Thực hành môn sinh lý vật nuôi – thủy sản

Dùng ngón tay trỏ bịt miệng ống để dung dịch khỏi chảy, luồn ống thông tim qua vết cắt chữ V ở nhánh động mạch chủ trái, tay đẩy cẩn thận sao cho đầu nhỏ của ống thông vào tận tâm thất d

TRƯỜNG ĐẠI HỌC QUY NHƠN KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN

- THỰC HÀNH MÔN: SINH LÝ VẬT NUÔI – THỦY SẢN

Giảng viên: ThS Võ Thị Hồng Phượng Phòng TH: Khoa học vật nuơi - động vật

MỤC LỤC

1 Phân tích hệ thống đường truyền của tim (TN Thắt nút stannius) 6

1 Làm tim rời – ảnh hưởng của thể dịch đối với hoạt động của tim cô lập 9

1 Xác định thành phần khí CO2 trong khi hít vào và thở ra 13

1 Sử dụng hoocmon HCG kích thích ếch bài xuất tinh trùng 20

Bài 1: SINH LÝ MÁU VÀ BẠCH HUYẾT

(Xác định hàm lượng Hêmôglobin trong máu gà;

Xác định số lượng hồng cầu gia cầm)

I MỤC ĐÍCH - YÊU CẦU

- Biết cách xác định số lượng hồng cầu trong 1mm3 máu và xác định hàm lượng Hêmôglobin (Hb) có trong 100 ml máu bằng huyết sắc kế Sali Các chỉ tiêu này phụ thuộc vào loài, tuổi, trạng thái sinh lý của động vật

- Tiến hành tuần tự theo các bước và cẩn thận Rèn luyện kỹ năng thao tác và quan sát thí nghiệm

II PHƯƠNG TIỆN THÍ NGHIỆM

2.1 Đối tượng thí nghiệm:

- Huyết sắc kế Sali: 2 bộ (TN1)

- Kính hiển vi quang học: 2 cái (TN2)

- Buồng đếm hồng cầu Neubauer: 2 bộ (TN2)

III NỘI DUNG THÍ NGHIỆM

1 Thí nghiệm 1: Xác định hàm lượng Hêmôglobin trong máu gà

1.1 Bước 1: Làm quen với dụng cụ

- Cấu tạo huyết sắc kế Sali:

+ Huyết sắc kế Sali gồm 1 hộp nhựa có 3 ngăn Ở hai bên có gắn hai ống thuỷ tinh kín chứa dung dịch clohyđrat-hêmatin dùng làm mẫu để so màu Ngăn giữa để chứa ống nghiệm chuẩn độ

+ Pipét để lấy máu gồm một đoạn ống cao su nối liền với ống thuỷ tinh có chia vạch 0,02 ml

1.2 Bước 2: Tiến hành thí nghiệm

- Dùng pipét cho HCl 0,1N vào ống nghiệm chuẩn độ của huyết sắc kế đến vạch thấp nhất (vạch số 2)

- Tráng ống pipét lấy máu bằng dung dịch chống đông và thổi cho hết lượng dung dịch thừa trong pipet

- Sát trùng kim chích máu và vị trí lấy máu bằng cồn iốt (ghi chú: gà thì lấy máu ở tĩnh mạch cánh)

- Chích máu và dùng pipét lấy máu đến vạch 0,02ml (không được lẫn bọt khí) Lấy giấy thấm lau sạch quanh đầu ống, rồi cho pipét hơi ngập vào dung dịch HCl 0,1N chứa trong ống nghiệm Thổi nhẹ cho máu ra nằm ở đáy ống và hút lên thổi xuống nhiều lần để rửa sạch máu trong pipét Lắc nhẹ và đặt ống vào ngăn giữa của huyết sắc kế, chờ 5 phút Dung dịch trong ống nghiệm chuyển dần sang màu nâu thẫm do HCl tác dụng với Hb tạo thành dung dịch hêmatin-clohydric (chú ý: tránh hiện tượng ngưng kết của máu)

- Dùng pipet nhỏ nước cất vào ống nghiệm đến vạch số 8,0 rồi lấy đủa thuỷ tinh khuấy nhẹ cho dung dịch hoà đều Quan sát và so sánh màu của dung dịch trong ống nghiệm với màu của 2 ống dung dịch chuẩn Xoay ống giữa, tránh phía có vạch để dễ so màu Đưa huyết sắc kế lên ngang tầm mắt về phía ánh sáng vừa phải để nhìn Nếu dung dịch trong ống nghiệm có màu đậm hơn thì tiếp tục nhỏ thêm một ít nước cất, khuấy đều và quan sát Khi nào thấy màu của 3 ống như nhau thì đọc kết quả

