khảo sát môi trường thích hợp tạo cây đơn bội kép từ bầu noãn cây bí đỏ cucurbita moschata duch doir

Nuôi cấy bao phấn và nuôi cấy noãn là hai phương pháp mang lại hiệu quả cao trong việc tạo cây đơn bội phục vụ cho mục đích lai tạo và nghiên cứu di truyền.. cây khi nuôi cấy bao phấn, h

VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Vật liệu

2.1.1 Địa điểm và thời gian thực hiện

▪ Phòng thí nghiệm Công Nghệ Tế Bào – Khoa Công Nghệ Sinh Học

Trường Đại học Mở Thành phố Hồ Chí Minh

Hoa cái bí đỏ giống VINO 07 được trồng tại vườn của nông dân tại thành phố Mới, tỉnh Bình Dương

2.1.3 Thiết bị và dụng cụ

Phòng chuẩn bị môi trường, phòng hấp khử trùng, phòng bảo quản hóa chất: nồi hấp, máy cất nước một lần, lò vi sóng, tủ lạnh, máy đo pH, cân kỹ thuật, cân phân tích, đĩa Petri, Erlen

Phòng cấy vô trùng: tủ cấy, máy điều hòa, dao cấy, kẹp, đèn cồn

Phòng nuôi cấy: máy điều hòa, kệ sắt, nhiệt kế, đèn chiếu sáng

Nhiệt độ phòng nuôi: 25 ± 2 o C Độ ẩm: 70 ± 5 %

Cường độ chiếu sáng: 2000 – 3000 lux pH môi trường nuôi cấy: 5,7 – 5,8

Sử dụng mụi trường MS ẵ cú bổ sung đường 30 g/L, agar 8 g/L và chất điều hòa tăng trưởng thực vật như TDZ (nồng độ thay đổi theo mục đích từng thí nghiệm)

Phương pháp nghiên cứu

2.2.1 Quan sát hình thái giải phẫu

Mục đích thí nghiệm: Xác định và mô tả hình thái noãn trước và sau khi cảm ứng

Vật liệu thí nghiệm: Hoa cái bí đỏ được thu hái một ngày trước khi nở

Mô tả thí nghiệm: Noãn được cắt lát mỏng và nhuộm trong thuốc nhuộm đỏ carmin, xanh iod theo quy trình như sơ đồ hình 2.1 và quan sát dưới kính hiển vi

2.2.2 Khảo sát nồng độ TDZ ảnh hưởng đến sự cảm ứng noãn tạo phôi cây bí đỏ

Mục đích thí nghiệm: Tìm ra nồng độ TDZ thích hợp cho việc cảm ứng tạo phôi từ noãn bí đỏ

Ngâm trong thuốc nhuộm đỏ carmin, xanh iod trong 12 phút

Rửa nước cất (3 lần) Đặt mẫu trong Glycerin

Ngâm trong acid acetic 45% trong 12 phút

Rửa nước cất (3 lần) Mẫu cắt

Quan sát dưới kính hiển vi

Hình 2.1 Sơ đồ nhu ộm đỏ carmin, xanh iod

Nghiệm thức Nồng độ TDZ

Mụi trường nuụi cấy: Mụi trường MS ẵ cú bổ sung TDZ thay đổi theo cỏc nồng độ như trong bảng 2.2

Mô tả thí nghiệm: Bầu noãn bí đỏ sau khi được thu hái sẽ được rửa với xà phòng dưới vòi nước, khử trùng qua cồn 70 o trong 3 phút, sau đó được ngâm trong Javel (NaClO) 10 % trong 10 phút thực hiện 2 lần Sau khi khử trùng, cắt lát theo chiều ngang thành những lát dày (1-2 mm) và gọt vỏ cấy vào môi trường nuôi cấy trên Để ở nhiệt độ lạnh 5 ± 2 o C trong 3 ngày, sau đó mang ra để ở nhiệt độ phòng nuôi 25 ± 2 o C

Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên Mỗi nghiệm thức lặp lại 3 lần, 1 đĩa/lần, 3 mẫu/đĩa

Thời gian theo dõi: 4 tuần

Chỉ tiêu đánh giá: Số lượng mẫu cấy cảm ứng (≥ 1 mm) trên 1 đĩa

Kết quả được xử lý bằng phần mềm Statgraphics plus 3.0 Sự khác biệt có ý nghĩa ở mức 95 % của giá trị được thể hiện bởi các chữ cái kèm theo, phân hạng Duncan

