Xây dựng quy trình định lượng hoạt chất và chất bảo quản trong thuốc cốm tam thất (panax notoginseng)

Xây dựng quy trình định lượng hoạt chất và chất bảo quản trong thuốc cốm tam thất (panax notoginseng) Xây dựng quy trình định lượng hoạt chất và chất bảo quản trong thuốc cốm tam thất (panax notoginseng)

ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU , HÓA CHẤT VÀ TRANG THIẾT BỊ

Thuốc cốm Tam thất được sản xuất bởi Nhà máy Dược phẩm OPC, thuộc Công ty Cổ phần Dược phẩm OPC, có địa chỉ tại Số 09/ĐX04-TH Tổ 7, Khu phố Tân Hóa, Phường Tân Vĩnh Hiệp, Thị xã Tân Uyên, Bình Dương.

Bảng 3.1 Danh mục chất đối chiếu

Notoginsenosid R1 Ginsenosid Rg1 Ginsenosid Rb1 Nipasol M

Số lô: DSTDS005003 DSTDR000902 DSTDR000603 QT130090520

Nhà cung cấp: Desite – Trung Quốc Viện kiểm thuốc

3.1.3 Dung môi và hóa chất

Bảng 3.2 Danh mục dung môi và hóa chất sử dụng trong phân tích

Tên hóa chất Tiêu chuẩn Nguồn gốc

Hình 3.1: Thuốc cốm Tam thất

Bảng 3.3 Danh mục thiết bị sử dụng trong phân tích

Tên thiết bị Nhãn hiệu Xuất xứ

Cân phân tích 5 số lẻ

Cân phân tích 4 số lẻ

Sartorius Sartorius Đức Đức Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC-DAD Agilent 1260 II Mỹ

Máy siêu âm Elma S 100 H Trung Quốc

PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.2.1 Xây dựng và thẩm định quy trình định lượng notoginsenosid R1 và các ginsenosid Rg1, Rb1 trong thuốc cốm Tam thất bằng phương pháp HPLC

3.2.1.1 Xây dựng quy trình định lượng notoginsenosid R1 và các ginsenosid Rg1, Rb1

Dựa theo chuyên luận về Tam thất (rễ củ) trong Dược điển Việt Nam V, chúng tôi đã lựa chọn phương pháp xử lý mẫu và điều kiện sắc ký phù hợp Đầu tiên, cần chuẩn bị dung dịch đối chiếu để đảm bảo tính chính xác trong quá trình phân tích.

Dung dịch hỗn hợp đối chiếu gốc: Cân chính xác khoảng 90,0 mg notoginsenosid R1

Để chuẩn bị dung dịch hỗn hợp đối chiếu gốc, cho 180,0 mg ginsenosid Rg1 và 180,0 mg ginsenosid Rb1 vào bình định mức 100 ml Thêm 60 ml methanol và siêu âm trong 5 phút, sau đó để nguội và bổ sung methanol đến vạch 100 ml.

Để chuẩn bị dung dịch hỗn hợp đối chiếu, cần lấy chính xác 5 ml dung dịch hỗn hợp gốc và pha loãng trong bình định mức 25 ml bằng methanol Sau đó, lọc dung dịch thu được qua màng lọc 0,45 µm Đồng thời, chuẩn bị dung dịch mẫu thử cũng là bước quan trọng trong quy trình này.

Để chuẩn bị dung dịch thử, ngẫu nhiên chọn 20 đơn vị chế phẩm và tính khối lượng trung bình của bột thuốc trong gói, sau đó nghiền thành bột mịn Cân chính xác khoảng 1,0 g bột thuốc đã nghiền, cho vào bình định mức 20 ml, thêm 15 ml methanol và siêu âm trong 30 phút để đảm bảo chế phẩm phân tán đều Sau khi để nguội, bổ sung methanol đến vạch định mức, lắc đều và lọc qua màng lọc 0,45 µm.

