(Luận văn thạc sĩ) nghiên cứu mối tương quan giữa mức độ biểu hiện của các gen a20, otub1, otub2, cezanne và nồng độ các cytokine viêm trên bệnh nhân ung thư bạch cầu

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Bùi Kiều Trang NGHIÊN CỨU MỐI TƯƠNG QUAN GIỮA MỨC ĐỘ BIỂU HIỆN CỦA CÁC GEN A20, OTUB1, OTUB2, CEZANNE VÀ NỒNG ĐỘ CÁC CYTOKINE VIÊM TRÊN BỆNH NHÂN UNG THƯ BẠCH CẦU LUẬN VĂN THẠC SĨ: SINH HỌC THỰC NGHIỆM Hà Nội - 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Bùi Kiều Trang NGHIÊN CỨU MỐI TƯƠNG QUAN GIỮA MỨC ĐỘ BIỂU HIỆN CỦA CÁC GEN A20, OTUB1, OTUB2, CEZANNE VÀ NỒNG ĐỘ CÁC CYTOKINE VIÊM TRÊN BỆNH NHÂN UNG THƯ BẠCH CẦU Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC THỰC NGHIỆM NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS Nguyễn Thị Xuân Hà Nội - 2021 Lời cam đoan Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu kết cá nhân Số liệu kết nghiên cứu luận văn hồn tồn trung thực, xác chưa khơng trùng lặp với cơng trình công bố Mọi thông tin nội dung tham khảo báo cáo trích dẫn cụ thể, rõ ràng Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm lời cam đoan Lời cảm ơn Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Thị Xuân – Trưởng Phòng Hệ gen học miễn dịch, Viện Nghiên cứu hệ gen, người thầy – người chị tận tình hướng dẫn, dìu dắt, giúp đỡ tơi suốt q trình làm việc hồn thành luận văn Thái độ làm việc chuyên nghiệp chị truyền cảm hứng cho giúp cải thiện thân nhiều sau thời gian thực tập Tôi xin gửi lời cảm ơn đến anh Nguyễn Hồng Giang, chị Đỗ Thị Trang phịng Hệ gen học miễn dịch nhiệt tình giúp đỡ bảo cho kinh nghiệm quý báu suốt q trình thực luận văn Qua tơi xin cảm ơn thầy cô Học viện Khoa học Công nghệ tạo điều kiện, giúp đỡ tơi nhiều để tơi hồn thành luận văn Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới gia đình, bạn bè ln ủng hộ, khích lệ động viên tinh thần tơi suốt q trình học tập hồn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2021 Tác giả luận văn Bùi Kiều Trang Danh mục ký hiệu chữ viết tắt Chữ viết tắt Tên đầy đủ Tên tiếng Việt ALL Acute lymphocytic leukemia Bạch cầu dịng lympho cấp tính AML Acute myeloid leukemia Bạch cầu dịng tủy cấp tính ANOVA Analysis of Variance Phân tích phương sai cDNA Complement deoxyribonucleic DNA bổ sung acid CLL Chronic lymphocytic leukemia Bạch cầu dòng lympho mạn tính CML Chronic myeloid leukemia Bạch cầu dịng tủy mạn tính DEPC Diethyl pyrocarbonate DNA Deoxyribonucleic acid DUB Deubiquitinase dNTP Deoxynucleotide ELISA Enzyme-linked Axit deoxyribonucleic Immunosorbent Xét nghiệm chất hấp thụ miễn assay HRP Horseradish peroxidase IL-1ββ Interleukin-1ββ IL-6 Interleukin-6 M-MuLV Moloney Murine Leukemia Virus