NGHIÊN cứu bào CHẾ PELLET MESALAMIN GIẢI PHÓNG tại đại TRÀNG

CHƯƠNG TỔNG QUAN

MESALAMIN

Mesalamin (5-aminosalicylic acid, 5-ASA) được xem là thành phần có hoạt tính của sulfasalazin [6]

Hình 1.1 Công thức cấu tạo của mesalamin

Khối lượng phân tử: 153,13 Tên khoa học: acid 5-amino-2-hydroxybenzoic

Mesalamin là một bột có màu trắng, xám nhẹ hoặc hồng, với hình dạng tinh thể kim Dược chất này có thể chuyển màu sẫm khi tiếp xúc với không khí và rất dễ hút ẩm Nhiệt độ nóng chảy của mesalamin là 280 °C Độ tan trong nước của nó rất thấp, chỉ 1 mg/ml ở 20 °C và 1,41 mg/ml ở 37 °C Mesalamin tan trong acid hydrochloric loãng và dung dịch kiềm loãng, với pKa lần lượt là 3,6 và 13,9 Tuy nhiên, dược chất này rất ít tan trong ethanol tuyệt đối, aceton, methyl alcohol, và đặc biệt không tan trong cloroform, ether, butyl alcohol, ethyl acetat, N-hexan, methylene clorid và propyl alcohol.

Mesalamin có hóa tính đặc trưng của nhân thơm, nhóm -NO2, hydroxyd thơm và nhóm chức acid Chất này dễ bị oxy hóa và quang hóa, và các hóa tính này được ứng dụng trong việc định tính, định lượng và bào chế.

Mesalamin dễ dàng bị phân hủy trong nước, nước nóng ở 100°C, nước chiếu tia UV, dung dịch kiềm và tác nhân oxi hóa Trong môi trường kiềm mạnh kết hợp với tác nhân oxi hóa, mesalamin bị phân hủy nhanh chóng, trong khi hoạt chất này ít bị ảnh hưởng trong môi trường acid mạnh.

1.1.3 Các phương pháp định lượng mesalamin

Phương pháp đo UV-VIS được áp dụng để xác định tỷ lệ % mesalamin giải phóng trong môi trường hòa tan Nhiều nghiên cứu đã sử dụng phương pháp này để định lượng mesalamin trong các môi trường hòa tan với các mức pH khác nhau.

Hàm lượng mesalamin trong chế phẩm được định lượng bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao theo dược điển Mỹ USP 41 Cột sắc ký sử dụng là L1 (4,6 mm x 33 cm; 3 àm) và tiền cột 4,6 mm x 3,0 cm, 10 àm Pha động bao gồm 4,3 g natri 1-octan sulfonat hòa tan trong 1 lít nước tinh khiết, điều chỉnh pH đến 2,15 bằng acid phosphoric Sử dụng detector UV tại bước sóng 230 nm với tốc độ dòng 2 ml/phút và thể tích tiêm mẫu 20 µl.

Nhiều nghiên cứu đã sử dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao để định lượng mesalamin trong dịch sinh học, áp dụng các detector như UV, huỳnh quang và điện hóa Bên cạnh đó, sắc ký lỏng khối phổ cũng được áp dụng trong một số nghiên cứu, như của Gu G-Z, Pastorini E, và Juan Qin, nhằm định lượng hàm lượng mesalamin trong huyết tương chó.

1.1.4 Dược lý và cơ chế tác dụng

Mesalamin (5-aminosalicylic acid, 5-ASA) là thành phần chính có hoạt tính trong sulfasalazin, có tác dụng chống viêm tại đường tiêu hóa Mặc dù cơ chế tác dụng của mesalamin chưa được hiểu rõ, nhưng nó có khả năng tác động tại chỗ hơn là toàn thân Khác với các salicylat, mesalamin không chuyển hóa thành acid salicylic Thuốc ức chế cyclooxygenase, giảm sản xuất prostaglandin trong đại tràng, giúp chống lại sự gia tăng của các chất chuyển hóa acid arachidonic ở người bị viêm ruột mạn tính Các chế phẩm mesalamin có thể hiệu quả với bệnh nhân nhạy cảm với sulfasalazin Dạng thuốc thụt của mesalamin có tác dụng tương tự như sulfasalazin dạng uống hoặc hydrocortison dạng thụt cho những người bị viêm loét đại tràng nhẹ và vừa Bệnh nhân kháng sulfasalazin và hydrocortison dạng uống có thể đáp ứng tốt với mesalamin dạng trực tràng Việc sử dụng mesalamin đường trực tràng kết hợp với sulfasalazin hoặc corticoid có thể nâng cao hiệu quả điều trị nhưng cũng làm tăng nguy cơ tác dụng không mong muốn.

Mesalamin có tỷ lệ hấp thu kém khi sử dụng qua đường trực tràng, chỉ khoảng 15%, với một số báo cáo cho rằng có thể từ 10-30% Hấp thu phụ thuộc vào thời gian lưu giữ thuốc ở trực tràng, pH, thể tích dung dịch mesalamin và tình trạng bệnh nhân Dung dịch trung tính cho kết quả hấp thu tốt hơn dung dịch acid Hỗn dịch mesalamin thường được giữ trong trực tràng từ 3,5 đến 12 giờ, trong khi dạng thuốc đạn chỉ giữ từ 1 đến 3 giờ Khoảng 70 ± 10% mesalamin dạng uống được hấp thu ở đoạn đầu ruột non, với một số hấp thu ở đoạn cuối ruột non, nhưng hấp thu kém ở đại tràng Các dạng thuốc uống khác được thiết kế để giải phóng mesalamin đến vị trí viêm xa hơn, với khoảng 50% mesalamin được giải phóng ở ruột non và 50% ở đại tràng Khoảng 25 ± 10% mesalamin được hấp thu khi uống Thời gian đạt nồng độ đỉnh trong huyết tương là từ 4 đến 12 giờ, với nửa đời trong huyết tương khoảng 40 phút và khoảng 40-50% liên kết với protein huyết tương Sự chuyển hóa của mesalamin chưa được chứng minh rõ ràng, nhưng phần hấp thu chủ yếu bị acetyl hóa thành acid N-acetyl-5-aminosalicylic tại thành ruột và gan.

Mesalamin liên kết với protein huyết tương và sau khi uống, chỉ một lượng nhỏ có thể qua hàng rào nhau thai, cũng như một lượng rất ít được phân bố vào sữa Ở người lớn khỏe mạnh, khoảng 20% liều mesalamin đã uống được thải trừ qua thận, chủ yếu dưới dạng acid N-acetyl-5-aminosalicylic, trong khi một lượng nhỏ khác được thải ra qua phân.

1.1.5 Chỉ định Điều trị viêm loét đoạn cuối đại tràng mức độ nhẹ đến trung bình, viêm đại tràng sigma, viêm trực tràng Viên uống: Chữa viêm loét đại trực tràng chảy máu; bệnh Crohn Viên đặt: Bệnh Crohn hoặc viêm loét đại trực tràng chảy máu ở hậu môn, trực tràng Thụt: Bệnh Crohn hoặc viêm loét đại trực tràng chảy máu đoạn từ góc lách trở xuống [6]

Tiền sử mẫn cảm với các salicylat hoặc thận mẫn cảm với sulfasalazin hay bất kỳ thành phần nào của thuốc hoặc mẫn cảm với sulfasalazin

Suy thận nặng và rối loạn chức năng gan

Hẹp môn vị, tắc ruột

Bất thường về đông máu Trẻ em dưới 2 tuổi [6]

1.1.7 Tác dụng không mong muốn

Tần suất xuất hiện các tác dụng phụ không mong muốn (ADR) khi sử dụng sulfasalazin, tiền chất của mesalamin, thường thấp hơn Các ADR phổ biến nhất bao gồm ỉa chảy, buồn nôn và nhức đầu, với tỷ lệ khoảng 2-3% trong số bệnh nhân điều trị.

Toàn thân: Nhức đầu, mệt mỏi, suy nhược, chóng mặt, sốt

Tiêu hóa: Ỉa chảy, buồn nôn, nôn, đau bụng, làm tăng triệu chứng của viêm đại tràng, ợ hơi, táo bón, khó tiêu

Da: Mày đay, phát ban, ngứa, mụn trứng cá

Hô hấp: Viêm họng, ho [6]

Máu: Giảm bạch cầu, giảm bạch cầu hạt, thiếu máu bất sản, mất bạch cầu hạt, giảm bạch cầu trung tính, giảm tiểu cầu và rối loạn tạo máu

Tuần hoàn: Viêm cơ tim, viêm màng ngoài tim

Da: Nhạy cảm với ánh sáng

Gan: Tăng transaminase, viêm gan

Cơ xương: Đau khớp, chuột rút, đau lưng

Thần kinh: Bệnh thần kinh, chủ yếu tác động đến chân

Tiết niệu: Viêm thận, hội chứng thận hư

Nội tiết và chuyển hóa: Tăng triglycerid

Phản ứng khác: Rụng tóc, viêm tụy, hội chứng không dung nạp mesalamin [6]

Sử dụng đồng thời sulfasalazin dạng uống có thể làm tăng nguy cơ độc hại cho thận, đặc biệt ở những bệnh nhân đang điều trị với warfarin, dẫn đến thời gian prothrombin kéo dài Ngoài ra, việc sử dụng mesalamin ở những người đang dùng thuốc NSAID cũng có thể gia tăng nguy cơ tổn thương thận.

Tránh sử dụng đồng thời mesalamin với các loại thuốc làm giảm nồng độ acid dạ dày như chất đối kháng H2 và chất ức chế bơm proton, vì điều này có thể làm giảm hiệu quả của mesalamin.

Mesalamin làm tăng tác dụng và tăng độc tính của chất chống ung thư thiopurin do ức chế chuyển hóa

Mesalamin có thể làm tăng tác dụng của vắc xin phòng thủy đậu Mesalamin có thể làm giảm tác dụng của glycosid tim [6]

1.1.9 Dạng thuốc và hàm lượng

Hỗn dịch để thụt trực tràng: 1 g/100 ml; 2 g/60 ml; 4 g/60 ml

Viên giải phóng chậm: 250 mg; 400 mg; 500 mg; 800 mg; 1,2 g

Viên nang giải phóng kéo dài 250 mg; 500 mg; 0,375 g (chứa phenylalanin 0,56 mg/viên)

Thuốc cốm bao tan trong ruột: gói 500 mg; 1 g; 1,5 g; 2 g [6]

Một số chế phẩm dùng đường uống của mesalamin trên thị trường [8]

Bảng 1.1 Một số chế phẩm của mesalamin trên thị trường

Tên biệt dược Nhà sản xuất Hàm lượng Dạng bào chế

- Viên nén giải phóng chậm, hàm lượng 250 mg, 400 mg, 800 mg (tá Đức hoặc Allergan Pharmaceuticals international limited clonshaugh busines & technology park - Ireland

800 mg dược: nhân viên chứa lactose, natri starch glycolat, magnesium stearat, talc, povidon; màng bao chứa methacrylic acid-methyl methacrylat copolyme (1:2), dibutyl sebacat, sắt oxid, macrogol 6000)

Farmaceutisk Laboratorium Ferring – Thụy sỹ

- Viên nén GPKD 500 mg, 1 g (tá dược: povidon, ethylcellulose, magnesium stearate, talc, microcrystalline cellulose)

- Hạt GPKD đóng gói 1 g, 2 g (tá dược: Ethylcellulose, povidon)

The GPKD tablets contain a combination of excipients including sodium carboxymethylcellulose, carnauba wax, stearic acid, colloidal hydrated silica, sodium starch glycolate (Type A), talc, magnesium stearate, methacrylic acid copolymers (Types A and B), triethyl citrate, titanium dioxide, iron oxide, and polyethylene glycol.

THUỐC GIẢI PHÓNG TẠI ĐẠI TRÀNG

1.2.1 Mục đích của dạng thuốc giải phóng tại đại tràng

Niêm mạc đại tràng chủ yếu có chức năng hấp thu nước, natri (Na+), clo (Cl-), kali (K+) và một số muối khoáng Tuy nhiên, khả năng hấp thu thuốc tại đại tràng kém hơn so với ruột non do chiều dài ngắn hơn, không có hệ thống nhung mao và vi nhung mao, cùng với ít enzym tiêu hóa.

Nghiên cứu thuốc giải phóng tại đại tràng nhằm điều trị hiệu quả các bệnh lý như táo bón, viêm đại tràng, ung thư đại tràng và lị amip Việc điều trị trực tiếp tại vị trí bệnh giúp giảm liều thuốc cần thiết và hạn chế tác dụng phụ toàn thân không mong muốn.

Để nâng cao sinh khả dụng của thuốc dễ bị phân hủy ở dạ dày và ruột non, cần chú trọng đến các thuốc chuyển hóa bước một qua gan Những thuốc này, khi được hấp thu tại phần cuối trực tràng, sẽ đi thẳng vào vòng tuần hoàn chung, giúp một phần không phải qua gan.

Lợi dụng thời gian trễ khi thuốc đến đại tràng, việc điều trị bệnh mạn tính như hen xuyễn, đau thắt ngực và viêm khớp có thể được thực hiện theo nhịp sinh học của bệnh Các nhà bào chế thuốc dựa vào những yếu tố sinh lý khác nhau trong các vùng của đường tiêu hóa, bao gồm pH, thời gian vận chuyển thuốc, hệ vi sinh vật và các enzym để đưa thuốc tới đại tràng một cách hiệu quả.

