LUẬN văn THẠC sĩ nghiên cứu chiết xuất, phân lập một số hợp chất từ lá cây gan heo (dicliptera chinensis (l ) ness)

TỔNG QUAN

Vị trí phân loại, đặc điểm thực vật, phân bố

1.1.1 Vị trí phân loại chi Dicliptera

Theo Hệ thống phân loại về ngành Ngọc Lan (Magnoliophyta của tác giả Takhtajan, chi Dicliptera có vị trí phân loại như sau [30]:

Ngành Ngọc Lan: Magnolipphyta Lớp ỏ Tháp út: Equisetopsida C Agardh Phân lớp Mộc Lan: Magnoliidae Novák ex Takht ộ Hoa Môi: Lamiales

1.1.2 Đặc điểm thực vật chi Dicliptera

- Dạng sống: dạng cây thân thảo

- Lá: lá đơn mọc cách, lá hình trứng Lá bắc hình bầu dục, có lông hoặc hình trứng ngược

- Cụm hoa: dạng xim, dạng chùy hay chùm hoặc bông ở nách lá hay ở đỉnh cành, có khi ở trên thân Đôi khi hoa đơn độc ở nách lá hoặc đỉnh cành

- Hoa: Tất cả chi đều có hoa lưỡng tính Hoa mẫu 4 hoặc mẫu 5

- Tràng: Tràng dạng ống, môi trên 3 khía, môi dưới nguyên

- Bao phấn : thường 2 ô, các ô bao phấn hình thuôn, gần tròn hoặc hình đường; bao phấn đính lưng, mở dọc; gốc bao phấn thường có phần phụ dạng móc hoặc lông Bao phấn đính trên chỉ nhị lệch nhau

- Bộ nhụy: Tất cả đều có bầu thượng Bầu hình tròn, gần tròn, hoặc bầu dục; bầu phủ lông mịn hoặc nhẵn

- Quả: ở Việt Nam chỉ có dạng quả nang, mở 2 mảnh, quả có lông, giá

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU

- Hạt ép dẹt, bề mặt nhiều điểm nốt, bề mặt hạt thường có lông [9]

Hình 1.1 Một số hình vẽ bộ phận chi Dicliptera [9]

1.1.3 Số lượng, đặc điểm các loài thuộc chi Dicliptera

- Trên thế giới Chi Dicliptera họ Acanthaceae) bao gồm hơn 150 loài vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới hi này phân bố ở hâu : Trung Quốc, Lào, ampuchia, Thái Lan, Indonesia, Malaysia, hâu Phi, hâu c và Mỹ [2, 4, 10]

- Việt Nam Chi Dicliptera gồm 4 loài [4 ; [8]:

 Loài D bupleuroides Nees in all Lưỡng thiệt : ây cỏ cứng cao 30cm; thân vuông, thường đen khi khô, có khi nâu đậm, không có lông, lóng dài 3-4cm Lá mọc đối, phiến lá hình trái xoan, mặt trên nâu đen, mặt dưới nâu Hoa hình môi mọc thành chùm ít hoa mọc ở nách lá; đài 6-8mm; vành cao 1,5mm

 Loài D.chinensis Nees in D ửu căn : ây cỏ thân có bốn cạnh, có lông mịn Lá mọc đối hình bầu dục thon, có lông mịn Hoa hình môi bẹt, môi trên nguyên Quả nang, hạt có ít lông

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU ây được phân bố ở các khu vực: Cao ằng, ắc ạn chợ Đồn , Thái Nguyên, Hà Giang, Yên ái, H a ình, Nam Định, Hà Nội, Huế, Sài G n

 Loài D leonotis Dalz x larke lưỡng thiệt : ây cỏ nằm rồi đứng, thân tr n, có lông lúc c n non Lá có phiến thon to 2-6 x 2cm, nhọn hai đầu, mỏng, dài 2-10cm Hoa mọc thành chùm ở kẽ lá, hình môi; môi trên hình xoan nhọn, môi dưới ba rang Quả nang có lông Hạt hình tr n hoặc dẹt ây được phân bố ở các khu vực: huyện miền núi hiêm Hóa, Na Hang tỉnh Tuyên Quang, huyện miền núi tỉnh Quảng Nam, huyện

H a Vang thành phố Đà Nẵng và một số tỉnh khác Vĩnh Phúc, Phú Thọ, Thái

 Loài D vestita R en Hạ mái phủ : Cây cỏ có thân mảnh, lóng dài 4-7cm Lá hình bầu dục hay hình trái xoan, to 4-7 x 3cm có lông sáp mịn Hoa hình môi, môi trên xoan rộng, hia rang to hơn môi dưới ba rang mọc ở nách lá có nhiều lông, lá đài hình kim

Quả nang nhỏ, có lông ây mọc hoang và được trồng nhiều ở địa phương các tỉnh miền núi và trung du phía bắc như: ao ằng Thạch n , Lạng Sơn Văn Quan , ắc Kạn chợ Đông , Thái Nguyên, Tuyên Quang, Quảng Ninh, Sơn La

1.1.4 Đặc điểm thực vật của cây Gan heo

- Tên khác: Lá diễn, Cửu văn, an thái

- Tên khoa học : Dicliptera chinensis (L.) Ness Gan heo là cây thân thảo sống hằng năm hay vài ba năm, cao 30-80cm

Thân và cành non có 4 cạnh, có lông tơ, các mấu phình to tựa như đầu gối Lá mọc đối màu xanh lục, phiến lá hình trứng thuôn, dài 2-7cm, rộng 2-4cm, đầu và gốc đều nhọn, có lông thưa.Các lá bắc hình trái xoan dài 8-11mm, các tiền diệp hẹp [2, 4]

Hoa màu trắng hồng, mọc thành xim ở nách lá và ở đầu cành.Ra hoa từ mùa đông đến mùa hạ (từ tháng 12 đến tháng 5)

Quả nang ngắn có lông tơ ở phía đầu Hạt dẹt

 Phân bố của cây Gan heo:

Cây của vùng lục địa Ðông Nam Á Châu, được tìm thấy ở Việt Nam, Trung Quốc và Lào [4]

Việt Nam phổ biến ở các tỉnh miền núi phía bắc Thường mọc hoang ở ven đường, ven suối, bãi trống hoặc thành đám ở dọc bờ mương, rãnh nước, nơi ẩm mát, các tỉnh thuộc vùng núi thấp và trung du gồm ao ằng, Lạng Sơn, Quảng Ninh, Nam Định, Yên ái, Tuyên Quang, ắc ạn, Thái Nguyên [2, 10, 14] Có thể thu hái toàn cây quanh năm, dùng tươi hay phơi khô

1.1.5 Đặc điểm bột dược liệu và vi phẫu cây Gan heo

- Đặc điểm vi phẫu lá cây Gan heo [15]:

Lá cây Gan heo là lá có các gân hình lông chim nêm lá chia ra làm hai phần: Phần gân lá và phần phiến lá ở hai bên

Phiến lá gồm có: Biểu bì trên cấu tạo bởi lớp tế bào sống, sắp xếp đều đặn nhau, không có diệp lục, không có lỗ khí Biểu bì dưới khác với biểu bì trên là có lỗ khí, biểu bì mang lông che chở đơn hoặc đa bào