- Cách đọc kết quả: Xoay mặt có vạch và số ra ngoài, xem mặt nước lõm ứng với vạch nào Đó là số gam Hb trong 100ml máu

+ Ví dụ: Vạch chỉ 12,7 thì kết quả xác định hàm lượng Hb trong máu sẽ là 12,7g% (nghĩa là trong 100ml máu có 12,7g Hb)

1.3 Bước 3: Kết quả thí nghiệm Ý nghĩa của việc xác định hàm lượng Hb trong máu

2 Thí nghiệm 2: Xác định số lượng hồng cầu gia cầm

* Làm quen với buồng đếm Neubauer

- Cấu tạo của buồng đếm, ống trộn:

+ Buồng đếm: có nhiều loại buồng đếm khác nhau nhưng nguyên tắc chung là khi cho máu đã pha loãng vào buồng đếm đã biết trước thể tích để đếm và tính ra số lượng hồng cầu trong 1mm3 máu

Thường ta dùng buồng đếm Neubauer: buồng đếm Neubauer có một ô vuông lớn, ô vuông lớn có 16 ô vuông trung, mỗi ô vuông trung có 16 ô vuông con

Mỗi ô vuông con có chiều sâu (h) = 1/10mm, chiều rộng mỗi cạnh (c) = 1/20mm, thể tích mỗi ô con (v) = 1/20 x 1/20 x 1/10 = 1/4000mm3

+ Ống trộn hồng cầu: là một pipét mao quản có chỗ phình to, bên trong có viên nhựa màu đỏ để trộn đều dung dịch Trên ống có khắc vạch 0,5; 1 và 101

- Nguyên tắc pha loãng máu:

Hồng cầu trong 1mm3 máu rất nhiều, muốn đếm được dùng dung dịch pha loãng và đếm trực tiếp trong một thể tích nhỏ, sau đó tính được số lượng hồng cầu trong một thể tích lớn Dung dịch pha loãng hồng cầu là dung dịch muối NaCl 1% (hơi ưu trương) Mục đích pha loãng là để số lượng hồng cầu trong một thể tích máu ít nên dễ đếm trên buồng đếm

Nếu hút máu đến vạch 0,5 rồi hút tiếp dung dịch pha loãng hồng cầu đến vạch 101, máu được pha loãng 200 lần; nếu hút máu đến vạch 1 rồi hút tiếp dung dịch pha loãng hồng cầu đến vạch 101, máu được pha loãng 100 lần

2.1 Bước 1: Chuẩn bị thí nghiệm

Tráng ống trộn hồng cầu bằng dung dịch chống đông máu, vẩy ống sạch nước (để giấy thấm ở đầu ống trộn, dùng ống bóp cao su thổi ở đầu kia của ống trộn cho sạch nước bên trong ống trộn)

Tiến hành lấy máu vào buổi sáng lúc con vật chưa ăn và khơng vận động Trước khi lấy máu phải dùng kéo cắt lơng ở rìa tai (đối với động vật cĩ lơng tai) cho sạch Vị trí lấy máu tuỳ thuộc vào loại gia súc: Bị, lợn, thỏ lấy máu ở tĩnh mạch tai, gia cầm thường lấy máu ở cánh Dùng bơng tẩm cồn i ốt sát trùng kim chích máu và chỗ lấy máu, chờ một chút cho cồn khơ Dùng kim chích máu chích vào tĩnh mạch rìa tai Lau bỏ giọt máu đầu tiên để giọt máu sau chảy ra cho trịn đều

- Đặt đầu ống trộn hồng cầu lên giọt máu nhưng khơng áp sát vào da với độ nghiêng 300 từ từ hút máu đến vạch 0,5 (khơng lẫn bọt khí) rồi nhấc đầu ống trộn

ra khỏi giọt máu Dùng bơng lau nhẹ bên ngồi, xung quanh đầu ống trộn để loại

- Thổi bỏ vài giọt đầu vì ở phần mao quản máu thường lỗng hơn trong chỗ phình to của ống trộn