1.2.2 Đặc điểm sinh lý của đường tiêu hóa liên quan tới giải phóng và hấp thu của thuốc

1.2.2.1 Đặc điểm sinh lý của đại tràng Đại tràng là phần áp cuối của ống tiêu hóa có đường kính lớn hơn ruột non Chiều dài đại tràng vào khoảng 100 cm, được chia thành: manh tràng, đại tràng lên, đại tràng ngang, đại tràng xuống, đại tràng sigma, trực tràng và hậu môn [4] Manh tràng là một túi nhỏ dài khoảng 6 cm, có cấu trúc giống hình túi, là nơi tiếp nhận các chất từ hồi tràng và tiếp tục hấp thu nước và muối Đại tràng lên dài 20 – 25 cm nằm ở phía bên phải ổ bụng, trong khi đại tràng ngang nằm ở ngang phần trên của bụng Đại tràng xuống dài 10 – 15 cm, chạy từ trên xuống dưới bụng trái và đại tràng sigma là đoạn cong nhỏ nằm trước trực tràng Trực tràng dài khoảng 13 cm, dẫn từ đại tràng sigma và nối với ống hậu môn [41] Đại tràng có chức năng chính là nhận thức ăn đã được tiêu hóa từ ruột non Sau đó hấp thu nước, các chất điện giải từ thức ăn và cùng với sự phân hủy của các vi khuẩn tạo bã thức ăn thành phân Giữ phân cho đến khi đủ lượng, đại tràng sẽ co bóp tạo nhu động và bài tiết phân qua trực tràng Chức năng chính hấp thu chất dinh dưỡng là ruột non, tuy nhiên một số chất sẽ phải đợi đến khi xuống đại tràng mới có thể chuyển hóa thành chất dinh dưỡng được [99] Sự hấp thu xảy ra ở nửa đầu đại tràng Niêm mạc đại tràng không có nhung mao như ruột non, tuy nhiên bề mặt bên trong niêm mạc có cấu trúc gấp làm tăng diện tích bề mặt, do đó khả năng hấp thu của niêm mạc đại tràng khá lớn [41]

Tại đại tràng, ion Na+ từ thức ăn được hấp thu vào máu qua cơ chế tích cực, kéo theo ion Cl− để duy trì sự cân bằng điện Dung dịch natri clorid tạo ra lực thẩm thấu, giúp nước từ ruột vào máu Niêm mạc ruột già cũng bài tiết ion HCO3− và hấp thu một lượng nhỏ ion Cl− để trao đổi với bicarbonat Ngoài ra, đại tràng còn là nơi chuyển hóa ure, được hình thành từ thức ăn có nitơ và chuyển hóa bởi vi sinh vật đường ruột, sau đó được hấp thu thụ động bởi các tế bào biểu mô niêm mạc đại tràng.

1.2.2.2 Đặc điểm sinh lý của đại tràng ảnh hưởng tới sự giải phóng dược chất

• Thể tích nước tại đại tràng

So với dạ dày và ruột non, đại tràng chứa thể tích nước tự do ít nhất, với khoảng 200 ml nước trong dịch đại tràng Đặc điểm này ảnh hưởng lớn đến khả năng phân rã của các dạng thuốc.

• Nhu động và co bóp của đại tràng

Đại tràng thực hiện các vận động như co bóp phân đoạn và sóng nhu động, tương tự như ruột non, giúp đẩy thức ăn về phía trực tràng Thỉnh thoảng, có những sóng phản nhu động yếu Đặc biệt, đại tràng còn có co bóp khối, một hình thức nhu động đặc biệt, diễn ra khi một đoạn đại tràng bị căng, tạo ra co bóp vòng để ép chất phân thành khối Co bóp này mạnh dần trong khoảng 30 giây, sau đó ruột giãn ra trong 2 - 3 phút, và lại xuất hiện co bóp khối ở đoạn ruột xa hơn Chuỗi vận động này kéo dài từ 10 phút đến nửa giờ và có thể lặp lại sau nửa ngày hoặc một ngày.

Sau bữa ăn, co bóp khối trong đại tràng tăng lên nhờ phản xạ từ dạ dày đến đại tràng qua dây thần kinh X Kích thích từ ruột già cũng góp phần gây ra các co bóp khối Những người bị loét ruột già thường xuyên trải qua cảm giác co bóp khối, dẫn đến cảm giác muốn đại tiện liên tục.

Sự nhu động và co bóp của đại tràng ảnh hưởng trực tiếp đến thời gian tồn tại của thuốc tại đây, từ đó tác động đến hiệu quả điều trị của các dạng thuốc giải phóng tại đại tràng.

• Thời gian lưu thuốc ở các đoạn của đường tiêu hóa

Thời gian lưu thuốc trong đường tiêu hóa ảnh hưởng đáng kể đến sự giải phóng và hấp thu thuốc Thời gian này phụ thuộc vào nhiều yếu tố như sinh lý, tuổi tác, tư thế cơ thể, giới tính và chế độ ăn uống Cụ thể, thời gian lưu thuốc ở dạ dày có thể từ 0 đến 2 giờ khi đói và kéo dài đến 6 giờ khi ăn no, trong khi ở ruột non, thời gian lưu thường ổn định từ 3 đến 4 giờ, nhưng có thể dao động từ 2 đến 6 giờ tùy thuộc vào từng cá thể Đặc biệt, thời gian lưu thuốc tại đại tràng có sự biến động lớn, từ 6 đến 70 giờ.

Khối khí trong đại tràng được hình thành chủ yếu ở tá tràng do sự phân hủy của vi sinh vật, tạo ra các acid béo mạch carbon ngắn, carbon dioxyd, hydro và methan Sự hình thành khối khí này phụ thuộc vào từng cá nhân, chế độ ăn uống và loại thực phẩm tiêu thụ Các khối khí này tập trung nhiều ở đại tràng ngang, tạo thành túi khí tạm thời, có thể làm giảm bề mặt tiếp xúc của thuốc, hạn chế sự hấp thu nước và chất điện giải, từ đó ảnh hưởng đến thời gian lưu thuốc tại đại tràng.

Giá trị pH trong đường tiêu hóa có sự biến đổi rõ rệt, với pH tăng dần từ dạ dày (pH 1 – 2) đến đoạn cuối ruột non (pH 7,5 ± 0,5) Cụ thể, pH tại các phần khác nhau của đại tràng lần lượt là 6,4 ± 0,6 ở đại tràng lên, 6,6 ± 0,8 ở đại tràng ngang, và 7,0 ± 0,7 ở đại tràng xuống.

Giá trị pH của đại tràng có thể bị ảnh hưởng bởi chế độ ăn uống và thuốc điều trị Một chế độ ăn giàu carbohydrate có thể làm giảm pH đại tràng do quá trình lên men polysaccharid thành acid béo chuỗi ngắn Ngoài ra, các loại thuốc có cấu trúc polysaccharid như lactulose cũng có thể thay đổi pH đại tràng, vì dược chất này được chuyển hóa thành acid lactic nhờ vi khuẩn trong đại tràng, dẫn đến sự giảm pH.

pH đường tiêu hóa có thể bị ảnh hưởng bởi các bệnh lý liên quan đến hệ tiêu hóa, đặc biệt là ở bệnh nhân viêm đại tràng Nghiên cứu của Raimundo và cộng sự chỉ ra rằng pH ở manh tràng và đại tràng lên, ngang của bệnh nhân viêm đại tràng có triệu chứng và bệnh nhân đã thuyên giảm có sự khác biệt, với giá trị lần lượt là 4,7 và 4,9 – 5,5 Nugent và cộng sự cũng ghi nhận pH đại tràng < 5,5 ở 2 trong số 6 bệnh nhân được nghiên cứu Ngược lại, báo cáo của Press và cộng sự cho thấy pH ở manh tràng, đại tràng lên và ngang của 11 bệnh nhân có giá trị cao hơn một chút.

• Hệ vi sinh đại tràng Ở người trưởng thành khỏe mạnh có khoảng 100 ngàn tỷ vi khuẩn trong đường ruột, chủ yếu tập trung ở đại tràng [94]

PELLET

Pellet là dạng hạt thuốc nhỏ, hình cầu hoặc gần cầu, với đường kính từ 0,25 đến 1,5 mm Chúng không phải là dạng bào chế hoàn chỉnh mà là chế phẩm trung gian hoặc bán thành phẩm, cần được đóng gói, nang cứng hoặc dập thành viên để tạo thành các chế phẩm hoàn chỉnh.

Pellet là sản phẩm trung gian để bào chế thành dạng thuốc rắn Về cơ bản, pellet có các thành phần như sau:

Tá dược tạo cầu là các chất giúp các đoạn sợi hình trụ được đùn/ép ra từ máy đùn có độ dẻo cần thiết để biến dạng thành các pellet hình cầu hoàn chỉnh trong quá trình chuyển động liên tục Cellulose vi tinh thể (microcrystalline cellulose, MCC), đặc biệt là Avicel PH, là tá dược tạo cầu phổ biến Các tá dược khác như calci phosphat, lactose, tinh bột và tinh bột biến tính không có khả năng tạo cầu.

Lactose, manitol, sacarose, tinh bột và cellulose vi tinh thể là những tá dược độn quan trọng trong việc xây dựng công thức pellet thông qua kỹ thuật đùn - tạo cầu.

Là thành phần bắt buộc phải có khi bào chế pellet bằng kỹ thuật đùn - tạo cầu

Tá dược dính có thể được sử dụng trong pellet dưới dạng lỏng hoặc bột khô kết hợp với dược chất và các tá dược khác Sau đó, nước hoặc dung môi thích hợp như dung dịch ethanol hoặc alcol isopropylic được thêm vào khối bột kép để nhào ẩm.

Là thành phần thiết yếu khi bào chế pellet giải phóng ngay bằng kỹ thuật đùn

Trong quá trình bào chế pellet, việc tạo cầu giúp tăng tốc độ rã và giải phóng dược chất nhanh chóng Lực ép khi đùn sợi làm giảm mật độ và kích thước lỗ xốp trong pellet, từ đó giảm mao dẫn nước và trì hoãn quá trình trương nở của tá dược Các tá dược siêu rã thường được sử dụng bao gồm tinh bột biến tính như natri starch glycolat, natri croscarmelose và crospovidon.

Tá dược trơn giúp giảm lực ma sát giữa khối bột ẩm và bề mặt lỗ sàng của máy đùn, tạo điều kiện cho bột dễ dàng đi qua và hình thành các sợi ép hình trụ không dính Sự hiện diện của tá dược trơn cũng làm giảm nhiệt sinh ra do ma sát trong quá trình đùn/ép sợi Trong quá trình vo/tạo cầu, tá dược trơn ngăn các đoạn sợi hình trụ dính vào nhau, nhưng nếu sử dụng quá nhiều, các pellet sẽ tụ lại, làm giảm độ cầu Các loại tá dược trơn có thể sử dụng bao gồm talc, silic dioxyd keo (Aerosil 200), kaolin và natri lauryl sulfat.

Để tăng khả năng giải phóng dược chất từ pellet, có thể sử dụng các tá dược trợ tan như polysorbat, poloxamer, natri lauryl sulfat, hoặc các dung môi không bay hơi như propylen glycol và polyethylen glycol 200 - 400 Ngoài ra, việc tạo hệ rắn - lỏng (liquisolid) bằng cách sử dụng cremophor hoặc các tá dược tạo vi môi trường pH như natri citrat, natri hydrocarbonat, natri phosphat, và meglumin kết hợp với dược chất là các acid yếu như acid citric, acid tartaric, acid fumaric, acid sucinic và các base yếu cũng rất hiệu quả trong việc cải thiện độ hòa tan của dược chất ít tan.

• Tá dược ổn định dược chất

Để đảm bảo ổn định cho dược chất trong quá trình bào chế pellet, cần phối hợp các tá dược thích hợp khi thành phần dược chất nhạy cảm với oxy, ẩm và pH không phù hợp.

Quy trình bào chế pellet giải phóng ngay sẽ hoàn tất khi sản phẩm đạt tiêu chuẩn chất lượng mong muốn Tuy nhiên, để tạo ra các pellet có khả năng giải phóng dược chất biến đổi, cần thực hiện thêm bước bao màng với các tá dược bao khác nhau tùy theo mục đích sử dụng.

• Tá dược bao tan ở đại tràng

Các pellet giải phóng tại đại tràng có thể được bào chế từ các biopolyme như zein kết hợp với polyme nhạy cảm với pH và các polyme khác, với tỷ lệ phù hợp để bao màng cho pellet Zein, một protein dạng bột được chiết xuất từ bột gluten ngô, được phân loại dựa trên khối lượng phân tử và chuỗi đồng đẳng thành các loại α-zein (19 – 22 kDa), β-zein (14 kDa), γ-zein (16 và 27 kDa) và δ-zein (10 kDa), trong đó α-zein, β-zein, γ-zein chiếm lần lượt 75 – 80 %, 10 – 15 %.

Zein là một protein có thành phần chủ yếu là α-zein, với một lượng nhỏ β-zein, γ-zein và δ-zein Đặc điểm tan của zein phụ thuộc vào cấu trúc chuỗi amino acid, với khả năng tan trong dung môi như alcohol và kiềm, nhưng không tan trong nước và aceton Cấu trúc của zein ảnh hưởng đến tính chất hóa lý và cơ chế tự lắp ráp, với α-zein có nhiều cấu trúc α-helix, trong khi β-zein chủ yếu có cấu trúc β-sheet Khi trộn zein với nước ở nhiệt độ cao hơn nhiệt độ chuyển kính (Tg), zein hình thành cấu trúc mạng lưới protein dạng sợi, đặc biệt trong hệ zein-tinh bột Zein thường được sử dụng trong các màng bao kiểm soát giải phóng dược chất tại đại tràng, như kết hợp với polyme Kollicoat MAE 100P để tạo ra màng bao pellet Ngoài ra, zein cũng có thể kết hợp với polyme phân hủy bởi enzym tiêu hóa để bào chế thuốc giải phóng tại đại tràng.

1.4.3 Phương pháp bào chế pellet

Có nhiều phương pháp bào chế pellet, bao gồm đùn – tạo cầu, bồi dần, phun sấy và phun đông tụ Trong số đó, phương pháp đùn – tạo cầu được sử dụng phổ biến nhất Quy trình bào chế pellet bằng phương pháp này bao gồm các bước như trộn bột khô, trộn bột ướt, ủ, đùn thành sợi hình trụ, vo tạo cầu và sấy khô pellet.

1.4.4 Thiết bị bào chế pellet bằng kỹ thuật đùn – tạo cầu

Trong quy trình bào chế thuốc pellet, các thiết bị thông dụng như máy xay, máy nghiền, máy rây, máy trộn bột khô, máy nhào trộn bột ẩm và thiết bị sấy khô đóng vai trò quan trọng Chúng được sử dụng trong các giai đoạn xay nghiền dược chất, trộn hỗn hợp bột khô, nhào trộn bột ẩm và làm khô pellet Tuy nhiên, để tạo ra sợi hình trụ, cần sử dụng máy đùn/ép sợi chuyên dụng, và để chuyển đổi các sợi này thành pellet hình cầu, máy vo/tạo cầu là thiết bị không thể thiếu.

