Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của cây mã đề (plantago mảo l ) ở huyện triệu sơn tỉnh thanh hóa

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO UBND TỈNH THANH HÓA TRƯỜNG ĐẠI HỌC HỒNG ĐỨC LÊ THỊ THU HẰNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CÂY MÃ ĐỀ (PLANTAGO MAJOR L.) Ở HUYỆN TRIỆU SƠN TỈNH THANH HÓA LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC THANH HÓA, NĂM 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO UBND TỈNH THANH HÓA TRƯỜNG ĐẠI HỌC HỒNG ĐỨC LÊ THỊ THU HẰNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CÂY MÃ ĐỀ (PLANTAGO MAJOR L.) Ở HUYỆN TRIỆU SƠN TỈNH THANH HÓA LUẬN VĂN THẠC SĨ HĨA HỌC Chun ngành: Hóa học hữu Mã số: 8440114 Người hướng dẫn khoa học: TS Đỗ Thị Việt Hương THANH HÓA, NĂM 2019 Danh sách Hội đồng chấm luận văn Thạc sĩ khoa học theo Quyết định số 1366/QĐ- ĐHHĐ ngày 29 tháng năm 2019 Hiệu trưởng Trường Đại học Hồng Đức: Học hàm, học vị, Cơ quan Chức danh Họ tên Công tác Hội đồng PGS.TS Ngô Xuân Lương Trường Đại học Hồng Đức Chủ tịch TS Lê Nguyễn Thành Viện HL KH CNViệtNam Phản biện TS Đinh Ngọc Thức Trường Đại học Hồng Đức Phản biện PGS.TS.Vũ Quốc Trung Trường ĐHSP Hà Nội Ủy viên TS Trịnh Thị Huấn Trường Đại học Hồng Đức Thư ký Xác nhận Người hướng dẫn Học viên chỉnh sửa theo ý kiến Hội đồng Ngày 09 tháng 10 năm 2019 TS Đỗ Thị Việt Hương * Có thể tham khảo luận văn Thư viện trường Bộ môn i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận văn khơng trùng lặp với khóa luận, luận văn, luận án cơng trình nghiên cứu công bố Người cam đoan Lê Thị Thu Hằng ii LỜI CẢM ƠN Đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học Mã đề (Plantago major L.) huyện Triệu Sơn tỉnh Thanh Hóa hồn thành Phịng thí nghiệm Hóa dược Phịng thí nghiệm hợp chất thiên nhiên, khoa Hóa học, trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội Với lòng biết ơn sâu sắc, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến TS Đỗ Thị Việt Hương, người giao cho đề tài tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn thầy bạn bè Phịng thí nghiệm Hóa dược, Phịng thí nghiệm hợp chất thiên nhiên, thầy cô khoa Khoa học tự nhiên- Trường Đại học Hồng Đức giúp đỡ suốt trình làm luận văn Và cuối cùng, xin cảm ơn gia đình, đồng nghiệp, anh chị em bạn lớp thạc sĩ Hóa hữu K10 sát cánh bên tôi, quan tâm, động viên giúp đỡ tơi suốt thời gian học hồn thành luận văn Thanh Hóa, tháng năm 2019 Tác giả Lê Thị Thu Hằng iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii CHỮ VIẾT TẮT, KÝ HIỆU v DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU vi DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ vii MỞ ĐẦU .1 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan thực vật 1.2 Thành phần hố học hoạt tính sinh học CHƯƠNG 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VÀ THỰC NGHIỆM 14 2.1 Phương pháp nghiên cứu 14 2.2 Thực nghiệm 14 2.2.1Mẫu thực vật 14 2.2.2Điều chế cặn chiết 15 2.2.3Khảo sát định tính thành phần hóa học mẫu Mã đề phương pháp sắc ký khí khối phổ (GC-MS) .17 2.2.4Phân tích phần chiết ethyl acetate sắc ký lớp mỏng (TLC) 17 2.2.5 Phân tách phần chiết ethyl acetate sắc ký cột thường (CC) 17 2.2.6 Xác định hoạt tính chống oxy hóa cặn chiết 18 2.2.7 Khảo sát khả ức chế độ hoạt động enzyme