nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hóa học của cây sài hồ nam pluchea pteropoda thu hái tại hải phòng tiểu luận nghiên cứu dược liệu biển

Đồng thời, việc khai thác và sử dụng bừabãi là một trong những nguyên nhân hàng đầu dẫn đến suy giảm và biến mất nhữngloại cây quý hiếm.Ngày nay, nhà nước ta đã có những chương trình và

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC HẢI PHÒNG

NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬTVÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦACÂY SÀI HỒ NAM (Pluchea pteropoda)

THU HÁI TẠI HẢI PHÒNG TIỂU LUẬN NGHIÊN CỨU DƯỢC LIỆU BIỂN

HẢI PHÒNG, NĂM 2022

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC HẢI PHÒNG

NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬTVÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦACÂY SÀI HỒ NAM (Pluchea pteropoda)

THU HÁI TẠI HẢI PHÒNG TIỂU LUẬN NGHIÊN CỨU DƯỢC LIỆU BIỂN

Bộ môn : Dược liệu – Dược cổ truyềnNhóm thực hiện: Phạm Thị Thùy Trang

Nguyễn Thị Ninh TrangPhạm Ngọc Vân QuỳnhNguyễn Thu ThảoCao Thị Thu Yên

HẢI PHÒNG, NĂM 2022

ĐẶT VẤN ĐỀ ………11

CHƯƠNG I: TỔNG QUAN ……….13

1.1 Đặc điểm thực vật họ Cúc ……… 13

1.2 Thực vật chi Pluchea Cass………14

1.3 Hoá học chi Pluchea Cass 15

1.4 Cây Sài hồ Nam-Pluchea Pteropoda Hemsl……….16

1.4.1 Nghiên cứu về thực vật học ……… 16

CHƯƠNG II: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18

2.1 Đối tượng nghiên cứu 18

2.2 Phương tiện nghiên cứu ……… 20

2.2.1 Hoá chất, dung môi ……… 20

2.2.2 Máy và thiết bị ……… 21

2.3 Phương pháp nghiên cứu 22

2.3.1 Nghiên cứu về đặc điểm thực vật 22

2.3.1.1 Phương pháp thu thập và xử lí số liệu ……… 22

2.3.2.2 Nghiên cứu về đặc điểm vi phẫu………29

2.3.2 Nghiên cứu về thành phần hóa học 31

2.3.2.1 Định tính các nhóm chất trong cây Sài hồ nam bằng phản ứng hóa học…312.3.2.2 Định tính bằng sắc ký lớp mỏng 35

2.3.2.3 Định lượng bằng polyphenol trong cây Sài hồ nam……… 37

2.4 Phương pháp thu thập tài liệu tham khảo……….39

CHƯƠNG III: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN ……… 41

DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT

Ký hiệu Cụm từ đầy đủDĐVN Dược điển Việt NamEtOAc Ethyl acetatEtOH EthanolHx HexanIR Tia hồng ngoạiMeOH MethanolSKLM Sắc ký lớp mỏngUV Ultra violet ( Tia cực tím )

