Tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa học phần dưới mặt đất cây phong quỳ sa pa

TỔNG QUAN

Tổng quan về chi Anemone

Vị trí phân loại chi Anemone [1, 2]

Giới Thực vật (Plantae) Ngành Ngọc Lan (Magnoliophyta) Lớp Ngọc Lan (Magnoliopsida)

Cây thảo sống lâu năm này có gốc thành rễ hoặc mọc thành bụi, với lá mọc so le và được cắt sâu Hoa của cây thường đơn độc hoặc thành tán, có bao chung với 3 lá chét Đài hoa có màu sắc đa dạng như vàng, lam, trắng và đỏ, với 5-10 phiến, không có tràng, nhị nhiều và lá noán có vòi nhụy Quả của cây là bế, đơn hạt, rời và tập hợp thành đầu.

1.1.3 Số lƣợng và phân bố chi Anemone

Trên toàn cầu, có khoảng 120-150 loài được phân bố rộng rãi ở các châu lục, với sự tập trung chủ yếu tại các quốc gia ôn đới như Ấn Độ, Nepal, Trung Quốc, Hàn Quốc, Nhật Bản và Việt Nam Đặc biệt, Trung Quốc là nơi có số lượng loài phong phú nhất, lên tới 50 loài.

23] Trong đó có 50 loài được sử dụng làm thuốc[6]

Bảng 1: Phân bố 50 loài sử dụng làm thuốc

1 A.altaica Châu Âu, Trung Quốc, Bắc Châu Á

2 A.amurensis Đông nước Nga, bắc Hàn Quốc, Trung

4 A.baicalensis Seberia, Hàn Quốc, Trung Quốc

A.begoniifolia Siberia, Hàn Quốc, Trung quốc

7 A.cathayensis Hàn Quốc, Trung Quốc

12 A.demissa Trung Quốc, dãy Himalaya

13 A.demissa var.major Trung Quốc

14 A.demissa var villosissima Himalayas, Trung Quốc

15 A.dichotoma Bắc Châu Á, Châu Âu, Trung Quốc

17 A.flaccida Nhật Bản, Trung Quốc, đông Nga,

18 A.flaccida var hofengensis Trung Quốc (Trùng Khánh)

19 A.fulinggensis Trung Quốc (Trùng Khánh)

20 A.griffithii Nepal, Bhutan, Sikkim-Ấn Độ

21 A.hupehensis Trung Quốc (tỉnh Trùng Khánh, Cam

Túc, Chiết Giang, Thiểm Tây, Tứ Xuyên…)

22 A.hupehensis f alba Trùng Khánh-Trung Quốc

24 A.multifida Tây bắc và trung tâm nước Mỹ

25 A.narcissiflora Châu Âu, châu Á, nam Mỹ

26 A.nemorosa Anh, châu Âu, tây Á

29 A.obtusiloba ssp ovalifolia Trung Quốc

31 A.parviflora (A.pulsatilla) Châu Âu, Anh

34 A.raddenana Trung Quốc, Hàn Quốc, đông nước

35 A.reflexa Bắc Hàn Quốc, Siberia, Đông Âu,

36 A.rivularis Trung Quốc, Himalaya, Sri Lanka

37 A.rivularis var flore-minore Trùng Khánh-Trung Quốc

38 A.rockii var pilocarpa Trùng Khánh-Trung Quốc

39 A.rupicola Bhutan, Nepal, bắc Ấn Độ, Trung

40 A.silvestris Châu Âu, Trung Quốc

41 A.stolonifera Trung Quốc, Nhật Bản

42 A.taipaiensis Thiểm Tây-Trung Quốc

43 A.tetrasepala Afghanistan, Kashmir (Ấn Độ), Tây

44 A.tibetica Tây Tạng (Trung Quốc)

45 A.tomentosa Trùng Khánh, Tứ Xuyên, Cam Túc,

Hà Nam, Thiểm Tây (Trung Quốc)

Tại Việt Nam, đã phát hiện 5 loài Anemone, bao gồm A.japonica, A.chapaensis, A.polilanei, A.rivularis và A.sumatrana Trong số này, A.japonica và A.rivularis là hai loài được nghiên cứu nhiều nhất Chi Anemone chủ yếu phân bố ở các tỉnh phía Bắc như Yên Bái, Lai Châu, Hà Giang và Lào Cai.