- Cho máu vào buồng đếm: buồng đếm đã được đưa lên kính hiển vi xác định

vị trí trước, tiếp theo là đậy lamen lên rồi điều cho chỉnh rõ Sau đĩ, nhỏ 1 giọt dung dịch máu đã trộn đều vào rìa lamen và buồng đếm, theo mao dẫn dung dịch máu sẽ chảy khắp mặt buồng đếm Để tránh bọt khí trong buồng đếm thì nên dùng đũa thuỷ tinh sát vào bên trên của lamen, sao cho lamen áp sát vào buồng đếm 2.2 Bước 2: Tiến hành đếm và tính

* Tiến hành đếm:

Đặt buồng đếm dưới thị trường kính hiển vi, điều chỉnh ánh sáng vừa phải Tìm vị trí buồng đếm ở vật kính 8 hoặc 10 Quan sát cấu tạo buồng đếm và xác định vị trí các ô cần đếm (4 ô trung ở 4 góc và 1 ô trung ở giữa để đảm bảo độ đồng đêu) Sau đó, chuyển sang vật kính 20 hoặc 40 để đếm

- Đếm số lượng hồng cầu ở 5 ô vuông trung, mỗi ô trung gồm 16 ô con Đếm số hồng cầu nằm gọn trong ô con và trên 2 cạnh quy ước Để tránh nhầm lẫn ta lần lượt đếm từng hàng từ phải sang trái, hàng dưới từ trái sang phải…

Tổng số ô phải đếm: 5 ô trung x 16 ô con = 80 ô con (được A hồng cầu)

Hình vẽ: a Ô lớn của buồng đếm hồng cầu

b 1 ô trung

* Tiến hành tính:

Tính số lượng hồng cầu trong 1mm

N: Số lượng hồng cầu trong 1 mm

A: Số lượng hồng cầu trong 80 ô con (5 ô trung)

1/4000 mm3: Thể tích 1 ô con

200: Độ pha loãng của máu

Thay tiêu bản mới, đếm lại 3 lần để lấy kết quả trung bình

2.3 Bước 3: Trình bày k

lượng hồng cầu

a Ô lớn của buồng đếm hồng cầu = 16 ô trung

b 1 ô trung = 16 ô con (phóng lớn)

hồng cầu trong 1mm3 theo công thức:

10.000 A

80

200 4000 A

N: Số lượng hồng cầu trong 1 mm3 máu

A: Số lượng hồng cầu trong 80 ô con (5 ô trung)

Thể tích 1 ô con

200: Độ pha loãng của máu

Thay tiêu bản mới, đếm lại 3 lần để lấy kết quả trung bình

Trình bày kết quả thí nghiệm Ý nghĩa của việc xác định

= 16 ô trung;

Thay tiêu bản mới, đếm lại 3 lần để lấy kết quả trung bình

Ý nghĩa của việc xác định số

Bài 2: SINH LÝ TUẦN HOÀN

(Phân tích hệ thống đường truyền của tim (Thắt nút Stannius);

Ghi đồ thị hoạt động của tim ếch)

I MỤC ĐÍCH – YÊU CẦU

- Chứng minh vai trị của các hạch thần kinh tim đối với sự hoạt động của tim

- Biết phương pháp ghi đồ thị hoạt động của tim ếch Qua đường ghi đồ thị thấy rõ tim hoạt động rất nhịp nhàng, liên tục, theo một chu kỳ nhất định Phân tích hoạt động một chu kỳ tim Xác định tần số hoạt động của tim ếch trong 1 phút

- Rèn luyện kỹ năng thao tác và quan sát thí nghiệm

II PHƯƠNG TIỆN THÍ NGHIỆM

2.1 Đối tượng thí nghiệm:

- Xiranh hoặc pipét, cốc thuỷ tinh 100, hộp lồng petri (TN1+TN2)

