Nghiên cứu xây dựng quy trình phân tích đồng thời dư lượng các kháng sinh sulfonamid và trimethoprim thường sử dụng trong thịt gia súc, gia cầm bằng phương pháp lc ms

LÂM ĐẠI DƯƠNG BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ LÂM ĐẠI DƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÂN TÍCH ĐỒNG THỜI DƯ LƯỢNG CÁC KHÁNG SINH SULFONAMID VÀ TRIMETHOPRIM THƯỜNG SỬ DỤNG TRONG THỊT GIA SÚC, GIA CẦM BẰNG PHƯƠNG PHÁP LC-MS/MS LUẬN VĂN THẠC SĨ CẦN THƠ - 2021 Cần Thơ - 2021 LÂM ĐẠI DƯƠNG BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ LÂM ĐẠI DƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÂN TÍCH ĐỒNG THỜI DƯ LƯỢNG CÁC KHÁNG SINH SULFONAMID VÀ TRIMETHOPRIM THƯỜNG SỬ DỤNG TRONG THỊT GIA SÚC, GIA CẦM BẰNG PHƯƠNG PHÁP LC-MS/MS LUẬN VĂN THẠC SĨ CẦN THƠ - 2021 Cần Thơ - 2021 LÂM ĐẠI DƯƠNG BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ LÂM ĐẠI DƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÂN TÍCH ĐỒNG THỜI DƯ LƯỢNG CÁC KHÁNG SINH SULFONAMID VÀ TRIMETHOPRIM THƯỜNG SỬ DỤNG TRONG THỊT GIA SÚC, GIA CẦM BẰNG PHƯƠNG PHÁP LC-MS/MS LUẬN VĂN THẠC SĨ CẦN THƠ - 2021 Cần Thơ - 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ LÂM ĐẠI DƯƠNG NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÂN TÍCH ĐỒNG THỜI DƯ LƯỢNG CÁC KHÁNG SINH SULFONAMID VÀ TRIMETHOPRIM THƯỜNG SỬ DỤNG TRONG THỊT GIA SÚC, GIA CẦM BẰNG PHƯƠNG PHÁP LC-MS/MS Chuyên ngành: Kiểm Nghiệm Thuốc Độc Chất MS: 8720210 LUẬN VĂN THẠC SĨ Người hướng dẫn khoa học: PGS TS ĐỖ CHÂU MINH VĨNH THỌ Cần Thơ – 2021 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu Các số liệu, kết nêu luận văn đảm bảo tính trung thực chưa cơng bố cơng trình nghiên cứu khác Cần Thơ, ngày 24 tháng 09 năm 2021 Tác giả luận văn Lâm Đại Dương LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin chân thành gửi lời tri ân sâu sắc đến Thầy PGS TS Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ, người đồng hành, hướng dẫn, động viên, hỗ trợ, truyền cảm hứng cho suốt chặn đường nghiên cứu khoa học đầy khó khăn không thiếu niềm vui, hạnh phúc Đối với riêng tôi, làm việc hướng dẫn Thầy may mắn vinh hạnh vô to lớn điều nhận không kết cuối mà tinh thần làm việc, tư nghiên cứu tình Thầy trị khơng so sánh Tơi xin chân thành cảm ơn Thầy! Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Thầy, Cơ Liên mơn Hóa Phân Tích – Kiểm nghiệm thuốc – Độc chất hết lòng tạo điều kiện, chia sẻ kinh nghiệm, ln lắng nghe, ủng hộ tinh thần q trình thực đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn đến tập thể Anh, Chị học viên lớp sau đại học Kiểm nghiệm thuốc – Độc chất khóa 2019-2021 hỗ trợ, hợp tác, động viên lúc khó khăn suốt hai năm học tập nghiên cứu Cuối cùng, tơi xin gửi lịng biết ơn sâu sắc đến gia đình Cảm ơn người bên cạnh chia sẻ, giúp đỡ, ủng hộ để tơi có ngày hơm nay! Cần Thơ, ngày 24 tháng 09 năm 2021 Tác giả luận văn Lâm Đại Dương i MỤC LỤC Trang MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT iii DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ v DANH MỤC CÁC BẢNG vi MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan