nghiên cứu thành phần hóa học của lá sâm lai châu panax vietnamensis var fuscidiscus k komatsu s zhu s q cai araliaceae khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học

Các công trình nghiên cứu nước ngoài chỉ tập trung chủ yếu vào các hợp chất từ các bộ phận dưới mat đất của Sâm, hầu nhự có rất ít nghiên cứu trên đối tượng lá Sâm mặc dù lá Sâm cũng có

BO GIAO DUC VA DAO TAO BO Y TE

DAI HOC Y DUOC THANH PHO HO CHi MINH

PHAN THUY TUONG VY

NGHIEN CUU THANH PHAN HOA HQC CUA

LA SAM LAI CHAU (Panax vietnamensis var fuscidiscus K Komatsu, 8S Zhu & S

Q Cai, Araliaceae)

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC

Thành phố Hồ Chí Minh — Nam 2021

BO GIAO DUC VA DAO TAO BO Y TE

DAI HOC Y DUOC THANH PHO HO CHi MINH

PHAN THUY TUONG VY

NGHIÊN CUU THANH PHAN HOA HOC CUA

LA SAM LAI CHAU

(Panax vietnamensis var fuscidiscus K Komatsu, 8 Zhu & S

Q Cai, Araliaceae)

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC

Giảng viên hướng dẫn: Th§ NGUYÊN THỊ NGỌC CHI

Thành phố Hồ Chí Minh — Năm 2021

DAI HOC Y DUGC CONG HOA XA HOI CHU NGHIA VIET NAM

KHOA DƯỢC

TP Hỗ Chí Minh, ngày 19 tháng 8 năm 2021

GIAY XAC NHAN DA BO SUNG, SUA CHUA KHOA LUAN THEO

Y KIEN DONG GOP CUA HOI DONG

Tên đề tài: Nghiên cứu thành phần hóa học của lá Sâm Lai Chau (Panax vietnamensis var fuscidiscus K Komatsu, S Zhu & 8 Q Cai, Araliaceae)

Ho va tén sinh vién: Phan Thuy Tuong Vy

Giáo viên hướng dẫn: ThS Nguyễn Thị Ngọc Chỉ

Khóa luận đã được bố sung, sửa chữa các nội dung sau:

1

_ Stra lại thứ tự xuất hiện tài liệu tham khảo

Sửa lại tiêu đề sơ đồ 3.14, 3.37

._ Sửa lại tên khoa học của Panax bipinnatifidus

._ Viết lại phân phương pháp nghiên cứu ở mục 2.2.7, 2.2.8, 2.2 10

Chính lại kết quả mê tả vi phẫu lông che chở, cuống lá; thêm mô tả chỉ tiết kiểu túi tiết tiêu bào ở vi phẫu thân, cuống lá, gân lá

Bỏ các hình cầu tử bột được liệu không đúng, không đặc trưng cho mẫu dược liệu nghiên cứu

10 Thêm pha động ở các phân đoạn SKC rây phân tử trong phần kết qua

11 Chính lại bố cục trong phần xác định cấu trúc của các hợp chất tỉnh khiết

12 Chỉnh lại khoảng trồng ở tài liệu tham khảo [4]

KHOA LUẬN TÓT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC — NĂM HỌC 2016-2021 Nghiên cứu thành phần hóa học của lá Sâm Lai Châu (Panax vietnamensis var fuscidiscus K Komatsu, S Zhu & S Q Cai, Araliaceae)

Phan Thuy Tường Vy, ThS Nguyễn Thị Ngọc Chỉ

Giới thiệu

Hiện nay, các nghiên cứu về Sâm Lai Chau (Panax vietnamensis var fuscidiscus) 6 Viét

Nam chỉ mới ngừng lại ở việc xác định trình tự gen, so sánh khoảng cách di truyền với Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis var vietnamensis) và tập trung vào khâu nuôi trồng, nhân

giống Trong khi thành phần hoá học cũng như tác dụng sinh học vẫn chưa được quan tâm

nghiên cứu trên cả thân rễ cũng như bộ phận lá Trên thị trường ngày nay, lá Sâm và các sản phẩm từ lá được sử dụng khá phô biên, nhưng vẫn chưa có một tiêu chuẩn nào để xác định

và kiêm tra chất lượng của chúng Các công trình nghiên cứu nước ngoài chỉ tập trung chủ yếu vào các hợp chất từ các bộ phận dưới mat đất của Sâm, hầu nhự có rất ít nghiên cứu trên đối tượng lá Sâm mặc dù lá Sâm cũng có tiềm năng lớn, cho các tác dụng sinh học tương tự

bệ phận dưới mặt đât và có thời gian thu hoạch ngăn hơn Do vậy, đê tài “ Nghiên cửu thành

phần hoá học của lá Sâm Lai Chau (Panax vietnamensis var fuscidiscus K Komatsu,

S Zhu & 8S Q Cai, Araliaceae)” được thực hiện nhằm mục đích nghiên cửu thành phần hoá học có trong lá Sâm, làm nền tảng cho việc định danh và xây dựng tiêu chuân kiêm nghiệm cho dược liệu này

Đối tượng và phương pháp nghiên cứu:

Đối tượng: Lá Sâm Lai Châu được thu mua ở Lai Châu vào tháng 7 năm 2020 Phương pháp nghiên cửu: Phân tích đặc điểm thực vật, khảo sát sơ bộ thành phan hóa học,

chiết xuất, phân lập các chất bằng sắc kí cột, tỉnh chế, kiêm tỉnh khiết của các chất phân lập được bằng SKLM và xác định câu trúc chất tỉnh khiết bằng cách so sánh với các chất đối chiêu băng phương pháp SKLM và phô (MS, NMR)

Kiểm tra độ tỉnh khiết: cả 14 chất đều tỉnh khiết sơ bộ trên SKLM

Xác định cau trúc: bằng cách so sánh với các chất đối chiêu được phân lập trong các nghiên

cứu trước đây, PVL08 được xác định là daucosterol Bằng các phương pháp phổ MS, NMR

và so sánh với dữ liệu tham khảo, các hợp chất lần lượt được xác định là: adenosin (PVL02), quercetin-3-O-B-D-galactopyranosid (hyperosid, PVLO03), vinaginsenosid R1 (V-RI) (PVLO5), acid palmitic (PVL06), kaempferol 3-O-(2”-O-B-D-glucopyranosyl)-B-D-

galactopyranosid (PVLO09), kaempferol 3-O-B-D-galactopyranosid (trifolin) (PVL10),

PVLII là pseudoginsenosid F1l (P-FII) (PVLIO), quercetin 3-O-(2”-O-B-D- ølucopyranosy]l)-J-D-galactopyranosid (PVLI3)

Đề nghị

- Tiếp tục nghiên cứu về thành phần hóa học của dược liệu

- Xây dựng quy trình định tính và định lượng HPLC để kiểm nghiệm dược liệu bằng các

chất chuẩn đã phân lập được.

FINAL ASSAY FOR THE DEGREE OF BS PHARM, COURSE 2016 — 2021 Study on chemical constituents of Lai Chau Ginseng leaves (Panax vietnamensis var fuscidiscus K Komatsu, 8S Zhu & SQ Cai, Araliaceae)

Phan Thuy Tuong Vy, Nguyen Thi Ngoc Chi Introduction

Currently, research on Panax vietnamensis var fuscidiscus in Vietnam has only focused on

determining gene sequences, comparing genetic distances with Panax vietnamensis var vietnamensis, and concentrating on cultivation and propagation, rather than chemical composition and biological effects on both rhizomes and leaves Ginseng leaves and leaf products are widely utilized in the market today, however, there is no standard for determining and quality control To the best of our knowledge, research on Lai Chau ginseng exclusively focus on compounds from the subterranean parts; there are extremely few studies

on ginseng leaves, despite the fact that ginseng leaves have some advantages compare to

rhizomes and radix, which are harvest period and the potential of similarity of biological

benefits

Therefore, the project "Study on chemical composition of Lai Chau Ginseng leaves (Panax vietnamensis var fuscidiscus K Komatsu, S Zhu & SQ Cai, Araliaceae)" was carried out in order to study the chemical composition of ginseng leaves as the basis research for identification and quality control for this medicinal herb

Materials and methods

Materials: Lai Chau Ginseng leaves purchased in July 2020 in Lai Chau

Methods: Plant features analysis, preliminary chemical composition study, extraction, separation of compounds by column chromatography, purification, and purity control of isolated compounds by TLC, and determination of the pure compounds’ structure was

compared to the reference compounds using TLC and spectroscopic techniques (MS, NMR)

Results

- Extraction, fractionation: 530,4 g of the Et extract; 108,05 g of the DCM fraction; 32,1 ¢

of the EA fraction; 180,27 g of the Bu fraction; 232,06 g of the water fraction

- By TLC, 11 compounds were isolated from the EA fraction (PVLO1-PVL12) and 3 are isolated from the Bu fraction (PVL13-PVL15)

- Examination of purity: all 14 compounds are preliminarily pure on TLC

- Structure determination: by comparison with reference substances isolated in previous studies, PVL08 is identified as daucosterol By the spectral methods of MS, NMR and by comparison with the reference data, we can identify: PVLO2 is adenosine, PVL03 is quercetin-3-O-B-D-galactopyranoside (hyperoside), PVLO5 is vinaginsenoside R1 (V-

R1), PVL06 is palmitic acid, PVLO9 is kaempferol 3-O-(2”-O-B-D-glucopyranosy1)-B-D- galactopyranoside, PVL10 1s kaempferol 3-O-B-D-galactopyranoside (trifolin), PVL11 is

D-galactopyranoside

Recommendations

- Continue isolating from other fractions

- Develop qualitative and quantitative analysis by HPLC for quality control.

