TỔNG QUAN
Tổng quan về chi Millettia
1.1.1 Vị trí phân loại chi Millettia
Theo hệ thống phân loại thực vật APG IV và hệ thống phân loại của Armen Takhtajan, chi Millettia thuộc nhóm thực vật hạt kín.
Phân lớp Hoa hồng (Rosidae)
1.1.2 Đặc điểm thực vật và sự phân bố của cây họ Đậu (Fabaceae)
Họ Đậu (Fabaceae), hay còn gọi là họ Cánh bướm, là một trong ba họ thực vật có hoa lớn nhất, chỉ sau họ Phong và họ Cúc Họ này bao gồm khoảng 19.300 loài thuộc 750 chi, xuất hiện dưới dạng thảo mộc, cây bụi, dây leo hoặc cây gỗ, chủ yếu sống trên cạn và là thành phần quan trọng trong hầu hết các kiểu thảm thực vật toàn cầu Hiện nay, họ Đậu được chia thành ba phân họ chính: Caesalpinioideae, Mimosoideae và Faboideae.
Hầu hết các loài cây họ đậu có khả năng cố định nitơ từ khí quyển nhờ vào vi khuẩn cộng sinh trong các nốt sần ở rễ Điều này giúp chúng phát triển tốt hơn trong điều kiện đất có lượng đạm thấp, miễn là các yếu tố khác cũng thuận lợi.
Hình 1.1 Sự phát triển hoa ở cây họ Đậu [7]
Lá điển hình có cấu trúc lá kép lông chim 1-2 lần, đôi khi chỉ gồm 3 lá chét hoặc thu hẹp thành vòi cuốn với sự hiện diện của lá kèm Các lá và lá chét thường có cử động thức ngủ, trong khi lá kèm có khả năng biến đổi thành gai.
Hoa thường xuất hiện dưới nhiều hình thức như chùm, tán, đầu hoặc dạng bông Chúng có thể mọc đều hoặc không đều, với cánh hoa có thể rời hoặc dính một phần Hoa có cấu trúc mẫu 5 miệng với 5 cánh.
Răng thường có 5 hoặc 2 môi, với nhị mẫu từ 10 hoặc nhiều hơn, được sắp xếp theo 3 kiểu: 10 nhị rời, 10 nhị dính nhau, hoặc dính thành hai bó 5+5 Ngoài ra, có thể có 9 nhị ở phía trước cùng với nhị thứ mười rời hoặc 10 nhị xếp trên hai vòng Nhụy gồm một lá noãn tạo thành bầu trên với một ô, mang hai dãy noãn đảo hoặc cong, đính noãn ở mép Vòi nhụy có thể thẳng, cong hoặc cuộn lại.
Quả của cây họ Đậu có thể mở bằng hai khe nứt hoặc không mở, thường khô và ít khi mọng nước Quả chín có thể nằm trong đất như đậu phộng hoặc gãy thành nhiều khúc, mỗi khúc chứa một hạt riêng biệt Một số loài chỉ có một hạt và không tự mở Hạt của cây họ Đậu không có nội nhũ, với phôi cong chứa hai lá mầm dày và lớn, giàu chất dinh dưỡng Rễ của cây có các nốt sần chứa vi khuẩn cố định đạm cộng sinh.
Theo APG IV họ Đậu được chia làm 3 phân họ phân biệt thông qua dạng cụm hoa, kiểu tiền khai hoa và bộ nhị [8, 9]
Bảng 1.1 Đặc điểm phân biệt các phân họ Đậu
Phân họ Đậu (Faboideae) ở Việt Nam bao gồm 14-15 loài, với đặc điểm lá 2-3 lần kép hình lông chim Lá chét có khả năng phù, dẫn đến hiện tượng rủ xuống khi bị chạm Tiền khai hoa van, hoa nhỏ, đều và lưỡng tính, trong khi lá đài thường dính lại thành ống.
Cánh hoa thường dính, tiền khai van Nhị rời Ở Việt Nam phân họ Vang có gần 120 loài thuộc trên
Có 20 loại chi khác nhau, bao gồm cả cây gỗ lớn và cây bụi Chúng có lá kép từ 1-2 lần, hình dạng giống lông chim, và lá kèm thường rụng sớm Cụm hoa chủ yếu xuất hiện dưới dạng chùm, với nhị 10 rời xếp thành hình thìa.
2 vòng, hạt phấn rời Nhụy
1 lá noãn tạo thành bầu
Là phân họ lớn nhất của họ Đậu, ở Việt Nam có khoảng 90 chi với hơn
Có khoảng 450 loài với lá kép hình lông chim hoặc lá đơn mọc cách Hoa có đặc điểm không đều, lưỡng tính và thuộc mẫu 5 Cụm hoa thường xuất hiện dưới dạng chùm, với hình dạng tràng giống như bướm, tiền khai hoa cờ và cánh cờ ở phía sau.
6 hoặc dính, nhụy 1 lá noãn tạo thành bầu trên
Hạt có nội nhũ và mầm thẳng, trong khi quả có hình dạng dẹp hoặc trụ Hạt thường lớn nhất, xòe rộng và phủ lên hai cánh bên Loại hoa có 10 nhị và 1 nhụy với lá noãn, quả thuộc loại đậu, hạt không có nội nhũ, mầm cong và lá mầm dày.