Tổng quan về cây Phong quỳ Sa Pa (Anemone chapaensis Gagnep.)

Tên khoa học Anemone chapaensis Gagnep

Tên thường gọi: Phong quỳ Sa Pa

Cây thảo sống lâu năm, cao từ 10cm đến 30cm, mọc thành bụi với thân non màu tím và thân già màu xanh lục, có lông Lá hình tim, sẻ 3 thùy, mép răng cưa, có lông trắng và 3 gân chính Hoa nở từ tháng 6 đến tháng 9, cụm hoa hình sim, màu trắng hoặc hồng, với cuống hoa dài 6-7cm Quả bế, không cọng, kích thước 4-5cm, khi chín bung ra nhiều hạt dài 2-3mm, có lông trắng Rễ cây hình trụ, nhỏ, đường kính từ 1-2mm.

46 A.trullifolia Tây tạng (Trung Quốc)

47 A trullifolia var linearis Trung Quốc

49 A.virginiana Trung và đông bắc Mỹ

Hình 1.1 Tiêu bản thực vật Anemone chapaensis Gagnep.[28]

Phong quỳ Sa Pa (Anemone chapaensis Gagnep.) là loài cây đặc hữu tại Sa Pa, tỉnh Lào Cai, phát triển tốt ở độ cao từ 1200-1500m Loài cây này ưa môi trường ẩm mát, bóng râm và thường mọc rải rác ở miền Bắc Việt Nam.

Thành phần hóa học chi Anemone

Thành phần hóa học chủ yếu có trong chi Anemone là các saponin, flavonoid và một số ít các cumarin, acid béo, diterpaiensis glycoside, lacton, tinh dầu…

1.3.1 Các saponin Đến nay đã có hơn 200 saponin được phân lập từ chi Anemone Bộ khung aglycon triterpen là olean (nhóm A), ursan (nhóm B), lupan (nhóm C), cycloartan tetracylic(nhóm D) [6]

Hình 1.2 Cấu trúc khung olean

Phần lớn các saponin trong tự nhiên được tìm thấy đều có bộ khung này, phần aglycon thường có 5 mạch vòng Một số saponin được phân lập từ chi

Hình 1.3 Các bộ khung olean cơ bản (nhóm A) phân lập từ chi Anemone

Rha-1-2[glc-1-4]ara Rha-1-2-ara

Rha-1-4-glc-1-6glc Rha-1-4-glc-1-6glc

Chữ viết tắt: Glc: β-D-Glucopyranosyl; Rha: α-L-Rhamnopyranosyl; Ara: α-L- Arabinopyranosyl

Hình 1.4 Các hợp chất saponin phân lập tư Anemone raddeana Regel

 Bộ khung ursan (nhóm B), lupan (nhóm C), và cycloartan tetracylic (nhóm D)

Cấu trúc nhóm ursan tương tự như nhóm olean, nhưng nhóm methyl ở C-30 gắn vào vị trí C-19 thay vì C-20 Nhóm ursan thường ít gặp hơn nhóm olean Trong khi đó, nhóm lupan (nhóm C) có các vòng A, B, C, D giống như các nhóm trên, nhưng vòng E của nó là vòng 5 cạnh.