DANH MỤC CÁC BẢNGSTT

Tên hình Trang

1 Hình 1: Cây Sài hồ nam Pluchea pteropoda Hemsl 17

2 Hình 2: Tiêu bản cây sài hồ nam 18

3 Hình 3: Máy đo hàm ẩm 19

4 Hình 4: Thu hái Sài Hồ Nam tại thực địa 22

5 Hình 5: Cơ quan dinh dưỡng và sinh sản của cây 23

6 Hình 6: Tỉa, ép mẫu và mẫu sau khi ép 24

7 Hình 7: Khâu, cố định tiêu bản 26

8 Hình 8: Dãn nhãn và bọc tiêu bản 27

9 Hình 9: Rửa xanh Methylen bằng nước cất 29

10 Hình 10: Nhuộm đỏ Carmin 29

11 Hình 11: Ảnh minh họa đặc điểm hình thái 41

12 Hình 12: Hoa của cây Sài hồ 2nam 42

13 Hình3 13: Hoa thức 43

14 Hình 14: Tiêu bản thân cây Sài hồ nam 45

15 Hình 15: Tiêu bản lá cây Sài hồ nam 46

16 Hình 16: Kết quả sắc ký lớp mỏng 48

17 Hình 17: Kết quả sắc ký lớp mỏng dưới tia UV tại bướcsóng 254nm và 366nm

49

LỜI CẢM ƠN

Chúng em xin chân thành cảm ơn thầy, cô bộ môn Dược liệu-Dược cổ truyền đãluôn tận tình chỉ bảo, quan tâm, giúp đỡ nhóm chúng em trong suốt quá trình hoànthành đề tài tiểu luận này.

Hải phòng, ngày 06/06/2022Nhóm 4 – Tổ 5 – Dược K8B

ĐẶT VẤN ĐỀ

Việt Nam là nước thuộc khu vực nhiệt đới gió mùa với nhiều điều kiện thuận lợitrong việc sinh trưởng và phát triển của cây thuốc, cây tinh dầu và nhiều loại câycông nghiệp khác Y học cổ truyền Việt Nam gắn liền cùng chiều dài lịch sử dântộc Cho đến tận ngày nay, nhân dân ta vẫn thường sử dụng dược liệu để làm thuốccũng như gia vị, lương thực để sinh sống và bảo vệ sức khỏe hằng ngày.

Theo điều tra của của các nhà thực vật học, ở Việt Nam có khoảng 10386 loàithuộc 2257 chi và 305 họ Trong đó có 1850 loài cây thuốc phân bố trong 244 họthực vật Số cây tinh dầu gồm khoảng 657 loài thuộc 357 chi và 144 họ Mặc dùvậy, việc nghiên cứu chi tiết và hệ thống về thành phần hóa học cũng như tác dụngsinh học của chúng còn nhiều hạn chế Đồng thời, việc khai thác và sử dụng bừabãi là một trong những nguyên nhân hàng đầu dẫn đến suy giảm và biến mất nhữngloại cây quý hiếm.

Ngày nay, nhà nước ta đã có những chương trình và dự án nghiên cứu nhằm địnhhướng, thúc đẩy vấn đề sử dụng, bảo vệ và phát triển rừng cũng như thực vật tạiViệt Nam.Vì vậy hóa học các hợp chất thiên nhiên nói chung và hợp chất có hoạttính sinh học nói riêng ngày càng thu hút được sự chú ý của nhiều nhà khoa họcbởi những ứng dụng quý giá của nó trong nhiều lĩnh vực như y học, nông nghiệp,công nghiệp…

Trong thảm thực vật Việt Nam, họ Cúc (Asteraceae) là họ cây rất phong phú và đadạng Họ Cúc có tới 336 loài trong đó có 100 loài được dùng làm thuốc chữa bệnhdưới dạng các chế phẩm thô sơ như thuốc sắc, rượu thuốc, cao Ngoài ra có nhiềucây họ Cúc đã được dùng trong công nghiệp dược, hương liệu và mỹ phẩm, nôngnghiệp Vì vậy, họ Cúc là một trong những họ cây được các nhà khoa học quantâm và nghiên cứu rất nhiều.

Sài hồ nam hay cây Lức có tên khoa học là Pluchea pteropoda Hemsl thuộc họ Cúc(Asteraceae), là một loài cây mọc hoang dại ở vùng nước lợ, nước mặn ven biểnMiền Bắc, duyên hải Miền Trung Việt Nam Nhân dân một số địa phương vẫnthường dùng lá Sài hồ để ăn gỏi cá, điều trị các vết loét có giòi ở trâu bò Hiện nay,trong đông y người ta vẫn thường dùng rễ phơi khô của cây Sài hồ (Plucheapteropoda Hemsl) để làm vị Sài hồ chữa cảm sốt, nhức đầu, đau tức ngực.Xuất phát từ tình hình thực tế trên chúng tôi chọn đề tài: “Nghiên cứu đặc điểmthực vật và thành phần hóa học cây Sài hồ nam (Pluchea pteropoda Hemsl) thuộchọ Cúc (Compositae) thu hái tại Hải Phòng.”