Các loài thực vật thuộc họ Đậu có sự phân bố rộng rãi trên toàn cầu, đặc biệt là ở các vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới Tại Việt Nam, có khoảng 134 chi với hơn 630 loài đậu được trồng và mọc hoang, đóng vai trò quan trọng trong cải tạo đất canh tác nhờ vào nốt sần chứa vi khuẩn cố định đạm Nhiều loài trong họ này được sử dụng làm rau, cây ăn quả, cung cấp gỗ như Trắc, Lim, hoặc được dùng để nhuộm như Chàm, và cũng có những loài được trồng làm cây cảnh như Phượng.
Ngành Dược Việt Nam sử dụng 51 loài thực vật thuộc họ Đậu làm thuốc, tuy nhiên, một số loài như Củ đậu, Cam thảo dây và Thàn mát lại có độc tính trong hạt.
1.1.3 Đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng sinh học của một số loài thuộc chi Millettia
Chi Millettia thuộc họ Fabaceae, bao gồm hơn 200 loài thực vật phân bố chủ yếu ở các vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới trên toàn cầu Họ Fabaceae được xem là một trong những nhóm thực vật hạt kín quan trọng, với Millettia là một chi thực vật có hoa đa dạng Một số loài nổi bật trong chi Millettia bao gồm Millettia speciosa Champ, Millettia expansna (Benth.) Baker, Millettia ovalifolia Kurz, Millettia laurentii De Wild và Millettia pinnata (L.) Panigrahi.
Một số loài Millettia đã được chứng minh có giá trị như thuốc trong y học bản địa, giúp điều trị nhiều bệnh Chúng được sử dụng rộng rãi tại các quốc gia ở Châu Á và Châu Phi.
Tổng quan về cây Cát sâm (Millettia speciosa Champ.)
Tên khoa học: Millettia speciosa Champ., tên khác là Callerya speciosa
(Champ ex Benthh.) Schot; Nanhaia speciosa (Champ ex Benth.) J.Compton & Schrire thuộc họ Đậu (Fabaceae).
Tên tiếng Việt: cây Cát Sâm, trong đó Cát là sắn, vị thuốc này giống củ sắn nhưng lại có công dụng bồi bổ nên gọi là Cát Sâm.
Một số tên gọi khác: Tài lệch, Sâm nam, Sâm chuột, Sơn liên ngẫu, Ngưu đại lực, Đại lực thự và Sâm chèo mèo [21]
Hình 1.3 Hình vẽ cây Cát sâm và phân bố của nó ở Việt Nam [21]
1.2.2 Đặc điểm thực vật và phân bố cây Cát sâm
Cát sâm là một loại thực vật có kích thước trung bình, với cành mọc tựa và rễ củ mầm Loại cây này nổi bật với vị ngọt mát và lá kép lông chim lẻ, có thêm lá kèm Bề mặt lá và cành non được phủ một lớp lông, tạo nên đặc điểm nhận diện riêng biệt cho cây.
Cây có lá trưởng thành dài tới 10cm, mềm màu xanh xám, với mặt trên xám đen và mặt dưới xám nâu, có đặc điểm xoăn Hoa của cây có màu đỏ hoặc hơi tím, dài từ 10-25mm, với miệng hoa rộng và đài hình ống, gồm 10 nhị và vòi hình sợi Quả của cây có hình dẹt, bên trong chứa từ 1-10 hạt hình thấu kính.
Rễ cây có hình trụ đều, hai đầu thuôn nhỏ, thường được cắt thành các đoạn dài từ 5-15cm hoặc bổ dọc thành từng miếng khi chế biến dược liệu Dược liệu này có màu vàng nhạt đến vàng nâu, bề mặt nhiều bột và có những tia ruột giống như nan hoa bánh xe.
Vi phẫu dược liệu cho thấy lớp bần gồm 4-8 hàng tế bào hình chữ nhật đều đặn nằm ngang Mô cứng có 3-4 hàng tế bào thành dày chứa tinh thể calci oxalat hình thoi Mô mềm được tạo thành từ các tế bào mỏng hình đa giác, trong khi libe chứa những tế bào nhỏ đều đặn Mạch gỗ có hình dạng to và tròn, còn mô mềm ruột bao gồm các tế bào hình đa giác Tia ruột cũng góp phần vào cấu trúc này.
Cây phát triển chủ yếu ở các tỉnh như Tuyên Quang, Bắc Cạn, Quảng Ninh, Phú Thọ, Bắc Giang, Hà Nội, Lạng Sơn và Hà Nam, với 3 đến 4 hàng tế bào hình chữ nhật xếp theo hướng xuyên tâm.
Nghiên cứu hóa học thực vật đã chỉ ra rằng chiết xuất từ rễ của M speciosa chứa nhiều thành phần quý giá, bao gồm alkaloid, saponin, triterpene loại oleanane, flavonoid, isoflavone, rotenoid, lignan, chalcon và phenolic glycoside.
