Tiếp tục nghiên cứu bào chế phytosome rutin

TỔ NG QUAN

T ổ ng quan Rutin

Rutin là 1 loại vitamin P Chữ P là chữđầu của chữ perméabilité, tiếng Pháp có nghĩa là tính thấm

- Công thức phân tử: C27H30O16, trọng lượng phân tử 610,51 ĐvC

- Tên IUPAC: 2-(3,4-dihydroxyphenyl)-5,7-dihydroxy-3-[(2S,3R,4S,5S,6R)- 3,4,5-trihydroxy-6-{[(2R,3R,4R,5R,6S)-3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2- yl]oxymethyl]oxan-2-yl}oxychromen-4-one

Hình 1.1 Cấu trúc của Rutin [2]

- Tên gọi khác: Quercetin-3-rutosid, Eldrin, Oxerutin, Quercetin-3- rhamnoglucosid, Rutosise, Sclerutin, Sophorin [2]

- Bột kết tinh màu vàng hay vàng lục

- Tan trong ethanol và các dung dịch hydroxid kiềm, hơi tan trong ethanol thực tế không tan trong nước và diclomethan [13]

Theo dược điển Việt Nam V, các phương pháp định tính rutin [13]:

- Phương pháp A: So sánh phổ hồng ngoại

- Phương pháp B: Đo phổ hấp thụ tử ngoại

- Phương pháp C: Phương pháp sắc kí lớp mỏng

1.1.4 Định lƣợng Đềxác định hàm lượng trong chế phẩm hoặc dược liệu, người ta sử dụng các phương pháp sau:

- Phương pháp sắc kí lỏng cao áp

Rutin là một hợp chất có nhiều tác dụng sinh học, bao gồm khả năng kháng sinh, kháng nấm và chống dị ứng Nghiên cứu gần đây đã chỉ ra rằng rutin cũng có hiệu quả trong việc điều trị các bệnh mãn tính như ung thư, tiểu đường, cao huyết áp và tăng cholesterol.

Rutin, một dạng vitamin P, có khả năng tăng cường sức bền của mao mạch Khi thiếu vitamin này, mao mạch dễ bị tổn thương và đứt vỡ, tình trạng này trước đây thường được cho là do thiếu vitamin C, nhưng gần đây đã được phát hiện có liên quan đến vitamin P.

Rutin có khả năng kiểm soát đường huyết hiệu quả bằng cách tăng cường hoạt động của thụ thể kinase phụ thuộc insulin, giúp cải thiện khả năng kết hợp giữa đường và insulin Điều này dẫn đến việc tăng cường vận chuyển đường và nâng cao sự hấp thu glucose trong cơ thể.

Rutin có khả năng chống lại các rối loạn thoái hóa thần kinh do tích lũy prion thông qua việc tăng cường sản xuất các yếu tố thần kinh và ức chế quá trình apoptotic trong tế bào thần kinh Những phát hiện này chỉ ra rằng rutin có thể mang lại lợi ích lâm sàng cho bệnh prion và các rối loạn thoái hóa thần kinh khác.

Rutin có tác dụng chống viêm ở da chuột chiếu xạ tia cực tím bởi ức chế sự biểu hiện của cyclooxygenase-2 và synthase nitric oxid cảm ứng [18]

Rutin được ứng dụng trong nhiều lĩnh vực như y học, công nghệ nhuộm màu thực phẩm, công nghệ bao màu

Rutin là một hợp chất quan trọng trong y học, chủ yếu được sử dụng để ngăn ngừa bệnh xơ vữa động mạch và điều trị các tình trạng suy yếu tĩnh mạch Nó có tác dụng hiệu quả trong việc điều trị các trường hợp xuất huyết như chảy máu cam, ho ra máu, xuất huyết tử cung và phân có máu Ngoài ra, rutin còn được áp dụng trong việc chữa trị bệnh trĩ, giảm dị ứng và hỗ trợ điều trị thấp khớp Đặc biệt, rutin cũng giúp làm lành nhanh chóng các tổn thương ngoài da do bức xạ.

Trong khoa mắt, rutin có thểđược dùng cho các trường hợp viêm võng mạc có xuất hiện xuất huyết, chảy máu ởđáy mắt [8]

Rutin có thể sử dụng đơn độc hoặc kết hợp với các thuốc khác để nâng cao hiệu quả điều trị như:

Vitamin C: Rutin có tác dụng tăng cường hiệu quả của vitamin C, đặc biệt trong việc cải thiện khả năng hấp thụ thuốc vào các cơ quan khác nhau Rutin thường được sử dụng để điều trị các triệu chứng như tổn thương mao mạch, xuất huyết dưới da và cao huyết áp.

- Vincamin: dùng để chữa các chứng rối loạn tâm thần, cải thiện trí nhớ, chức năng thần kinh giác quan ởngười già

- Nicotinamid: dùng trong các biểu hiện chức năng hay tổn thương thực thể của suy tĩnh-bạch mạch, giãn tĩnh mạch nguyên phát hay các cơn đau trĩ

- Ngoài ra còn có thể phối hợp với cholin, khellin, papaverin

1.1.7 Một số sản phẩm của rutin trên thịtrường

Bảng 1.1 Một số sản phẩm của rutin trên thịtrường

Tên thương mại Thành phần chính Hàm lượng Dạng bào chế

Mevon Rutin 500 mg Viên bao phim

Meflavon Rutin 500 mg Viên bao phim

Rutin-Vitamin C Rutin, vitamin C 50 mg Viên bao đường

Swanson Rutin Rutin 500 mg Viên nang mềm

Rutin complex Rutin, bioflavonoids 500 mg Viên nén

Siduol Tocopherol calcium succinat; Rutin 100 mg Viên nang

1.1.8 Một số nguồn chiết Rutin

Rutin được tìm thấy ở 62 họ thực vật với khoảng 150 loài thực vật, trong đó có 70 loài thuộc 28 họ có chứa rutin ở dạng vết [2]

Trong cây, rutin chủ yếu phân bốở hoa (cây hòe, cây tam giác mạch), lá (cây bạch đằng, cây tam giác mạch)

Tuy có nhiều loài thực vật chứa rutin nhưng rutin chỉ được tách chiết từ những cây nguyên liệu có hàm lượng rutin cao như Ruta graveolens L có khoảng 2

%, Fagopyrum esculentum Moench có khooảng 4 %, Fagopyrum tataricum L có khoảng 6 %, Eucalyptus macrorrhyncha F.Muell có khoảng 8 %, Sophora japónica

Các phương pháp chiết xuất rutin từ hoa hòe dựa vào độ tan khác nhau của rutin trong các dung môi [11]

- Chiết bằng dung môi nước

- Chiết bằng dung môi cồn

- Chiết bằng dung môi là dung dịch kiềm loãng

T ổ ng quan phytosome

Phytosome là phức hợp của chiết xuất dược liệu hoặc hoạt chất dược liệu chuẩn hóa kết hợp với phospholipid, trong đó "phyto" chỉ thành phần có nguồn gốc thực vật và "some" ám chỉ cấu trúc tế bào Với cấu trúc tương tự như màng tế bào, phytosome được xem là hệ vận chuyển phyto-lipid Phytosome được hình thành trong dung môi phân cực thông qua liên kết hydro giữa phần phân cực của phospholipid, như nhóm phosphat, và phần phân cực của polyphenol, một thành phần có hoạt tính sinh học.

Hình 1.2 Cấu tạo của phytosome [2]

Ho ạ t ch ấ t : Các hoạt chất có nguồn gốc từ thực vật/ dược liệu, thường là hoạt chất nhóm polyphenol như: flavonoid (rutin, quercetin, silybin…), saponin, terpenoid,…

Trong phytosome, các nhóm phân cực của hoạt chất tương tác với nhóm phosphat và nhóm amonium của phospholipid thông qua liên kết hydro Sự tương tác này tạo ra một sắp xếp không gian đặc trưng, có thể được xác minh bằng các phương pháp phổ như phổ hồng ngoại IR, phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR, phổ nhiễu xạ tia X và phổ phân tích nhiệt quét vi sai DSC.