Gân lá: Gân lá lồi lên ở cả hai mặt Ngoài cùng là hai lớp biểu bì trên và dưới cấu tạo bởi những tế bào kéo dài theo chiều dọc của gân giữa Tiếp theo là tới lớp mô dày trên và mô dày dưới , cấu tạo bởi tế bào có vách dày bằng cellulose làm nhiệm vụ nâng đỡ Mô giậu cấu tạo bởi hàng tế bào hình chữ nhật xếp đều đặn nhau Phía trong là mô xốp , mô mềm gồm các tế bào hình đa giác kích thước khác nhau, xếp lộn xộn Các libe gỗ là các tế bào xếp thành một hình cung hoặc một vòng trong bao xung quanh lấy gỗ

Bột phần trên mặt đất của cây Gan heo: Bột có màu nâu Soi dưới kính hiển vi thấy có các thành phần sau: Lông tơ che chở đơn bào, lông tơ che chở đa bào, bào thạch, lỗ khí, biểu bì mang lỗ khí, mảnh mô mềm, mảnh mạch điểm, mảnh mạch xoắn, mảnh mạch, tế bào

Hình 1.2 Vi phẫu lá cây Gan heo [15]

Hình 1.3 Một số vi phẫu bột cây Gan heo [15]

1 Lông che chở đơn bào 5 Lỗ khí

2 Mảnh mạch xoắn 6 Mảnh bần

3 Mảnh mô mềm 7 Bào thạch

Thành phần hóa học của cây Gan heo

- Dịch chiết cây Gan heo được định tính các hợp chất bằng phương pháp hóa học [15]

Bảng 1.1 Kết quả định tính các nhóm chất hữu cơ bằng phương pháp hóa học

Ghi chú: (- âm tính, + dương tính không rõ, ++ dương tính rõ, +++ dương tính rất rõ

STT Nhóm chất Phản ứng định tính Kết quả Kết luận

1 Acid amin TT Ninhydrin ++ Có

3 Anthranoid Phản ứng Borntraeger - Không có

5 Chất béo Vết mờ trên giấy lọc +++ Có

6 Coumarin Mở vòng lacton - Không có

7 Đường khử TT Fehling +++ Có

Hơi NH 4 OH Cyanidin FeCl3 5%

9 Glycosid tim Phản ứng Liebermann

10 Saponin Hiện tượng tạo bọt

12 Acid hữu cơ Bột Na2CO3 +++ Có

Kết luận sơ bộ: nhận thấy trong thành phần của cây Gan heo chứa các nhóm chất: acid amin, caroten, chất béo, đường khử, flavonoid, saponin, tannin, acid hữu cơ

- Một số hợp chất phân lập từ lá cây Gan heo mà Việt Nam đã nghiên cứu được do nhóm tác giả Vũ Đức Lợi và Nguyễn Tiến Vững [17] Lá Gan heo được chiết siêu âm trong dung môi ethanol và bằng phương pháp sắc ký cột đã phân lập được 3 hợp chất Xác định cấu trúc các hợp chất phân lập được thông qua kết quả đo nhiệt độ nóng chảy, góc quay cực riêng, phổ khối, phổ cộng hưởng hạt nhân và so sánh với các dữ liệu công bố của các hợp chất liên quan Ba hợp chất phân lập được xác định cấu trúc là:

 6-hydroxy-1,12-oleanadien-3-on(3) Hợp chất 3 lần đầu tiên phân lập được từ lá cây Gan heo

- Nhóm tác giả tại trường đại học Bắc Kinh, Trung Quốc đã nghiên cứu thêm được một loại verebroside mới có tên dicliptercerebroside đã được phân lập từ Dicliptera chinensis Trong đó, Cerebrosides là tên phổ biến cho một nhóm glycosphoridolid gọi là các monoglycosylceramid là thành phần quan trọng trong cơ thịt động vật và các màng tế bào thần kinh

Cấu trúc của dicliptercerebrosid được xác định là: 1-O-β-D- glucopyranosyl-2N - [(2'R) -2'-hydroxy- (9Z) -palmitoleoyl] -2S, 3S, 4R-C

Như vậy, nhóm tác giả đã phân lập được 3 chất từ dịch chiết Dicliptera chinensis đó là:

 Amidoalcohol ác câu trúc trên được xác định trên bằng phương pháp quang phổ

- Vào tháng 6 năm 2006, 3 tác giả trên cũng có bài báo trên Pubmed là:

Gao YT, Yang XW , Ai TM [25]

Các hợp chất được tách bằng sắc ký cột silica gel, pha chế sắc kí lớp mỏng và HPL đảo ngược, cấu trúc của chúng được xác định bằng các phương pháp quang phổ của UV, NMR và MS

Bảy hợp chất đã được phân lập từ chiết xuất ethyl axetat Cấu trúc của chúng được xác định là:

 secoisolariciresinol dimethyl eter dicalat (II)

 5-methoxy-4, 4'-di-O-methyl secolariciresinol (III)

Trong đó, công thức hóa học của các chất được xác định như sau:

Bảng 1.2 Bảy hợp chất đã được phân lập từ chiết xuất etyl axetat

STT Tên chất Công thức hóa học

Một số tác dụng dược lý đã được nghiên cứu

1.3 Một số tác dụng dƣợc lý đã đƣợc nghiên cứu

1.3.1 Tác dụng chống xơ gan

Nghiên cứu chỉ ra rằng nhóm chất polysaccarid có trong cây Gan heo (Dicliptera chinensis ) tác dụng vào TGF-β / Smad và ức chế hoạt động của tế bào hình sao ở chuột đã bị gây xơ gan bởi dimethylnitrosamine Nghiên cứu này nhằm theo dõi tác động của Dicliptera chinensis polysaccharide (DCP) trên bệnh xơ gan HF và sự hoạt động các tế bào hình sao gan (HSC)

- Mô hình xơ gan được gây ra bởi tiêm dimethyl nitrosamines (DMN) trong chuột Chuột trong nhóm điều trị được tiêm tĩnh mạch với nồng độ DCP khác nhau (0, 100, 300 mg / kg) Đồng thời dùng các thuốc nhuộm và phép thử để phát hiện ra các biểu hiện các tế bào trên gan Kết quả cho thấy DCP làm giảm sự xơ gan do DMN gây ra ở chuột và các biểu hiện TGF-β1, pSmad2 / 3 và α-SMA giảm đáng kể trong mô gan theo liều [36]

Như vậy, DCP nhắm mục tiêu tới TGF-β / Smad và ức chế sự kích hoạt tế bào Stellen ở chuột bị gây xơ gan do dimethylnitrosamine

1.3.2 Tác dụng bảo vệ gan

- Việc kiểm tra bệnh học cho thấy liều cao và trung bình của D P đã cho thấy hiệu quả đáng kể trong việc cải thiện sự xơ gan, làm giảm viêm, hoại tử DCP có hiệu quả cải thiện chức năng gan, như đã thấy trong việc làm giảm nồng độ men gan ALT, aspartate aminotransferase (AST), tổng bilirubin