In a study by Ping Ding et al (2014), thirteen compounds were isolated, including docosanoic acid, tetracosan, octadecan, hexacosanoic acid, β-sitosterol acetate, β-sitosterol, syringin, maackiain, formononetin, ψ-baptigenin, rotundic acid, pedunculoid, and daucosterol Notably, compounds 5, 7, and 10-12 were reported for the first time from the plant cát sâm Additionally, a triterpenoid of the oleanane type, 22 β-acetoxy-3 β,24-dihydroxy-12-oleanen-30-oic acid, along with medicarpin, maackiain, and β-sitosterol, was identified from the ethyl acetate extract of M speciosa roots found in Vietnam.
The chemical structure of compounds isolated from the roots of Milletia speciosa includes several key substances: 1) Friedelin, 2) Rotundic acid, 3) Pedunculoside, 4) Uvaol, 5) Ursolic acid, 6) Gypenoside XVII, 7) Pterocarpin, 8) Syringin, 9) Daidzin, and 10) Rutin.
Nguyễn Ngọc Tuấn cùng các cộng sự tại Viện Công nghệ Sinh học và Công nghệ Thực phẩm, Đại học Công nghiệp Thành phố Hồ Chí Minh (2022) đã tiến hành nghiên cứu thành phần hóa học từ rễ củ cây Cát sâm Kết quả nghiên cứu cho thấy tổng cộng nhiều hợp chất có giá trị, mở ra hướng đi mới trong việc ứng dụng cây Cát sâm trong y học và công nghệ thực phẩm.
10 hợp chất, bao gồm sáu triterpenoid, hai flavonoid và hai hợp chất phenolic đã được xác định từ rễ của M speciose (hình 1.4) [2]
Nasiruddin và cộng sự (2022) đã nghiên cứu và so sánh các thành phần hóa học khác nhau trong mỗi phân đoạn dịch chiết M speciosa thông qua sắc ký đồ
Kết quả phân tích GC-MS của chiết xuất ete dầu hỏa cho thấy sự xuất hiện của 57 hợp chất khác nhau Ngoài ra, phân tích GC-MS của chiết xuất metanol từ thân cây M speciosa đã xác định được 13 hợp chất hóa học.
Zhang M và cộng sự (2021) đã phát hiện 86 hợp chất từ M speciosa thông qua phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Kết quả nghiên cứu cho thấy có 23 alkaloid chiếm 39,71%, 23 flavonoid chiếm 11,91%, và 17 acid, bao gồm 3 axit amin, 9 axit phenolic, và 5 axit hữu cơ.
15 cơ chiếm 9,2%), 9 terpenoit và steroid (20,13%), 7 este (3,33%), 3 lignan (3,73%),
Việc sử dụng M speciosa làm thực phẩm có nguồn gốc từ thời nhà Minh và nhà Thanh Các nghiên cứu hóa học đã chỉ ra rằng M speciosa chứa các thành phần như coumarin, alkaloid, flavonoid và terpen, đóng góp vào các đặc tính trị liệu của nó Những thành phần này giúp bảo vệ gan, chống viêm phế quản và tăng cường khả năng miễn dịch.
Flavonoid là thành phần chủ yếu trong M speciosa, được biết đến với khả năng chống béo phì và giảm lipid trong máu.
Formononetin, một isoflavone đặc trưng có trong rễ M speciosa, có khả năng ức chế quá trình hình thành mỡ và béo phì do chế độ ăn giàu chất béo (HFD) gây ra Chất này hoạt động bằng cách tăng cường sự sinh nhiệt trong tế bào mỡ.
Rễ Millettia speciosa chứa các thành phần chính như Medicarpin và maackiain, đã được nghiên cứu chứng minh có khả năng chống lại tế bào bạch cầu HL-60 và ức chế quá trình bài tiết bạch cầu từ tế bào RBL-2H3.
ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Đối tượng nghiên cứu
Cây Cát sâm được thu hái tại Tuyên Quang vào tháng 1 năm 2022 Sau khi thu hái, mẫu tươi được phơi sấy và bảo quản trong túi nilon kín, đồng thời lưu mẫu để giám định tại bộ môn Dược liệu – Dược học cổ truyền, Trường Đại học Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội Mẫu cây sau đó được sử dụng để ngâm dịch chiết và thực hiện các phản ứng định tính, định lượng các thành phần hóa học, cũng như phân lập và xác định cấu trúc các hợp chất có trong cây.
2.1.2 Hóa chất, trang thiết bị
- Các dung môi dùng để chiết xuất và phân lập bao gồm: Ethanol (EtOH) 80%, ethyl acetat (EtOAc), nước cất đạt tiêu chuẩn về độ tinh khiết
- Pha tĩnh dùng trong sắc ký cột: silica gel pha thường (Merck) cỡ hạt 0,063 – 0,200 mm và cỡ hạt 0,040 – 0,063 mm, pha đảo RP-18 (Merck) cỡ hạt 0,03 – 0,05 mm
- Các hóa chất dùng để định tính: H2SO4 1N, NH3, NaOH 10%, HCl, FeCl3 5%, thuốc thử Liebermann, Baljet, Legal, Mayer, Dragendorff, Fehling A, B,…
- Bản mỏng tráng sẵn trên đế nhôm, pha thường silica gel 60 F254 (Merck), độ dày 0,2 mm; pha đảo silica gel 60 RP-18 F254s (Merck), độ dày 0,25 mm; hoạt hóa ở 110ºC trong 1h
Dụng cụ thí nghiệm quan trọng trong lĩnh vực Dược liệu và Dược học cổ truyền bao gồm cốc có mỏ, bình nón, bình cầu, bình chiết, bình tam giác, pipet, ống đong và ống nghiệm Những dụng cụ này được sử dụng tại Bộ môn Dược liệu và Dược học cổ truyền, Trường Đại học Y Dược, ĐHQGHN.