Phospholipid: Phần đầu có tính thân nước gồm nhóm phosphat gắn với các dẫn xuất amin khác nhau, phần đuôi là hai chuỗi hydrocarbon có tính kỵnước.

Hình 1.3 Cấu trúc phân tử của phosphatidylcholin đậu nành hydrogen hóa [16]

Vai trò c ủ a phospholipid trong phytosome:

Nhóm phosphat và amoni trong phospholipid tạo ra các liên kết hydro với nhóm phân cực của dược chất, góp phần làm tăng độ ổn định của phytosome so với các dạng bào chế khác.

Phospholipid là phân tử lưỡng cực có khả năng hòa tan trong cả môi trường nước và dầu Việc sử dụng phospholipid làm chất mang dược chất có thể cải thiện độ tan và tốc độ hòa tan của dược chất, từ đó nâng cao khả năng hấp thu qua đường tiêu hóa.

Phospholipid giúp giảm sức căng bề mặt của hệ phân tán trong dịch cơ thể, từ đó cho phép phytosome dễ dàng hòa tan trong dịch tiêu hóa và được vận chuyển đến các mô trong cơ thể.

- Phospholipid tự nhiên: Hay dùng nhất là phosphatidylcholin (PC) từ lecithin của trứng hoặc đậu tương, ngoài ra còn có phosphatidylethanolamin (PE), phosphatidylserin (PS), phosphatidylglycerol (PG),…

- Phospholipid tổng hợp: Phosphatidylcholin đậu nành được hydrogen hóa (HSPC), disteroyl phosphatidylcholin (DSPC), dioleylphosphatidylcholin (DOPC), dioleylphosphatidylethanolamin (DOPE),…

- Một số loại phospholipid khác như sphingolipid (sphingomyelin, sphingosin)

L ự a ch ọ n phospholipid trong quá trình bào ch ế phytosome:

Việc lựa chọn phospholipid là yếu tố quan trọng, ảnh hưởng trực tiếp đến các đặc tính của phức hợp hình thành Do đó, quá trình chọn lựa cần dựa trên những đặc điểm cụ thể để đảm bảo hiệu quả tối ưu.

Mức độ bão hòa của lipid ảnh hưởng đến độ ổn định của phytosome; phospholipid không bão hòa như phosphatidylcholin lòng đỏ trứng và phosphatidyl glycerol dễ bị peroxy hóa, dẫn đến hỏng màng và rò rỉ dược chất Do đó, phospholipid bão hòa như dipalmytoyl phosphatidylcholin và dipalmitidyl phosphatidic được ưa chuộng hơn để nâng cao độ ổn định cho phytosome.

Để tạo ra các chế phẩm có khả năng giải phóng dược chất nhanh chóng, màng cần có độ linh động cao Do đó, các phospholipid chưa bão hòa thường được lựa chọn, đồng thời giảm hàm lượng cholesterol bổ sung vào màng.

Phospholipid, chủ yếu từ đậu nành và trứng, đặc biệt là phosphatidylcholin, là thành phần chính trong màng tế bào Các phospholipid như phosphatidylethanolamin (PE), phosphatidylserin (PS) và phosphatidylcholin (PC) thường được sử dụng trong bào chế phytosome Với đầu cholin, PC là chất mang lý tưởng để bao gói các hoạt chất thực vật và đóng vai trò như chất dinh dưỡng hiệu quả trong điều trị bệnh gan.

1.2.3 Đặc điểm của Phytosme Đặc điể m hóa h ọ c [35]

Phytosome được hình thành thông qua phản ứng giữa phospholipid và các thành phần trong thảo mộc chuẩn hóa Phân tích quang phổ cho thấy sự hình thành liên kết hydro giữa đầu phân cực của phospholipid (bao gồm nhóm phosphat và ammonium) và các đầu phân cực của hoạt chất.

Kích thước Phytosome thay đổi từ 50 nm đến vài trăm μm

Phytosome, khi tiếp xúc với nước, chuyển thành dạng micell giống liposome và quang phổ photon (PCS) cho thấy dạng liposome này có được do phytosome

Dữ liệu 1 H-NMR và 13 C-NMR cho thấy rằng chuỗi chất béo không thay đổi tín hiệu trong cả phospholipid tự do và phức hợp phytosome Các chuỗi acid béo dài không tham gia vào phản ứng mà chỉ tạo thành lớp áo xung quanh phần hoạt động.

Các phức này thường tan trong dung môi aprotic, không hòa tan trong nước và tương đối không ổn định trong rượu Phytosome có những đặc điểm sinh học nổi bật và mang lại nhiều ưu điểm đáng kể.

- Cải thiện sinh khả dụng của tinh chất thảo dược và tăng tiêu hóa trong ruột

- Giúp các tinh chất thảodược không có tính lipid hấp thu dễ dàng qua ruột

- Các thành phần của phytosome an toàn, được phép sử dụng trong bào chế dược phẩm, mỹ phẩm

Flavonoid ở dạng phytosome được bảo vệ và có sinh khả dụng cao khi đến gan, trong khi phosphocholin cũng có tác dụng bảo vệ gan một cách tự nhiên.

- Cải thiện tính thấm của thuốc qua da

PC là thành phần thiết yếu trong phytosome, không chỉ đóng vai trò là chất mang mà còn cung cấp PC cho màng.

- Quy trình sản xuất tương đối đơn giản, không đòi hỏi công nghệ phức tạp, hiệu suất cao

Bền vững trong điều trị dạ dày và có khả năng chống lại hoạt động của vi khuẩn đường ruột, sản phẩm này ổn định hơn liposome nhờ vào liên kết hóa học giữa phospholipid và hoạt chất.

ĐỐI TƯƠNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨ U

N ộ i dung nghiên c ứ u

- Định lượng rutin bằng phương pháp đo quang phổ hấp thu UV - VIS

- Khảo sát độ tan của rutin trong các môi trường và hệ số phân bố của rutin.

Phytosome có một số đặc tính quan trọng như hình thức cấu trúc, độ tan trong các môi trường khác nhau, hệ số phân bố, kích thước tiểu phân (KTTP), phân bố KTTP, thế zeta và hiệu suất phytosome hóa Những đặc tính này đóng vai trò quan trọng trong việc cải thiện khả năng hấp thu và tính ổn định của phytosome trong các ứng dụng dược phẩm và thực phẩm chức năng.

- Đánh giá khả năng tạo phức giữa rutin và phospholipid qua các phổ hồng ngoại (FT - IR), phân tích nhiệt vi sai (DSC), nhiễu xạ tia X (XRD).

Phương pháp nghiên cứ u

2.3.1 Định lượng rutin bằng phương pháp đo quang

Phương pháp định lượng rutin bằng phương pháp đo quang được tham khảo và xây dựng lại theo nghiên cứu của Malay và các cộng sự [22]

Tìm bước sóng hấp thụ cực đại

Cân 25 mg rutin chuẩn và hòa tan trong 100 ml methanol Lấy 10 ml dung dịch này cho vào bình định mức 100 ml, thêm methanol đến vạch để tạo ra dung dịch A với nồng độ 25 mg/L Tiến hành quét độ hấp thụ quang của dung dịch A trong khoảng bước sóng 800 - 200 nm để xác định bước sóng hấp thụ cực đại của rutin qua hình ảnh quang phổ.

Để xây dựng đường chuẩn, chúng tôi đã pha loãng dung dịch A với methanol thành các dung dịch có nồng độ rutin lần lượt là 5 mg/L, 10 mg/L, 12,5 mg/L, 15 mg/L và 20 mg/L Sau đó, chúng tôi đo độ hấp thu quang của các mẫu này với mẫu trắng là methanol ở bước sóng cực đại Dựa trên kết quả đo, chúng tôi xây dựng đường chuẩn và thiết lập phương trình biểu diễn mối quan hệ giữa độ hấp thụ và nồng độ rutin, từ đó có thể tính toán chính xác nồng độ rutin trong các mẫu thử.

