đánh giá hiệu quả kiểm soát sinh học nấm và tuyến trùng gây bệnh chết nhanh chết chậm trên cây hồ tiêu piper nigrum l bằng bộ chế phẩm sinh học ở tỉnh gia lai

--- ∞0∞--- PHAN THỊ MỸ LONG ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ KIỂM SOÁT SINH HỌC NẤM VÀ TUYẾN TRÙNG GÂY BỆNH CHẾT NHANH, CHẾT CHẬM TRÊN CÂY HỒ TIÊU Piper nigrum L.. BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC

VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU

Thời gian: từ tháng 11/2021-06/2022 Địa điểm:

• Phòng thí nghiệm Công nghệ Vi sinh trường Đại học Mở Tp Hồ Chí Minh, cơ sở 3 Bình Dương, 68 Lê Thị Trung, Thành phố Thủ Dầu Một, Bình Dương

• Vườn hồ tiêu kinh doanh 7 tháng tuổi (0,7 ha) và 1 năm tuổi (1 ha) của ông Phan Văn Bình tại Xã Konghtok huyện Chư Sê tỉnh Gia Lai

1.1 Đối tượng và vật liệu nghiên cứu

• Các mẫu cây hồ tiêu Srilanca, Thenken được thu thập tại xã Konghtok huyện Chư Sê tỉnh Gia Lai

Hình 2.1 Xã Konghtok huyện Chư Sê tỉnh Gia Lai (13.728058, 108.109237)

SVTH: PHAN THỊ MỸ LONG

▪ Phân bón vô cơ: NPK 16:16:8 cung cấp bởi công ty cổ phần phân bón Bình Điền

▪ Bánh dầu đậu phộng: được thu mua tại các cơ sở ép dầu đậu phộng ở địa phương Trong bánh dầu chứa từ 28-51% đạm, ngoài ra còn có các muối khoáng, vitamin và acid amin

▪ P có nguồn gốc hữu cơ: cung cấp bởi công ty phân lân nung chảy Văn Điển

▪ K hữu cơ khai thác từ quặng: cung cấp bởi công ty cổ phần HACHECO

• Bộ chế phẩm sinh học được cung cấp bởi Công ty TNHH MIDOLI có chứa các chủng vi sinh vật đối kháng nấm gây bệnh Phytophthora sp., Pythium sp., Fusarium sp và tuyến trùng Meloidogyne sp

❖ Nguồn gốc: Bộ chế phẩm sinh học sử dụng trong đề tài được cung cấp bởi công ty TNHH MIDOLI

❖ Bộ sản phẩm sử dụng thử nghiệm trên vườn hồ tiêu gồm: chế phẩm vi sinh

TRI-BIOMI3X, BIOMI-AntiFB 1, BIOMI-AntiN 1, BIOMI-Pest 1, BIOMI- Pest 2, BIOMI-Ferti Thành phần vi sinh và công dụng của mỗi sản phẩm được mô tả chi tiết ở bảng 2.1

Hình 2.2 Bộ chế phẩm sinh học

Bảng 2.1 Thành phần và công dụng của chế phẩm vi sinh

Chế phẩm vi sinh Chi tiết sản phẩm, chỉ tiêu chất lượng

(viên nén): Chế phẩm vi sinh (bón rễ và ủ phân)

- Tổng VSV phân giải cellulose (Trichoderma viride, Aspergillus oryzae, Bacillus velezensis, Streptomyces rochei,

Phanerochaete chrysosporium): ≥ 1x10 8 CFU/g + Tổng VSV cố định đạm vùng rễ và nội sinh (Azotobacter sp.,

Azospirillum sp., Bacillus velezensis): ≥ 1x10 6 CFU/g + Tổng VSV phân giải lân (Bacillus sp., Azospirillum sp.):

- Kích thích tăng trưởng, tăng năng suất

Các chủng vi sinh trong sản phẩm được lựa chọn có khả năng chịu mặn cao, thích hợp cho các khu vực bị nhiễm mặn ở vùng Đồng bằng sông Cửu Long, đặc biệt là các ruộng lúa và nhà vườn trồng cây ăn quả.