- Sắc ký cột: sử dụng các cột sắc ký nhiều kích cỡ khác nhau tại Trường Đại học
- Máy cô quay: máy HAHNVAPOR tại Trường Đại học Y Dược, ĐHQGHN
- Máy đo nhiệt độ nóng chảy: máy SMP10 BioCote tại Trường Đại học Y Dược, ĐHQGHN
- Máy đo khối phổ ESI-MS: Đo trên máy Agilent 1100 LC/MSD tại Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam
Máy đo cộng hưởng từ hạt nhân NMR được thực hiện trên máy Bruker AVANCE 500 MHz tại Viện Hóa học, thuộc Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam.
Tại Bộ môn Dược liệu và Dược học cổ truyền, cùng với Bộ môn Bào chế và Công nghệ Dược phẩm của Trường Đại học Y Dược, ĐHQGHN, các thiết bị quan trọng như cân phân tích, tủ sấy, tủ hút, và đèn soi UV được sử dụng để phục vụ cho nghiên cứu và giảng dạy trong lĩnh vực dược phẩm.
Nội dung nghiên cứu
2.2.1 Phân lập được một số hợp chất trong phân đoạn dịch chiết ethylacetat của cây Cát sâm
Sau khi chiết xuất cao ethylacetat từ rễ củ cây Cát sâm, mẫu sẽ được thực hiện các phản ứng hóa học để xác định các nhóm hợp chất có trong cây Cao ethylacetat sẽ được phân tích qua sắc ký cột và sắc ký lớp mỏng nhằm chiết xuất và phân lập các thành phần hóa học có trong phân đoạn này.
2.2.2 Xác định được một số hợp chất trong phân đoạn ethylacetat của cây Cát sâm
Khi kiểm tra chất bằng sắc ký lớp mỏng hoặc các phương pháp sắc ký khác, nếu chất đạt độ tinh khiết cao, tiến hành đo điểm chảy và phổ ESI-MS, kết hợp với dữ liệu từ máy cộng hưởng từ hạt nhân NMR để xác định chính xác hợp chất Từ cấu trúc hóa học, có thể xác định tên hợp chất và dự đoán tiềm năng của chất phân lập được.
Phương pháp nghiên cứu
2.3.1 Xử lý và bảo quản mẫu
Sau khi thu hái, mẫu dược liệu cần được thái phiến, sấy khô và nghiền nhỏ Tiếp theo, dược liệu được sấy trong tủ sấy ở nhiệt độ dưới 50℃ cho đến khi khô hoàn toàn Cuối cùng, bảo quản dược liệu trong túi nilon kín và để ở nơi khô ráo, thoáng mát.
2.3.2 Phương pháp chiết xuất, phân lập và xác dịnh cấu trúc một số hợp chất có trong phân đoạn ethylacetat của rễ cây Cát sâm
2.3.5.1 Phương pháp xử lý mẫu và chiết xuất
Rễ củ cây Cát sâm được thái phiến, sấy khô và nghiền nhỏ, sau đó chiết xuất bằng phương pháp Soxhlet trong 6-8 giờ với dung môi nước cất Quá trình chiết xuất này được thực hiện lặp lại 3 lần, sau đó dịch chiết được lọc qua bông, gộp lại và cô quay chân không dưới áp suất giảm cho đến khi thu được cao lỏng toàn phần.
Cao này được chiết phân lớp lần lượt với n- hexan, EtOAc và n-BuOH
Mỗi dung môi được sử dụng ba lần, với mỗi lần là 1,5L và lắc mạnh trong 10 phút Sau khi gộp và loại bỏ dung môi của các dịch chiết dưới áp suất giảm, thu được 18g cắn n-hexan, 92g cắn EtOAc và 26g cắn n-BuOH.
2.3.5.2 Phương pháp phân lập các hợp chất phân đoạn ethylacetat
Phương pháp sắc ký cột và sắc ký lớp mỏng là hai kỹ thuật chính trong việc phân lập các hợp chất từ dịch chiết ethylacetat Sắc ký cột được sử dụng để phân tách các hợp chất, trong khi sắc ký lớp mỏng giúp khảo sát các phân đoạn và đánh giá độ tinh sạch của chất.