III NỘI DUNG THÍ NGHIỆM

1 Thí nghiệm 1: Phân tích hệ thống đường truyền của tim (Thắt nút Stannius) 1.1 Bước 1: Chuẩn bị thí nghiệm

Mổ lộ tim ếch: Huỷ tuỷ ếch, ghim ngửa trên khay mổ Dùng kẹp nâng phần

da và phần sụn ức lên, dùng kéo cắt một lỗ qua da và đầu phần sụn ức Luồn đầu kẹp vào khoang, kẹp chặt đầu sụn ức nâng lên để đưa mũi kéo vào khoang (chú ý: đầu mũi kéo phải luơn hướng lên phía trên để khơng cắt phạm vào các nội quan khác) Cắt vát sang hai bên của phần sụn ức theo hình chữ V lên đến xương hai chi trên, dùng kéo bấm xương cắt đứt xương chi trên và cắt tiếp lên đến sát hốc hàm dưới, sau đĩ cắt ngang qua phần da và cơ Như vậy, ta đã cắt phần da và cơ của lồng ngực gần thành một tam giác cân cĩ đỉnh là điểm đầu sụn ức Nếu cắt đúng, máu chảy rất ít và các nội quan nhất là phổi sẽ khơng lộ ra

Dùng kẹp, nhẹ nhàng kẹp xoang bao tim nâng lên rồi dùng kéo cắt một lỗ tròn ở gần mỏm tim Sau đó, luồn mũi kéo nhọn nhỏ vào xoang bao tim hướng lên phía trên rồi cắt dọc xoang bao tim đến tận gốc tim để lộ tim hoàn toàn

Chú ý: sau khi mổ lộ tim ếch, kéo hai chi trên căng ra hai bên, ghim lại nhằm làm cho vết mổ mở rộng để dễ quan sát Trong quá trình thí nghiệm thỉnh thoảng phải nhỏ dung dịch sinh lý để tim khỏi bị khô

1.2 Bước 2: Tiến hành thí nghiệm

- Quan sát sự co bóp của các phần tim Đếm nhịp tim trong 3 phút để lấy nhịp trung bình cho 1 phút

- Tiến hành các nút thắt:

Hình: Thắt nút Stannius

A Nút thắt thứ nhất: Ngăn cách hạch xoang tĩnh mạch với tim

B Nút thắt thứ hai: Ngăn cách nút Ludwig với nút Bidder

+ Nút thắt thứ nhất: ngăn cách hạch xoang tĩnh mạch với tim

Dùng kẹp luồn sợi chỉ dưới 2 nhánh động mạch chủ bên phải và trái rồi lật ngược tim lên phía trên Lúc này sợi chỉ nằm ở ranh giới giữa xoang tĩnh mạch và tim ếch Kéo 2 đầu của sợi chỉ và kéo sợi chỉ lui xuống phía dưới một chút rồi thắt chặt lại Làm như vậy là đã ngăn cách hạch xoang với các phần còn lại của tim, tức

là đã ngăn cách nút Remark (ở xoang tĩnh mạch) với nút Ludwig (ở vách liên nhĩ) và nút Bidder (ở vách trên 2/3 tâm thất)

Lưu ý: hệ thống nút này là của tim ếch

Quan sát và đếm nhịp đập của xoang tĩnh mạch và các phần còn lại của tim: ngay sau khi thắt và sau 5-6 phút Giải thích kết quả thu được?

+ Nút thắt thứ hai: Ngăn cách nút Ludwig với nút Bidder

Vòng sợi chỉ buột nút thắt ngang qua đường ranh giới giữa tâm nhĩ và tâm thất Quan sát sự hoạt động của tim ếch và đếm nhịp co bóp của tâm nhĩ và tâm thất So sánh nhịp đập của tâm nhĩ và tâm thất Giải thích hiện tượng?

+ Nút thắt thứ ba: Cởi hai nút thắt trên, để một lát cho xoang tĩnh mạch, tâm nhĩ và tâm thất đập bình thường Sau đó cột nút thứ 3 ở mỏm tâm thất (1/3 tâm thất tính từ mỏm lên) Quan sát và đếm nhịp các phần của tim Giải thích?

* Chú ý: Trong quá trình thí nghiệm thỉnh thoảng nhỏ dung dịch sinh lý lên tim để tim khỏi bị khô Yêu cầu thắt các nút thật chính xác

1.3 Bước 3: Trình bày kết quả thí nghiệm, giải thích và rút ra kết luận?

2 Thí nghiệm 2: Ghi đồ thị hoạt động của tim ếch

2.1 Bước 1: Mổ lộ tim ếch (giống bước 1 của thí nghiệm 1)

2.2 Bước 2: Tiến hành thí nghiệm

a) Quan sát hoạt động của tim:

- Đếm nhịp tim trong 3 phút, tính nhịp trung bình của 1 phút

- Quan sát trình tự hoạt động (co, giãn), màu sắc của các phần tim: xoang tĩnh mạch, tâm nhĩ, tâm thất

b) Ghi đồ thị hoạt động của tim ếch:

Lắp hệ thống trụ ghi, cần ghi, bút ghi và tiến hành ghi đồ thị:

- Dùng kẹp tim kẹp vào đầu mỏm tim ếch Đầu chỉ còn lại buộc vào hệ thống cần ghi Điều chỉnh hệ thống cần ghi sao cho đầu bút ghi tiếp xúc với mặt trục ghi tạo thành một góc 150 để đường ghi phản ánh sự co bóp của tim rõ nhất Trên băng giấy của mặt trục ghi sẽ ghi lại sự hoạt động nhịp nhàng của các pha trong chu kỳ tim

Lưu ý: Trong khi theo dõi đường ghi trên đồ thị cần kết hợp quan sát hoạt động tim để xác định rõ sự tương ứng giữa đường ghi và sự hoạt động của các phần tim Thỉnh thoảng nhỏ dung dịch sinh lý lên tim để tim khỏi bị khô

2.3 Bước 3: Trình bày kết quả thí nghiệm, giải thích và rút ra kết luận?

Bài 3: SINH LÝ TUẦN HOÀN

(Làm tim rời - chứng minh ảnh hưởng của thể dịch đối với hoạt động của tim cô lập; Quan sát sự tuần hoàn máu ở trong mạch)

I MỤC ĐÍCH – YÊU CẦU

- Biết phương pháp làm chế phẩm tim cô lập (tức là tách rời tim ra ngoài

cơ thể để không còn ảnh hưởng của thần kinh trung ương) Chứng minh khả năng hoạt động tự động của tim khi tách rời khỏi cơ thể và vai trò của thể dịch lên sự điều hoà hoạt động của tim

- Quan sát để thấy được sự tuần hồn máu trong hệ mạch Qua cấu tạo và quan sát chiều vận chuyển của máu phân biệt được động mạch, tĩnh mạch và mao mạch Phân biệt được vận tốc máu trong mao mạch so với động mạch và tĩnh mạch Qua đĩ, thấy được đặc điểm cấu tạo phù hợp với chức năng

- Rèn luyện kỹ năng thí nghiệm và quan sát thí nghiệm

II PHƯƠNG TIỆN THÍ NGHIỆM

1 Đối tượng thí nghiệm

- Ếch to khoẻ

2 Hoá chất thí nghiệm

- Dung dịch sinh lý NaCl 0,65%

- Dung dịch Ađrênalin

3 Dụng cụ thí nghiệm

- Bộ đồ mổ tiểu động vật, đinh ghim, khay mổ, ván mổ, ván mỗ cĩ khoét lỗ

ở 3 vị trí

- Chỉ buộc, bông thấm nước

- Ống thông tim, Móc thuỷ tinh

- Kính lúp, đồng hồ bấm giây, bộ nguồn kích thích

- Sơ ranh, hộp lồng petri, cốc thuỷ tinh 100ml

- Kính hiển vi có vật kính 90 hoặc 100

III NÔI DUNG THÍ NGHIỆM

1 Thí nghiệm 1: Làm tim rời – ảnh hưởng của thể dịch đối với hoạt động của tim cô lập

1.1 Bước 1: Chuẩn bị chế phẩm tim rời

a) Hủy tủy ếch, ghim ếch ngửa trên khay mổ, mổ lộ tim, cắt bỏ xoang bao tim

b) Chuẩn bị 6 đoạn chỉ ngắn (5-7 cm) để buộc các mạch

- Dùng móc thuỷ tinh tách hai cung động mạch chủ ra khỏi các tổ chức xung quanh Dùng 2 đoạn chỉ tạo các nút buộc

+ Nút 1: Luồn dưới động mạch nhánh trái, xa tim rồi buộc “hờ”

+ Nút 2: Luồn dưới động mạch nhánh phải, buộc chặt, cắt gọn hai đầu chỉ

- Lật ngược tim ếch, dùng móc thuỷ tinh tách hai tĩnh mạch phổi trái và phải ra khỏi các tổ chức xung quanh Dùng 2 đoạn chỉ tạo các nút buộc

+ Nút 3, 4: Luồn chỉ 3 và 4 qua tĩnh mạch phổi phải và trái buột chặt, cắt gọn đầu chỉ

- Dùng móc thuỷ tinh tách tĩnh mạch chủ ra khỏi các tổ chức xung quanh Dùng 1 đoạn chỉ tạo nút buộc