α-glucosidase19 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 21 3.1 Khảo sát định tính hợp chất phần chiết ethyl acetate (EP) mẫu Mã đề phương pháp sắc kí khí khối phổ (GC-MS) 21 3.2.Phân tích phần chiết ethyl acetat (EP) phương pháp sắc ký lớp mỏng (TLC) 25 iv 3.3.Phân tách phần chiết ethyl acetate (EP) sắc ký cột thường (CC) 25 3.4.Khảo sát số số hóa học hoạt tính sinh học 33 3.4.1 Khảo sát hoạt tính chống oxi hóa 33 3.4.2 Hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase 34 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO 38 v CHỮ VIẾT TẮT, KÝ HIỆU TLC (Thin-layer Choromatography): Sắc kí lớp mỏng CC (Column Choromatography): Sắc kí cột NMR (Nuclear Magnetic Resonance Spectrocopy): Phổ cộng hưởng từ hạt nhân H-NMR (Proton Magnetic Resonance Spectroscopy): Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton δ: Độ dịch chuyển hóa học (ppm) vi DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Bảng 1.1: Các flavonoid tìm thấy lồi Mã đề 11 Bảng 2.1: Hiệu suất phần chiết mẫu Mã đề 16 Bảng 3.1: Các hợp chất xuất phần chiết EP 22 Bảng 3.2: Các phân đoạn chất từ dịch chiết EP Mã đề 26 Bảng 3.3: Kết khảo sát hoạt tính chống oxi hóa 34 Bảng 3.4: Kết khảo sát hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase 35 vii DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Hình 1.1 : Các phận Mã đề Hình 1.2: Alkaloid có Plantago major Hình 1.3: Dẫn xuất caffeic acid Plantago major Hình 1.4: Các glycoside iridoid loài Mã đề 12 Hình 2.1: Mẫu Mã đề tươi 15 Hình 2.2: Quy trình chiết mẫu Mã đề 16 Hình 3.1: Sắc đồ chạy GC - MS phần chiết EP 21 Hình 3.2: Các hợp phần có phần chiết ethyl acetate (EP) 24 Hình 3.3: Sắc ký mỏng khảo sát phân tách dịch chiết EP với hệ dung môi n-hexane/ethyl acetate (9:1, v/v) 25 Hình 3.4: Phổ cộng hưởng từ hạt nhận 1H NMR Chất 27 Hình 3.5: Cơng thức cấu tạo Chất (β-Sitosterol) 28 Hình 3.6: Phổ cộng hưởng từ hạt nhận 1H NMR Chất 29 Hình 3.7: Cơng thức cấu tạo Chất (β-sitosterol-3-O-β-D-glucoside) 30 Hình 3.8: Phổ cộng hưởng từ hạt nhận 1H NMR Chất 31 Hình 3.9: Cơng thức cấu tạo Chất (axit ursolic) 32 Hình 3.10: Phổ cộng hưởng từ hạt nhận 1H NMR Chất 32 Hình 3.11: Cơng thức cấu tạo Chất 33 Hình 3.12: Đồ thị thể khả ức chế enzyme α-glucosidase theo nồng độ phần chiết 35 30 J=7.5Hz, H-29), 4.20 (1H, d, J=7.9Hz, H-1’), 2.89 (1H, dd, J=4.5Hz, 8.0Hz, H-2’), 3.12 (1H, dd, J=4.5Hz, 8.0Hz, H-3’), 3.02 (1H, dd, J=4.5Hz, 8.0Hz, H-4’), 3.06 (1H, m, J=4.5Hz, 8.0Hz, H-5’), 0,46 (2H, dd, J=2.5Hz, 11.7Hz, H-6’), 3.43 (1H, d, J=4.5Hz, OH-2’), 3.42 (1H, d, J=4.5Hz, OH3’), 3.40 (1H, d, J=4.5Hz, OH-4’), 3.61 (1H, t, J=4.5Hz, OH-5’) Từ tính chất vật lý, số liệu phổ 1H-NMR cho ta xác định hợp chất β-sitosterol-3-O-β-D-glucoside Hình 3.7: Cơng thức cấu tạo Chất (β-sitosterol-3-O-β-Dglucoside) Nhóm phân đoạn 5: Hòa tan 3.3 gram mẫu EP ethyl acetate, đưa lên cột tách nhồi sẵn 60 gram silica gel, rửa giải gradient với hệ dung môi n-hexane/ ethyl acetate (15:1, v:v) Thu nhóm phân đoạn, kí hiệu EP 5.1 EP 5.5 Phân đoạn EP 5.3 rửa giải lần cột silica gel với hệ dung môi n-hexane / ethyl acetate (3:1, v:v), thu nhóm phân đoạn kí hiệu EP 5.3.1EP 5.3.4 Sau làm bay dung môi tự nhiên, nhóm phân đoạn EP 5.3.3 thu tinh thể hình kim, màu trắng kí hiệu Chất Cấu trúc