kháng sinh thực trạng sử dụng kháng sinh 1.2 Kháng sinh nhóm sulfonamid kháng sinh trimethoprim 1.3 Tổng quan tình hình nghiên cứu 12 1.4 Tổng quan phương pháp sắc ký lỏng siêu hiệu ghép đầu dò khối phổ ba tứ cực 19 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 Đối tượng 23 2.2 Phương pháp nghiên cứu 24 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 37 3.1 Xây dựng quy trình định lượng đồng thời sulfaquinoxalin, sulfathiazol, sulfamethoxazol, trimethoprim phương pháp LC-MS/MS có mẫu thịt gia súc (heo, bò), gia cầm (gà) 37 3.2 Thẩm định quy trình định lượng ứng dụng quy trình thẩm định phân tích đánh giá dư lượng kháng sinh sulfaquinoxalin, sulfathiazol, sulfamethoxazol, trimethoprim có mẫu thịt gia súc (heo, bò), gia cầm (gà) thu thập Kiên Giang 48 Chương BÀN LUẬN 63 ii 4.1 Xây dựng quy trình định lượng đồng thời sulfaquinoxalin, sulfathiazol, sulfamethoxazol, trimethoprim phương pháp LC-MS/MS có mẫu thịt gia súc (heo, bò), gia cầm (gà) 63 4.2 Thẩm định quy trình định lượng ứng dụng quy trình thẩm định phân tích đánh giá dư lượng kháng sinh sulfaquinoxalin, sulfathiazol, sulfamethoxazol, trimethoprim có mẫu thịt gia súc (heo, bò), gia cầm (gà) thu thập Kiên Giang 76 KẾT LUẬN 80 KIẾN NGHỊ 82 TÀI LIỆU THAM KHẢO iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ tắt, AOAC Ý nghĩa Chữ nguyên ký hiệu Association of official analytical Chemists Hiệp hội nhà hóa học ACN Acetonitrile Acetonitril AF Formic acid Acid formic Antimicrobial resistance Kháng thuốc AMR ANSORP BNNPTNT ESI HPLC Asian Network for Surveillance of Resistant Pathogens Mạng lưới giám sát châu Á kháng thuốc vi khuẩn gây bệnh thường gặp Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn Electrospray ion High Performance Liquid Chromatography Ion hoá phun điện tử Sắc ký lỏng hiệu cao IS Internal standard Chất nội chuẩn ISP Isopropanol Isopropanol Korean Nationwide Surveillance Mạng lưới giám sát quốc gia of Antimicrobial Resistance kháng thuốc Hàn Quốc Liquid Chromatography Sắc ký lỏng KONSAR LC LC-MS Liquid Chromatography-Mass Spectrometry Sắc ký lỏng ghép khối phổ LLE Liquid-Liquid Extraction Chiết lỏng-lỏng LOD Limit of Detection Giới hạn phát LOQ Limit of Quantification Giới hạn định lượng iv MeOH Methanol Minimal Inhibitory Concentration Nồng độ ức chế tối thiểu MRLs Maximum Residue Limit Giới hạn dư lượng tối đa MRM Multiple Reaction Monitoring Chế độ chọn lọc nhiều lần MS Mass Spectrometry Khối phổ PAD Photodiode Array Detector Đầu dò dãy diod quang ppb Part Per Billion Phần tỷ ppm Part Per Million Phần triệu MIC QCVN QuEChERS Quy chuẩn Việt Nam Quick, easy, cheap, effective, rugged, safe RSD Relative Standard Deviation Độ lệch chuẩn tương đối S/N Signal/Noise Tín hiệu/Nhiễu SD Standard Deviation Độ lệch chuẩn SIM Selected Ion Mornitoring Chế độ quét chọn lọc ion SMX Sulfamethoxazole Sulfamethoxazol SPE Solid Phase Extraction Chiết pha rắn SQX Sulfaquinoxaline Sulfaquinoxalin STZ Sulfathiazole Sulfathiazol TCVN TMP UHPLC Tiêu chuẩn Việt Nam Trimethoprim Ultra High Performance Liquid Chromatography Trimethoprim Sắc ký lỏng siêu hiệu v DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Trang Hình 1.1 Cấu trúc chung kháng sinh nhóm sulfonamid Hình 1.2 Cấu trúc kháng sinh sulfaquinoxalin 10 Hình 1.3 Cấu trúc kháng sinh sulfathiazol 10 Hình 1.4 Cấu trúc kháng sinh sulfamethoxazol 11 Hình 1.5 Cấu trúc kháng sinh trimethoprim 12 Hình 1.6 Sơ đồ khối ba tứ cực nối tiếp 21 Hình 2.1 Quy trình xử lý mẫu khảo sát…………………………….