mRNA Messenger ribonucleic acid dịch liên kết với enzym RNA thông tin NF-κBB Nuclear factor kappa-light-chainenhancer of activated B OD Optical Density Mật độ quang học OTU Ovarian tumor Khối u buồng trứng qRT-PCR Quantitative reverse transcription Phản ứng tổng hợp chuỗi PCR polymerase chép ngược RIP-1β Tumor necrosis factor receptorinteracting protein-1β RNA Ribonucleic acid SPSS Statistical Package for the Social Axit ribonucleic Sciences STAT Signal transducer and activator of transcription TBE Tris-borate-EDTA TLR Toll-like receptor TMB 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine TNFR Tumor necrosis factor receptor TNF-α Tumor necrosis factor-α TRAF6 TNF receptor-associated factor UV Ultra violet Tia cực tím ZnF Zinc finger Ngón tay kẽm Danh mục bảng Bảng 2.1β: Các cặp mồi đặc hiệu cho phản ứng Realtime-PCR .28 Bảng 3.1β: Tương quan mức độ biểu gen A20 với nồng độ cytokine IL-6, TNF-α, IL-1ββ bệnh nhân bạch cầu dịng lympho cấp tính 40 Bảng 3.2: Tương quan mức độ biểu gen OTUB1 với nồng độ cytokine IL-6, TNF-α, IL-1ββ bệnh nhân bạch cầu dịng lympho cấp tính 42 Bảng 3.3: Tương quan mức độ biểu gen OTUB2 với nồng độ cytokine IL-6, TNF-α, IL-1ββ bệnh nhân bạch cầu dịng lympho cấp tính 43 Bảng 3.4: Tương quan mức độ biểu gen Cezanne với nồng độ cytokine IL-6, TNF-α, IL-1ββ bệnh nhân bạch cầu dịng lympho cấp tính 44 Bảng 3.5: Tương quan mức độ biểu gen A20 với nồng độ cytokine IL-6, TNF-α, IL-1ββ bệnh nhân bạch cầu dịng lympho mạn tính 45 Bảng 3.6: Tương quan mức độ biểu gen OTUB1 với nồng độ cytokine IL-6, TNF-α, IL-1ββ bệnh nhân bạch cầu dịng lympho mạn tính 46 Bảng 3.7: Tương quan mức độ biểu gen OTUB2 với nồng độ cytokine IL-6, TNF-α, IL-1ββ bệnh nhân bạch cầu dịng lympho mạn tính 48 Bảng 3.8: Tương quan mức độ biểu gen Cezanne với nồng độ cytokine IL-6, TNF-α, IL-1ββ bệnh nhân bạch cầu dịng lympho mạn tính 49 Bảng 3.9: Tương quan mức độ biểu gen A20 với nồng độ cytokine IL-6, TNF-α, IL-1ββ bệnh nhân bạch cầu dịng tủy cấp tính 51β Bảng 3.1β0: Tương quan mức độ biểu gen OTUB1 với nồng độ cytokine IL-6, TNF-α, IL-1ββ bệnh nhân bạch cầu dịng tủy cấp tính 52 Bảng 3.1β1β: Tương quan mức độ biểu gen OTUB2 với nồng độ cytokine IL-6, TNF-α, IL-1ββ bệnh nhân bạch cầu dịng tủy cấp tính 53 Bảng 3.1β2: Tương quan mức độ biểu gen Cezanne với nồng độ cytokine IL-6, TNF-α, IL-1ββ bệnh nhân bạch cầu dịng tủy cấp tính 55 Bảng 3.1β3: Tương quan mức độ biểu gen A20 với nồng độ cytokine IL-6, TNF-α, IL-1ββ bệnh nhân bạch cầu dịng tủy mạn tính 56 Bảng 3.1β4: Tương quan mức độ biểu gen OTUB1 với nồng độ cytokine IL-6, TNF-α, IL-1ββ bệnh nhân bạch cầu dịng tủy mạn tính 57 Bảng 3.1β5: Tương quan mức độ biểu gen OTUB2 với