Sắc ký cột: được tiến hành với chất hấp phụ là silicagel pha thường cỡ hạt 0,063 – 0,200 mm và 0,040 – 0,063 mm (Merck) và pha đảo RP-18 cỡ hạt
0,03 – 0,05 mm (Merck) với các loại cột sắc ký có kích cỡ khác nhau
Sắc ký lớp mỏng được thực hiện trên bản mỏng đế nhôm với silica gel 60 F254 có độ dày 0,2 mm và RP-18 F254s (Merck) với độ dày 0,25 mm Trước khi sử dụng, bản mỏng cần được hoạt hóa ở nhiệt độ 110ºC trong 1 giờ để đảm bảo hiệu quả tối ưu trong quá trình sắc ký.
Sắc ký là phương pháp phát hiện vết chất bằng cách sử dụng đèn tử ngoại ở bước sóng 254 nm và 365 nm Ngoài ra, có thể sử dụng thuốc thử là dung dịch H2SO4 10% trong ethanol, sau đó sấy khô và hơ nóng trên bếp điện từ cho đến khi xuất hiện màu.
2.3.5.3 Phương pháp xác định cấu trúc các hợp chất đã phân lập được Để xác định cấu trúc của các hợp chất đã phân lập được ở phân đoạn dịch chiết ethylacetat từ rễ củ cây Cát sâm được triển khai qua 2 bước chính:
Để tiến hành phân tích chất phân lập, bước đầu tiên là đo nhiệt độ nóng chảy và thực hiện các phương pháp đo phổ như phổ khối (MS) và phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR), bao gồm 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT, HSQC, HMBC và NOESY Những dữ liệu này sẽ được thiết lập thành một bộ dữ liệu hoàn chỉnh cho chất phân lập.
- Bước 2: So sánh bộ dữ liệu các chất phân lập được với dữ liệu các chất đã công bố và kết luận [35-37]
KẾT QUẢ
Chiết xuất và phân lập được các hợp chất từ rễ củ cây Cát sâm
Rễ củ cây Cát sâm được thái phiến, sấy khô (3,5kg) và nghiền nhỏ, sau đó chiết Soxhlet trong 6-8 giờ bằng dung môi nước cất Dịch chiết được gộp lại và cô quay chân không dưới áp suất giảm cho đến khi thu được cao lỏng toàn phần Cao này được chiết phân lớp lần lượt với n-hexan, EtOAc và n-BuOH, mỗi loại chiết 1,5 lít.
3 lần) Cất loại dung môi của các dịch chiết thu được dưới áp suất giảm thu được 18g cắn n-hexan; 92g cắn EtOAc và 26g cắn n- BuOH
Quy trình chiết xuất cao tổng và các cao phân đoạn được tóm tắt ở sơ đồ hình 3.1
Hình 3.1 Quy trình chiết xuất cao tổng và các cao phân đoạn cây Cát sâm
Quy trình phân lập các hợp chất từ cắn EtOAc được tóm tắt ở hình 3.2
1 Chiết Soxhlet 6-8h bằng DM nước cất
2 Loại bã dược liệu, gộp dịch chiết
3 Cô quay chân không dưới áp suất giảm
1 Chiết phân đoạn lần lượt với n-hexan, EtOAc và BuOH (1,5l x 3 lần)
2 Cất loại dung môi dưới áp suất giảm
Hình 3.2 Quy trình phân lập các hợp chất từ cắn EtOAc của cây Cát sâm
Từ cắn chiết EtOAc (80g) được tiến hành trên sắc ký cột silicagel với các hệ dung môi r ử a giải là n-hexan-CH2Cl2 gradient (75:25 → 15:85) thu được
Trong nghiên cứu, từ phân đoạn D2 (15g), chúng tôi đã tiến hành chạy sắc ký cột Sephadex LH20 với hệ pha động CHCl3 - MeOH (tỷ lệ 19:1 và 9:1, v/v, tổng thể tích 2,5L), thu được ba phân đoạn nhỏ hơn là D2.1, D2.2 và D2.3 Phân đoạn D2.1 được tách lại bằng sắc ký cột với dung môi chloroform:methanol (tỷ lệ 5:2; v/v), dẫn đến việc thu được hợp chất CS5 với trọng lượng 19 mg Trong khi đó, phân đoạn D2.2 tiếp tục được phân tách trên cột sắc ký silicagel, sử dụng hệ dung môi ethylacetat:dichlometan (tỷ lệ 5:1; v/v), thu được hợp chất CS6 với trọng lượng 30 mg.
Hệ dung môi rửa giải n-hexan-CH 2 Cl 2 gradient (75:25 → 15:85)
Sắc ký cột sephadex LH20 Pha động CHCl 3 - MeOH (19:1 và 9:1, v/v, 2,5L)
Sắc ký cột hệ dung môi với chloroform: methanol (5:2; v/v)
Sắc ký cột silicagel, rửa giải bằng hệ dung môi ethylacetat: dichlometan (5:1; v/v)
Sắc ký cột silicagel, rửa giải bằng hệ dung môi n- hexan: ethylacetat (3:2; v/v)
CS5 (19 mg) CS6 (30 mg) CS7 (23 mg)
Phân đoạn D2.3 được phân tách trên cột sắc ký silicagel, rửa giải bằng hệ dung môi n-hexan:ethylacetat (3:2; v/v) thu được hợp chất CS7 (23 mg).
