đề cương khóa luận tốt nghiệp nuôi cấy mô cây bắt mồi drosera spp

Lidochon de tai Nghiên cứu gần đây tir Dai hoc Curtin tai Uc, đã phát hiện khoáng hơn 25% các loài thực vật ăn thịt trên thế giới có nguy cơ tuyệt chủng.. Bên cạnh việc có tác dụng tiêu

ỦY BAN NHÂN DÂN TP HÒ CHÍ MINH TRUONG DAI HOC SAI GON

NGUYEN THUY DUONG

DE CUONG KHOA LUAN TOT NGHIEP

NUOI CAY MO CAY BAT MOI DROSERA SPP

NGANH: SU PHAM KHOA HOC TU NHIEN

TRINH DO: DAI HOC

MÃ NGÀNH: 7140247

TP HÒ CHÍ MINH, THÁNG 09 NĂM 2022

ỦY BAN NHÂN DÂN TP HÒ CHÍ MINH

TRUONG DAI HOC SAI GON

NGUYEN THUY DUONG

DE CUONG KHOA LUAN TOT NGHIEP

NUOI CAY MO CAY BAT MOI DROSERA SPP

NGANH: SU PHAM KHOA HOC TU NHIEN

TRINH DO: DAI HOC

MÃ NGÀNH: 7140247 GIANG VIÊN HƯỚNG DÂN: TS ĐẶNG THỊ NGỌC THANH

TP HÒ CHÍ MINH, THÁNG 09 NĂM 2022

)I0E2 000 1a 1

L Lido chom dé taicccccccccccccccccccccccecccscesevevsvevavevevsvsvevsvavevsvsvevsvavevavscevsvscevassesvsesevevseees 1

2 Mục tiêu nghiên cứu 2c 2201121111211 1211 1111115111511 101 111181581 1

3 Đôi tượng nghiên CứU sc SE E1 E1 121111 1E 111tr ae 1

NT (009000 03) 0xăšẽäiiiiiiiiiiiiẳIẰẶ 2

BH i0 /ni 30 nouổỔ5ỪỲỶỀỒẦIẦẢ 2

6 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tải SH HH Hee 2

CHƯƠNG I: TÔNG QUAN TÀI LIỆU -5555:2222cct2EEttrtttEtrrrrrrtrrrrrrrrrree 3

1.1 Đặc điểm giống thực vật Drosera spp - 5 s2 E22 Hee 3

1.1.1 Đặc điểm phân loài 5 s21 E1 E11 112111011 E12111 121111 tre, 3 1.1.2 Đặc điểm phân bồ 5-5 St 12171211 2111111 1121110101211 1g rya 4

1.1.3 Đặc tính sinh thái và sinh học 0202021119911 155551111 syy 4

1.2 Đặc điểm giống thực vật Byblis spp - 5-1 SE E12 12H re rưey 5

1.2.1 Đặc điểm phân loạI - -L c1 2212221222111 111121152111 111581150112 11111121 kxyg 6

1.2.2 Đặc điểm phân bồ 5-5 2s 1 EE1712112111111 211211101 12111 nga 7

1.2.3 Đặc tính hình thái và sinh học - c1 111 n 9S 91999535180 580 1115111 ky say 7

1.3 Giá trị và tầm quan trọng - tình hình nghiên cứu - 5c sccxcEEeExcrerxerrxe 9

1.3.1 Giá trị và tằm quan tTỌng - s c s21 1112112121111 1 ng He 9

1.3.2 Tinh hình nghiên cứu c2 c1 2211222122111 1151151112111 5 111115111 9 1.4 Sơ lược về nhân giống in vitfO -ss- s t E11 211211211 E1 12t Hee 10

MUC LUC

1.5 Quy trình nhân giống Drosera spp và Byblis spp - 5 chen lãi 1.5.1 Điều kiện nhân giống in vitro trong giống Drosera spp và Byblis spp ll 1.5.2 Môi trường MS cải tién str dung trong nhân giống Drosera spp va Byblis

1 II

CHƯƠNG 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 5:25 S2 2212211221 2Eee 14

2.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu -sc S1 E11 1182211 nghe 14 2.1.1 Thời gian nghiên cứu - c2 2c 1211222111 111 111811511511 120111 1125111 ke 14

2.1.2 Địa điểm nghiên cứu - 5: cc S 1 1111211112112 101 1 tre 14 2.2 Bồ trí thí nghiệm - ¿15t SE E112 11102121121111 1 21111121 12tr rêu 14

