Nghiên cứu xây dựng qui trình định lượng đồng thời dư lượng một số kháng sinh nhóm macrolid, aminosid có trong nước thải bằng phương pháp lc ms

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ TRẦN VĂN DUY THÁI NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUI TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI DƯ LƯỢNG MỘT SỐ KHÁNG SINH NHÓM MACROLID, AMINOGLYCOSID CÓ TRONG NƯỚC THẢI BẰNG PHƯƠNG PHÁP LC- MS/MS LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƯỢC SỸ ĐẠI HỌC CẦN THƠ- 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ TRẦN VĂN DUY THÁI NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUI TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI DƯ LƯỢNG MỘT SỐ KHÁNG SINH NHÓM MACROLID, AMINOGLYCOSID CÓ TRONG NƯỚC THẢI BẰNG PHƯƠNG PHÁP LC- MS/MS LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƯỢC SỸ ĐẠI HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS ĐỖ CHÂU MINH VĨNH THỌ ThS DƯƠNG THỊ TRÚC LY Cần Thơ - 2018 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, xin gửi lời cảm ơn đến Cha, Mẹ em gái Cha, Mẹ em luôn quan tâm, chăm sóc cho con, làm lụng vất vả để tạo hết điều kiện tốt cho học tập Thứ hai, em muốn gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến thầy TS Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ - Trưởng Liên mơn Hóa phân tích - Kiểm nghiệm Độc chất quan tâm, giúp đỡ, truyền đạt cho em kiến thức thật quý báu lời khuyên bổ ích để giúp em hồn thành luận văn Khơng thế, thầy cịn người gắn bó, đồng hành em suốt quãng thời gian thực luận văn, giúp đỡ em gặp khó khăn, trắc trở Em cảm thấy may mắn trở thành học trò thầy Em khơng qn giúp đỡ, hỗ trợ tận tình thầy liên mơn Hóa phân tích - Kiểm nghiệm - Độc chất tạo điều kiện cho em có đầy đủ dụng cụ, trang thiết bị, máy móc để thực đề tài Ngồi ra, em muốn cảm ơn cô Trúc Ly Nhã Thảo ln quan tâm đến q trình thực đề tài em Thứ ba, em xin gửi lời cảm ơn đến Ths Liên Ths Luy (Trung tâm chất lượng nông lâm thủy sản vùng 6, NAFI 6) giúp đỡ hỗ trợ chất chuẩn, hóa chất, kinh nghiệm phân tích mẫu để em hoàn thành tốt luận văn Em xin gửi lời cảm ơn đến anh chị K38, đặc biệt anh Anh Thi ln hỗ trợ hết mình, dẫn tận tình giúp đỡ em hồn thành tốt luận văn Em xin cảm ơn chị Thu Hường, chị Phương Thảo giúp đỡ em nhiều q trình thực đề tài Ngồi em muốn gửi lời cảm ơn đến chị Kiều Hân Dược K36, em Xuân Quỳnh Dược K41 giúp đỡ em trình lấy mẫu Lời cảm ơn cuối cùng, xin cảm ơn bạn làm đề tài Kiểm nghiệm K39, đặc biệt hai bạn Cẩm Nhung Nhật Tồn Các bạn ln chia sẻ, động viên, giúp đỡ gặp khó khăn, trải qua nhiều kỉ niệm vui buồn Mình ln trân trọng thấy vui có hội quen biết Ngồi ra, muốn cảm ơn đến bạn làm đề tài Dược liệu K39, đặc biệt bạn Thanh Hào Mình muốn cảm ơn bạn Trần Thảo, Vũ Thảo, Hoàng Thiên, Thanh Thanh, Xuân Phương, Thanh Phương, Trung Triều, Hoàng Minh, Mai Phương, Ngọc Tín ln giúp đỡ em mặt tinh thần hỗ trợ em việc làm đề tài Cảm ơn người tất LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng hướng dẫn TS Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ Các số liệu, kết thực nghiệm nêu luận văn trung thực, chưa công bố tài liệu khác Cần Thơ, ngày 14 tháng 06 năm 2018 Sinh viên thực Trần Văn Duy Thái i MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN LỜI CAM ĐOAN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TĂT v DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC HÌNH VẼ viii DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ x ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan số kháng sinh nhóm Macrolid nghiên cứu 1.1.1 Azithromycin .4 1.1.2 Clarithromycin 1.1.3 Erythromycin .5 1.1.4 Roxithromycin 1.1.5 Độc tính nhóm Macrolid 1.1.6 Các phương pháp định lượng số kháng sinh nhóm Macrolid Dược điển nước 1.2 Tổng quan số kháng sinh nhóm Aminoglycosid nghiên cứu .8 1.2.1 Amikacin .8 1.2.2 Gentamicin sulfat 1.2.3 Kanamycin Sulfat .9 1.2.4 Streptomycin sulfat 10 1.2.5 Tobramycin .10 1.2.5 Độc tính nhóm Aminoglycosid 11 ii 1.2.6 Các phương pháp định