1.4.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến đặc tính của pellet bằng kỹ thuật đùn – tạo cầu

Để bào chế pellet bằng kỹ thuật đùn - tạo cầu, cần sử dụng tá dược tạo cầu phù hợp nhằm thu được sản phẩm pellet hình cầu hoặc phỏng cầu Tá dược này ảnh hưởng lớn đến giải phóng dược chất, vì vậy nên sử dụng với tỷ lệ thấp nhất để hạn chế tác động đến khả năng làm chậm giải phóng Thể tích tá dược dính lỏng hoặc nước trong giai đoạn nhào ẩm cần được xác định chính xác để tạo ra khối bột ẩm đủ dẻo, cho phép đùn/ép ra các sợi chắc, mịn, bề mặt nhẵn Nếu thiếu nước hoặc tá dược dính lỏng, khối ẩm sẽ không đủ dẻo, dẫn đến sợi đùn ra không chắc và kích thước pellet không đồng đều Ngược lại, nếu thừa nước hoặc tá dược dính lỏng, khối bột quá ẩm sẽ gây dính, làm cho pellet thu được cũng có kích thước không đồng nhất.

Trong giai đoạn nhào ẩm, trình tự phối hợp các thành phần ảnh hưởng đáng kể đến khả năng giải phóng dược chất từ pellet Việc nghiên cứu lựa chọn trình tự phối hợp dược chất với các thành phần trong công thức pellet là cần thiết để đảm bảo sản phẩm đạt yêu cầu về tốc độ và mức độ giải phóng dược chất Trong giai đoạn đùn/ép, tốc độ đùn sợi cũng tác động đến hiệu suất sản xuất pellet và đặc tính của chúng; tốc độ chậm tạo ra sợi chắc, mịn, trong khi tốc độ cao dẫn đến sợi thô, ráp và nhiều bột mịn, khiến kích thước pellet không đồng nhất.

CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU, TRANG THIẾT BỊ, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

NGUYÊN LIỆU, TRANG THIẾT BỊ, NỘI DUNG NGHIÊN CỨU

Nguồn gốc và tiêu chuẩn chất lượng của các nguyên liệu dùng trong nghiên cứu được ghi trong bảng 2.1

Bảng 2.1 Các nguyên liệu và hóa chất sử dụng trong nghiên cứu

STT Nguyên liệu Nguồn gốc

Nhà sản xuất Tiêu chuẩn

Các hóa chất dùng cho bào chế

Mesalamin (Kích thước tiểu phân D90: 15 đến 20 àm)

Ethyl celulose (Ethocel TM standard 7 premium)

8 Triethyl citrat Đức Basf SE TCNSX

9 Lactose monohydrat Hà Lan Friesland Campina

PH101 Đài Loan Mingtai Chemical

11 Natri starch glycolat Đài Loan Yung Zip Chemical

Shanghai Yuking Water Soluble Material Tech Co

14 Silic dioxyd Đức Evonik Resource

16 Dung dịch xenetix 6 mg/ml Pháp Guerbet

Các hóa chất dùng cho kiểm nghiệm

Chuẩn gốc mesalamin (Lô: R001T0; hàm lượng nguyên trạng:

Chuẩn gốc diazepam (Lô: QT181020213; hàm lượng nguyên trạng 99,49%)

17 Kali dihydrophosphat Đức Merk TCNSX

18 Natri hydroxyd Đức Merk TCNSX

LC-MS Mỹ VWR TCNSX,

24 Acid formic Mỹ Fisher TCNSX

25 Natri 1-octanesulfonat Mỹ Fisher TCNSX

26 Acid phosphoric Mỹ Fisher TCNSX

27 Nước cất Việt Nam Bidiphar DĐVN V

2.1.2 Thiết bị và dụng cụ

Thiết bị bào chế dùng cho nghiên cứu được ghi ở bảng 2.2

Bảng 2.2 Các thiết bị bào chế

STT Dụng cụ - Thiết bị Công suất thiết bị Địa điểm nghiên cứu Nguồn gốc

1 Máy trộn siêu tốc LM-10 800 g – 3 kg Bidiphar Trung Quốc

2 Máy đùn Caleva VDE 100 g – 500 g Bidiphar Anh

3 Máy vo Caleva MBS 250 100 g - 400 g Bidiphar Anh

4 Máy bao tầng sôi Qui Long FLP-5

5 Máy bao tầng sôi Uni-Glatt 50 g – 1 kg

6 Tủ sấy Binder 1 m 3 Bidiphar Đức

7 Máy khuấy từ IKA ® C- MAG HS7

8 Máy đóng nang tự động Jiangnan NJP1200

9 Bộ rây chọn kích thước hạt Bidiphar Việt Nam

10 Các dụng cụ thủy tinh Bidiphar Đức

2.1.2.2 Thiết bị và dụng cụ đánh giá

Thiết bị và dụng cụ đánh giá như ghi ở bảng 2.3

Bảng 2.3 Các thiết bị và dụng cụ đánh giá

STT Dụng cụ - Thiết bị Nguồn gốc

1 Cân phân tích 4 số lẻ A&D GH200 Nhật

2 Cân sấy ẩm A&D MX50 Nhật

3 Máy đo pH Mettler Toledo pH220 Thụy sĩ

4 Máy thử hoà tan 14 cốc Erweka DT-1614 Đức

5 Máy quang phổ Agilent 8453 Mỹ

6 Máy HPLC Shimadzu LC-2030 Nhật

7 Máy LC-MS/MS Shimadzu LCMS-8040 Nhật

8 Tủ vi khí hậu Binder KBF-115 Đức

9 Tủ lạnh âm sâu Panasonic MDF-137 Nhật

10 Máy siêu âm ULTRASONIC LC60H Đức

11 Máy lắc xoáy Labnet VX100 Mỹ

12 Máy ly tâm Hermle Z200A Đức

13 Micropipet 1000 àL; 200 àL; 500 àL Đức

14 Máy chụp X-quang Serix 250 mA Đức

15 Bình định mức, pipet class A Pháp

Chó thí nghiệm là những con chó trưởng thành, giống đực, khỏe mạnh, có trọng lượng từ 10 đến 18 kg Chúng được nuôi dưỡng trong môi trường thí nghiệm với chế độ ăn uống đầy đủ và được kiểm soát chặt chẽ.

Các nội dung chính của đề tài được thực hiện tại:

Bộ môn Bào chế tại Trường Đại Học Dược Hà Nội đóng vai trò quan trọng trong việc đào tạo chuyên môn cho sinh viên ngành dược Công ty cổ phần Dược Bình Định (Bidiphar) là một trong những đơn vị hàng đầu trong lĩnh vực sản xuất dược phẩm tại Việt Nam Phòng khám đa khoa Thành Danh, tọa lạc tại 294 Trường Chinh, Nhơn Hưng, An Nhơn, Bình Định, cung cấp dịch vụ chụp X-quang cho chó, đáp ứng nhu cầu chăm sóc sức khỏe thú y.

2.1.5 Nội dung nghiên cứu Để hoàn thành mục tiêu nghiên cứu, luận án đã thực hiện các nội dung nghiên cứu sau:

- Thẩm định các phương pháp định lượng mesalamin áp dụng trong luận án

- Xây dựng công thức pellet nhân mesalamin bằng phương pháp đùn, tạo cầu

- Xây dựng công thức pellet mesalamin giải phóng tại đại tràng bằng phương pháp bao film

- Nâng cấp quy mô bào chế pellet mesalamin giải phóng tại đại tràng ở quy mô 2 kg pellet nhân / mẻ bao

- Xây dựng tiêu chuẩn cơ sở và đánh giá độ ổn định của pellet nghiên cứu

- Đánh giá in vivo pellet mesalamin giải phóng tại đại tràng trên chó thí nghiệm

PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.2.1.1 Nghiên cứu tính chất dược chất

• Nghiên cứu ổn định của mesalamin trong các điều kiện khác nhau

Cho 100 mg mesalamin vào bình định mức 200ml, thêm nước vừa đủ 200ml được dung dịch (1)

Lấy 25ml dung dịch (1) và cho vào bình định mức 50ml, sau đó thêm nước vừa đủ để tạo thành dung dịch (1.1) Bảo quản dung dịch (1.1) ở nhiệt độ phòng, tránh ánh sáng trong thời gian 48 giờ để có được mẫu DC/01.

Pha loãng dung dịch (1) với nước ở tỉ lệ 1:1 được dung dịch (1.2) Chiếu ánh sáng UV vào (1.2) trong 48 giờ được mẫu DC/02.

Pha loãng dung dịch (1) với nước ở tỉ lệ 1:1 được dung dịch (1.3) Đun nóng dung dịch (1.3) ở 100 o C trong 2 giờ được mẫu DC/03.

Pha loãng dung dịch (1) với dung dịch NaOH 0,2N theo tỉ lệ 1:1 để tạo ra dung dịch (1.4) Sau đó, bảo quản dung dịch (1.4) ở nhiệt độ phòng, tránh ánh sáng trong 48 giờ để thu được mẫu DC/04.

Pha loãng dung dịch (1) với dung dịch HCl 0,2N theo tỉ lệ 1:1 để tạo ra dung dịch (1.5) Bảo quản dung dịch (1.5) ở nhiệt độ phòng và tránh ánh sáng trong 48 giờ để thu được mẫu DC/05.

Tiến hành phân tích các mẫu DC/01, DC/02, DC/03, DC/04 và DC/05 bằng phương pháp sắc ký HPLC và đánh giá cảm quan, hàm lượng mesalamin

• Nghiên cứu độ ổn định của mesalamin trong môi trường có tác nhân oxi hóa và tác nhân chống oxi hóa như dinatri edetat, natri metabisulfit, vitamin C

Cho 100 mg mesalamin vào bình định mức 200 ml, cho dung dịch H 2 O 2 5 % vừa đủ thể tích được dung dịch (2)

Pha loãng dung dịch (2) và dung dịch H 2 O 2 5% ở tỉ lệ 1:1 được dung dịch (2.1) Bảo quản dung dịch (2.1) ở nhiệt độ phòng, ở điều kiện tránh ánh sáng trong 48 giờ được mẫu DC/06.

Cho natri metabisulfit vào dung dịch (2) để tạo ra dung dịch natri metabisulfit 0,25 mg/ml (dung dịch 2.2) Bảo quản dung dịch (2.2) ở nhiệt độ phòng và tránh ánh sáng trong 48 giờ, được gọi là mẫu DC/07.

Hòa tan hoàn toàn vitamin C vào dung dịch (2) để tạo ra dung dịch vitamin C với nồng độ 0,25 mg/ml (dung dịch 2.3) Bảo quản dung dịch (2.3) ở nhiệt độ phòng, tránh ánh sáng trong 48 giờ để đảm bảo chất lượng mẫu DC/08.

Cho EDTA vào dung dịch (2) để tạo ra dung dịch EDTA 0,25 mg/ml (dung dịch 2.4) Bảo quản dung dịch (2.4) ở nhiệt độ phòng và tránh ánh sáng trong 48 giờ, được ghi nhận là mẫu DC/09.

Tiến hành phân tích các mẫu DC/06, DC/07, DC/08, DC/09 bằng phương pháp sắc ký HPLC và đánh giá cảm quan, hàm lượng mesalamin

2.2.1.2 Nghiên cứu tương tác dược chất - tá dược

Trộn mesalamin với các tá dược theo tỷ lệ 1:1, sau đó đóng bột vào lọ thủy tinh màu nâu, đậy nắp cao su và chụp nắp nhôm Bảo quản mẫu ở điều kiện lão hóa cấp tốc với nhiệt độ 40°C và độ ẩm 75 ± 5% Tiến hành phân tích đánh giá cảm quan và hàm lượng mesalamin sau 1 và 3 tháng bảo quản bằng phương pháp HPLC.

2.2.2.1 Bào chế pellet nhân mesalamin

Pellet nhân chứa mesalamin được chế biến bằng phương pháp đùn tạo cầu với các thành phần như mesalamin, tá dược tạo cầu cellulose vi tinh thể PH101 (MCC PH101), tá dược tạo kênh khuếch tán (lactose) hoặc tá dược rã (natri starch glycolat) và tá dược trơn (Aerosil) Hỗn hợp bột được nhào ẩm bằng dung dịch PVP K30 trong nước và ủ trong 1 giờ Sau đó, hỗn hợp được đùn qua máy với đường kính lỗ đùn 0,8 – 1 mm và tốc độ 80 vòng/phút Sợi ra từ máy đùn được tạo cầu với tốc độ 1500 vòng/phút và sau đó được sấy khô ở 60 độ C đến khi độ ẩm đạt dưới 3% Quy mô thí nghiệm là 500 g/mẻ.

Bảng 2.4 Thành phần pellet nhân tính cho lượng pellet chứa 500 mg mesalamin

STT Thành phần Khối lượng

2 MCC PH101 Thay đổi theo nghiên cứu

3 Lactose monohydrat Thay đổi theo nghiên cứu

4 Natri starch glycolat Thay đổi theo nghiên cứu

7 Nước * Thay đổi theo nghiên cứu

* bay hơi trong quá trình bào chế pellet

• Bào chế pellet nhân chứa chất cản quang

Bào chế pellet nhân chứa chất cản quang với thành phần chính là mesalamin 500 mg, bari sulfat 80 mg, MCC PH101, lactose monohydrat, DST, PVP K30, dung dịch Xenetix 6 mg/ml (0,2 ml) và Aerosil.

Pellet nhân được chế biến với quy trình và thông số kỹ thuật tương tự như pellet nhân đã đề cập Chúng chứa chất cản quang đạt tiêu chuẩn và được bao film bằng công thức màng bao tối ưu từ nghiên cứu tối ưu hóa Quy trình bao film sẽ được thực hiện theo mô tả trong mục 2.2.2.2 dưới đây.

2.2.2.2 Bào chế pellet mesalamin giải phóng tại đại tràng

Pellet nhân đạt tiêu chuẩn được bao kiểm soát giải phóng bằng dịch bao có thành phần như ghi ở bảng 2.5 Dịch bao được pha chế bằng cách hòa tan chất hóa dẻo trong khoảng 70% lượng ethanol 80% Zein và các polyme kiểm soát giải phóng được hòa tan vào dung dịch này Bột talc được nghiền mịn, rây qua 180 và sau đó cho vào dung dịch polyme Cuối cùng, bổ sung ethanol 80% vừa đủ để hoàn thiện quá trình.

