Potential Therapeutic Activities", Advances in Pharmacologycal Science, 2018 pp 9794625 rig ht @ 42 Santos A L, Yamamoto E S, Passero L F D, Laurenti M D, et al, (2017), "Antileishmanial Activity and Immunomodulatory Effects of Tricin Isolated from Leaves of Casearia arborea (Salicaceae)", Chemical Biodivers, 14 (5) Co py 43 Sciences W A o and Sciences W A o., (1922), "Journal of the Washington Academy of Sciences", Washington Academy of Sciences, 86 (3), pp 6-3169 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com VN U 44 Sciences W A o and Sciences W A o., (1926), "Journal of the Washington Academy of Sciences", Washington Academy of Sciences, 86 (3), pp 9-2258 ac y, 45 Scotland RW, Vollesen K, (2000), "Classification of Acanthaceae", Kew Bulletin, 55 pp 513-589 dP rm 46 Shalini V, Jayalekshmi A, Helen A, (2015), "Mechanism of antiinflammatory effect of tricin, a flavonoid isolated from Njavara rice bran in LPS induced hPBMCs and carrageenan induced rats", Molecular Immunology, 66 (2), pp 229-239 ine an 47 Shalini V, Pushpan C K, G S, A J, et al, (2016), "Tricin, flavonoid from Njavara reduces inflammatory responses in hPBMCs by modulating the p38MAPK and PI3K/Akt pathways and prevents inflammation associated endothelial dysfunction in HUVECs", Immunobiology, 221 (2), pp 137-144 ed ic 48 Takhtadzhian A L., (1997), "Diversity and classification of flowering plants", Columbia University Press ho ol of M 49 Tung Bui Thanh, Loi Vu Duc, Hai Nguyen Thanh , Vung Nguyen Tien, (2016), "In vitro antioxidant and anti-inflammatory activities of isolated compounds of ethanol extract from Sanchezia speciosa Leonard’s leaves", Journal of Basic and Clinical Physiology and Pharmacology, 28 (1), pp 7984 @ Sc 50 Yang H, Sung S H, Kim J, Kim Y C, (2011), "Neuroprotective diarylheptanoids from the leaves and twigs of juglans sinensis against glutamate-induced toxicity in HT22 cells", Planta Medica, 77 (8), pp 841845 py rig ht 51 Yang H H, Hwangbo K, Zheng M S, Son J K, et al, (2014), "Inhibitory effects of juglanin on cellular senescence in human dermal fibroblasts", Journal of Natural Medicines, 68 (3), pp 473-480 Co 52 You O H, Shin E A, Lee H, Kim J H, et al, (2017), "Apoptotic Effect of Astragalin in Melanoma Skin Cancers via Activation of Caspases LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com VN U and Inhibition of Sry-related HMg-Box Gene 10", Phytotherapy Research, 31 (10), pp 1614-1620 ac y, 53 Zhang F X, Xu R S, (2018), "Juglanin ameliorates LPS-induced neuroinflammation in animal models of Parkinson's disease and cell culture via inactivating TLR4/NF-kappaB pathway", Biomedicine and Pharmacotherapy, 97 pp 1011-1019 Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ic ine an dP rm 54 Zhou G Y, Yi Y X, Jin L X, Lin W, et al, (2016), "The protective effect of juglanin on fructose-induced hepatitis by inhibiting inflammation and apoptosis through TLR4 and JAK2/STAT3 signaling pathways in fructose-fed rats", Biomedicine and Pharmacotherapy, 81 pp 318-328 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ... KHOA Y DƯỢC of M ed ic ine NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ PHÂN ĐOẠN DỊCH CHIẾT NƯỚC CỦA LÁ CÂY KHÔI ĐỐM (Sanchezia nobilis Hook. f) Sc ho ol KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH... dịch chiết nước Khôi đốm (Sanchezia nobilis Hook. f.)” thực với mục tiêu: Chiết xuất, phân lập số hợp chất từ phân đoạn dịch chiết nước Khôi Đốm Xác định cấu trúc hợp chất phân lập LUAN VAN CHAT... bốn hợp chất 1-4 lần đầu phân lập từ họ Acathanceae hợp chất lần phân lập từ tự nhiên [15] Năm 2014, Ahmed E Abd Ellah cộng tiếp tục phân lập hợp chất từ Khôi đốm, hợp chất khác từ dịch chiết