T IL trong khi tăng albumin L và giảm nồng độ huyết thanh của hoại tử khối u Yếu tố alpha (TNF-α , interleukin-6 (IL-6) ở chuột HF Ngoài ra, hàm lượng acid hyaluronic (HA), collagen type IV (IV-C), type III precollagen (PCIII) và laminin (LN) trong mô gan ở chuột nhắt bị xơ gan giảm đáng kể, trong khi biểu hiện chuyển đổi yếu tố tăng trưởng- Β l TGF-β l), collagen type I (Col-I), protease kim loại-1 (TIMP-1) [34]

Như vậy, DCP có hoạt tính đối kháng hiệu quả đối với độc tính gan ở DMN ở chuột nhắt HF, cơ chế chống fibrotic có liên quan đến việc điều chỉnh các enzyme huyết thanh chức năng, cải thiện chức năng trao đổi chất và ức chế phản ứng viêm trong mô gan

- Các DCP có tác dụng làm giảm tổn thương gan ở chuột khi cho chuột sử dụng thuốc chống lao isoniazid và rifampicin

Chuột bị tổn thương gan trước và sau khi điều trị với D P đã được lấy mẫu máu và gan để xét nghiệm các chỉ số ALT, AST, AKP, NO, TNF-α, IL-6, xét nghiệm miễn dịch ELISA Kết quả cho thấy bệnh lý trên gan ở chuột đã được cải thiện, số lượng các tế bào viêm đã giảm, các chỉ số xét nghiệm đều giảm nên có thể kết luận rằng DCP có hiệu quả điều trị trên gan bị tổn thương gây ra bởi thuốc kháng lao và có cơ chế liên quan tới tác dụng kháng viêm của nó

1.3.3 Tác dụng chống oxy hóa

Phương pháp: Dịch chiết metanol thô của các bộ phận trên mặt đất của Dicliptera roxburghiana DRM được lắc phân đoạn với các dung môi, tạo ra các phân đoạn n-hexane (DRHF), chloroform (DRCF), ethyl acetate (DREF), n-butanol (DRBF) và phần hòa tan còn lại là phần nước dư DR F

Nhóm tác giả Ahmad đánh giá các hoạt động chống oxy hoá của các phân đoạn thông qua các phương pháp phân tích khác nhau

Kết quả: Có sự xuất hiện của các chất oxi hóa như: flavonoid, phenol, tannin, alkaloids, saponin, terpenoid và coumarines Trong đó hiện diện nhiều nhất trong dịch chiết MeOH, chloroform, EtOAc, n-butanol [19]

1.3.4 Tác dụng trên chức năng sinh sản ở chuột cái

 Ảnh hưởng tới thông số sinh lý, sinh hóa trên chuột cái chưa trưởng thành

Phương pháp: chiết xuất dung dịch nước của hỗn hợp lá (ADHJ) bốn cây thuốc (Aloe buettneri, Dicliptera verticillata, Macranthus hibiscus và

Justicia insularis) Nghiên cứu này nhằm mục đích đánh giá phản ứng buồng trứng với hỗn hợp lá ở chuột cái chưa trưởng thành

Các liều lượng khác nhau của chiết xuất nước của J insularis được cho chuột ăn hàng ngày, trong 20 ngày, đối với chuột cái chưa trưởng thành được phân thành 4 nhóm thực nghiệm gồm 20 con mỗi nhóm Vào cuối giai đoạn thử nghiệm, một số thông số sinh hóa và sinh lý của chức năng buồng trứng đã được kiểm tra [31]

Bảng 1.3 Ảnh hưởng của dung dịch hỗn hợp lá tới sự hình thành nang trứng và sinh sản ở chuột cái

Trọng lượng buồng trứng Tăng gấp 3 hoặc gấp đôi so với đối chứng

Protein Tăng đáng kể 58,09% và 45,64%

Cholesteron Giảm 70% ở chuột được tiêm Điểm xuất huyết Giảm

Trọng lượng tử cung Giảm Thông số sinh và thai Tăng số lượng thể vàng

Với kết quả như trên, hỗn hợp lá được dự đoán có khả năng điều chỉnh chu kì kinh nguyệt, đau bụng kinh và vô sinh ở phụ nữ Rất có thể trong thành phần hỗn hợp dịch chiết chứa estrogen

 Hỗn hợp dịch chiết của Dicliptera verticillata làm thay đổi nồng độ estradiol (hormon nữ) và ảnh hưởng tới quá trình chuyển hóa gan trên chuột cái chưa trưởng thành:

Năm 2002, nhóm tác giả gồm Telefo PB, Moundipa PF, Tchouanguep

FM nghiên cứu tác dụng của hỗn hợp dịch chiết từ lá của các loài Aloe buettneri, Justicia insularis, Hibiscus macranthus và Dicliptera verticillata

Nhận thấy khi cho chuột cái chưa trưởng thành uống hỗn hợp dịch chiết, ở liều 13, 49 và 94 mg/kg mỗi ngày trong 15 ngày gây ra một sự gia tăng đáng kể nồng độ estradiol trong buồng trứng, trong huyết thanh và trọng lượng tử cung cũng tăng Đồng thời cũng phát hiện sự giảm hoạt động của N- demethylase aminopyrine ở chuột điều trị [32]

Tác dụng và công dụng theo y học cổ truyền

Tính vị: Gan heo có vị ngọt, nhạt, tính mát [2, 12]

Quy kinh: an, phế, thận [10 ông năng: Thanh nhiệt, tiêu viêm, lợi tiểu, làm mát máu, sinh tân dịch, mát gan, lương huyết giải độc [2]

Toàn cây được dùng làm thuốc, dùng ngoài, sắc uống, có thể làm phẩm nhuộm màu Lá non, ngọn cây làm thực phẩm.[4, 6]

Theo dân gian, dùng cả cây Gan heo với hàm lượng dùng 30-60g cây khô hay 60-120g cây tươi sắc uống, có tác dụng như sau:

2 Viêm phổi nhẹ, viêm ruột thừa cấp

3 Viêm gan cấp, viêm kết mạc

6 Giảm niệu, đái ra dưỡng trấp Dùng lá cây với các trường hợp bệnh:

1 Dùng ngoài trị lở sưng, rôm sẩy, mụn nhọt, bỏng rạ, dùng lá tươi giã nát xoa lên vùng da bị lở

2 Dùng lá để nấu canh, nấu với thịt lợn, ăn rất mát và bổ gan

ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Nguyên vật liệu

Mẫu lá cây Gan heo (Dicliptera chinensis L Nees được thu hái vào tháng 6 năm 2016 tại Thị trấn Cổ Lễ, huyện Trực Ninh, tỉnh Nam Định mang số hiệu (Vũ Đức Lợi 09 được gửi đến là mẫu tiêu bản dạng cây tươi có ảnh chụp chi tiết dạng sống, hoa, lá ) Mẫu tiêu bản có đủ tiêu chuẩn để giám định tên khoa học bao gồm cả cơ quan sinh dưỡng lẫn cơ quan sinh sản