Bao film bằng thiết bị tầng sôi Qui Long hoặc Uni-Glatt với thông số:

Thiết bị tầng sôi Uni-Glatt hoạt động với nhiệt độ khí thổi vào 60°C (khí đã được tách ẩm) và nhiệt độ khí ra 40°C Lưu lượng khí vào đạt 40% công suất máy, với áp suất súng phun 1 bar và đường kính súng 1 mm Tốc độ phun dịch là 2,5 ml/phút, cùng với chiều cao ống Wusrter là 5 cm Mỗi mẻ có trọng lượng 50 g pellet nhân.

Thiết bị tầng sôi Qui Long hoạt động với nhiệt độ khí thổi vào 30°C và áp suất súng phun đạt 1 bar Đường kính súng phun là 1 mm, tần số quạt hút dao động từ 28 đến 30 Hz, trong khi tốc độ bơm nhu động tương ứng là 2,8 g/phút Mỗi mẻ sản xuất có trọng lượng 240 g pellet nhân.

Bảng 2.5 Thành phần dịch bao film pellet

STT Thành phần Số lượng

1 Zein Thay đổi theo nghiên cứu

2 Eudragit S100 Thay đổi theo nghiên cứu

3 Ethyl celulose Thay đổi theo nghiên cứu

4 Pectin Thay đổi theo nghiên cứu

5 Acid stearic Thay đổi theo nghiên cứu

6 Chất hóa dẻo DBP hoặc glycerin hoặc TEC 20 % tổng polyme (kl/kl)

7 Talc 20 % tổng polyme (kl/kl)

8 Tween 80 Thay đổi theo nghiên cứu

9 EtOH 80 % Vừa đủ để dịch bao chứa 6 % polyme (kl/tt)

2.2.3 Phương pháp thiết kế thí nghiệm và tối ưu hóa công thức màng bao pellet giải phóng tại đại tràng

Sau khi tiến hành khảo sát các tá dược trong dịch bao, chúng tôi đã xác định những thành phần quan trọng ảnh hưởng đến quá trình bào chế pellet mesalamin giải phóng tại đại tràng Những thành phần này sẽ được lựa chọn để thiết kế thí nghiệm tối ưu hóa công thức dịch bao pellet.

Bảng 2.6 Thành phần dịch bao trong các công thức tối ưu

STT Thành phần Số lượng

1 Zein Thay đổi theo nghiên cứu

2 Eudragit S100 Thay đổi theo nghiên cứu

3 Ethylcellulose Thay đổi theo nghiên cứu

4 Dibutyl phtalat 20 % tổng polyme (kl/kl)

5 Talc 20 % tổng polyme (kl/kl)

6 EtOH 80 % Vừa đủ để dịch bao chứa 6 % polyme (kl/tt)

Sử dụng phần mềm MODDE 12.0 để thiết kế thí nghiệm ngẫu nhiên theo nguyên tắc hợp tử tại tâm, nhằm tối ưu hóa màng bao với các yếu tố cố định Tỷ lệ zein và EC được duy trì ở mức 1:1, trong khi tỷ lệ % DBP so với tổng lượng polymer (zein) cũng được xác định để đảm bảo hiệu quả tối ưu trong quá trình nghiên cứu.

CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU

KẾT QUẢ THẨM ĐỊNH CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG

3.1.1 Kết quả thẩm định phương pháp quang phổ tử ngoại UV-VIS

Tiến hành thẩm định phương pháp quang phổ tử ngoại – khả kiến UV-VIS như phương pháp trình bày ở mục 2.2.4.1 được kết quả như sau:

Hình 3.1 Phổ hấp thụ của (a) mẫu trắng, (b) mẫu chuẩn, thử, placebo trong môi trường pH 1,2

Hình 3.2 Phổ hấp thụ của (a) mẫu trắng, (b) mẫu chuẩn, thử, placebo trong môi trường pH 6,8

Hình 3.3 Phổ hấp thụ của (a) mẫu trắng, (b) mẫu chuẩn, thử, placebo trong môi trường pH 7,4

Kết quả so sánh phổ cho thấy rằng phổ mẫu chuẩn và phổ mẫu thử tương đồng, với các cực đại hấp thụ tương đương nhau ở các môi trường pH 1,2; pH 6,8 và pH 7,4 Bên cạnh đó, ảnh hưởng của mẫu placebo trong các môi trường này lần lượt là -0,19 %, -0,41 % và 0,53 %, đều đạt yêu cầu ≤ 2 %.

• Độ phù hợp của hệ thống

Bảng 3.1 Kết quả khảo sát tính phù hợp của hệ thống (n=6)

Môi trường hòa tan Độ hấp thụ

TB SD RSD pH 1,2 0,64499 0,00113 0,18 % pH 6,8 0,57719 0,00087 0,15 % pH 7,4 0,62664 0,00141 0,22 %

Kết quả phân tích cho thấy RSD của độ hấp thụ từ 6 lần đo mẫu chuẩn ≤ 2,0 %, vậy quy trình phân tích đạt tính phù hợp hệ thống

• Tính tuyến tính Kết quả khảo sát tính tuyến tính như sau

Nồng độ (àg/ml) pH 1,2 y = 0.021x + 0.0017 R² = 0.9987

Nồng độ (àg/ml) pH 6,8

Hình 3.4 Đồ thị biểu diễn mối tương quan giữa độ hấp thụ và nồng độ mesalamin trong môi trường (a) pH 1,2; (b) pH 6,8 và (c) pH 7,4

Kết quả nghiên cứu chỉ ra rằng nồng độ mesalamin trong dung dịch tại các pH 1,2; 6,8 và 7,4 có mối quan hệ tuyến tính với độ hấp thụ trong khoảng nồng độ 0,3 – 34,7 µg/ml, với hệ số tương quan R² khoảng 0,99 Điều này cho thấy phương pháp phân tích đạt tiêu chí tính tuyến tính.

• Độ đúng Kết quả khảo sát độ đúng như sau:

Bảng 3.2 Kết quả khảo sát độ đúng

Mức nồng độ Tỷ lệ hồi phục trung bình (%)

125% (34,7 àg/ml) 100,91 0,71 pH 6,8 1% (0,3 àg/ml) 101,29 0,91

125% (34,7 àg/ml) 100,06 0,48 pH 7,4 1% (0,3 àg/ml) 99,50 1,02

Nồng độ (àg/ml) pH 7,4

Kết quả ở bảng trên cho thấy tỷ lệ hồi phục nằm trong khoảng 97 – 103 % và RSD tỉ lệ thu hồi ở mỗi mức nồng độ ≤ 2,0 % đạt yêu cầu độ đúng

Từ kết quả thẩm định độ đúng và tính tuyến tính suy ra khoảng xác định của phương phỏp: 0,3 àg/ml đến 34,7 àg/ml

Kết quả độ lặp lại và độ chính xác trung gian như sau

Bảng 3.3 Kết quả khảo sát độ chính xác của phương pháp

Môi trường hòa tan Độ lặp lại

(RSD, n = 6) Độ chính xác trung gian (RSD, n = 12) pH 1,2 0,87% 0,95% pH 6,8 0,88% 0,82% pH 7,4 0,32% 0,69%

Kết quả cho thấy độ chính xác đạt yêu cầu (RSD < 2 %)

3.1.2 Kết quả thẩm định phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

Tiến hành thẩm định như đã mô tả ở mục 2.2.4.1, thu được kết quả như sau:

Hình 3.2 Sắc ký đồ mẫu trắng (a), mẫu placebo (b), mẫu chuẩn (c) và mẫu thử (d)

Kết quả thẩm định cho thấy thời gian lưu của pic mesalamin trên sắc ký đồ mẫu chuẩn là 13,95 phút, trong khi mẫu thử là 13,80 phút Sắc ký đồ của dung dịch mẫu thử cho thấy pic có thời gian lưu tương đương với pic mesalamin trong dung dịch chuẩn, và mẫu giả dược cùng mẫu trắng không có pic trùng với pic trên Điều này chứng tỏ quy trình phân tích có tính đặc hiệu.

3.1.2.2 Tính phù hợp của hệ thống

Bảng 3.4 Kết quả khảo sát tính phù hợp của hệ thống

RSD % 0,51 0,52 0,28 1,18 0,33% t R : thời gian lưu; S: diện tích pic; A s : hệ số bất đối; N: số đĩa lý thuyết; R: độ phân giải

Kết quả phân tích cho thấy hệ số bất đối của pic 3-aminosalisylic, mesalamin và acid salisylic đều nằm trong khoảng 0,8 – 1,5, với RSD của các thông số sắc ký cho các lần tiêm lặp lại đều dưới 2% Điều này chứng tỏ quy trình phân tích đạt tiêu chuẩn tính phù hợp hệ thống.

Kết quả khảo sát tính tuyến tính như sau

Hình 3.5 Đồ thị biểu diễn mối tương quan giữa nồng độ mesalamin và diện tích pic

Kết quả cho thấy hệ số R 2  1 chứng tỏ có sự tương quan tuyến tính giữa nồng độ và diện tích pic

Kết quả thẩm định độ đúng như sau

Bảng 3.5 Kết quả khảo sát độ đúng của phương pháp

Mức nồng độ Tỷ lệ thu hồi (%) Tỷ lệ thu hồi trung bình (%) RSD (%)

100,96 101,01 Kết quả cho thấy, tỷ lệ thu hồi ở mỗi mức nồng độ trong khoảng 98 – 102 % và RSD ≤ 2 %, do đó phương pháp đạt yêu cầu độ đúng

Từ kết quả thẩm định độ đúng và tính tuyến tính suy ra khoảng xác định của phương pháp: 0,16 mg/ml đến 0,24 mg/ml

Kết quả độ lặp lại và độ chính xác trung gian như sau

Bảng 3.6 Độ lặp lại và độ chính xác trung gian Độ lặp lại (n = 6) Độ chính xác trung gian (n = 12)

Kết quả cho thấy độ chính xác đạt yêu cầu (RSD < 2 %) Phương pháp đạt yêu cầu độ chính xác

Phương pháp HPLC đã được phát triển với khoảng tuyến tính phù hợp, độ đặc hiệu, độ đúng và độ chính xác cao Phương pháp này có thể được áp dụng để định lượng mesalamin trong viên một cách hiệu quả.

3.1.3 Kết quả thẩm định phương pháp định lượng mesalamin trong huyết tương chó bằng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ

3.1.3.1 Độ đặc hiệu – chọn lọc

Kết quả thẩm định độ chọn lọc – đặc hiệu của phương pháp như sau

(b) Hình 3.6 (a) sắc ký đồ mẫu huyết tương trắng; (b) sắc ký đồ mẫu huyết tương trắng có pha chuẩn MES ở nồng độ LLOQ (50 ng/ml) và IS

Đáp ứng của mẫu trắng tại thời điểm trùng với thời gian lưu của mesalamin (2,3 phút) là 7,81% so với mesalamin ở nồng độ LLOQ (yêu cầu ≤ 20%), trong khi đáp ứng của mẫu trắng tại thời điểm trùng với thời gian lưu của diazepam (8,1 phút) chỉ đạt 1,31% so với diazepam (yêu cầu ≤ 5%) Điều này cho thấy phương pháp phân tích đạt yêu cầu về tính đặc hiệu và chọn lọc theo hướng dẫn của US-FDA.

3.1.3.2 Đường chuẩn và khoảng tuyến tính

Pha dãy chuẩn có nồng độ 50 – 30000 ng/ml như bảng 3.7

Bảng 3.7 Cách pha dãy chuẩn nồng độ từ 50 – 30000 ng/ml

Kết quả khảo sát đường chuẩn và khoảng tuyến tính như phương pháp trình bày ở mục 2.2.4 như sau

Hình 3.7 Đồ thị biểu diễn mối quan hệ giữa tỷ lệ diện tích pic MES/IS với nồng độ

MES trong huyết tương (ng/ml)

Bảng 3.8 Độ đúng của các mẫu chuẩn

CC Độ chính xác so với nồng độ lý thuyết (%)

CC1 CC2 CC3 CC4 CC5

Kết quả thẩm định cho thấy có sự tương quan tuyến tính giữa tỷ lệ diện tích pic MES/IS và nồng độ MES trong khoảng 50 - 30000 ng/ml, với hệ số tương quan gần bằng 1 Nồng độ MES xác định từ đường chuẩn so với nồng độ lý thuyết đều nằm trong giới hạn cho phép 85 – 115% theo hướng dẫn của US-FDA.

3.1.3.3 Giới hạn định lượng dưới (LLOQ)

Bảng 3.9 Kết quả xác định giới hạn định lượng dưới (LLOQ)

Mẫu trắng Mẫu chuẩn (50ng/mL)

MES IS MES IS Nồng độ tìm thấy (a) (ng/ml) Độ đúng

(%) Đáp ứng của mẫu LLOQ/mẫu trắng (S/N) Đạt/ Không

(a) : tính từ phương trình hồi quy (b) : % so với nồng độ thực

Kết quả cho thấy giới hạn định lượng dưới (LLOQ) đạt yêu cầu của US-FDA, với thời gian lưu mẫu chuẩn lớn hơn 5 lần so với mẫu huyết tương trắng; độ chính xác nằm trong khoảng 80% – 120% so với nồng độ thực.

3.1.3.4 Độ đúng và độ chính xác của phương pháp

Kết quả khảo sát độ đúng và độ chính xác như sau:

Bảng 3.10 Kết quả khảo sát độ đúng, độ lặp lại trong ngày và khác ngày (n=6)

Trong nghiên cứu này, các tính toán hồi quy cho thấy độ đúng trung bình trong ngày đầu tiên đạt từ 94,5% đến 106,3%, trong khi độ đúng ở các ngày khác dao động từ 97,8% đến 104,3%, đều nằm trong khoảng yêu cầu 85% - 115% Độ chính xác trung bình trong ngày đầu tiên là từ 2,3% đến 5,9%, và ở các ngày khác là từ 3,4% đến 6,3%, đáp ứng tiêu chuẩn của FDA Hoa Kỳ với độ chính xác ≤ 20% cho mẫu LLOQ và ≤ 15% cho các mẫu còn lại.