MUC LUC

)\090DĐ.eờ Ả ÔÒỎ II DANH MỤC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT ©22222222222211222112221112221122211222222 VI DANH MỤC BẢNG Q2 222222222212211122112211122112211122112211221122122222222222 xa VI DANH MỤC HÌNH VẼ, SƠ ĐÔ, ĐỒ THỊ 22- 222 2222112221112211122211222122222 IX D909.) 090) 0 44 , HHH.HH ẢẢẢ XI 2V ý 06) sin, Á ,ÔÒỎ 1 CHUONG 1 TONG QUAN TAL LIBU ooo ccccccccccescsescsecsesescsecsesevseeesesesesentasestsesseseee 2

1.1.3.6 Tác dụng kháng viêm 2 2 2 S2 111111211112111111 111151 E1 2 17

1.1.3.7 Tác dụng kháng khuẩn - kháng nẫm 22 S222 222E22221222222222322 2222 17 1.13.8 Tác dụng chống oxy hOÁ 222222222211221222212221121222 22 18 1.1.3.9 Tác dụng tăng cường sinh lực và chống mệt mỏ 22 22222222 18

1.2.1 Danh pháp - 2 cece cee 2112112111111111121111111111 111111011111 11 212 1 vệ, 19

12.2 Đặc điểm hình thái -22S222212211221122221122211222111221112221112221 226 19 1.2.3 Đặc điểm phát triển và phân bổ 522 2222222221222221222221222122222 2.220 19 1.2.4 Thành phần hoá học ©22222S22225221522111222112221122211221112221112221 226 20

12.4.1 Các hợp chất được phân lập từ thân rễ, rễ củ Sâm Việt Nam 20

12.4.2 Các hợp chất được phân lập từ lá Sâm Việt Nam 2222.-z2 24 1.2.5 Tac ốc 25

1.2.5.1 _ Tác dụng trén than kinh trung wong 00 ee cece eee 25

1.3.3 Phân bố địa lý và thực trạng hiện nay 52252 S21222122121112212222222x2 29

13.4 Trìnhtự ADN 222222202 2220221222212 1221222222222 e 29

1.3.5 Thanh phan hoa hoe .AẢ.Ả 30

2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU

2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu 2 2 2.1 1111112111212111111 111151811 111221221

2.12 Trang thiết bị nghiên cứu

2.1.3 Hoá chất, dung môi và thuốc thử -22S222222112112212112211212122112121221 2e 31 2.2 | PHUONG PHAP NGHIEN CUU

2.2.1 Phân tích đặc điểm thực vật học

2.2.2 Xác định độ âm Ặ2 2 222 211122222222222221222222 ra

2.2.5 Xác định các chất chiết được trong được liệu 52222222 2221222226 33 2.2.6 Khảo sát sơ bộ thành phần hoá học 522 21 2212221221122112212222221 2 33

2.2.7 Chiết xuất — phân tách các phân đoạn 2-2252222222222312222122122222122122222, 33 2.2.8 Phân lập các thành phần từ phân đoạn cao EA, cao Bu -222 z2 33

2.2.9 Tinh ché các chất tỉnh khiết từ phân đoạn cao EA, cao Bu 34

2.2.10 Kiểm tra tỉnh khiết các hợp chất phân lập được bằng SKLM 34 2.2.11 _ Xác định cấu trúc các hợp chất phân lập được 2222222222222222 34

CHUONG 3 KET QUA VA BAN LUẬN S0 2222222222222 rre 35

3.1 DAC DIEM THUC VAT HOC oii cece cesses csseessessessssssssssessiesviesivessssssensseess 35 3.1.1 Đặc điểm hình thái s2 222222221221 221221 2111212222222 35

3.6.3 Phân lập thành phản từ phân đoạn EA8 22222222221222.11.122212222.2 48

3.6.4 Phân lập thành phần từ phân đoạn EAIH -©22- 2212212221222 xe 50 3.6.5 Phân lập thành phần từ phân đoạn EA13 -©22222212222122122221.222222xce 52 3.6.5.1 Tinh ché phan doan EAI3.3-5 0 cccccccccccccecscssseecsseesseevsseesseesieessesssseseee 54 3.6.5.2 Tinh ché phan doam EAI3.7 oo cccccccccccscceecscessseessseesseessseessesssseesseeseseseee 54 3.6.5.3 Tỉnh chế phân đoạn EAI3.8 2.22222211222122 2e 56 3.6.6 Phân lập thành phần từ phân đoạn EA14 -222222122221221222212212222xce 56 3.6.6.1 Tỉnh chế phân đoạn EA14.4 S5 2222222122222 re 58 3.6.6.2 Phân lập thành phần từ phân đoạn EA14.9 - 5222222222222 2 58 3.6.7 Phân lập thành phần từ EA7 222-22122221221112121222211222122 xe s9

3.7 PHẦN LẬP CÁC THÀNH PHẢN TỪ PHẦN ĐOẠN CAO BU 61 Phân lập thành phần từ Bull -22 S52 22222222221221152112112211221212122222222 xe 64

Phân lập thành phần từ phân đoạn Bul1.2 -2-22222122512211221222122122 222 65 Phân lập thành phần từ Bul].4 5222 2112221221221 rre 68

3.8 KIEMTRA TINH KHIET HOP CHAT PHAN LAP DUGc BANG SKLM 71

3.8.1 Các hợp chất tỉnh khiết phân lập từ phân đoạn EA - 522 5222222222222 71 3.8.1.1 Hợp chất PVL01, PVL02, PVL03, PVL05, PVL09, PVL10, PVLII, 010075

3.8.1.2 Hợp chất PVLO6 2.22202222222222 re 3.8.1.3 Hợp chất PVL07, PVL08

3.8.2 Các hợp chat tinh khiết phân lập từ phân đoạn Bu -2-552222222222 73

3.9 XÁC ĐỊNH CÁU TRÚC CÁC HỢP CHÁT PHÂN LẬP ĐƯỢC 75 3.9.1 Hop chat PVLOI

3.9.2 Hop chat PVLO2

3.9.3 Hop chat PVL1O

3.9.5 Hợp chất PVLÔ3 Q.2 20 22022222222 112112122222222222222 ra 82 kh: sàng 84 KV: 0.3 06 §6 3.9.8 Hợp chất PVLII 2.2222222222212212222222222222ye 87 3.9.9 Hop chat PVLO6 ooo cee escesese cesses test veate tar teetsviteseststerteesesensasetaeees 92

3.10 BÀNLUẬN Q.20 202221222222 ee 94 CHƯƠNG4._ KÉT LUẬN VÀ ĐÈ NGHỊ -1212222 1212222222 95

41 KÉẾTLUẬN 0.2 2022022 0H22 ee 95

42 ĐÊNGHỊ 2 2 02202 n2 0H22 2e 97 TÀI LIỆU THAM KHẢO à2 0222122222122 1222121212122 re 98

00 Nio Ả.ẢẢẢ 106

DANH MỤC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT

EtOAc Ethyl acetate

HMBC Heteronuclear Multiple Bond

Correlation

HPLC Heh po tnatoerant Sắc ký lỏng hiệu năng cao HSQC Heteronuclear Single Quantum

KT Ket tinh

ICso Inhibitory concentration 50% Nông độ ức chê tôi đa 50%

J Coupling constant Hang sé ghép

m multiplet Đỉnh phức tạp

MS Mass Spectroscopy Phổ khối lượng NMR Nuclear Magnetic Resonance Cộng hưởng từ hạt nhân ppm Parts per million Phan triéu PDA Photodiode array Day diod quang

Bang 1.1

Bang 1.2

Bang 1.3

Bang 1.4

Bang 1.5

Bang 1.6

Bang 1.7

Bang 1.8

Bang 1.9

Bang 1.10

Bang 1.11

Bang 1.13

Bang 1.14

Bang 1.15

DANH MUC BANG

VỊ trí phân loat clia Chi PAHO e ene eceeseteeeeceeeenecseseeeeneeseteeneens 2 Danh mục các loài trong chỉ /?2/14X cee c2 2 2 nay 2

Phân bố của các loài thuộc chỉ Panax trên thế giới ccnnnrườn 3

Các saponin khung PPD được phân lập từ chỉ ?anax 5

Các saponin khung PPT được phân lập từ chỉ 2wax 6

Cac saponin khung OCT được phân lập từ chị 2wax 7

Cac saponin khung ÔA được phân lập từ chỉ #anax 7

Các saponin có chuỗi C-17 khác được phân lập từ chỉ Pawax 8

Các polysaccharid được phan lap ter chi Pana oo cect 10 Cac hop chat phenolic duoc phan lap tir chi Pandx ccc: 12 Các saponin dẫn chất của 20(S)-protopanaxadiol ở thân rễ và rễ củ Sâm ¬— 21

Các saponin dẫn chất của 20(S)-protopanaxatriol ở thân rễ và rễ củ Sâm ¬— 22

Các saponin có cau trúc ocotillol ở thân rễ và rễ củ Sâm VN 23

Cac saponin dan chat của acid oleanolic ở thân rễ và rễ củ Sâm VN 23

Cac saponin phân lập được từ lá Sâm Việt Nam .- s55: 27

Bảng 2.16 Trang thiết bị nghiên cứu 31

Bảng 2.17 Các dụng môi hoá chất và thuốc thứ - s2 tt run 31 Bảng 3.18 Kết quả xác định độ âm, tro toàn phần và tro không tan trong acid 4l Bảng 3.19 Hàm lượng chất chiết được trong lá Sâm Lai Châu se 42 Bảng 3.20 Kết quả phân tích sơ bộ thành phần hoá thực vật nà 42 Bảng 3.21, Kết quả chiết xuất các phân đoạn cao từ lá Sâm Lai Châu 43

Bang 3.22 Các phân đoạn thu được từ phân đoạn cao EA cóc 46 Bang 3.23 Các phân đoạn thu được từ phân đoạn cao EA8 c.cec 49 Bang 3.24 Các phân đoạn thu được từ phân đoạn cao EAl1 - s22: 51 Bang 3.25 Các phân đoạn thu duce tir phan doan cao EA13 oo eee 53 Bang 3.26 Cac phan đoạn thu duce tir phan doan cao EA13.7 00 54 Bang 3.27 Cac phan đoạn thu duce tir phan doan cao EA14 oo eee 57 Bang 3.28 Các phân đoạn thu duce tir phan doan cao EAI7 0 eens 60 Bang 3.29 Các phân đoạn thu được từ phân đoạn cao Bu