- Mẫu trắng: Dung dịch methanol

- Mẫu thử: Mẫu thử đem lọc qua màng cellulose acetat 0,45 μm, đem pha loãng bằng methanol ở tỷ lệ nhất định đểđược nồng độ dung dịch thử trong khoảng

5 đến 20 mg/L Đo độ hấp thụ quang của mẫu thửở bước sóng cực đại

Phytosome rutin được bào chế theo quy trình sau:

Hòa tan riêng biệt rutin và các thành phần PC, CH trong dung môi Sau đó, kết hợp chúng vào cốc có mỏ và khuấy từ để tạo thành liên kết Dung môi được loại bỏ bằng phương pháp bốc hơi dưới áp suất chân không hoặc phun sấy Quy trình bào chế và điều kiện thực hiện được mô tả trong Hình 2.1.

Hình 2.1 Sơ đồ quy trình bào chế Phytosome rutin

Hòa tan trong dung môi (ethanol hoặc điclomethan)

Hòa tan trong dung môi

Khuấy từ với tốc độ 150 vòng/phút, thời gian 3-16 giờ, nhiệt độ 25 – 50 °C

-Cô quay bốc hơi dung môi dưới áp suất dung môi

- - Áp lực súng phun:3,5 atm

- - Tốc độ phun: 1200 - 1600 (ml/giờ)

- - Tốc độ thổi khí: 800 l/giờ

Sản phẩm được bảo quản trong bình tránh ẩm ở nhiệt độ phòng

2.3.3 Xác định độ tan, hệ số phân bố của rutin, phytosome rutin bào chế

Xác định độ tan c ủa rutin, phytosome rutin trong các môi trườ ng

Các hệđệm 1,2; hệđệm 4,5; hệđệm 6,8 (được pha theo quy trình trong Dược điển

Việt Nam V) và nước cất

Hòa tan rutin và phytosome trong 20 ml các hệ đệm pH 1,2; 4,5; 6,8 và nước cất trong cốc có mỏ Khuấy hỗn hợp trong 48 giờ ở nhiệt độ phòng, sau đó tiến hành ly tâm với tốc độ thích hợp.

Quy trình thực hiện bao gồm quay ở tốc độ 5000 vòng/phút trong 30 phút, sau đó lọc dung dịch qua màng lọc cellulose acetat 0,45 μm để thu được dịch thử Tiếp theo, pha loãng dịch thử với methanol đến nồng độ thích hợp và tiến hành đo hấp thụ quang tại bước sóng cực đại.

Xác đị nh h ệ s ố phân b ố d ầu nướ c c ủ a rutin và phytosome rutin

- Chuẩn bị pha octanol và nước:

Để thực hiện thí nghiệm, hãy lấy 200 ml nước và 200 ml octanol, sau đó trộn chúng vào cốc có mỏ 1000 ml và khuấy đều trong suốt đêm Tiếp theo, chuyển hỗn hợp vào ống đong 500 ml và để yên qua đêm để tách riêng hai pha octanol và nước.

Cân chính xác 50 mg rutin hoặc lượng phytosome rutin tương đương vào cốc có mỏ, hòa tan với 40 ml methanol trong bình định mức 50 ml và định mức lại bằng methanol, lắc đều Hút 1 ml dung dịch thu được cho vào cốc có mỏ và bốc hơi dung môi đến khô để thu được cặn Thêm 20 ml nước và 20 ml octanol vào, khuấy từ qua đêm ở nhiệt độ phòng Lấy riêng phần nước và octanol, lọc qua màng cellulose acetat 0,45 μm, sau đó pha loãng dung dịch đến nồng độ thích hợp và đo độ hấp thụ quang ở bước sóng cực đại.

Hệ số phân bố dầu nước được tính theo công thức:

Trong đó: Aoct là độ hấp thụ quang của rutin trong octanol (Abs)

Awatlà độ hấp thụ quang của rutin trong nước (Abs).

Ablank oct là độ hấp thụ quang của octanol (Abs)

Ablank wat là độ hấp thụ quang của nước (Abs). f1 là hệ số pha loãng pha octanol. f2 là hệ số pha loãng pha nước.

2.3.4 Phương pháp làm giảm kích thước tiểu phân

Phytosome được bào chế bằng phương pháp siêu âm nhằm giảm kích thước tiểu phân và tạo ra mẫu đồng nhất hơn Quá trình này bao gồm việc hòa tan một lượng nhỏ phức hợp vào 50 ml nước và siêu âm liên tục hỗn dịch phytosome trong 10 phút bằng thiết bị siêu âm cầm tay có công suất 50 W và tần suất 60 Hz.

2.3.5 Phương pháp đánh giá một sốđặc tính của phytosome

 Hình th ứ c Đánh giá hình thức bằng cảm quan: màu sắc, độdính, độ dẻo

 KTTP, phân b ố KTTP, th ế zeta

Sử dụng hỗn dịch phytosome rutin sau khi siêu âm để giảm kích thước, tiến hành đo kích thước hạt, chỉ số đa phân tán PDI và thế zeta bằng thiết bị phân tích Horiba SZ100.

 Độ tan phytosome trong các môi trườ ng, h ệ s ố phân b ố phytosome

Tương tự như phương pháp mô tả ở mục 2.3.3 đã trình bày ở trên

 Xác đị nh hi ệ u su ấ t phytosome hóa

Để tiến hành định lượng rutin toàn phần, lấy 1 ml hỗn dịch phytosome, cho vào bình định mức 25 ml và bổ sung methanol đến vạch, sau đó pha loãng và định lượng bằng phương pháp đo quang, thu được độ hấp thụ quang A1 Để xác định hiệu suất phytosome hóa, cần loại bỏ phần rutin tự do, vì rutin tự do không

Từ phương trình đường chuẩn dựng được ở mục 2.3.1, xác định nồng độ rutin tương ứng với độ hấp thụ quang A1, A2 lần lượt là C1, C2 (mg/L)

Hiệu suất phytosome hóa được xác định bằng công thức: H % = × 100

2.3.6 Phương pháp đánh giá khả năng tạo phức giữa dược chất và phospholipid

Phương pháp đo nhiệt quét vi sai DSC

Sử dụng đĩa nhụm chứa mẫu 40 àl với khối lượng mẫu khoảng 3 – 7 mg, đục thủng nắp và thực hiện quét nhiệt độ từ 50 – 300 °C với tốc độ gia nhiệt 10 °C/phút Trong quá trình thử nghiệm, cần thổi khí nitrogen với lưu lượng 50 ml/phút để đảm bảo kết quả chính xác.

Phương pháp đo quang phổ hồng ngoại IR

Lấy 5 - 10 mg mẫu khô, trộn đều với KBr và nghiền mịn Khi hỗn hợp đồng nhất, dập thành viên mỏng và tiến hành quét phổ với viên nén thu được.

Phương pháp đo nhiễu xạ tia X

Mẫu được giữ trong bộ giữ mẫu và đưa vào thiết bị Quét mẫu từ góc 5º - 50º với tốc độ quay góc θ = 1 º/phút, nhiệt độ 25 o C

2.3.7 Phương pháp đánh giá hiệu suất phun sấy phytosome rutin

Hiệu suất phun sấy được tính bằng công thức: (khối lượng phytosome rutin thu được / khối lượng phytosome rutin theo lý thuyết có trong dịch phun sấy) × 100% Trong đó, khối lượng phytosome rutin thu được được đo bằng gam, và khối lượng lý thuyết là giá trị dự kiến trong dịch phun sấy.

Phương pháp xử lý số liệu

Các kết quả được xử lý thống kê với sự hỗ trợ của phần mềm Microsoft Excel 2013

Kết quảđược trình bày dưới dạng: X ± SD Trong đó: X là giá trịtrung bình SD là độ lệch chuẩn (cỡ mẫu: n = 3)

THỰ C NGHI Ệ M, K Ế T QU Ả VÀ BÀN LU Ậ N

Định lượ ng rutin b ằng phương pháp đo quang

 Xác định điểm hấp thụ cực đại

Pha dung dịch rutin chuẩn với nồng độ 25mg/L và tiến hành đo độ hấp thụ quang trong khoảng bước sóng từ 800nm đến 200nm Kết quả thu được được thể hiện trong Hình 3.1.