Mẫu thực vật đã được Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật giám định tên khoa học là: Dicliptera chinensis (L.) Nees, họ Ô rô-Acanthaceae (chi tiết theo phiếu giám định tên khoa học mẫu thực vật ở phụ lục 1)

Mẫu khô: Lá Gan heo được rửa sạch, làm khô hoặc sấy khô với nhiệt độ khoảng 40°C và thái nhỏ, bảo quản để nghiên cứu thành phần hóa học và chiết xuất, phân lập

Hình 2.1 Mẫu cây Gan heo

- Các dung môi dùng trong chiết xuất, phân lập như: n-hexan, etyl acetat, dicromethal, EtOH, Cloroform, tO c, D M đều đạt tiêu chuẩn công nghiệp và được chưng cất lại trước khi dùng

- Dung môi tinh khiết bao gồm: nước cất 2 lần, dimetylsulfosid (DMSO)

- Các dung môi phân tích gồm: MeOH, n-hexan, EtOAc, H₂O dùng để phân tích sắc ký đều đạt tiêu chuẩn phân tích

- Sắc ký lớp mỏng: sử dụng bản mỏng nhôm tráng sẵn silica gel 60

F 254 Merck, độ dày 0,2mm Sau khi triển khai sắc ký, bản mỏng được kiểm tra bằng đèn tử ngoại ở bước sóng 254nm và 365nm sau đó hiện màu bằng thuốc thử là dung dịch H2SO4 10% trong ethanol

- Sắc ký cột: sắc ký cột sử dụng silica gel cỡ hạt 0.063-0.200mm (Merck) và cỡ hạt 0,040- 0,063 mm (Merck) với các loại cột sắc ký có kích cỡ khác nhau.

Trang thiết bị, dụng cụ, máy móc

- ác dụng cụ thí nghiệm thủy tinh: ống nghiệm, bình nón, bình gạn, cốc có mỏ, pipet

- Các thiết bị khác: Tủ sấy, tủ hút, cân phân tích, kính hiển vi

- Phổ khối ESI-MS đo trên máy Varian gilent 1100 L -MSD tại Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam

- Phổ cộng hưởng từ hạt nhân: NMR được ghi trên máy Bruker Avance 500MHz tại Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam

- Nhiệt độ nóng chảy: đo trên máy SMP10 io ote, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội

- Góc quay cực riêng: đo trên máy PLR-4, MRC scientific instruments, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội

Phương pháp nghiên cứu

2.2.1 Phương pháp chiết xu t, phân lập hợp ch t

Mẫu nghiên cứu sau khi được rửa sạch và phơi khô, thái nhỏ và ngâm chiết 3 lần trong dung môi ethanol, sử dụng chiết bằng thiết bị siêu âm (50 o C,

3 giờ) Dịch chiết thu được lọc qua giấy lọc, gộp dịch lọc và cất loại dung môi dưới áp suất giảm thu được cao toàn phần

Phân tán cao chiết này trong nước rồi chiết phân bố với các dung môi theo thứ tự tăng dần độ phân cực là n-hexan và ethyl acetat ác phân đoạn n- hexan, ethyl acetat được cất loại dung môi dưới áp suất giảm thu được cao từng phân đoạn tương ứng

Hình 2.2: Sơ đồ chiết tách phân đoạn

Phân tán trong H2O Lắc phân đoạn với n-hexan Thu hồi dung môi

Phân đoạn n- hexan Phân đoạn nước

Phân đoạn ethyl acetat Phân đoạn H2O

Lựa chọn phân đoạn có tiềm năng bằng sắc kí lớp mỏng, tiến hành xử lý và phân lập Quá trình nghiên cứu phân lập hợp chất từ các phân đoạn đã chọn chủ yếu sử dụng phương pháp sắc ký cột ác phân đoạn trong quá trình phân lập được theo dõi bằng sắc ký lớp mỏng và sắc ký lớp mỏng điều chế

Sắc ký cột : được tiến hành với chất hấp phụ là silica gel pha thường và pha đảo, lựa chọn hệ dung môi có độ phân cực tăng dần Silica gel pha thường cỡ hạt là 0,063-0,200 mm (Merck) và cỡ hạt 0,040-0,063 mm (Merck) với các loại cột sắc ký có kích cỡ khác nhau

Sắc ký lớp mỏng TL : được thực hiện trên bản mỏng nhôm tráng sẵn silica gel 60 F254 Merck , độ dày 0,2 mm và RP-18 F254s, độ dày 0,25 mm (Merck) Sau khi triển khai sắc ký, bản mỏng được kiểm tra bằng đèn tử ngoại ở bước sóng 254 nm và 365 nm, sau đó được phun thuốc thử là dung dịch

H2SO4 10% trong ethanol và đốt nóng trên bếp điện từ

Sắc ký lớp mỏng điều chế pTL : được thực hiện trên bản mỏng nhôm tráng sẵn silica gel 60G F254, độ dày 1,0 mm (Merck) Sau khi triển khai sắc ký, bản mỏng được kiểm tra bằng đèn tử ngoại ở bước sóng 254 nm và 365 nm hoặc cắt rìa bản mỏng để phun thuốc thử là dung dịch H2SO4 10% trong ethanol, đốt nóng trên bếp điện từ, ghép lại bản mỏng như cũ để xác định vùng chất bằng dung môi thích hợp

2.2.2 Phương pháp xác định c u trúc hợp ch t

Xác định cấu trúc của các chất phân lập được dựa trên phân tích kết quả phổ khối (MS), phổ cộng hưởng từ hạt nhân ( 1 H-NMR, 13 C-NMR, DEPT), ngoài ra còn kết hợp với các thông số vật lí như Phổ tử ngoại- khả kiến (UV-VIS), Góc quay cực được đo bằng máy DIP- 360, Điểm nóng chảy

Mp và so sánh các dữ liệu thực nghiệm và các dữ liệu được công bố để đưa ra kết quả chính xác nhất a, Phổ khối lượng (MS)

Phổ khối lượng cung cấp những thông tin về khối lượng của các ion sinh ra từ phân tử Phổ khối lượng không xác định trực tiếp khối lượng của

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU ion mà xác định tỷ lệ giữa khối lượng m và điện tích (z) của ion (m/z) Khi đó để xác định khối lượng phân tử (M) cần phải biết số điện tích của ion

Trong cùng một điều kiện ion hóa, sự phân mảnh tạo thành các ion con từ ion mẹ sẽ tuân theo những định luật nhất định Các chất có cấu trúc tương tự nhau sẽ tạo ra những phân mảnh giống nhau Từ khối lượng các phân mảnh của phân tử, cùng các phương pháp phổ khác người ta có thể xác định được cấu trúc của một chất chưa biết So sánh phổ khối của một chất chưa biết với phổ khối của một chất đã biết có thể giúp định danh chất chưa biết đó dễ dàng và chính xác [16] b, Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR)