− Cột sắc ký: Phenomenex Luna C18 (250 x 4,6 mm, 5àm)

− Tốc độ dòng: 1 ml/phút

− Thể tớch tiờm mẫu: 10 àl

− Pha động: gồm acetonitril (A) và nước cất hai lần (B)

Thời gian (phút) A (% tt/tt) B (% tt/tt)

Thứ tự rửa giải: notoginsenosid R1; ginsenosid Rg1; ginsenosid Rb1

3.2.1.2 Thẩm định quy trình định lượng notoginsenosid R1 và các ginsenosid Rg1, Rb1 trong thuốc cốm Tam thất

Dựa trên quy định của Sổ tay hướng dẫn đăng ký thuốc (2013) và AOAC (Hiệp hội các nhà hóa học phân tích chính thức), phương pháp thẩm định và định lượng đồng thời các hợp chất R1, Rg1 và Rb1 đã được xây dựng, trong đó tính tương thích của hệ thống được xem xét kỹ lưỡng.

Tiến hành tiêm 6 lần liên tiếp dung dịch hỗn hợp theo điều kiện sắc ký đã được mô tả Ghi nhận các thông số như thời gian lưu, diện tích pic, hệ số đối xứng, số đĩa lý thuyết, giá trị trung bình và độ lệch chuẩn tương đối (RSD).

− Hệ số đối xứng: 0,8 < As < 1,5

− Số đĩa lý thuyết: N > 1000 b Tính đặc hiệu

Dung dịch thử placebo: Cân chính xác khoảng 0,9 g chế phẩm placebo không cao

Tam thất được nghiền mịn và cho vào bình định mức 20 ml, sau đó thêm 15 ml methanol Tiến hành siêu âm trong 30 phút để đảm bảo chế phẩm phân tán đều Sau khi để nguội, bổ sung methanol đến vạch định mức và lắc đều trước khi lọc qua màng lọc 0,45 µm.

Dung dịch thử thêm đối chiếu: Cân chính xác khoảng 1,0 g đã được chuẩn bị ở mục

3.2.1.1 cho vào bình định mức 20 ml và 2,0 ml dung dịch hỗn hợp đối chiếu gốc Thêm 9 ml methanol, siêu âm 30 phút để chế phẩm phân tán đều Để nguội, bổ sung đến vạch với bằng methanol Lắc đều và lọc qua màng lọc 0,45 àm

Tiến hành tiêm các dung dịch hỗn hợp đối chiếu, dung dịch thử, dung dịch thử thêm đối chiếu và dung dịch thử placebo vào hệ thống HPLC theo các điều kiện sắc ký đã được mô tả Ghi nhận thời gian lưu, diện tích pic, phổ UV và độ tinh khiết của pic để đảm bảo tính chính xác và độ tin cậy của kết quả phân tích.

Sắc ký đồ của dung dịch thử cần có pic với thời gian lưu tương đương với thời gian lưu của pic notoginsenosid R1, ginsenosid Rg1 và ginsenosid Rb1 trên sắc ký đồ của dung dịch đối chiếu.

− Phổ hấp thu UV của pic notoginsenosid R1, ginsenosid Rg1, ginsenosid Rb1 trên sắc ký đồ của dung dịch đối chiếu và dung dịch thử tương đương nhau

− Sắc ký đồ của dung dịch placebo không xuất hiện pic trong khoảng thời gian lưu tương ứng với pic notoginsenosid R1, ginsenosid Rg1, ginsenosid Rb1

Sắc ký đồ của dung dịch thử cho thấy pic có thời gian lưu tương đương với notoginsenosid R1, ginsenosid Rg1 và ginsenosid Rb1 trong sắc ký đồ của dung dịch đối chiếu Diện tích pic tăng lên so với khi chưa thêm dung dịch đối chiếu.

− Độ tinh khiết của pic notoginsenosid R1, ginsenosid Rg1, ginsenosid Rb1 trên sắc ký đồ của dung dịch thử ≥ 999,0 c Tính tuyến tính

Từ dung dịch hỗn hợp đối chiếu gốc, chuẩn bị dãy các dung dịch tuyến tính có nồng độ các ginsenosid từ 40 % đến 200 % nồng độ định lượng như sau:

Lấy một thể tích dung dịch hỗn hợp đối chiếu gốc và cho vào các bình định mức 25 ml (từ 1 đến 5) theo bảng 2 Sau đó, bổ sung methanol (TT) đến vạch định mức, lắc đều và lọc qua màng lọc 0,45 µm.