3.1.3.5 Độ đúng và độ chính xác của phương pháp khi pha loãng

Pha các mẫu AC1, AC2, AC3 như bảng 3.11

Bảng 3.11 Cách chuẩn bị mẫu khảo sát độ đúng – độ chính xác khi pha loãng (AC)

Kết quả khảo sát độ đúng và độ chính xác khi pha loãng như sau:

Bảng 3.12 Kết quả độ đúng, độ chính xác của phương pháp khi pha loãng (n=6)

(a) : tính từ phương trình hồi quy; (b) : % so với nồng độ thực Ở các nồng độ trên, độ đúng trung bình từ 99,9 - 105,4% đạt yêu cầu 85 - 115

% Ngoài ra, độ chính xác trung bình từ 4,1 - 5,9 % đáp ứng các yêu cầu ≤ 15%

3.1.3.6 Tỷ lệ thu hồi của phương pháp

• Tỷ lệ thu hồi của MES và chuẩn nội diazepam

Kết quả khảo sát tỷ lệ thu hồi MES và IS như sau

Bảng 3.13 Kết quả khảo sát tỷ lệ thu hồi của MES và IS (n=6)

STT Đáp ứng MES Đáp ứng IS

Kết quả nghiên cứu cho thấy phương pháp xử lý mẫu đạt hiệu suất chiết xuất mesalamin và diazepam cao, ổn định, với sai lệch giữa các nồng độ không vượt quá 10%, đáp ứng đầy đủ các yêu cầu của US-FDA.

3.1.3.6 Xác định ảnh hưởng của nền mẫu Bảng 3.14 Kết quả đánh giá sự ảnh hưởng của nền mẫu (n=6)

MF MES MF IS MF MES /MF IS

LQC HQC LQC HQC LQC HQC

Kết quả phân tích cho thấy không có sự sai khác giữa các nền mẫu khác nhau (CV < 15 %), đạt yêu cầu US-FDA

3.1.3.7 Xác định độ nhiễm chéo

Kết quả phân tích như sau

Bảng 3.15 Kết quả đánh giá độ nhiễm chéo

Mẫu trắng Mẫu LLOQ Tỉ lệ đáp ứng pic (%) Kết luận

MES IS MES IS MES IS

Tại thời điểm trùng với thời gian lưu của MES đáp ứng của các mẫu trắng đều

Phương pháp phân tích đáp ứng yêu cầu về độ nhiễm chéo trong phân tích thuốc trong dịch sinh học, với kết quả cho thấy dưới 20% đáp ứng LLOQ và các mẫu trắng đều dưới 5% đáp ứng LLOQ tại thời điểm trùng với thời gian lưu của IS.

3.1.3.7 Nghiên cứu độ ổn định của mẫu phân tích

Bảng 3.16 Độ ổn định của MES huyết tương trong các điều kiện khác nhau (n=6) Độ ổn định Mẫu Nồng độ ban đầu (ng/ml)

Nồng độ sau bảo quản (ng/ml)

3 chu kỳ đông – rã đông LQC 154,5 166,0 7,4

HQC 24273,5 25532,8 5,2 Độ ổn định thời gian ngắn

HQC 24273,5 24423,1 0,6 Độ ổn định trong autosampler (24 giờ/4 o C)

HQC 24273,5 25866,3 6,6 Độ ổn định dài ngày (-25 ± 5 o C, 30 ngày)

Nồng độ mesalamin trong các mẫu LQC và HQC sau khi bảo quản qua 3 chu kỳ đông - rã đông, sau 5 giờ ở nhiệt độ phòng, sau 24 giờ trong autosampler, và sau 30 ngày ở nhiệt độ -25 ± 5 o C, cho thấy sự khác biệt so với nồng độ ban đầu là ≤ 15%.

% Do đó, MES ổn định trong mẫu huyết tương ở các điều kiện trên, đáp ứng yêu cầu US-FDA

Kết quả thẩm định cho thấy phương pháp phân tích mesalamin trong huyết tương chó đáp ứng đầy đủ các yêu cầu về độ đặc hiệu, độ đúng, độ lặp lại, khoảng tuyến tính, giới hạn định lượng dưới, tỷ lệ thu hồi và độ ổn định Phương pháp này có thể được áp dụng trong nghiên cứu hấp thu in vivo các chế phẩm chứa mesalamin.

KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU TIỀN CÔNG THỨC

3.2.1.1 Kết quả nghiên cứu ổn định của mesalamin trong các điều kiện khác nhau

Pha chế mẫu nghiên cứu như bảng 3.17 và bảo quản ở điều kiện như trình bày ở mục 2.2.1

Bảng 3.17 Công thức nghiên cứu sự phân hủy mesalamin trong nước, UV, nhiệt độ, pH

Tiến hành phân tích mẫu nghiên cứu được kết quả sau

Bảng 3.18 Ảnh hưởng của nước, UV, nhiệt độ, pH tới sự phân hủy mesalamin

Mẫu Thay đổi màu sắc Hàm lượng mesalamin (%)

DC02 (nước, chiếu UV) Không màu 93,35

DC04 (dung dịch NaOH 0,2 N) Nâu 3,50

DC05 (dung dịch HCl 0,2 N) Không màu 100,34

Thành phần DC01 DC02 DC03 DC04 DC05

Dung dịch mesalamin 0,5 mg/ml (dung dịch 1)

25 ml 25 ml 25 ml 25 ml 25 ml

Nước chiếu UV - Vđ 50ml - - -

Dung dịch NaOH 0,2 N - - - Vđ 50ml -

Dung dịch HCl 0,2N - - - - Vđ 50ml

Nghiên cứu cho thấy tốc độ phân hủy mesalamin chịu ảnh hưởng mạnh mẽ bởi pH của môi trường hòa tan Mesalamin duy trì ổn định trong môi trường acid mạnh, nhưng nhanh chóng bị phân hủy và chuyển màu nâu trong môi trường kiềm mạnh, với hàm lượng dược chất chỉ còn 3,50% trong dung dịch NaOH 0,1N, so với 100,34% trong dung dịch HCl 0,1N Ngoài ra, các yếu tố như nước, tia UV và nhiệt độ cũng góp phần vào sự phân hủy của dược chất, tuy nhiên mức độ phân hủy trong nước và ở nhiệt độ cao không đáng kể như các yếu tố khác.

3.2.1.2 Kết quả nghiên cứu ổn định của mesalamin trong môi trường có tác nhân oxi và tác nhân chống oxi hóa như dinatri edetat, natri metabisulfit, vitamin C

Pha chế các mẫu DC06, DC07, DC08 và DC09 như sau và tiến hành bảo quản ở trong điều kiện trình bày ở mục 2.2.1

Bảng 3.19 Công thức nghiên cứu sự phân hủy mesalamin trong môi trường có tác nhân oxi hóa và tác nhân chống oxi hóa

Tiến hành phần tích mẫu nghiên cứu được kết quả như sau

Bảng 3.20 Kết quả phân tích sự phân hủy dược chất trong các môi trường (n=2)

Mẫu Thay đổi màu sắc

DC07 (dung dịch H2O2 5 % -natri metabisulfit)

DC08 (dung dịch H2O2 5 % - vitamin C) Nâu 97,84

DC09 (dung dịch H2O2 5% -EDTA) Nâu 94,79

Thành phần DC06 DC07 DC08 DC09

Dung dịch mesalamin 0,5 mg/ml

Dung dịch H2O2 5% vừa đủ 50 ml 50 ml 50 ml 50 ml

Tác nhân oxi hóa H2O2 5% làm tăng phân hủy dược chất, với hàm lượng dược chất còn 95,82% sau 48 giờ Các chất chống oxi hóa như natri metabisulfit và dinatri EDTA không ngăn chặn sự phân hủy dược chất trong dung dịch H2O2 5% Tuy nhiên, mesalamin cho thấy sự ổn định cao hơn trong dung dịch H2O2 5% khi có mặt acid ascorbic (vitamin C) Trong điều kiện thí nghiệm tương tự, hàm lượng mesalamin trong công thức DC07 (chứa natri metabisulfit) và DC09 (chứa dinatri EDTA) lần lượt đạt 94,37% và 94,79%, trong khi công thức DC08 (chứa acid ascorbic) có hàm lượng lên đến 97,84%.

3.2.2 Kết quả nghiên cứu tương tác dược chất - tá dược

Pha chế các mẫu nghiên cứu như bảng 3.21 và bảo quản ở điều kiện đã trình bày ở mục 2.2.1

Bảng 3.21 Các mẫu nghiên cứu tương tác dược chất, tá dược

STT Thành phần TT01 TT02 TT03 TT04 TT05

2 Celulose vi tinh thể PH101 1 g - - - -

Tiến hành phân tích các mẫu nghiên cứu được kết quả như sau

Bảng 3.22 Kết quả nghiên cứu tương tác dược chất-tá dược

Ban đầu (*) 1 tháng lão hóa cấp tốc 3 tháng lão hóa cấp tốc

(*) Hàm lượng ban đầu là hàm lượng nguyên liệu trong CoA của NSX nguyên liệu

Kết quả phân tích hàm lượng sau 1 tháng và 3 tháng lão hóa cấp tốc cho thấy hàm lượng dược chất ở các mẫu nghiên cứu không thay đổi đáng kể, chứng minh rằng dược chất ổn định và không xảy ra tương tác Điều này cho thấy hàm lượng hoạt chất không bị giảm sau 3 tháng lão hóa cấp tốc, cho phép sử dụng các tá dược này trong công thức pellet mesalamin.

NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG CÔNG THỨC PELLET MESALAMIN GIẢI PHÓNG TẠI ĐẠI TRÀNG

3.3.1 Xây dựng công thức pellet nhân bằng phương pháp đùn - tạo cầu

Nghiên cứu tiền công thức đã chỉ ra rằng các tá dược MCC PH 101, PVP K30 và Aerosil được sử dụng trong thành phần pellet nhân Để khảo sát ảnh hưởng của độ ẩm đến khả năng tạo cầu pellet, các mẫu pellet được bào chế theo công thức với tổng khối lượng pellet nhân chứa 500 mg mesalamin là 1105 mg.

Bảng 3.23 Công thức khảo sát ảnh hưởng của lượng nước đến khả năng tạo cầu của pellet nhân (Tính cho lượng pellet có chứa 500mg mesalamin)

STT THÀNH PHẦN CT1 CT2 CT3 CT4

(*) Bay hơi trong quá trình pha chế

Bài viết tiến hành bào chế pellet từ các công thức CT1, CT2, CT3 và CT4 với khối lượng dược chất và tá dược cho mỗi mẻ 500 g Kết quả đánh giá cho thấy pellet từ CT1 và CT2 có hình dạng trụ tròn không đều, trong khi pellet từ CT3 và CT4 có hình cầu và đều Hiệu suất tạo pellet của CT4 đạt 85%, trong khi CT3 cao hơn với 92,4% Vì vậy, CT3 đã được chọn cho các nghiên cứu tiếp theo.

Tiến hành thử hòa tan CT3 ở điều kiện thử hòa tan cho pellet nhân (900 ml môi trường đệm phosphat pH 6,8) ở mục 2.2.4.3, thu được kết quả như sau

Hình 3.8 % dược chất giải phóng từ pellet nhân sử dụng CT3 (n = 6)

Dược chất giải phóng nhanh chóng trong môi trường hòa tan, với hơn 90% dược chất được giải phóng từ pellet sau 4 giờ và hoàn toàn sau 5 giờ Đặc biệt, pellet vẫn giữ nguyên hình dạng sau khi giải phóng hoàn toàn dược chất.

3.3.2 Xây dựng công thức pellet mesalamin bao giải phóng tại đại tràng

Tiêu chuẩn đánh giá thuốc giải phóng tại đại tràng dựa trên T10 và T80, tương ứng với thời gian giải phóng 10% và 80% lượng dược chất Trong đó, T10 được coi là quan trọng nhất vì nó đại diện cho thời gian tiềm tàng (Tlag) của hệ thống, đặc trưng cho thuốc giải phóng tại đại tràng Nghiên cứu của Sajeev Chandran và cộng sự về % dược chất giải phóng từ vi cầu indomethacin tại đại tràng cho thấy mục tiêu bào chế pellet mesalamin có lớp bao film giải phóng tại đại tràng với T10 từ 4.

6 giờ và T80 nhỏ hơn 16 giờ [85]

3.3.2.1 Nghiên cứu màng bao chỉ chứa zein trong pellet bao giải phóng tại đại tràng

Zein được coi là nguyên liệu tiềm năng trong bào chế viên bao kiểm soát giải phóng, nhưng chưa có nghiên cứu nào sử dụng zein đơn thành phần làm tá dược trong bào chế pellet giải phóng tại đại tràng Nhóm nghiên cứu đã tiến hành bao pellet mesalamin chỉ bằng zein, với mục tiêu pellet sẽ giải phóng tại đại tràng theo cơ chế ăn mòn.

Tiến hành bao pellet sử dụng zein với tỉ lệ các thành phần trong công thức trình bày trong bảng 3.24 cho pellet nhân được bào chế bằng CT3

% ME SA LA MIN G IẢ I P H Ó N G

Bảng 3.24 Công thức dịch bao chỉ chứa zein cho 50 g mẻ pellet nhân mesalamin

Pellet sau khi bao được đánh giá khả năng hòa tan in vitro trong điều kiện 1, bao gồm 2 giờ đầu trong môi trường HCl 0,1 N pH 1,2, tiếp theo là các giờ trong môi trường đệm phosphat pH 6,8 Kết quả thử nghiệm được trình bày ở mục 2.2.4.4.

Hình 3.9 Kết quả thử hòa tan pellet bao film chứa zein (n = 6)

Với bề dày màng bao 20%, dược chất trong pellet bao giải phóng nhanh trong

Trong 2 giờ đầu, khoảng 80% dược chất được giải phóng, vì vậy không thể bào chế pellet với khả năng giải phóng tại đại tràng; thay vào đó, chỉ có thể sử dụng zein làm tá dược để kiểm soát quá trình giải phóng.

3.3.2.2 Nghiên cứu phối hợp zein với các tá dược kiểm soát giải phóng khác trong thành phần lớp bao

Luận án quyết định kết hợp zein với một tá dược kiểm soát giải phóng khác nhằm tăng cường khả năng trì hoãn giải phóng cho pellet bao Zein, khi ion hóa, mang điện tích dương, và khi kết hợp với tá dược có điện tích âm, sẽ tạo ra một màng bao chắc chắn hơn.