Khi đặt một chất có hạt nhân có số spin (I) lẻ 1H, 13 được đặt trong một từ trường ngoài (B0), các spin hạt nhân sẽ được sắp xếp lại theo hai hướng: thuận và ngược chiều với từ trường và đạt tới trạng thái cân bằng giữa hai trạng thái này với một tỉ lệ xác định của 2 trạng thái Nếu dùng một bức xạ điện từ có tần số thích hợp chiếu xạ lên chất đó, các spin sẽ hấp thu năng lượng (cộng hưởng) và chuyển lên mức năng lượng cao (sắp xếp ngược chiều với từ trường Khi ngưng chiếu xạ, các spin hạt nhân sẽ giải phóng năng lượng để trở về trạng thái cân bằng Xác định năng lượng mà các hạt nhân cùng một loại nguyên tố trong phân tử hấp thu (hay giải phóng) sẽ thu được phổ cộng hưởng từ hạt nhân của các chất đó ó 2 cách xác định năng lượng cộng hưởng này Cách thứ nhất là xác định tần số cộng hưởng theo từng tần số trong suốt dải tần số cộng hưởng, cách này được gọi là cộng hưởng từ hạt nhân quét Cách thứ hai là ghi nhận đồng thời mọi tần số cộng hưởng rồi sử dụng biến đổi Fourier để tách riêng tần số cộng hưởng của từng hạt nhân Kỹ thuật này được gọi là cộng hưởng từ hạt nhân biến đổi Fourier (Fourier transform - NMR, FT - NMR) và là kỹ thuật sử dụng chủ yếu hiện nay [16]

Nguyên thuỷ, phổ cộng hưởng từ hạt nhân là tần số cộng hưởng của các hạt nhân trong phân tử Tuy nhiên, tần số hấp thu của hạt nhân thay đổi

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU theo từ trường ngoài B0 Để thuận tiện và loại bỏ ảnh hưởng của B0 trong số liệu phổ, người ta chia sự chênh lệch tần số cộng hưởng của hạt nhân so với một chất chuẩn thường dùng nhất là trimethyl silan, TMS) cho tần số cộng hưởng của chất chuẩn đó Vì kết quả thu được (Hz/MHz) là rất nhỏ (phần triệu nên người ta dùng ppm để thể hiện giá trị cộng hưởng của các hạt nhân Giá trị này thường được gọi là chuyển dịch hoá học Giá trị chuyển dịch hoá học của các proton thường nằm trong khoảng 0-14 ppm, còn của carbon-13 là từ 0-240 ppm [16]

Như đã trình bày ở trên, tần số cộng hưởng của hạt nhân phụ thuộc vào từ trường của máy Từ trường càng cao, dải tần số dùng để kích thích các hạt nhân càng rộng, phép đo càng nhạy và chính xác, độ phân giải ngày càng cao Do vậy, ta thường gọi phổ kế cộng hưởng từ hạt nhân 200 MHz, 300 MHz hay 500 MHz là theo tần số dùng để kích thích các proton [16]

Tùy vào mục đích và mức độ phức tạp của cấu trúc, ta có thể đo 1 hay nhiều loại phổ khác nhau Xác định phổ của cùng một loại hạt nhân ( 1 H hay

13 như trong các phổ một chiều ( 1 H-NMR, 13 C-NMR, DEPT) hay các mối tương quan giữa các loại hạt nhân trong các phổ hai chiều (COSY) [16]

 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân một chiều Phổ proton ( 1 H-NMR hay proton NMR) cho biết môi trường hóa học của proton trong phân tử ác proton có môi trường hóa học khác nhau sẽ dịch chuyển hóa học khác nhau Phổ proton của 1 proton hay 1 nhóm proton có cùng môi trường hóa học thể hiện trên phổ có thể là 1 đỉnh Đỉnh này có thể là đỉnh đơn, đôi, ba tới 7 đỉnh thành phần Diện tích mỗi đỉnh tỷ lệ với số lượng proton của đỉnh Dựa vào diện tích của đỉnh có thể biết số proton của đỉnh đó [16]

KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN

Kết quả chiết xuất, phân lập hợp chất

Mẫu lá cây Gan heo được chiết xuất như sau:

Mẫu lá cây Gan heo được phơi khô, nghiền thành bột (6,5 kg), sau đó chiết trong ethanol 3 lần, mỗi lần dùng 8 lít dung môi Sử dụng chiết bằng thiết bị chiết siêu âm (50°C, 3 giờ) Dịch chiết được lọc qua giấy lọc, gộp dịch chiết 3 lần lại và cất loại dung môi ở áp suất giảm thu được 630,0 g cặn chiết ethanol

Lấy 120 g cặn chiết này phân tán vào 1,2 lít nước cất và tiến hành chiết phân bố lần lượt với n-hexan và ethyl acetat; mỗi dung môi được chiết lặp lại 3 lần, mỗi lần khoảng 1,5 lít dung môi, thu được các phân đoạn dịch chiết tương ứng Các dịch chiết n-hexan, ethyl acetat được cất thu hồi dung môi thu được các cắn tương ứng n-hexan (H, 31,0 g) và ethyl acetat (E, 56,0 g) và lớp nước (N, 33,0 g)

Hình 3.1 Sơ đồ chiết xuất phân đoạn lá cây Gan heo

Chiết với EtOH (3 lần × 8 lít)

Thu hồi dung môi, h a tan thành nhũ dich trong H₂O

Lắc phân đoạn với n-hexan (3 lần × 1,5 lít)

Thu hồi dung môi Phân đoạn n-hexan

Lắc phân đoạn với EtOAc (3 lần × 1,5 lít)

Thu hồi dung môi Phân đoạn EtOAc

Phân đoạn EtOH Phân đoạn H₂O

Phân đoạn ethyl acetat từ lá cây Gan heo được phân lập thô bằng cột silica gel như sau:

Sử dụng phương pháp sắc kí cột

+ Cặn chiết ethyl acetat (50,0 g được triển khai sắc ký trên cột silica gel pha thường, trộn cặn với lượng tối thiểu silicagel, sấy khô và nghiền mịn

+ Cột được rửa sạch, đáy cột được lót 1 lớp bông mỏng Đổ vào cột 40ml chloroform mở khóa cho dung môi chảy từ từ để đẩy hết bọt khí trong lớp bông ra ngoài Khi lớp dung môi còn khoảng 3 cm thì khóa cột

+ Cột được nhồi bằng phương pháp nhồi cột ướt: trộn silica gel với một lượng vừa đủ dung môi chloroform thành hỗn dịch rồi đổ lên cột, vừa đổ vừa gõ nhẹ quanh cột để hạt nén, thoát hết bọt khí trong cột và phân bố đều, bằng mặt, rửa thành cột bằng chloroform

+ Ổn định cột: Sau khi luyện cột, ta kiểm tra cột xem có thẳng, và không còn bọt khí thì ta đậy nắp cột và ổn định cột trong vòng 24h

- Tiến hành sắc kí cột hấp thụ + Mở khóa cột cho dung môi chloroform chảy đến sát bề mặt silica gel, khóa cột lại

+ Đưa chất lên cột: Đổ phần cặn đã được trộn với silica gel lên trên, vừa dội vừa gõ nhẹ để phần cặn sát bề mặt silica gel, lót 1 lớp bông mỏng lên bề mặt silica gel

+ Sau đó rửa giải bằng dung môi và bắt đầu chạy cột Hệ dung môi rửa giải là chloroform/methanol, tỉ lệ thay đổi từ 30:1 đến 1:1