Bang 3.30 Cac phan doan thu được từ phân doan cao Bul 1 Bang 3.31 Cac phân đoạn thu được từ phân đoạn cao Bull.2 000 ee 65 Bang 3.32 Các phân đoạn thu được từ phân đoạn cao Bul l.4 - +: 68

Bảng 3.33 Tông kết thông tin các hợp chất được phân lập từ lá Sâm Lai Châu 70

Bang 3.34 Dữ liệu phố [H-NMR (600 MHz) va 13C-NMR (150 MHz) của các hợp

J1, 76

Bảng 3.35 Dữ liệu phô 'H-NMR (600 MHz) và '*C-NMR (150 MHz) của các hợp

chất PVL09, PVL10 (trong DMSO) n2 rrruờn 80

Bang 3.36 Dir ligu phé 'H-NMR (600 MHz) va 3C-NMR (150 MHz) cua cac hop

Chat PVLO3 83

Bang 3.37 Dir ligu phé 'H-NMR (600 MHz) va “C-NMR (150 MHz) cua các hợp

chất PVL [3 c2 tt tt HH ưa 85

Bảng 3.38 Dữ liệu phố !H-NMR (600 MHz) và '?C-NMR (150 MHz) của các hợp chất PVL05, PVLI1 (trong pyridin) - c2 1 rrrrerrruờn 89 Bang 3.39 Dir ligu phé 'H-NMR (600 MHz) va “C-NMR (150 MHz) cua cac hop

Chat PVLOG ooo 92

Bảng 4.40 Tóm tắt thông tin các hợp chất phân lập được tir 14 S4m Lai Chau 96

vill

DANH MỤC HÌNH VẼ, SƠ ĐỎ, ĐỎ THỊ

Hình 1.1 Khung cơ bản của các saponin và phân đường phô biến của các saponin

được phân lập từ chỉ P@/14X 2c 2c 12 1211112112111 1111 111111111211 11 1 He 4

Hình 1.2 Cầu trúc khung protopanaxadiol s22 ru ruờn 20 Hình 1.3 Cầu trúc khung protopanaxatriol s22 rrrrrdea 22 Hình 1.4 Cầu trúc khung ocotillol - 2s 2 c1 1 21 2 2121 ren 23 Hình 1.5 Cầu trúc khung acid oleanolie -.- + 2c c2 22 truyen 24 Hình 1.6 Các hợp chất polyacetylen được phân lập từ thân rễ và rễ củ của Sâm VN

Hình 1.7 Hình ảnh về đặc điểm hình thái của Sâm Lai Châu [90] 29

Hình 3.8 Hình ảnh về đặc điểm hình thái của mẫu dược liệu nghiên cứu 35

Hình 3.9 Hình ảnh biểu bì bóc tách được từ lá Sâm Lai Châu .- 37 Hình 3.10 Hình ảnh lông che chở của lá Sâm Lai Châu - co: co sec 37 Hình 3.11 Vi phẫu của thân Sâm Lai Châu 222222 221222122212272222222 e6 38 Hình 3.12 Vi phẫu của lá Sâm Lai Châu 222222 2212221222122222722222 e6 40

Hình 3.13 Một số cấu tử quan sát dưới kính hiển vi của bột lá Sâm Lai Châu 41

Sơ đồ 3.14 Sơ đồ tóm tắt quy trình chiết xuất các cao phân đoạn từ lá Sâm Lai Châu

Hình 3.15 SKÐ cao toàn phần và các cao phân đoạn của lá Sâm Lai Châu 45

Hình 3.16 SKĐÐ các phân đoạn phân lập từ phân đoạn EA 48 Hình 3.17 SKĐÐ các phân đoạn phân lập từ phân đoạn EAS 40

Hình 3.18 SKÐ SKLM tinh chế phân đoạn EA8.4 n2 rrrrrờn 50

Hình 3.19 SKĐÐ các phân đoạn phân lập từ phân đoạn EA 1 l - s22 51

Hình 3.20 SKÐ SKLM tinh chế phân đoạn EA1I.8 Sun 52

Hình 3.21 SKĐÐ các phân đoạn phân lập từ phân đoạn EA13 33

Hình 3.22 SKÐ SKLM tinh chế phân đoạn EA 13.345 nh rrườn 54

Hình 3.23 SKĐÐ các phân đoạn phân lập từ phân đoạn EA13.7 35

Hinh 3.24, SKD phân đoạn EA13.7.1 sau khi tỉnh chế -©22sc22222212c22cee 55

Hình 3.25 SKĐÐ các phân đoạn phân lập từ phân đoạn EA13.8 56 Hinh 3.26 SKD cac phan đoạn phân lập từ phân doan EA14 ooo se 57 Hinh 3.27 SKD cac phan đoạn phân lập từ phân đoạn EA14.4 58

Hinh 3.28 SKD cac phân đoạn phan lap tir phan doan EA14.9 s30

Hình 3.29 SKĐÐ các phân đoạn phân lập từ phân đoạn EA 17 c2 cey 60 Hình 3.30 SKĐÐ các phân đoạn phân lập từ phân đoạn EA 17.5 61

Hình 3.31 SKĐÐ các phân đoạn phân lập từ phân đoạn Bu 2 s22 63

Hình 3.32 SKĐÐ các phân đoạn phân lập từ phân đoạn Bull -+-: 64 Hình 3.33 SKĐÐ các phân đoạn phân lập từ phân đoạn Bul l.2 -: 66

LOI CAM ON

Thời gian hơn 5 tháng thực hiện đề tài đã mang lại cho em nhiều kiến thức, kĩ năng

và những trải nghiệm trước đây chưa từng có Và trong khoảng thời gian này, em đã nhận được sự giúp đỡ và động viên từ thầy cô, anh chị, bạn bè và các em khoá đưới

Đầu tiên, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới cô TS Lê Thị Hồng Vân đã dan dat

và định hướng em theo con đường nghiên cứu, luôn đồng hành, chia sẻ kiến thức quý

giá và tạo điều kiện tốt nhất cho em hoàn thành khoá luận Cảm ơn cô ThS Nguyễn

Thị Ngọc Chị đã luôn theo sát, hướng dẫn và cho em lời khuyên, động viên và khích

lệ em vào những lúc em gặp khó khăn trong lúc học tập, thực nghiệm cũng như trong

cuộc sống

Em xin cảm ơn thầy TS Mã Chí Thành và các thầy cô trong hội đồng đã dành thời gian để đọc và đóng góp ý kiến giúp em hoàn thiện dé tai hon

Em xin chân thành cảm on tat ca thầy cô Bộ môn Dược Liệu, cô Châu, chị Lan, chị

Giang đã tạo điều kiện tốt nhất cho em trong quá trình học tập và hoàn thành khóa

luận

Em xin cam on anh Hung, chi Thao, chị Trang, chị Sương, chị Ngọc đã giúp đỡ, cho

em lời khuyên quý báu và giải đáp những thắc mắc của em trong quá trình thực nghiệm

Mình xin gửi lời cảm ơn đến các bạn lab Dược liệu 405 đã đồng hành cùng mình

trong khoảng thời gian vui, buồn khi thực hiện khoá luận: bạn Thiên Thảo, Hoài Sang, Tấn Phat, Thanh Hoang, Té Ngân và Thu Na Và đặc biệt minh xin gửi lời cảm ơn

sâu sắc và trái tim yêu thương đến partner của mình, luôn lắng nghe, thấu hiệu, đồng hành và giúp đỡ mình giải quyết hậu quả trong suốt thời gian qua

Minh xin gui loi cam on sau sac dén cdc ban monitor lab 405, dac biét la Khang,

Hién, Quỳnh, Huệ, Hương, Trân, Uyên Quách, Linh, Trúc, Uyên, Kiều, Mai, Huy, Duy, Trường, Trung, Huyền luôn sẵn sàng giúp đỡ, hỗ trợ mình hoàn thành đề tài

dù học hành, thi cử bận rộn

Cuối cùng, con xin cảm ơn cha mẹ và gia đình đã luôn yêu thương, giúp đỡ, là chỗ

dựa vững chãi cho con, luôn tạo điều kiện tốt nhất cho con học tập, cho con động lực

và năng lượng để tiễn về phía trước

Một lần nữa, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến tất cả mọi người!

Thành phố Hỗ Chí Minh, tháng § năm 2021

Phan Thuy Tường Vy

xI

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH Đặt vấn đề

ĐẶT VÁN ĐÈ

Việt Nam nằm trong vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa nóng và âm nên có nguồn tài

nguyên thực vật rất phong phú và đa dạng Thêm vào đó, cộng đồng các dân tộc Việt Nam từ lâu đời đã có nhiều kinh nghiệm sử dụng các loài cây cỏ làm thuốc phòng

và chữa bệnh, trong đó có loài Sâm

Nhân sâm nói riêng hay các loài khác thuộc chỉ Pønax nói chung được xem là

dược liệu quí, được sử dụng trong y học cô truyền hàng ngàn năm và tác dụng

phòng chữa bệnh của loại dược liệu này đã được chứng minh thông qua các

công trình nghiên cứu khoa học

Hiện nay trên thế giới có khoảng 18 loài thuộc chỉ Panax đã được công bế [1] Theo hé théng phân loại thực vật của The Plant list có 13 loài thuộc chỉ 2nax

được chấp nhận [2] Một số loài thuộc chỉ này được sử đụng phô biến ngày nay như Nhân sâm (Panax ginseng), Sâm MY (P quinquefolius), Sam Nhat (P japonicus),

O Viét Nam hién 6 4 loai thuéc chi Panax da được công bố: Sâm Vũ Diệp (Panax

bipinnatifidus), Tam that (P notogiseng), Tam thất hoang (P stipuleanatus) và Sâm Việt Nam (P vietnamensis) [3] Trong dé, Sam Viét Nam co hai thứ gần đây được phát hiện là P viefnamemsis vat langbianensis (hay còn được gọt là Sâm Langbian) va P vietnamensis var fuscidiscus (hay con được gọi là Sâm Lai Châu)

Hiện nay, các nghiên cứu về Sâm Lai Châu (P viefnamensis var ƒuscidiscus) ở

Việt Nam chỉ mới ngừng lại ở việc xác định trình tự gen, so sánh khoảng cách

di truyền với Sâm Ngọc Linh (P vietnamensis var vietnamensis) và tập trung vào khâu nuôi trồng, nhân giống Trong khi thành phần hoá học cũng như tác dụng sinh học vẫn chưa được quan tâm nghiên cứu trên cả thân rễ cũng như bộ phận lá Các công trình nghiên cứu nước ngoài chỉ tập trung chủ yếu vào các hợp chất từ

các bộ phận đưới mặt đất của Sâm, hầu như có rất ít nghiên cứu trên đối tượng lá Sâm

mặc dù lá Sâm cũng có tiềm năng lớn, cho các tác dụng sinh học tương tự bộ phận

dưới mặt đất và có thời gian thu hoạch ngăn hơn Trên thị trường ngày nay, lá Sâm

và các sản phẩm từ lá được sử dụng khá phố biến, nhưng vẫn chưa có một tiêu chuẩn

nào để xác định và kiểm tra chất lượng của chúng Do vậy, đề tài “ Nghiên cứu

thành phần hoá học của lá Sâm Lai Châu (Panax vietnamensis var fuscidiscus K Komatsu, S Zhu & S Q Cai, Araliaceae)” dugc thye hién nham muc dich nghiên cứu thành phần hoá học có trong lá Sâm, làm nền tảng cho việc định danh và

xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm cho dược liệu này.