Bảng 2.1 Các nghiệm thức trong thí nghiệm khảo sát nồng độ TDZ ảnh hưởng đến sự cảm ứng noãn tạo phôi cây bí đỏ Cucurbita moschata (Duch.) Poir

2.2.3 Khảo sát nồng độ AgNO 3 ảnh hưởng đến sự cảm ứng noãn tạo phôi cây bí đỏ

Mục đích thí nghiệm: Tìm ra nồng độ AgNO3 thích hợp cho việc cảm ứng tạo phôi từ noãn bí đỏ

Mụi trường nuụi cấy: Mụi trường MS ẵ cú bổ sung AgNO3 thay đổi theo cỏc nồng độ như trong bảng 2.2

Kết quả được xử lý bằng phần mềm Statgraphics plus 3.0 Sự khác biệt có ý nghĩa ở mức 95 % của giá trị được thể hiện bởi các chữ cái kèm theo (phân hạng Duncan).

2.2.4 Khảo sát nồng độ TDZ kết hợp với AgNO 3 10 mg/L ảnh hưởng đến sự cảm ứng noãn tạo phôi cây bí đỏ Cucurbita moschata (Duch.) Poir

Mục đích thí nghiệm: Tìm ra nồng độ thích hợp cho việc cảm ứng tạo phôi từ noãn bí đỏ

Mụi trường nuụi cấy: Mụi trường MS ẵ cú bổ sung AgNO3 10 mg/L và TDZ thay đổi nồng độ như trong bảng 2.3

Nghiệm thức Nồng độ AgNO3

Bảng 2.2 Các nghiệm thức trong thí nghiệm khảo sát nồng độ AgNO 3 ảnh hưởng đến sự cảm ứng noãn tạo phôi cây bí đỏ Cucurbita moschata (Duch.) Poir

Kết quả được xử lý bằng phần mềm Statgraphics plus 3.0 Sự khác biệt có ý nghĩa ở mức 95 % của giá trị được thể hiện bởi các chữ cái kèm theo, phân hạng Duncan.

Bảng 2.3 Các nghiệm thức trong thí nghiệm khảo sát nồng độ TDZ kết hợp với AgNO 3 10 mg/L ảnh hưởng đến sự cảm ứng noãn tạo phôi cây bí đỏ

KẾT QUẢ THẢO LUẬN

Quan sát hình thái giải phẫu

Hình ảnh giải phẫu noãn bí đỏ được thu hái một ngày trước khi nở có cấu tạo gồm những phần sau:

Bên ngoài là thành của bầu noãn gồm hai lớp biểu bì: biểu bì ngoài và biểu bì trong, giữa hai lớp biểu bì là nhu mô chứa các bó libe mộc Các lá noãn chứa noãn sẽ đính vào các giá nằm ở mép trong của bầu noãn (hình 3.2)

Hình 3.2 Hình thái giải phẫu noãn bí đỏ 1 ngày trước khi nở

Hình 3.1 Bầu noãn bí đỏ 1 ngày trước khi nở

Khảo sát nồng độ TDZ ảnh hưởng đến sự cảm ứng noãn tạo phôi cây bí đỏ Cucurbita moschata (Duch.) Poir

Noón bớ đỏ sau khi được khử trựng, cắt lỏt mỏng cấy vào mụi trường MS ẵ cú bổ sung TDZ với các nồng độ khác nhau và được ủ ở nhiệt độ lạnh 5 ± 2 o C trong 3 ngày, sau đó mang ra để ở nhiệt độ phòng nuôi 25± 2 o C trong vòng 4 tuần Kết quả thu được từ bảng 3.1 cho thấy nghiệm thức cao nhất là nghiệm thức MS ẵ bổ sung TDZ 0,5 mg/L (3 noãn) Tiếp theo cho kết quả thấp hơn lần lượt là nghiệm thức MS ẵ bổ sung TDZ 0,2 mg/L (2,67 noón), TDZ 0,15 mg/L (2,67 noón), TDZ 0,1 mg/L (2,33 noãn) và nghiệm thức TDZ 0,05 mg/L (2 noãn) Nghiệm thức cho kết quả thấp nhất là nghiệm thức đối chứng (0,33 noãn) (bảng 3.1.)

