LÊ THỊ DIỄM NGHIÊN cứu đặc điểm THỰC vật, hàm LƯỢNG GENIPOSID của một số mẫu DÀNH DÀNH tại VIỆT NAM KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dược sĩ

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ THỊ DIỄM NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, HÀM LƯỢNG GENIPOSID CỦA MỘT SỐ MẪU DÀNH DÀNH TẠI VIỆT NAM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2022 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ THỊ DIỄM Mã sinh viên: 1701079 NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, HÀM LƯỢNG GENIPOSID CỦA MỘT SỐ MẪU DÀNH DÀNH TẠI VIỆT NAM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Phạm Hà Thanh Tùng ThS Nghiêm Đức Trọng Nơi thực hiện: Bộ môn Thực vật Khoa Dược, trường Đại học Phenikaa HÀ NỘI - 2022 LỜI CẢM ƠN Để hồn thiện khóa luận, tơi bảo tận tình thầy cô, giúp đỡ anh chị, bạn em Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS Phạm Hà Thanh Tùng, người thầy trực tiếp hướng dẫn, đồng hành suốt q trình thực hồn thành khóa luận Người thầy truyền tình yêu khoa học, cách tư duy, nghiên cứu xử lý vấn đề mà gặp phải Thầy người bạn, lắng nghe, thấu hiểu, động viên cho lời khuyên Bên cạnh đó, q trình thực khóa luận, tơi cịn bảo tận tình thầy Bộ môn Thực vật, anh chị dược sĩ, giúp đỡ bạn em Tôi xin chân thành bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc đến: ThS Nghiêm Đức Trọng, DS Trần Thị Kim Anh giúp đỡ, tạo điều kiện cho thu lần tất mẫu nghiên cứu, đặc biệt tỉnh xa xơi Ninh Bình, Thanh Hóa, Hịa Bình, Quảng Bình TS Nguyễn Ngọc Hiếu – khoa Dược, trường Đại học Phenikaa tạo điều kiện để thực nghiệm trường tình hình dịch Covid căng thẳng Thầy giải đáp, hướng dẫn, bảo tơi phần hóa đề tài PGS TS Trần Văn Ơn, ThS Phạm Thị Linh Giang, người thầy hướng dẫn, định hướng xử lý mẫu giúp xây dựng phương pháp nghiên cứu, thực nghiệm ThS Lê Thiên Kim, DS Hồ Thị Dung, DS Bùi Thị Hậu, em Vương Ngân Hà, bạn nghiên cứu Bộ môn Thực vật bạn thành viên Lớp Dược liệu giúp đỡ, thực đề tài Cuối cùng, xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu thầy cô Trường Đại học Dược Hà Nội, người dìu dắt tơi suốt năm qua, cảm ơn gia đình, bạn bè ln chỗ dựa tinh thần động viên khó khăn Hà Nội, ngày 27 tháng 06 năm 2022 Sinh viên Lê Thị Diễm MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU DANH MỤC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1.Tổng quan Dành dành 1.1.1.Các nghiên cứu thực vật Dành dành 1.1.2.Thành phần hóa học 1.1.3 Tác dụng dược lý 1.1.4 Độc tính 1.1.5 Công dụng, chế biến CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 2.1.1 Nguyên liệu 2.1.2 Thiết bị, hóa chất 10 2.2 Nội dung phương pháp nghiên cứu 11 2.2.1 Nghiên cứu thực vật 11 2.2.2 Nghiên cứu hàm lượng geniposid 13 CHƯƠNG KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM 15 3.1 Đặc điểm thực vật 15 3.1.1 Đặc điểm hình thái mẫu Dành dành 15 3.1.2 Cấu tạo vi phẫu mẫu Dành dành 19 3.1.3 Phân tích mối quan hệ mẫu dựa đặc điểm hình thái 24 3.2 Hàm lượng geniposid mẫu Dành dành 26 BÀN LUẬN 29 4.1 Về đặc điểm thực vật 29 4.2 Về cấu tạo vi phẫu thân 30 4.3 Về hàm lượng geniposid 30 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 32 5.1 Đặc điểm thực vật giống Dành dành nghiên cứu 32 5.2 Hàm lượng