Hình 3.1 Quét độ hấp thụ quang của dung dịch rutin chuẩn ởbước sóng từ

800 nm đến 200 nm Nhận xét:Nhìn vào quang phổ của rutin, bước sóng cực đại λmax = 257 nm được sử dụng để định lượng rutin

Tiến hành pha các mẫu thử có nồng độ lần lượt là 5; 10; 12,5; 15; 20 mg/L, đo độ hấp thụ quang ở bước sóng 257 nm Kết quả thể hiện trong Bảng 3.1 và Hình 3.2

Bảng 3.1 Độ hấp thụ quang của rutin theo nồng độ tại bước sóng 257 nm

Nồng độ (mg/L) 5,03 10,06 12,58 15,10 20,13 Độ hấp thụ quang (Abs) 0,196 0,392 0,494 0,587 0,760

Hình 3.2 Đồ thị biểu diễn độ hấp thụ quang của rutin theo nồng độ tại bước sóng 257 nm

Nhận xét: R 2 = 0,9987 (> 0,995) cho thấy có sự tuyến tính giữa độ hấp thụ quang và nồng độ dung dịch rutin trong khoảng nồng độ 5 mg/L đến 20 mg/L.

Phương trình biểu diễn sư tương quan độ hấp thụ quang với nồng độ là: y = 0,0377x + 0,0141

Trong đó y là độ hấp thụ quang (đơn vị Abs), x là nồng độ rutin (đơn vị mg/L).

Khảo sát hệ số phân bố dầu nước và độ tan trong các môi trường của rutin

Đã tiến hành xác định độ tan của rutin trong các môi trường và hệ số phân bố dầu nước của rutin theo phương pháp đã mô tả Kết quả thu được thể hiện trong Bảng 3.2 với phương trình y = 0.0377x + 0.0141 và hệ số xác định R² = 0.9987.

0 5 10 15 20 25 Độ h ấp th ụ qu an g (Ab s)

Bảng 3.2 Một số đặc tính của rutin (n=3)

Mẫu Độ tan ở pH 1,2 (mg/L) Độ tan ở pH 4,5 (mg/L) Độ tan ở pH 6,8 (mg/L) Độ tan trong nước (mg/L)

Hệ số phân bố dầu nước (K D ) Rutin 66,28±3,45 76,55±2,5 147,05±8,14 84,21±3,19 7,54±0,19

- Rutin nguyên liệu có độ tan thấp.

Rutin có độ tan tốt nhất trong môi trường có pH 6,8, trong khi độ tan của nó giảm đáng kể trong môi trường pH 1,2 Cụ thể, độ tan bão hòa của rutin ở pH 6,8 cao gấp hai lần so với ở pH 1,2.

- Hệ số phân bố dầu nước của rutin là 7,54 (> 4) điều này khiến thuốc khó hấp thu qua da [22].

Bào ch ế phytosome Rutin

Tiến hành bào chế phytosome rutin theo phương pháp ở mục 2.3.2, các thông số kĩ thuật được thể hiện trong Bảng 3.3

Bảng 3.3 Các thông sốkĩ thuật bào chế phytosome rutin bằng phương pháp bốc hơi dung môi, sử dụng các dung môi khác nhau

Thông sốkĩ thuật Phương pháp 1 (M1) Phương pháp 2 (M2)

Tỉ lệ mol rutin:PC 1:1 (0,3 g Rutin)

Dung môi hòa tan Ethanol tuyệt đối

Methanol (hòa tan rutin, V0 ml), dichlomethan (hòa tan PC,

Thời gian tạo phức 3 giờ

Nhiệt độ phản ứng Nhiệt độ phòng

Dung môi kết tủa lại n-hexan (V= 30 ml)

Bảng 3.4 Một sốđặc tính của phytosome bào chếtheo hai phương pháp và hiệu suất phytosome hóa (n=3)

Mẫu KTTP (nm) PDI Thế zeta (mV) Hiệu suất phytosome hóa (%)

So với phytosome rutin được bào chế bằng phương pháp bốc hơi với dung môi n-hexan (M2), phytosome rutin sử dụng dung môi ethanol có kích thước lớn hơn một chút (310,3 nm so với 255,4 nm) và giá trị tuyệt đối thế zeta nhỏ hơn không đáng kể (-87,5 mV) Mặc dù phân bố kích thước tiểu phân nhỏ hơn (0,303 so với 0,370), nhưng hiệu suất phytosome hóa lại cao hơn đáng kể (92,99% so với 77,22%).

Việc sử dụng các dung môi độc hại như methanol, diclomethan và n-hexan trong quá trình bào chế có thể gây ô nhiễm môi trường Những dung môi hữu cơ này không chỉ là mối nguy hiểm cho sức khỏe con người mà còn là các chất độc thần kinh khó có thể loại bỏ hoàn toàn.

Do vậy, dung môi ethanol được lựa chọn để bào chế phytosome

3.3.2 Khảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ phản ứng

Phytosome rutin được bào chế theo quy trình như mô tả trong mục 2.3.2 với các thông số:

- Tỉ lệ mol rutin:PC là 1:1 (khối lượng rutin 0,3 g)

- Thời gian phản ứng: 3 giờ

- Nhiệt độ phản ứng lần lượt là: nhiệt độ phòng (25 °C), 40 °C, 50 °C

Phức hợp tạo thành được đánh giá KTTP, phân bố KTTP, thế zeta và hiệu suất phytosome hóa Kết quảđược mô tả trong Bảng 3.5 và Hình 3.3

Bảng 3.5 KTTP, PDI, thế zeta của hỗn dịch phytosome rutin theo nhiệt độ phản ứng (n=3)

Hình 3.3 KTTP và PDI của hỗn dịch phytosome rutin theo nhiệt độ phản ứng

KTTP đạt giá trị nhỏ nhất là 310,3 nm khi phản ứng diễn ra ở nhiệt độ phòng Khi nhiệt độ tăng lên, KTTP cũng tăng theo, với giá trị 353,8 nm ở 40 độ C và 409,4 nm ở 50 độ C Nguyên nhân của sự gia tăng này là do liên kết hydro giữa PC và rutin trở nên kém bền vững hơn khi nhiệt độ tăng.

- PDI: Phân bố KTTP của mẫu 1; 3 và 4 lần lượt có PDI = 0,303; 0,313; 0,330 đều lớn hơn 0,3 chứng tỏ KTTP có khoảng phân bố rộng, M1 có khoảng phân bố nhỏ nhất

- Thế zeta: Giá trị tuyệt đối thế zeta của các mẫu đều rất cao, cho thấy hỗn dịch phytosome có độ ổn định cao

- Hiệu suất phytosome hóa: Các mẫu đều có hiệu suất phytosome hóa cao (>

90 %), khác biệt không nhiều (hiệu suất phytosome hóa M1, M3, M4 lần lượt là 92,99; 92,00; 93,12 %)

Bào chế phytomsome rutin ở nhiệt độ 25 °C tạo ra phức hợp với kích thước hạt nhỏ nhất (310,3 nm), chỉ số phân bố kích thước (PDI) thấp nhất (0,303) và giá trị thế zeta tuyệt đối cao nhất (-87,5 mV) Do đó, nhiệt độ 25 °C được lựa chọn cho các nghiên cứu tiếp theo.

3.3.3 Khảo sát ảnh hưởng của thời gian phản ứng

Bào chế phytosome rutin theo quy trình ghi ở mục 2.3.2 với các thông sốnhư sau:

- Tỷ lệ mol rutin : phospholipid là 1:1

- Nhiệt độ phản ứng: Nhiệt độ phòng (25 °C)

- Thời gian phản ứng lần lượt là 3 giờ, 12 giờ và 16 giờ

Phức hợp phytosome được đánh giá KTTP, phân bố KTTP, thế zeta, hiệu suất phytosome hóa như mục 2.3.5

Kết quảthu được thể hiện ở các Bảng 3.6, Hình 3.4

Bảng 3.6 KTTP, PDI, thế zeta của hỗn dịch phytosome rutin theo thời gian phản ứng (n=3)

Thời gian phản ứng (giờ)

Hình 3.4 KTTP, PDI của hỗn dịch phytosome rutin theo thời gian phản ứng

KTTP và PDI cho thấy thời gian phản ứng là 3 giờ, với phytosome rutin được bào chế có kích thước tiểu phân nhỏ nhất là 310,3 nm và PDI 0,303 Khi thời gian phản ứng được kéo dài lên 12 giờ và 16 giờ, KTTP chỉ tăng không đáng kể, lần lượt đạt 310,3 nm, 322,5 nm và 318,4 nm.