……….30 Hình 3.1 Kết auto-tune SMX (a) SQX (b) hỗn hợp chuẩn…38 Hình 3.2 Kết manual-tune ion phân tử ban đầu TMP (a) SQX (b).39 Hình 3.3 Sắc ký đồ phân tích đồng thời kháng sinh STZ, SMX, SQX, TMP điều kiện khối phổ sắc ký phù hợp……………………………… 41 Hình 3.4 Quy trình xử lý mẫu thực tế…………………………….……… 49 Hình 3.5 Sắc ký đồ mẫu dung môi (a), trắng (b), chuẩn dung môi (c), trắng thêm chuẩn (d) trắng thêm chuẩn lần (e) STZ…………………51 Hình 3.6 Phổ đồ MS1 scan mẫu trắng thịt gà thêm chuẩn……………….52 Hình 3.7 Phổ đồ MS2 scan TMP (a) STZ (b) mẫu trắng thịt gà 52 Hình 3.8 Phương trình hồi quy tuyến tính kháng sinh SMX (a), SQX (b), STZ (c), TMP (d) mẫu thịt gà truy xuất từ phần mềm Masslynx 4.1…………………………………………………………………… 54 Hình 3.9 LOD (a) LOQ (b) STZ mẫu thịt gà……………… 56 Hình 3.10 Sắc ký đồ phân tích TMP SMX mẫu thịt heo TH3………61 vi DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Kết khảo sát điều kiện MS nghiên cứu [16] 14 Bảng 1.2 Tổng hợp số cơng trình nghiên cứu giới 15 Bảng 2.1 Chuẩn bị dãy dung dịch xây dựng đường chuẩn 27 Bảng 2.2 Quy định mức độ sai lệch cho phép tỷ lệ ion mẫu chuẩn mẫu thử 33 Bảng 2.3 Độ thu hồi cho phép khoảng nồng độ khác 35 Bảng 3.1 Thơng số khối phổ tối ưu hóa phân tích kháng sinh………….40 Bảng 3.2 Chương trình gradient rửa giải đồng thời kháng sinh………… 41 Bảng 3.3 Thơng tin quy trình chiết yếu tố khảo sát………… 42 Bảng 3.4 Kết độ thu hồi quy trình chiết khảo sát…………… 43 Bảng 3.5 Kết đánh giá quy trình xử lý mẫu tối ưu mẫu…44 Bảng 3.6 Hệ số gốc đường chuẩn giá trị tính tốn ME…………… 45 Bảng 3.7 Kết khảo sát độ ổn định dung môi…………………… 46 Bảng 3.8 Kết khảo sát độ ổn định mẫu gia cầm…………… 47 Bảng 3.9 Kết khảo sát độ ổn định mẫu gia súc…………… 47 Bảng 3.10 Dung dịch X để hòa tan cắn…………………………………… 48 Bảng 3.11 Kết đánh giá tính tương thích hệ thống mẫu trắng thêm chuẩn (n = 6)………………………………………………………… 50 Bảng 3.12 Kết đánh giá độ đặc hiệu yếu tố thời gian lưu, số điểm IP tỷ lệ ion sai lệch chất phân tích………………………….53 Bảng 3.13 Phương trình hồi quy, hệ số tương quan, khoảng tuyến tính kháng sinh mẫu thịt heo – thịt bò thịt gà……………………55 Bảng 3.14 Kết xác định LOD, LOQ kháng sinh mẫu… 56 Bảng 3.15 Kết xác định LOD, LOQ kháng sinh mẫu thịt heo – thịt bị……………………………………………………………56 TẠP CHÍ Y DƯỢC HỌC CẦN THƠ – SỐ 43/2021 Bảng Kết khảo sát điều kiện MS tối ưu chất phân tích Chất phân tích Kiểu ion hóa ESI STZ m/z ion phân tử ban đầu 255,9 SMX 253,9 ES+ SQX 300,9 TMP 291,0 m/z ion phân mảnh đặc trưng 91,9 155,9 107,9 92,0 155,9 91,9 261,0 123,0 Nhiệt độ khí bay (oC) 500 Tốc độ dịng khí bay (L/h) Thế cone (V) Thế mao quản (kV) 1000 30 30 30 30 35 35 30 