Nghiệm thức Số noãn cảm ứng

0,10 2,33 ab Noãn phát triển, màu xanh

0,15 2,67 ab Noãn phát triển tốt, noãn màu xanh, phình to

0,20 2,67 ab Noãn phát triển tốt, noãn màu xanh, phình to

0,50 3,00 a Noãn phát triển tốt, noãn màu xanh, phình to cv% 21,65

Bảng 3.1 Số noón cảm ứng và trạng thỏi noón bớ đỏ trờn mụi trường MS ẵ có bổ sung TDZ với các nồng độ khác nhau sau 4 tuần nuôi cấy

Trong cùng một cột các số liệu có cùng mẫu tự không có sự khác biệt ở mức ý nghĩa 0,05 qua phép thử Duncan

Trong đó: ĐC: Đối chứng với TDZ 0 mg/L noãn không phát triển Hình dạng và kích thước mẫu không thay đổi Mẫu có màu trắng đục

T1: TDZ 0,05 mg/L noãn phát triển kém Kích thước mẫu có thay đổi ít, mẫu có màu xanh nhạt, cong hơn so với ban đầu

T2: TDZ 0,1 mg/L noãn phát triển Kích thước mẫu có thay đổi, mẫu có màu xanh, phồng to hơn ban đầu

Hỡnh 3.3 Noón bớ đỏ sau 4 tuần nuụi cấy trờn mụi trường MS ẵ cú bổ sung TDZ với các nồng độ khác nhau

T3: TDZ 0,15 mg/L noãn phát triển Kích thước mẫu thay đổi rõ rệt, mẫu có màu xanh đậm, phồng to và cong hơn so với ban đầu

T4: TDZ 0,2 mg/L noãn phát triển tốt Kích thước mẫu thay đổi rõ rệt, mẫu có màu xanh đậm, phồng to và cong hơn so với ban đầu

T5: TDZ 0,5 mg/L noãn phát triển tốt Kích thước mẫu thay đổi rõ rệt, mẫu có màu xanh đậm và xanh nhạt, phồng to và cong hơn so với ban đầu

TDZ được biết đến là một chất điều hòa tăng trưởng thực vật có ảnh hưởng đến sự cảm ứng và hình thành phôi Kết quả từ thí nghiệm cho thấy tất cả các nghiệm thức có bổ sung TDZ đều cho kết quả tốt hơn nghiệm thức không có TDZ, điều này chứng tỏ rằng TDZ đã có một tác động đáng kể đến việc cảm ứng noãn bí đỏ Tuy nhiên, có sự khác biệt giữa các nồng độ TDZ trong thí nghiệm Sau 4 tuần nuôi cấy, nghiệm thức MS 1/2 bổ sung TDZ 0,5 mg/L cho kết quả tốt nhất (3 noãn), noãn phát triển tốt, cảm ứng tốt hơn so với các nghiệm thức còn lại Kết quả này không phù hợp với các nghiên cứu đã công bố trước đó Năm 2018, Kurtar và cộng sự đã sản xuất cây đơn bội bằng phương pháp nuôi cấy noãn thông qua mô sẹo ở Cucurbita maxima (Duch.) Poir Các noãn được thu nhận vào các thời điểm ra hoa khác nhau Môi trường chứa BAP 4,0 mg/L + NAA 0,05 mg/L + TDZ 0,1 mg/L cho kết quả cảm ứng phôi tốt nhất Cho thấy có sự khác biệt về kiểu gen nên kết quả có sự khác biệt về nồng độ TDZ.

Khảo sát nồng độ AgNO 3 ảnh hưởng đến sự cảm ứng noãn tạo phôi cây bí đỏ Cucurbita moschata (Duch.) Poir

Thử nghiệm cấy noãn bớ đỏ đã khử trùng sau khi cắt mỏng vào môi trường MS bổ sung AgNO3 với các nồng độ khác nhau và ủ ở nhiệt độ lạnh 5 ± 2 o C trong 3 ngày Sau đó, các noãn được chuyển sang nuôi ở nhiệt độ phòng 25 ± 2 o C trong vòng 4 tuần Kết quả cho thấy nghiệm thức MS bổ sung AgNO3 10 mg/L có số noãn nảy mầm cao nhất (3 noãn) Ngược lại, nghiệm thức đối chứng (không bổ sung AgNO3) có số noãn nảy mầm thấp nhất (0,33 noãn) Các nghiệm thức còn lại đều có số noãn nảy mầm cao hơn nghiệm thức đối chứng, tuy nhiên không có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê.