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH Tổng quan tài liệu

Bang L.L VỊ trí phân loại của chỉ Panax

Bộ Hoa tan (Apiales)

Ho Nhân sâm (Araliaceae)

chấp nhận [6]

Bảng 1.2 Danh mục các loài trong chỉ Panax

~ The Plant Catalogue Tén khoa hoc Phan loai list [2] of Life [6] Panax assamicus R.N BanerJ Loài X Panax bipinnatifidus Seem Loài X X Panax bipinnatifidus var angustifolius Dưới loài X X Panax bipinnatifidus var bipinnatifidus Dưới loài X Panax ginseng C.A Meyer Loài X X Panax japonicus (T Nees) C.A Meyer Loài X X Panax notoginseng (Burkill) FH Chen Loài Xx Xx Panax pseudoginseng Wall Loài X X Panax quinquefolius L Loài X X Panax sokpayensis Shiva K.Sharma & Pandit Loài X X

Panax trifolius L Loài x x Panax vietnamensis Ha et Grushv Loài X X Panax vietnamensis var fuscidiscus Dưới loài X Panax vietnamensis var langbianensis Dưới loài X Panax vietnamensis var vietnamensis Dưới loài X

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH Tổng quan tài liệu

The Plant Catalogue

Tên khoa hị — Phân loại an roa list [2] of Life [6]

Panax wangianus S.C Sun Loài X X

1.1.1.1 Đặc điểm thực vật

Cây thân thảo sống nhiều năm, có thân rễ mập; thân không gai, có vảy ở gốc Cay chỉ có hoa lưỡng tính hoặc cây có cả hoa lưỡng tính và hoa đực Lá kép chân vịt, mọc vòng 3-5 lá; lá chét nguyên đến có răng nhỏ, có răng hay có thùy lông chim;

lá kèm nhỏ Cụm hoa đơn độc, ở đỉnh cành, dạng tán Cuống hoa có khớp dưới,

hoa lưỡng tính, không có khớp dưới hoa đực Đài có 5 răng ngắn Tràng 5, rời,

xếp lợp Nhị 5, chỉ nhị dài bằng hoặc dài hơn cánh tràng, chỉ nhị xếp xen kẽ với cánh tràng Bầu 2 lá noãn; vòi nhụy 2, rời hay hợp ở gốc Quá hạch, hình cầu đôi khi

hơi dẹt hoặc có 3 góc Hạt thường đẹt một bên, số lượng hạt bằng số lá noan;

phôi nhũ đồng nhất [7]

1.1.1.2 Đặc điểm sinh thái và phân bố

Chi Pamax L phân bố chủ yếu ở vùng ôn đới ở Bắc bán cầu, kéo dài từ vùng

rừng núi giáp bờ biển phía đông Bắc Mỹ cho đến vùng Đông Bắc Á [8] Giới hạn cuối cùng về phía Nam của chỉ Panax là loài Sâm Việt Nam (Panax vietnamensis) 6

miền Trung của Việt Nam, tại 14°15' vĩ độ Bắc [3] Cho đến nay ở Việt Nam có 4

loài thuộc chỉ Panax đã được công bố: P bipimaiifdus Seem (Sâm vũ điệp),

P notoginseng (Tam that), P stipuleanatus (Tam that hoang) va P vietnamensis

(Sam Viét Nam) [3] Sw phan bé cia cac loai thuéc chi Panax duge tém tat tai

Bang 1.3 [8,9,10]

Bang 1.3 Phan bố của các loài thuéc chi Panax trén thé gidi

Panax quinquefolius L Bắc Mỹ, Đông-Nam Canada, Trung Quốc Panax ginseng C.A Meyer Đông Nga, Đông Bắc Trung Quốc, Triệu Tiên Panax japonicus (T Nees) C.A Meyer va Nhat Ban

Panax assamicus R.N.Banerj Đông Bắc Ấn Độ, Đông Hymalaya

Panax notoginseng (Burkill) FH Chen Bắc Mỹ, Nam Trung Quốc, Bắc Việt Nam Panax pseudoginseng Wall Nam Trung Quốc, Bắc Việt Nam

Panax bipinnatiidus Seem Bắc và Nam Trung Quốc, Bắc Việt Nam Panax vietnamensis Ha et Grushv Nam Trung Quốc, Trung Việt Nam

1.12 Thanh phân hoá học

Trong các loài thuộc chỉ Pazax, ngoài những thành phần hoá học thông thường như: đường, acid béo, acid amin, nguyên tố đa lượng và nguyên tổ vi lượng,

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH Tổng quan tài liệu

Chi Panax còn chứa các thành phân hoá học chính như saponin, polysaccharid, polyacetylen, hop chat phenolic va tinh dau [11] Trong d6, saponin (hay cac ginsenosid) duoc xem 1a thanh phan cé hoat tinh sinh học quan trọng nhất [12] 1.1.2.1 Saponin

Ginsenosid lan dau tién duge tim thay tir Panax ginseng (Nhan sam) vao nam 1960 bởi các nhà khoa học người Nhật [12], đến năm 2012, đã có gần 300 saponin được phân lập và xác định cấu trúc từ I1 loài khác nhau thuộc chỉ Panax [13] Saponin hay còn gọi là sapogenin glycosid gồm phần sapogenin có cấu trúc steroid hay triterpen gắn với một hay nhiều phân tử đường Các phân tử đường gắn với khung aglycon thường là các monosaccharid như glucose, acid glucuronic, rhamnose, xylose, arabinose Các sapogenin được phân loại theo khung cấu trúc (dammaran, olean) với mạch nhánh C- l7 khác nhau [13]

HO" HO" HO" nọ

HO OK HO OH HO OH on

Rha: a -L-rhamnopyranosyl Ara(p): a -L-arabmopyranosyl Ara(Ð: a -L-arabmofuranosyl

Hình 1.1 Khung co ban cua cac saponin va phân đường phô biên của các saponin được

phân lập từ chi Panax

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH Tổng quan tài liệu

Bang 1.4 Các saponin khung PPD được phân lập từ chỉ Panax

TT Tên thông thường CTPT TT Tên thông thường CTPT

7 G-Rd CasHs2018 38 P-F8 CssH92023

10 m-G-Rc Cs6H92025 4I GY-XII CaiH70012

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH Tổng quan tài liệu

TT Tên thông thường CTPT TT Tên thông thường CTPT

Ghi chủ: G: ginsenosid; P: Pseudo-ginsenosid; GY: Gypenosid; Q: Quinquenosid; N: Notoginsenosid; V: Vina-ginsenosid; Y: Yesanchinosid; C: Chikusetsusaponin

- Khung protopanaxatriol (PPT)

Tương tự nhóm PPD, nhóm PPT có thêm nhóm hydroxyl hay đường gắn vào vị trí

€-6 Và có khoảng 50 saponin có khung PPT được xác định [13] Một số saponin khung PPT được phân lập từ chỉ Panax được thể hiện trong Bang 1.5

Bảng 1.5 Cac saponin khung PPT được phân lập từ chỉ Panax

TT Tên thông thường CTPT TT Tên thông thường CTPT

23 20(S)-6°-O-Acetyl-G- CasHO14 | 48 — 20(R)-6°-O-Acetyl-G- CugH 4014

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

- Khung ocotillol (OCT)

Đặc trưng của cấu trúc này là cầu trúc có vòng epoxy gắn vào vị trí C-20 Và có

khoảng 15 saponin có khung OCT được phân lập từ chỉ Panax và hầu hết chúng đều có cầu hình 24(Š) [13] Một số saponin khung OCT được phân lập từ chỉ Panax

được thể hiện trong Bang 1.6

Bang 1.6 Các saponin khung OCT được phân lập từ chỉ Panax

Ghi chú: P: Pseudo-ginsenosid; V: Vina-ginsenosid; Yesanchinosid: Y; M: Majornosid

Khung acid oleanolic (OA)

Tổng cộng có 19 hợp chất đã phân lập và xác định cấu trúc thuộc khung OA Saponin

nhóm này có phần aglycon mang cấu trúc acid oleanolie (triterpen 5 vòng) [13] Một số saponin khung OA được phân lập từ chỉ Panax được thé hién trong Bang 1.7

Bang 1.7 Cac saponin khung ÔA được phân lập từ chỉ Panax

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH Tổng quan tài liệu

TT Tên thông thường CTPT

11 P-Rpl butyl ester CapH4O 14

13 Spinasaponin A 28-O-glucosid — CasH76O19

Ghi chu: G: ginsenosid; P: Pseudo-ginsenosid; B: Bipinosid; $ : Stipuleanosid; A: Aralosid