Bảng 3.4 Cách chuẩn bị các dung dịch tuyến tính

Thể tích dd hỗn hợp đối chiếu gốc (ml) Độ pha loãng

Tiến hành tiêm các dung dịch khảo sát tính tuyến tính vào hệ thống HPLC để ghi nhận diện tích pic của notoginsenosid R1, ginsenosid Rg1 và ginsenosid Rb1 Đồng thời, xác định phương trình hồi quy tuyến tính giữa diện tích pic và nồng độ, cũng như hệ số tương quan tuyến tính.

Sử dụng phân tích hồi quy trong Excel kết hợp với trắc nghiệm F để kiểm tra tính thích hợp của phương trình hồi quy y = ax + b, đồng thời áp dụng trắc nghiệm t để đánh giá ý nghĩa của các hệ số a và b trong phương trình Việc này giúp đảm bảo độ tin cậy và chính xác của mô hình hồi quy.

Chuẩn bị 6 dung dịch thử, tiêm vào hệ thống HPLC theo điều kiện sắc ký đã mô tả Ghi nhận diện tích pic notoginsenosid R1, ginsenosid Rg1, ginsenosid Rb1

Hàm lượng (mg/gói) của từng hoạt chất trong cốm được tính theo công thức:

Diện tích pic của từng hoạt chất trong sắc ký đồ của dung dịch thử và dung dịch đối chiếu được ký hiệu là S T và S C Khối lượng cân của các chất đối chiếu notoginsenosid R1, ginsenosid Rg1 và ginsenosid Rb1 được ký hiệu là m C, với đơn vị tính là mg.

C C : Hàm lượng của chất đối chiếu notoginsenosid R1, ginsenosid Rg1, ginsenosid Rb1 tính trên nguyên trạng (%)

D T , D C : Lần lượt là độ pha loãng của dung dịch thử và dung dịch đối chiếu m TB : Khối lượng trung bình gói (g) m T : Khối lượng cân của mẫu thử (g)

− RSD của hàm lượng notoginsenosid R1, ginsenosid Rg1, ginsenosid Rb1 qua 6 lần định lượng ≤ 2,0% e Độ chính xác trung gian

XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG HOẠT CHẤT

4.1.1 Xây dựng quy trình định lượng notoginsenosid R1 và ginsenosid Rg1, Rb1 trong thuốc cốm Tam thất (Panax notoginseng)

Hệ dung môi khảo sát bao gồm acetonitril và nước với điều kiện gradient: bắt đầu với tỷ lệ ACN 25,0% trong 12 phút, sau đó tăng tuyến tính lên 37,0% trong 6 phút, giữ nguyên trong 6 phút, và tiếp tục tăng lên 60,0% trong 4 phút Tỷ lệ ACN sau đó giữ nguyên trong 10 phút, quay lại 25,0% trong 4 phút, và ổn định ở mức 25,0% trong 5 phút Tổng thời gian cho quy trình định lượng là 47 phút Với điều kiện gradient này, sắc ký đồ cho thấy pic notoginsenosid R1, ginsenosid Rg1 và Rb1 được tách biệt rõ ràng, cho các thông số sắc ký phù hợp Do đó, điều kiện gradient này được chọn làm điều kiện sắc ký chính, trong khi các điều kiện khác vẫn giữ nguyên theo phương pháp nghiên cứu đã đề xuất.

− Pha động: gồm acetonitril (A) và nước cất hai lần (B)

Thời gian (phút) A (% tt/tt) B (% tt/tt)