30 4,0 4,0 4,0 4,0 4,0 4,0 4,0 4,0 Năng lượng va đập (V) 30 15 25 30 15 30 25 25 Ghi định tính định lượng định tính định lượng định tính định lượng định tính định lượng Nhận xét: Các kháng sinh phân tích điều kiện khối phổ tối ưu, đảm bảo có ion phân mảnh (1 mảnh định tính mảnh định lượng) đặc trưng cho chất phân tích, đáp ứng đủ điểm IP theo yêu cầu EC/2002 Điều kiện sắc ký thích hợp: Cột Agilent Poroshell 120 Phenyl-Hexyl (4,6 mm x 150 mm x 2,7 µm) Pha động: acetonitril - nước axit formic pH theo chương trình gradient trình bày Bảng Thể tích tiêm mẫu: 10 µL Tốc độ dòng: 0,5 mL/phút Bảng Điều kiện sắc ký thích hợp phân tích đồng thời kháng sinh Thời gian (phút) 10 10,1 13 Tốc độ dòng (mL/phút) 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 ACN (%) 10,0 10,0 80,0 80,0 10,0 10,0 Nước acid formic pH (%) 90,0 90,0 20,0 20,0 90,0 90,0 Hình 1: Sắc ký đồ hỗn hợp chuẩn kháng sinh điều kiện tối ưu Nhận xét: Kết sắc ký đồ điều kiện tối ưu thu pic nhọn, cân đối, cường độ tín hiệu cao ổn định, thời gian phân tích ngắn, chất phân tích tách hồn tồn 39 TẠP CHÍ Y DƯỢC HỌC CẦN THƠ – SỐ 43/2021 Quy trình xử lý mẫu thích hợp: Quy trình xử lý mẫu khảo sát cho hiệu suất thu hồi kháng sinh đạt yêu cầu quy định, cường độ tín hiệu tốt, ổn định, hình dạng pic cân đối, quy trình đơn giản thời gian xử lý mẫu nhanh (Hình 2) Thẩm định quy trình phân tích Tính tương thích hệ thống: Kết trình bày bảng Bảng Kết tính tương thích hệ thống Chất phân tích tr (phút) Spic TB RSD% TB RSD% STZ SMX SQX TMP 8,25 0,00 58533,98 1,63 9,70 0,00 95526,87 1,82 10,07 0,04 101187,65 1,91 8,11 0,14 96621,14 1,20 Nhận xét: RSD thông số khảo sát nằm giới hạn cho phép (RSD ≤ 15%), thiết bị có độ ổn định độ xác cao, đáp ứng u cầu để phân tích [3] Hình 2: Quy trình xử lý mẫu thích hợp Tính đặc hiệu: Mẫu dung mơi, mẫu trắng phải khơng có tín hiệu chất phân tích, mẫu thử giả lập phải cho tín hiệu chất phân tích thời gian lưu trùng với thời gian lưu mẫu chuẩn Khi ta thêm chuẩn vào mẫu thử giả lập, tín hiệu diện tích pic thời gian lưu chất tăng lên rõ rệt (Hình 3) 40 TẠP CHÍ Y DƯỢC HỌC CẦN THƠ – SỐ 43/2021 (e) (d) (c) (b) (a) Hình 3: Sắc ký đồ mẫu dung môi (a), mẫu trắng (b), mẫu chuẩn (c), mẫu trắng thêm chuẩn (d) mẫu trắng thêm chuẩn lần (e) STZ Khoảng tuyến tính - đường chuẩn giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng, độ đúng, độ xác: Các đường chuẩn xây dựng mẫu trắng tính tốn tự động phần mềm thiết bị (Masslynx 4.1) Các kết trình bày Bảng 4, Bảng 5, Hình Hình Bảng Kết thẩm định khoảng tuyến tính, phương trình hồi quy, LOD, LOQ Chất phân tích STZ SMX SQX TMP Khoảng tuyến tính (ppb) 5-200 5-200 5-200 2,5-100 Phương trình hồi quy y = 858,551 x – 1010,11 y = 1354,57 x – 1378,05 y = 1010,03 x – 1200,08 y = 1131,79 x + 372,894 Hệ số tương quan (r2) 0,999 0,999 0,993 0,994 LOD (ppb) 0,125 0,125 0,0625 0,0625 LOQ (ppb) 0,25 0,25 0,125 0,125 Bảng Độ thu hồi độ lặp lại bốn kháng sinh mức nồng độ Mức nồng độ 0,5 MRL MRL 1,5 MRL TMP Ngày 3 R (%) 98,7 99,1 100,7 98,5 99,0 100,9 96,2 99,5 98,7 SQX RSD (%) 3,9 6,1 2,9 4,9 3,2 