Các ginsenosid có mạch nhánh C17 it pho bién khac

Saponin với chuỗi C-17 khác chiếm tỉ lệ lớn hơn các nhóm saponin khac Cau trúc

mạnh nhánh C-17 khác chủ yếu bao gồm: thêm HO, hydroxyl hoá, methoxyl hoá, peroxy hoá, khử nước ở C-20, carbonyl hoá, dehydro hoá, đóng vòng, oxy hoá [ 13] Một số saponin có chuỗi C-17 khác được phân lập từ chỉ Panax được trình bày trong Bảng 1.8

Bang 1.8 Cac saponin co chuỗi C-17 khác được phân lập từ chỉ Panax

TT Tên thông thường CTPT TT Tên thông thường CTPT

1 C-L9a C36He2010 |22 V-R10 C36He2010

3 G-Rhl5 Ca¿HøOl |24 F-H CsoHs4O21

17 24(RY24(S}-F-Td CsHsOa [38 24(RY/24(8-G-1 CasHs202

20 FN-D CyHnOis |41 N-R1O C30Hs009

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH Tổng quan tài liệu

TT Tên thông thường CTPT TT Tên thông thường CTPT

53 G-Rhl2 €z¿HaOio |92_ N-R§ C36H62010

81 G-SL2 CHO |120 12,23-Eproxy-G-Rgl CaHnOu

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH Tổng quan tài liệu

TT Tên thông thường CTPT TT Tên thông thường CTPT

1.1.2.2 Polysaccharid

Polysaccharid là polyme tự nhiên, thường bao gồm hơn 10 monosaccharid thông qua các liên kết glycosidic với các chuỗi mạch thắng hoặc mạch nhánh và khối lượng phân tử thường có thê lên tới hàng chục nghìn thậm chí hàng triệu [15]

Polysaccharid được phân lập từ Nhân sâm chú yếu bao gồm glucan và pectin [16,17] Pectin ở Nhân sâm có thành phân chủ yếu là homogalacturonan, rhamnogalacturonan

1, arabinogalaetans [15, L7] Các polysaccharid phân lập từ chỉ Panax được trình bay trong Bang 1.9

Bang 1.9 Cac polysaccharid được phân lập từ chỉ Panax

Tỉ lệ monosaccharid

TênhợpchẦ - | GIc Ara Rha Man GAÁ GleA Xyl Fue Fru

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH Tổng quan tài liệu

Tỉ lệ monosaccharid

Ten hop chat Gar Gie Ara Rha Man GalA GleA Xyl Fue Fru

Polyacetylen là một polyaleol không bão hoà với các liên kết ba, câu trúc của

polyacetylen thường bao gồm các hợp chất C-17 với cầu trúc cơ bản là hept-I-E-4- 4,6-diyne-3-ol [18] Do cầu trúc hoá học, hầu hết các polyacetylen đều có đặc tính thân dầu và không tan trong nước

Hai polyacetylen là thành phân kém phân cực đại dién cho chi Panax 1a panaxynol

và panaxydol Ngoài 2 polyacetylen chính, có hơn 20 polyacetylen khác cũng đã được phân lập tir chi Panax, nhw: panaxydiol, panaxatriol, panaxacol, panaxyne epoxyd, ginsenoyne A-K [19]

1.1.2.4 Cac hop chat phenolic

Bên cạnh các nhóm hợp chất kê trên, các hợp chất phenolic cũng đã được tim thay ở các bộ phận dùng khác nhau của các loài thuộc chi Panax

Theo 1i-Sang Kim và cộng sự (2016), tổng hàm lượng acid phenolie và flavonoid cao nhất trong lá, tiếp theo là rễ chính và rễ phụ của Nhân sâm Acid ferulic và acid m-coumaric là các acid phenolic chính trong rễ chính và rễ phụ, trong khi acid p-coumaric va acid m-coumaric la acid phenolic chính trong la Catechin là thành phần flavonoid chính trong rễ chính và rễ phụ, trong khi catechin va kaempferol

là thành phần flavonoid chính trong lá Acid linolenic và menadion là những

thành phần chính trong tất cả các bộ phận của Nhân sâm [20] Các hợp chất phenolic

phân lập từ chỉ Panax được trình bảy trong Bang 1.10

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH Tổng quan tài liệu

Bảng 1.10 Các hợp chất phenolie được phân lập từ chỉ Panax

Thành phần chính của tỉnh dầu trong các loài thuộc chỉ Panax thuộc nhóm

sesquiterpen hydroearbon (6-panasinsen, Ø-farnesen, ø-panasinsen, aromadendren, ø- neocloven, bicyclogermacren và (E}-caryophyllen) và sesquterpen aleol (spathulenol, ginsenol, panasinsenol A va panasinsenol B) Tỉnh đầu của các loài thuộc chỉ Panax khác nhau chủ yếu ở thành phần sesquiterpen hydrocarbon và các monoterpen [2 I]

Gần đây, Qiu và cộng sự (2008) đã sử dụng kĩ thuật GC/FID và GC/MS để định tính

và định lượng các tỉnh dầu có trong Nhân sâm Kết quả cho thấy có mẫu Sâm từ

3 năm tuổi có khoảng 36 terpenoid, trong đó hàm lượng ø-cadinol, a-bisabolol,

thujopsen tăng lên đáng kế khi độ tuôi của mẫu Sâm tăng lên [22]

12

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH Tổng quan tài liệu

1.1.3 Tác dụng dược lý

Hiện nay, Nhân sâm nói riêng và các loài khác thuộc chỉ Panax nói chung là một trong những loại thảo được được sử dụng phố biến trên toàn thế giới Tác dụng của ginsenosid đối với sức khoẻ con người đã được nghiên cứu chứng minh trong

nhiều thập kỉ Nó có tác dụng hữu ích đối với chức năng của hệ thần kinh, tim mạch

và hệ miễn dịch Hơn nữa nhiều nghiên cứu cho thấy ginsenosid còn được xem nhự chất chống ung thư và kháng khuẩn [23]

Các thành phần polysaccharid của Sâm gần đây được chú ý nhiều do các tác dụng

sinh học khác nhau mà chúng mang lại như điều hoà miễn dịch, kháng khuẩn, chống

đột biến, bảo vệ khỏi phóng xạ, chống oxy hoá, chống loét, chống trầm cảm, chống

nhiễm trùng huyết và chống viêm [24]

1.1.3.1 Tác dụng trên thần kinh

Ginsenosid Rbị và -Rgi đóng vai trò chính trong tác đụng bảo vệ thân kinh Ginsenosid Rb da duoc chimg minh làm tăng sự sống sót của tế bao thần kinh và

cải thiện sự phát triển của tế bảo thần kinh [25] G-Rbi bảo vệ tế bào thần kinh

hải mã khỏi tôn thương do thiếu máu cục bệ và cũng làm chậm quá trình chết tế bao

thần kinh do thiếu máu cục bộ não [26]

Ginsenosid Rgi, Rhi va protopanaxatriol (5-10 mg/kg) làm giảm đáng kế tình trạng

suy giảm trí nhớ ở chuột và tăng khả năng hưng phấn tại hồi hãi mã ở chuột bị

kích thích [27]

Ginsenosid Røi có tác dụng bảo vệ, chống lại tốn thương do thiểu máu não cục bộ

thoáng qua ở chuột bị tôn thương não [28] và cũng bảo vệ khỏi quá trình chết tế bào

thần kinh vỏ não do AB25-35 gây ra thông qua việc điều hòa yếu tổ hạt nhân kappa B (NF-xB)/nitric oxit (NO) [29]

Ginsenosid Rd được chứng minh có tác dụng cải thiện tốn thương do đột quy, do

thiếu máu cục bệ và kéo đài thời gian sống sót của tế bào thần kinh thông qua một số

cơ chế nhự phosphoinositide-3-kinase/AKT và protein kinase điều hòa tín hiệu phospho-extracellular (ERK), ức chế NF-xB, kênh ion nhạy cảm acid 1a, poly (ADP- ribose) polymerase-l, hoạt hóa tyrosine kinase, điều hòa hệ thống chống oxy hóa

nội sinh, bảo toàn điện thế màng ty thể, và giảm yếu tổ giải phóng cytochrom C va

gây ra qua trinh apoptosis [30]

Ginsenosid Re cé tac déng ức chế sự giảm hoạt động của H(+)/ATPase trong

chắn thương do thiếu máu cục bộ tái tưới máu não ở chuột [3]

Ginsenosid Rgs có tác dụng cải thiện rối loạn chức năng nhận thức và chứng viêm

thần kinh, đồng thời điều chính cả hoạt động acetylcholin va acetylcholin transferase trong vỏ não [32]

Tác dụng bảo vệ tế bào thần kinh của hai hợp chất polyacetylen là panaxynol (PNN)

và panaxydol (PND) đối với độc tính trên tế bào thần kinh vỏ não gây ra bởi

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH Tổng quan tài liệu

natri nitroprussid, các tế bào được ủ với PND và PNN ở các nồng độ khác nhau trong

24 giờ, sau đó cho tiếp xúc với natri nitroprussid trong I giờ Đánh giá tỷ lệ tế bào sống sót thông qua thử nghiệm MTT và sự phóng thich lactat dehydrogenase (LDH) Kết quả cho thấy, nhóm tế bào được ủ với PND và PNN có tý lệ sống sót cao hơn khi so sánh với nhóm chứng (chỉ tiếp xúc với natri nitroprussid) [33]

1.1.3.2 Tác dụng trên hệ tim mạch

Ginsenosid Rd làm giảm thiểu tốn thương do thiếu máu cục bộ cơ tim thông qua

cơ chế làm giảm điện tích nhồi máu cơ tim, giảm hoạt động của CK, LDH, cTnI huyết thanh [34]

Ginsenosid Rg¡ bảo vệ chống lại tôn thương do thiếu máu cục bộ não, tái tưới máu

ở chuột bằng cách điều chỉnh sự biểu hiện của thụ thể kích hoạt protease-l [35]

Ngoài ra, ginsenosid Rg: cé tac dụng bảo vệ tế bào cơ tim của chuột khỏi tình trạng thiếu oxy, tốn thương oxy hóa, tái tạo oxy thông qua chất chống oxy hóa và cân bằng nội môi canxi nội bào [36]