4.1.2 Thẩm định quy trình định lượng notoginsenosid R1 và ginsenosid Rg1, Rb1

4.1.2.1 Tính tương thích hệ thống

Bảng 4.1 Kết quả xác định tính tương thích hệ thống của R1 trong thuốc cốm

Thời gian lưu k' Diện tích pic A S N R S

− RSD Thời gian lưu của R1 là 0,11% < 2,0%

− RSD Diện tích pic của R1 là 0,45% < 2,0%

− Hệ số đối xứng của R1 là 1,073 nằm trong khoảng giới hạn 0,8-1,5

− Số đĩa lý thuyết của R1 là 36935 > 1000

Bảng 4.2 Kết quả xác định tính tương thích hệ thống của Rg1 trong thuốc cốm

− RSD Thời gian lưu của Rg1 là 0,05% < 2,0%

− RSD Diện tích pic của Rg1 là 0,08% < 2,0%

− Hệ số đối xứng của Rg1 là 0,971 nằm trong khoảng giới hạn 0,8-1,5

− Số đĩa lý thuyết của Rg1 là 41246 > 1000

Bảng 4.3 Kết quả xác định tính tương thích hệ thống của Rb1 trong thuốc cốm

− RSD Thời gian lưu của Rb1 là 0,04% < 2,0%

− RSD Diện tích pic của Rb1 là 0,18% < 2,0%

− Hệ số đối xứng của Rb1 là 1,172 nằm trong khoảng giới hạn 0,8-1,5

− Số đĩa lý thuyết của Rb1 là 1108847 > 1000

 Kết luận chung: Quy trình định lượng notoginsenosid R1 và ginsenosid Rg1, Rb1 trong thuốc cốm Tam thất đạt yêu cầu về tính tương thích hệ thống

Hình 4.1 Sắc ký đồ mẫu đối chiếu R1, Rg1, và Rb1

Hình 4.2 Sắc ký đồ mẫu thử

Hình 4.3 Sắc ký đồ mẫu placebo

Hình 4.4 Sắc ký đồ mẫu thử thêm đối chiếu

Hình 4.5 Phổ UV tại pic notoginsenosid R1 của dung dịch đối chiếu (i) và dung dịch thử (ii)

Hình 4.6 Phổ UV tại pic ginsenosid Rg1 của dung dịch đối chiếu (i) và dung dịch thử (ii)

Hình 4.7 Phổ UV tại pic ginsenosid Rb1 của dung dịch đối chiếu (i) và dung dịch thử (ii) Nhận xét:

Dung dịch thử cho pic có thời gian lưu và phổ UV tương ứng với pic của notoginsenoside R1 cùng với pic của ginsenosid Rg1 và Rb1 trên sắc ký đồ của các dung dịch đối chiếu.

− Sắc ký đồ mẫu placebo (Hình 4.3) không có pic cùng thời gian lưu với pic của notoginsenosid R1 và pic của ginsenosid Rg1, Rb1

Sắc ký đồ của dung dịch thử sau khi thêm đối chiếu cho thấy sự xuất hiện của 3 pic notoginsenosid R1, ginsenosid Rg1 và ginsenosid Rb1, với diện tích pic tăng lên rõ rệt so với trước khi thêm đối chiếu.

− Độ tinh khiết của pic:

• Notoginsenosid R1 trong dung dịch thử (Hình 3.2) là 999,805 > 999,0

• Ginsenosid Rg1 trong dung dịch thử (Hình 3.2) là 999,996 > 999,0

• Ginsenosid Rb1 trong dung dịch thử (Hình 3.2) là 999,980 > 999,0

Kết luận: Quy trình định lượng notoginsenosid R1 và ginsenosid Rg1, Rb1 trong thuốc cốm Tam thất có tính đặc hiệu

Bảng 4.4 Kết quả xác định phương trình hồi quy và hệ số tuyến tính của notoginsenosid R1 trong thuốc cốm Tam thất

STT Nồng độ chất cần phân tích trong mẫu (àg/ml) - x Diện tớch pic

Hình 4.8 Đường biểu diễn tương quan tuyến tính giữa nồng độ và diện tích pic của notoginsenosid R1 trong thuốc cốm Tam thất

Khảo sát đường biểu diễn diện tích pic theo nồng độ phân tích của notoginsenosid R1

− Độ dốc: a = 1,637 - Tung độ gốc: b = -5,960

 Phương trình hồi quy tương thích

− p-value (a) = 2,53*10-6 < α = 0,05  Hệ số a có ý nghĩa thống kê

− p-value (b) = 0,214 > α = 0,05  Hệ số b không có ý nghĩa thống kê

Kết luận: Vậy phương trình hồi quy của notoginsenosid R1 là y = 1,637x y = 1,637x - 5,960 R² = 0,9997

Nồng độ notoginsenoside R 1 (àg/ml)

Bảng 4.5 Kết quả xác định phương trình hồi quy và hệ số tuyến tính của ginsenosid Rg1 trong thuốc cốm Tam thất

STT Nồng độ chất cần phân tích trong mẫu (àg/ml) - x

Đường biểu diễn tương quan tuyến tính giữa nồng độ và diện tích pic của ginsenosid Rg1 trong thuốc cốm Tam thất cho thấy mối liên hệ rõ ràng giữa hai yếu tố này Khảo sát diện tích pic theo nồng độ phân tích của ginsenosid Rg1 giúp xác định mức độ hiệu quả và chất lượng của sản phẩm.