geniposid Dành dành nghiên cứu 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt DĐVN V Ý nghĩa Dược điển Việt Nam V HPLC UV 240 Sắc ký lỏng hiệu cao Đèn tử ngoại phát bước sóng 240 nm GACP Thực hành tốt trồng thu hái Dược liệu DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU Danh mục bảng Bảng 2.1 Danh sách mẫu Dành dành nghiên cứu Bảng 2.2 Đặc điểm hình thái giống Dành dành 11 Bảng 2.3 22 biến số sử dụng nghiên cứu đa dạng hình thái Dành dành 12 Bảng 3.1 Bảng phân nhóm mẫu nghiên cứu theo đặc điểm hình thái 25 Bảng 3.2 Kết đánh giá độ phù hợp hệ thống phương pháp định lượng hàm lượng geniposid mẫu Dành dành 26 Bảng 3.3 Kết định lượng geniposid bột dành dành 27 Danh mục biểu đồ Biểu đồ 3.1 Biểu đồ hàm lượng geniposid mẫu nghiên cứu 28 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Đặc điểm hình thái Dành dành Hình 1.2 Một số cấu trúc hóa học iridoid glycosid Hình 1.3 Cấu trúc hóa học sắc tố vàng Dành dành Hình 3.1 Dạng sống đặc điểm thân mẫu nghiên cứu 15 Hình 3.2 Đặc điểm hình thái mẫu nghiên cứu 16 Hình 3.3 Đặc điểm kèm mẫu nghiên cứu 16 Hình 3.4 Đặc điểm giải phẫu hoa mẫu nghiên cứu 18 Hình 3.5 Hình dạng quả, hạt mẫu nghiên cứu 19 Hình 3.6 Cấu tạo giải phẫu Dành dành mẫu HN03 21 Hình 3.7 Cấu tạo giải phẫu Dành dành mẫu HB04 21 Hình 3.8 Cấu tạo vi phẫu thân Dành dành 23 Hình 3.9 Cấu tạo vi phẫu thân Dành dành mẫu HN04 23 Hình 3.10 Cây phân loại 14 mẫu Dành dành nghiên cứu dựa so sánh đặc điểm hình thái 24 Hình 3.11 Một số đặc điểm khác biệt nhóm 25 Hình 3.12 Kết chồng sắc ký đồ geniposid chuẩn 0,1 mg/ml qua lần chạy mẫu HN02 qua lần chạy 28 ĐẶT VẤN ĐỀ Dành dành loại thảo mộc đa công dụng, từ lâu sử dụng phổ biến để làm thực phẩm, mỹ phẩm làm thuốc nhiều quốc gia Trung Quốc, Việt Nam Trong ngành Dược, có nhiều nghiên cứu chứng minh Dành dành có nhiều tác dụng dược lý quan trọng, tác động tích cực đến tim mạch hệ tiêu hóa, chống trầm cảm, kháng khuẩn chống viêm, [11] Khoảng 162 hoạt chất phân lập xác định từ Dành dành, có geniposid (một iridoid glycosid) thành phần có hoạt tính sinh học cao [11] Do trồng từ lâu, Dành dành có đa dạng di truyền lớn, ảnh hưởng đến suất chất lượng [42] Vì vậy, việc chọn giống Dành dành nhiều quốc gia quan tâm, đặc biệt Trung Quốc Năm 2009, Su Zhiliang cộng tiến hành tuyển chọn nhân giống dòng Dành dành ưu việt Kết chọn giống cho suất tươi tăng 50,0% so với thông thường, hàm lượng sắc tố vàng geniposid (1 chất điển hình iridoid glycosid) tăng lên 6,89%, 17,76% [31] Hiện nay, Việt Nam, công tác chọn giống ngành Dược quan tâm, thực với số dược liệu Quế [7], Sâm [6], Khổ qua [5], chưa có hoạt động chọn giống với Dành dành Dành dành chủ yếu trồng phổ biến dựa nguồn gen có sẵn địa phương mua thương lái, năm khai thác từ 30-40 dược liệu [1] chưa có vùng trồng đạt chuẩn GACP hay công bố giống chuẩn Dành dành Qua tổng quan tài liệu điều tra sơ bộ, nhận thấy việc phân loại chọn giống Dành dành phụ thuộc nhiều vào việc đánh giá đặc điểm hình thái bên ngồi (rễ, thân, lá, hoa, quả, hạt) Các đặc điểm có liên quan mật thiết đến thông tin di truyền, giúp xác định khác biệt cá thể nghiên cứu phục vụ cho công tác chọn giống đánh giá độ thuần, độ đồng nguồn giống trồng trọt [8] Ngồi đặc điểm hình thái, việc chọn