+ Điều chỉnh tốc độ rửa giải là 1ml/1 phút

+ Mỗi ống nghiệm hứng khoảng 10ml dung dịch Kiểm tra các dịch rửa giải bằng sắc kí lớp mỏng và thu các phân đoạn giống nhau Thu được 4 phân đoạn E1 (6,0 g), E2 (14,2 g), E3 (6,3 g), E4 (8,4 g)

+ Phân đoạn E4 tiếp tục phân tách bằng sắc ký cột silica gel pha thường, rửa giải bằng hỗn hợp chloroform/ aceton/ nước (3:4:0,1), thu được 5 phân đoạn nhỏ là E4.1 (1,6 g), E4.2 (1,4 g) và E4.3 (1,2 g), E4.4 (0,8 g) và E4.5 (0,6 g)

+ Tinh chế phân đoạn E4.1 bằng cột sắc ký pha đảo RP-18 với hệ dung môi rửa giải aceton/nước 3:2, v/v thu được hợp chất 1 (23 mg)

Phân tách phân đoạn E4.3 bằng sắc ký cột silica gel với hệ dung môi hexan/ aceton 7:3, v/v thu được hợp chất 2 (11 mg).

Xác định cấu trúc các hợp chất phân lập được từ cây Gan heo

Hình 3.2 Sơ đồ phân lập các hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat

3.2 Xác định cấu trúc một số hợp chất từ cây Gan heo

Tính chất: Chất bột màu trắng, vô định hình Độ quay cực: [α 25 D = -64,2(c =0,1, MeOH)

Phổ ESI-MS: m/z 277,0 [M+H] + Khối lượng phân tử: 276 Công thức phân tử: C16H22O4

Phổ NMR trình bày ở Bảng 3.1

Silica gel pha thuận Cloroform/ methanol (30:1 đến 1:1)

Silica gel pha thuận Cloroform/aceton/H₂O (3:4:0.1)

Pha đảo RP18 Aceton/H₂O ( tỉ lệ 3:2) Hợp chất 1 (23 mg)

Silica gel pha thuận Hexan/ aceton ( tỉ lệ 7:3) Hợp chất 2 (11 mg)

Bảng 3.1 Dữ liệu phổ NMR của hợp ch t C 16 H 22 O 4 và ch t so sánh L

C DEPT C (1) H (1) ppm J: Hz H(L)ppm J:Hz

Hợp chất 1 thu được dưới dạng bột màu trắng Phổ ESI-MS của hợp chất 1 xuất hiện pic ion phân tử tại m/z 277,0 [M+H] + , tương ứng với M= 276 và có thể có công thức phân tử C 16 H 20 O 4 Phổ 1 H-NMR của hợp chất 1 thấy có tín hiệu của 2 proton olefin ; 1 nhóm methoxy và 3 nhóm methyl Phổ 13 C- NMR và DEPT của hợp chất 1 xuất hiện 16 carbon trong đó có: 1 carbonyl, 4 carbon không liên kết với hydro, 4 carbon methin, 3 carbon methylen và 4 carbon methyl Trên phổ HMBC của hợp chất 1 xuất hiện tương tác HM giữa H-10 δ H 1,41)/H-11 δ H 1,23) với C-3a δ C 171,0)/C-4 δ C 38,6)/C-4a δ C 47,1); giữa H-3 δH 5,912) với C-2 δC168,9)/C-3a δC 171,0)/C-9a δC

106,8 đã xác định vị trí của 2 nhóm methyl tại C-4, liên kết đôi tại C-3/C-3a

Tương tác HM giữa nhóm methoxy δH 3,20) và C-9a δC 106,8 đã xác định vị trí nhóm methoxy gắn trực tiếp tại C-9a Dựa vào dữ liệu phổ của hợp chất 1 và so sánh với số liệu đã công bố của hợp chất O-methyl-6- oxofurodysinin lacton [22] thấy trùng khớp các vị trí tương ứng

Vì vậy, xác định hợp chất 1 là O-methyl-6-oxofurodysinin lacton

Tính chất:Hợp chất 2 có dạng tinh thể không màu, tan trong CHCl3

Phổ 1 H-NMR (500MHz, CDCl3 δ ppm có kết quả như sau: 7,59 (1H, d, J = 15,8 Hz, H-3′ , 7,09 1H, dd, J = 8,1, 1,8 Hz, H-9′ , 7,05 1H, d, J = 1,8

Hz, H-5′ , 6,93 1H, d, J = 8,1 Hz, H-8′ , 6,30 1H, d, J = 16,1 Hz, H-2′ , 5,85 (1H, br s, OH-7′ , 4,72 1H, d, J = 8,8 Hz, H-3), 5,10 (1H, br t, J = 6,6 Hz, H-

24), 3,94 (3H, s, OCH3-6′ , 1,68 3H, s, H3-26), 1,62 (3H, s, CH3-27), 0,98 (3H, s, CH3-29), 0,97 (3H, s, CH3-18), 0,91 (3H, s, CH3-30), 0,90 (3H, s,

CH 3 -28), 0,89 (3H, d, J = 6,2 Hz, CH 3 -21), 0,60 (1H, d, J = 4,0 Hz, CH 2 -19), 0,38 (1H, d, J = 4,4 Hz, CH2-19)

Phổ 1 H-NMR của hợp chất 2 cho thấy đây là hợp chất triterpenoid có dạng khung cycloartane Các tín hiệu của cyclopropane methylene tại δH 0,38 (1H, d, J =4,4 Hz, CH2-19) và 0,60 (1H, d, J = 4,0 Hz, CH2-19); bốn nhóm methyl bậc ba tại δH 0,98 (3H, s, CH3-29), 0,97 (3H, s, CH3-18), 0,91 (3H, s,

CH3-30), 0,90 (3H, s, CH3-28); một nhóm methyl bậc hai tại δH 0,89 (3H, d,

J = 6,2 Hz, CH3-21); một nhóm methylene tại δH 5,10 (1H, br t, J = 6,6 Hz, H-24) Một nhóm feruloyl được xác định dựa trên tín hiệu proton tại [δH 7,59 (1H, d, J ,8 Hz, H-3′ , 7,08 1H, dd, J = 8,1, 1,8 Hz, H-9′ , 7,04 1H, d, J 1,8 Hz, H-5′ , 6,92 1H, d, J = 8,1 Hz, H-8′ , 6,30 1H, d, J = 16,1 Hz, H-2′ , 5,85 (1H, br s, OH-7′ ; và 3,94 3H, s, O H -6′ liên kết với C-3 được xác

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU định dựa vào độ chuyển dịch hóa học ở trường thấp của H-3 δH 4,72 được so sánh với cycloartenol δ H-3 4,72) trong tài liệu [29] Nhóm feruloyl được xác định định hướng β dựa trên hằng số ghép cặp proton-proton giữa H-2ax và H- 3ax (J = 8,8 Hz) Dựa vào dữ liệu phổ của hợp chất 3 và so sánh với dữ liệu phổ đã công bố của hợp chất cycloartanyl ferulat [37 , xác định hợp chất 2 là Cycloartenyl ferulat