2.3 Vật liệu nghiên cứu - - c1 211112111211 1211 1111112111111 1 1111k ke rệt 14

2.4 Thiết bị và hóa chất cà HH HH hư ưàn 14 2.4.1 ThiẾt Đị ác HH HH HH HH HH Heo 14

2.5 Phương pháp nghiên CỨU - - - E2 1 2212221221112 11121151111 1115111511 18111 151111 rky 16 2.5.1 Khử trùng hat, tạo cây con in vitro làm nguyên liệu ban đầu 16 2.5.2 Tạo cụm chồi từ đoạn thân, lá, rễ Drosera spp và Byblis spp - 17

CHƯƠNG 3 KẼT QUÁ NGHIÊN CỨU DỰ KIỂN 5c 5c Sxcsczxcxzzreez 19

3.1 Kết quả khử trùng hạt, tạo cay con in vitro làm nguyên liệu ban đầu 19 3.2 Kết quả thí nghiệm tạo cụm chồi từ đoạn thân, lá, rễ Drosera spp va Byblis spp không qua giai đoạn chuyên sang MS - 1 s21 1E E122 212121 rre 20 3.3 Tạo cụm chi từ đoạn thân, lá, rễ Drosera spp va Byblis spp qua giai đoạn chuyền sang MS -.- 5S 12 1 1121111 121111012121 21211 H1 ng ng ro 20

3.4 Tạo rễ từ đoạn thân -S 2S 121112111 511151 111111111111 111111 1111110111111 2121 re 20

3.5 Tạo cây hoàn chỉnh - c1 2.12221221112211 1551 1511111151151 11 55 1111181111 e key 20

TAI LIEU

PHU LUC

THAM KHẢO Đà 9S 111112112111 2121 11211110115 12121 rye

MO DAU

1 Lidochon de tai

Nghiên cứu gần đây tir Dai hoc Curtin tai Uc, đã phát hiện khoáng hơn 25% các loài thực vật

ăn thịt trên thế giới có nguy cơ tuyệt chủng Nguyên nhân là do sự biến đổi khí hậu toàn cầu, nạn săn trộm trái phép, khai phá đất dé phát triển nông nghiệp và khai khoáng ngày cảng tăng [9] Bên cạnh việc có tác dụng tiêu diệt các loài côn trùng gây hại, các loài thực vật ăn thịt còn được sử dụng trong thực phẩm, dược phẩm và kiến trúc Trong thời đại của kinh tế và thương mại hóa ngày nay, con người dần quan tâm đến việc làm mới không gian nhà ở bằng cây cảnh và dần có nhiều người bắt đầu có xu thể thích thú với vẻ đẹp mới lạ của các loài cây

ăn thịt

Drosera spp va Byblis spp là một loại cây bắt mỗi mang nhiều đặc điểm khác lạ so với các

loại thực vật khác Chúng có giá trị dược tính rất lớn như điều trị các bệnh như ung thư, hen

suyến, ho gà , Ngoài ra chúng có khả năng cảm ứng, tiết ra nhiều loại hợp chất thơm, ngọt

đề thu hút côn trùng và đặc biệt chúng tiết ra các giọt keo không bị khô và mất đi dưới ánh

sáng Mặt Trời, chính vì vậy khi để cây dưới ánh sáng Mặt Trời ở điều kiện thích hợp sẽ xuất

hiện màu sắc rất đẹp Tuy nhiên theo danh sách đỏ của các thực vật bị đe dọa của Châu Âu thì trong tự nhiên, các loài Drosera ngày càng trở nên khan hiếm Vì thể hiện nay nhiều quốc gia

đã ban hành các luật để bảo vệ chúng Loài thực vật ăn thịt này có cơ hội thị trường nhỏ do

điều kiện nuôi trồng khó khăn hoặc nhân giống phức tạp và không phô biến trên thị trường như các loài cây ăn thịt khác

Chính vì những lí do trên, đề tài “Nuôi cấy mô cây bắt mỗi Drosera spp.” dugc thuc hién, nhằm tìm ra môi trường nuôi cấy với nồng độ các chất điều hòa sinh trưởng thích hợp nhất cho việc nhân giông cây Drosera spp

2 — Mục tiêu nghiên cứu

Tìm ra môi trường phù hợp nhất trong các chương trình biệt hóa in vitro tạo chồi, rễ và cây hoàn chính đối với Drosera spp và Byblis spp

3 Đối tượng nghiên cứu

Đề tài nghiên cứu trên giống Drosera spp và Byblis spp với hai loại hormone cytokinin và auxin

4 — Nội dung nghiên cứu

Tác động của các hormone thực vật lên sự tạo chối, rễ và cây hoàn chính cua Drosera spp và

Byblis spp

5 _ Phạm vi nghiên cứu

Hormone tao chéi gidi han trong hai loai cytokinin la BA va kinetin; hormone tao ré giới hạn trong một loại auxin là NAA