Trong cùng một cột các số liệu có cùng mẫu tự không có sự khác biệt ở mức ý nghĩa

5,0 2,00 ab Noãn phát triển, màu xanh

7,5 2,00 ab Noãn phát triển, noãn màu xanh, phình to

10,0 3,00 a Noãn phát triển tốt, noãn màu xanh, phình to

12,5 2,33 ab Noãn phát triển, noãn màu xanh, phình to cv% 30,41

Bảng 3.2 Số noón cảm ứng và trạng thỏi noón bớ đỏ trờn mụi trường MS ẵ có bổ sung AgNO 3 với các nồng độ khác nhau sau 4 tuần nuôi cấy

Trong đó: ĐC: Đối chứng với AgNO 3 0 mg/L noãn không phát triển Hình dạng và kích thước mẫu không thay đổi Noãn có màu trắng đục

A1: AgNO 3 2,5 mg/L noãn kém phát triển Hình dạng và kích thước mẫu có thay đổi ít Noãn có màu xanh nhạt

A2: AgNO 3 5 mg/L noãn phát triển Kích thước mẫu cong hơn so với ban đầu Noãn có màu xanh và hóa nâu một phần

A3: AgNO 3 7,5 mg/L noãn phát triển Kích thước mẫu phồng và cong hơn so với ban đầu Noãn có màu xanh và hóa nâu một phần

Hỡnh 3.4 Noón bớ đỏ sau 4 tuần nuụi cấy trờn mụi trường MS ẵ cú bổ sung AgNO 3 với các nồng độ khác nhau

A4: AgNO 3 10 mg/L noãn phát triển tốt Kích thước mẫu phồng và cong hơn so với ban đầu Noãn có màu xanh Một số lá noãn mọc tách ra ngoài

A5: AgNO 3 12,5 mg/L noãn phát triển Kích thước mẫu phồng và cong hơn so với ban đầu Noãn có màu xanh đậm

Sau 4 tuần nuụi cấy, nghiệm thức MS ẵ bổ sung AgNO3 10 mg/L cho kết quả tốt nhất (3 noãn), noãn có màu xanh, cong hơn ban đầu Các ion bạc được cung cấp dưới dạng nitrate (AgNO3) được ứng dụng nhiều vào nuôi cấy mô tế bào thực vật nhờ đặc tính kháng nấm, kháng khuẩn mà không gây ảnh hưởng đến sức khỏe con người (Abdi et al., 2012) Mặt khác, các ion bạc còn đóng vai trò quan trọng trong sự phát triển của mô sẹo, tái tạo và phát sinh phôi soma, tái sinh chồi trong nuôi cấy in vitro (Bais et al.,1999) Tuy nhiên, nồng độ của AgNO3 được sử dụng khác nhau theo từng loài thực vật Trên cây bắp cải, ở nồng độ AgNO3 10 mg/L cho tỉ lệ tạo phôi cao nhất (Biddington et al., 1988) Ở cây ngô, bắp non sau khi thụ phấn khoảng 18 – 24 ngày được thu nhận để tách phôi Ở nồng độ 10 mg/L AgNO3 thì khả năng tạo mô sẹo và tái sinh cây đạt giá trị lớn nhất (90,5 % ) (Phạm Thị Lý Thu và cs., 2003) Đây cũng là kết quả phù hợp với thí nghiệm của chúng tôi.

Khảo sát nồng độ TDZ kết hợp với AgNO 3 10 mg/L ảnh hưởng đến sự cảm ứng noãn tạo phôi cây bí đỏ Cucurbita moschata (Duch.) Poir

sự cảm ứng noãn tạo phôi cây bí đỏ Cucurbita moschata (Duch.) Poir

Nghiên cứu cho thấy việc bổ sung AgNO3 và TDZ vào môi trường MS đã thúc đẩy sự phát triển của nón bớ đỏ sau khử trùng và cắt mỏng Trong số các nghiệm thức, bổ sung TDZ 0,5 mg/L và AgNO3 10 mg/L cho tỷ lệ sống cao nhất, cao hơn đáng kể so với nghiệm thức đối chứng Các nghiệm thức bổ sung TDZ 0,1 mg/L và AgNO3 2,5 mg/L; TDZ 0,25 mg/L và AgNO3 5 mg/L; TDZ 0,5 mg/L và AgNO3 5 mg/L cho tỷ lệ sống thấp hơn nghiệm thức bổ sung TDZ 0,5 mg/L và AgNO3 10 mg/L nhưng không có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê.