- Dùng ủ lên men cho tất cả các nguyên liệu hữu cơ: bã bùn mía, rơm, bã trồng nấm, phân chuồng, vỏ cà phê, xác bã thực vật, phế phẩm hữu cơ của các nhà máy,…

- Cải tạo đất bạc màu

Sử dụng: Pha 1 viên trong 40-50 lít nước Ủ phân 1 viên (3 g) dùng ủ 1 tấn nguyên liệu

(viên nén): Chế phẩm vi sinh

(phòng trừ nấm và khuẩn)

- Bacillus polyfermenticus (kháng nấm) ≥ 1x10 7 CFU/g

- Phòng và trừ nấm gây bệnh - cung cấp hệ vi sinh vật đối kháng mạnh với nấm, khuẩn bệnh hại cây trồng

- Vi khuẩn Bacillus sinh chất kháng nấm, kháng khuẩn

- Chế phẩm ức chế nhiều loại nấm (Phytophthora, Pythium,

Rhizoctonia solani, Neoscytalidium, Fusarium, Colletotrichum,…) gây bệnh vàng lá, thối cổ rễ, khô cành trên mắc ca, chết chậm trên cây hồ tiêu, khô vằn trên cây lúa, đốm trắng trên cây thanh long, cháy lá, xoắn cổ lá, thối đỏ trên cây mía, thối rễ, thối thân, thối trái, … trên nhiều loại cây trồng

- Có khả năng cải tạo đất, giúp bộ rễ phát triển mạnh, hỗ trợ cây phục hồi và phát triển

Sử dụng: Pha 1 viên trong 40-50 lít nước Nên phun vào lúc sáng sớm hay chiều mát

(viên nén): Chế phẩm vi sinh

(phòng trừ sinh học tuyến trùng hại rễ)

- Phụ gia: dịch chiết cây Neem (Azadirachta indica) Công dụng:

- Phòng trừ đặc trị tuyến trùng tối ưu hơn với sự kết hợp giữa vi sinh vật và dịch chiết thực vật

- Phòng trừ côn trùng gây hại, ức chế nấm bệnh

- Có tác dụng như phân bón vi sinh vật (hoạt tính cố định đạm, sinh hoocmon tăng trưởng IAA, phân giải lân) qua đó hỗ trợ cây phục hồi, phát triển

Chế phẩm vi sinh Chi tiết sản phẩm, chỉ tiêu chất lượng phẩm vi sinh (trừ sâu)

(dạng lỏng): Chế phẩm vi sinh (trừ sâu)

- Phụ gia: dịch ủ hạt Neem

- Bào tử của vi khuẩn Bacillus thuringiensis và tinh thể độc sẽ đi qua đường tiêu hóa, sau đó độc tố được kích hoạt, bào tử nẩy mầm và tiếp tục sinh độc tố để diệt sâu Sự kết hợp với dịch chiết hạt Neem sẽ tối ưu hóa hoạt tính diệt sâu Có khả năng diệt các loại sâu phổ biến trong nông nghiệp như: sâu xanh, sâu xanh bướm trắng, sâu đo, sâu cuốn lá, sâu đục thân/rau màu,

(dạng lỏng): Phân bón hữu cơ vi sinh kích thích tăng trưởng cây trồng

- Hàm lượng hữu cơ thủy phân từ đậu nành, trùn quế, sinh khối nấm men

-Tổng VSV cố định đạm ≥ 10 6 CFU/ml -Tổng VSV phân giải lân ≥ 10 6 CFU/ml -Tổng VSV phân giải cellulose ≥ 10 6 CFU/ml

- Tổng VSV phân giải kali ≥ 10 6 CFU/ml

- Kích thích bộ rễ phát triển, tăng cường hấp thu phân bón

- Cung cấp hệ vi sinh vật vùng rễ và vi sinh vật nội sinh thực vật (cố định đạm, sinh auxin, phân giải lân) giúp cây tăng trưởng tốt Cung cấp hệ vi sinh giúp phân giải cellulose, xác bã thực vật giúp tăng cường chuyển hóa và hấp thu dinh dưỡng hữu cơ tại chỗ

- Cung cấp dinh dưỡng dễ tiêu, bổ sung dịch lên men vi sinh vật giúp phát triển rễ, cây hấp thu nhanh và hiệu quả, tăng trưởng tốt