Hình 1.5 Các bộ khung triterpen cơ bản khác (nhóm B,C,D) từ chi Anemone

Hình 1.6 Một số flavonoid phân lập được từ chi Anemone

1.3.3 Một số thành phần hóa học khác

Các coumarin, lacton, lignin, steroid, phenolic và một số hợp chất khác được phân lập từ chi Anemone

Bảng 2 Các hợp chất phân lập từ chi Anemone

STT Cấu trúc Tên hợp chất TLTK

Tác dụng sinh học chi Anemone

Theo kinh nghiệm dân gian, rễ cây Phong quỳ được sử dụng kết hợp với các vị thuốc khác để điều trị bệnh tim Rễ cây này có vị đắng, tính hàn, ít độc và có tác dụng khử phong thấp, thanh nhiệt, giải độc Ngoài ra, người dân còn dùng rễ để chống viêm, điều trị các bệnh như viêm họng, viêm gan, đau dạ dày, lỵ, thiên đầu thống, bế kinh, tiểu ra máu, rắn cắn, và phong thấp đau nhức.

1.4.2 Công dụng sinh học đƣợc nghiên cứu

Các saponin nhóm triterpenoid là thành phần chính trong rễ của chi

Anemone, chúng có khả năng kháng khuẩn, kháng u, chống co giật[5, 24]

Phần cắn saponin triterpen thô từ loài A.flaccida (AFS) có khả năng giảm sưng đỏ và phù chân sau trong mô hình viêm khớp do collagen (CIA) trên chuột, với nồng độ các chất trung gian hóa học gây viêm như TNF-α và IL-6 trong huyết thanh giảm đáng kể khi chuột được cho uống AFS với liều 200-400 mg/kg/ngày Rễ loài Anemone raddeana chứa các chất raddeanoside R1, R2 có khả năng ức chế tế bào ung thư dạ dày BGC823, đồng thời các radeanosid cũng có tác dụng giảm đau và chống viêm Protoanemonin được biết đến với tác dụng an thần và chống co thắt phế quản, co thắt hồi tràng do histamin Loài Anemone demissa var major thường được sử dụng trong điều trị kiết lỵ, hỗ trợ tiêu hóa và các bệnh khó tiêu.

ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tương nghiên cứu

Cây dược liệu được thu hái khi đang ra hoa, được thu hái ở đèo Hoàng Liên (Ô Qui Hồ, ở độ cao 1500 đến 1800m), thuộc huyện Sa Pa, tỉnh Lào Cai

Mẫu tiêu bản khô số 01 (cành, lá, hoa) được thu hái vào ngày 11/9/2013 và mẫu số 02 vào ngày 24/5/2015 tại đèo Hoàng Liên, huyện Sa Pa, tỉnh Lào Cai Cả hai mẫu đã được giám định bởi TS Đỗ Thị Xuyến và hiện đang được lưu giữ tại phòng Bách thảo thực vật, Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội, cũng như tại Khoa Hóa phân tích-Tiêu chuẩn, Viện Dược liệu.

Mẫu dược liệu được lưu giữ tại Khoa Hóa phân tích-Tiêu chuẩn, Viện Dược liệu

2.2 Hóa chất trang thiết bị 2.2.1 Hóa chất

- Các dung môi dùng trong chiết xuất phân lập: ethanol (EtOH) 96%, methanol (MeOH), ethyl acetat (EtOAc), diclomethan, n-hexan…

- Các dung môi dùng trong HPLC (Methanol… ) của Merck, Đức

- Pha tĩnh trong sắc ký cột là silica gel pha thường (cỡ hạt 60-200 àm, Merck), silica gel pha đảo Rp-18 (cỡ hạt 30-50 àm, Merck)

- Bản mỏng tráng sẵn DC-Aulofolien 60 F 245 (Merck), bản mỏng pha đảo RP-

18 F 245s Merck Dung môi hiện màu là acid sulfuric 10%/ethanol, đốt nóng

2.2.2 Thiết bị, máy móc, dụng cụ

 Hệ thống sắc ký hiệu năng cao Agilent 1260 Infinity (Agilent Technologies, Mỹ)

 Hệ thống chiết hồi lưu với bình cầu có dung tích từ 10-2000ml

 Máy đo phổ khối HP 5989B (Viện Hoá học, Viện Hàn Lâm Khoa học và

 Máy đo phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR): 1 H-NMR ; 13 C-NMR ; DEPT (Viện Hoá học, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam)