4,5 8,1 6,2 4,4 STZ RSD (%) 4,1 5,6 4,2 6,0 6,5 4,7 6,1 3,3 4,6 R (%) 98,4 93,7 98,5 98,5 100,1 101,8 99,2 99,9 101,4 41 R (%) 98,4 87,9 88,7 100,2 98,7 99,6 95,9 92,2 93,9 SMX RSD (%) 5,4 4,1 3,8 4,9 3,7 4,8 6,4 3,3 4,1 R (%) 99,4 90,7 90,3 101,4 100,5 102,3 94,6 95,1 96,1 RSD (%) 4,7 3,7 3,9 4,2 3,8 4,4 5,8 4,0 3,9 TẠP CHÍ Y DƯỢC HỌC CẦN THƠ – SỐ 43/2021 (b) (a) (d) (c) Hình 4: Đường tuyến tính STZ (a), SMX (b), SQX (c) TMP (d) truy xuất từ phần mềm Masslynx 4.1 (b) (a) (d) (c) Hình 5: LOD STZ 0,125ppb (S/N = 3,35) (a), SMX 0,125ppb (S/N = 4,80) (b), SQX 0,0625 ppb (S/N = 3,60) (c), TMP 0,0625 ppb (S/N = 3,37 ) (d) Nhận xét: Trong khoảng nồng độ khảo sát kháng sinh đạt tính tuyến tính (giá trị r2 > 0,99), khoảng tuyến tính rộng, bao trùm giá trị MRL kháng sinh nhóm 42 TẠP CHÍ Y DƯỢC HỌC CẦN THƠ – SỐ 43/2021 sulfonamid (100 ppb) trimethoprim (50 ppb) [7], giá trị LOD (0,0625-0,125 ppb) LOQ (0,125-0,25 ppb) thấp đặc trưng cho phân tích khối phổ Các giá trị độ thu hồi trung bình chất STZ, SMX, SQX TMP nằm khoảng 80-110% giá trị RSD < 23%, đáp ứng yêu cầu EC/2002 Do phương pháp đạt độ đúng, độ xác cao Vì vậy, áp dụng quy trình để xác định dư lượng kháng sinh phân tích có mẫu thịt gà thị trường 3.2 Ứng dụng phân tích dư lượng kháng sinh mẫu thịt gà tỉnh Kiên Giang Kết phân tích mẫu thịt gà thu thập siêu thị địa bàn tỉnh Kiên Giang cho thấy chưa phát dư lượng kháng sinh STZ, SMX, SQX TMP Sắc ký đồ phân tích đại diện mẫu ứng dụng TG7 thể Hình Hình 6: Kết phân tích mẫu ứng dụng TG7 IV BÀN LUẬN Điều kiện khối phổ: Kết auto tune tune tay xác định mảnh ion phân mảnh chất phân tích đặc trưng phù hợp với nghiên cứu công bố [4], [5] Tiến hành khảo sát thông số khối phổ để thu nhận tín hiệu ion tối ưu bao gồm nhiệt độ khí bay mức 500 oC, tốc độ dịng khí bay 1000 L/h, cone mức 30 35 V mao quản 4,0 kV Các thông số không khác biệt nhiều chất phân tích có giá trị khối lượng/điện tích (m/z) gần tương tự (khoảng 250-300) Tuy nhiên, mức lượng va đập áp dụng cho chất phân tích khác nhau, dao động khoảng từ 15-30 V tùy thuộc vào mục tiêu tạo phân mảnh có m/z lớn hay nhỏ, đặc trưng riêng cho chất Điều kiện sắc ký: Khảo sát pha động sử dụng dung môi hữu bao gồm methanol acetonitril với chất điều chỉnh pH nước axit formic mức pH khác giúp chất phân tích chuyển dạng hồn tồn, cho hình dáng píc cân đối, tín hiệu cao, chân píc gọn so với số nghiên cứu công bố [4], [5] Thêm vào đó, chương trình rửa giải gradient áp dụng nhằm tách hồn tồn chất phân tích khỏi khỏi tạp mẫu, cho thời gian phân tích phù hợp Quy trình xử lý mẫu: Sau tham khảo nghiên cứu trước [1], [4] nhóm nghiên cứu tiến hành khảo sát quy trình xử lý mẫu với dung mơi chiết/ tủa protein ACN có khơng có kết hợp AF pH 3, ISP tỷ lệ khác nhau, tỷ lệ lượng muối/ dịch chiết so với lượng thịt, thời gian ngâm lạnh loại tạp phân cực Các thông số xác định nhằm giải vấn đề đặc trưng mẫu phức tạp thực phẩm tỷ lệ thu hồi mẫu kém, việc loại bỏ tạp phân cực chất béo tránh ảnh hưởng tín hiệu chất phân tích làm hỏng 43 TẠP CHÍ Y DƯỢC HỌC CẦN THƠ – SỐ 43/2021 cột pha tĩnh