Các mẫu đều cho thấy trị tuyệt đối thế zeta cao, chứng tỏ rằng hỗn dịch có độ ổn định tốt Đặc biệt, mẫu phản ứng sau 12 giờ đạt trị tuyệt đối thế zeta cao nhất.

- Hi ệ u su ấ t phytosome hóa : M6 có hiệu suất phytosome hóa cao nhất (95,32%) Các mẫu phản ứng 3 gờ, 12 giờ có hiệu suất nhỏ hơn tương ứng là 92,99

Hiệu suất phytosome tăng lên khi thời gian phản ứng được kéo dài từ 3 giờ lên 12 giờ và 16 giờ, do phản ứng hoàn toàn xảy ra Tuy nhiên, sự khác biệt giữa hiệu suất phytosome hóa của M6 và M5 là không đáng kể, vì phản ứng đã hoàn tất sau 12 giờ.

Để tiết kiệm thời gian bào chế và đạt hiệu suất phytosome hóa cao, thời gian phản ứng 12 giờ được lựa chọn, vì sự chênh lệch KTTP giữa các mẫu có thời gian phản ứng khác nhau không đáng kể.

3.3.4 Khảo sát ảnh hưởng của tỉ lệ mol các chất tham gia phản ứng

Tiến hành bào chế phytosome rutin theo quy trình mô tảở mục 2.3.2, với các thông sốkĩ thuật cốđịnh:

- Thời gian hình thành liên kết 12 giờ

- Nhiệt độ khuấy từ: nhiệt độ phòng (25 °C)

- Tỉ lệ mol rutin và PC lần lượt: 1:1, 1:2, 2:1

Sản phẩm thu được đã được đánh giá chất lượng thực phẩm với các chỉ số như đa phân tán PDI, thế zeta và hiệu suất phytosome hóa, theo mục 2.3.5 Kết quả đánh giá này được trình bày chi tiết trong Bảng 3.7 và Hình 3.5.

Bảng 3.7 KTTP, PDI, thế zeta của hỗn dịch phytosome rutin theo tỉ lệ mol

Mẫu Tỷ lệ mol rutin:PC KTTP

Hình 3.5 KTTP và PDI của hỗn dịch phytosome rutin theo tỉ lệ mol Ru:PC

Phytosome rutin được bào chế với tỉ lệ 1:1 cho kích thước tiểu phân (KTTP) nhỏ nhất là 312,5 nm, trong khi các mẫu M12 và M21 có KTTP lớn hơn lần lượt là 537,4 nm và 406,6 nm Sự khác biệt này có thể được giải thích bởi tỉ lệ mol rutin : PC là 2:1, lúc này vẫn còn một lượng rutin ở trạng thái tự do, chưa tham gia liên kết Khi tỉ lệ mol rutin : PC được điều chỉnh thành 1:2, lượng rutin tham gia vào liên kết tăng lên.

Tỉ lệ mol Ru:PC

PC không tham gia liên kết hình thành một lớp gel quanh tiểu phân phức hợp phytosome rutin làm tăng KTTP.

- Th ế zeta : Cả ba mẫu đều có trị tuyệt đối thế zeta khá cao (> 70 mV)

M1 có hiệu suất phytosome hóa cao đạt 95,00%, nhờ vào việc tăng tỉ lệ phospholipid (PC), giúp cung cấp nhiều vị trí liên kết hơn, từ đó phức hợp dễ dàng hình thành và lượng rutin tham gia liên kết cũng tăng lên Ngược lại, mẫu M21 với tỉ lệ 2:1 lại có hiệu suất rất thấp Để tối ưu hóa chất lượng thực phẩm (KTTP) và hiệu suất phytosome hóa, tỉ lệ mol rutin : PC 1:1 được chọn cho các khảo sát tiếp theo.

3.3.5 Khảo sát ảnh hưởng của cholesterol đến độổn định của phytosome rutin

Nghiên cứu về phytosome cho thấy việc thêm cholesterol vào công thức bào chế giúp tăng cường ổn định lớp màng lipid kép và cải thiện độ đặc khít của phospholipid, từ đó nâng cao khả năng ổn định của phytosome Cholesterol góp phần giảm sự kết tụ và sa lắng của các tiểu phân trong hỗn dịch Nghiên cứu đã khảo sát ảnh hưởng của cholesterol ở các tỉ lệ mol khác nhau đến hiệu suất phytosome hóa và đặc tính của hỗn dịch phytosome rutin bằng cách hòa tan cholesterol vào ethanol và tiến hành bào chế theo các thông số kỹ thuật cố định.

- Thời gian hình thành liên kết 12 giờ

- Nhiệt độ khuấy từ: nhiệt độ phòng (25 °C)

Tỉ lệ mol rutin:PC:CH đã được điều chỉnh, và sản phẩm thu được sẽ được đánh giá dựa trên các tiêu chí như kiểm định chất lượng thực phẩm (KTTP), độ phân bố KTTP, chỉ số PDI, thế zeta, và hiệu suất phytosome hóa theo mục 2.3.5.

Kết quảđược mô tả trong Bảng 3.8 và Hình 3.6

Bảng 3.8 KTTP, PDI, thế zeta của hỗn dịch phytosome rutin theo tỉ lệ mol rutin:PC:CH (n = 3)

Tỷ lệ mol rutin:PC:

Hình 3.6 KTTP và PDI của hỗn dịch phytosome rutin theo tỉ lệ mol

- Khi thay đổi tỷ lệmol rutin:PC:CH thì các đặc tính của hỗn dịch phytosome cũng thay đổi

- Mẫu M8 với tỉ lệ mol 1:1:0,2 có KTTP và PDI nhỏ nhất (299,45 nm; 0,309) đồng thời trị tuyệt đối thế zeta lớn nhất (-109,7)

3.3.6 Lựa chọn phương pháp loại dung môi

Phytosome rutin được bào chếtheo hai dung môi được mô tả trong mục 2.3.2 và phun sấy với các thông số quá trình phản ứng:

- Tỉ lệ mol Rutin: PC: CH là 1:1:0,2

- Dung môi hòa tan: ethanol

- Thời gian phản ứng: 12 giờ

- Nhiệt độ phản ứng: nhiệt độ phòng (25 °C)

Các thông số của quá trình phun sấy:

- Tốc độ phun: 1400 ml/ giờ

Sản phẩm được phân tích dựa trên kích thước tiểu phân, phân bố kích thước tiểu phân, thế zeta và hiệu suất phytosome hóa Kết quả chi tiết được trình bày trong Bảng 3.9.

Tỉ lệ mol Rutin:PC:CH

Bảng 3.9 KTTP, PDI, thế zeta của phytosome rutin bào chếtheo hai phương pháp bốc hơi dung môi và phun sấy (n=3)

Hình 3.7 KTTP, PDI của phytosome rutin được bào chếtheo hai phương pháp khác nhau

Phun sấy cho phức hợp phytosome có kích thước tiểu phân nhỏ hơn (263,7 so với 299,4) và chỉ số đa phân tán PDI thấp hơn (0,325 so với 0,350), đồng thời hiệu suất phytosome hóa cao hơn (95,43 % so với 90,61 %) Tuy nhiên, trị tuyệt đối thế zeta lại nhỏ hơn (68,9 so với 109,7) Nguyên nhân có thể là do kích thước tiểu phân phytosome được bào chế bằng phương pháp phun sấy (trước khi siêu âm) nhỏ hơn so với phương pháp bốc hơi dung môi dưới áp suất chân không, vì quá trình phun sấy tạo ra các hạt rất nhỏ, dẫn đến kích thước tiểu phân phytosome giảm.