% ME SA LA MIN G IẢ I P H Ó N G

• Nghiên cứu ảnh hưởng của loại tá dược kiểm soát giải phóng kết hợp với zein

Tiến hành bao pellet nhân CT3 sử dụng zein kết hợp với một tá dược kiểm soát giải phóng, với tỉ lệ các thành phần được trình bày trong bảng 3.25.

Bảng 3.25 Công thức dịch bao khảo sát ảnh hưởng của loại tá dược KSGP kết hợp với zein cho 50 g mẻ pellet nhân mesalamin

STT Thành phần CT9 CT10 CT11

Trong nghiên cứu, thử hòa tan được thực hiện trong điều kiện 1, bao gồm 2 giờ đầu trong môi trường HCl 0,1 N với pH 1,2, tiếp theo là các giờ sau trong môi trường đệm phosphat với pH 6,8 Kết quả thu được sẽ được trình bày ở mục 2.2.4.4.

Hình 3.10 trình bày kết quả thử nghiệm độ hòa tan của các mẫu pellet được bào chế theo công thức màng bao chứa zein, kết hợp với một polyme kiểm soát giải phóng khác, với số lần thử nghiệm là n = 6.

% M ES A LA M IN G IẢ I PH ÓN G

Kết quả thử nghiệm cho thấy:

Trong quá trình bao, hầu hết các công thức đều được thực hiện một cách dễ dàng theo các thông số đã đề cập trong mục 2.2.2 Kết quả là pellet bao thu được có màu sắc đồng nhất và ít bị dính vào nhau.

Từ đồ thị ta thấy, với cùng bề dày màng bao là 20 %, khả năng kiểm soát giải phóng dược chất của các công thức được chia thành 2 loại:

Loại 1 bao gồm các công thức màng bao: CT9, CT10: Dược chất giải phóng nhanh và gần như hoàn toàn trong 2 giờ đầu

Loại 2: CT11, công thức này có khả năng kiểm soát giải phóng dược chất tốt hơn các công thức ở loại 1 và cho thấy sự phù hợp hơn trong bào chế màng bao giải phóng tại đại tràng: trì hoãn giải phóng tốt hơn trong các giờ đầu (Tlag đạt 4 - 5 giờ) và có dấu hiệu giải phóng nhanh trong các giờ tiếp theo Vì vậy Eudragit S100 được lựa chọn làm tá dược kiểm soát giải phóng kết hợp với zein để tiến hành các nghiên cứu tiếp theo

Nghiên cứu về chất hóa dẻo trong công thức bào chế là rất quan trọng, đặc biệt trong phương pháp bao màng Chất hóa dẻo không chỉ tăng tính mềm dẻo mà còn giảm hiện tượng nứt vỡ, cải thiện khả năng bám dính của màng vào nhân và nâng cao tính thấm của màng Những yếu tố này đều ảnh hưởng trực tiếp đến khả năng kiểm soát giải phóng dược chất của màng bao.

Để chọn loại chất hóa dẻo phù hợp, cần khảo sát ảnh hưởng của nó đến khả năng kiểm soát giải phóng dược chất từ pellet bao.

Tiến hành bao pellet nhân CT3 sử dụng các loại chất hoá dẻo như sau

Bảng 3.26 Công thức dịch bao cho 50g mẻ pellet nhân mesalamin

STT Thành phần CT11 CT12 CT13

XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ SỞ VÀ ĐÁNH GIÁ ĐỘ ỔN ĐỊNH VIÊN

Các mẫu pellet mesalamin giải phóng tại đại tràng được sản xuất theo quy trình bào chế với quy mô mỗi mẻ 2 kg pellet nhân Phương pháp bào chế được thực hiện theo hướng dẫn tại mục 2.2.2.

3 lô Dựa vào kết quả kiểm nghiệm tiêu chuẩn chất lượng, đề xuất tiêu chuẩn cơ sở cho pellet nhân, pellet bao và viên nang mesalamin GPTĐT

Bảng 3.46 Đề xuất tiêu chuẩn chất lượng của pellet nhân

STT CHỈ TIÊU TIÊU CHUẨN

1 Hình thức Pellet hình cầu, màu nâu

2 Định tính Phải thể hiện phép thử định tính mesalamin

3 Độ hòa tan - Môi trường pH 6,8:

+ Sau 1 giờ: ≥ 80 % mesalamin giải phóng

4 Định lượng Hàm lượng mesalamin (C7H7NO3) từ 90 – 110 %

Bảng 3.47 Đề xuất tiêu chuẩn chất lượng của pellet bao

STT CHỈ TIÊU TIÊU CHUẨN

1 Hình thức Pellet hình cầu, màu vàng

2 Định tính Phải thể hiện phép thử định tính mesalamin

3 Độ hòa tan - Môi trường pH 1,2:

+ Sau 2 giờ: < 10 % mesalamin giải phóng

- Môi trường đệm phosphat pH 7,4:

+ Sau 2 giờ ở môi trường đệm phosphat pH 7,4: ≤

+ Sau 6 giờ ở môi trường đệm phosphat pH 6,8: ≥

4 Định lượng Hàm lượng mesalamin (C7H7NO3) từ 90 – 110 %

Bảng 3.48 Đề xuất tiêu chuẩn chất lượng viên nang mesalamin 125 mg GPTĐT

STT CHỈ TIÊU TIÊU CHUẨN

1 Hình thức Viên nang số 0 chứa pellet hình cầu, màu vàng bên trong

2 Độ đồng đều khối lượng viên Giá trị chấp nhận (AV) ≤ 15%

3 Định tính Phải thể hiện phép thử định tính mesalamin

4 Độ hòa tan - Môi trường pH 1,2:

+ Sau 2 giờ: < 10 % mesalamin giải phóng

- Môi trường đệm phosphat pH 7,4:

+ Sau 2 giờ ở môi trường đệm phosphat pH 7,4: ≤

+ Sau 6 giờ ở môi trường đệm phosphat pH 6,8: ≥

5 Định lượng Hàm lượng mesalamin (C7H7NO3) trong viên phải đạt từ 90 – 110 % so với lượng ghi trên nhãn

3.6.2 Đánh giá độ ổn định

Các mẫu viên nang mesalamin được nghiên cứu với ba lô sản phẩm khác nhau, được bào chế theo phương pháp đã nêu trong mục 2.2.2 Mỗi viên nang chứa các pellet được thiết kế đặc biệt để giải phóng hoạt chất tại đại tràng.

Viên mesalamin 125 mg được đóng trong lọ thủy tinh nâu, mỗi lọ chứa 20 viên Sản phẩm cần được bảo quản ở điều kiện phòng thí nghiệm trong 12 tháng và trong điều kiện lão hóa cấp tốc (nhiệt độ 40 ± 2 °C, độ ẩm 75 ± 5%) trong 6 tháng, theo hướng dẫn của Asean.

Do thời gian hạn chế, chúng tôi chỉ theo dõi độ ổn định của thuốc ở điều kiện thường trong 12 tháng Việc theo dõi và lấy mẫu kiểm tra độ ổn định của thuốc sẽ tiếp tục cho đến khi đạt thời gian quy định.

Kết quả khảo sát các chỉ tiêu chất lượng của thuốc được trình bày dưới đây

So với mẫu viên mới, các viên được bảo quản ở điều kiện thường trong 12 tháng và trong điều kiện lão hóa cấp tốc trong 6 tháng không có sự thay đổi về hình thức.

Bảng 3.49 Hàm lượng (%) của 3 lô viên mesalamin giải phóng tại đại tràng ở điều kiện dài hạn sau 12 tháng (n = 6)

Bảng 3.50 Hàm lượng (%) của 3 lô viên mesalamin giải phóng tại đại tràng ở điều kiện lão hóa cấp tốc sau 6 tháng (n = 6)

Kết quả khảo sát cho thấy hàm lượng mesalamin giải phóng tại đại tràng sau 6 tháng bảo quản trong điều kiện lão hóa cấp tốc đã được ghi nhận.

Sau 12 tháng bảo quản ở điều kiện thường, hàm lượng của các mẫu thử nghiệm vẫn nằm trong giới hạn cho phép Các mẫu viên sẽ tiếp tục được theo dõi và lấy mẫu định lượng trong điều kiện thực để đưa ra kết luận về độ ổn định của viên nghiên cứu.

3.6.2.3 Theo dõi độ hòa tan

Kết quả khảo sát cho thấy độ hòa tan của dược chất từ viên mesalamin giải phóng tại đại tràng không thay đổi đáng kể trong các điều kiện bảo quản và thời gian xác định.

Bảng 3.51 % dược chất giải phóng của 3 lô viên mesalamin giải phóng tại đại tràng được bảo quản ở điều kiện thực sau 12 tháng (n = 6)

% mesalamin giải phóng theo thời gian (TB ± SD) pH 1,2 pH 7,4 pH 6,8

2 giờ 1 giờ 2 giờ 3 giờ 2 giờ 4 giờ 6 giờ

Bảng 3.52 % dược chất giải phóng của 3 lô viên mesalamin giải phóng tại đại tràng được bảo quản ở điều kiện lão hóa cấp tốc sau 6 tháng (n = 6)

% mesalamin giải phóng theo thời gian (TB ± SD) pH 1,2 pH 7,4 pH 6,8

2 giờ 1 giờ 2 giờ 3 giờ 2 giờ 4 giờ 6 giờ

3.6.2.4 Tuổi thọ dự đoán bằng phương pháp ngoại suy theo phần mềm Minitab 17

Phân tích dữ liệu độ ổn định và độ hòa tan trong 12 tháng bằng phần mềm Minitab 17 cho thấy các chỉ tiêu định lượng đạt yêu cầu.

Hình 3.23 Ước lượng tuổi thọ với mức chất lượng hàm lượng 90 – 110 %

Biểu đồ trong Hình 3.23 cho thấy đường hồi quy của hàm lượng mesalamin, với mức chất lượng đạt 110% và 90% so với hàm lượng ghi trên nhãn Đường giới hạn tin cậy dưới 95% cắt đường cận dưới mức chất lượng tại thời điểm 32 tháng, trong khi đường giới hạn tin cậy trên không cắt đường cận trên mức chất lượng ở các thời điểm sau đó Hàm lượng dược chất thay đổi trong điều kiện lão hóa và thực tế từ 3 – 4%, do đó tuổi thọ đề xuất là 18 tháng có thể được hỗ trợ bởi phân tích thống kê dữ liệu hàm lượng.

Hình 3.24 Ước lượng tuổi thọ với mức chất lượng độ hòa tan sau 2 giờ ở pH 1,2

Hình 3.24 cho thấy đường hồi quy của độ hòa tan mesalamin sau 2 giờ ở pH 1,2 với mức chất lượng không lớn hơn 5,0 % Đường giới hạn tin cậy không cắt đường cận trên của mức chất lượng tại các thời điểm sau, cho thấy rằng tuổi thọ đề xuất 18 tháng được hỗ trợ bởi phân tích thống kê dữ liệu độ hòa tan.

Hình 3.25 Ước lượng tuổi thọ với mức chất lượng độ hòa tan sau 2 giờ ở điều kiện 30 ºC, độ ẩm 75 %

Biểu đồ 3.25 thể hiện đường hồi quy của độ hòa tan mesalamin sau 2 giờ ở pH 7,4, với tiêu chí chất lượng không vượt quá 10,0% Đường giới hạn tin cậy không cắt ngang đường cận trên của tiêu chuẩn chất lượng tại các thời điểm sau Do đó, tuổi thọ đề xuất là 18 tháng có thể được xác nhận thông qua phân tích thống kê dữ liệu độ hòa tan.

Hình 3.26 Ước lượng tuổi thọ với mức chất lượng độ hòa tan sau 6 giờ trong môi trường pH 6,8 ở điều kiện 30 ºC, độ ẩm 75 %

Biểu đồ đường hồi quy cho thấy độ hòa tan của mesalamin sau 6 giờ trong môi trường pH 6,8 đạt chất lượng không dưới 80% Đường biểu diễn cũng cung cấp giới hạn tin cậy 95% cho giá trị trung bình, cắt ngang mức chất lượng tại thời điểm 26 tháng Do đó, tuổi thọ đề xuất 18 tháng của sản phẩm có thể được xác nhận qua phân tích thống kê dữ liệu độ hòa tan.

Nghiên cứu cho thấy viên nang mesalamin duy trì ổn định trong thời gian bảo quản theo các chỉ tiêu đã nghiên cứu Dựa trên kết quả phân tích bằng phần mềm Minitab 17, tuổi thọ của sản phẩm được đề xuất là 18 tháng.

Các mẫu viên sẽ được theo dõi và lấy mẫu thử độ hòa tan trong điều kiện dài hạn nhằm đánh giá độ ổn định của viên nghiên cứu.

SỰ DỊCH CHUYỂN PELLET IN VIVO TRONG ĐƯỜNG TIÊU HÓA CHÓ BẰNG CHỤP X-QUANG

Thử nghiệm được thực hiện theo mô tả ở mục 2.2.5.1 nhằm xác định sự dịch chuyển của pellet in vivo trong đường tiêu hóa của chó Kết quả hình ảnh X-quang của chó 1 được trình bày trong hình 3.26, trong khi hình ảnh của 4 chó còn lại được cung cấp trong phụ lục 5.

Hình 3.27 Hình ảnh X-quang của chó 1 ở thời điểm (a) sau 2 giờ 20 ở vị trí nằm ngửa, (b) sau 2 giờ 20 ở vị trí nằm nghiêng, (c) sau 4 giờ ở vị trí nằm ngửa, (d) sau

Sau 4 giờ nằm nghiêng, 7 giờ nằm ngửa, 9 giờ nằm ngửa, 9 giờ nằm nghiêng, 11 giờ 30 nằm ngửa và 11 giờ 30 nằm nghiêng, các vị trí nằm có ảnh hưởng đến cơ thể.

Kết quả thử nghiệm in vivo với phương pháp hình ảnh X-quang trên 5 chó cho thấy sau 2 giờ, pellet vẫn nằm ở vị trí dạ dày hoặc phân bố rải rác tại dạ dày và ruột non Hình ảnh của pellet vẫn rõ ràng sau 2 và 4 giờ sau khi uống thuốc, cho thấy màng bao pellet chưa bị mòn nhiều Phần lớn chất cản quang và chất kích quang vẫn còn giữ bên trong nhân pellet, cho thấy khả năng hạn chế giải phóng dược chất ở đoạn đầu đường tiêu hóa.