Xác định được cấu trúc các hợp chất
Hợp chất CS5 (Rutin) (quercetin-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(1-6)-β-D- glucopyranoside) là chất bột màu vàng, có nhiệt độ nóng chảy tnc = 214 ÷ 216°C
Dữ liệu phổ 1 H-NMR, 13 C-NMR, DEPT của chất CS5 và chất tham khảo [38] được trình bày ở bảng 3.1
Bảng 3.1: Dữ liệu phổ DEPT, 1 H- và 13 C-NMR của CS5 và chất tham khảo đo trong DMSO-d6
CS5 Rutin (DMSO-d6) [38] δ C CS5 ppm δ H CS5 (ppm) (mult, J=Hz) δ C Ga,b ppm δ H Ga,c (ppm) (mult, J=Hz)
6''' CH3 17,9 1,03 (d; 6,0) 18,6 1,00 (d; 6,1) a ) đo trong DMSO-d6 , b ) 125 MHz, c ) 500 MHz, G) của Rutin
Phổ 1 H-NMR cho tín hiệu singlet tại δH 12,58 ppm của nhóm OH tại C-5 liên hợp với nhóm carbonyl Có năm tín hiệu proton thơm, hai proton ghép cặp kiểu ortho của H-5' tại δH 6,87 (1H, d, J=8,0Hz) với H-6' tại δH 7,54 (1H, dd, J=8,0; 2,0Hz), hai proton ghép cặp kiểu meta của H-6 tại δH 6,19 (1H, d, J=2,0Hz) với H-8 tại δH 6,39 (1H, d, J=2,0 Hz), một tín hiệu proton thơm singlet của H-2' tại δ H 7,56 (1H, s) Tín hiệu proton anomeric của gốc rhamnose tại δH 4,49 (1H, d, J=1,8Hz), tín hiệu proton anomeric của gốc glucose tại δH 5,31 (1H, d, J=7,8Hz) Các proton còn lại nằm trong vùng δH 3,83 đến δH 3,25ppm Tín hiệu nhóm methyl của gốc rhamnose tại δH 1,03 (3H, d, J=6,0Hz) Phổ 1 H-NMR của
Hợp chất CS5 cho thấy tín hiệu của vòng nhân thơm tại 7,54 (2H, m, H-2',6'), 6,87 (1H, d, J=8,0Hz; H-5') và 2 proton anomeric tại 5,31 (1H, d, J=7,8Hz; glcH-1'') và 4,49 (1H, d, J=1,8Hz; rhamH-1''') Phổ 1H-NMR của hợp chất này cũng ghi nhận tín hiệu proton methyl ở 1,03 (3H, d, J=6,0; rham-CH3) Đặc biệt, phổ 13C-NMR và DEPT cho thấy có 27 carbon, bao gồm 15 carbon của khung flavonoid và 12 carbon từ gốc đường glucose cùng với 6 carbon từ gốc đường rhamnose Qua so sánh dữ liệu phổ với tài liệu [38], chúng tôi khẳng định hợp chất CS5 là rutin (quercetin-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(1-6)-β-D-glucopyranoside).
Hình 3.3 Cấu trúc hóa học của Rutin (quercetin-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-
3.2.2 Hợp chất CS6: acid margaric
Kết tinh trong hệ dung môi dichlometan:methanol (1:1; v/v), tinh thể màu trắng ngà, tnc = 60-63 o C; R f = 0,66 (TLC, silica gel, n-hexan:aceton, 5:1, v/v), hiện màu tím với thuốc thử vanilin:acid sulfuric 1 %
Dữ liệu phổ 1 H-NMR, 13 C-NMR, DEPT của chất CS6 và chất tham khảo [25] được trình bày ở bảng 3.2
Bảng 3.2: Dữ liệu phổ DEPT, 1 H- và 13 C-NMR của CS6 và chất tham khảo
DEPT CS6 Acid margaric (CDCl3) δ C CS6 ppm δ H CS6 (ppm) (Mult, J=Hz) δ C Sa,b ppm δ H Sa,c (ppm) (Mult, J=Hz)
17 CH3 14,2 0,87 (t; 7,0) 14,1 0,88 (t; 6,6) a Đo trong CDCl 3 , b 125 MHz, c 500 MHz của chất tham khảo acid margaric [25]
Hợp chất CS6 là tinh thể màu trắng ngà với điểm nóng chảy từ 60-63°C Phổ ESI-MS cho thấy pic ion phân tử tại m/z 271,12 [M+H]+, phù hợp với công thức phân tử C17H34O2 (M = 270 đvC) Trên phổ 1H-NMR, tín hiệu cộng hưởng δH 2,33 (2H, t, J = 7,5 Hz; H-2) thuộc về nhóm metylen gắn trực tiếp với nhóm carbonyl, tương ứng với tín hiệu carbon ở δC 33,9 (C-2) trên phổ 13C-NMR Phổ cũng cho tín hiệu của nhóm metylen khác gần kề.