- Cung cấp các chất dinh dưỡng cho cây, tạo điều kiện cho cây sinh trưởng phát triển tốt theo giai đoạn

- Dùng bón bổ sung cho cây trồng và phục hồi sinh trưởng sau mùa thu hoạch, cải tạo đất bạc màu, hạ phèn

Sử dụng: 1 lít pha trong 100-200 lít nước

- Thuốc nhuộm lacto phenol cotton, lugol

- Các chất khác: Saccarose, nước muối sinh lý 0,85%, nước cất, CMC

• Thiết bị: Máy vortex, kính hiển vi, máy lắc, cân điện tử, tủ cấy, lò viba, tủ ấm, tủ sấy, nồi hấp vô trùng

• Dụng cụ: Đĩa petri, becher, ống đong, ống nghiệm, ống ly tâm, rây lọc, lam và lamel, cỏc loại micropipette và đầu tớp tương ứng (100-1000 àl, 20-200 àl), một số dụng cụ khác bao gồm: đèn cồn, que cấy trang, dao mũi mác.

PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Phương pháp: Bố trí thí nghiệm gồm 2 nghiệm thức so sánh giữa nghiệm thức đối chứng và nghiệm thức sử dụng bộ chế phẩm sinh học được thể hiện ở hình 2.3 và 2.4

Quy trình: Nghiệm thức đối chứng áp dụng quy trình kỹ thuật phân bón và chăm sóc cây hồ tiêu của chủ hộ Nghiệm thức sử dụng bộ chế phẩm sinh học điều chỉnh quy trình kỹ thuật phân bón và chăm sóc cây hồ tiêu dựa trên nghiệm thức đối chứng

• Bón phân hữu cơ: 8 kg/cây vào tháng 4 âm lịch đầu mùa mưa

(không sử dụng chế phẩm)

• Bón phân vô cơ: chia làm 4 đợt bón NPK

(16:16:8) vào đầu mùa mưa 0,3 kg/cây, 2 lần giữa mùa mưa 0,25 kg/cây và cuối mùa mưa 0,2 kg/cây

• Cách ủ: 7 tấn nguyên liệu (3 tấn phân chuồng, 4 tấn vỏ cà phê) ủ với 9 kg mật rỉ đường và 20 viên chế phẩm TRI-BIOMI3X, tưới nước và trộn đều, dùng bạt ni lông tủ kín, ủ trong 2 tháng Bón 8 kg/cây vào đầu tháng 4 âm lịch

▪ N: sử dụng hỗn hợp ủ gồm: 50 kg bánh dầu đậu phộng, 100 lít nước, 4 kg mật rỉ và 1 viên chế phẩm TRI- BIOMI3X , ủ 1 tháng trong thùng phuy Pha loãng hỗn hợp ủ với nước (v:v/1:50), phun ướt đẫm mỗi cây (lá và gốc) với 4 lít hỗn hợp đã pha loãng, phun vào đầu, giữa và cuối mùa mưa

Để ủ phân, trộn 7 tấn nguyên liệu gồm 3 tấn phân chuồng và 4 tấn vỏ cà phê với 9 kg mật rỉ đường và 20 viên chế phẩm TRI-BIOMI3X Tưới nước, trộn đều rồi dùng bạt ni lông đậy kín Sau 2 tháng ủ, bón 8 kg phân này cho mỗi cây vào đầu tháng 4 âm lịch.

▪ N: sử dụng hỗn hợp ủ gồm: 50 kg bánh dầu đậu phộng, 100 lít nước, 4 kg mật rỉ và 1 viên chế phẩm TRI- BIOMI3X, ủ 1 tháng trong thùng phuy Pha loãng hỗn hợp ủ với nước (v:v/1:50), phun ướt đẫm mỗi cây (lá và gốc) với 4 lít hỗn hợp đã pha loãng, phun vào đầu, giữa và cuối mùa mưa