Ginsenosid Rbị có thể làm giảm sự hình thành mao mạch do tác động của chất

chi van beta thu thé estrogen và kích thích sản xuất NO trong tế bào nội mô

động mạch chủ ở người [37]

Ginsenosid Rg; lam tang san xuat NO théng qua sự gia tăng quá trinh phosphoryl héa

và biểu hiện eNOS [37]

1.1.3.3 Tác đụng chống khối u

Ginsenosid Rha có tác đụng chống khối u mạnh đối với dòng tế bào HCTI16 của

ung thư đại trực tràng Ginsenosid Rha: làm giảm sự tăng sinh của tế bào HCTI16 thông qua việc ức chế kinase protein có nguồn gốc tế bào gắn kết PDZ/T-LAK,

là một protein kinase serin/threonin hiện diện nhiều trong các tế bảo này [38]

Protopanaxadiol ức chế sự phát triển của khối u ở chuột xenograft HCT I I6 thông qua việc ức chế yếu tố hạt nhân kappa-chất tăng cường chuỗi ánh sáng của tế bào B hoạt hoa (NF-«B) va con duong tin higu c-Jun N-terminal kinase (JNK) [39]

Dịch chiết nước Sâm Mỹ liều 20, 40, 60, và 80 mg/ml làm thay đôi các đặc điểm hình thái và cơ học của tế bào ung thư biểu mô tế bào gan SMMC-7721 ở người,

tăng tính nhạy cảm với quá trình apoptosis [40] Hon nita, Sam Mỹ cũng có tác dụng chống ung thư ở các tế bào MCF-7 ung thư vú ở người thông qua việc ức chế sự tăng sinh của tế bào MCF-7 bằng những thay đỗi trong đường truyền tín hiệu protein kinase kích hoạt mifogen (MAPK) [41]

Ginsenosid Re co tác dụng chéng lại độc tính trên thận do cisplatin (m6t loat thuốc

trị ung thư) gây ra bang cach tre ché NF-KB và MAPK qua trung gian ROS [42] Ginsenosid Rp có tác dụng ức chế cả sự hình thành và sự tăng sinh tế bào ung thư

vú theo cơ chế làm giảm sự ôn định của protein IGF-IR trong các tế bào ung thư vú

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH Tổng quan tài liệu

Ngoài ra, ginsenoid Rp¡ với liều 20 mM gây ra bắt giữ chu kì và ức chế sự tăng trưởng

tế bào qua trung gian apoptosis [43]

Ginsenosid Rg3 ure chế sự xâm lấn của khối u và sự di căn của các tế bào u ác tính

F16 mà không làm suy giảm sự phát triển của tế bào và sự tăng sinh của các tế bao khối u [37] Ngoài ra, Rg› ức chế sự đi căn của ung thư buồng trứng (SKOV-3);

tác dụng ức chế một phân là đo ức chế hình thành mạch do khối u gây ra và giảm

khả năng xâm lần và biểu hiện MMP-9 (proteinase kim loại trong chất nền ngoại bao)

của té bao SKOV-3 [44]

Ginsan, một polysaccharid có tính acid làm giảm tỉ lệ u phôi gây ra bởi benzo-pyren

ở chuột bằng cách kích hoạt các nhánh của hệ thông miễn địch [45]

Một polysaccharid trung tính (WGPN), từ rễ của Nhân sâm, đã được thử nghiệm hoạt tính chống ung thư đơn độc và kết hợp với 5-fluorouraeil (5-EU) trên khối u S180

(Sarcoma- 180) ở chuột bằng đường tiêu hóa WGPN có khả năng ức chế sự phát triển của khối u S180 và khi kết hợp với 5-FU cho tác dụng hiệp đồng Ngoài ra, WGPN còn làm giảm tác dụng phụ của 5-EU đối với hệ thống miễn địch ở chuột mang S180

[46]

Polysaccharid MB40 đã được nghiên cứu trên các mô hinh déng vat ung thu in vivo

và kết quả của nghiên cứu này chỉ ra rằng khi phối hợp paclitaxel hoặc cisplatin với

MB40 có thể làm tăng hiệu quả điều trị và giảm các biến chứng rối loạn tạo máu

do hóa trị hoặc xạ trị toàn thân [47]

Panaxynol cho thấy khả năng ức chế sự tăng sinh của dòng tế bào ung thư gan HepG2 (khả năng ức chế thay đôi theo liều và thời gian tiếp xúc của các tế bào với panaxynol)

và góp phần thay đối hình thái của tế bào HepG2 Đồng thời, quan sát những tế bào

HepG2 được ủ với panaxynol, có sự gia tăng số lượng chất dị nhiễm sắc (heterochromatin) va ty thé trong tế bào, các phức hợp Golgi cũng phát triển lớn hơn,

nhân trở nên nhỏ hơn và nhiễm sắc thể cô đặc hơn so với các tế bào HepG2

bình thường (không được thêm panaxynol vào môi trường nuôi cấy) [48]

1.1.3.4 Tác dụng chống đái tháo đường

Các ginsenosid đã được nghiên cứu có tác dụng cai thién tinh trang khang insulin

ở gan, cơ xương và tế bào mỡ thông qua nhiều cơ chế khác nhau

Ginsenosid Rbi làm giảm sự tích tụ mỡ ở gan, ức chế sự phân giải lipid của tế bào

mỡ ở chuột béo phì và tiêu đường [49] và giảm đường huyết đói [50], góp phần

cải thiện kha năng dung nap glucose va tang dé nhay cua insulin

Ngoài ra, ginsenosid Rb; con lam giam bét sự xuất hiện của các biến chứng liên quan đến bệnh đái tháo đường týp 2, bao gồm sự suy giảm tiến triển chức năng tế bào /,

ton thương thận, tôn thương thân kinh và các biến chứng tim mạch đo đái tháo đường

[51]

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH Tổng quan tài liệu

Các nghiên cứu trước đây đã chỉ ra rằng trong tế bào mỡ, căng thăng lưới nội chất

có thể dẫn đến rối loạn chức năng dẫn truyền tín hiệu insulin, gây ra khang insulin của tế bào mỡ Trong điều kiện căng thắng của lưới nội chất, phức hợp ginsenosid Rk; + Rgs cé thể cải thiện tình trạng kháng insulin va tang hap thu glucose mang lai tác dụng bảo vệ trong các té bao 3T3-L1 [52]

Ở cơ xương, rồi loạn chức năng tỉ thể là yêu tố chính gây ra tình trang khang insulin Bằng chứng đã chỉ ra rằng Rg: đã kích hoạt các chức năng của ty thể, bao gồm

sản xuất ATP và tiêu thụ oxy, trong các tế bao C2C12, cai thién đường truyền tín hiệu

insulin, cai thiện chức năng ty thể, có tác dụng bảo vệ chống lại sự đề khang insulin

trong co xuong [53]

Ginsenosid K, san pham chuyển hóa cuối cùng của saponin protopanaxadiol có thé

cải thiện độ nhạy insulin thong qua việc kích hoạt đường truyền tín hiệu PI3K/Akt

ở chuột mắc bệnh tiêu đường [54]

Malonyl ginsenosid có tác dụng giảm bớt tình trạng tăng đường huyết, tăng lipid máu

và kháng insulin 6 bénh nhan dai thao đường týp 2 Trong thử nghiệm dung nạp glucose trong phic mạc, tiêm malonyl ginsenosid với liều 50 và 100 mg/kg/ngày,

trong 3 tuần làm giảm đáng kế mức đường huyết lúc đói và tăng thai glucose [55]

Ginsenosid Rb? kich hoạt đường truyền tín hiệu SIRTI và protein kinase kích hoạt AMP để giảm tích ty lipid do sự kết hợp của acid oleic và lượng glueose cao, do đó cải thiện đáng ké kha nang dung nap glucose [56]

1.1.3.5 Tac dung chéng béo phi

Ginsenosid Rbi có thê thúc đây sự hình thành mỡ, điều chỉnh mức độ perilipin trong

tế bào mỡ, điều chỉnh chuyên hóa glycolipid và cải thiện độ nhạy insulin và leptin

Tất cả những tác dụng này đều liên quan chặt chẽ đến việc giảm tích tụ mỡ ở gan,

ức chế sự phân giải lipid của tế bào mỡ,điều hòa chuyển hóa năng lượng, góp phần

chống béo phì [57]

Ginsenosid Rgi có thê ảnh hưởng đến chuyển hóa lipid ở chuột mắc bệnh tiêu đường

loại 2 đo streptozotocin gây ra, làm giảm tông lượng cholesterol (TC), triglycerid (TG) va cholesterol lipoprotein tý trong thap (LDL-C) [58]

Ginsenosid Re, -Rb và -Rb2 cho tac đụng ức chế lipase của tuyến tuy trong quá trình tiêu hoá thức ăn làm giảm tốc đệ giải phóng acid oleic từ triolein, góp phần giảm cân [59]

Nam 2012, Liu và cộng sự đã phat hiện ra rằng các loại saponin protopanaxadiol cho tác dụng ức chế hoạt động lipase tuyến tụy của lợn trong ống nghiệm ở liều 0,25—-1 mg/ml, trong khi protopanaxatriol không cho thấy tác dụng này [60]

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH Tổng quan tài liệu

1.1.3.6 Tác dụng kháng viêm

Ginsenosid Rbị làm giảm các cytokin tiền viêm (TNF-ø, IL-6, và/hoặc IL-1/) trong

mô mỡ và gan, có liên quan đến việc điều hòa con đường NF-xB, góp phần cải thiện tình trạng viêm [61]

Ginsenosid Røi ức chế con đường tín hiệu INK để phát huy tác dụng chống apxe và

chống viêm [56]

Ginsenosid Rg; lam giảm sản xuất NO và qua trinh apoptosis dé tang cường chức năng tiêu dao và cải thiện tình trạng viêm sớm sau khi cấy ghép [62]