Bốc hơi dung môi Phun sấy (M11)

Phương pháp loại dung môi

3.3.7 Khảo sát điều kiện phun sấy

 Khảo sát nhiệt độđầu vào

Phytosome rutin được bào chếtheo phương pháp phun sấy đã được mô tả trong mục 2.3.2 với các thông số:

- Tốc độ phun dịch: 1600 ml/giờ

- Nhiệt độđầu vào lần lượt : 85 °C, 90 °C, 100 °C, 110 °C

Hiệu suất phun sấy phytosome rutin thu được thể hiện trong Bảng 3.10

Bảng 3.10 Hiệu suất phun sấy phytosome rutin thu đƣợc khi phun sấy với nhiệt độ khác nhau

- Ở 90 °C hiệu suất phun sấy phytosome rutin thu được là lớn nhất (54,5 %)

Do vậy nhiệt độ đầu vào 90 °C được lựa chọn

 Khảo sát tốc độ phun sấy

Phytosome rutin được bào chế theo phương pháp phun sấy đã được mô tả trong mục 2.3.2 với các thông số:

- Tốc độ phun lần lượt: 1200, 1400, 1600, 1800 ml/ giờ

Hiệu suất phun sấy phytosome rutin thu được thể hiện trong Bảng 3.11

Bảng 3.11 Hiệu suất phun sấy phytosome rutin thu đƣợc khi phun sấy với tốc độ khác nhau

Tốc độ phun (ml/giờ) 1200 1400 1600 1800

Nh ậ n xét: Với tốc độ 1600 ml/giờ, hiệu suất phun sấy phytosome rutin thu được lớn nhất

Như vậy điều kiện tối ưu để phun sấy đạt hiệu suất cao nhất là: nhiệt độđầu vào

90°C và tốc độ phun 1600 ml/giờ

 Từ kết quả khảo sát các thông số quy trình, chúng tôi có sơ đồ bào chế phytosome rutin thể hiện ở Hình 3.8 như sau:

Đánh giá một số đặc tính phytosome bào chế được

Tiến hành bào chế 3 mẻ phytosome rutin theo quy trình đã mô tả, với quy mô 10 g/mẻ Phytosome rutin được đánh giá các đặc tính như hình thức cảm quan, độ tan trong các môi trường, kích thước phân tử (KTTP), chỉ số đa phân tán (PDI), thế zeta, và hiệu suất phytosome hóa Kết quả của các đánh giá này được thể hiện rõ trong nghiên cứu.

Hòa tan trong ethanol ethanol

Phối hợp tạo phức giữa rutin-phospholipid

Phun sấy loại dung môi thu phytosome rutin thô

- Áp lực súng phun: 3,5 atm

- Tốc độ phun: 1600 ml/giờ

Bảo quản trong bình hút ẩm ở nhiệt độ phòng

Bảng 3.12 Một sốđặc tính của phytosome rutin bào chế bằng phương pháp phun sấy (n=3)

Chỉ tiêu Hình thức KTTP

Bột tơi mịn, màu vàng 266,4 ± 7,1 0,292 ± 0,080 -82,7 ± 2,7 95,61 ± 0,24

Bảng 3.13 So sánh độ tan bão hòa của Rutin và Phytosome rutin trong các môi trường pH khác nhau

Mẫu Độ tan ở pH 1,2 (mg/L) Độ tan ở pH 4,5 (mg/L) Độ tan ở pH 6,8 (mg/L) Độ tan trong nước (mg/L)

Hệ số phân bố dầu nước (K D )

Hình 3.9 So sánh độ tan bão hòa của Rutin và Phytosome rutin trong các môi trường pH khác nhau

0 50 100 150 200 250 Độ tan ở pH 1,2 (mg/L) Độ tan ở pH 4,5 (mg/L) Độ tan ở pH 6,8 (mg/L) Độ tan trong nước (mg/L) Đ ộ tan b ão h òa (m g/ m l)

Phytosome rutin có kích thước hạt nhỏ (266,4 nm) và chỉ số phân tán (PDI) hẹp (0,292), cho thấy tính đồng nhất cao Giá trị tuyệt đối thế zeta đạt 82,7 mV, cho thấy độ ổn định tốt của hệ thống Hiệu suất phytosome hóa cao đạt 95,61%, đồng thời độ tan trong các môi trường đã được cải thiện đáng kể so với rutin thông thường.

Phytosome rutin có khả năng tan trong nước tốt nhất với mức 215,09 mg/ml, vượt trội hơn so với độ tan ở pH 1,2 là 129,77 mg/ml (gấp 2,52 lần), pH 4,5 là 114,75 mg/ml (gấp 2,14 lần) và pH 6,8 chỉ đạt 29,43 mg/ml (gấp 1,15 lần).

Phytosome rutin có độ tan vượt trội so với rutin thông thường, với khả năng hòa tan trong nước tăng gấp 2,55 lần Trong các môi trường pH khác nhau, độ tan của phytosome rutin cũng cải thiện đáng kể, cụ thể là tăng 1,28 lần ở pH 1,2, 1,31 lần ở pH 4,5 và 1,26 lần ở pH 6,8.

Hệ số phân bố dầu nước là yếu tố quan trọng ảnh hưởng đến khả năng thấm qua da Để đạt hiệu quả thẩm thấu tốt, hệ số này cần nằm trong khoảng từ -1 đến 4 So với rutin, hệ số phân bố dầu nước của phytosome giảm 2 lần, đạt giá trị 3,76, cho thấy khả năng thấm qua da của phytosome tốt hơn.

Đánh giá khả năng tạo phức hợp giữa rutin và phospholipid trong phytosome bằng phương pháp vật lý

Để đánh giá khả năng tương tác giữa rutin và phospholipid, phương pháp vật lý được áp dụng bao gồm phổ hồng ngoại (IR), phân tích nhiệt vi sai (DSC) và phân tích nhiễu xạ tia X (FTIR).

Phổ hồng ngoại của phức hợp phytosome rutin cho thấy sự dịch chuyển của các pic hấp thụ, cụ thể là nhóm hydroxyl (O-H) của rutin từ 3412,08 cm -1 xuống 3363,86 cm -1 Đồng thời, pic hấp thụ của nhóm (RO)2PO2- của phospholipid tại 1238,30 cm -1 và 1085,92 cm -1 cũng dịch chuyển xuống 1199,72 cm -1 và 1055,06 cm -1 Điều này chứng tỏ sự hình thành phức hợp giữa nhóm –OH của rutin và nhóm PO4- của phospholipid.

Hình 3.10 Phổ IR của Rutin, PC, CH và phytosome

 Phân tích nhiễu xạ tia X

Hình 3.11 Hình ảnh phổ nhiễu xạ tia X của Rutin, PC, CH và phytosome

Phổ nhiễu xạ tia X của rutin cho thấy nhiều pic nhiễu xạ, khẳng định rằng rutin tồn tại ở trạng thái kết tinh Ngược lại, phổ nhiễu xạ của PC chỉ xuất hiện một pic rộng, cho thấy sự khác biệt trong cấu trúc tinh thể giữa hai chất Giản đồ nhiễu xạ của phức hợp cũng phản ánh những đặc điểm này.

Phytosome rutin đã không còn hiện tượng nhiễu xạ, cho thấy sự tương tác giữa rutin và phosphatidylcholin đã diễn ra, giúp rutin chuyển từ trạng thái kết tinh sang trạng thái vô định hình.

 Phân tích nhiệt quét vi sai (DSC)

Hình 3.12 Phổ DSC của Rutin, PC, CH và phytosome

Giản đồ nhiệt của phức hợp phytosome rutin cho thấy không còn dấu hiệu của pic thu nhiệt của PC và rutin, mà thay vào đó xuất hiện một pic thu nhiệt mới ở nhiệt độ 183,6188 °C, thấp hơn so với nhiệt độ của rutin nguyên liệu là 188,9488 °C Điều này chứng tỏ sự hình thành phức hợp giữa rutin và phospholipid.

Kết quả phân tích cho thấy sự hình thành phức hợp phytosome giữa đầu phân cực của phospholipid và các nhóm chức phân cực của dược chất thông qua liên kết hydro.