▪ P: sử dụng phân lân Văn Điển bón 0,2 kg/cây vào đầu mùa mưa

▪ Sử dụng bộ chế phẩm gồm TRI-BIOMI3X (viên), BIOMI- AntiFB 1 (viên), BIOMI-AntiN 1 (viên), BIOMI-Pest 1 (viên), BIOMI-Pest 2 (lít), BIOMI Ferti (lít) phun tưới bề mặt đất và phun ướt đẫm cây định kỳ 30 ngày/lần trong 6 tháng Cách pha 2 viên, lít/1 loại chế phẩm/200L, đối với BIOMI Ferti 2 lít /100 lít Liều 400-500 lít /1 lần/1 ha

▪ P: sử dụng phân lân Văn Điển bón 0,5 kg/cây vào thời điểm sau khi thu hoạch

▪ K hữu cơ khai thác từ quặng: bón 0,1 kg/cây vào tháng 3 âm lịch và 0,2 kg/ cây vào tháng

▪ Sử dụng bộ chế phẩm gồm TRI-BIOMI3X (viên), BIOMI- AntiFB 1 (viên), BIOMI-AntiN 1 (viên), BIOMI-Pest 1 (viên), BIOMI-Pest 2 (lít), BIOMI Ferti (lít) phun tưới bề mặt đất và phun ướt đẫm cây định kỳ 30 ngày/lần trong 6 tháng Cách pha 2 viên, lít/1 loại chế phẩm/200 lít, đối với BIOMI Ferti 2 lít /100 lít Liều 400-500 lít /1 lần/1 ha

• Quản lý cỏ dại trong vườn: làm sạch cỏ, nhổ cỏ trong gốc, tránh làm tổn thương rễ

• Tủ gốc: dùng rơm rạ, vỏ ngô, tủ xung quanh gốc tiêu vào mùa khô để giữ ẩm cho cây

• Buộc dây tiêu vào trụ

• Thiết kế hệ thống thoát nước bằng các mương rãnh, vun gốc không để đọng nước

• Phát hiện cây bị bệnh chết nhanh, chết chậm xử lý bằng thuốc hóa học

Ghi chú: Quy trình công nghệ này có thể điều chỉnh phù hợp theo tình hình trồng và chăm sóc thực tế

• Đống ủ: Đánh giá mật độ vi sinh vật có lợi trong đống ủ gồm vi sinh vật cố định đạm, vi sinh vật hòa tan lân và vi sinh vật phân giải cellulose sau 2 tháng ủ

▪ Đánh giá hiệu quả kiểm soát nấm, tuyến trùng: đánh giá định kỳ 30 ngày/lần

▪ Khảo sát mật độ một số vi sinh vật có lợi trong đất gồm vi sinh vật cố định đạm, vi sinh vật hòa tan lân và vi sinh vật phân giải cellulose đánh giá định kỳ 30 ngày/lần

▪ Đánh giá khả năng kích thích sinh trưởng: chiều dài thân chính (đối với vườn 7 tháng) đánh giá định kỳ 30 ngày/lần

▪ Đánh giá năng suất cây hồ tiêu ở vườn 1 năm tuổi

• Vườn thực nghiệm 7 tháng tuổi:

▪ Theo dõi khả năng kích thích sinh trưởng: chiều dài thân chính đối với vườn 7 tháng định kì 30 ngày/ lần

• Vườn thực nghiệm 1 năm tuổi:

▪ Đánh giá năng suất hồ tiêu

Mẫu đất trồng hồ tiêu được thu thập theo dạng mẫu phức, tại 5 điểm theo nguyên tắc chéo gốc Cách gốc 30 cm, độ sâu từ 15-20 cm, lấy mẫu theo góc của tam giác đều, gốc cây là trung tâm, mẫu đất lấy khối lượng 100 g/mẫu, trộn 5 điểm lại thành mẫu chung Bảo quản mẫu trong túi ni-lông có lỗ thông khí, ở nhiệt độ phòng (Lamsal và cs., 2012)

Hình 2.3 Mô hình bố trí thí nghiệm vườn 7 tháng tuổi

(Hình ảnh mang tính chất minh họa)

Hình 2.4 Mô hình bố trí thí nghiệm vườn 1 năm tuổi

(Hình ảnh mang tính chất minh họa)