− Độ dốc: a = 3,904 - Tung độ gốc: b = - 37,040

Kết luận: Vậy phương trình hồi quy của ginsenosid Rg1 là y = 3,904x y = 3,904x - 37,040 R² = 0,9996

Nồng độ ginsenosid Rg 1 (àg/ml)

Bảng 4.6 Kết quả xác định phương trình hồi quy và hệ số tuyến tính của ginsenosid Rb1 trong thuốc cốm Tam thất

STT Nồng độ chất cần phân tích trong mẫu (àg/ml) - x

Hình 4.10 Đường biểu diễn tương quan tuyến tính giữa nồng độ và diện tích pic của ginsenosid Rb1 trong thuốc cốm Tam thất

Khảo sát đường biểu diễn diện tích pic theo nồng độ phân tích của ginsenosid Rb1

− Độ dốc: a = 2,850 - Tung độ gốc: b = - 20,805

Kết luận: Vậy phương trình hồi quy của ginsenosid Rb1 là y = 2,850x y = 2,850x - 20,805 R² = 0,9998

Nồng độ ginsenosid Rb 1 (àg/ml)

Kết luận chung: Quy trình định lượng notoginsenosid R1 và ginsenosid Rg1, Rb1 trong thuốc cốm Tam thất đạt yêu cầu về tính tuyến tính

Bảng 4.7 Kết quả xác định độ lặp lại của R1 trong cốm

Hàm lượng R1 trong cốm (mg/gói)

Giá trị RSD (%) kết quả định lượng hàm lượng R1 có trong các mẫu thử là 0,32% ≤ 2,0%

Bảng 4.8 Kết quả xác định độ lặp lại của Rg1 trong cốm

Hàm lượng Rg1 trong cốm (mg/gói)

Giá trị RSD (%) kết quả định lượng hàm lượng Rg1 có trong các mẫu thử là 0,11% ≤ 2,0%

Bảng 4.9 Kết quả xác định độ lặp lại của Rb1 trong cốm

Hàm lượng Rb1 trong cốm (mg/gói)

Giá trị RSD (%) kết quả định lượng hàm lượng Rb1 có trong các mẫu thử là 0,20% ≤ 2,0%

4.1.2.5 Độ chính xác trung gian

Bảng 4.10 Kết quả xác định độ chính xác trung gian của R1 trong cốm

Người phân tích 1: Hoàng Sang Người phân tích 2: Đông Thanh

Hệ thống HPLC-DAD: Agilent 1260 II Hệ thống HPLC-DAD: Agilent 1260 II

Hàm lượng R1 trong cốm (mg/gói)

Trung bình: 10,55 (mg/gói) Trung bình: 10,72 (mg/gói)

Kết quả của cả 2 người phân tích Trung bình: 10,64 (mg/gói)

Khảo sát kết quả định lượng giữa hai kiểm nghiệm viên:

Kết luận: Vậy kết quả định lượng hàm lượng R1 trong cốm của 2 kiểm nghiệm viên khác nhau không có ý nghĩa thống kê

Bảng 4.11 Kết quả xác định độ chính xác trung gian của Rg1 trong cốm

Hàm lượng Rg1 trong cốm (mg/gói)

Kết luận: Vậy kết quả định lượng hàm lượng Rg1 trong cốm của 2 kiểm nghiệm viên khác nhau không có ý nghĩa thống kê

Bảng 4.12 Kết quả xác định độ chính xác trung gian của Rb1 trong cốm

Hàm lượng Rb1 trong cốm (mg/gói)

Kết luận: Vậy kết quả định lượng hàm lượng Rb1 trong cốm của 2 kiểm nghiệm viên khác nhau không có ý nghĩa thống kê

Bảng 4.13 Kết quả xác định độ đúng của R1 trong cốm

Lượng chuẩn thêm vào (mg)

Lượng chuẩn tìm thấy (mg)

Nhận xét: Tỷ lệ phục hồi nằm trong khoảng 98,0 - 102,0% và giá trị RSD ≤ 2,0%

Kết luận: Vậy quy trình định lượng notoginsenosid R1 trong cốm đạt yêu cầu về độ đúng

Bảng 4.14 Kết quả xác định độ đúng của Rg1 trong cốm

Mức nồng độ Bình định mức 20 ml

Tỷ lệ phục hồi ginsenosid Rg1 trong cốm đạt từ 98,0 - 102,0% với giá trị RSD ≤ 2,0%, cho thấy quy trình định lượng này đảm bảo độ chính xác cao.