CHƯƠNG I: TỔNG QUAN

1.1 ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT HỌ CÚC:

Họ Cúc (Compositae hay Asteraceae) lă một trong những họ lớn nhất củathực vật hạt kín Đó lă một họ quan trọng của hệ thực vật thế giới cũng như hệ thựcvật Việt Nam.

Theo M.E Kirpieznikov (1981), họ Cúc có khoảng 1150 – 1300 chi với hơn20.000 loăi, phđn bố rộng rêi trín toăn thế giới nhất lă vùng khí hậu  nhiệt đới vẵn đới.

Họ Cúc ở Việt nam có 2 phđn họ, 13 tông, 114 chi vă 336 loăi Trong 336loăi Phđn bố khắp nơi trong số đó có đến 161 loăi biết giâ trị kinh tế, chiếm gần50% số loăi, cđy thuốc chiếm 96 loăi, cđy cảnh 28 loăi, cđy lăm rau ăn 30 loăi; cđycho tinh dầu vă dầu bĩo 12 loăi, cđy lăm phđn xanh 5 loăi, cđy có tâc dụng trừ sđudiệt côn trùng 5 loăi.

Câc cđy họ năy thường thuộc thảo, ít khi lă cđy to, rễ cđy thừng phồng línthănh củ, lâ đơn vă thường mọc so le, ít khi mọc đối, có khi thănh hình hoa thị,không có lâ kỉm, phiến ít khi nguyín, thường khía răng hay chia thuỳ Cụmhoa: Đầu gồm nhiều hoa mọc ở kẽ những vảy vă bao bọc bởi một tổng bao lâ bắchoa có thể đều, hình ống hay không đều, hình lưới nhỏ Năm cânh hoa liền nhau -thănh một trăng hình ống hay hình lưỡi nhỏ Năm nhị dính liền nhau bởi bao phấnthănh một ống Hai lâ noên, bầu hồ lô đựng một noên, vòi dăi, đầu nhụy xẻ đôi, cólông mu, quả bế nhiều khi có măo lông hay có móc Hạt không có nội mũ Một sốkhâc có ống nhựa mủ, một số loăi khâc có ống tiết Chất dự trữ trong củ lă insulin.

F Bohlman vă câc cộng tâc viín đê phđn lập đọc từ họ Cúc tần trín 2500hợp chất mới vă xâc định cấu trúc của chúng Trong công việc năy ông đê nghiín

cứu các loài thực vật thuộc họ Cúc ở các vùng châu Âu, Trung Quốc, Nam Mỹcũng như vùng Nam Phi Trong các chất trên đặc trưng nhất vẫn là các hợp chấtSesquiterpen, Secquitecpen lacton, Coumarin, Ancaloit.

1.2 THỰC VẬT CHI PLUCHEA CASS:

Chi Pluchea Cass trên thế giới có khoảng 80 loài mọc phổ biến ở vùng nhiệtvà cận nhiệt đới thuộc châu Á, Bắc và Nam Mĩ, châu Phi, châu Úc Trên thế giớicó nhiều loài cây của chi Pluchea Cass được dùng trong y học dân gian để chữamột số bệnh Người da Đỏ ở Mexico dùng nước sắc của lá cây P Symphytifolia(Miller) Gillis để chữa đau bụng, ỉa chảy, ký sinh trùng đường ruột Pluchea quitocở Brazil dùng làm thuốc long đờm, trung tiện, tiêu hoá và tê thấp PlucheaLanceolata có ở Ấn Độ dùng làm thuốc giảm đau, hạ sốt, đầy bụng chống viêm.Pluchea indica có ở Pakistan, Ấn Độ, Thái lan, Việt nam dùng làm thuốc lợi tiểu,giảm đau chữa loét hành tá tràng, chống viêm, bổ gan, kháng nấm, kháng khuẩn trịgiun, làm săn da, chữa rắn cắn làm thuốc lợi tiểu, giảm đau, loét hành tá tràng.