 Dụng cụ chạy sắc ký: cột thủy tinh đường kính từ 1-10cm, dài 30-

100cm, bình cầu từ 50-2000ml, ống nghiệm, ống đựng mẫu, pipet…

 Dụng cụ trong chạy HPLC

 Các dụng cụ thí nghiệm thuộc Viện Dược liệu và bộ môn Hóa dược và kiểm nghiệm thuốc, Khoa Y dược, Đại học Quốc gia Hà Nội

2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp xử lý mẫu và chiết xuất

Dược liệu được chiết xuất từ rễ cây Phong quỳ Sa Pa sau khi rửa sạch và phơi khô Quy trình chiết sử dụng dung dịch ethanol 96% ở nhiệt độ 70 độ C, thực hiện 3 lần Sau khi chiết, dịch chiết được cất để thu hồi dung môi, từ đó thu được cắn.

Hòa tan mẫu vào nước và lắc với các dung môi có độ phân cực tăng dần như n-hexan, ethyl acetat và n-butanol Mỗi dung môi được chiết xuất ba lần, sau đó tiến hành cất để thu hồi các phân đoạn, từ đó thu được cao tương ứng với từng phân đoạn.

Cô thu hồi dung môi

Hình 2 Sơ đồ tách chiết dược liệu

2.3.2 Phương pháp phân lập, phân tách các hợp chất Để phân tách, phân lập các phân chiết của dược liệu ta sử dụng phương pháp sắc ký: sắc ký lớp mỏng (TLC dùng để khảo sảt), sắc ký cột với chất hấp thụ là silica gel pha thuận và pha đảo, sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)

Sắc ký lớp mỏng (TLC) được thực hiện trên bản mỏng với đế nhôm Kieselgel 60 F 254 và bản mỏng pha đảo RP 18 F 245s, cả hai đều của Merck với độ dày 0,25mm Phương pháp nhuộm sử dụng màu băng thuốc thử acid sulfuric 10%/acetat, được đốt trên bếp điện ở nhiệt độ 110 o C.

Sắc ký cột (CC) sử dụng cột thủy tinh với đường kính từ 1-30cm và chiều dài từ 30-100cm Các chất hấp thụ chính là silica gel, với kích thước hạt 63-200 dành cho cột có đường kính lớn hơn 10cm, và kích thước hạt 40-63 cho cột nhỏ hơn 5cm Đối với cột có kích thước nhỏ, silica gel pha đảo với kích thước hạt 30-50 được sử dụng.

2.3.3 Phương pháp xác định công thức hóa học

Phương pháp phổ học hiện nay đóng vai trò quan trọng trong phân tích và xác định các chất, với các loại phổ phổ biến như phổ tử ngoại – khả kiến (UV-Vis), phổ hồng ngoại (IR), phổ khối lượng (MS) và phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) Ngoài ra, một số loại phổ khác như phổ nhiễu xạ đơn tinh thể tia X, phổ huỳnh quang, phổ cận hồng ngoại (NIR), phổ Raman, phổ lưỡng cực vòng và tán sắc quay cũng được áp dụng trong một số trường hợp nhất định Ưu điểm nổi bật của các phương pháp này là khả năng cung cấp thông tin về cấu trúc của các chất, hỗ trợ xác định cấu trúc của các chất chưa biết và định danh các chất đã biết thông qua việc so sánh phổ với các chất chuẩn Chúng cũng được sử dụng để xác định hàm lượng các chất bằng cách so sánh độ hấp thụ hoặc cộng hưởng của mẫu định lượng với mẫu chuẩn.

Phổ tử ngoại và khả kiến: sự hấp thụ năng lượng điển tử trong vùng sóng ánh sáng tử ngoại gần (190-400nm) và khả kiến (400-780nm) của các

Bản quyền © Trường Đại học Y Dược, ĐHQG Hà Nội Chất gây ra sự chuyển dịch của các electron từ trạng thái cơ bản lên trạng thái kích thích Biểu đồ thể hiện mối quan hệ giữa cường độ hấp thụ và bước sóng của chất được gọi là phổ UV-Vis, được xác định trong các điều kiện cụ thể.