+ Nút 5: Luồn chỉ phía trên hơi xa ngã 3 của tĩnh mạch chủ buộc “hờ” + Nút 6: Luồn chỉ phía trên ngã 3 của tĩnh mạch chủ buộc “chặt” (dưới nút buộc 5)

c) Rửa tim:

Lật tim trở lại và đặt mũi kéo nhỏ, sắc lên thành động mạch chủ trái (ngoài nút 1) hướng mũi kéo về phía tim rồi bấm vát một nhát hình chữ V (để dễ luồn ống thông sau khi đã rửa sạch máu trong tim)

Dùng bơm tiêm chứa đầy dung dịch sinh lý, luồn đầu kim qua tĩnh mạch (chính giữa nút 5 và nút 6), bơm từ từ dung dịch sinh lý vào rửa sạch máu trong tim (đến khi tim chuyển sang màu trắng đục) rồi buột chặt nút chỉ 5

- Luồn ống thông tim

Ống thông tim chứa đầy dung dịch sinh lý Dùng ngón tay trỏ bịt miệng ống để dung dịch khỏi chảy, luồn ống thông tim qua vết cắt chữ V ở nhánh động mạch chủ trái, tay đẩy cẩn thận sao cho đầu nhỏ của ống thông vào tận tâm thất (dấu hiệu cho thấy ống thông tim đã nằm trong khoang tâm thất là có máu phun lên) Buộc chặt thành động mạch vào đúng eo thắt của ống thông Nhấc cao cả ống thông lẫn tim lên, dùng kéo cắt tách tim khỏi lồng ngực cùng với ống thông tim Sau đó đặt tim vào hộp lồng petri có chứa dung dịch sinh lý 1.2 Bước 2: Tiến hành thí nghiệm

1.2.1 Thí nghiệm đối chứng:

- Khi mới mổ lộ tim chưa tiến hành các nút thắt, ta quan sát, đếm tần số nhịp đập/ phút

1.2.2 Thí nghiệm chứng minh:

Quan sát và đếm nhịp tim ở các loạt như sau:

- Trường hợp 1: Quan sát, đếm tần số nhịp đập/ phút trên chế phẩm tim mới tách rời không nhỏ dung dịch Ađrênalin

- Trường hợp 2: Hút bớt vài giọt dung dịch sinh lý và nhỏ vào ống thông tim vài giọt dung dịch Ađrênalin (dùng ống hút trộn đều ađrênalin với dung dịch sinh lý trong ống thông), nhỏ một vài giọt ađrênalin vào hộp lồng petri có chứa dung dịch sinh lý nuôi tim

Quan sát, đếm tần số nhịp đập/ phút trên chế phẩm tim tách rời có nhỏ dung dịch Ađrênalin

Chú ý: cắt ngoài các nút chỉ, tránh làm tổn thương xoang tĩnh mạch vì ở đây có hoạch xoang tim rất quan trọng

1.3 Bước 3: Quan sát và so sánh các hoạt động của tim ếch trong 02 trường hợp trên Từ đó, rút ra kết luận về khả năng hoạt động của tim tách rời khỏi cơ thể và vai trò của thể dịch lên sự điều hoà hoạt động của tim ếch nói riêng và tim động vật nói chung

2 Thí nghiệm 2: Quan sát sự tuần hồn máu ở trong mạch

2.1 Bước 1: Chuẩn bị

Ếch huỷ tuỷ, ghim ếch nằm ngửa lên tấm gỗ cĩ khoét lỗ

2.2 Bước 2: Tiến hành thí nghiệm

Quan sát sự vận chuyển của máu trong hệ mạch ở các vị trí sau:

* Quan sát ở màng bơi: Căng màng bơi chi sau ếch giữa các ngĩn 2 và 3 trên lỗ khoét sẵn (căng vừa phải để khơng ảnh hưởng tới sự vận chuyển máu) Đưa tấm gỗ lên kính hiển vi quan sát

- Quan sát sự vận chuyển của máu trong động mạch, trong tĩnh mạch và trong mao mạch

* Quan sát trên màng treo ruột: Dùng kéo rạch da và cơ dài khoảng 1,5 –

2 cm ở eo trái hoặc phải, dùng panh kéo nhẹ một đoạn ruột cĩ màng treo ra rồi dùng đinh ghim căng màng treo ruột trên lỗ của ván mỗ Đặt lên kính hiển vi và quan sát sự vận chuyển máu trong mao mạch, động mạch và tĩnh mạch