Ở Việt Nam cho tới nay mới ghi nhận được 4 loài thuộc chi Pluchea Cass là:Pluchea indica Less (cây Cúc tần), Pluchea pteropoda Hemsl (cây Sài hồ),Pluchea eupatorioides Kurz (cây lức), Pluchea polygonata Gagnep (cây cúc bông).Tuy phần lớn chúng được sử dụng trong y học dân gian nhưng sự hiểu biết về dượclý và thành phần hoá học còn hạn chế Pluchea indica (L.) Less., mọc hoang dạihoặc được trồng ở hầu hết các tỉnh nước ta từ miền núi đến trung du, đồng bằngtrung du, đồng bằng ven biển Pluchea pteropoda Hemsl chỉ mọc ở những vùngbiển miền Bắc, duyên hải miền Trung, ở đồng bằng cây cũng mọc nhưng chủ yếulà làm hàng rào Pluchea eupatorioides Kurz mới tìm thấy một số nơi miền Nam,còn Pluchea polygonata Gagnep cũng chỉ thấy ở Phan Rang.

Sau đây là một số cây thuộc chi Pluchea Cass đã được nghiên cứu về thànhphần hoá học gồm:

Pluchea arguta BoissPluchea chingoyo

Pluchea carolinensis (Jacp) G DonlPluchea dioscoridis (L.) DCPluchea fastigiata Guise

Pluchea foetida DC (P camphorata DC)Pluchea indica (L.) Less

Pluchea lanceolata(DC) CB clarkPluchea odorata Cass

Chi pluchea Cass, được nhiều nhà khoa học nghiên cứu về thành phần hóahọc và đã phát hiện ra được nhiều lớp hợp chất khác nhau.

Các hợp chất đặc trưng cho loại cây này là alkyl thiophene, flavonoid tinhdầu và các hợp chất khác như triterpenoid sesquiterpenoid.

1.4 CÂY SÀI HỒ NAM - PLUCHEA PTEROPODA HEMSL:

Ở Việt Nam cây Sài hồ có nhiều tên gọi khác nhau như Sài hồ nam, nam Sàihồ, Hải Sài hồ, cây lức, cây lức lan

Tên khoa học: Pluchea Pteropoda Hemsl.,Thuộc họ Cúc: Compositae (hay Asteraceae) 1.4.1 Nghiên cứu về thực vật học:

Sài hồ Việt Nam (Sài hồ nam), là cây thảo, sống lâu năm, thân mẫm và chắc,hình trụ, cao 30-40 cm có thể cao tới trên 70cm, càng lên cao càng nhiều nhánh Lámọc cách, hình thìa, phía cuống hợp lại, có răng cả hai bên, lá dày, mặt trên xanhhơn mặt dưới, dài khoảng 3-4cm, rộng 1,5-2,5 cm có 3-4 đôi đồng gân phụ Cụmhoa hình đầu màu đỏ nhạt, hơi tím, gần như không có cuống, hợp thành 2-4 ngù, lábắc nhắn phía trong hẹp hơn Quả bé có 10 cạnh, có lông mao, không rụng (hình1).

Trên thế giới cây mọc ở Trung Quốc thường mọc ở các vùng Tứ Xuyên, HàBắc, Sơn Tây, Nội Mông Tại Việt Nam cây mọc hoang dại ở vùng nước lợ, nướcmặn như Quảng Ninh, Nam Định, Hà Nam, Ninh Bình ven biển miền bắc và duyênhải miền trung, vùng đồng bằng cây được trồng làm bờ rào.

Cây Sài hồ mọc ở Việt Nam được dùng làm vị thuốc trong y học dân gian.Rễ cây rửa sạch phơi khô tán nhỏ sắc lấy nước uống Thường người ta hay thu háivào mùa thu hoặc mùa xuân là tốt nhất.