1,64 (2H, quartet, H-3) Sự có mặt của nhóm carbonyl trong acid dễ dàng nhận
28 ra trên phổ 1 3 C-NMR nhờ vào tín hiệu cộng hưởng ở δ C 179,1 (C-1) Nhóm metyl đầu mạch cho tín hiệu δH 0,87 (3H, t, J=7,0 Hz; H-17) và δ C 14,2 (C-
Trong nghiên cứu, sự chồng chập của 26H trong khoảng δ H 1,26-1,32 chỉ ra sự hiện diện của 13 nhóm metylen mạch dài (H-4→H-16) Phân tích từ phổ 1H-NMR và 13C-NMR cho thấy chất CS6 chứa 15 nhóm methylen, 1 nhóm methyl và 1 nhóm cacboxyl.
Kết hợp với tài liệu tham khảo [25] cho phép khẳng định hợp chất CS6 là acid heptadecanoic hay acid margaric
Hình 3.4 Hình ảnh của acid margaric
3.3.3 Hợp chất CS7: acid ursolic
Chất rắn màu trắng, nhiệt độ nóng chảy ở 290-292°C
R f = 0,50 (TLC, silica gel RP-18, CH3OH:H2O 8:1, v/v), hiện màu tím với thuốc thử vanilin:acid sulfuric 1 %
Dữ liệu phổ 1 H-NMR, 13 C-NMR, DEPT của chất CS7 và chất tham khảo được trình bày ở bảng 3.3
Bảng 3.3: Dữ liệu phổ DEPT, 1 H- và 13 C-NMR của CS7 và chất tham khảo
DEPT CS7 Acid ursolic (DEPT) δ C CS7 ppm δ H CS7 (ppm) (Mult, J=Hz) δ C Ta,b ppm δ H Ta,c (ppm) (Mult, J=Hz)
30 CH3 21,0 0,91 (s) 21,1 0,90 (d; 6,0) aĐo trong Pyridin-d5 , b125 MHz, c500 MHz của chất tham khảo acid ursolic [2]
Phổ khối lượng điện tử (EI-MS) của hợp chất CS7 cho thấy pic ion phân tử m/z 456,1 [M]+ (C30H48O3) cùng với các phân mảnh ở 248,1; 203,1; 189,0, tương ứng với phân mảnh retro Diels-Alder từ triterpen urs-12-en có nhóm OH ở vòng A.
Phân tích các phổ 1 H - NMR và 1 3 C -NMR cho thấy tín hiệu của proton của nhóm hydroxymetin δH 3,18 ppm (1H, t, J,5 Hz; H-3) tương ứng với tín hiệu
Hợp chất CS7 có 30 nguyên tử carbon, với δC 78,6 (C-3) cho thấy sự chuyển dịch của nhóm carbonyl về trường thấp tại δC 180,6 (C-28) Sự hiện diện của nhóm metin olefinic được thể hiện qua tín hiệu ở δH 5,21 ppm (1H, t, J=7,5 Hz; H-12) và δC 125,1 (C-12) Phân tích các phổ 13C-NMR và DEPT hỗ trợ kết luận này.
Với các phân tích trên, kết hợp so sánh với các số liệu phổ đã công bố
[ 2 ] cho phép khẳng định cấu trúc của hợp chất CS7 là acid 3β-hydroxyurs- 12-en-28-oic hay acid ursolic
Hình 3.5 Hình ảnh của acid 3β-hydroxyurs-12-en-28-oic hay acid ursolic
BÀN LUẬN
Hợp chất rutin
Rutin, hay còn gọi là quercetin-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(1-6)-β-D-glucopyranoside], là một hợp chất tự nhiên thuộc nhóm flavonoid, cụ thể là flavonol Hợp chất này đóng vai trò quan trọng trong việc bảo vệ sức khỏe con người, bao gồm hoạt động chống khối u và khả năng phòng ngừa cũng như điều trị ung thư.
Vào năm 1842, rutin lần đầu tiên được phân lập từ cây Ruta graveolens L bởi một nhà khoa học người Đức, và cái tên 'rutin' cũng xuất phát từ đây Chất này có mặt nhiều trong thực vật như hoa lạc tiên, kiều mạch, trà và táo, và cũng được tìm thấy trong rễ củ cây Cát sâm Về mặt hóa học, rutin là một glycoside bao gồm flavonolic aglycone quercetin và disacarit rutinose Nó đã được chứng minh có nhiều hoạt động dược lý, bao gồm khả năng chống oxy hóa, bảo vệ tế bào, vận mạch, chống ung thư, bảo vệ thần kinh và bảo vệ tim mạch.
Rutin đã được chứng minh là có khả năng phòng ngừa viêm dây thần kinh và thiếu hụt rutin có thể dẫn đến suy giảm apoptosis thần kinh Ngoài ra, rutin có hoạt tính chống co giật và được xem là an toàn cho bệnh nhân động kinh, vì nó không ảnh hưởng đến hiệu quả của các loại thuốc chống động kinh và không gây ra tác dụng phụ.