Trong cùng một cột các số liệu có cùng mẫu tự không có sự khác biệt ở mức ý nghĩa

Trạng thái noãn ĐC 0,33 c Noãn không phát triển

AT1 2,33 ab Noãn phát triển tốt, phình to

AT2 2,00 b Noãn phát triển tốt, phình to

AT3 2,67 ab Noãn phát triển tốt, phình to, một số lá noãn mọc tách ra ngoài

AT4 2,33 ab Noãn phát triển tốt, phình to

AT5 3,00 a Noãn phát triển tốt, phình to, một số lá noãn mọc tách ra ngoài cv% 22,33

Bảng 3.3 Số noón cảm ứng và trạng thỏi noón bớ đỏ trờn mụi trường MS ẵ cú bổ sung AgNO 3 10 mg/L và TDZ với các nồng độ khác nhau sau 4 tuần nuôi cấy

Trong đó: ĐC: Đối chứng với AgNO 3 0 mg/L và TDZ 0 mg/L noãn không phát triển Hình dạng và kích thước mẫu không thay đổi Noãn có màu trắng đục

AT1: AgNO 3 10 mg/L và TDZ 0,05 mg/L noãn phát triển tốt Hình dạng phồng to, kích thước mẫu có thay đổi Noãn có màu xanh

AT2: AgNO 3 10 mg/L và TDZ 0,1 mg/L noãn phát triển Kích thước mẫu cong hơn so với ban đầu Noãn có màu xanh

AT3: AgNO 3 10 mg/L và TDZ 0,15 mg/L noãn phát triển Kích thước mẫu phồng và cong hơn so với ban đầu Noãn có màu xanh Một số lá noãn mọc tách ra ngoài

Hỡnh 3.5 Noón bớ đỏ sau 4 tuần nuụi cấy trờn mụi trường MS ẵ cú bổ sung AgNO 3 10 mg/L và TDZ với các nồng độ khác nhau

AT4: AgNO 3 10 mg/L và TDZ 0,2 mg/L noãn phát triển tốt Kích thước mẫu phồng và cong hơn so với ban đầu Noãn có màu xanh

AT5: AgNO 3 10 mg/L và TDZ 0,5 mg/L noãn phát triển Kích thước mẫu phồng và cong hơn so với ban đầu Noãn có màu xanh đậm Một số lá noãn mọc tách ra ngoài

Từ thí nghiệm 1 TDZ kích thích các noãn phát triển ở rìa của mẫu Còn AgNO3 ở thí nghiệm 2 lại kích thích các lá noãn nằm ở trung tâm của mẫu phát triển Sự kết hợp của AgNO3 và TDZ sẽ thúc đẩy noãn cảm ứng, phát triển mạnh mẽ Sau 4 tuần nuôi cấy trên môi trường kết hợp cho thấy tất cả các mẫu của các nghiệm thức đều phát triển mạnh, lá noãn mọc tách ra ngoài và không có sự khác biệt có ý nghĩa qua thống kê Tuy nhiên, ở nghiệm thức TDZ 0,5 mg/L và AgNO3 10 mg/L có xuất hiện phôi Như vậy, việc sử dụng chất điều hòa sinh trưởng thực vật phải phụ thuộc vào từng loại cây, từng mục đích thí nghiệm mà xác định nồng độ thích hợp Sử dụng với nồng độ quá cao hoặc quá thấp đều không đạt được kết quá mong muốn mà còn gây ra những phản ứng bất lợi