Trong Đông y rễ cây Sài hồ nam được phối hợp cùng với một số thuốc khácđể điều chế các loại thuốc đặc trị như cảm sốt, nhức đầu đau tức ngực, tinh thầnmệt mỏi, hạ huyết áp, thay cho Sài hồ bắc (Bupleurum Sinense DC) Nhân dân ởmột số địa phương còn dùng lá cây để ăn gỏi cá, trị loét giòi ở trâu bò Theo kếtquả nghiên cứu của Đoàn Thanh Tùng phần dịch chiết n-hexan của cây Sài hồ namcó tính kháng khuẩn yếu không có tính kháng nấm

Hình 1: Cây Sài hồ nam Pluchea pteropoda Hemsl.,

CHƯƠNG II: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁPNGHIÊN CỨU

2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨUThông tin mẫu:

Mẫu vật: Toàn cây Sài Hồ Nam.Tên khoa học: Pluchea pteropoda Hemsl.Họ: Cúc (Asteraceae).

Số hiệu tiêu bản: CH03.

Tọa độ địa lý: 20o49ˈB - 106o54ˈĐThời gian thu mẫu: 17h17p ngày 11/05/2022

Nơi thu mẫu: Rừng ngập mặn Phù Long - Cát Hải - Hải Phòng.

Mẫu được thu với sự hỗ trợ của giảng viên, nhóm nghiên cứu khoa học và sinhviên Dược.

Hình 2: Tiêu bản cây Sài hồ nam

Tiêu bản thực vật có cành mang lá, cuống lá, phiến lá, cụm hoa và đang đượclưu giữ tại phòng Bộ môn Dược liệu - Dược cổ truyền, Đại học Y dược Hải Phòng.

Mẫu toàn cây Sài hồ nam sau khi thu hái, loại tạp chất, rửa sạch, để ráo Saukhi thu hái, một phần thân và lá được được bảo quản trong EtOH 60% để nghiêncứu đặc điểm vi phẫu Phần thân và lá còn lại được làm nhỏ, sấy khô ở 50ºC, bảoquản trong túi nilon sạch làm nguyên liệu nghiên cứu các chỉ tiêu chất lượng Hàmẩm của Sài hồ nam là 2,51%.

Hình 3: Máy đo hàm ẩm2.2 PHƯƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU:

2.2.1 Hóa chất, dung môi:- Hóa chất nghiên cứu thực vật:

+ Hóa chất dùng trong tẩy nhuộm vi phẫu: javen, acid acetic, xanh methylen0,5%, đỏ carmin và nước cất.

- Hóa chất nghiên cứu thành phần hóa học:

+ Dung môi, hóa chất dùng để định tính: dung dịch MeOH, dung dịch hexan, dung dịch ethyl axetat, anhydrid acetic, dung dịch H2SO4đặc, thuốc thửFolin- Ciocalteu, ether dầu hỏa, dung dịch Na2CO37,5%, dung dịch FeCl35%,dung dịch chì acetat 10%, dung dịch gelatin 1% và nước cất.

n-+ Hóa chất dùng để định lượng: nước cất, dung dịch MeOH, thuốc thửFolin-Ciocalteu, dung dịch Na2CO 7,5%.3

2.2.2 Máy và thiết bị:

- Dụng cụ làm tiêu bản dược liệu biển khô:

Giấy A , băng keo, kim chỉ, kéo, giấy báo, bìa cứng, bọc bảo vệ.2

- Máy và thiết bị để nghiên cứu thực vật:

+ Tiêu bản quan sát vi phẫu: lam kính, bông, đĩa petri, lá kính, chổi lông,pipet, dao lam, cà rốt.

+ Quan sát, phân tích đặc điểm hình thái ngoài, vi phẫu của Sài hồ nam vàchụp ảnh trực tiếp dưới kính hiển vi Leica, tại phòng thực tập Thực vật – Dượcliệu, trường Đại học Y dược Hải Phòng.

- Máy và thiết bị để định tính, định lượng:

+ Cân phân tích 3 số lẻ Ohaus model PA413, cân kỹ thuật 2 số lẻ OhausPA2102, cân xác định độ ẩm Precisa HA60 (Precisa, Thụy Sĩ).