sử dụng sắc ký pha đảo Quá trình xử lý mẫu qua bước kết tủa protein, chiết tách chất phân tích ACN kết hợp ISP muối vơ có ưu điểm tiết kiệm chi phí đơn giản, tránh việc mẫu, giúp nâng cao hiệu suất chiết, với kết độ thu hồi kháng sinh nằm khoảng quy định (80-110%) Ngoài ra, việc áp dụng phương pháp ngâm lạnh để loại tạp phân cực chất béo thay cho dung môi chiết lỏng lỏng độc hại thường sử dụng n-hexan giúp bảo vệ môi trường sức khỏe kiểm nghiệm viên Ứng dụng quy trình thẩm định: Kết phân tích mẫu thịt gà thu thập siêu thị địa bàn tỉnh Kiên Giang chưa phát dư lượng kháng sinh STZ, SMX, SQX TMP Tuy nhiên, lượng mẫu ứng dụng nhỏ mang tính tham khảo, cần mở rộng cỡ mẫu tính đại diện tình hình thực tế địa bàn V KẾT LUẬN Nghiên cứu xây dựng thành cơng quy trình định lượng đồng thời kháng sinh STZ, SMX, SQX TMP thịt gà phương pháp LC-MS/MS thẩm định quy trình đạt theo hướng dẫn AOAC, EC 2002 Quy trình phân tích có tính chọn lọc, xác, tin cậy cao Quy trình ứng dụng vào thực tiễn để kiểm tra mẫu thịt gà Kiên Giang Kết phân tích chưa phát dư lượng kháng sinh TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ Khoa học Công nghệ (2017), Tiêu chuẩn Việt Nam (TCVN 11838:2017) – Thịt – phương pháp xác định dư lượng sulfonamid sắc ký lỏng khối phổ hai lần AOAC International (2002), “AOAC Guidelines for Single Laborator Validation of Chemical Methods for Dietary Supplements and Botanicals”, Section 3.3, 3.4.1, 3.4.2, 3.4.6, pp.18-22 Chad J Briscoe, Mark R Stiles, David S Hage (2007), “System suitability in bioanalytical LC-MS/MS”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 44, pp.484-491 Dasenake Marilena (2015), “Development of methods for the determination of veterinary drugs in food matrices by Liquid Chromatography – Mass Spectrometry”, National and Kapodistrian University of Athens, 2015 Diego G Rocha, Flavio A Santos, Aline A Gomes, Adriana F Faria (2016), “Validation of a LC-MS/MS Multiresidue Methodology Based on a QuEChERS Approach for the Determination of Fluoroquinolones, Sulfonamids and Trimethoprim in Poultry and Porcine Kidney According to the Normative Instruction 24/2009-MAPA”, Journal of the Brazilian Chemical Society, 28, pp.76-86 European Union (2002), Commission decision of 12 August 2002 implementing Council Directive 96/23/EC concerning the performance of analytical methods and the interpretation of results European Union (2010), Commission regulation (EU) No 37/2010 of 22 December 2009 on pharmacologically active substances and their clsssification regarding maximum residue limits in foodstuffs of animal origin J J Carrique-Mas, J E Bryant, N V Cuong, N V M Hoang, J Campbell, et al (2013), “An epidemiological investigation of Campylobacter in pig and poultry farms in the Mekong delta of Vietnam”, Epidemiol Infect (2014), 142, 1425-1436 Juan J Carrique-Mas, Nguyen V Trung, Ngo T Hoa, Ho Huynh Mai, Tuyen H Thanh, et al (2015), “Antimicrobial Usage in Chicken Production in the Mekong Delta of Vietnam”, Zoonoses and Public Health (2015), 70-78 10.Nguyen Van Cuong, Nguyen Thi Nhung, Nguyen Huu Nghia, Nguyen Thi Hoa, Nguyen Vinh Trung, et al (2016), “Antimicrobial consumption in Medicated Feeds in Vietnamese Pig and Poultry Production”, EcoHealth (Ngày nhận bài: 21/8/2021 - Ngày duyệt đăng: 07/10/2021) 44 CONG HOA XÅ HOI CHも NGHiA VIET NAMI BQYTE Hanh phic Doc lap‐ TW do‐ rRuoNG EAJ HQC Y DrJgC CAN THO DHYDCT S6:J翡 存 牛 `./QD― Cど ′冗乃ο;″ gay.