Bảng 4.15 Kết quả xác định độ đúng của Rb1 trong cốm

Mức nồng độ Bình định mức 20 ml

Tỷ lệ phục hồi của quy trình định lượng ginsenosid Rb1 trong cốm đạt từ 98,0% đến 102,0%, với giá trị RSD không vượt quá 2,0% Điều này cho thấy quy trình này đáp ứng tiêu chuẩn về độ chính xác.

XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG NIPASOL M

4.2.1 Xây dựng quy trình định lượng nipasol M trong thuốc cốm Tam thất

Khảo sát hệ dung môi bao gồm acetonitril và nước rửa giải đẳng dòng tỷ lệ ACN : H2O (50 :

50) trong 20 phút Với điều kiện tỷ lệ dung môi này, sắc kí đồ mẫu thử thu được cho pic nipasol M tách riêng ra khỏi các pic tạp khác và cho các thông số sắc kí phù hợp Vì vậy chọn điều kiện gradient này làm điều kiện sắc kí Các điều kiện khác giữ nguyên theo phương pháp nghiên cứu đã đề xuất Điều kiện sắc ký:

− Pha động: acetonitril và nước (50 : 50)

4.2.2 Thẩm định quy trình định lượng nipasol M trong thuốc cốm Tam thất

4.2.2.1 Tính tương thích hệ thống

Bảng 4.16 Kết quả xác định tính tương thích hệ thống của nipasol M trong thuốc cốm

STT Thời gian lưu k' Diện tích pic A S N

− RSD Thời gian lưu của nipasol M là 0,18% < 2,0%

− RSD Diện tích pic của nipasol M là 0,21% < 2,0%

− Hệ số đối xứng của nipasol M là 0,99 nằm trong khoảng giới hạn 0,8-1,5

− Số đĩa lý thuyết của R1 là 46316 > 1000

Hình 4.11 Sắc ký đồ mẫu đối chiếu nipasol M

Hình 4.12 Sắc ký đồ mẫu thử nipasol M

Hình 4.13 Sắc ký đồ mẫu placebo nipasol M

Hình 4.14 Sắc ký đồ mẫu thử thêm đối chiếu nipasol M

Hình 4.15 Phổ UV tại pic nipasol M của dung dịch đối chiếu (i) và dung dịch thử (ii) Nhận xét:

− Dung dịch thử cho pic có thời gian lưu và phổ UV tương ứng với pic của nipasol M trên sắc ký đồ các dung dịch đối chiếu

− Sắc ký đồ mẫu placebo (Hình 4.13) không có pic cùng thời gian lưu với pic của nipasol M

− Sắc ký đồ của mẫu thử thêm đối chiếu và mẫu dung môi không có pic cùng thời gian lưu với pic của nipasol M

− Độ tinh khiết của pic nipasol M trong dung dịch thử (Hình 4.12) là 999,7 > 999,0 Kết luận: Quy trình định lượng nipasol M trong thuốc cốm Tam thất có tính đặc hiệu

Bảng 4.17 Kết quả xác định phương trình hồi quy và hệ số tuyến tính của nipasol M

STT Nồng độ nipasol M trong mẫu

Hình 4.16 Đường biểu diễn tương quan tuyến tính giữa nồng độ và diện tích pic của nipasol

M trong thuốc cốm Tam thất Khảo sát đường biểu diễn diện tích pic theo nồng độ phân tích của nipasol M

− Độ dốc: a = 101,234 - Tung độ gốc: b = -4,506

− p-value (a) = 6,640*10^-9 < α = 0,05  Hệ số a có ý nghĩa thống kê

− p-value (b) = 0,012 < α = 0,05  Hệ số b có ý nghĩa thống kê

Kết luận: Vậy phương trình hồi quy của nipasol M là y = 101,234x – 4,506 y = 101.234x - 4.506 R² = 1

Bảng 4.18 Kết quả xác định độ lặp lại của nipasol M trong cốm

Hàm lượng nipasol M trong thuốc cốm (mg/gói)

