0120 nghiên cứu xây dựng quy trình định lượng đồng thời metformin và sitagliptin trong viên nén bằng phương pháp hplc

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ PHẠM THỊ MỸ LỆ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI METFORMIN VÀ SITAGLIPTIN TRONG VIÊN NÉN BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC TS NGUYỄN THỊ NGỌC VÂN Cần Thơ - 2014 i LỜI CẢM ƠN Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến cô TS Nguyễn Thị Ngọc Vân, người tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu, định hướng giải vấn đề mà em gặp phải suốt trình làm đề tài tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến cô Ths Nguyễn Ngọc Nhã Thảo tận tình bảo, hỗ trợ động viên em suốt thời gian làm đề tài Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy Ths Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ, cô Ths Dương Thị Trúc Ly, Ths Nguyễn Thị Bích Thủy, Ds Nguyễn Thị Tường Vi thầy Ds Lữ Thiện Phúc ln động viên, tận tình chia sẻ kinh nghiệm quý báu tạo điều kiện thuận lợi để em hoàn thành đề tài tốt nghiệp Em không quên gửi lời cảm ơn đến cô Nguyễn Thị Đặng, cô Trần Thị Thanh Thúy động viên tinh thần giúp đỡ em suốt trình thực đề tài Liên mơn Hóa phân tích - Kiểm nghiệm - Độc chất Mình xin chân thành cảm ơn bạn lớp Dược khóa 35, em lớp Dược khóa 36 quan tâm, chia sẻ khó khăn giúp đỡ để hồn thành đề tài tốt nghiệp Con xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến ba mẹ động viên vượt qua khó khăn suốt thời gian làm đề tài ii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các số liệu, kết nêu luận văn đảm bảo tính trung thực chưa cơng bố cơng trình nghiên cứu khác Cần Thơ, tháng 06 năm 2014 Phạm Thị Mỹ Lệ iii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i LỜI CAM ĐOAN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ ix ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG - TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 METFORMIN HYDROCLORID 1.1.1 Đại cương 1.1.2 Tính chất lý hóa 1.1.3 Tính chất dược lý 1.1.4 Một số phương pháp định lượng metformin hydroclorid 1.2 SITAGLIPTIN PHOSPHAT MONOHYDRAT 1.2.1 Đại cương 1.2.2 Tính chất lý hóa 1.2.3 Tính chất dược lý 1.2.4 Một số phương pháp định lượng sitagliptin phosphat monohydrat 1.3 CÁC NGHIÊN CỨU LIÊN QUAN ĐẾN ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI METFORMIN VÀ SITAGLIPTIN 10 1.4 THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG 12 1.4.1 Khái niệm 12 1.4.2 Các yêu cầu thẩm định qui trình phân tích định lượng 12 CHƯƠNG - ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 16 2.1.1 Chế phẩm Janumet® 16 iv 2.1.2 Chất chuẩn làm việc 16 2.2 ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 16 2.3 HÓA CHẤT - DUNG MÔI - TRANG THIẾT BỊ 16 2.3.1 Hóa chất - dung môi 16 2.3.2 Trang thiết bị 17 2.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.4.1 Xử lý mẫu 18 2.4.2 Thăm dò điều kiện sắc ký tối ưu 18 2.4.3 Xác định tính tương thích hệ thống quy trình định lượng 20 2.4.4 Thẩm định quy trình định lượng đồng thời metformin sitagliptin 21 2.4.5 Áp dụng quy trình định lượng đồng thời metformin sitagliptin với chế phẩm thị trường 25 CHƯƠNG - KẾT QUẢ 27 3.1 KHẢO SÁT ĐIỀU KIỆN SẮC KÝ TỐI ƯU 27 3.1.1 Bước sóng phát 27 3.1.2 Pha động 27 3.2 XÁC ĐỊNH TÍNH TƯƠNG THÍCH HỆ THỐNG 29 3.2.1 Xác định tính tương thích hệ thống mẫu chuẩn 29 3.2.2 Xác định tính tương thích hệ thống mẫu thử 29 3.3 THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI METFORMIN VÀ SITAGLIPTIN 31 3.3.1 Tính đặc hiệu 31 3.3.2 Tính tuyến tính 35 3.3.3 Độ xác 37 3.3.4 Độ 40 3.4 ÁP DỤNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI METFORMIN VÀ SITAGLIPTIN VỚI CHẾ PHẤM TRÊN THỊ TRƯỜNG 42 CHƯƠNG - BÀN LUẬN 43 4.1 KHẢO SÁT ĐIỀU KIỆN SẮC KÝ TỐI ƯU 43 v 4.1.1 Bước sóng phát 