梁 J_″ ´れg.ィ イ/.′2″,,2θ ″´ / QUYET DINH V/v thな nh lap I16i dδ ng d`nh gii luan vin Thac si chuyen nginh K16m nghiem thu6c va doc cMtchc h9c viOn Lam Dai Duo■ ⅡIEU g TRJONG TRび ONG D▲ IH9C Y DU・ OC CÅ N THC ′ ∂ イ ″θ θ 2/8D― rrg′ ,gあ ノ 25/み ′ 2,″ ″ ,2θ θ ι ジα動′ 慇ゴ ´ ′ 2g c力 ヵ /′ ∂ 2ヵ ′ た ブッ ビ ″ι ′ ′71ヵ ′ ″ g Dα ノ Йο οyDグ ο ″動。 ∵ ′ ′多 δ ′ (b7'ι ′0ッ ι ′グ′ ″ 力S∂ 4′ 1′ Ca7,ε ′ 可″ ∂ Sδ 7,ξ `Cど ′ 5″ θ ′ イ /rr39DDr7,g″ ′ θ ′ イε ′ αβぢ′ ″ ″ ∂ れ gF∂ σ ″0 `′ ′″εν′I)a。 o νιップ を α″ヵヵ′ ″9′ 」ε/7∂ a。 。′,4ヵ`/5″ ∂71zα εs7デ `ら `α `ク yDqr″ ″ C″ ″ q´ σリツ 4θ 9″ θ と 済″/'S∂ ′イθ2/CD― D〃 g″ θ」 ら ′96ラ αコ 弓 ″δ7,g Dα ′力Oι 、 y'ク 0`C′ 7'7物 0'ツ ιlガ ι ∂′g7,力 ′″ ラ4g`τ ι∂″ 力αιS'商 ″22θ ′9メ ぅ 『 、 `″ X6t del■ ghi cia Tl■`ε 1.ol〕 g ph6ng Dao tao Sau Dai hoc `グ (ブ 7´ `グ QUYET DINH: DiCu l・ Thanh l如 H6iゞ 61t dinh gi`luan vhn Thac sT cho hoc vien: Ho va ten:Lam Dai Du'o.ng Ngay sinh:19/09/1994 Chuyen nganh:KiOm nglliem thuOc、 棧doc chat Kh6a:2019-2021 ′ '7`χ ′ TOn luan vhn:``Ⅳgノ,そ ″ι ′ y″イ ′ ツ´ ′ ″ル′力′ ″rfι カグ ″ g/ノ7δ ′ δ ″″J″ ?″ g `g,″ ´ ´ 'グ ″ ル gSル Sレ ク つ ″ α 〃 ″ 7ツ ′多′ ′ ″ ι rЙ 7う ″ ″ gSブ g″ g議 δ ο ″ /gゴ ′ ″ ′ Sを ,gノ α ″ /′ で く `た ι ′ ″′ ′′ '力 ″″α′ tg′ 力4フ 五6-■ イ SZIイ iS'' “ `み `み `″ `gノ Cを1l b6 hu61lg dani l.PGS.TS.D6Chau Minh Vinh Tho I)allll sacll cic tl■ を 1■ h viOn l16i d6ng g0131: PGS.TS.:Duong Xuan Chi Chi tich (3'S.TS.:Nguyen Dic Tuan TS.IIuッ nh Thi M,Duyen Phan biOn 4.PGS.TS.Vё Thi Bach HuO 5.PGS.TS.N● uvOn Thi N● oc Van Uy vien Uv viOn― Phan bien】 Thu lく , D16u2 H6i d6ng c6 nhi01n vu d`11ln gi`luan vttn.I｀ hac sl chuyen l,ganh KiOrn thu6c va d6c ch`tthco quy ch6 dao tao Thac sicia B6 Gi4o duc va Dao tao、 7な nghi01■ l tlT giaj tin sau klli lloan tllanh nlliel vu Diさ u3.C`c01■ g(Ba)1｀ 1可 61■ g PhOng Hさ nh chinh t6ng hop,Trl161■ g Phё ng Dさ o taO Sau dai hOC,Tl・ 6ng PhQng Tai Chinh k6 tOin,Thi trt13ng CaC d01l Vl lien quan Va c`c viol.tl― 。ng H6i d6ng dinh gia luan vin Thac sT chiu trach nhiel.l thi hanh quyet dill■ 11 1layフ /′ ′ イ リ A″ο ブ″力′″r ―Nhul diOu 3メ ーLuu:V■ PSDH` TR Lr N RJCNG lH0 'ハ Y ouqc cir rxd 1、 lguyen′ rullg iK[ien Iヽ CONG HOAXA ⅡOICHO I)Oc - NGHiA VIET NAM Tq - H4nh Phtic BAN GIゴtI TRINH Vi VIEC BO SUNG,SJA CHJA LUAN VAN TIIEOflaEN CUAHoIDONGDANH GIALUANVAN TOTNGⅡ IEP Khhg置 :Ban Gi41n Hiou Trlnmg D■ hoc Y DIσ c Can Thσ Ho vaten hoc vien:Larn D● Dlrong Ttt dё tai luれ v狙 :N♪ i“ ch x∼ dⅢ g quy n血 phtt lchめ ng thδ i dlr luい gc“ khang sinh s■ ぉnamid va T五 methopnm■ ,Cmg st dung ttong thi gia sic,」 acam bhg phucng phap LC)MS/MS Chuyen nganh:Ki6mnghiem mu6c va dOC Ch't Mia s6:8720210 Nglra hu61lg dan:PGS.TS.:DO Chau Minh V■ ■ 1■o cta sau ni m血 lutt v狙 ,hoc v血 磁 sia ctta哺 b6smgluね vm theO,H“ HOi dさ ng d五 血 gi6 1u“ vm t6tngh∞ nう m2021,cり