Tiếp tục nghiên cứu bào chế và đánh giá vi cầu leuprolid acetat giải phóng kéo dài

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ NGỌC MINH TIẾP TỤC NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VÀ ĐÁNH GIÁ VI CẦU LEUPROLID ACETAT GIẢI PHÓNG KÉO DÀI KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2021 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ NGỌC MINH MÃ SINH VIÊN: 1601513 TIẾP TỤC NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VÀ ĐÁNH GIÁ VI CẦU LEUPROLID ACETAT GIẢI PHÓNG KÉO DÀI KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn TS Trần Hải Yến DS Phạm Quốc Doanh Nơi thực Bộ môn Bào chế Viện CNDPQG HÀ NỘI – 2021 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến: TS Trần Thị Hải Yến Đã quan tâm, bảo hết lòng giúp đỡ tạo điều kiện cho em từ ngày đầu nghiên cứu suốt q trình thực khóa luận Em xin bày tỏ lòng biết ơn đến DS Phạm Quốc Doanh – người hết lòng giúp đỡ tạo điều kiện cho em thực đề tài Em xin chân thành cảm ơn quý thầy cô, anh chị kĩ thuật viên Bộ môn Bào chế nhiều Bộ môn trường quan tâm, giúp đỡ tạo điều kiện để em hồn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn quý thầy cô Ban Giám hiệu nhà trường, phòng ban cán nhân viên trường Đại học Dược Hà Nội, người tạo điều kiện cho em học tập tiếp thu kiến thức suốt năm qua Cuối cùng, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè, tập thể sinh viên đồng hành, giúp đỡ em suốt q trình thực tập hồn thành khóa luận Hà Nội, ngày 03 tháng 06 năm 2021 Sinh viên Nguyễn Thị Ngọc Minh MỤC LỤC MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Leuprolid acetat .2 1.1.1 Cơng thức hóa học 1.1.2 Tính chất vật lý, hóa học .2 1.1.3 Ứng dụng điều trị 1.2 Tổng quan vi cầu PLGA-LA .3 1.2.1 Phương pháp bào chế vi cầu nhũ hóa kép kết hợp bốc dung môi 1.2.2 Một số yếu tố ảnh hưởng đến hiệu suất vi cầu hóa 1.2.3 Q trình giải phóng thuốc từ vi cầu PLGA 1.2.4 Một số yếu tố ảnh hưởng đến khả giải phóng dược chất invitro 1.2.5 Đánh giá giải phóng dược chất invitro từ vi cầu giải phóng kéo dài điều kiện cấp tốc: 13 CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 16 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị sử dụng 16 2.1.1 Nguyên vật liệu 16 2.1.2 Thiết bị 17 2.2 Nội dung nghiên cứu 17 2.3 Phương pháp nghiên cứu .18 2.3.1 Phương pháp bào chế vi cầu PLGA 18 2.3.2 Phương pháp đánh giá vi cầu PLGA 19 2.3.3 Phương pháp định lượng leuprolide acetat HPLC 21 2.3.4 Phương pháp nhiệt quét vi sai (DSC) 22 2.3.5 Phương pháp phổ hồng ngoại FTIR 22 2.3.6 Phương pháp định lượng leuprolide acetat mơi trường giải phóng máy đo cường độ huỳnh quang 23 2.3.7 Phương pháp thử giải phóng invitro điều kiện cấp tốc 23 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 25 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 3.1 Phân tích nhiệt quét vi sai (DSC) 25 3.2 Ảnh hưởng công thức bào chế đến đặc tính khả giải phóng .26 3.2.1 Khảo sát nồng độ polyme pha dầu 26 3.2.2 Khảo sát nồng độ dược chất pha nước nội 28 3.2.3 Khảo sát nồng độ % PVA pha nước ngoại 30 3.2.4 Khảo sát tỉ lệ PLGA pha dầu 32 3.2.5 Khảo sát ảnh hưởng muối kiềm tan MgCO3 pha dầu 36 3.3 Kết đánh giá số đặc tính vi cầu PLGA-LA 40 3.3.1 Hình thức 40 3.3.2 Hình thái, KTTP vi cầu 40 3.3.3 Khả nạp dược chất .41 3.3.4 Hình thái bề mặt vi cầu 41 3.3.5 Khả giải phóng .41 3.3.6 Phổ hồng ngoại FTIR 42 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Tên đầy đủ Tên viết tắt DCM Dicloromethan Dung môi hữu DMHC EE% Entrapment Efficiency % Hiệu suất vi cầu hóa dược chất Dược chất DC PTLT Phân tử lượng