hợp chất khảo sát máy đo cộng hưởng từ hạt nhân 31 Hình 3.8: Phổ cộng hưởng từ hạt nhận 1H NMR Chất Trên phổ 1H-NMR Chất xuất tín hiệu nhóm methyl δ 0.77 (H-23), 0.70 (H-26), 0.85 (H-25), 0.87 (H-24), 1.03 (H-27) hai nhóm methyl δ 0.82 (H-29), 0.90 (H-30) H-NMR (500MHz, CDCl3), δ (ppm): 3.45 (1H, m, H-3), 5.11 (1H, m, H-12), 0.77 (3H, s, H-23), 0.87 (3H, s, H-24), 0.85 (3H, s, H-25), 1.03 (3H, s, H-27), 0.82 (3H, d, J=6.5Hz, H-29), 0.90 (3H, s, J=6.5Hz, H-30) Từ tính chất vật lý, số liệu phổ 1H-NMR cho ta xác định hợp chất axit uroslic 32 Hình 3.9: Công thức cấu tạo Chất (axit ursolic) Nhóm phân đoạn 8: Hịa tan 3.1 gram mẫu EP ethyl acetate, đưa lên cột tách nhồi sẵn 60 gram silica gel, rửa giải gradient với hệ dung môi n-hexane/ ethyl acetate (15:1, v:v) Thu nhóm phân đoạn, kí hiệu EP 8.1 EP 8.7 Phân đoạn EP 8.2 rửa giải lần cột silica gel với hệ dung môi n-hexane / ethyl acetate (5:1, v:v), thu nhóm phân đoạn kí hiệu EP 8.2.1 EP 8.2.4 Ở nhóm phân đoạn EP 8.2.1 thu tinh thể màu trắng, hình kim, kí hiệu Chất Cấu trúc hợp chất khảo sát máy đo cộng hưởng từ hạt nhân Hình 3.10: Phổ cộng hưởng từ hạt nhận 1H NMR Chất 33 Phổ 1H NMR Chất có diện tín hiệu: proton olefin δH 5,31 (1H,t, J= 3,5 Hz, H-12); proton oxymethyl δH 3,17 (1H, dd, J = 4,5 6,5 Hz, H-3); proton methyl δH 2,90 (1H, dd, J = 4,0 14,0 Hz, H-18) proton nhóm methyl bậc ba δH=0,80-1,27 H-NMR (500MHz, CDCl3), δ (ppm): 3.17 (1H, dd, J=4.5Hz, 6.5Hz, H-3), 5.31 (1H, t, J=3.5Hz, H-12), 2.90 (1H, dd, J=14.0Hz, 4.0 Hz), 1.00 (3H, s, H-23), 0.80 (3H, s, H-24), 0.97 (3H, s, H-25), 0.85 (3H, s, H26), 1.19 (3H, s, H-27), 1.27 (3H, s, H-29), 0.96 (1H, s, H-30) Cấu trúc dự đoán chất 3β-Hydroxy-olean-12-en-28,29-dioic acid Hình 3.11: Cơng thức cấu tạo Chất (3β-Hydroxy-olean-12-en-28,29-dioic acid) 3.4.Khảo sát số số hóa học hoạt tính sinh học Các số tổng hàm lượng phenolic tổng hàm lượng flavonoid xác định khả bắt gốc tự khảo sát để đánh giá khả chống oxi hóa cặn chiết, đồng thời khảo sát khả ức chế độ hoạt động enzyme α-glucosidase 3.4.1 Khảo sát hoạt tính chống oxi hóa Kết xác định tổng phenolic tổng hàm lượng flavonoid thu kết khả quan việc chống oxi hóa Mã đề 34 Số liệu cụ thể xác đinh tổng phenolic tổng hàm lượng flavonoid nêu rõ bảng Bảng 3.3: Kết khảo sát hoạt tính chống oxi hóa Dịch chiết tổng MeOH Tổng phenolic Tổng flavonoid (mg/g) (mg/g) 70,77 25,72 Tổng hàm lượng flavonoid xác định 25,72 mg/g (tính theo quercetin) cao so với kết thu xác định hàm lượng flavonoid (tính theo lượng catechin) dịch chiết methanol loài Mã đề khác 23,91 mg/g Chỉ số tổng hàm lượng phenolic mức trung bình so với khác thuộc chi Plantago, khoảng 52,11~ 281,93 mg/g Kết thực nghiệm chứng tỏ Mã đề dược liệu thể hoạt tính chống oxi hóa tốt, phù hợp với nghiên cứu khoa học hoạt tính cơng bố trước 3.4.2 Hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase Các phần chiết ethyl acetate n-hexane đóng vai trị mẫu thử khảo sát hoạt tính giá trị nồng độ 0.5 μg/ml, μg/ml, μg/ml, 32 μg/ml 128 μg/ml Kết độ hấp thụ quang thu thống kê bảng 3.4 sau: 35 Bảng 3.4: Kết khảo sát hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase Giá trị STT Tên mẫu % ức chế tương ứng nồng độ IC50 128 32 0.5 (g/ml) g/ml g/ml g/ml g/ml g/ml HP 126.00 50.20 35.50 20.90 0 EP 28.46 