Nghiên cứu tạo tế bào e coli biểu hiện kháng thể bán phần chuỗi đơn cb6 kháng virus sars cov 2

BỘ CƠNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CƠNG NGHIỆP THÀNH PHĨ HỊ CHÍ MINH w pee NGUYEN VAN DOAN NGHIÊN CỨU TAO TE BAO E coli BIEU HIEN KHANG THE BAN PHAN CHUOI DON CB6 KHANG VIRUS SARS-CoV-2 Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Mã ngành: 8420201 LUẬN VĂN THẠC SĨ THÀNH PHĨ HỊ CHÍ MINH, NĂM 2023 Cơng trình hồn thành Trường Đại học Cơng nghiệp TP Hồ Chí Minh Người hướng dẫn khoa học: TS Đồn Chính Chung PGS TS Trịnh Ngọc Nam Luận văn thạc sĩ bảo vệ Hội đồng chấm bảo vệ Luận văn thạc sĩ Trườn g Dai học Công nghiệp thành phố Hồ Chí Minh ngày 06 tháng 10 năm 2023 Thành phần Hội đồng đánh giá luận văn thạc sĩ gồm: TS Nguyễn Thị Kim Anh - Chủ tịch Hội đồng 2.TS Lao Đức Thuận - Phản biện I TS Pham Tấn Việt - Phản biện TS Nguyễn Minh Nam - Ủy viên 5.TS Trần Thị Huyền - Thư ký (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị Hội đồng chấm bảo vệ luận văn thạc Si) CHU TICH HOI DONG VIEN TRUONG VIEN CONG NGHE SINH HOC VA THUC PHAM BỘ CÔNG THƯƠNG CONG HOA XA HOI CHU NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP Độc lập - Tự - Hạnh phúc THÀNH PHĨ HỊ CHÍ MINH TƠ NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: Nguyễn Văn Đoán MSHV: 20125441 Ngày, tháng, năm sinh: 14/04/1997 Nơi sinh: Nam Định Ngành: Công nghệ Sinh học Mã ngành: 8420201 I TÊN ĐÈ TÀI: NGHIEN CUU TAO TE BAO E coli BIEU HIEN KHANG CHUOI DON CB6 KHANG VIRUS SARS-CoV-2 THE BAN PHAN NHIEM VU VA NOI DUNG: - Tao déng vector biéu gen mã hóa khang thé chudi don CB6 khang protein SARS-CoV-2 - Biến nạp biểu hiện kháng thể chuỗi đơn CB6 kháng protein SARSCoV-2 vi khuẩn E.coli - Nghiên cứu điều kiện phù hợp nuôi cấy vi khuẩn E coi sản xuất kháng thể - Kiểm tra đánh giá sơ chất lượng kháng thể chuỗi đơn CB6 kháng protein chuỗi đơn CB6 kháng protein SARS-CoV-2 SARS-CoV-2 II NGAY GIAO NHIEM VU: 30/11/2022 Il NGAY HOAN THANH NHIEM VU: 30/05/2023 IV NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HOC: TS Đồn Chính Chung PGS TS Trịnh Ngọc Nam Tp Hồ Chí Minh, ngày 28 tháng 10 năm 2023 NGƯỜI HƯỚNG DẪN CHU NHIEM BO MON ĐÀO TẠO VIỆN TRƯỞNG VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ THỰC PHAM LOI CAM ON Lời em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến tất ca Thầy, Cô Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm — Trường Đại Học Cơng Nghiệp TP Hề Chí Minh tận tình giảng dạy, truyền đạt kiến thức q báu giúp em hồn thành chương trình đào tạo báo cáo tốt nghiệp Trong trình làm báo cáo có nhiều khó khăn giúp em có trải nghiệm quý giá nhiều bài học kinh nghiệm Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới thầy Đồn Chính Chung — Phó phịng Nghiên cứu Phát triển thuộc công ty CP CNSH Dược Nanogen thầy Trịnh Ngọc Nam — Trưởng phòng Quan hệ Hợp tác Quốc tế trường ại học Công nghiệp Tp HCM Các Thầy giúp đỡ hướng dẫn em tận tình để em hồn thành báo cáo thời hạn Mặc dù cố gắng đề hoàn thành báo cáo cách hồn chỉnh khơng tránh khỏi thiếu sót chưa có kinh nghiệm nghiên cứu khoa học kiến thức hạn chế Em mong nhận góp ý quý Thầy, Cơ đề báo cáo hồn chỉnh Cuối cùng, chúng em kính chúc q Thầy, Cơ đồi sức khỏe thành công nghiỆp Em xin chân thành cảm ơn! TOM TAT LUAN VAN THAC Si Dai dich Covid — 19 xác định nguyên nhân virus SARS-CoV-2, gây hau qua 6.376.503 người tứ vong Hiện nay, giới có nhiều cách tiếp cận để nghiên cứu điều chế vaccine phòng ngừa