43 4.1.2 Pha động 44 4.2 TÍNH TƯƠNG THÍCH HỆ THỐNG 46 4.3 THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI METFORMIN VÀ SITAGLIPTIN 47 4.3.1 Tính đặc hiệu 47 4.3.2 Tính tuyến tính 48 4.3.3 Độ xác 49 4.3.4 Độ 49 4.3 ÁP DỤNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI METFORMIN VÀ SITAGLIPTIN VỚI CHẾ PHẤM TRÊN THỊ TRƯỜNG 50 KẾT LUẬN 51 KIỂN NGHỊ 52 PHỤ LỤC vi DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Từ nguyên Nghĩa Tiếng Việt ̅ 𝐗 Giá trị trung bình µ Khoảng tin cậy ACN Acetonitril As Asymmetry factor Hệ số bất đối DAD Diode array detector Đầu dò dãy diod quang DPP Dipeptidyl peptidase Men dipeptidyl peptidase Giới hạn tin cậy e HPLC High performance liquid Sắc ký lỏng hiệu cao chromatography k' Capacity factor Hệ số dung lượng N Theoretical plates Số đĩa lý thuyết MeOH Methanol MET Metformin hydroclorid Pic Peak Đỉnh sắc ký đồ R2 Coefficient of Correlation Hệ số tương quan RP Reversed phase Pha đảo Rs Resolution factor Hệ số phân giải RSD Relative Standard Deviation Độ lệch chuẩn tương đối S Area Diện tích đỉnh SD Standard deviation Độ lệch chuẩn SKĐ Sắc ký đồ Sắc ký đồ SIT Sitagliptin tR Retention time tt/tt Thể tích / thể tích TEA Triethylamin UV-Vis Ultraviolet-visible spectrophotometry Thời gian lưu Quang phổ tử ngoại khả kiến vii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Phương pháp định lượng metformin viên nén theo tiêu chuẩn số Dược điển Bảng 1.2 Các nghiên cứu định lượng metformin phương pháp HPLC Bảng 1.3 Các nghiên cứu định lượng sitagliptin phương pháp HPLC Bảng 1.4 Tóm tắt điều kiện sắc ký định lượng đồng thời metformin sitagliptin phương pháp HPLC 11 Bảng 2.1 Độ tinh khiết chất chuẩn làm việc 16 Bảng 2.2 Các hóa chất dung mơi sử dụng 17 Bảng 2.3 Các trang thiết bị sử dụng 17 Bảng 2.4 Các điều kiện pha động khảo sát 20 Bảng 2.5 Nồng độ dung dịch xây dựng đường chuẩn 22 Bảng 3.1 Kết khảo sát tính tương thích hệ thống metformin sitagliptin mẫu chuẩn 29 Bảng 3.2 Kết khảo sát tính tương thích hệ thống metformin sitagliptin mẫu thử 29 Bảng 3.3 Kết khảo sát độ tinh khiết pic 32 Bảng 3.4 Kết khảo sát độ tương đồng phổ thử phổ chuẩn 33 Bảng 3.5 Kết khảo sát tính tuyến tính nồng độ diện tích đỉnh metformin sitagliptin mẫu chuẩn 35 Bảng 3.6 Tính tương thích, ý nghĩa hệ số phương trình hồi quy 36 Bảng 3.7 Kết khảo sát độ lặp lại định lượng metformin mẫu thử 37 Bảng 3.8 Kết khảo sát độ lặp lại định lượng sitagliptin mẫu thử 37 Bảng 3.9 Kết khảo sát độ xác trung gian định lượng metformin 38 mẫu thử 38 Bảng 3.10 Kết khảo sát độ xác trung gian định lượng sitagliptin 38 mẫu thử 38 viii Bảng 3.11 Kết thử độ phương pháp định lượng metformin sitagliptin 41 Bảng 3.12 Kết xác định hàm lượng metformin sitagliptin 42 chế phẩm thị trường 42 Bảng 4.1 Giới hạn hàm lượng hoạt chất viên nén theo quy định 50 Dược điển Việt Nam IV 50 Bảng 4.2 Kết đánh giá hàm lượng metformin sitagliptin 50 chế phẩm Janumet® 50 ix DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Cấu trúc hóa học metformin hydroclorid Hình 1.2 Cấu trúc hóa học sitagliptin phosphat monohydrat Hình 3.1 Hình ảnh chồng phổ UV-Vis metformin sitagliptin 27 Hình 3.2 SKĐ điều kiện pha động (1), (2), (3), (4), (5), (6), (7) (8) 28 Hình 3.3 SKĐ phổ chiều mẫu chuẩn điều kiện sắc ký tối ưu 29 Hình 3.4 SKĐ tính tương thích hệ thống mẫu chuẩn 30 Hình 3.5 SKĐ tính tương thích hệ thống mẫu thử 30 Hình 3.6 SKĐ mẫu pha động, mẫu trắng B1, mẫu chuẩn, 31 mẫu thử, mẫu thử thêm chuẩn 31 Hình 3.7 SKĐ mẫu thử, mẫu trắng B2, mẫu thử phân hủy NaOH 0,1N sau 36 giờ, mẫu trắng B3, mẫu thử phân hủy HCl 0,1N sau 36 32 Hình 3.8 Kết kiểm tra độ tinh khiết pic metformin mẫu thử 33 Hình 3.9 Kết kiểm tra độ tinh khiết pic sitagliptin mẫu thử 33 Hình 3.10 Kết thử độ tương đồng phổ UV-Vis metformin chuẩn phổ UV-Vis