Bài giảng Phân tích gen và sản phẩm của gen một số kỹ thuật

Trang 1 SINH HỌC PHÂN TỬ & DI TRUYỀN HỌC Phõn tớch gen và sản phõ̉m của gen Trang 2 Phõn tích gen và sản phõ̉m của gen CÁC KỸ THUẬT PHÂN TÍCH AXIT NUCLEIC Đinh Đoàn Long Bộ mụn Y

SINH HỌC PHÂN TỬ & DI TRUYỀN HỌC Phân tích gen sản phẩm của gen (Một số kỹ thuật SHPT ứng dụng y học) Phân tích gen và sản phẩm của gen CÁC KỸ THUẬT PHÂN TÍCH AXIT NUCLEIC Tách chiết tinh ADN Sử dụng quang phổ để xác định nồng độ ADN ARN Điện di phân tích axit nucleic Sử dụng enzym giới hạn phân tích ADN Các phương pháp lai axit nucleic mẫu dị Tổng hợp hóa học sử dụng đoạn oligonucleotide Phản ứng chuỗi polymerase (PCR) Giải trình tự ADN Xác định vai trò chức gen Đinh Đồn Long Bộ mơn Y DƯỢC HỌC CƠ SỞ Chương 12 Phân tích gen và sản phẩm của gen CÁC KỸ THUẬT PHÂN TÍCH PROTEIN Chuẩn bị tế bào để tinh protein Sử dụng sắc ký cột để tinh protein Phân tích protein gel polyacrylamide Giải trình tự protein Phân tích tương tác protein - protein Về hệ protein học (proteomics) Đinh Đồn Long Bộ mơn Y DƯỢC HỌC CƠ SỞ CÁC KỸ THUẬT PHÂN TÍCH AXIT NUCLEIC Tách chiết tinh ADN ADN vµ ARN n-íc Bỉ sung Phenol ADN, ARN vµ protein pha n-ớc Lắc mạnh Phenol Ly tâm Protein phenol Dùng phenol loại protein khỏi dịch chiết ADN ARN Đinh Đồn Long Bộ mơn Y DƯỢC HỌC CƠ SỞ CÁC KỸ THUẬT PHÂN TÍCH AXIT NUCLEIC Sử dụng quang phổ để xác định nồng độ ADN ARN nh lợng ADN v ARN dựa phơng pháp đo quang phổ bớc sóng 260 280 nm  1,0 A260nm  50 g / ml dsADN  1,0 A260nm  40 g / ml ssADN / ARN  1,0 A260nm  33 g / ml dNTP / oligonucleotide Đinh Đồn Long Bộ mơn Y DƯỢC HỌC CƠ SỞ CÁC KỸ THUẬT PHÂN TÍCH AXIT NUCLEIC Điện di phân tích axit nucleic §iƯn cùc Gradient biÕn tÝnh 70% Các giếng tra mẫu ADN kiểu dại Thể đột biến khó biến tính DGGE vuông góc K thut điện di xung trường (Pulse-field electrophoresis) Đinh Đoàn Long Gradient biến tính Thể đột biến dễ biến tính 70% ChiỊu dÞch chun cđa ADN 40% 0% DGGE song song Kỹ thuật điện di biến tính gradient DGGE (Denaturing gradient gel electrophoresis) Bộ môn Y DƯỢC HỌC CƠ SỞ CÁC KỸ THUẬT PHÂN TÍCH AXIT NUCLEIC Sử dụng enzym giới hạn phân tích ADN a) Enzym cắt đầu (vd: RsaI) b) Enzym cắt đầu dính – lệch phía đầu 5’ (vd: EcoRI) Phần đầu 5’ nhơ c) Enzym cắt đầu dính – lệch phía đầu 3’ (vd: KpnI) Phần đầu 3’ nhô Đinh Đồn Long Bộ mơn Y DƯỢC HỌC CƠ SỞ CÁC KỸ THUẬT PHÂN TÍCH AXIT NUCLEIC Sử dụng enzym giới hạn phân tích ADN Cách tính kích thước đoạn giới hạn trung bình Xác suất vị trí giới hạn gồm bp tìm thấy hệ gen 1/4 x 1/4 x 1/4 x 1/4 = 1/256 Xác suất vị trí giới hạn gồm bp tìm thấy hệ gen 1/4 x 1/4 x 1/4 x 1/4 x 1/4 x 1/4 = 1/4096 Đinh Đồn Long Bộ mơn Y DƯỢC HỌC CƠ SỞ CÁC KỸ THUẬT PHÂN TÍCH AXIT NUCLEIC Sử dụng enzym giới hạn phân tích ADN Ví dụ vị trí giới hạn hệ gen người bp bp bp Đinh Đoàn Long Bộ môn Y DƯỢC HỌC CƠ SỞ CÂU HỎI VẬN DỤNG Nếu nucleotit phân bố ngẫu nhiên phân tử ARN dài 106 nucleotit, chứa 20% A, 25% C, 25% U 30% G Số lần trình tự 5’-GUUA-3’ trung bình xuất đoạn phân tử ARN nêu bao nhiêu? A từ đến lần B từ đến lần C từ đến lần D nhiều lần Đinh Đồn Long Bộ mơn Y DƯỢC HỌC CƠ SỞ