Sau 7 giờ, pellet di chuyển xuống đại tràng Hình ảnh pellet của chó 3 đã mờ hẳn trong khi hình ảnh pellet vẫn hiện rõ ở chó 1, chó 2, chó 4 và chó 5, chứng tỏ dược chất đã giải phóng gần như hoàn toàn ở đại tràng của chó 3 và giải phóng chỉ một phần ở các chó còn lại sau thời điểm này

Sau 9 giờ, hình ảnh pellet ở vị trí đại tràng của chó 1, chó 2, chó 4 và chó 5 mờ hơn so với thời điểm 7 giờ do màng bao pellet bị mòn dần, giải phóng bari sulfat và chất kích quang bên trong nhân ra ngoài môi trường dịch ruột chó

Sau 11 giờ, hình ảnh pellet đã mờ hẳn ở chó 1, chó 2 và chó 5, chứng tỏ màng bao pellet đã bị phá hủy và giải phóng phần lớn dược chất từ nhân ra ngoài môi trường dịch đại tràng chó Hình ảnh x-quang chó 4 vẫn còn phát hiện, tuy nhiên hình ảnh khá mờ và ít so với các thời điểm trước Sau 16 giờ, hình ảnh pellet đã mờ hẳn ở chó 4

Kết quả thử nghiệm trên 5 chú chó cho thấy, tại cùng một thời điểm, pellet xuất hiện ở các vị trí khác nhau trên từng cá thể Pellet có khả năng hạn chế giải phóng dược chất trong phần đầu đường tiêu hóa Hình ảnh pellet được ghi nhận rõ ràng sau 4 giờ kể từ khi chó uống thuốc Đặc biệt, dược chất chủ yếu được giải phóng ở đại tràng, với hình ảnh pellet mờ đi sau 9, 11 hoặc 16 giờ sau khi uống thuốc.

3.8 NGHIÊN CỨU SỰ HẤP THU DƯỢC CHẤT TRÊN CHÓ THÍ NGHIỆM

Nghiên cứu được thực hiện trên 05 chó thí nghiệm, mỗi chó được cho uống thuốc theo trình tự đã nêu ở mục 2.2.5.2 Máu được lấy theo phương pháp ghi ở mục 2.2.5.2, và các mẫu huyết tương sau đó được phân tích theo phương pháp đã được thẩm định ở mục 2.2.4.1 Kết quả cho thấy nồng độ mesalamin trong các mẫu huyết tương của chó.

Hình 3.28 Nồng độ mesalamin trong huyết tương khi cho chó uống pellet nhân và pellet GPTĐT chứa khoảng 500 mg mesalamin (n = 5)

Kết quả nghiên cứu cho thấy, chó uống pellet nhân đạt nồng độ mesalamin trong huyết tương cao hơn và nhanh hơn so với chó uống pellet giải phóng tại đại tràng, với nồng độ đỉnh xuất hiện sau khoảng 2 giờ và sau đó giảm dần.

Pellet mesalamin giải phóng hoàn toàn mesalamin trong vòng 24 giờ ở dạ dày hoặc ruột non Tuy nhiên, khi chó uống pellet mesalamin GPTĐT, nồng độ mesalamin trong huyết tương rất thấp sau 2 giờ Thuốc đạt cực đại hấp thu khoảng 9 giờ khi ở đại tràng, cho thấy pellet GPTĐT hạn chế giải phóng mesalamin trong 4 giờ đầu ở dạ dày và ruột non, nhưng giải phóng nhiều hơn và đạt cực đại hấp thu tại đại tràng.

• Mô phỏng sự hấp thu mesalamin trong đường tiêu hóa chó bằng mô hình dược động học sinh lý

Kết quả khớp mô hình dược động học sinh lý in vitro và in vivo cho pellet nhân và pellet bao giải phóng tại đại tràng bằng phần mềm GastroPlus TM cho thấy hiệu quả rõ rệt trong việc tối ưu hóa quá trình giải phóng thuốc.

+ Thông số dược động học thực tế và dự đoán từ mô hình

Thời gian (giờ) Đường cong trung bình nồng độ - thời gian (n

Bảng 3.53 Giá trị thông số dược động học thực tế và dự đoán bằng GastroPlus TM của pellet nhân

Thông số Giá trị thực tế Giá trị dự đoán

AUC 0 – inf (ng/ml.giờ) 1,036 x 10 5 1,178 x 10 5

Hình 3.29 Đồ thị nồng độ thuốc trong huyết tương thực tế và dự đoán theo mô hình dược động học sinh lý của pellet nhân

Kết quả từ bảng 3.53 và hình 3.28 cho thấy mô hình có giá trị R² cao (0,96) và AIC thấp (21,11), chứng minh rằng mô hình mô tả chính xác dữ liệu thực nghiệm Các giá trị Cmax, Tmax, AUC0-inf, và AUC0-t thực tế lần lượt là 2,243 x 10⁴; 2; 1,036 x 10⁵; 1,031 x 10⁵, gần giống với các giá trị dự đoán của mô hình là 2,42 x 10⁴; 1,92; 1,178 x 10⁵; 1,175 x 10⁵.

+ Dữ liệu hấp thu theo từng đoạn đường tiêu hóa chó

Hình 3.30 Tỷ lệ thuốc hấp thu ở các đoạn khác nhau của đường tiêu hoá của pellet nhân

Hình 3.29 cho thấy tỷ lệ hấp thu mesalamin ở các đoạn khác nhau trong đường tiêu hóa chó khi sử dụng phương pháp uống, theo mô hình dược động học sinh lý từ phần mềm GastroPlus TM Tổng lượng mesalamin hấp thu vào máu đạt 67,9%, với dạ dày không hấp thu, tá tràng 8,3%, hỗng tràng 40,3% (hỗng tràng 1: 28,2%, hỗng tràng 2: 12,1%), hồi tràng 0,6% (hồi tràng 1: 0,2%, hồi tràng 2: 0,2%, hồi tràng 3: 0,2%), manh tràng 4,9% và đại tràng 13,8% Sự hấp thu mesalamin ở đại tràng cao hơn hồi tràng do thời gian lưu thuốc tại đại tràng lâu hơn Lưu ý rằng % hấp thu trên đồ thị chỉ có giá trị so sánh giữa các đoạn khác nhau của đường tiêu hóa vì không có thuốc tiêm tĩnh mạch làm đối chiếu.

- Pellet mesalamin giải phóng tại đại tràng

+ Thông số dược động học thực tế và dự đoán từ mô hình

Bảng 3.54 Thông số dược động học thực tế và dự đoán bằng GastroPlus TM của pellet mesalamin GPTĐT

Thông số Giá trị thực tế Giá trị dự đoán

AUC 0 – inf (ng/ml.giờ) 6,886 x 10 4 6,765x10 4

Hình 3.31 Đồ thị nồng độ thuốc trong huyết tương thực tế và dự đoán theo mô hình sinh lý của pellet GPTĐT

Kết quả từ bảng 3.54 và hình 3.30 cho thấy các thông số dược động học giữa giá trị thực tế và giá trị dự đoán mô tả đầy đủ quá trình hấp thu và phân hủy của mesalamin trong huyết tương Mô hình đạt giá trị R² lớn là 0,92 và AIC nhỏ là -15,81, chứng tỏ mô hình mô tả chính xác số liệu thực nghiệm Giá trị Cmax và AUC dự đoán tương đồng với giá trị thực tế, trong khi Tmax dự đoán là 12,8 giờ, cao hơn so với Tmax thực tế là 9 giờ Tuy nhiên, sự khác biệt này trong Tmax không có ý nghĩa điều trị lớn, vì vậy mô hình được chấp nhận.

+ Tỷ lệ dược chất hấp thu ở các đoạn đường tiêu hóa

Hình 3.32 Tỷ lệ thuốc hấp thu ở các đoạn khác nhau của đường tiêu hoá của pellet

Hình 3.31 cho thấy tỷ lệ phân bố hấp thu mesalamin từ pellet GPTĐT trong đường tiêu hóa chó qua mô hình dược động học sinh lý bằng phần mềm GastroPlus TM Tổng lượng mesalamin hấp thu vào máu đạt 39,0%, với dạ dày và tá tràng không có sự hấp thu, hỗng tràng chỉ đạt 1,4%, hồi tràng 0,1%, manh tràng 12,1% và đại tràng 25,5% Mặc dù không có thuốc tiêm tĩnh mạch làm đối chiếu, dữ liệu này cho phép so sánh tỷ lệ hấp thu giữa các đoạn khác nhau của đường tiêu hóa Kết quả từ GastroPlus TM chỉ ra rằng mesalamin hấp thu kém ở dạ dày và ruột non, nhưng lại được hấp thu nhiều hơn ở đại tràng, nơi pellet GPTĐT giải phóng phần lớn mesalamin.

4 CHƯƠNG 4 BÀN LUẬN 4.1 NGHIÊN CỨU CÔNG THỨC PELLET MESALAMIN GIẢI PHÓNG TẠI ĐẠI TRÀNG

4.1.1 Nghiên cứu tiền công thức

NÂNG CẤP QUY MÔ

Khi nâng cấp quy mô sản xuất pellet lên 2,2 kg mỗi mẻ và 2 kg mỗi bao, quy trình bào chế được tối ưu hóa để giảm thiểu các công đoạn thủ công Tất cả các giai đoạn trong quy trình đều được thực hiện bằng máy móc, giúp kiểm soát chặt chẽ các thông số quá trình Điều này đảm bảo chất lượng pellet đồng đều cả trong từng lô sản xuất và giữa các lô khác nhau.

Công đoạn trộn khô đóng vai trò quan trọng trong việc đảm bảo sự phân tán đồng đều của các thành phần trong khối bột Thời gian và tốc độ trộn có ảnh hưởng lớn đến chất lượng sản phẩm Trong nghiên cứu, quá trình trộn nguyên liệu được thực hiện trên máy trộn siêu tốc với thời gian trộn là 10 phút, nhằm nâng cấp cỡ lô và tối ưu hóa sự đồng nhất của hỗn hợp.

Công đoạn trộn bột ướt rất quan trọng, trong đó thời gian và tốc độ trộn đóng vai trò quyết định đến sự phân tán hàm lượng và độ đồng đều của độ ẩm trong khối bột Luận án đã xác định thời gian trộn là 10 phút và tốc độ trộn 25 Hz, nhằm đảm bảo bột sau khi trộn đạt được sự đồng đều về hàm lượng và độ ẩm.

Công đoạn rây là bước quan trọng trong quy trình chế biến bột, sử dụng máy xát hạt với lỗ rây kích thước 5 mm để phá vỡ các khối bột ẩm dính lại Nếu chọn rây có kích thước nhỏ hơn, bột ẩm sẽ hình thành các sợi dính, làm giảm hiệu quả tơi xốp của bột Do đó, việc lựa chọn kích thước rây phù hợp là cần thiết để đảm bảo chất lượng sản phẩm cuối cùng.

Công đoạn ủ bột đóng vai trò quan trọng trong việc đảm bảo độ ẩm đồng đều và độ dẻo của bột, thuận lợi cho quá trình vo tròn pellet Đối với sản phẩm nhạy cảm như mesalamin, thời gian ủ bột nên được kiểm soát, chỉ cần khoảng 1 giờ để duy trì hàm lượng dược chất Độ ẩm của khối bột ảnh hưởng lớn đến quá trình đùn và vo; nếu độ ẩm quá thấp, pellet sẽ có hình dạng không đạt yêu cầu, trong khi độ ẩm quá cao sẽ gây dính, giảm hiệu suất Để đảm bảo khối ẩm pellet nhân mesalamin trong khoảng 30 – 35%, cần kiểm soát thời gian của các công đoạn trộn bột ướt và rây, tránh làm dung môi bốc hơi và giảm chất lượng pellet.

Tốc độ đùn đóng vai trò quan trọng trong việc xác định độ cứng của pellet; nếu tốc độ quá cao, pellet sẽ cứng và ảnh hưởng đến khả năng hòa tan dược chất, trong khi tốc độ quá thấp có thể dẫn đến pellet mềm và không đồng đều Theo kinh nghiệm sản xuất tại công ty, tốc độ đùn lý tưởng là 80 vòng/phút, giúp đảm bảo quá trình vo tròn pellet đồng đều hơn.

Công đoạn vo có ảnh hưởng lớn đến hình dạng và sự đồng đều của pellet, với khối lượng bột vo mỗi lần, tốc độ và thời gian vo là những yếu tố quan trọng Thực nghiệm cho thấy khối lượng bột ướt mỗi lần vo tối ưu là 200 g và thời gian vo là 1,5 phút.

Công đoạn bao được thực hiện trên thiết bị bao tầng sôi, trong đó nhiều yếu tố ảnh hưởng đến quá trình bao pellet Nghiên cứu cho thấy khi nâng quy mô lên 2 kg pellet nhân mỗi mẻ bao, hiệu suất bao cao hơn so với quy mô nhỏ 240 g/mẻ Điều này chứng tỏ thiết bị bao tầng sôi Qui Long của công ty Bidiphar phù hợp hơn cho các mẻ bao lớn.

Kết quả nghiên cứu cho thấy độ hòa tan, T10 và độ đồng đều khối lượng viên trong một lô và giữa các lô đều khá đồng đều Điều này cho phép khẳng định quy trình sản xuất viên nang mesalamin giải phóng tại đại tràng bằng phương pháp đùn – tạo cầu và bao tầng sôi có đặc điểm thuận lợi cho sản xuất quy mô công nghiệp Tuy nhiên, khi sản xuất quy mô lớn hơn, các thông số quy trình cần được điều chỉnh phù hợp với thiết bị.

TIÊU CHUẨN CƠ SỞ VÀ ĐỘ ỔN ĐỊNH

4.3.1 Tiêu chuẩn cơ sở viên mesalamin giải phóng tại đại tràng

Do chưa có chuyên luận về thuốc giải phóng tại đại tràng trong các dược điển và không có thuốc mesalamin để đối chiếu, tiêu chuẩn cho viên mesalamin được xây dựng dựa trên tài liệu nghiên cứu và kết quả thực nghiệm Tiêu chuẩn chất lượng cho pellet bao mesalamin giải phóng tại đại tràng bao gồm các chỉ tiêu như hình thức, độ đồng đều khối lượng, định tính, độ hòa tan và định lượng Các phương pháp được đề xuất có độ chính xác cao và dễ áp dụng trong điều kiện thực tế tại Việt Nam.