Ở vị trí này dễ quan sát và quan sát rõ nhất vì màng treo ruột mỏng, lại khơng cĩ tế bào sắc tố đen

Cũng làm như trên, cĩ thể quan sát sự vận chuyển máu trong mạch ở lưỡi và

ở phổi

Một số điểm cần lưu ý trong thí nghiệm:

- Khi căng màng bơi, màng treo ruột, phổi hay lưỡi cần căng vừa phải vì nếu căng quá thì các cơ và màng liên kết xung quanh các mao mạch có thể làm cho các mao mạch bị chẹn lại Do đó, máu không vận chuyển được hoặc chỉ vận chuyển được trong một số ít mao mạch còn lại, tốc độ vận chuyển sẽ tăng lên so với bình thường

- Trong quá trình thí nghiệm, thường xuyên nhỏ dung dịch sinh lý lên mẫu quan sát để giữ cho mẫu không bị khô

2.3 Bước 3: Qua cấu tạo và quan sát chiều vận chuyển máu, phân biệt được động mạch, tĩnh mạch và mao mạch Phân biệt được vận tốc máu trong mao mạch

so với động mạch và tĩnh mạch So sánh độ dày mỏng của thành mạch Qua đó, thấy được đặc điểm cấu tạo phù hợp với chức năng

Bài 4: SINH LÝ HÔ HẤP

(Xác định thành phần khí CO2 trong khi hít vào và thở ra;

Sự khuếch tán khí CO2 qua màng phổi ếch)

I MỤC ĐÍCH – YÊU CẦU

Qua bài thực hành này sinh viên phải:

- Biết phương pháp xác định thành phần khí CO2 trong khi hít vào và thở ra Chứng minh sự khác nhau về nồng độ khí CO2 trong khi hít vào và thở ra

- Biết phương pháp làm chế phẩm phổi ếch Thấy rõ hiện tượng khuyếch tán khí

CO2 qua màng phổi

- Rèn luyện kỹ năng thao tác và quan sát thí nghiệm

II PHƯƠNG TIỆN THÍ NGHIỆM

1 Đối tượng: Người (TN1) và Ếch (TN2)

2 Hóa chất:

- Nước vôi trong: Ca(OH)2 hoặc Bari hydroxide Ba(OH)2; Cồn tuyệt đối (TN1)

- Đá vơi (san hơ) đập thành viên nhỏ; Nước cất (TN2)

- Axít HCl 10% (TN2); NaCl 0,65% (TN2)

3 Dụng cụ:

- Bộ đồ mổ tiểu động vật, bông, chỉ, cốc thủy tinh, hộp lồng petri

- Hệ thống bình kíp; Hệ thống bình chữ T

III NỘI DUNG THÍ NGHIỆM

1 Thí nghiệm 1: Xác định thành phần khí CO2 trong khi hít vào và thở ra 1.1 Bước 1: Lắp dụng cụ như hình vẽ

- Đổ dung dịch canxi hyđroxit Ca(OH)2 vào hai lọ thủy tinh khoảng 1/3 dung tích của lọ

1.2 Bước 2: Tiến hành thí nghiệm

Sát trùng đầu ống nhựa hình chữ T Đối tượng thí nghiệm ngậm miệng vào ống nhựa (lấy tay bĩp mũi lại), hít vào bằng miệng và thở ra cũng bằng miệng một cách nhẹ nhàng Làm như vậy khoảng 15 lần

Lưu ý: Hít vào và thở ra phải nhẹ nhàng, tránh nước vơi từ lọ B vào miệng hoặc làm nước ở bình A trào ra ngồi

1.3 Bước 3: Nhận xét về độ vẩn đục của nước vơi trong ở hai lọ A và B Rút ra kết luận về nồng độ CO2 trong khi hít vào và thở ra Giải thích?