Ginsenosid Rb; điều chỉnh biểu hiện GPRI20 trong đại thực bào RAW264.7,

làm giảm mức độ biểu hiện ïNOS và COX-2, cải thiện tình trạng viêm [63]

Protein C duoc xem như một dấu hiệu của tình trạng viêm CGinsenosid Re điều chỉnh

mức đệ protein C, góp phần cải thiện tình trạng viêm [64]

Ngoài ra, saponin khung PPD có khả năng làm giảm giải phóng các chất trung gian gây viêm như nitric oxit (NO), yếu tổ hoại tử khối u-ơ và prostaglandin E2 trong các

mô hỉnh viém i” vitro va in vivo [65]

Tác dụng kháng viêm của polysaccharid trong Nhân sâm được chứng minh qua

thử nghiệm sử dụng mô hình bệnh miễn dịch tự động, kết quả cho thấy có sự giảm

cac yéu to gay viém TNF-a va IFN-g trong té bao lympho trong hé théng mién dich

niêm mạc ruột của chuột bị viêm khớp do collagen [66]

PSG có khả năng kích thích quá trình thực bào của hệ thống lưới nội mô và sản xuất

kháng thể Ngoài ra, PSG làm tăng số lượng bố thê ở chuột lang và IgG huyết thanh

ở chuột [67]

Ginsan có thể khôi phục chức năng của tế bào Iympho T bị ức chế bởi chiếu xạ bằng

cách tăng biêu hiện mRNA của các cytokine loại Thl và Th2, và khôi phục mRNA của IFN- va Thl cytokin [68]

Panaxynol có khả năng ức chế nhiều loại lipoxygenase khác nhau bao gồm 5-lipoxygenase, 12-lipoxygenase dong bach cầu, 12-lipoxygenase dòng tiểu cầu và

15-lipoxygenase với IC50 lân lượt là 2, 1, 67 và 4 uM Khả năng ức chế mạnh nhất

có thê thay 1a trén enzyme 12-lypoxygenase dong bach cau (IC50 = 1 1M) Trong khi

đó, hợp chất falcarindiol cho hiệu quả ức chế kém hơn với IC50 cho các loại

lipoxygenase ké trén lan luot la 7, 48, >100 va 18 uM Trén cyclooxygenase, cả hai hợp chất này đều cho hoạt tính ức chế yếu (IC50 > 30 tM) [69]

1.1.3.7 Tác dụng kháng khuân — kháng nắm

Nghiên cứu được thực hiện bởi Wang và cộng sự (2013) đã cho thấy hoạt tính kháng khuẩn của Sâm Mỹ chống lại hai chủng vì khuẩn Propionibaclerium acnes (MIC 64 và 128 jig/ml) va Staphylococcus epidermidis (MIC 4,1 mg/ml) [70]

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH Tổng quan tài liệu

Các ginsenosid ít phân cực hơn (G-Rg›, -Røa, -Rgs, -Rsa, -Rgs, -Rk ) có hoạt tính kháng khuân cao hơn so với các ginsenosid phân cực (G-Røi, -Re, -Rbị, -Re, -Rba, -Rd )[70]

Ginsenosid Rb; có tác dung khang khuan manh (MIC < 1 mg/ml) trén Staphylococcus capitis, Candida albicans va c6 tac dung kim khuan v6i Staphylococcus epidermidis

va Klesiella pneumoniae Trong khi ginsenosid Rd chi cé tac déng khang khuan trên Candida albicans (MIC 9 g/ml) [71]

Gần đây, nhiều nhà khoa học đã tiễn hành một loạt các nghiên cứu về tương tác giữa

vi khuân và vật chủ Ngày càng nhiều bằng chứng cho thấy răng vi khuẩn bám dính

vào tế bào người là một bước quan trọng dẫn đến sự lây nhiễm và phát triển của chúng [72]

Các polysaccharid có tính axit được phân lập từ rễ của Nhân sâm có tác dụng chống lại sự kết dính cua Helicobacter pylori té bao biéu mé da day va hồng cầu [73] Hai polysaccharid có tính acid (PG-F2 và PG-HMW) của Nhân sâm chống lại sự bám dính của vi khuẩn qua đường miệng và đa đối với các dòng tế bào của người và chuột Bên cạnh đó, PG-F2 và PG-HMW còn ức chế đáng kế sự gắn của H pylori vao

tế bào biêu mô dạ dày người [74]

Polysaccharid dugc phân lập từ Nhân sâm có hoạt tính chống nhiễm trùng huyết mạnh

bằng cách kích thích đại thực bào tạo ra nhiều NO đề chống lại nhiễm trùng huyết do

Staphylococcus aureus [75]

Ginsan có thể bảo vệ chuột khỏi khả năng gây chét do nhiém Staphylococcus aureus với liều lượng 25 g/kg Tác dụng này có liên quan đến việc tăng cường thanh thai

vi khuẩn khỏi tuần hoàn, lá lách và thận Ngoài ra, ginsan còn tăng cường hoạt động

của đại thực bào để chống lại vi khuẩn [76]

Panaxynol (falcarinol) va panaxydol (falcarindiol) có tác dụng ức chế sự nảy mầm bào tử của các loại năm khác nhau ở nồng đệ tir 20-200 pg/ml [77]

1.1.3.8 Tác đụng chống oxy hoá

Superoxide dismutases (SODs), xúc tác quá trình chuyên superoxide thành hydrogen peroxid, duoc xem 1a enzym chéng oxy héa quan trong Mangan superoxid dismutase (MnSOD) la mét loại superoxid đismutases có ở ty thé [72] Ginsan có khả năng kích

hoạt MnSOD để loại bỏ các gốc tự do hoạt động [78]

Ngoài ra, các gốc tự do hoạt động sinh ra do chiếu tia bức xạ có thể bị loại bỏ bởi ginsan bằng cách tăng phiên mã superoxid dismuftases và glutathion peroxidase [68] 1.1.3.9 Tác dụng tăng cường sinh lực và chống mệt mỏi

Nhân sâm từ lâu đã được sử dụng như một loại thuốc để bồi bỗ sinh lực cho người bệnh, đo nó có tác dụng tăng cường sinh lực, bồi bộ khí huyết và chống mệt mỏi

Polysaccharide PGP có thể ức chế tôn thương ty thể và sưng tây do Fe?'L-Cys gây

ra PGP có thể ức chế sự hình thành sản phâm peroxy hóa lipid malondialdehyd

18

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH Tổng quan tài liệu

(MDA) trong não chuột, và tăng mức độ adenosin triphosphat (ATP), adenosin diphosphat (ADP), téng s6 adenylat (TAP) va điện tích năng lượng adenylat (AEC), cũng như tỷ lệ ATP/ADP và ATP/AMP trong tế bào gan và tăng hoạt động của creatin kinase (CK) ở cơ xương chuột trong tình trạng thiếu oxy mãn tính Từ đó, có thê kết luận rằng PGP bảo vệ ty thể bằng cách ức chế sự sung tay của ty thé và cải thiện quá trình chuyên hóa năng lượng [79]

Các polysaccharid trong Sâm có tác dụng chống mệt mỏi bằng cách giảm glutathion peroxidase, tang creatin phosphokinase, lactic dehydrogenase va malondialdehyd

Va dựa vào kết quả nghiên cứu, polysaccharid có tính acid cho tác dụng mạnh hơn polysaccharid trung tinh [80]

1.2 SAM VIET NAM

1.2.1 Danh phap

Tén Viét Nam: Sam Viét Nam [81]

Tên khoa hee: Panax vietnamensis Ha et Grushv., Araliaceae [81]

Tên khác: Sâm Ngọc Linh, Sâm Khu 5 (Sâm KŠ), Sâm trúc, Củ ngải rọm con,

cây thuốc giấu (dân tộc Xê-đăng) [8 I]

1.2.2 Đặc điểm hình thái

Sâm Ngọc Linh có dạng thân khí sinh thẳng đứng, màu lục hoặc hơi tím, nhỏ,

có đường kính thân khoảng 4-8 mm Thân rễ có đường kính 1-2cm, mọc ngang trên

hoặc dưới mặt đất độ 1-3cm, mang nhiều rễ nhánh và củ Sâm chỉ có một lá duy nhất

không rụng suốt từ năm thứ I đến năm thứ 3 và chỉ từ năm thứ 4 trở đi mới có thêm

2 đến 3 lá Lá mọc vòng ở đỉnh thân, kép chân vịt, gốc cuống lá không có gai hay

có phần phụ dạng gai nhỏ Cuống lá kép dai 6-12 mm, mang 5 la chét, lá chét ở chính giữa lớn hơn với độ đài 12-15 em, rộng 3-4 em Lá chét phiến hình bầu dục,

mép khía răng cưa, chóp nhọn, lá có lông ở cả hai mặt Cây 4-5 năm tuôi có hoa đơn, hình tan, cuống tán hoa dài 10-20 Mỗi tán có 60-100 hoa, cuống hoa ngắn 1-1,5 cm,

lá đài 5, cánh hoa 5, màu vàng nhạt, nhị 5, bau 1 6 véi 1 voi nhụy Quả dài 0,8 em- lem và rộng khoảng 0,5cm-0,6cm, sau hai thang bắt đầu chuyển từ màu xanh

đến xanh thẫm, vàng lục, khi chín ngả màu đỏ cam với một chấm đen không đều

ở đính quả Mỗi quả chứa một hạt, một số quả chứa 2 hạt và số quả trên cây bình quân khoảng 10 đến 30 qua [81]

1.2.3, Đặc điểm phát triển và phân bố

Vào đầu tháng 1 hàng năm, Sâm xuất hiện chồi mới sau mùa ngủ đông, thân khí sinh

lớn dần lên thành cây Sâm trưởng thành có I tán hoa Từ tháng 4 đến thang 6, cây nở hoa và kết quả Tháng 7 bắt đầu có quả chín và kéo dài đến tháng 9 Cuối tháng 10, phần thân khí sinh tàn lụi dần, lá rụng, để lại một vết sẹo ở đầu

củ Sâm và cây bắt đầu giai đoạn ngú đông hết tháng 12 Chính căn cứ vào vết seo trên đầu củ mỗi mùa đông đến mà người ta có thể nhận biết cây Sâm bao nhiêu tuôi,