6 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài

Kết quả của đề tài này góp phần bỗ sung tài liệu về phương pháp nhân nhanh các giống cây Drosera spp và Byblis spp Từ đó cung cấp nguồn nguyên liệu mô thực vật cho các nghiên

cứu tách chiết hoạt chất sinh học có trong cây vỀ sau

CHUONG 1: TONG QUAN TAI LIEU

1.1 Dac diém giống thực vật Drosera spp

Chi Drosera là một chi lớn trong nhóm thực vật ăn thịt Drosera có nguồn gốc từ khắp

nơi trên thế giới, trừ Nam Cực Loài đầu tiên trong chỉ được mô tả bởi nhà thực vật học Charles Darwin va hién nay, loai Drosera co it nhat 244 loai

Các loài Drosera bản địa ở châu Âu được bảo vệ như ở Đức, Áo và Thuy Si, Phan Lan,

Hungary, Phap, Bulgaria Tai hai trong ba khu vye phan bé chinh, 6 Nam Phi và Úc, môi trường sông của những Drosera phải chịu sức ép mạnh mẽ từ con người Cùng lúc với các loài có nguy cơ cao ở Nam Phi là các loài ở Western Cape và Madagascar Ở Nam Mỹ và Caribe, các loài Drosera ở một số khu vực được coi là nguy cấp[2]

1.1.1 Đặc điểm phân loài

O Loai Drosera finlaysoniana

Gidi: Plantae (Thuc vật)

Ngành: Angiospermae (Thue vat hat kin)

Lớp: Eudicots (Thực vật hai lá mam)

Phân lớp: Caryophyllidae (Cam chuéng)

Ho: Droseraceae

Chi: Drosera

Loài: Drosera finlaysoniana

O Loai Drosera cucullata

Gidi: Plantae (Thuc vật)

Ngành: Angiospermae (Thue vat hat kin)

Lớp: Eudicots (Thực vật hai lá mam)

Phân lớp: Caryophyllidae (Cam chuéng)

$: ` +

a

Hinh 1.1 Vung phan bé loai Drosera finlaysoniana va Drosera cucullata

https://powo.science.kew.org/

1.1.3 Đặc tinh sinh thai va sinh hoc

Điểm chung của loài Drosera là cây thân thảo, mềm, mảnh nhỏ Đặc trưng của lá Drosera là bề mặt của lá dày đặc với những sợi lông tuyến tiết ra một chất nhầy nhằm

thu hút côn trùng nhỏ, khi chạm vào chất tiết chúng sẽ bị dính lại Xúc tu của lá có thê

di chuyển nên được xếp chúng vào nhóm “bẫy môi chủ động” Quả Drosera dạng túi (nang) gồm 2 hai phần Khi vỏ quả khô chúng sẽ nứt ra và hạt sẽ rơi quạn mặt đất Hạt

có màu đèn, thường hình tròn và thường có màng nỗi trên bề mặt Cây Drosera sinh sản hữu tính bằng hạt Cây có thê tự thụ phấn hay thụ phần nhờ gió và côn trùng Hạt được phóng thích khi nang hạt nứt ra Loài Drosera thường sông ở khu vực bãi lầy,

đầm lầy Nhiệt độ thích hợp trung bình từ 51°F (5°C) và cao tới hơn 86°F (30°C)[2]

O Loai Drosera finlaysoniana

Thân cây có thể cao tới gần 45 cm (điển hình hơn là 20 em), các lá có cuồng hẹp dài tới

15 em xen kẽ xung quanh thân cây Màu sắc có phân thay đổi, điển hình là màu xanh lá chanh trong suốt với các xúc tu không màu hoặc hồng nhạt, nhưng có thể có các xúc tu

đỏ tươi và đỏ ửng, đặc biệt ở những lá già hơn Hoa màu trắng đến hồng sáng hoặc màu hoa cà trên những chiếc cuống dài, những cánh hoa rộng và hình trứng hoặc hình trứng Tất cả các bộ phận của cây đều có lớp phủ dày đặc của bộ ba tuyên nhỏ màu

trang[7].