2 Thí nghiệm 2: Sự khuếch tán khí CO2 qua màng phổi ếch

2.1 Bước 1: Chuẩn bị thí nghiệm

- Bính 3: có nút cao su gắn vào đó 3 ống thủy tinh, ống A liên hệ với 2, ống

B (ống thông phổi, ở đầu trên của ống có gắn thêm 1 đoạn ống cao su) dùng thổi phổi ếch để kiểm tra xem phổi có bị thủng không, ống C thông giữa bình và khí trời

* Cách làm chế phẩm phổi ếch

- Ếch chọc tủy, dùng panh mở miệng ếch, nhìn thấy sụn hạt cau (lỗ vào của khí quản) Dùng ống thủy tinh đầu nhẵn có chỗ thắt luồn qua sụn hạt cau

- Mở lồng ngực ếch, tách phổi và khí quản ra ngoài Thổi qua ống thủy tinh một ít không khí để cho hai lá phổi phồng lên nhằm kiểm tra xem phổi có

bị thủng không Sau đó thổi vào một ít không khí cho phổi hơi phồng lên rồi dùng

2 đoạn chỉ (20cm) buộc chặt 2 phế quản, treo chế phẩm này vào bình 3, kẹp buộc chặt đoạn cao su của ống B

Bước 2: Tiến hành thí nghiệm

Mở van để HCl tác dụng với đá vôi tạo thành CO2, CO2 qua bình 2 (nước bình 2 sủi bọt) được rửa sạch và chuyển sang bình 3

- Trường hợp 1: Phân áp CO2 trong bình 3 tăng dần tạo nên sự chênh lệch phân áp CO2 giữa bình 3 và trong phế bào Để trong vòng 20 phút, ta quan sát sự thay đổi thể tích của hai lá phổi, màu sắc mao mạch ở phổi; rút ra nhận xét

- Trường hợp 2: Sau đó ta đưa phổi ra khỏi bình 3, một lúc sau (15 phút) quan sát xem có hiện tượng gì xảy ra (thể tích phổi, màu sắc mao mạch ở phổi) Giải thích?

- Chú ý: Khi làm chế phẩm phổi ếch cần cẩn thận để không chọc rách phổi (dùng ống thủy tinh đầu nhẵn luồn qua sụn hạt câu nhẹ nhàng)

Bước 3: Trình bày kết quả thí nghiệm, giải thích và rút ra kết luận

Bài 5: SINH LÝ TIÊU HĨA

(Quan sát cử động của ruột; Tác dụng của mật đối với lipit)

I MỤC ĐÍCH – YÊU CẦU

- Quan sát hoạt động của ống tiêu hĩa

- Xác định ảnh hưởng của thần kinh mê tẩu, giao cảm và vai trị của thể dịch (adrenalin) lên hoạt động của ống tiêu hĩa

- Chứng minh vai trị của mật trong việc nhủ tương hĩa lipit

- Yêu cầu: Tiến hành tuần tự theo các bước và cẩn thận Rèn luyện kỹ năng thao tác và quan sát thí nghiệm

II PHƯƠNG TIỆN THÍ NGHIỆM

1 Đối tượng:

- Ếch to khoảng 4-5 con/kg (TN1,2)

2 Hoá chất:

- Tinh thể muối ăn (TN1)

- Dung dịch sinh lý NaCl 0,65%; Adrênalin (TN1)

- Dầu thực vật (TN2)

- Nước cất (TN2)

3 Dụng cụ:

- Bộ đồ mổ tiểu động vật, cốc thuỷ tinh 100ml, hộp lồng petri (TN1,2)

- Bông, bơm tiêm loại 12ml (TN2)

- Ống nghiệm, đĩa đồng hồ, kính hiển vi, lam kính (TN2)

II NỘI DUNG THỰC HÀNH

1 Thí nghiệm 1: Quan sát cử động của ruột

1.1 Bước 1: Chuẩn bị thí nghiệm

- Hủy tủy ếch, ghim ngửa lên khay

- Mổ lộ tim và tìm dây mê tẩu, giao cảm

- Sau đĩ tiếp tục mổ rộng xuống phía dưới (chú ý tránh cắt vào tĩnh mạch bụng ở đường chính giữa- cắt một đường dọc ở bên song song với tĩnh mạch bụng)

để quan sát được tồn bộ ruột

1.2 Bước 2: Quan sát cử động ruột

- Trường hợp 1: Quan sát hoạt động bình thường của dạ dày, ruột

- Trường hợp 2: Dùng kẹp kẹp nhẹ để gây kích thích cơ học Sau đĩ đặt hạt muối để gây kích thích hĩa học ở vị trí bất kỳ trên ống tiêu hĩa Quan sát cử động của ruột, chiều chuyển động, cách thức chuyển động của các cơ thành ống tiêu hĩa