metformin mẫu thử 34 Hình 3.11 Kết thử độ tương đồng phổ UV-Vis sitagliptin chuẩn phổ UV-Vis sitagliptin mẫu thử 34 Hình 3.12 Đồ thị tuyến tính metformin hỗn hợp chuẩn 35 Hình 3.13 Đồ thị tuyến tính sitagliptin hỗn hợp chuẩn 36 Hình 3.14 SKĐ tính tuyến tính metformin sitagliptin hỗn hợp chuẩn 36 Hình 3.15 SKĐ khảo sát độ lặp lại, độ xác trung gian (ngày 1) phương pháp định lượng đồng thời metformin sitagliptin 39 Hình 3.16 SKĐ khảo sát độ xác trung gian (ngày 2) phương pháp định lượng đồng thời metformin sitagliptin 39 Hình 3.17 SKĐ khảo sát độ xác trung gian (ngày 3) phương pháp định lượng đồng thời metformin sitagliptin 40 Hình 3.18 SKĐ độ phương pháp định lượng đồng thời metformin sitagliptin chế phẩm 41 PL - 11 PHỤ LỤC CÁC SẮC KÝ ĐỒ PL 5.1 SKĐ tính tương thích hệ thống mẫu chuẩn lần tiêm External Standard Report 8 6 4 2 0 mAU mAU EZChrom Elite for Hitachi Version 317a Method Name: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Method\Optimal condition.met Data: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Data\Thamdinh I (7-5-14)\tuongthich he thong\hhchuan (lan 1) User: myle Acquired: 5/7/2014 1:03:38 PM Printed: 5/17/2014 5:46:16 PM 10 Minutes DAD-CH2 265 nm Results Name Metformin Sitagliptin Totals Retention Area Time 2.853 6.353 Theoretical plates (USP) 145288 5821 100638 10336 Capacity factor 0.78333 2.97083 Resolution Asymmetry (USP) 1.47853 17.51914 245926 Instrument Name: Instrument (Offline) Software Version: Version LaChrom 890-8800-09 Acquisition Method: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Method\Optimal condition.met Sequence: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Sequence\Thamdinhquytrinh.seq 1.39450 1.12594 PL - 12 PL 5.2 SKĐ tính tương thích hệ thống mẫu thử lần tiêm External Standard Report 10 10 5 0 mAU mAU EZChrom Elite for Hitachi Version 317a Method Name: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Method\Optimal condition.met Data: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Data\Thamdinh I (7-5-14)\tuongthich he thong\thu (lan 1) User: myle Acquired: 5/7/2014 2:26:06 PM Printed: 5/17/2014 6:23:02 PM 10 Minutes DAD-CH2 265 nm Results Name Metformin Sitagliptin Totals Retention Area Time 2.853 6.327 Theoretical Capacity Resolution Asymmetry plates factor (USP) (USP) 134665 5831 0.78333 1.47866 1.42835 77801 10300 2.95417 17.41780 1.11943 213182 Instrument Name: Instrument (Offline) Software Version: Version LaChrom 890-8800-09 Acquisition Method: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Method\Optimal condition.met Sequence: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Sequence\Thamdinhquytrinh.seq PL - 13 PL 5.3 SKĐ tính tuyến tính hỗn hợp chuẩn bình External Standard Report EZChrom Elite for Hitachi Version 317a Method Name: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Method\Optimal condition.met Data: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Data\Thamdinh IV (12-5-14)\Tinhtuyentinh (Chinhthuc)\hhchuan 20-2.dat User: myle Acquired: 5/12/2014 12:39:56 AM Printed: 5/21/2014 8:14:20 AM DAD-CH2 265 nm Results Name Metformin Sitagliptin Totals Retention Area Time 2.860 6.373 Theoretical Capacity Resolution Asymmetry plates factor (USP) (USP) 33177 5348 0.78750 1.50199 1.10300 16135 11272 2.98333 17.71964 1.13143 49312 Instrument Name: Instrument (Offline) Software Version: Version LaChrom 890-8800-09 Acquisition Method: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Method\Optimal condition.met Sequence: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Sequence\Thamdinhquytrinh.seq PL - 14 PL 5.4 SKĐ tính tuyến tính hỗn hợp chuẩn bình External Standard Report EZChrom Elite for Hitachi Version 317a Method Name: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Method\Optimal