Nhận xét: Giá trị RSD (%) kết quả định lượng hàm lượng nipasol M có trong các mẫu thử là 0,56% ≤ 2,0%

4.2.2.5 Độ chính xác trung gian

Bảng 4.19 Kết quả xác định độ chính xác trung gian của nipasol M trong cốm

Hàm lượng nipasol M trong cốm (mg/gói) Diện tích pic

Hàm lượng nipasol M trong cốm (mg/gói)

Kết luận: Vậy kết quả định lượng hàm lượng nipasol M trong thuốc cốm của 2 kiểm nghiệm viên khác nhau không có ý nghĩa thống kê

Bảng 4.20 Kết quả xác định độ đúng của nipasol M trong thuốc cốm Tam thất

Nồng độ nipasol M thêm vào (àg/ml)

Nồng độ nipasol M tìm thấy (àg/ml)

Nhận xét: Tỷ lệ phục hồi nằm trong khoảng 98,0 - 102,0% và giá trị RSD ≤ 2,0%

Kết luận: Vậy quy trình định lượng nipasol M trong thuốc cốm đạt yêu cầu về độ đúng.

BÀN LUẬN

4.3.1 Khảo sát chương trình gradient

Quy trình định lượng ginsenoside (R1, Rg1, Rb1) được nghiên cứu theo chương trình hệ dung môi DĐVN V, với thời gian phân tích kéo dài 66 phút Sắc ký đồ cho thấy tín hiệu tạp tương đối ít trong những phút đầu và các pic chính R1, Rg1, Rb1 có thời gian lưu lần lượt khoảng 19 phút, 20 phút và 29 phút Để cải tiến quy trình, có thể giảm độ phân cực của hệ dung môi (ACN : Nước), giúp rút ngắn thời gian chạy mẫu và tiết kiệm hóa chất.

Khảo sát đã cho thấy việc tăng tỷ lệ dung môi ACN từ 19% lên 25% vẫn đảm bảo tách được 3 pic chính với hệ số phân giải và độ tinh khiết đạt yêu cầu Quy trình định lượng hoạt chất được cải tiến đã rút ngắn thời gian phân tích mẫu từ 66 phút xuống còn 47 phút, góp phần giảm lượng dung môi hóa chất sử dụng và tiết kiệm chi phí cho mỗi lần kiểm mẫu.

Việc chọn hệ dung môi cho quy trình định lượng nipasol M dựa trên độ phân cực của hoạt chất, với cấu trúc chứa hai nhóm chức –OH và propyl, cho thấy độ phân cực trung bình Hệ dung môi acetonitril : nước (50 : 50) được lựa chọn để khảo sát phương pháp định lượng nipasol M, cho kết quả định lượng pic chính đạt yêu cầu về độ tinh khiết và hệ số dung lượng k’ từ 2 đến 10 Hệ dung môi này giúp sắc ký đồ rửa giải tách hoàn toàn tạp chất khỏi pic chính, với thời gian lưu khoảng 15,9 phút Mẫu thuốc cốm được bào chế từ cao cồn Tam thất có các chất phân cực trung bình đến phân cực mạnh, tạo nền mẫu phân tích rất phù hợp với hệ dung môi ACN 50%.

4.3.2 Điểm mới trong đề tài nghiên cứu

Xây dựng quy trình định lượng hoạt chất và chất bảo quản trong thuốc cốm Tam thất

− Xác định chính xác hàm lượng hoạt chất (Notoginsenosid R1, Ginsenosid Rg1, Ginsenosid Rb1) trong mỗi đơn vị chế phẩm

− Xác định chính xác hàm lượng chất bảo quản (Nipasol M)

Tiêu đề	Xây Dựng Quy Trình Định Lượng Hoạt Chất Và Chất Bảo Quản Trong Thuốc Cốm Tam Thất (Panax Notoginseng)
Tác giả	Lưu Hoàng Sang
Người hướng dẫn	ThS. Nguyễn Việt Cường
Trường học	Trường Đại Học Lạc Hồng
Chuyên ngành	Khoa Dược
Thể loại	Báo Cáo Nghiên Cứu Khoa Học
Năm xuất bản	2023
Thành phố	Đồng Nai

Định dạng
Số trang	61
Dung lượng	1,65 MB