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH Tổng quan tài liệu

phải ít nhất 3 năm tuôi tức trên củ có một sẹo (sau 3 năm đầu Sâm chỉ rụng một lá) mới có thé khai thác, khuyến cáo là trên 5 năm tuôi Mùa đông cũng là mùa thu hoạch tốt nhất phần thân rễ của Sâm [81]

Sâm Việt Nam được phát hiện ở độ cao từ 1.200 m trở lên, đạt mật độ cao nhất ở

khoảng từ 1.700-2.000 m dưới tân rừng già Sâm mọc tập trung dưới chân núi Ngọc Linh, một ngọn núi cao 2.578 m với lớp đất vàng đó trên đá granit dày trên

50 cm, có độ mùn cao, tơi xốp và rừng nguyên sinh còn rộng, nên được gọi là Sâm Ngọc Linh, tuy những nghiên cứu thực địa mới nhất cho thấy Sâm còn mọc ở núi Ngọc Lum Heo thuộc xã Phước Lộc, huyện Phước Sơn, tỉnh Quảng Nam, đỉnh núi Ngọc Am thuộc Quảng Nam, Đắc Giây thuộc Kontum, núi Langbian ở Lạc Dương, tỉnh Lâm Đồng cũng rất có thê có loại Sâm này Mọc đưới tán rừng âm, nhiều mùn, thích hợp với nhiệt độ ban ngày từ 20-25 °C, ban đêm 15-18 °C,

Sâm Ngọc Linh có thể sống rất lâu, thậm chí trên 100 năm, sinh trưởng khá chậm

Bệ phận dùng làm thuốc chủ yếu là thân rễ, củ và ngoài ra cũng có thể dùng lá và rễ

con [81]

1.2.4 Thành phần hoá học

1.2.4.1 Các hợp chất được phân lập từ thân rễ, rễ củ Sâm Việt Nam

Cho đến nay, các công trình nghiên cứu cho thấy có hơn 70 hợp chất saponin được phân lập từ Sâm Việt Nam, trong đó có khoảng 52 sapomin đã được phan lập từ thân

rễ và rễ củ và 19 sapomn tử bộ phận lá của Sâm Việt Nam đã được công bố Từ một

thứ của Sâm Việt Nam là P.vieinamensis var fuscidiscus, có 9 ginsenosid mới lần đầu phân lập [82, 83, 84, 85, 86]

Các saponin dân chất của 20(S)-protopanaxadiol:

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH Tổng quan tài liệu

Bảng 1.11 Các saponin dẫn chất của 20(S)-protopanaxadiol ở thân rễ và rễ củ Sâm VN

TT Tên Kiêu -Ri -Ra KLPT

Ara(f): a-arabinofuranosyl; Ac: acetyl; *: Saponin chinh

Ara(p): œ-L-arabinopyranosyl;

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH Tổng quan tài liệu

Hình 1.3 Câu trúc khung protopanaxatriol

Bảng 1.12 Các saponin dẫn chất của 20(S)-protopanaxatriol ở thân rễ và rễ củ Sâm VN

TT Tên Kieu -Ri -R2 -R3 KLPT

ll Y-E I -H -Glc?-Rha -Gle®-Gle 1108

12 Y-F I -H [6-Ac]-Gle?-Rha -Glc°-Gle 1150

13 G-Rhs I -H -Glc -CH3 634

14 V-Ris K -H -Glc -Glc 785

15 V-RIa N -H -Glc -H 672 l6 V-Rạ I -Gle?-Gle -Glc?-Glc -Glc 963

18 24(S) V-Rại N -H -Glc?-Gle -Glc 835 19_ 24(R)V-Rạ; N -H -Glc?-Gle -Glc 835

20 V-R¿; L -Gle?-Gle -OH -Glc 815

Ghi chu: G: Ginsenosid; P: Pseudo-ginsenosid; N: Notoginsenosid; V: Vina-ginsenosid; Glc B-D-glucopyranosyl; Xyl: B-D-xylopyranosyl; œ-Glc: œ-plucopyranosyl, Rha: ø-L-rhamnopyranosyl; Ac: acetyl; *: Saponin chính

22

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH Tổng quan tài liệu

8 V-Ri M -Glc?(6-Ac)-Rha -CHa 843

Các saponin dân chất của acid oleanolic

Bang 1.14 Cac saponin dan chat của acid oleanolic ở thân rễ và rễ củ Sâm VN

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH Tổng quan tài liệu

Ri=R2=H: acid oleanolic (O)

Hinh 1.5 Cau tric khung acid oleanolic

Ngoai saponin, 7 hợp chất polyacetylen cũng đã được phân lập từ thân rễ và rễ củ của

P viemamensis, trong đô có 5 hợp chất đã biét la falcarinol, heptadeca-1,8(E)-dien- 4,6-diyn-3,10-diol, và các đồng phân hoặc dẫn xuất của heptadeca-1,8(E)-đien-4,6- diyn-3,10-diol Và 2 hợp chất là hợp chất mới và đặc trưng là 10-acetoxy-heptadeca- 8(E)-en-4,6-diyn-3-ol va heptadeca-1,8,10(E)-trien-4,6-diyn-3,12-diol [87]

Hình 1.6 Các hợp chất polyacetylen được phân lập từ thân rễ và rễ củ của Sâm VN

1.2.4.2 Các hợp chất được phân lập từ lá Sâm Việt Nam

Võ Duy Huấn và cộng sự (1999) đã tiễn hành nghiên cứu thành phần hoá học của lá Sâm Việt Nam và đã phân lập và xác định được cấu trúc của 19 hợp chất saponin,

24

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH Tổng quan tài liệu

trong đó có I1 hợp chất saponin đã phân lập được từ thân rễ và rễ củ P vienamensis

và các loài Panax khác và 8 hợp chất là saponin dammaran mới được đặt tên trong ứng là vina-ginsenosid L1-L8 [87] Công thức của các hợp chất đã phân lập từ lá Sâm Việt Nam được trình bày ở Bảng 1.15

1.2.5 Tác dụng dược lý

1.2.5.1 Tác dung trên thần kinh trung ương

Ở các liều thấp 60 mg/kg và 120 mg/kg cao cồn lá Sâm Việt Nam có tác động rút

ngắn thời gian ngủ của pentobarbital ở chuột nhắt thử nghiệm, đạt ý nghĩa thống kê

với độ tin cậy 95% [88]

Thử nghiệm được thực hiện với những liều cao dần và ở liều cao 1800 mg/kg, cao

cồn lá Sâm Việt Nam lại thé hiện tác dụng ức chế thần kinh trung ương, kéo dai thời

gian ngủ của chuột nhắt do pentobarbital, còn ở liều 600 mg/kg và 1200 mg/kg thời

gian ngủ ở chuột nhất thử nghiệm không khác biệt so với chuột nhắt uống nước cất [88]

Rễ củ Sâm Việt Nam có tác dụng ức chế hệ thần kinh trung tương ở liều 2000 mg/kg

và kích thích hệ thần kinh trung ương ở liều 10-100 mg/kg Điều đó cho thấy có sự

tương đồng trong tác dụng trên hệ thần kinh trung ương như ức chế thần kinh trung

ương ở liều cao và kích thích thần kinh trung ương ở liều thấp [88]

1.2.5.2 Tác dụng chống stress

Tương tự như cao rễ, cao cồn lá Sâm Việt Nam liều 600, 1200 mg/kg déu thê hiện tác dụng phục hồi thời gian ngủ bị rút ngắn do stress, đưa trở về trạng thái bình thường

[88]

Ở liều 200 mg/kpg, tác động chống stress của saponin toàn phân lá Sâm Việt Nam

thé hiện rất rõ, đạt ý nghĩa thống kê với độ tin cậy 95% [88]

Với Sâm Việt Nam, cả rễ và lá, liều có tác động chống stress thì không ảnh hưởng đến thời gian ngủ ở nhóm không bị stress Điều này cho thấy tính thích nghỉ của

Sâm Việt Nam trong tác động chồng stress hơn hắn những thuốc tông hợp có tác dụng tương đương (Diazepam) [88]

1.2.5.3 Tác dụng tăng lực

Ở những liều 600, 1200, 1800 mg/kg, thời gian bơi lần thứ hai ở các chuột thử nghiệm đều không khác biệt đạt ý nghĩa thống kê so với thời gian bơi lần thứ nhất Tuy nhiên, sau khi dùng cao lá Sâm Việt Nam, tỷ lệ % thời gian bơi lần thứ hai/lần thứ nhất cao hơn so với lô đối chứng [88]

So với rễ củ Sâm Việt Nam, tác dụng tăng lực thể hiện ở những liều nhỏ (5-100 mg/kg) Ở đây, liều thé hiện tác dụng ở lá và rễ củ không tương đương nhau

và liều ở lá cao so với rễ củ Điều này có thể là do sự phối hợp đưa đến tác dụng của các thành phần có trong cao lá khác với thành phần hoạt chất trong cao rễ củ hay

cũng có thể là do cơ chế tác động khác nhau [88]

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH Tổng quan tài liệu 1.2.5.4 Tác dụng chống oxi hoá

Cao lá Sâm Việt Nam (nồng độ 5-100 ng/m]) ức chế sự tạo thành MDA, sản phẩm

sinh ra trong quá trình peroxy hoá lipid trong mô não Tác động này tương tự như Trolox, một đồng phân của vitamin E (nồng độ 100 wg/ml) là một chất chống

oxy hóa điển hình [88]

Với nghiên cứu trước đây, saponin của rễ củ Sâm Việt Nam có tác dụng ức chế

sự hình thành MDA ở nồng độ 50-500 ng/ml, chứng tỏ saponin cha lá Sâm Việt Nam

có tác dụng ở nồng độ thấp hơn [88]

26

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH Tổng quan tài

Bang 1.15 Cac saponin phan lập được từ lá Sâm Việt Nam

Tên Kiêu -Ri -R› KLPT Tên -Ri -Ra KLPT Tén -R

GY-IxX A -Gilc -Glc®-Xyl 916