+ Bếp điện, bếp đun cách thủy Memmert, tủ sấy Binde – FD115 (Binder,Đức), máy siêu âm, máy cô quay chân không IKA RV basic (bình cầu đáy tròn0,5 lít, ống sinh hàn thẳng, bơm chân không…)

+ Đèn tử ngoại

+ Dụng cụ: các dụng cụ thí nghiệm thường quy (vải lọc, bông, giấy lọc, ốngnghiệm, bình nón, bình gạn, cốc có mỏ, đũa thủy tinh, pitpet, micropipet…),các dụng cụ thí nghiệm khác (mao quản, bình khai triển sắc ký…), bình địnhmức, bản mỏng…

+ Máy UV-VIS với cuvet thạch anh.2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU:2.3.1 Nghiên cứu về đặc điểm thực vật:2.3.1.1 Phương pháp thu thập và xử lý số liệu:

- Mục đích: quản lý tài nguyên địa phương và lưu trữ mẫu phục vụ cho cáccông tác nghiên cứu.

- Mẫu vật là toàn cây với kích thước 40-60 cm được đựng trong túi nilon cỡlớn dày Bên cạnh đó dùng nhãn đeo để đánh số hiệu mẫu thu được ở thực địa vàđược ghi chép vào sổ tay riêng và các phương tiện chụp ảnh, quay phim để ghi lạiquá trình thu thập mẫu vật.

Hình 4: Thu hái Sài hồ nam tại thực địa

- Mẫu tiêu bản: không quá già và không quá non, thể hiện được những đặc

sạch mẫu bằng nước sạch và dùng bàn chải mềm chải sạch muối và đất cát trên bềmặt.

Hình 5: Cơ quan sinh dưỡng và sinh sản của cây

Cơ quan sinh sản

Cơ quan dinh dưỡng

- Ép và sấy mẫu tiêu bản: khi sấy cần ép chặt mẫu để lá khỏi nhăn nheo, đểmẫu cây nằm đúng vị trí định dán mẫu Sắp xếp mẫu trên giấy trắng và dưới mộtlớp giấy thấm để cố định trước khi sấy Đặt các mẫu lên cặp ép, buộc cặp ép lại sấykhoảng 35– 40°C trong 8–12h, trong quá trình sấy cần thường xuyên thông thoáng.

Hình 6: Tỉa, ép mẫu và mẫu sau khi ép

Khi sắp xếp cần tuân thủ một số nguyên tắc:+ Trong số các lá có ít nhất một lá lật ngược lên.+ Không để các bộ phận của cây đè lên nhau.

+ Chú ý giữ cuống lá để thấy được sự sắp xếp lá trên cây.

- Khâu và dán mẫu cây lên tiêu bản: đặt mẫu cây Sài hồ nam đã ép và sấy khôlên bìa cứng phẳng và khâu vào bìa, dán giấy lên trên các nốt khâu ở mặt trái.

Hình 7 : Khâu, cố định tiêu bản

Khi mẫu đã khâu, dán xong ở góc phải phía dưới của tiêu bản người ta dánnhãn vào Kích thước nhãn 8x13 cm.

Hình 8: Dán nhãn và bọc tiêu bản

2.3.1.2 Nghiên cứu về đặc điểm vi phẫu:

Mẫu được đem xử lý bằng các phương pháp thích hợp rồi nghiên cứu vi phẫu.Tiến hành làm vi phẫu theo các bước sau:

+ Ngâm lá và thân vào nước cho mềm: Chọn mẫu

Mẫu vật là thân cây: chọn đoạn tương đối thẳng, đường kính 0,1–0,5cm.Mẫu vật là lá cây: hình dạng lá còn nguyên vẹn, không quá già cũng không quánon.

+ Cắt tiêu bản bằng dụng cụ vi phẫu: dao lam và cà rốt: mẫu được đặt lên thớt,dùng dao lam cắt thành những lát mỏng và ngâm ngay vào đĩa petri đã có sẵn nướccất.

+ Xử lý lát cắt: Lựa chọn những lát cắt mỏng, tẩy bằng dung dịch Javen, rửasạch bằng nước cất, ngâm trong acid acetic 5%, rửa lại bằng nước cất đến hết acid.Sau đó tiến hành nhuộm kép với xanh methylen và đỏ carmin.