Hình 1.2 Loài Drosera finlaysoniana

O Loai Drosera cucullata

Thân cây có thể cao hơn 30 cm voi nhimg chiéu dai 1a dai gan 14 cm, thuôn nhọn từ gốc đến ngọn với vùng cuống lá rõ rét Mau xanh lục đến đỏ nhạt đặc biệt trên lá già, xúc tu không màu Những bông hoa mọc trên những chiếc cuồng ngắn dọc theo một thân cây xù xì, tương đối nhỏ và có màu trắng đến màu hoa cà nhạt với một bộ nhị hoa hình cơ delta rộng và có màu đỏ như máu rất khác biệt Loài này có thể được nhận ra

bởi sự hiện diện của chúng cùng với một loạt các bộ ba màu đỏ có sẵn nhỏ nhưng khác

biệt nằm ở mặt dưới của cuống lá và phiến lá, đôi khi thành một sọc dọc theo gân

giữa[7]

1.2 Đặc điểm giống thực vật Bybiis spp

Chi Byblis là một chỉ nhỏ trong nhóm thực vật ăn thịt Byblis có nguồn gốc từ Úc và

New Guinea Loài đầu tiên trong chi được mô tả bởi một nhà thực vật học người Anh

là Richard Anthont Salisbury năm 1808 Ban đầu chỉ có 2 loài được công nhận là B liniflora va B gigantea Mai cho dén nam 1980, công trình nghiên cứu của nhà thực

vat nguoi Uc Allen Lowrie thi chi Byblis duoc công nhận có 8 loài: Byblis aquas, B filifolia, B gigantea, B lamellata, B liniflora, B rorida, B pilbarana va B guehoi Các loài trong chỉ này đa số là cây hàng năm chỉ riêng loài B gigantea va B lamellata

là cây lâu năm{3]

Byblis đều được Chính phủ bảo vệ, tuy nhiên đến năm 2000, loài này được bảo vệ quốc

tế theo phụ lục II của Công ước CITES, nhưng đã bị xóa khỏi danh sách khi Úc tham gia thỏa thuận CITES Kê từ đó, việc thương mại hóa của các loài Byblis đã không được kiểm soát bên ngoài nước Úc Đa phần các nguyên liệu thực vật được bán ngày nay được sản xuất từ trồng trọt; trong đó B ñlifolia và B liniflora hàng năm là phổ biến nhất Hầu hết các loài khác phải được trồng từ hạt giống do thu thập từ tự nhiên Loài B gigantea và B lamellata của Tây Úc đang bị đe dọa bởi sự hủy hoại môi

trường sống đối với sự phát triển đô thị từ các thành phố như Perth Đặc biệt là do sự

khai thông, thoát nước tai cac ving 4m ướt nhằm lấy đất phục vụ sản xuất trồng trọt B gigantea nằm trong Liên minh Quốc tế về Bảo tồn Thiên nhiên và được coi là cực kỳ

nguy cấp [4]

1.2.1 Đặc diễm phân loại

0 Loai Byblis filifolia [3|

Gidi: Plantae (Thuc vật)

Ngành: Angiospermae (Thue vat hat kin)

Lớp: Eudicots (Thực vật hai lá mam)

Phân lớp: Asterids (Cúc)

Bộ: Lamiales (Hoa môi)

Ho: Byblidaceae

Chi: Bybis

Loai: Byblis filifolia

O Loai Byblis pilbarana [3]

Gidi: Plantae (Thuc vật)

Ngành: Angiospermae (Thue vat hat kin)

Lớp: Eudicots (Thực vật hai lá mam)

[5]

côn trùng nhỏ, khi chạm vào chất tiết chúng sẽ bị dính lại Quả Byblis dạng túi (nang)

gồm 2 hai phần Khi vỏ quả khô chúng sẽ nứt ra và hạt sẽ rơi quạn mặt đất Hạt có màu đèn, thường hình tròn và thường có màng nỗi trên bề mặt Tuy nhiên, không giống như sundews, Byblis không thể di chuyên các xúc tu cũng như lá của chúng đề hỗ trợ bẫy hoặc tiêu hóa nên được xếp chúng vào nhóm “bẫy môi thụ động” Cây Byblis sinh sản hữu tính bằng hạt Cây có thê tự thụ phấn hay thụ phấn nhờ gió và côn trùng Hạt được phóng thích khi nang hạt nứt ra Loài Byblis thường sống ở khu vực bãi lầy, đầm lây Nhiệt độ thích hợp trung bình từ 5 — 40°C (40 — 105°F) [2,3,5]

O Loai Byblis filifolia

Cay B filifolia la loai cây hàng năm, thân thảo, mềm, mảnh nhỏ, có chiều cao lên tới

60 em, với thân mọc thăng đến nửa bò và lá dài tới 15 em, có u sẵn ở gốc Màu thường

là xanh lục nhạt, nhưng có thể ửng đỏ trên lá già hoặc các bộ phận tiếp xúc với ánh sáng mạnh Hoa mọc trên các cuông đơn mọc từ giữa các lá với nhiều hoa có khả năng

ra cùng lúc, đường kính lên tới 1,5 em với các cánh hoa hình trứng đến gần như hình chữ nhật có mép răng cưa Màu hoa cà đến tím ở mặt trên, trắng đến hơi vàng ở mặt

dưới Các lá đài được bao phủ dày đặc bởi các tuyến [6,5].