Phổ hồng ngoại (IR) trong vùng hồng ngoại giữa (mid IR, MIR, 4000-400 cm-1) chủ yếu liên quan đến sự hấp thụ hồng ngoại do các dao động của các liên kết trong phân tử So với phổ UV-Vis, phổ hồng ngoại cung cấp nhiều thông tin cấu trúc hơn, đặc biệt liên quan đến các liên kết đôi, ba, cũng như các nhóm thế và dị tố, điều này rất hữu ích cho việc xác định cấu trúc của các chất Hơn nữa, phổ IR có nhiều băng hấp thu đặc trưng cho từng chất, đặc biệt là ở vùng điểm chỉ, do đó, việc so sánh phổ IR của các chất với chất chuẩn có thể hỗ trợ hiệu quả trong việc định danh các chất.

Phổ khối lượng (MS) là công cụ quan trọng trong phân tích và xác định hợp chất tự nhiên, cung cấp thông tin về khối lượng của các ion từ phân tử Dưới điều kiện ion hóa nhất định, sự phân mảnh của ion mẹ tạo ra các ion con theo quy luật nhất định, với các chất có cấu trúc tương tự tạo ra phân mảnh giống nhau Bằng cách kết hợp khối lượng phân tử và các phân mảnh, cùng với các phương pháp phổ khác, có thể xác định cấu trúc của chất chưa biết So sánh phổ khối của chất chưa biết với chất đã biết giúp định danh chính xác và dễ dàng hơn.

Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR), phổ khối và nhiễu xạ đơn tinh thể tia X hiện là những công cụ quan trọng trong xác định cấu trúc hợp chất hữu cơ Có nhiều kỹ thuật NMR khác nhau được áp dụng, cho phép xác định các đặc tính cộng hưởng của hạt nhân Tùy thuộc vào mục đích và độ phức tạp của cấu trúc, người nghiên cứu có thể đo một hoặc nhiều loại phổ khác nhau Các phổ một chiều như 1H-NMR và 13C-NMR, cùng với các kỹ thuật hai chiều như COSY và HETCOR, giúp xác định mối tương quan giữa các loại hạt nhân.

Phổ proton (1H-NMR) cung cấp thông tin về môi trường của các proton trong phân tử, cho thấy rằng các proton trong các môi trường hóa học khác nhau sẽ có các dịch chuyển hóa khác nhau.

 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân carbon-13 ( 13 C-NMR) cung cấp các thông tin về môi trường hóa học của carbon

Kỹ thuật xác định số lượng proton liên kết trên carbon là rất quan trọng trong hóa học hữu cơ Hiện nay, phương pháp DEPT (Distortionless Enhancement by Polarization Transfer) được sử dụng phổ biến, đặc biệt là trong phổ DEPT-135 Trong kỹ thuật này, carbon bậc IV không xuất hiện, carbon bậc II được thể hiện dưới dạng các đỉnh âm, trong khi carbon bậc III và I xuất hiện dưới dạng các đỉnh dương.

90 chỉ còn lại các carbon bậc III là các đỉnh dương trong phổ

Các kỹ thuật phổ hai chiều cung cấp thông tin quan trọng về sự tương tác giữa carbon và hydro gắn trực tiếp (HSQC), giữa các proton và carbon lân cận (COSY), cũng như tương tác giữa proton và carbon gần (HETCOR) hoặc xa hơn (long-range HETCOR, thường được sử dụng là HMBC) Bên cạnh đó, các kỹ thuật như NOESY và ROESY giúp phân tích sự tương tác giữa các proton gần nhau trong không gian.

Các loại phổ khác như phổ nhiễu xạ đơn tinh thể tia X, phổ tán sắc quay quang và phổ lưỡng cực vòng cũng được áp dụng để xác định cấu trúc của các chất.