58.64 52.20 37.00 27 Chất tham 181.3 chiếu Acarbose Hình 3.12: Đồ thị thể khả ức chế enzyme α-glucosidase theo nồng độ phần chiết Các mẫu thử HP EP hoạt tính ức chế enzyme thử với giá trị IC50 126 g/ml, 28.46 g/ml Trong kết dịch chiết ethyl acetate lại có hoạt tính ức chế với enzyme α-glucosidase cao gấp 4.4 lần so với cặn chiết n-hexane Đồng thời chất đối chứng Acarbose có IC50 183 g/ml, chất đối chứng dùng 36 hầu hết thí nghiệm khảo sát khả ức chế độ hoạt động enzyme α-glucosidase, thí nghiệm khảo sát này, hai phần chiết có IC50 nhỏ so với chất đối chứng, chứng tỏ phần chiết có hoạt chất kiểm soát enzyme α -glucosidase Đây kết khả quan để tiến hành thí nghiệm định hướng điều trị tiểu đường Như hai phần chiết dược liệu Mã đề có tiềm cao cho tác dụng điều trị bệnh tiểu đường type II Điều với thuốc Đông y theo kinh nghiệm dân gian sử dụng Mã đề cho việc điều trị bệnh tiểu đường 37 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Qua trình nghiên cứu Mã đề (Plantago major L.), thu kết sau: Đã xây dựng quy trình điều chế phần chiết từ Mã đề theo độ phân cực tăng dần dung môi chiết Kết thu hai phần chiết: phần chiết n-hexane (HP) ethyl acetate (EP) với hiệu suất phần chiết (so với lượng nguyên liệu khô) tương ứng là: 2.514% 4.222% Đã khảo sát thành phần hóa học hợp chất có phần chiết ethyl acetate phương pháp sắc ký khí khối phổ Kết phân tích phát 21 hợp chất có phần chiết EP, hợp chất: Globulol, 15-OH-lactone chlorophyll a, Hydroxychlorophyll b, Pheophytin a chiếm thành phần Đã phân tách bốn hợp chất từ phần chiết ethyl acetate (EP) Dựa vào phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H NMR nhận biết hợp chất phân lập từ cặn chiết EP β-sitosterol, β-sitosterol-3-O-β-D-glucoside, ursolic axit 3β-Hydroxy-olean-12-en-28,29-dioic acid Đã xác định số hóa học hoạt tính sinh học từ dịch chiết Mã đề Việt Nam: Tổng hàm lượng phenolic tổng hàm lượng flavonoid dịch chiết methanol là: 70,77mg/g 25,72 mg/g Kết khảo sát khả ức chế enzyme α-glucosidase cho thấy phần chiết EP có tác dụng ức chế mạnh phần chiết HP với IC50 là: 28.46 µg/ml, 126 µg/ml Kiến nghị: Nghiên cứu tiếp hoạt tính sinh học hợp chất nhận nhằm phát hợp chất có hoạt tính sinh học 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Võ Văn Chi (1996), Từ điển thuốc Việt Nam, trang 213 Dược Điển Việt Nam III (2002) Bộ Y tế trang 39 Đỗ Tất Lợi (1986) Những thuốc vị thuốc Việt Nam.trang 231-233 Tiếng Anh Ahmed, Z.F., Rizk, A.M., Hammouda, F.M., 1965 Phytochemical studies of egyptian Plantago species (Glucides) Journal of Pharmaceutical Sciences 54, 1060–1062 Ahmed, Z.F., Hammouda, F.M., Rizk, A.M., Wassel, G.M., 1968 Phyochemical studies of egyptian Plantago species Planta Medica 4, 404– 410 Ahmad, M.S., Ahmad, M.U., Osman, S.M., 1980 A new hydroxyolefinic acid from Plantago major seed oil Phytochemistry 19, 217–2139 Ahmad, M., Rizwani, G.H., Aftab, K., Ahmad, U.V., Gilani, A.H., Ahmad, S.P., 1995 Acteoside: a new antihypertensive drug Phytotherapy Research 9, 525–527 Andary, C., Wylde, R., Laffite, C., Privat, G., Winternitz, F., 1982 Structures of verbascoside and oroban choside, caffeic acid sugar esters from Orobanche rapum-genistae Phytochemistry 21, 1123–1127 Bakker, M.I., Baas, W.J., Sum, D.T.H.M., Koloffel, C., 