giống dược liệu cần dựa thành phần hóa học Đối với Dành dành, hoạt chất geniposid quan tâm nhất, khơng tiêu chí kiểm nghiệm chất lượng Dành dành, mà cịn chất có hoạt tính sinh học cao Xuất phát từ thực tế đó, đề tài “Nghiên cứu đặc điểm thực vật, hàm lượng geniposid giống Dành dành Việt Nam” thực với mục tiêu: - Mô tả đặc điểm hình thái, đặc điểm vi phẫu số mẫu Dành dành thu Việt Nam - Xác định hàm lượng geniposid Dành dành mẫu CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1.Tổng quan Dành dành 1.1.1.Các nghiên cứu thực vật Dành dành 1.1.1.1 Vị trí phân loại tên khoa học Theo hệ thống phân loại Armen Takhtajan “Flowering Plants” (2009) [32], Dành dành xếp theo thứ tự phân loại sau: Ngành Ngọc Lan (Magnoliophyta) Lớp Ngọc Lan (Magnoliopsida) Phân lớp Hoa Môi (Lamiidae) Bộ Long Đởm (Rubiales (Gentianales)) Họ cà phê (Rubiaceae) Phân họ Ixoroideae Chi Gardenia Ellis Tên khoa học: Gardenia jasminoides J Ellis Tên đồng nghĩa: Gardenia, Gardenia angustifolia Lodd., Gardenia grandiflora Lour., Gardenia longisepala (Masam.) Masam., Gardenia maruba Siebold ex Blume, Gardenia pictorum Hassk., Gardenia radicans Thunb., Genipa florida (L.) Baill., Genipa grandiflora (Lour.) Baill., Jasminum capense Mill, Gardenia florida L [11], Fructus Gardeniae, Gardenia augusta [26] Tên thường gọi: Chi tử, Mác làng cương (Tày) (Việt Nam), Cape-Jasmine (Hàn Quốc, Anh), Zhizi (Trung Quốc), Sanshishi (Nhật Bản) [1], [11] 1.1.1.2 Phân bố Dành dành thuộc chi Gardenia Ellis, phân bố rộng rãi vùng nhiệt đới cận nhiệt đới, từ gần mực nước biển đến độ cao 1800m, có nguồn gốc Trung Quốc, Việt Nam, Đài Loan, Nhật Bản, Myanmar, Ấn Độ, Thái Lan Ở Trung Quốc, Dành dành phân bố 16 tỉnh, đặc biệt tỉnh phía nam sơng Dương Tử: An Huy, Phúc Kiến, Quảng Đông, Quảng Tây, Quý Châu, Hải Nam, Hà Bắc, Hồ Bắc, Giang Tô, Giang Tây, Sơn Đông, Tứ Xuyên, Đài Loan, Vân Nam, Chiết Giang trồng nhiều tỉnh Cam Túc, Hà Bắc, Sơn Tây, Giang Tây, Hồ Nam, [1], [11] Ở Việt Nam, Dành dành mọc hoang ven suối trồng phổ biến khắp tỉnh đồng trung du miền Bắc, tập trung tỉnh Hải Dương, Hưng Yên, Thái Bình, Hà Nam, Nam Định, Ninh Bình, Thanh Hóa, Nghệ An Hà Tĩnh Nguồn Dành dành Việt Nam tương đối phong phú Lượng dược liệu khai thác hàng năm từ 30 đến 40 [1], [3] 1.1.1.3 Đặc điểm thực vật Dành dành Cây bụi, cao 0,3-3 m, cành hình trụ thon, khơng có rãnh gờ đáng kể, dẹt lại, lóng có xu hướng ngắn lại, khơng lơng có lơng ngắn đến lơng dày đặc, thân non có màu xanh, thân già có màu nâu đen ngả màu xám đến trắng xám, có nốt sần Lá đơn, mọc đối, gặp vịng 3, khơng cuống có cuống, cuống dài đến 0,2-1 cm, mặt phẳng, mặt lồi, màu xanh, khơng có lơng có lơng ngắn đến lơng dày đặc Gốc phiến hình nêm đến nhọn, đầu nhọn đến thn dài mảnh mai Phiến khô mỏng da giấy bìa cứng, hình mác thn dài, hình trứng thn dài, hình trứng, hình bầu dục, hình elip, 3-25 × 1,5-8cm, mặt phiến sáng bóng đơi có lơng mềm mịn đường gân chính, khơng có lơng có lơng ngắn đến dày đặc, màu xanh đậm mặt trên, nhạt mặt Gân hình lơng chim, rõ mặt dưới, gân màu trắng, 8-15 đôi, nách thường có lơng tơ Lá kèm mọc đối dính thành ống cao 0,3 cm bao quanh thân, phía xẻ thành miếng tam giác mỏng cao 0,5 cm, màu xanh nhạt, có gân song song [1], [3], [11], [26], [33], [44] Hoa to, đơn độc, mọc cành hay chỗ phân nhánh thân Hoa đều, lưỡng tính, mẫu 6, thơm Cuống hoa nhẵn, 1-10 mm, có cạnh lồi, khơng có lơng có lơng ngắn đến dày đặc, màu xanh Lá bắc thường thường Lá đài 6, đều, màu xanh, hàn liền gốc tạo thành ống cao mm, thn dần phía dưới, phía chia thành thùy thn nhọn, 10-12 × 2-3 mm Mỗi đài có sóng chạy dọc xuống bầu noãn cuống hoa Tiền khai van Đài tồn tại, khơng có lơng có lơng ngắn đến dày đặc Cánh hoa 6, đều, hàn liền gốc tạo thành ống tràng hình đinh 30-50 × 4-6 mm, họng có lơng tơ, nhẵn, màu xanh nhạt, phía chia thành thùy, thùy có hình bầu dục, đầu màu trắng kích thước 32-15 mm, đỉnh mặt thùy có màu ngà vàng, tiền khai vặn chiều kim đồng hồ Nhị 6, đều, rời, đính miệng ống tràng, xen kẽ cánh hoa, nhị dạng sợi ngắn mm, màu trắng ngà Bao phấn thuôn dài, 17-18 mm, mặt bụng màu vàng, mặt lưng màu trắng, đỉnh màu trắng Khi hoa nở, bao phấn cong queo, ép sát vào thùy cánh hoa Hạt phấn rời, màu vàng, chia thùy, kích thước 37,5-50 µm Lá nỗn 2, vị trí trước sau, bầu ơ, nhiều nỗn, đính nỗn trung trụ, bầu nỗn màu xanh nhạt có sóng dọc Một vịi nhụy hình trụ, màu trắng, nhẵn, đính đỉnh bầu, dài gần 40 mm Một đầu nhụy hình chùy màu vàng nhạt, chia thùy, đầu nhụy có đường gân dọc Đĩa mật dạng khoen màu vàng nhạt bao quanh gốc vòi nhụy [1], [3], [11], [26], [37], [44] Quả mọng, hình thoi, hình trứng hẹp, hình cầu phụ, hình elip, 1,5-7 × 1,2-2 cm, có 5-9 gờ dọc, với thùy đài hoa dai đến 40 × mm, màu vàng cam đến đỏ nâu, có nâu xám đến đỏ xám, bóng Đỉnh lõm, có đến đài tồn tại, thường bị gãy cụt Gốc hẹp, có vết cuống Vỏ mỏng, giịn, bóng Vỏ PL3.11 Đặc điểm thực vật mẫu HB04 PL3.12 Đặc điểm thực vật mẫu HB06 PL3.13 Đặc điểm thực vật mẫu TN01 PL3.14 Đặc điểm thực vật mẫu TN02 PHỤ LỤC BẢNG MÃ HÓA CHI TIẾT ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI CỦA CÁC MẪU NGHIÊN CỨU STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 CAM KTON KTLA MEPL GOPH SOGA TILEL MAG SOLA CDCU CDLA CDTH CDON CDTR TILEC CDGA CDBA CDVO CDNU HDQU KTCU TILE OLAK LADA DAIT A LA P A ANOI BA HO KE DAHO DAHO HO AHO BAPH PH NHUY NHUY A QUA QUA E I H HN01 1 2 2 1 1 2 1 HN02 1 2 2 1 2 1 3 2 HN03 2 2 2 1 1 1 3 HN04 1 2 2 2 1 3 2 HN05 2 1 1 1 2 3 1 HN06 1 2 3 3 3 2 QB02 1 2 2 2 3 3 1 NB01 1 1 2 1 1 1 1 2 TH01 1 1 2 1 1 1 1 HB02 1 1 2 2 2 3 1 HB04 1 2 1 1 3 1 2 HB06 1 1 2 1 1 2 1 3 2 TN01 1 2 2 2 2 3 3 3 TN02 1 3 2 1 2 2 1 2 PHỤ LỤC GIẤY CHỨNG NHẬN PHÂN TÍCH CHẤT CHUẨN GENIPOSID PHỤ LỤC HÌNH ẢNH CHỒNG SẮC KÍ ĐỒ CÁC MẪU NGHIÊN CỨU QUA LẦN ĐỊNH LƯỢNG ... TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ THỊ DIỄM Mã sinh viên: 1701079 NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, HÀM LƯỢNG GENIPOSID CỦA MỘT SỐ MẪU DÀNH DÀNH TẠI VIỆT NAM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn:... Dành dành Việt Nam? ?? thực với mục tiêu: - Mô tả đặc điểm hình thái, đặc điểm vi phẫu số mẫu Dành dành thu Việt Nam - Xác định hàm lượng geniposid Dành dành mẫu CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1.Tổng quan Dành. .. thêm mẫu Dành dành tỉnh phía nam Việt Nam để bổ sung vào kết nghiên cứu - Nghiên cứu đánh giá nguồn gen giống Dành dành có hàm lượng geniposid cao, nguồn gen Dành dành Việt Nam số mẫu Dành dành giới