2.3.4 Phương pháp phân tích định tính hợp chất bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)

KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU

3.1 Phân lập và xác định cấu trúc hợp chất từ phần dưới mặt đất cây

Phong quỳ Sa Pa 3.1.2 Phân lập chất từ rễ Phong quỳ Sa Pa

Phân đoạn n-butanol từ cây Phong quỳ Sa Pa được tách thô bằng phương pháp sắc ký cột với silica gel pha thường Cột sắc ký được chuẩn bị bằng cách rửa sạch và lót một lớp bông mỏng ở đáy Phương pháp nhồi cột ướt được sử dụng với silica gel pha thường làm chất nhồi, và cột được ổn định trong khoảng thời gian từ 12 đến 24 giờ.

Cắn phân đoạn n-butanol (100g) được hòa tan trong MeOH và được sắc ký qua cột silica gel pha thường Quá trình rửa giải sử dụng hệ dung môi EtOAc:MeOH:H2O theo gradient nồng độ từ 15:1:0,3 đến MeOH 100% Các dịch rửa giải được kiểm tra bằng sắc ký lớp mỏng, và các cột có độ đồng nhất cao được dồn lại, thu được phân đoạn PĐ13.

Phân đoạn PĐ13 (1,3g) được tách ra bằng phương pháp sắc ký pha đảo RP-18, sử dụng dung môi MeOH: H2O với nồng độ MeOH tăng dần từ 70% đến 90% Các dịch rửa giải được kiểm tra bằng sắc ký lớp mỏng (SKLM), từ đó thu được chất PQRB1 (31mg) từ các cột có độ đồng nhất cao.

Hình 3.1 Sơ đồ phân lập một số hợp chất từ phân đoạn BuOH của rễ cây

3.1.2 Xác định cấu trúc hợp chất thu đƣợc

Tính chất: Bột vô định hình màu trắng

Phổ 1 H-NMR (CD 3 OD; 500MHz) và 13 C-NMR (CD 3 OD; 125 MHz): xem bảng 3

Ph a t hư ờng Ph a đ ảo

Bảng 3 Số liệu phổ 1 H và 13 C-NMR của hợp chất PQRB

5 65,2 65,2 3,70(m); 3,89(m) a : Đo trong CD 3 OD; b : Đo trong C 5 D 5 N

Hợp chất PQRB1 thu được dưới dạng bột vô định hình, màu trắng Phổ khối ESI-MS có đỉnh ion tại m/z: 884,6 [M+Na]+, tương ứng với công thức phân tử C 46 H 74 O 16

Trên phổ 1 H-NMR, 6 tín hiệu methyl singlet tại δ H 0,82 (s, H-24); 1,00 (s, H-25); 0,73 (s, H-26); 1,19 (s, H-27); 0,93 (s, H-29); 0,97 (s, H-30)

Hình 3.2 6 tín hiệu methyl mũi đơn

Hình 3.3 Tín hiệu CH 3 trên phổ DEPT

Kết hợp với 2 tín hiệu carbon olefin tại δ C 123,8 (C-12) và 144,9 (C-13) và 1 tín hiệu nhóm carboxylic tại δ C 178,2 (C-28) trên phổ 13 C-NMR gợi ý phần aglycon của PQRB1 là bộ khung triterpenoid nhóm hederagenin

Hình 3.4 Phổ 13 C-NMR: Tín hiệu olefin và cacboxylic

Ngoài ra còn sự xuất hiện của 3 tín hiệu proton anomeric δ H 1,55; 5,24;5,02 ppm; tương đương với 3 carbon anomer δ C 104,6; 101,6; 104,2 cho ppm

The structure of PQRB1 consists of three sugar units, identified as one unit of arabinose, one unit of rhamnose, and one unit of ribose.