th6 c“ di6m sau day: 1.B6smg thong th ch△ tch猛 (hanl ll19咀 g,s616),diё u ken bお quね (tra血 S“ g) 2.B6sung Du thac quy trhi k6m dlrllrい g nangshh 3.x`c dinh r5 dia d6m thu thゎ mうu■ Hat,i diabtt tinh Kitt Giang 4.Sia 10ithuat ngu thco Dす Oc Dien VoNam V tham mお s620,40,55,65c6dё c節 廿Onglum v狙 ,phM b流 luい Da 5.Tai li“ trich dtt b6 sung tailieu tham mお s011 6.Cゎ nhat tai li“ tham mお m“ Toi xin chtt th激 lh cam σn nhmg′ k“ d6ng gф qu′ “ luan vぅ n dlrcc hoan chinh ll(■ n c`,″ Ngl武減 hlrhg din oia,a ur', %■ ■、 a HOidさ ng“ b加 g″ η 滋電 動α″ ′ イ 滋″2θ2′ I10C ViOn V｀ },4¶ ,0 し aぃ つづ '0。 ″χι ′σ 』αι ″ιrza″ ヵν″″IIφ ′′ぢ昭 ,″ Й づ πヵ璽 Ltt σ ′。ブ″ど ′ ″gJ″ ″ tこ ″ JI″。 プ ′ `ッ οgοP′ ″ゎЙsヵα″θ ヵ♂′ル′″ッ グ″ν a c″ 。″ι a″ σ a′ ″ “ CONG HOAXÅ ⅡOI CⅡUNGHlAVIET NAMI D)oc lop― TT do― IIlnh phic G`,″ ァ 、 /vdさ ng′ ch。 PⅢ Ёu Ⅲ 伍 7rhrャ gィ ι 動α g″ 20′滋″ 滋 2υ 2イ “ “ Tw細 ien sidung vぅ khaithic nOi dung tai Llu TOi ten:Lain Dai D●(mg Latお gia tai lieu:Nghien cit xay dWlg quy tinh phan tich dδ ng thd d11111飢 lg cac Hlang sinh suぉ namid va T五 methop五m thu挽lg si dwlg iong thit gia sic,gia cam ng phumg phap LCttSMS bふ Toi hoan toan dδ ng′ cho ph6P Thu宙 entott quyё n si dⅢ g vakhdぬ ac noi dmg tailieu nhim muc dich phuc vu cOng t“ dδ ng dao tao,nghien c女 じ量loa hoc va phuc vu cong cta Tュ 血lg Daihoc Y Dす OC Can Tho TOi nOng c6 b狂 貯 nitt nai mo lien qutt d“ sai t6i hoぬ toぬ ぬ :u廿 h nhiem trir6c ph如 quyё n tt dung tai lieu tren.N6u luat./ “ Tic gia (ゆ 憾 g″ だ 力ο〃″) = υ滅 嘔 ャ、く ヽ )ノ aurリ タ LÂM ĐẠI DƯƠNG BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ LÂM ĐẠI DƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÂN TÍCH ĐỒNG THỜI DƯ LƯỢNG CÁC KHÁNG SINH SULFONAMID VÀ TRIMETHOPRIM THƯỜNG SỬ DỤNG TRONG THỊT GIA SÚC, GIA CẦM BẰNG PHƯƠNG PHÁP LC-MS/MS LUẬN VĂN THẠC SĨ CẦN THƠ - 2021 Cần Thơ - 2021 LÂM ĐẠI DƯƠNG BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ LÂM ĐẠI DƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÂN TÍCH ĐỒNG THỜI DƯ LƯỢNG CÁC KHÁNG SINH SULFONAMID VÀ TRIMETHOPRIM THƯỜNG SỬ DỤNG TRONG THỊT GIA SÚC, GIA CẦM BẰNG PHƯƠNG PHÁP LC-MS/MS LUẬN VĂN THẠC SĨ CẦN THƠ - 2021 Cần Thơ - 2021 LÂM ĐẠI DƯƠNG BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ LÂM ĐẠI DƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÂN TÍCH ĐỒNG THỜI DƯ LƯỢNG CÁC KHÁNG SINH SULFONAMID VÀ TRIMETHOPRIM THƯỜNG SỬ DỤNG TRONG THỊT GIA SÚC, GIA CẦM BẰNG PHƯƠNG PHÁP LC-MS/MS LUẬN VĂN THẠC SĨ CẦN THƠ - 2021 Cần Thơ - 2021 ... thịt heo, bị, gà cịn nghiên cứu Vì lý trên, đề tài ? ?Nghiên cứu xây dựng quy trình phân tích đồng thời dư lượng kháng sinh Sulfonamid Trimethoprim thường sử dụng thịt gia súc, gia cầm phương pháp. .. VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ LÂM ĐẠI DƯƠNG NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÂN TÍCH ĐỒNG THỜI DƯ LƯỢNG CÁC KHÁNG SINH SULFONAMID VÀ TRIMETHOPRIM THƯỜNG SỬ DỤNG TRONG THỊT GIA. .. sulfamethoxazol, trimethoprim phương pháp LC- MS/ MS có mẫu thịt gia súc (heo, bị), gia cầm (gà) 63 4.2 Thẩm định quy trình định lượng ứng dụng quy trình thẩm định phân tích đánh giá dư lượng kháng sinh