condition.met Data: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Data\Thamdinh IV (12-5-14)\Tinhtuyentinh (Chinhthuc)\hhchuan 40-4.dat User: myle Acquired: 5/12/2014 12:51:59 AM Printed: 5/21/2014 8:22:07 AM DAD-CH2 265 nm Results Name Metformin Sitagliptin Totals Retention Area Time 2.860 6.380 Theoretical Capacity Resolution Asymmetry plates factor (USP) (USP) 65415 5528 0.78750 1.49259 1.20366 36532 10401 2.98750 17.42144 1.07046 101947 Instrument Name: Instrument (Offline) Software Version: Version LaChrom 890-8800-09 Acquisition Method: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Method\Optimal condition.met Sequence: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Sequence\Thamdinhquytrinh.seq PL - 15 PL 5.5 SKĐ tính tuyến tính hỗn hợp chuẩn bình External Standard Report EZChrom Elite for Hitachi Version 317a Method Name: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Method\Optimal condition.met Data: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Data\Thamdinh IV (12-5-14)\Tinhtuyentinh (Chinhthuc)\hhchuan 80-8.dat User: myle Acquired: 5/12/2014 12:19:16 AM Printed: 5/21/2014 8:27:34 AM 5 0 mAU 10 mAU 10 10 Minutes DAD-CH2 265 nm Results Name Metformin Sitagliptin Totals Retention Area Time 2.853 6.373 Theoretical Capacity Resolution Asymmetry plates factor (USP) (USP) 123859 5594 0.78333 1.48855 1.30079 71351 10626 2.98333 17.60390 1.15700 195210 Instrument Name: Instrument (Offline) Software Version: Version LaChrom 890-8800-09 Acquisition Method: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Method\Optimal condition.met Sequence: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Sequence\Thamdinhquytrinh.seq PL - 16 PL 5.6 SKĐ tính tuyến tính hỗn hợp chuẩn bình External Standard Report 10 10 5 0 10 Minutes DAD-CH2 265 nm Results Name Metformin Sitagliptin Totals Retention Area Time 2.853 6.380 Theoretical Capacity Resolution Asymmetry plates factor (USP) (USP) 258963 5502 0.78333 1.49772 1.39726 147752 10397 2.98750 17.45217 1.11038 406715 Instrument Name: Instrument (Offline) Software Version: Version LaChrom 890-8800-09 Acquisition Method: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Method\Optimal condition.met Sequence: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Sequence\Thamdinhquytrinh.seq mAU mAU EZChrom Elite for Hitachi Version 317a Method Name: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Method\Optimal condition.met Data: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Data\Thamdinh IV (12-5-14)\Tinhtuyentinh (Chinhthuc)\hhchuan 160-16.dat User: myle Acquired: 5/11/2014 11:45:58 PM Printed: 5/21/2014 8:31:01 AM PL - 17 PL 5.7 SKĐ tính tuyến tính hỗn hợp chuẩn bình External Standard Report EZChrom Elite for Hitachi Version 317a Method Name: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Method\Optimal condition.met Data: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Data\Thamdinh IV (12-5-14)\Tinhtuyentinh (Chinhthuc)\hhchuan 200-20.dat User: myle Acquired: 5/11/2014 11:34:50 PM Printed: 5/21/2014 8:33:23 AM 10 10 5 0 mAU 15 mAU 15 10 Minutes DAD-CH2 265 nm Results Name Metformin Sitagliptin Totals Retention Area Time 2.860 6.387 Theoretical Capacity Resolution Asymmetry plates factor (USP) (USP) 324580 5482 0.78750 1.48840 1.36566 180726 10425 2.99167 17.42788 1.13280 505306 Instrument Name: Instrument (Offline) Software Version: Version LaChrom 890-8800-09 Acquisition Method: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Method\Optimal condition.met Sequence: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Sequence\Thamdinhquytrinh.seq PL - 18 PL 5.8 SKĐ tính tuyến tính hỗn hợp chuẩn bình External Standard Report EZChrom Elite for Hitachi Version 