Tạo cây hoàn chỉnh từ phôi đã cảm ứng

Sau khi cảm ứng tạo phôi từ noãn cây bí đỏ, các mẫu cảm ứng được chuyển sang mụi trường MS ẵ để tiếp tục tạo phụi Cụ thể, ở nghiệm thức MS ẵ bổ sung TDZ 0,05 mg/L và AgNO3 10 mg/L, TDZ 0,15 mg/L và AgNO3 10 mg/L, TDZ 0,5 mg/L và AgNO3 10 mg/L thu nhận được phôi sau 8 tuần nuôi cấy (hình 3.6.) Tuy nhiên, ở nghiệm thức TDZ 0,05 mg/L và AgNO3 10 mg/L chồi phát triển nhưng mẫu đã bị nhiễm nấm, nghiệm thức TDZ 0,15 mg/L và AgNO3 10 mg/L chồi phát triển chậm hơn so vớinghiệm thức TDZ 0,5 mg/L và AgNO3 10 mg/L chồi đã kéo dài và đã tạo được rễ mầm

Sau 8 tuần tất cả cỏc mẫu được chuyển sang mụi trường MS ẵ bổ sung than hoạt tính 1 g/L để kéo dài chồi và rễ Sau 15 tuần nuôi cấy ta thu được cây hoàn chỉnh ở nghiệm thức TDZ 0,5 mg/L và AgNO3 10 mg/L (hình 3.7.), ở nghiệm thức TDZ 0,15 mg/L và AgNO3 10 mg/L chồi phát triển dị dạng, chồi kém phát triển và trở nên trắng đục sau 22 đến 23 tuần (hình 3.7.)

Hỡnh 3.6 Chồi bớ đỏ sau 8 tuần nuụi cấy trờn mụi trường MS ẵ thu nhận từ nghiệm thức tạo phôi

TDZ 0,05 mg/L + AgNO 3 10 mg/L TDZ 0,15 mg/L + AgNO 3 10 mg/L TDZ 0,5 mg/L + AgNO 3 10 mg/L

Hình 3.7 Chồi bí đỏ được nuôi cấy trên môi trường MS % bổ sung than hoạt tinh 1 g/L

Sau 22 đến 23 tuần nuôi cấy cây phát triển hoàn chỉnh ở nghiệm thức TDZ 0,5 mg/L và AgNŨ 3 10 mg/L (hình 3.7.) cao khoảng 8 cm và có 3-4 lá thật, rễ mọc dài trên môi trường, cây đủ điều kiện đưa ra ngoài trồng Cây được ngâm trong khoáng vi lượng Fetrilon-combi nồng độ 1/10 trong 2 ngày trước khi trồng vào giá thể đất.

Cây bí đỏ được nuôi cấy noãn trong 27 ngày sau đó được đưa ra ngoài trồng Kết quả cho thấy cây phát triển bình thường, với 4-5 lá thật và sự xuất hiện của chồi mới.

Kết quả này cũng tương tự với nghiên cứu của Kurtar và cộng sự., năm 2018 đã tạo cây đơn bội bằng phương pháp nuôi cấy noãn thông qua mô sẹo ở Cucurbita maxima (Duch.) Poir Cây con bắt đầu tăng trưởng trong 12 – 15 tuần nuôi cấy và phát triển thành cây hoàn chỉnh sau 22 đến 24 tuần Cây con đã ra rễ và mọc dài trên môi trường MS rắn có bổ sung axit indole-3-acetic (IAA) 0,01 mg/L + BAP 1,0 mg/L Tuy nhiờn, ở thớ nghiệm này chỳng tụi sử dụng MS ẵ bổ sung 1 g/L than hoạt tớnh để kéo dài chồi và rễ

Hình 3.8 Cây bí đỏ có nguồn gốc từ nuôi cấy noãn sau 27 ngày đưa ra ngoài trồng

KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ

Tiêu đề	Khảo Sát Môi Trường Thích Hợp Tạo Cây Đơn Bội Kép Từ Bầu Noãn Cây Bí Đỏ Cucurbita Moschata (Duch.) Poir.
Tác giả	Thái Thị Thúy Kiều
Người hướng dẫn	TS. Nguyễn Trần Đụng Phương
Trường học	Trường Đại Học Mở Thành Phố Hồ Chí Minh
Chuyên ngành	Công Nghệ Sinh Học
Thể loại	Khóa Luận Tốt Nghiệp
Năm xuất bản	2021
Thành phố	Thành Phố Hồ Chí Minh

Định dạng
Số trang	59
Dung lượng	1,79 MB