nồng độ cytokine IL-6, TNF-α, IL-1ββ bệnh nhân bạch cầu dịng tủy mạn tính 59 Bảng 3.1β6: Tương quan mức độ biểu gen Cezanne với nồng độ cytokine IL-6, TNF-α, IL-1ββ bệnh nhân bạch cầu dịng tủy mạn tính 60 Danh mục hình vẽ, đồ thị Hình 1β.1β: Hình ảnh so sánh tế bào máu bình thường bệnh bạch cầu Hình 1β.2: Hình ảnh tế bào bạch cầu dịng lympho bệnh ALL .1β1β Hình 1β.3: Hình ảnh tế bào bạch cầu dòng lympho bệnh CLL .1β2 Hình 1β.4: Hình ảnh tế bào bạch cầu dịng tủy bệnh AML 1β4 Hình 1β.5: Sự hình thành nhiễm sắc thể Philadelphia 1β5 Hình 1β.6: Hình ảnh tế bào bạch cầu dịng tủy bệnh CML 1β5 Hình 1β.7: Cấu trúc protein A20 1β8 Hình 3.1β: Ảnh minh họa điện di đồ sản phẩm RNA tổng số tách chiết từ mẫu máu bệnh nhân người khỏe mạnh ……………………………………… 31β Hình 3.2: Biểu mRNA gen A20, OTUB1, OTUB2 Cezanne bệnh nhân bạch cầu dòng lympho cấp tính (cột màu đen) mẫu người khỏe (cột màu xám) 32 Hình 3.3: Biểu mRNA gen A20, OTUB1, OTUB2 Cezanne bệnh nhân bạch cầu dịng lympho mạn tính (cột màu đen) mẫu người khỏe (cột màu xám) 33 Hình 3.4: Biểu mRNA gen A20, OTUB1, OTUB2 Cezanne bệnh nhân bạch cầu dòng tủy cấp tính (cột màu đen) mẫu người khỏe (cột màu xám) .34 Hình 3.5: Biểu mRNA gen A20, OTUB1, OTUB2 Cezanne bệnh nhân bạch cầu dịng tủy mạn tính (cột màu đen) mẫu người khỏe (cột màu xám) .35 Hình 3.6: Nồng độ cytokine IL-6, TNF-α IL-1ββ bệnh nhân bạch cầu dịng lympho cấp tính 36 Hình 3.7: Nồng độ cytokine IL-6, TNF-α IL-1ββ bệnh nhân bạch cầu dịng lympho mạn tính 37 Hình 3.8: Nồng độ cytokine IL-6, TNF-α IL-1ββ bệnh nhân bạch cầu dịng tủy cấp tính 38 Hình 3.9: Nồng độ cytokine IL-6, TNF-α IL-1ββ bệnh nhân bạch cầu dịng tủy mạn tính 39 Hình 3.1β0: Sự tương quan mức độ biểu gen A20 nồng độ cytokine IL-6, TNF-α IL-1ββ bệnh nhân bạch cầu dòng lympho cấp tính 41β Hình 3.1β1β: Sự tương quan mức độ biểu gen OTUB1 nồng độ cytokine IL-6, TNF-α, IL-1ββ bệnh nhân bạch cầu dòng lympho cấp tính 42 Hình 3.1β2: Sự tương quan mức độ biểu gen OTUB2 nồng độ cytokine IL-6, TNF-α IL-1ββ bệnh nhân bạch cầu dòng lympho cấp tính 43 Hình 3.1β3: Sự tương quan mức độ biểu gen Cezanne nồng độ cytokine IL-6, TNF-α IL-1ββ bệnh nhân bạch cầu dịng lympho cấp tính 44 Hình 3.1β4: Sự tương quan mức độ biểu gen A20 nồng độ cytokine IL-6, TNF-α IL-1ββ bệnh nhân bạch cầu dịng lympho mạn tính 46 Hình 3.1β5: Sự tương quan mức độ biểu gen OTUB1 nồng độ cytokine IL-6, TNF-α IL-1ββ bệnh nhân bạch cầu dịng lympho mạn tính 47 Hình 3.1β6: Sự tương quan mức độ biểu gen OTUB2 nồng độ cytokine IL-6, TNF-α IL-1ββ bệnh nhân bạch cầu dịng lympho mạn tính 48 Hình 3.1β7: Sự tương quan mức độ biểu gen Cezanne nồng độ cytokine IL-6, TNF-α IL-1ββ bệnh nhân bạch cầu dịng lympho mạn tính 50