Hình 3.5 Phổ 1 H-NMR: 3 protons anomer hợp chất PQRB1

Vị trí liên kết giữa các đường và bộ khung olean được xác định dựa vào các tương quan HMBC Cụ thể, tương quan H-1(Ara)/C-3, H-1(Rha I)/C-2(Ara) và H-1(Rib)/C-3(Rha I) khẳng định vị trí liên kết của phần aglycon tại C-3 trên khung olean, trong khi hai cầu nối đường còn lại nằm tại C-2(Ara) và C-3(Rha I) Theo tài liệu tham khảo, PQRB1 được xác định là 3-O–β–D–ribopyranosyl (1→3)–α-L–rhamnopyranosyl (1→2)-α–L-arabinopyranosyl hederagenin.

Hình 3.6 Công thức cấu tạo hợp chất PQRB1

3.2 Phân tích định tính hợp chất bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao

Lựa chọn điều kiện sắc ký dựa trên các tài liệu tham khao và SKLM như sau:

 Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao Agilent 1260 Infinity

 Cột sắc ký: Agilent Eclipse XD B-C18 (kích thước cột 4,6 x 250mm, cỡ hạt 5à)

 Detector UV phát bước sóng 208nm

 Pha động: Aceton nitrin-Acid acetic 0,2%/Nước (4:1, v/v)

 Tốc độ dòng: 0,8ml/phút

 Thể tớch mẫu bơm: 20àl

 Nhiệt độ phân tích: nhiệt độ phòng

Pha mẫu thử bằng cách sử dụng 28mg cao dược liệu từ phần dưới mặt đất của cây Phong quỳ Sa Pa, hòa tan trong 1000µl methanol Tiến hành siêu âm trong 10 phút để đảm bảo cao hòa tan hoàn toàn, sau đó lọc mẫu qua màng lọc 0,45 micromet.

Tương tự làm với hợp chất PQRB1: hòa tan 2mg hợp chất PQRB1 trong 1000àl methanol, siờu õm 10 phỳt, lọc qua màng 0,45 micromet

 Hợp chất PQRB1 có thời gian lưu t R #,284

 Diện tích pic của PQRB1 rất bé trong sắc ký đồ HPLC của cao n-

Butanol, hàm lượng của chất tách được tương đối nhỏ trong phần rễ cây Phong quỳ Sa Pa

Hình 3.7 Sắc ký đồ HPLC của hợp chất PQRB1

Hình 3.8 Sắc ký đồ HPLC của cao phân đoạn n-butanol phần dưới mặt đất cây Phong quỳ Sa Pa

Quá trình phân lập hợp chất thường sử dụng các phương pháp sắc ký như sắc ký cột, sắc ký lớp mỏng và sắc ký lỏng hiệu năng cao Sắc ký cột và sắc ký lớp mỏng được ưa chuộng nhờ chi phí thấp, nguyên liệu dễ tìm và khả năng xử lý mẫu với khối lượng lớn.

Dựa trên thực nghiệm, nghiên cứu đã thiết lập thành công điều kiện sắc ký HPLC cho hợp chất saponin được chiết xuất từ phần dưới mặt đất của cây Phong quỳ Sa Pa Đề tài cũng đã tiến hành phân lập hợp chất từ phân đoạn n-butanol của cây này.

Phong quỳ Sa Pa được nghiên cứu dựa trên các đặc điểm hóa lý và phương pháp phổ, bao gồm phổ khối (MS) và phổ cộng hưởng hạt nhân (NMR) Nghiên cứu cũng so sánh với các tài liệu tham khảo đã xác định hợp chất PQRB1.

Tiêu đề	Tiếp Tục Nghiên Cứu Thành Phần Hóa Học Phần Dưới Mặt Đất Cây Phong Quỳ Sa Pa
Tác giả	Hoàng Thị Huyền Diệu
Người hướng dẫn	ThS. Hà Thị Thanh Hương, TS. Nguyễn Hữu Tùng
Trường học	Đại học Quốc gia Hà Nội
Chuyên ngành	Dược học
Thể loại	Khóa luận tốt nghiệp
Năm xuất bản	2018
Thành phố	Hà Nội

Định dạng
Số trang	42
Dung lượng	0,96 MB