Bàn luận

3.7.1 Vềphương pháp bào chế phytosome rutin Đề tài đã lựa chọn các dung môi methanol, dichloromethan, n-hexan, ethanol để bào chế phytosome rutin Tuy nhiên, việc sử dụng các dung môi hữu cơ như methanol, dichloromethan, n-hexan như nhiều nghiên cứu trước để bào chế phytosome sẽ gây độc với môi trường, sức khỏe con người, khó có thể nâng cấp ở quy mô công nghiệp Để khắc phục những nhược điểm trên, chúng tôi đã sử dụng ethanol làm môi trường để rutin và phospholipid phản ứng với nhau tạo thành phức Phương pháp loại dung môi bằng phương pháp phun sấy có nhiều ưu điểm hơn so với phương pháp bốc hơi dung môi bằng cô quay dưới áp suất chân không như quá trình diễn ra liên tục, dễ dàng trong việc sản xuất lớn ở quy mô công nghiệp, thích hợp với cả hoạt chất nhạy cảm với nhiệt do thời gian tiếp xúc với nhiệt rất ngắn (chỉ từ mili giây đến vài giây) Ngoài ra khi sử dụng phương pháp phun sấy thì phytosome thu được ở dạng bột rất mịn, tơi, dễ dàng có thể phối hợp đưa vào viên nang cứng, nang mềm, cốm thuốc, viên nén, hỗn dịch…

3.7.2 Về xây dựng công thức bào chế phytosome rutin

Nghiên cứu cho thấy việc thêm cholesterol vào công thức bào chế phytosome giúp tăng cường ổn định lớp màng lipid kép và cải thiện độ đặc khít của phospholipid, từ đó nâng cao khả năng ổn định của phytosome và giảm sự kết tụ, sa lắng của các tiểu phân Tỷ lệ rutin:PC:CH được lựa chọn trong nghiên cứu là 1:1:0,2, cho ra phytosome với kích thước tiểu phân nhỏ nhất, phân bố kích thước hẹp và hiệu suất phytosome hóa cao nhất, đồng thời cải thiện đáng kể độ tan của phức hợp tạo ra.

3.7.3 Vềcác đặc tính của phytosome rutin sau bào chế

Phytosome rutin bào chếđược có kích thước tiểu phân tương đối nhỏ (<

Phytosome rutin bào chế có kích thước tiểu phân khoảng 300 nm với phân bố kích thước hẹp (PDI gần 0,3) và độ ổn định tương đối cao, thể hiện qua giá trị thế zeta đạt 68,9 mV cùng hiệu suất phytosome hóa trên 95% Đặc biệt, độ tan của phytosome rutin được cải thiện đáng kể trong các môi trường nước với pH 1,2, 4,5 và 6,8, trong đó độ tan trong nước tăng gấp 2,52 lần so với rutin nguyên liệu Hệ số phân bố phytosome đạt 7,54, cho thấy khả năng phân tán tốt của sản phẩm.

Bào chế rutin dưới dạng phytosome đã cải thiện độ tan, tăng khả năng thấm qua da và sinh khả dụng, với mức giảm gần 2 lần so với rutin thông thường (3,76) Kết quả này phù hợp với nghiên cứu trước của Malay và cộng sự [19].

3.7.4 Đánh giá khảnăng tương tác giữa dược chất và phopsholipid

Hình ảnh từ các phổ DSC, IR và phổ nhiễu xạ tia X cho thấy sự hình thành liên kết giữa rutin và phospholipid trong phức hợp phytosome rutin Phytosome rutin tồn tại dưới dạng vô định hình, khác với trạng thái tinh thể của dược chất tự do, giúp cải thiện độ tan và tăng cường khả năng hấp thu, từ đó nâng cao sinh khả dụng của hoạt chất.

KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT

Nghiên cứu đã bào chế được phytosome rutin bằng phương pháp phun sấy

Tỉ lệ mol của rutin, PC và CH được xác định là 1:1:0,2 Quy trình bào chế được thực hiện với tốc độ khuấy từ 150 vòng/phút, kéo dài trong 12 giờ và ở nhiệt độ ổn định.

25 o C; phun sấy loại dung môi ở nhiệt độ đầu vào 90 °C, tốc độ phun dịch 1600 ml/giờ

Phytosome rutin đã được đánh giá với một số chỉ tiêu chất lượng quan trọng như hình thức, kích thước tiểu phân (266,4 nm), chỉ số phân bố kích thước tiểu phân (PDI = 0,292), giá trị tuyệt đối thế zeta (82,7 mV), hiệu suất phytosome hóa đạt 95,61%, độ tan và hệ số phân bố dầu nước Các phương pháp phân tích như FTIR, DSC và nhiễu xạ tia X đã xác nhận sự tạo phức giữa rutin và phosphatidylcholin.

1 Tiếp tục nghiên cứu các biện pháp làm giảm kích thước tiểu phân và tăng độ ổn định của phytosome rutin bào chế

2 Tiếp tục khảo sát và hoàn thiện quy trình nâng cấp quy mô

[1] Trần Tử An (2006), Hóa Phân Tích.Tập 2.Phân tích dụng cụ, NXB Bộ Y tế, 63

[2] Nguyễn Tư Đạt (2017), Nghiên cứu bào chế Phytosome rutin, Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ, Khoa Y Dược- ĐHQGHN.

Vũ Thị Thu Hà (2016) đã thực hiện nghiên cứu về phương pháp bào chế Phytosome quercetin thông qua kỹ thuật kết tủa trong dung môi Luận văn tốt nghiệp của cô được trình bày tại Đại học Dược Hà Nội, góp phần vào việc phát triển các phương pháp mới trong lĩnh vực dược phẩm.

[4] Hoàng Đình Hơp (2002), Nghiên cứu chiết suất rutin từ hoa hòe, Đại học

[5] Phạm Thị Minh Huệ và cộng sự (2017), Liposome, phytosome phỏng sinh học trong bào chế, Đại học Quốc gia Hà Nội, Khoa Y Dược, 55

[6] Phạm Thị Minh Huệ và cộng sự (2015), "Nghiên cứu bào chế phytosome curcumin", Tạp chí dược học, 3 (14-18

[7] Bùi Mai Hương (2017), Nghiên cứu bào chế và độ ổn định của Phytosome quercetin, Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ, Đại học Dược Hà Nộ

[8] Phạm Khuê (1989), "Nhu cầu sử dụng hoa hòe trong lão khoa"

[9] Đỗ Tất Lợi (2013), Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, 299

Phạm Thị Nhung (2016) đã thực hiện nghiên cứu về việc điều chế và đánh giá tác dụng ức chế tế bào ung thư gan (HepG2) của Phytosome – curcumin trong luận văn thạc sĩ dược học tại Học viện Quân Y Nghiên cứu này đóng góp quan trọng vào việc phát triển các liệu pháp điều trị ung thư gan hiệu quả hơn.

[11] Bộmôn dược liệu- Đại học Dược Hà Nội (2011), Bài giảng dược liệu, 113-114

[12] Phạm Xuân Sinh Sinh và cộng sự, Dược học cổ truyền, Trường Đại học

[13] Bộ y tế (2017), Dược điển Việt Nam V, Nhà xuất bản Y học, 848-849

[14] Ngô Vân Thu và cộng sự (2011), Dược liệu học tập 1, tr387-388

[15] Dương Thị Thuấn (2016), Nghiên cứu bào chế thuốc tiêm hỗn dịch chứa phức hợp lipid amphotercin B, Luận văn thạc sĩ dược học, ĐH Dược Hà Nội

[16] Đào Bá Hoàng Tùng (2016), Nghiên cứu bào chế Phytosome quercetin bằng phương pháp bốc hơi dung môi, Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ, Đại học Dược

[17] Nguyễn Hữu Tùng và cộng sự (2016), "Nghiên cứu thành phần và điều chế

Phytosome Saponin toàn phần của củ cây Tam thất (Panax Notoginseng ) trồng ở Tây Bắc Việt Nam", Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Y Dược, 32 (1), 18-24