Bàn luận

Đề tài đã chiết xuất cao toàn phần từ phần trên mặt đất lá cây Gan heo bằng phương pháp ngâm tại nhiệt độ 50 o C với dung môi cồn 96° Phương pháp có ưu điểm đơn giản, dễ thực hiện, thiết bị đơn giản, rẻ tiền thu được khối lượng cắn toàn phần đạt 9,69% so với lượng dược liệu ban đầu Cắn toàn phần sau đó được chiết lỏng – lỏng với các dung môi có độ phân cực tăng dần là nhexan, ethyl acetat , thu được lần lượt các cắn phân đoạn với khối lượng đạt 0,48% ; 0,86% ; so với nguyên liệu khô ban đầu Đề tài đã phân lập 02 hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat của mẫu nghiên cứu Dựa theo đặc điểm lý hóa (cảm quan, nhiệt độ nóng chảy), phổ khối (APCI-MS, ESI-MS), phổ cộng hưởng từ hạt nhân NMR ( 1 H-NMR, 13 C-NMR, D PT và qua đối chiếu với các tài liệu đã công bố, 2 hợp chất này

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU được xác định lần lượt là: O-methyl-6-oxofurodysinin lacton (1) và

Cycloartenyl ferulat (2) Cả 2 hợp chất này đều chưa từng được công bố trong bất kỳ công trình khoa học nào trước đây về lá Gan heo Vì vậy, đây là đóng góp mới của đề tài, làm phong phú hơn tri thức về thành phần hóa học của cây Gan heo

Hợp chất o-methyl-6-oxofurodysinin lacton

Hợp chất o-methyl-6-oxofurodysinin lacton được tìm thấy ở hai loài Hải miên Dysidea Fragilis và Haliclona Oculata [5] và trong da của loài Cadlina Luteomarginata [23]

Hợp chất o-methyl-6-oxofurodysinin lacton được chứng minh là có tác dụng : chống hoạt tính gây độc tế bào ung thư ác hợp chất phân lập từ loài hải miên Dysidea fragilis được đánh giá sàng lọc sơ bộ ở nồng độ 100 g/mL có hoạt tính gây độc tế bào trên 8 dòng tế bào ung thư KB, LU-1, HL-60, LnCaP, SK-MeI2, HepG2, MCF-7, PC-3

Kết quả cho thấy, hợp chất có khả năng ức chế >50% sự phát triển tế bào ung thư [5]

Hợp chất cycloartenyl ferulat được tìm thấy trong dầu cám Là một loại -Oryzanol, một hợp chất được tạo thành từ : este axit ferulic và rượu triterpene với phytosterols Chúng có nhiều lợi ích sức khoẻ đã khảo sát từ gạo và các sản phẩm gạo Nhóm chất đã được chứng minh khoa học có chất chống oxy hoá, chống viêm, chống khối u, và làm giảm kali máu, đã được được chấp thuận để điều trị mất cân bằng thần kinh và rối loạn mãn kinh [37]

Cụ thể hơn, hợp chất cycloartenyl ferulate, một thành phần của gamma- oryzanol có nguồn gốc từ dầu cám gạo làm suy giảm sự phân huỷ của tế bào Mast Trong nghiên cứu này, các nhà khoa học kiểm tra ảnh hưởng của cycloartenyl ferulate (cycloartenolferulic axit este; CAF) về phản ứng dị ứng

Khi CAF và gamma-oryzanol được tiêm dưới da với DNP (phức DNA và

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU protein) chống lại IgE vào da lưng của chuột, phản ứng quá mẫn da trên da do thụ thể kháng nguyên DNP-HSA giảm đi F và gamma-oryzanol cũng ức chế sự giải phóng hạt của các tế bào Mast IgE kết hợp với CAF không thể phát hiện được bằng kháng thể chống lại IgE trong phân tích ELISA Mặc dù ủ IgE với CAF không làm giảm lượng Ig , nhưng có thể kết tủa IgE bằng cách ly tâm Kết quả này chứng minh rằng CAF đã bắt giữ được Ig , ngăn cản nó gắn kết với FcepsilonRI, và giảm sự giải phóng hạt của tế bào Mast Chính vì thế, chúng có tác dụng trong điều trị viêm dị ứng [27]

Một nghiên cứu khác chứng minh tác dụng đa dạng của hợp chất cycloartenyl ferulate Chiết xuất methanol của cám gạo và gamma-oryzanol đã ngăn chặn tình trạng gây viêm do 12-o-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA) ở chuột Các thành phần hoạt tính của cám gạo, sitosterol ferulate , 24- methylcholesterol ferulate , cycloartenyl ferulate và 24- metylenecycloartanol ferulate ức chế rõ ràng viêm TPA gây ra ở chuột Liều ức chế 50% của các hợp chất này đối với viêm do TPA gây ra là 0,2-0,3 mg / con Hơn nữa, cycloartenyl ferulate đã ức chế đáng kể tác dụng thúc đẩy khối u của TPA trong chuột nhắt Như vậy, chất được khẳng định có hoạt tính chống viêm và chống phát triển khối u ở chuột [33]

Nhận xét: 2 các hợp chất phân lập được đều được chứng minh là có tác dụng sinh học, đồng thời giúp ta định hướng được việc nghiên cứu thêm thành phần hóa học cũng như tác dụng sinh học của lá cây Gan heo

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ

Kết luận

Qua quá trình hoàn thành thực nghiệm, luận văn đã thu đươc kết quả sau đây:

- Đã phân lập được 02 chất bằng phương pháp chiết bằng dung môi ethanol và sắc ký từ phân đoạn ethylacetat của dịch chiết lá Gan heo

- Đã xác định được cấu trúc hóa học là o-methyl-6- oxofurodysinin lacton (1) và cycloartenyl ferulat (2) dựa theo dữ liệu phổ thực nghiệm và so sánh với tài liều đã công bố Cả 2 hợp chất này đều lần đầu tiên phân lập từ lá cây Gan heo.

Kiến nghị

o Tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa học cây Gan heo cả thành phần lá và phần trên mặt đất của cây o Dựa trên kết quả nghiên cứu thành phần hóa học , tiến hành nghiên cứu tác dụng sinh học của cây Gan heo trên người

1 Nguyễn á 2014 , điển ách h a thực vật h c iệt Nam, NX Giáo dục Việt Nam, tr 393

2 Đỗ Huy ích, Đặng Quang hung, ùi Xuân hương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Thu, Nguyễn Tập, Trần Toàn (2011), Cây thuốc v động vật làm thuốc ở Việt Nam, tập III, Nhà xuất bản Khoa học và kỹ thuật, Hà Nội, tr 479-480

3 Võ Văn hi, Trần Hợp 1999 , Câ c c ch ở iệt Nam,tập I, NX

4 Võ Văn hi 2003 , điển thực vật th ng dụng, tập I, NX Khoa học và kỹ thuật, tr 957

5 Nguyễn Thị Cúc (2017) Luận văn Nghiên cứu thành phần hóa h c và hoạt tính diệt tế ung thư của hai loài hải miên Dysidea fragilis và alicl na culata (tt)”, luận án Tiến sĩ hóa học, học viện Khoa học và