Bảng 2.2 Địa điểm và số lượng mẫu

Mẫu Số lượng Địa điểm

Vườn 7 tháng 10 Xã Konghtok huyện Chư Sê tỉnh Gia

Vườn 1 năm 10 Xã Konghtok huyện Chư Sê tỉnh Gia

2.3 Khảo sát mật độ một số vi sinh vật có lợi trong đất bao gồm vi sinh vật cố định đạm, vi sinh vật hòa tan lân và vi sinh vật phân giải cellulose

* Khảo sát mật độ vi sinh vật cố định đạm

Phương pháp: Tiến hành theo TCVN 6166:2002

• Môi trường Jensen hấp ở điều kiện 121 o C, 20 phút

• Môi trường được đổ đĩa petri (đường kính 90 mm) với thể tích 15 ml

• Mẫu đất mang về sấy khô ở nhiệt độ phòng Dùng chày, cối sứ vô trùng để nghiền sơ đất, sàng qua rây có đường kính 710 μm

• Trộn đều 10 g đất trong 90 ml nước muối sinh lý 0,85%

• Ủ lắc ở tốc độ 150 vòng/phút, trong 15 giờ, ở 37 o C

• Pha loóng mẫu đến độ pha loóng 10 -3 , 10 -4 dựng micropipet hỳt 200 àl dịch pha loãng và trải đều vào môi trường Jensen

• Ủ ở 37 o C Đối với vi sinh vật cố định đạm nuôi cấy 2-3 ngày

• Thí nghiệm được lặp lại 3 lần và định kì 30 ngày/lần

Kết quả: Đọc kết quả dựa trên đặc điểm hình thái và số khuẩn lạc đếm được trên đĩa petri để đánh giá mật độ vi sinh vật cố định đạm Áp dụng công thức xác định mật độ vi sinh vật

Mật độ vi sinh vật trong một đơn vị kiểm tra được tính bằng CFU/g hay ml, theo công thức:

N là số vi sinh vật trong một đơn vị kiểm tra (được tính bằng CFU/g hay ml);

KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN

KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ KIỂM SOÁT TUYẾN TRÙNG TUYẾN TRÙNG Meloidogyne sp GÂY BỆNH TRÊN CÂY HỒ TIÊU

Sau 5 tháng tiến hành thí nghiệm không ghi nhận được mật độ tuyến trùng

Meloidogyne sp gây bệnh có mặt trong mẫu đất Tuy nhiên, qua điều tra và ghi nhận hình ảnh thì có xự xuất hiện tuyến trùng trong mẫu rễ từ các biểu hiện bệnh như có u sần ở nốt rể tại vườn 1 năm tuổi ở cả 2 nghiệm thức, trùng khớp với báo cáo của Koshy và cộng sự (2005) là hồ tiêu bị nhiễm tuyến trùng xuất hiện các nốt sần ở rễ

Sự xâm nhiễm làm xuất hiện các nốt sần ở rễ chính hay các rễ bên của cây (Koshy và cs., 2005) Tại vườn 7 tháng tuổi không ghi nhận hình ảnh biểu hiện của sự xuất hiện của tuyến trùng gây bệnh Dưới đây là một số hình ảnh được ghi nhận lại:

Hình 3.20 Hình ảnh rễ cây hồ tiêu ở vườn 7 tháng tuổi Đối chứng (A), thực nghiệm (B) Hình 3.19 Hình ảnh rễ cây hồ tiêu ở vườn 1 năm tuổi Đối chứng (A), thực nghiệm (B)

Tiêu đề	Đánh Giá Hiệu Quả Kiểm Soát Sinh Học Nấm Và Tuyến Trùng Gây Bệnh Chết Nhanh, Chết Chậm Trên Cây Hồ Tiêu (Piper Nigrum L.) Bằng Bộ Chế Phẩm Sinh Học Ở Tỉnh Gia Lai
Tác giả	Phan Thị Mỹ Long
Người hướng dẫn	ThS. Nguyễn Văn Minh, ThS. Dương Nhật Linh
Trường học	Trường Đại Học Mở Thành Phố Hồ Chí Minh
Chuyên ngành	Công Nghệ Sinh Học
Thể loại	khóa luận tốt nghiệp
Năm xuất bản	2022
Thành phố	TP. Hồ Chí Minh

Định dạng
Số trang	118
Dung lượng	3,92 MB