1998 Leaf wax of Lactuca sati6a and Plantago major Phytochemistry 47, 1489–1493 10 Bohm, H., Boeing, H., Hempel, J., Raab, B., Kroke, A., 1998 Flavonols, flavones and anthocyanins as native antioxidants of food and their possible role in the prevention of chronic diseases Zeitschrift fur Ernahrungswissenschaft 37, 147–163 39 11 Chang, I.M., Yun, H.S., Kim, Y.S., Ahn, J.W., 1984 Aucubin: potential antidote for alpha-amanitin poisoning Clinical Toxicology 22, 77–85 12 Chang, I.M., 1997 Antiviral activity of aucubin against hepatitis B virus replication Phytotherapy Research 11, 189– 192 13.Chang, I.M., 1998 Liver-protective activities of aucubin derived from traditional oriental medicine Research Communications in Molecular Pathology and Pharmacology 102, 189–204 14 Chatterton, N.J., Harrison, P.A., Thornley, W.R., Bennett, J.H., 1990 Sucrosyloligosaccharides and cool temperature growth in 14 forb species Plant Physiology and Biochemistry 28, 167–172 15 Davini, E., Lavarone, C., Trogolo, C., Aureli, P., Pasolini, B., 1986 The quantitative isolation and antimicrobial activity of the aglycone of aucubin Phytochemistry 25, 2420–2422 16 Gorin, A.G., 1966a Polysaccharides from Plantago major leaves I Analysis of monosaccharide composition of polysaccharide complex Chemical Abstracts 64, 8277 17 Gorin, A.G., 1966b Polysaccharides from Plantago major leaves II Pectic acid Chemical Abstracts 64, 11552 18 Gorin, A.G., Maksyutina, N.P., Kolesnikov, D.G., 1966 New ulcer remedy from the leaves of Plantago major Chemical Abstracts 65, 17581 19 Guil, J.L., Rodriguez-Garcia, I., Torija, E., 1997 Nutritional and toxic factors in selcted wild edible plants Plant Foods for Human Nutrition 51, 99–107 20 Guil, J.L., Torija, M.E., Gime´nez, J.J., Rodrı´guez, I., 1996 Identification of fatty acids in edible wild plants by gas chromatography Journal of Chromatography A 719, 229– 235 40 21 Handjieva, N., Spassov, S., Bodurova, G., et al., 1991 Majoroside, an iridoid glucoside from Plantago major Phytochemistry 30, 1317–1318 22 H Chen, X Yan, W Lin, L Zheng, and W Zhang, “A New Method for Screening a-Glucosidase Inhibitors and Application to Marine Microorganisms,” Pharm Biol., vol 42, no 6, pp 416–421, 2004 23 Herbert, H.M., Maffrand, F.P., Taoubi, K., Augereau, J.M., Fouraste, I., Gleye, J., 1991 Verbascoside isolated from Lantana camara, an inhibitor of portein kinase C Journal of Natural Products 54, 1595–1600 24 Kawashty, S.A., Gamal-el-din, E., Abdalla, M.F., Saleh, N.A.M., 1994 Flavonoids of Plantago species in Egypt Biochemical Systematics and Ecology 22, 729–733 25 Kimura, Y., Okuda, S., Nishibe, S., Arichi, S., 1987 Effects of caffeoylglycosides on arachidonate metabolism in leukocytes Planta Medica 53, 148–153 26 Lin, C.C., Shieh, D.E., 1996a The anti-inflammatory activity of Scutellaria rivularis extracts and its active components, baicalin, baicalein and wogonin American Journal of Chinese Medicine 24, 31–36 27 Lin, C.C., Shieh, D.E., 1996b In vivo hepatoprotective effect of baicalein, baicalin and wogonin from Scutellaria rivularis Phytotherapy Research 10, 651–654 28 Long, C., Moulis, C., Stanislas, E., Fouraste´, E., 1995 L%aucuboside et le catapol dans les feuilles de Plantago