317a Method Name: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Method\Optimal condition.met Data: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Data\Thamdinh IV (12-5-14)\Tinhtuyentinh (Chinhthuc)\hhchuan 400-40.dat User: myle Acquired: 5/11/2014 11:24:05 PM Printed: 5/21/2014 8:49:04 AM 20 20 10 10 0 mAU 30 mAU 30 10 Minutes DAD-CH2 265 nm Results Name Metformin Sitagliptin Totals Retention Area Time 2.853 6.393 Theoretical Capacity Resolution Asymmetry plates factor (USP) (USP) 656188 5542 0.78333 1.47589 1.39868 375190 10282 2.99583 17.45956 1.11300 213100 Instrument Name: Instrument (Offline) Software Version: Version LaChrom 890-8800-09 Acquisition Method: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Method\Optimal condition.met Sequence: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Sequence\Thamdinhquytrinh.seq PL - 19 PL 5.9 SKĐ độ xác ngày - mẫu thử External Standard Report 10 10 5 0 mAU mAU EZChrom Elite for Hitachi Version 317a Method Name: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Method\Optimal condition.met Data: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Data\Thamdinh I (7-5-14)\do chinhxacngay I\I- thu User: myle Acquired: 5/7/2014 5:30:13 PM Printed: 5/17/2014 6:42:43 PM 10 Minutes DAD-CH2 265 nm Results Name Metformin Sitagliptin Totals Retention Area Time 2.853 6.300 Theoretical Capacity Resolution Asymmetry plates factor (USP) (USP) 166938 5853 0.78333 1.49251 1.37578 94817 10596 2.93750 17.49632 1.10738 261755 Instrument Name: Instrument (Offline) Software Version: Version LaChrom 890-8800-09 Acquisition Method: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Method\Optimal condition.met Sequence: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Sequence\Thamdinhquytrinh.seq PL - 20 PL 5.10 SKĐ độ xác ngày - mẫu thử External Standard Report 10 10 5 0 mAU mAU EZChrom Elite for Hitachi Version 317a Method Name: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Method\Optimal condition.met Data: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Data\Thamdinh II (8-5-14)\II- thu User: myle Acquired: 5/8/2014 9:16:56 AM Printed: 5/17/2014 6:55:21 PM 10 Minutes DAD-CH2 265 nm Results Name Metformin Sitagliptin Totals Retention Area Time 2.847 6.380 Theoretical Capacity Resolution Asymmetry plates factor (USP) (USP) 170436 5868 0.77917 1.47525 1.32101 94181 10263 2.98750 17.64234 1.12401 264617 Instrument Name: Instrument (Offline) Software Version: Version LaChrom 890-8800-09 Acquisition Method: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Method\Optimal condition.met Sequence: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Sequence\Thamdinhquytrinh.seq PL - 21 PL 5.11 SKĐ độ xác ngày - mẫu thử External Standard Report EZChrom Elite for Hitachi Version 317a Method Name: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Method\Optimal condition.met Data: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Data\Thamdinh III (9-5-14)\Do chinhxacngay III\III - thu 1.dat User: myle Acquired: 5/9/2014 11:00:20 AM Printed: 5/17/2014 7:06:39 PM 10 10 5 0 mAU 15 mAU 15 10 Minutes DAD-CH2 265 nm Results Name Metformin Sitagliptin Totals Retention Area Time 2.820 6.293 Theoretical Capacity Resolution Asymmetry plates factor (USP) (USP) 170199 5644 0.76250 1,48990 1.42325 94803 10114 2.93333 17.34708 1.12227 264002 Instrument Name: Instrument (Offline) Software Version: Version LaChrom 890-8800-09 Acquisition Method: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Method\Optimal condition.met Sequence: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Sequence\Thamdinhquytrinh.seq PL - 22 PL 5.12 SKĐ độ - mẫu thử thêm 80% chuẩn - bình External Standard Report EZChrom Elite for Hitachi Version 