6 Lưu Đàm ư (2005), “Nghiên cứu chiết tách nhuộm màu thực phẩm t kinh nghiệm s dụng thực vật của đồng bào dân tộc thiểu số”, Trung tâm hỗ trợ nghiên cứu hâu , Đại học Quốc gia Hà Nội

7 Nguyễn Thượng Dong (2006), Nghiên cứu thuốc t thả dược, NXB Khoa học và Kỹ thuật

8 Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu (1990), Phương pháp nghiên cứu hóa h c cây thuốc, NXB y học chi nhánh thành phố Hồ Chí Minh, Khoa Dược

9 Đỗ Văn Hải, Dương Đức Huyến (2011 , Đặc điểm hình thái các chi thuộc họ Ô Rô ( Acanthaceae Juss) ở Việt Nam Hội nghị khoa h c

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU toàn quốc về sinh thái và tài nguyên sinh vật lần thứ 4,Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật, tr 104-108

10 Phạm Hoàng Hộ (1999), Cây c Việt Nam, tập III, Nhà xuất bản trẻ, tr.73-74

11 Đỗ Tất Lợi (2001), Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, tr.518-520

12 Nguyễn hí Tôn 2015 , Đ ng Na ược- vị thuốc chữa ệnh, tập I, NX Y học, tr 542

13 Viện Dược liệu (2004), Cây thuốc v động vật làm thuốc ở Việt Nam,

NXB Khoa học và Kỹ thuật, tr.432-438

14 Viện Dược liệu (2006), Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý của thuốc t thả dược, NXB Khoa học và kỹ thuật, tr 139-141

15 Phạm Kim Thoa (2017) Khóa luận “ Nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hóa h c của cây Lá Diễn”, khoa Y Dược, Đại học Quốc

16 Nguyễn Văn Thu và Trần Hùng (2011), ược liệu h c, I, NXB Y học

17 Nguyễn Tiến Vững, Vũ Đức Lợi (2017), Một số hợp chất phân lập từ lá cây Gan Heo (Dicliptera chinensis (L.) Nees) Tạp ch ược h c, T

18 Abdullahi, S.M, Musa, A.M, Abdullahi, M.I, Sule M.Iand Sani, Y.M 2013 , Isolation of Lupeol from the Stem-bark of Lonchocarpus sericeus Papilionaceae , Scholars Academic Journal of Biosciences

19 hmad 1, Khan MR, Shah N , Khan R 2013 In vitro antioxidant potential of Dicliptera roxburghiana BMC Complement Altern Med, 13:140

20 Ankita Wal, Pranary Wal, A.K Rai, Kanwal raj (2010), Isolation and modification of pseudohybrid plant Lupeol , J.Pharm Sci & Res

21 Bibhu Prasad Sahu, Panchanan Gouda and Chakrapani Patnaik (2016), Pandanus Odaritissimus Linn Prasad Sahu, Panchanan Gouda and Chakrapani Patnaik (2016), Pandanus Odaritissimus Linn: Isolation of Stigmast-5, 22-dien-3-β-ol from ethanolic extra of stem bark and study of antimicrobial activity , Journal of Chemistry and chemical Sciences, Vol.6(6), 574-585

22 Charoenchai P, Vajrodaya S, Somprasong W, Mahidol C, Ruchirawat

S, Kittakoop P (2010), “Antiplasmodial, cytotoxic, radical scavenging and antioxidant activities of Thai plants in the family Acanthaceae ,

23 Eric J Dumdei, Julia Kubanek, John E Coleman, Jana Pika, Raymond

J Andersen, Jorge Rios Steiner and Jon Clardy (1997), New terpenoid metabolits from the skin extracts, an egg mass, and dietary sponges of the Northeastern Pacific dorid nudibranch Cadlina luteomarginata", Canadian Journal of Chemistry, 75 (6):773-789

24 Gao Ya, Zhong Mingli, Zhong Jialiang, Zhang Kefeng (2014) Oestrogenicity and effect on hepatic metabolism of the aqueous extract of the leaf mixture of Aloe buettneri, Dicliptera verticillata, Hibiscus macranthus and Justicia insularis , Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine, 6, 953-956

25 Gao YT, Yang X , i TM 2006 , Studies on the chemical constituents in herbs of ethanolic extract from herbs of Dicliptera chinensis , Zhongguo Zhong Yao Za Zhi, 31(12), 985-987

26 Gao YT1, Yang X , i TM 2007 Dicliptercerebroside, a novel cerebroside from Dicliptera chinensis.” Journal of Asian Natural Products Research, page 763-770

27 Oka T, Fujimoto M, Nagaska R 2010 , ycloartenyl ferulate, a component of rice bran oil-derived gamma-oryzanol, attenuates mast cell degranulation , Phytomedicine, 17(2):152-6

28 P.S Jain, S ari 2010 , Isolation of lupeol, stigmatsterol and campesteron from petrolium ether extract of woody stem of Wrightia tinctoria , Asian Journal of plant Sciences, 9(3): 1-5

29 Rita Aquino, Isabella Behar, Francesco de Simone, Cosimo Pizza,Mario d'Agostino (1985), "Dioscin and Gracillin from Tamus communis", Journal of Natural Products, 48 (3): 502–502

30 Takhtajan A.L (1997), Diversity and Classification of Flowering Plants, Columbia University Press, New York, USA

31 Telefo PB1, Moundipa PF, Tchana AN, Tchouanguep Dzickotze C, Mbiapo FT 1998 , ffects of an aqueous extract of Aloe buettneri, Justicia insularis, Hibiscus macranthus, Dicliptera verticillata on some physiological and biochemical parameters of reproduction in immature female rats , J Ethnopharmacol, 63(3):193-200

32 Telefo P 1, Moundipa PF, Tchouanguep FM 2002 , Oestrogenicity and effect on hepatic metabolism of the aqueous extract of the leaf mixture of Aloe buettneri, Dicliptera verticillata, Hibiscus macranthus and Justicia insularis , Fitoterapia, 73(6):472-8

33 Yasukawa K, Akihisa, Kimura Y 1998 , Inhibitory effect of cycloartenol ferulate, a component of rice bran, on tumor promotion in two-stage carcinogenesis in mouse skin , Biological & Pharmaceutical

34 Zhang K, Gao Y, Zhong M, Xu Y, Li J, Chen Y, Duan X, Zhu H(2016), Hepatoprotective effects of Dicliptera chinensis polysaccharides on dimethylnitrosamine-induced hepatic fibrosis rats and its underlying mechanism , Journal of Ethnopharmacol, 179, 38-44.

Tiêu đề	Nghiên cứu chiết xuất, phân lập một số hợp chất từ lá cây gan heo (Dicliptera chinensis (L.) Ness)
Tác giả	Mai Diễm Quỳnh
Người hướng dẫn	TS. Vũ Đức Lợi, PGS.TS. Nguyễn Quốc Huy
Trường học	Đại học Quốc gia Hà Nội
Chuyên ngành	Dược học
Thể loại	Khóa luận tốt nghiệp đại học
Năm xuất bản	2018
Thành phố	Hà Nội

Định dạng
Số trang	46
Dung lượng	2,67 MB