thấp PTLC Phân tử lượng cao LA/GA Lactic acid/Glycolic acid KTTP Kích thước tiểu phân LA Leuprolid acetat LClt % Hàm lượng phần trăm dược chất vi cầu lý thuyết LCtt% Hàm lượng phần trăm dược chất vi cầu thực tế Nước/Dầu N/D Nước/Dầu/Nước N/D/N NT1 Nhũ tương NT2 Nhũ tương PLGA Poly acid lactic-co-glycolic PLGA-LA Vi cầu PLGA chứa dược chất leuprolid acetat kl/kl Khối lượng/ khối lượng PVA Poly vinyl alcohol HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao (High-performance liquid chromatography) DSC Phân tích nhiệt quét vi sai (Differential scanning calorimetry) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Nguyên liệu sử dụng nghiên cứu 16 Bảng 2.2 Thiết bị sử dụng nghiên cứu 17 Bảng 2.3 Thông số kỹ thuật sử dụng quy trình bào chế nghiên cứu 18 Bảng 3.1 Thành phần bào chế vi cầu với nồng độ polyme khác 26 Bảng 3.2 Thành phần bào chế vi cầu PLGA-LA 28 Bảng 3.3 Thành phần bào chế vi cầu với nồng độ % PVA 30 Bảng 3.4 Ảnh hưởng nồng độ % PVA pha ngoại đến đặc tính vi cầu 31 Bảng 3.5 Thành phần bào chế vi cầu với tỉ lệ polyme khác (1) 32 Bảng 3.6 Ảnh hưởng tỉ lệ PLGA 5-20kDa 24-38kDa đến 32 Bảng 3.7 Thành phần bào chế vi cầu với tỉ lệ polyme khác (2) 34 Bảng 3.8 Ảnh hưởng tỉ lệ PLGA 7-17kDa 24-38kDa đến 34 Bảng 3.9 Thành phần bào chế vi cầu với tỉ lệ polyme khác (3) 35 Bảng 3.10 Ảnh hưởng tỉ lệ PLGA 7-17kDa 5-20kDa đến 35 Bảng 3.11 Thành phần bào chế vi cầu với lượng MgCO3 37 Bảng 3.12 Ảnh hưởng MgCO3 cơng thức đến đặc tính vi cầu .37 Bảng 3.13 Thành phần bào chế vi cầu 40 Bảng 3.14 Kích thước vi cầu PLGA-LA 40 Bảng 3.15 Khả nạp dược chất PLGA-LA 41 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Công thức phân tử leuprolid acetat Hình 1.2 Phương pháp nhũ hóa kép kết hợp bốc dung mơi .4 Hình 1.3 Sự phân tán kết tụ giọt nhũ tương liền kề Hình 1.4 Các chế liên quan đến giải phóng thuốc .8 Hình 1.5 Khả giải phóng loại polyme khác 11 Hình 1.6 Đồ thị giải phóng leuprolide acetat điều kiện thực điều kiện cấp tốc sử dụng màng thẩm tích mơi trường 0.1M PBS pH 7.4 [50] 14 Hình 3.1 Phổ nhiệt quét vi sai của: vi cầu PLGA-LA (A), PLGA 24-38kDa (B), PLGA 5-20kDa (C), PLGA 7-14kDa (D) 26 Hình 3.2 Ảnh hưởng nồng độ polyme đến 27 Hình 3.3 Ảnh hưởng nồng độ polyme đến khả giải phóng 27 Hình 3.4 Ảnh hưởng nồng độ dược chất pha nước nội đến KTTP, .29 Hình 3.5 Ảnh hưởng nồng độ dược chất pha nước nội đến 29 Hình 3.6 Đồ thị biểu diễn ảnh hưởng nồng độ % PVA đến 31 Hình 3.7 Ảnh hưởng tăng dần tỉ lệ đến khả giải phóng (1) 33 Hình 3.8 Ảnh hưởng tỉ lệ polyme đến khả giải phóng (2) 34 Hình 3.9 Ảnh hưởng tỉ lệ polyme đến khả giải phóng (3) 36 Hình 3.10 Ảnh hưởng MgCO3 đến khả giải phóng 38 Hình 3.11 Phương trình biểu diễn biến đổi MgCO3 39 Hình 3.12 Hình ảnh chụp FESEM vi cầu PLGA-LA: (A), (B) vi cầu PLGA- LA khơng có MgCO3 phóng đại 9000 lần 3000 lần; (C), (D): vi cầu PLGA- LA có MgCO3 phóng đại 10000 lần 3000 lần 39 Hình 3.13 Hình ảnh chụp FESEM vi cầu PLGA-LA đối chiếu phóng đại 10000 lần (A) 3000 lần (B) 40 Hình 3.14 Đồ thị so sánh khả giải phóng vi cầu PLGA-LA vi cầu đối chiếu (Lucrin Depot 3,75 mg) điều kiện thử giải phóng 41 Hình 3.15 Phổ FTIR nguyên liệu LA, nguyên liệu PLGA, MgCO3 42 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an ĐẶT VẤN ĐỀ Leuprolid acetat (LA) chất tổng hợp tương tự hormon giải phóng gonadotropin (GnRH) với hiệu lực gấp khoảng 80-100 lần GnRH nội sinh, sử dụng để điều trị loạt loại rối loạn hormon bao gồm ung thư tuyến tiền liệt, lạc nội mạc tử cung dậy sớm trẻ em Do tính thấm bị bất hoạt enzyme thể, sinh khả dụng đường uống thuốc thấp (