317a Method Name: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Method\Rua cot 50(B)-50(C).met Data: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Data\Thamdinh IV (12-5-14)\Do dung 12-5-14 \them chuan 80%.dat User: myle Acquired: 5/12/2014 5:41:10 AM Printed: 5/21/2014 8:50:58 AM 10 10 5 0 mAU 15 mAU 15 10 Minutes DAD-CH2 265 nm Results Name Metformin Sitagliptin Totals Retention Area Time 2.880 6.360 Theoretical Capacity Resolution Asymmetry plates factor (USP) (USP) 302091 5625 0.71513 1.48795 1.44082 170258 10362 2.90400 17.24829 1.15654 472349 Instrument Name: Instrument (Offline) Software Version: Version LaChrom 890-8800-09 Acquisition Method: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Method\Optimal condition.met Sequence: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Sequence\Thamdinhquytrinh.seq PL - 23 PL 5.13 SKĐ độ - mẫu thử thêm 100 % chuẩn - bình External Standard Report 20 20 10 10 0 mAU mAU EZChrom Elite for Hitachi Version 317a Method Name: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Method\Optimal condition.met Data: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Data\Thamdinh IV (12-5-14)\Do dung 12-5-14\them chuan 100% - II-1 User: myle Acquired: 5/12/2014 6:40:44 AM Printed: 5/21/2014 9:01:12 AM 10 Minutes DAD-CH2 265 nm Results Name Metformin Sitagliptin Totals Retention Area Time 2.880 6.373 Theoretical Capacity Resolution Asymmetry plates factor (USP) (USP) 333383 5652 0.80000 1.48977 1.42027 187659 10128 2.98333 17.18554 1.11715 521042 Instrument Name: Instrument (Offline) Software Version: Version LaChrom 890-8800-09 Acquisition Method: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Method\Optimal condition.met Sequence: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Sequence\Thamdinhquytrinh.seq PL - 24 PL 5.14 SKĐ độ - mẫu thử thêm 120 % chuẩn - bình External Standard Report 20 20 10 10 0 mAU mAU EZChrom Elite for Hitachi Version 317a Method Name: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Method\Optimal condition.met Data: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Data\Thamdinh IV (12-5-14)\Do dung 12-5-14\them chuan 120% II-1.dat User: myle Acquired: 5/12/2014 6:02:55 AM Printed: 5/21/2014 9:07:43 AM 10 Minutes DAD-CH2 265 nm Results Name Metformin Sitagliptin Totals Retention Area Time 2.880 6.367 Theoretical Capacity Resolution Asymmetry plates factor (USP) (USP) 370295 5646 0.88000 1.50233 1.43051 206057 10456 2.96667 17.33073 1.13145 576352 Instrument Name: Instrument (Offline) Software Version: Version LaChrom 890-8800-09 Acquisition Method: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Method\Optimal condition.met Sequence: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Sequence\Thamdinhquytrinh.seq PL - 25 PL 5.15 SKĐ xác định hàm lượng metformin sitagliptin chế phẩm Janumet® - lần External Standard Report EZChrom Elite for Hitachi Version 317a Method Name: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Method\Optimal condition.met Data: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Data\Tham dinh IV (12-5-14)\Dinh luong Janumet\M1 User: myle Acquired: 5/12/2014 6:35:15 PM Printed: 5/27/2014 12:13:40 PM 5 0 mAU 10 mAU 10 10 Minutes DAD-CH2 265 nm Results Name Metformin Sitagliptin Totals Retention Area Time 2.880 6.360 Theoretical Capacity Resolution Asymmetry plates factor (USP) (USP) 169384 5853 0.78333 1.49932 1.38579 94122 10596 2.93750 17.49632 1.10738 263506 Instrument Name: Instrument (Offline) Software Version: Version LaChrom 890-8800-09 Acquisition Method: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Method\Optimal condition.met Sequence: C:\EZChrom Elite\Enterprise\Projects\METFORMIN VA SITAGLIPTIN\Sequence\Thamdinhquytrinh.seq