[18] Naif Abdullah Al-Dhabi et al (2015), "An up-to-date review of rutin and its biological and pharmacological activities", EXCLI journal, 14 (59

[19] Afshin Babazadeh et al (2017), "Phosphatidylcholine-rutin complex as a potential nanocarrier for food applications", Journal of Functional Foods, 33 (134-141

[20] Anuja P Bhosale et al (2015), "Herbosomes as a novel drug delivery system for absorption enhancement", World journal of pharmacy and pharmaceutical sciences, 5 (1), 345-355

[21] Rúbia Casagrande et al (2007), "In vitro evaluation of quercetin cutaneous absorption from topical formulations and its functional stability by antioxidant activity", International journal of pharmaceutics, 328 (2), 183-190

[22] Malay K Das et al (2014), "Design and Evaluation of Phyto-Phospholipid

Complexes (Phytosomes) of Rutin for Transdermal Application"

[23] Mark Davis (2017), "Recent strategies in spray drying for the enhanced bioavailability of poorly water-soluble drugs", Journal of controlled release

[24] Babak Ghanbarzadeh et al (2016), "Nano-phytosome as a potential food- grade delivery system", Food Bioscience, 15 (126-135

[25] BJ Gurley (2011), "Emerging technologies for improving phytochemical bioavailability: benefits and risks", Clinical Pharmacology & Therapeutics,

[26] Peter CH Hollman et al (1997), "Bioavailability of the dietary antioxidant flavonol quercetin in man", Cancer letters, 114 (1), 139-140

[27] Zahra Hooresfand et al (2015), "Preparation and characterization of rutin- loaded nanophytosomes", Pharm Sci, 21 (3), 145-151

[28] Malay K et al (2013), "Phytosomes: an overview", Biologically Active

[29] Joseph A Kareparamban et al (2012), "Phytosome: a novel revolution in herbal drugs", IJRPC, 2 (2), 299-310

[30] Junaid Khan et al (2013), "Recent advances and future prospects of phyto- phospholipid complexation technique for improving pharmacokinetic profile of plant actives", Journal of controlled release, 168 (1), 50-60

[31] Wonhwa Lee et al (2012), "Barrier protective effects of rutin in LPS- induced inflammation in vitro and in vivo", Food and chemical toxicology,

[32] Jing Li et al (2015), "A review on phospholipids and their main applications in drug delivery systems", Asian journal of pharmaceutical sciences, 10 (2), 81-98

[33] G Monica et al (2014), "Herbosomes: A potential carriers for the bioavailability enhancement of herbal extracts", World journal of pharmacy and pharmaceutical sciences, 4 (10), 1052-1079

[34] Navneet Nagpal et al (2016), "Designing of a phytosome dosage form with

Tecomella undulata as a novel drug delivery for better utilization", Pakistan journal of pharmaceutical sciences, 29 (4)

[35] Chetan K Nimbalkar et al (2017), "PHYTOSOMES-NOVEL DRUG

DELIVERY SYSTEM", Indian Journal of Drugs, 5 (1), 16-36

[36] Medina OP et al (2004), "Nanoparticles in cancer", Current Pharm Des, 10

A study by Raja Kumar Parabathina et al (2010) published in the Journal of Chemical and Pharmaceutical Research highlights the protective effects of Vitamin E, Morin, Rutin, and Quercetin against biochemical alterations caused by Doxorubicin under oxidative stress The research focuses on the impact of these compounds on heart, liver, and kidney tissues, suggesting their potential role in mitigating the adverse effects of chemotherapy on vital organs.

[38] Soo Nam Park et al (2013), "Preparation of quercetin and rutin-loaded ceramide liposomes and drug-releasing effect in liposome-in-hydrogel

4 complex system", Biochemical and biophysical research communications,

[39] Carla Aparecida Pedriali et al (2008), "The synthesis of a water-soluble derivative of rutin as an antiradical agent", Química Nova, 31 (8), 2147-2151

[40] Solmaz Rasaie et al (2014), "Nano phytosomes of quercetin: A promising formulation for fortification of food products with antioxidants",

[41] Rudra Pratap Singh et al (2015), "Preparation and evaluation of phytosome of Lawsone", International Journal of Pharmaceutical Sciences and Research, 6 (12), 5217

Alejandro Sosnik et al (2015) explore the benefits and obstacles associated with spray-drying technology in the production of pure drug particles and drug-loaded polymeric carriers This method offers significant advantages for pharmaceutical applications, including enhanced solubility and bioavailability of drugs However, the authors also address various challenges, such as maintaining drug stability and optimizing the formulation process Their findings highlight the need for further research to maximize the efficacy of spray-drying in drug delivery systems.

[43] Surendra Tripathy et al (2013), "A review on phytosomes, their characterization, advancement & potential for transdermal application",

Journal of Drug Delivery and Therapeutics, 3 (3), 147-152

PHỤ LỤC PHỤ LỤC 1: Hình ảnh phytosome rutin bào chế theo phương pháp phun sấy

Hình 1.1 Hình ảnh phytosome rutin bào chếtheo phương pháp phun sấy

PHỤ LỤC 2: Hình ảnh phổ hồng ngoại IR

Hình 2.1: Phổ hồng ngoạiIR của rutin

Hình 2.2 Phổ hồng ngoại IR của phospholipid (PC)

Hình 2.3 Phổ hồng ngoại IR của cholesterol

Hình 2.4 Phổ IR của Phytosome

PHỤ LỤC 3: Hình ảnh phổ nhiễu xạ tia X

Hình 3.1 Phổ nhiễu xạ tia X của rutin

Hình 3.2 Phổ nhiễu xạ tia X của phospholipid (PC)

Faculty of Chemistry, HUS, VNU, D8 ADVANCE-Bruker - M3

File: PhuongYDuoc M3.raw - Type: 2Th/Th locked - Start: 2.000 ° - End: 59.990 ° - Step: 0.030 ° - Step time: 0.5 s - Temp.: 25 °C (Room) - Time Started: 13 s - 2-Theta: 2.000 ° - Theta: 1.000 ° - Chi: 0.00 ° - Phi: 0.00 ° - X:

Hình 3.3 Phổ nhiễu xạ tia X của Cholesterol

Hình 3.4 Phổ nhiễu xạ tia X của Phytosome

PHỤ LỤC 4: Hình ảnh phổ nhiệt vi sai DSC

Hình 4.1 Phổ nhiệt vi sai DSC của rutin

Hình 4.2 Phổ nhiệt vi sai DSC của phospholipid (PC)

Peak :102.9518 °C Onset Point :64.5253 °C Enthalpy /J/g : 17.0923 (Endothermic effect)

Peak 1 :140.5410 °C Peak 2 :166.5213 °C Onset Point :128.0332 °C Enthalpy /J/g : 56.9245 (Endothermic effect) (30.5288 + 26.3957)

Crucible:Al 100 àl Atmosphere:Ar Experiment:Phuong M1

Hình 4.3 Phổ nhiệt vi sai DSC của cholesterol

Hình 4.4 Phổ nhiệt vi sai DSC của phytosomerutin bào chế đƣợc

Crucible:Al 100 àl Atmosphere: Ar

Experiment: Phuong M2 Procedure: 30-250 oC 10C.min-1 (Zone 2)

Crucible:Al 100 àl Atmosphere: Ar

Experiment:Phuong M3 Procedure: 30-250 oC 10C.min-1 (Zone 2)

PHỤ LỤC 5: KTTP, phân bố KTTP, thế zeta của mẫu phytosome rutin bào chế bằng phương pháp phun sấy

Hình 5.1 KTTP, PDI của một mẫu phytosome rutin

Hình 5.2 Thế zeta của một mẫu phytosome rutin

Tiêu đề	Tiếp Tục Nghiên Cứu Bào Chế Phytosome Rutin
Tác giả	Đoàn Thị Phương
Người hướng dẫn	ThS. Nguyễn Văn Khanh
Trường học	Đại Học Quốc Gia Hà Nội
Chuyên ngành	Dược Học
Thể loại	khóa luận tốt nghiệp
Năm xuất bản	2018
Thành phố	Hà Nội

Định dạng
Số trang	71
Dung lượng	1,59 MB