4.3.2 Độ ổn định pellet mesalamin giải phóng tại đại tràng

Nghiên cứu cho thấy mesalamin là hoạt chất phân hủy nhanh trong môi trường kiềm mạnh và chậm hơn trong dung dịch nước, nhưng ổn định trong môi trường acid mạnh Dược chất này không bền dưới ánh sáng UV, mặc dù sự phân hủy dưới tác động của UV diễn ra chậm hơn so với môi trường kiềm và tác nhân oxi hóa Các chất chống oxi hóa như natri metabisulfite và EDTA không làm giảm tác động của oxi hóa, trong khi acid ascorbic lại giúp dược chất ổn định hơn khi có mặt H2O2 5%.

Để ngăn ngừa phản ứng phân hủy, cần áp dụng các biện pháp như không sử dụng tá dược có tính kiềm mạnh, kiểm soát thời gian thực hiện trong các công đoạn ẩm ướt như trộn bột ướt, ủ bột và đùn-vo, cũng như kiểm soát độ ẩm của pellet nhân và pellet sau khi bao film Thêm vào đó, sản phẩm cuối cùng nên được đóng gói trong lọ thủy tinh nâu kín để hạn chế sự khuếch tán độ ẩm từ môi trường và tránh ánh sáng tác động trực tiếp vào sản phẩm.

• Đánh giá độ ổn định

Nghiên cứu độ ổn định của viên mesalamin giải phóng tại đại tràng nhằm đánh giá sự thay đổi chất lượng thuốc dưới tác động của các yếu tố môi trường như nhiệt độ, độ ẩm, ánh sáng, cũng như các yếu tố thuộc về chế phẩm thuốc Các chỉ tiêu được tập trung nghiên cứu bao gồm hình thức, độ đồng đều khối lượng, định tính, định lượng và độ hòa tan dược chất, vì nó liên quan trực tiếp đến hiệu quả điều trị Kết quả ban đầu cho thấy viên nghiên cứu đạt yêu cầu chất lượng sau 12 tháng bảo quản ở điều kiện thực và 6 tháng ở điều kiện lão hóa cấp tốc Tuy nhiên, để có kết luận chính xác về tuổi thọ của thuốc, cần theo dõi trong thời gian dài hơn Luận án gặp khó khăn trong việc đánh giá tạp phân hủy do hạn chế về kinh phí, và độ ổn định dài hạn chỉ được theo dõi ở điều kiện phòng thí nghiệm, dẫn đến giá trị dự đoán độ ổn định mang tính tương đối.

ĐÁNH GIÁ IN VITRO VÀ IN VIVO

Hiện nay, chưa có sự thống nhất về điều kiện thử hòa tan cho thuốc uống giải phóng tại đại tràng, vì vậy việc xây dựng các điều kiện hòa tan phù hợp là cần thiết để phản ánh chính xác sự vận chuyển của thuốc trong đường tiêu hóa Luận án đã tiến hành thử hòa tan với hai điều kiện khác nhau để xác định sự giải phóng thuốc, trong đó điều kiện pH ảnh hưởng lớn đến kết quả thử nghiệm in vitro do polyme sử dụng có độ tan phụ thuộc vào pH Mô hình in vitro được lựa chọn là điều kiện 2 (môi trường pH 1,2 trong 2 giờ, pH 7,4 trong 3 giờ tiếp theo và pH 6,8 trong các giờ còn lại) nhằm tối ưu hóa công thức pellet mesalamin Kết quả cho thấy thuốc nghiên cứu đạt T10 hơn 4 giờ và T80 khoảng 9 giờ.

4.4.2 Đánh giá sự dịch chuyển thuốc in vivo trong đường tiêu hóa chó

Có nhiều phương pháp xác định vị trí giải phóng thuốc tại đại tràng trong đường tiêu hóa, bao gồm xạ hình gamma với các chất đánh dấu phóng xạ như Tc-99m-DTPA, và các phương pháp hình ảnh như MRI và X-quang Nghiên cứu của S P Sawarkar (2019) cho thấy Tc-99m-DTPA được sử dụng trong viên nhân mesalamin, cho kết quả chính xác nhưng tốn kém do yêu cầu sử dụng chất đánh dấu phóng xạ Sarah Sulaiman (2022) áp dụng MRI để theo dõi viên nang HPMC, cho hình ảnh rõ nét về vị trí thuốc trong đường tiêu hóa, nhưng chi phí thực hiện vẫn cao Veerpal (2020) sử dụng bari sulfat trong X-quang để xác định vị trí thuốc và Tlag, đồng thời kết hợp với dung dịch Xenetix để cải thiện độ rõ nét và độ tin cậy của hình ảnh.

Nghiên cứu của Tung và cộng sự (2020) đã thành công trong việc đánh giá sự di chuyển của viên berberin clorid trong đường tiêu hóa của người tình nguyện Kết quả chụp X-quang cho thấy pellet mesalamin bao film chứa chất cản quang rõ nét ở phần trên đường tiêu hóa, sau đó mờ dần khi thuốc di chuyển xuống đại tràng do màng bao bị ăn mòn So với phương pháp đồng vị phóng xạ hoặc MRI, chụp X-quang cho hình ảnh không rõ nét bằng, do thuốc dễ bị lẫn với các tạp phẩm trong đại tràng Nghiên cứu chỉ sử dụng 5 chó, dẫn đến hạn chế về ý nghĩa thống kê, chưa thể khẳng định rõ về Tlag và vị trí giải phóng thuốc tại đại tràng Tuy nhiên, hình ảnh thu được cho thấy pellet mesalamin hạn chế giải phóng ở đoạn trên đường tiêu hóa và chủ yếu giải phóng tại vị trí đại tràng.

4.4.3 Đánh giá sự hấp thu thuốc in vivo trên chó

Hầu hết các dạng bào chế của mesalamin đang được nghiên cứu và phát triển, với sự tập trung vào việc khảo sát sự hấp thu thuốc in vivo qua các thí nghiệm trên động vật như chuột, chó và thỏ Bên cạnh đó, cũng có một số nghiên cứu được thực hiện trên người tình nguyện để đánh giá hiệu quả của thuốc.

Động vật thí nghiệm như chuột, thỏ và chó thường được sử dụng để nghiên cứu sự hấp thụ thuốc từ các chế phẩm chứa mesalamin, với số lượng thay đổi tùy theo mục đích nghiên cứu Trong số đó, chó được xem là mô hình phù hợp nhất cho nghiên cứu in vivo do có hệ tiêu hóa tương tự con người Mặc dù điều kiện nghiên cứu in vivo còn hạn chế và số lượng mẫu máu lớn, nhưng đã có một số kết quả ban đầu về khả năng hấp thụ của pellet mesalamin bao giải phóng tại đại tràng, giúp xác thực kết quả in vitro và đánh giá sinh khả dụng của thuốc trong các nghiên cứu sau.

Trong các nghiên cứu đánh giá in vivo được trích dẫn trong luận án, chỉ có hoạt chất gốc mesalamin trong huyết tương được định lượng Việc định lượng chất chuyển hóa chính N-acetyl-5-aminosalicylic acid của mesalamin không thực hiện được do thiếu chất chuẩn, vì nó đắt và khó mua Do đó, mesalamin trong huyết tương được xác định bằng phương pháp LC-MS/MS.

• Phương pháp định lượng mesalamin trong huyết tương

Mesalamin có tính phân cực và lưỡng tính, khiến cho việc chiết xuất và phân tích nó từ huyết tương trở nên phức tạp Để định lượng mesalamin trong huyết tương, nhiều phương pháp đã được áp dụng, trong đó phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) với detector UV và HPLC với detector huỳnh quang là những kỹ thuật phổ biến.

Phương pháp sắc ký lỏng khối phổ (LC-MS/MS) đã chứng minh quy trình xử lý mẫu nhanh chóng và đơn giản, vượt trội hơn so với các phương pháp truyền thống như HPLC với detector điện hóa, thường yêu cầu bước tạo dẫn xuất phức tạp và tốn thời gian Nghiên cứu trong luận án đã chỉ ra rằng LC-MS/MS khắc phục được những hạn chế của các nghiên cứu định lượng mesalamin trước đây, như yêu cầu thể tích mẫu lớn (≥ 100 µL) và ảnh hưởng của nền mẫu lớn (≥ 30%).

Phương pháp sắc ký lỏng kết hợp khối phổ (LC-MS/MS) đã được thẩm định để định lượng mesalamin trong huyết tương chó, sử dụng chuẩn nội diazepam theo hướng dẫn của US-FDA Các chỉ tiêu thẩm định bao gồm độ đặc hiệu, giới hạn định lượng dưới 50 ng/mL, độ chính xác cao (85% đến 115%), và độ lặp lại với CV% nhỏ hơn 15% Phương pháp này cho thấy khoảng tuyến tính rộng từ 50 đến 30,000 ng/mL và có thể được áp dụng trong nghiên cứu hấp thu và tương đương sinh học của thuốc chứa mesalamin.

• Nghiên cứu hấp thu mesalamin in vivo trên mô hình chó thí nghiệm

Nghiên cứu hấp thu in vivo của pellet mesalamin GPTĐT được thực hiện trên chó, nhằm đánh giá khả năng hấp thu dược chất Do không có viên đối chứng dạng bào chế giải phóng tại đại tràng cho mesalamin, luận án đã tiến hành so sánh sự hấp thu giữa pellet mesalamin nhân và pellet mesalamin GPTĐT trên cùng một cá thể chó.

Nghiên cứu về hấp thu mesalamin cho thấy thời gian đạt nồng độ cực đại (Tmax) của chó uống pellet nhân diễn ra nhanh chóng hơn so với chó uống pellet giải phóng tại đại tràng (GPTĐT), với Tmax của pellet nhân tương ứng với dạ dày hoặc ruột non, trong khi Tmax của pellet GPTĐT lại ở đại tràng Điều này chỉ ra rằng pellet nhân giải phóng hoàn toàn tại vị trí đầu đường tiêu hóa, dẫn đến nồng độ tối đa (Cmax) cao hơn, cho thấy dược chất hấp thu tốt hơn ở đoạn đầu Ngược lại, pellet GPTĐT hạn chế giải phóng ở đoạn đầu và chủ yếu giải phóng mesalamin ở đại tràng, với chỉ một lượng nhỏ mesalamin được hấp thu vào máu sau 4 giờ Các nghiên cứu trên mô hình chuột và thỏ cũng xác nhận rằng pellet GPTĐT có Tmax và Cmax thấp hơn so với pellet nhân, chứng minh hiệu quả giải phóng thuốc tại đại tràng.

Mesalamin nhanh chóng bị acetyl hóa tại ruột và gan, tạo thành acid N-acetyl-5-aminosalicylic (Ac-5-ASA) Để chứng minh rằng dược chất ít bị giải phóng ở đoạn trên đường tiêu hóa, một số nghiên cứu đã định lượng Ac-5-ASA trong huyết tương Y Karrout và cộng sự (2015) đã phân tích nồng độ Ac-5-ASA trong huyết tương của ba nhóm chuột thí nghiệm uống mesalamin với liều 150 mg/kg/ngày Kết quả cho thấy nồng độ Ac-5-ASA ở nhóm chuột uống pellet mesalamin bao bằng nutriose:EC và tinh bột đậu:EC rất thấp so với nhóm uống pellet Pentasa, chứng minh rằng pellet bao giải phóng tại đại tràng hạn chế giải phóng hoạt chất ở đoạn trên đường tiêu hóa A Foppoli và cộng sự (2019) cũng đã thực hiện nghiên cứu trên người tình nguyện để xác nhận dạng bào chế hạn chế giải phóng ở dạ dày và ruột non Để đánh giá tác dụng kháng viêm tại chỗ của thuốc, một số nghiên cứu đã gây viêm đường tiêu hóa ở động vật thí nghiệm và đánh giá khả năng giảm viêm của mesalamin tại đại tràng Nghiên cứu của Y Karrout cho thấy chuột bị viêm đại tràng sau khi uống pellet giải phóng tại đại tràng có sự hồi phục tổn thương mô rõ rệt.

Do hạn chế về thời gian và kinh phí trong nghiên cứu, luận án đã áp dụng phương pháp định lượng nồng độ mesalamin trong huyết tương chó kết hợp với hình ảnh X-quang để chứng minh khả năng hạn chế giải phóng mesalamin ở đoạn trên đường tiêu hóa và chủ yếu tại đại tràng Mặc dù số lượng chó thử nghiệm chỉ có 5, dẫn đến hạn chế về mức ý nghĩa thống kê, nhưng những kết quả ban đầu đã cho thấy pellet mesalamin được nghiên cứu có khả năng giải phóng mesalamin đáp ứng mục tiêu của dạng bào chế giải phóng tại đại tràng.

Dạng bào chế thuốc giải phóng tại đại tràng theo cơ chế phụ thuộc pH khó thương mại hóa trên thị trường do đặc điểm pH đường tiêu hóa người khác nhau ở mỗi cá thể và phụ thuộc nhiều yếu tố như tình trạng bệnh, thuốc sử dụng, thức ăn, … Trên thị trường, sản phẩm Asacol ® 400 mg đã được chứng minh giải phóng tại đại tràng trong các thử nghiệm độ hòa tan in vitro [69] Thử nghiệm in vivo trên người cũng cho thấy Asacol ® 400 mg trì hoãn giải phóng cho đến khi thuốc đến đoạn cuối hồi tràng và các đoạn đường tiêu hóa sau đó Khoảng 28 % mesalamin trong viên Asacol ® 400 mg hấp thu sau khi uống, phần còn lại có tác dụng tại đại tràng và được thải ra theo phân

NHỮNG ĐÓNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN

Luận án đã xây dựng được công thức và quy trình bào chế pellet mesalamin giải phóng tại đại tràng gồm nhân và màng bao kiểm soát giải phóng Pellet nhân có chứa natri starch glycolat là một tá dược siêu rã, giúp nhân thuốc trương nở, phá vỡ lớp màng bao bên ngoài và giải phóng nhanh dược chất bên trong sau thời gian tiềm tàng Tlag Màng bao pellet đã kết hợp được các polyme Eudragit S100 tan ở pH > 7, EC không tan trong nước và zein trong thành phần màng bao giải phóng tại đại tràng Pellet giải phóng tại đại tràng có Tlag hơn 4 giờ và T80 khoảng