lượng số kháng sinh nhóm Aminoglycosid Dược điển nước 11 1.3 Các nghiên cứu liên quan đến phƣơng pháp định lƣợng kháng sinh nhóm Macrolid Aminoglycosid nƣớc thải phƣơng pháp sắc ký lỏng 12 1.3.1 Trên giới 12 1.3.2 Tại Việt Nam 14 1.4 Tổng quan phƣơng pháp lấy mẫu bảo quản mẫu nƣớc thải 17 1.4.1 Phương pháp lấy mẫu nước thải 17 1.4.2 Phương pháp bảo quản mẫu 20 1.5 Tổng quan sắc ký lỏng ghép khối phổ (LC-MS/MS) .20 1.5.1 Sắc ký lỏng siêu hiệu .21 1.5.2 Đầu dò khối phổ ba lần tứ cực 21 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.1 Đối tƣợng 25 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 25 2.1.2 Tiêu chuẩn chọn mẫu .25 2.1.3 Ngun vật liệu - hóa chất, dung mơi - trang thiết bị 25 2.1.4 Địa điểm nghiên cứu thời gian nghiên cứu .26 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 26 2.2.1 Chuẩn bị mẫu .26 2.2.2 Xây dựng quy trình định lượng Azithromycin, Clarithromycin, Erythromycin, Roxithromycin, Amikacin, Gentamicin, Kanamycin, Streptomycin, Tobramycin mẫu thử giả lập phương pháp LCMS/MS 27 iii 2.2.3 Thẩm định quy trình định lượng Azithromycin, Clarithromycin, Erythromycin, Roxithromycin, Gentamicin, Kanamycin, Streptomycin, Tobramycin mẫu thử giả lập phương pháp LC-MS/MS 33 2.3 Ứng dung quy trình thẩm định để định lƣợng dƣ lƣợng kháng sinh nhóm Macrolid Aminoglycosid có nƣớc thải thu thập tỉnh Bạc Liêu, Cà Mau, Trà Vinh nƣớc thải công nghiệp Bạc Liêu 36 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 37 3.1 Xây dựng quy trình định lƣợng 37 3.1.1 Khảo sát lựa chọn nội chuẩn 37 3.1.2 Khảo sát điều kiện khối phổ .38 3.1.3 Khảo sát điều kiện sắc ký thích hợp 41 3.1.4 Quy trình xử lý mẫu thích hợp 43 3.1.5 Khảo sát độ ổn định mẫu phân tích 45 3.1.6 Đánh giá ảnh hưởng nhiễu lên chất phân tích .47 3.2 Thẩm định quy trình định lƣợng 48 3.2.1 Tính tương thích hệ thống 48 3.2.2 Tính đặc hiệu - chọn lọc 50 3.2.3 Khoảng tuyến tính đường chuẩn 54 3.2.4 Giới hạn phát giới hạn định lượng .55 3.2.5 Độ độ xác .57 3.3 Ứng dung quy trình thẩm định để phân tích dƣ lƣợng kháng sinh Azithromycin, Clarithromycin, Erythromycin, Roxithromycin, Amikacin, Gentamicin, Kanamycin, Streptomycin, Tobramycin mẫu nƣớc thải vùng nuôi trồng thủy sản thu thập Bạc Liêu, Cà Mau, Trà Vinh mẫu nƣớc thải công nghiệp .59 iv CHƢƠNG BÀN LUẬN 61 4.1 Phƣơng pháp phân tích kháng sinh nhóm Macrolid Aminoglycosid 61 4.2 Xây dựng quy trình định lƣợng kháng sinh nhóm Macrolid Aminoglycosid 61 4.2.1 Lựa chọn phương pháp phân tích .61 4.2.2 Khảo sát nội chuẩn 62 4.2.3 Khảo sát điều kiện khối phổ .62 4.2.3 Khảo sát điều kiện sắc ký thích hợp 66 4.2.4 Khảo sát quy trình xử lý mẫu thích hợp 69 4.2.5 Khảo sát ổn định mẫu phân tích 70 4.2.6 Khảo sát ảnh hưởng nhiễu lên chất phân tích .70 4.3 Thẩm định quy trình định lƣợng 70 4.3.1 Tính tương thích hệ thống 70 4.3.2 Tính đặc hiệu- chọn lọc 71 4.3.3 Khoảng tuyến tính đường chuẩn 71 4.3.4 Giới hạn phát giới hạn định lượng .72 4.3.5 Độ độ xác 72 4.4 Ứng dụng quy trình thẩm định 73 4.4.1 Tình hình sử dụng kháng sinh ni trồng thủy hải sản 73 4.4.2 Áp dụng quy trình thẩm định để định lượng mẫu thu thập .73 KẾT LUẬN 75 KIẾN NGHỊ 77 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC v DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TĂT Chữ tắt, ký hiệu Chữ nguyên Ý nghĩa AF Acid formic Acid formic Amikacin Amikacin AMI AOAC Association of Official Hiệp hội hóa học phân tích quốc Analytical Chemists tế AZI Azithromycin Azithromycin CB Conduction band Vùng dẫn lượng cao Clarithromycin Clarithromycin đl Định lượng Định lượng đt Định tính Định tính CLAR ESI Electrospray ion ERY Erythromycin Erythromycin GENT Gentamicin Gentamicin HFBA Heptafluorobutyric acid Heptafluorobutyric acid HPLC IS KANA LC LC-MS High Performance Liquid Chromatography Internal Standard Chuẩn nội Kanamycin Kanamycin Liquid Chromatography Liquid ChromatographyMass Spectrometry LOD Limit Of Detection LOQ Limit Of Quantification Khối lượng/điện tích m/z MRM Sắc ký lỏng hiệu cao Multiple Reaction Monitoring