lanceolata L., Plantago major L et Plantago media L Journal de Pharmacie de Belgique 50, 484–488 29 Matsuzaki, Y., Kurokawa, N., Terai, S., Matsumura, Y, Kobayashi, N., Okita, K., 1996 Cell death induced by baicalein in human hepatocellular carcinoma cell lines Japanese Journal of Cancer Research 87, 170–177 30 Maksyutina, N.P., 1971b Hydroxycinnamic acids of Plantago major and Pl lanceolata, Chemistry of Natural Compounds, 7, 795 41 31 Mironov, V.A., Vasil’ev, G.S., Matrosov, V.S., et al., 1983 Physiologically active alcohols from great plantain Khimiko- farmatsevticheskii Zhurnal 17, 1321–1325 32 Miyase, T., Ishino, M., Akahori, C., Ueno, A., Ohkawa, Y., Tanizawa, H., 1991 Phenylethanoid glycosides from Plantago asiatica Phytochemistry 30, 2015–2018 33 Mølgaard, P., 1986 Population genetics and geographical distribution of caffeic acid esters in leaves of Plantago major in Denmark Journal of Ecology 74, 1127–1137 34 Moongkarndi, P., Bunyapraphatsara, N., Srisukh, V., Wagner, H., 1991 The inhibitory activity in 5-lipoxygenase pathway of hispidulin from Millingtonia hortensis Linn f Journal of the Science Society of Thailand 17, 51–56 35 Murai, M., Tamayama, Y., Nishibe, S., 1995 Phenylethanoids in the herb of Plantago lanceolata and inhibitory effect on arachidonic acidinduced mouse ear edema Planta Medica 61, 479–480 36 Nishibe, S., Ono, K., Nakane, H., Kawamura, T., Noro, Y., Tanaka, T., 1997 Studies on constituents of Plantaginis herba Inhibitory effects of flavonoids from Plantago herb on HIV-reverse transcriptase activity Natural Medicines 51, 547–549 37 Noro, Y., Hisata, Y., Okuda, K., et al., 1991 Pharmacognostical studies of Plantaginis herba (VII) on the phenylethanoid contents of Plantago spp Japanese Journal of Pharmacognosy 1, 24–28 38 Obolentseva, G.V., Khadzhai, Y.I., 1966 Pharmacological study of Plantaglucide (Plantago major leaf extract) used in the treatment of an acid gastritis and peptic ulcer Farmakologiya i Toksikologiya 29, 469–472 (English abstract) 42 39 Oritz de Urbina, A.V., Martin, M.L., Ferna´ndez, B., San Roma´n, L., Cubillo, L., 1994 In vitro antispasmodic activity of peracetylated penstemonoside, aucubin and catapol Planta Medica 60, 512–515 40 Pailer, V.M., Haschke-Hofmeister, E., 1969 Inhaltstoffe aus Plantago major Planta Medica 17, 139–145 41 Ravn, H., Nishibe, S., Sasahara, M., Li, X., 1990 Phenolic compounds from Plantago asiatica Phytochemistry 29, 3627 42 Jansson, O., 1974 Phylloquinone (vitamin K1) levels in leaves of plant species differing in susceptibility to 2,4dichlorophenoxyacetic acid Physiologia Plantarum 31, 323–325 43 Recio, M.C., Giner, R.M., Rı´os, J.L., 1994 Structural considerations on the iridoids as anti-inflammatory agents Planta Medica 60, 232–234 44 Rice-Evans, C.A., Miller, N.J., Paganga, G., 1996 Structure antioxidant activity relationships of flavonoids and phenolic acids Free Radical Biology and Medicine 20, 933–956 45 Rohrer, D.C., 1972 The crystal and molecular structure of planteose dihydrate Acta Crystallographica B 28, 425– 433 46 Rojas, I.R., 1968 Contribucion al estudio quimico del llanten (Plantago major L.) Anales de la Facultad de Quimicay Farmacia 20, 146–150 47 Sasaki, H., Nishimura, H., Morota, T., et