thuốc điều trị, có phương pháp tạo dịng gen mã hóa kháng đề sản xuất protein ức chế hoạt động SARSCoV-2 Nghiên cứu thực nhằm mục đích tạo dong chung vi khuan E coli mang gen mã hóa kháng thể bán phần chuỗi đơn CB6 có khả sản xuất protein CB6, hướng đến áp đụng sản xuất thuốc ức chế SARS-CoV-2 Gen CB6 gắn vào vector pNANOGEN biến nạp vào chủng vi khuẩn E coli BL21(DE3) phương pháp hóa biến nạp Sau đó, chúng vi khuẩn mang gen mã hóa kháng thể bán phần chuỗi đơn CB6 nuôi cấy môi trường LBka cảm ứng ITPG Dưới kích hoạt ITPG protein CB6 biểu hiện, tách chiết tỉnh thành công Kết kiểm tra, phân tích SDS — PAGE Western Blot xác nhận biểu protein CB6 với kích thước đặc tính mong muốn Khi thực phản ứng trung hòa hòa SARS-CoV-2 mẫu kháng thé CB6 xác định kit trung hòa SARS-CoV-2 đạt hiệu ức chế 46,59% Như vậy, từ kết cho thấy nghiên cứu tạo địng biéu thành cơng protein CB6 tiền dé dé sản xuất kháng thê bán phần chuỗi đơn CB6 điều trị COVID — 19 ii ABSTRACT The COVID-19 pandemic is primarily caused by SARS-CoV-2, resulting in over 6,376,503 deaths worldwide Currently, there are various approaches being pursued globally to study the development of preventive vaccines and therapeutic drugs One of these methods involves generating a genetically engineered antibody-producing cell line to produce proteins that can inhibit the activity of SARS-CoV-2 This study aims to create a bacterial strain of F coli carrying a gene encoding a partial singlechain antibody CB6 to produce CB6 protein for potential application in inhibiting SARS-CoV-2 The CB6 gene is inserted into the pNANOGEN BL21(DE3) bacterial strain using vector and transformed into F coli a transformation method Subsequently, the bacterial strain carrying the gene encoding the partial single-chain antibody CB6 is cultured on LBKan the CB6 medium and induced with ITPG Under the activation of ITPG, protein is expressed, extracted, and successfully purified The results of SDS-PAGE and Western Blot analyses confirm the expression of the CB6 protein with the desired size and characteristics The neutralizing activity of the CB6 antibody against SARS-CoV-2 is determined using a SARS-CoV-2 neutralization kit, which shows an inhibitory efficiency of 46,5% Therefore, these results demonstrate the successful generation and expression of the CB6 protein, providing a foundation for the production of the partial single-chain antibody CB6 for COVID-19 treatment 1H LOI CAM DOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu thân Các kết nghiên cứu kết luận luận văn trung thực, không chép từ nguồn hình thức Việc tham khảo nguồn tài liệu (nếu có) thực trích dẫn ghi nguồn tài liệu tham khảo quy định Học viên Nguyễn Văn Đoán 1V P90) 1o i TOM TAT-LUAN VAN THAG 8] rescsssscesmessasenaarrranmeunnaanmeuanmnsn ii ABRSIRADT szssnunsnnnobettielttq9HttliltttietYHdtitti\4HS0SsUi9teiiaitala iil LỜI CAM ĐOAN 0009009 0t HH HH2 ru iv 91 V M.9I28)00/905i0280.90) ix DANH MUG BẰNG BIỂonnusennnibsiinsnndrebidadtididisubidDS1010G91180801804088 xi 9I28)00/900A50508951005 xiii MG DAU m sac nh Mure án 3, Nội dung:nehiE:cỨHssszsenssarttttiilitttieBBCDIODEHIHHHEHENIHEHENHHHANHPHINNSEHEERH Đối tượng, phạm vi địa điểm trghiÊn.:GỮU encaveneeresrensorsounnrorvonmurausereeunnses sone Cách tiếp cận phương pháp nghiên cứu -22222222221222122212222.ee Ý nghĩa thực tiễn để tài 222222221 2221222121121122112211222222 re CHUONG TONG QUAN LINH VỰC NGHIÊN CỨU -5 5