al., 1989 Immunosuppressive principles of Rehmannia glutinosa var hueichingensis Planta Medica 55, 458–462 48 Samuelsen, A.B., Lund, I., Djahromi, J.M., Paulsen, B.S., Wold, J.K., Knutsen, S.H., 1999a Structural features and anti-complementary activity of some heteroxylan polysaccharide fractions from the seeds of Plantago major L Carbohydrate Polymers 38, 133–143 43 49 Schneider, G., 1990 Arzneidrogen, Ein Kompendium fuăr Pharmazeuten, Biologien und Chemiker Wissenschaftsverlag, Mannheim, Germany, p 131 50 Shoyama, Y., Matsumoto, M., Nishioka, I., 1987 Phenolic glycosides from diseased roots of Rehmannia glutinosa var purpurea Phytochemistry 26, 983–986 51 Skari, K.P., Malterud, K.E., Haugli, T., 1999b Radical scavengers and inhibitors of enzymatic lipid peroxidation from Plantago major, a medicinal plant Poster 495 at 2000 Years of Natural Products Research — Past, Present and Future, Amsterdam, The Netherlands 52 Skari, K.P., Malterud, K.E., Haugli, T., 1999a Radical scavengers and inhibitors of enzymatic lipid peroxidation from Plantago major, a medicinal plant In: Kumpulainen, J.T., Salone, J.T (Eds.), Proceedings of the 2nd International Conference on Natural Antioxidants and Anticarcinogens in Nutrition, Health and Disease The Royal Society of Chemistry, Cambridge, pp 200–202 53 Smolenski, S.J., Silinis, H., Farnswoth, N.R., 1974 Alkaloid Screening IV Lloydia 37, 30–61 54 Taskova, R., Handjieva, N., Evstatieva, L., Popov, S., 1999 Iridoid glucosides from Plantago cornuti, Plantago major and Veronica cymbalaria Phytochemistry 52, 1443–1445 55 V Dewanto, X Wu, K K Adom, and R H Liu, “Thermal Processing Enhances the Nutritional Value of Tomatoes by Increasing Total Antioxidant Activity Thermal Processing Enhances the Nutritional Value of Tomatoes by Increasing Total Antioxidant Activity,” J Agric Food Chem., vol 50, pp 3010–3014, 2002 44 56 Wagner H., 1987 Immunostimulants from higher plants In: Hostettmann K., Lea P.J (Eds.), Biologically Active Natural Products Clarendan press, Oxford 57 W Hakamata, M Kurihara, H Okuda, T Nishio, and T Oku, “Design and screening strategies for alpha-glucosidase inhibitors based on enzymological information.” Curr Top Med Chem., vol 9, no 1, pp 3– 12, 2009 58 Xiong, Q.B., Kadota, S., Tani, T., Namba, T., 1996 Antioxidative effects of phynyletanoids from Cistanche deserticola Biological and Pharmaceutical Bulletin 19, 1580–1585 59 Yokozawa, T., Dong, E., Liu, Z.W., Shimizu, M., 1997 Antioxidative activity of flavones and flavonols in vitro Phytotherapy Research 11, 446– 449 60 You, K.M., Jong, H.G., cyclooxygenase/lipoxygenase Kim, from H.P., 1999 human Inhibition platelets of by polyhydroxylated/methoxylated flavonoids isolated from medicinal plants Archives of Pharmacal Research 22, 18– 24 61 Yuting, C., Rongliang, Z., Zhongjian, J., Yong, J., 1990 Flavonoids as superoxide scavengers and antioxidants Free Radical Biology and Medicine 9, 19–21 62 Zennie, T.M., Ogzewalla, C.D., 1977 Ascorbic acid and vitamin A content of edible wild plants of Ohio and Kentucky Economic Botany 31, 76–79 63 Zhou, Y.-C., Zheng, R.-L., 1991 Phenolic compounds and analogs as superoxide anion scavengers and antioxidants Biochemical Pharmacology 42, 1177–1179