Rutin ức chế cytokine tiền viêm bằng cách giảm sản xuất TNF-α và IL-1β trong microglia, điều này có lợi cho việc điều trị bệnh Alzheimer Nó làm giảm viêm do streptozotocin bằng cách ức chế hoạt động của protein axit dạng sợi thần kinh đệm, interleukin-8, cyclooxygenase-2, nitric oxide synthase cảm ứng và yếu tố nhân-kB Các nghiên cứu cho thấy động vật được điều trị bằng rutin giảm đáng kể bệnh viêm khớp dạng thấp và bệnh thiếu máu Fanconi nhờ vào việc ức chế sản xuất gốc oxy quá mức Với tác dụng kháng nấm và chống viêm, rutin cũng hiệu quả trong điều trị viêm khớp nhiễm khuẩn do nấm Candida albicans.
Nghiên cứu cho thấy rutin có tác dụng lợi tiểu, trong khi quercetin, một chuyển hóa của rutin, tác động lên nội mô mạch máu để giải phóng oxit nitric Điều này dẫn đến việc tăng giãn mạch thận và cải thiện quá trình lọc thận.
Rutin đã được nghiên cứu kỹ lưỡng về khả năng chống ung thư Nghiên cứu của Chem và các cộng sự chỉ ra rằng rutin có tác dụng ức chế mạnh mẽ sự phát triển của tế bào nguyên bào thần kinh LAN-5, đồng thời làm giảm khả năng hóa ứng động của các tế bào này.
Trong một nghiên cứu khác, quercetin làm tăng quá trình chết theo chương trình và ngăn cản sự di căn trong một mô hình ung thư tuyến tụy [43].
Acid margaric
Axit margaric hay axit heptadecanoic, với tên khoa học là Axit 2,2-Dimetylpent-4-enoic, là một loại axit béo bão hòa chuỗi lẻ (OCS-FA) Hợp chất này đã được nghiên cứu và xác định có mặt trong dịch chiết phân đoạn rễ củ cây Cát sâm cũng như một số loài thực vật khác, chẳng hạn như đậu bắp.
Axit heptadecanoic (C17:0) và OCS-FA thường ít được ưu tiên trong quá trình oxy hóa β so với các axit béo chuỗi chẵn Tuy nhiên, axit margaric có lợi ích quan trọng khi đóng vai trò là chất nền cho việc tổng hợp các axit béo bão hòa chuỗi lẻ, đặc biệt trong glycosphingolipid ở não và các bộ phận khác, đồng thời cung cấp phản ứng dị ứng chất trung.
Anaplerotic 33 là quá trình chuyển đổi propionyl-CoA thành succinyl-CoA trong chu trình acid citric (CAC), giúp bổ sung các hợp chất cần thiết cho chu trình này Quá trình này cũng bao gồm việc loại bỏ axit propionic dư thừa khỏi tuần hoàn, góp phần duy trì cân bằng trong chu trình.
Nghiên cứu cho thấy rằng các thành phần chất béo trong sữa uống có ảnh hưởng đến nguy cơ mắc bệnh tiểu đường Cụ thể, mức độ cao của các axit béo bão hòa chuỗi lẻ, bao gồm cả acid heptadecanoic, liên quan đến việc giảm khoảng 30% nguy cơ phát triển tiểu đường tuýp 2 mới mắc.
Acid heptadecanoic hiện nay được coi là một dấu ấn sinh học quan trọng trong việc đánh giá nguy cơ và tiên lượng bệnh lý, cũng như trong chế độ ăn uống Nghiên cứu cho thấy mối quan hệ giữa acid heptadecanoic và các bệnh lý có thể dự đoán một cách đáng tin cậy, ngay cả khi không phụ thuộc vào chế độ ăn uống Quá trình sinh tổng hợp acid heptadecanoic nội sinh cũng liên quan đến căn nguyên bệnh lý.
Acid ursolic
Axit ursolic (3β-hydroxyurs-12-en-28-oic) là một triterpenoid năm vòng thuộc loại ursan, có nguồn gốc từ cây thuốc, trái cây và rau củ Trong những năm gần đây, các nghiên cứu đã chỉ ra rằng axit ursolic sở hữu nhiều hoạt tính sinh học đáng chú ý, bao gồm khả năng chống viêm, chống oxy hóa và chống ung thư.
Acid ursolic được phát hiện lần đầu vào những năm 1920 từ lớp biểu bì sáp của táo và đã được phân lập gần đây từ nhiều cơ quan thực vật khác nhau, bao gồm rễ củ cây Cát sâm Nhiều loài thực vật chứa acid ursolic, như lá Arctostaphylos uva-ursi có tác dụng chống ung thư, lá Argania spinosa có khả năng kháng khuẩn, thân lá Bursera cuneata có vai trò chống viêm và kháng histamine, hoa Lami album giúp chống oxy hóa, và quả Ligustrum lucidum hỗ trợ bệnh mạch vành và tiểu đường.
34 thân rễ Panax ginseng (CA Mey.) Baill (Araliaceae) có tác dụng kháng virus chống ung thư và nhiều công dụng khác [49]
Acid ursolic (UA) có đặc tính chống ung thư mạnh mẽ, được nghiên cứu cho thấy khả năng điều chỉnh yếu tố phiên mã tế bào, thụ thể và nhiều mục tiêu phân tử khác, ảnh hưởng đến sự tăng sinh tế bào, di căn và quá trình chết theo chương trình thông qua các cơ chế và con đường truyền tín hiệu khác nhau Tác dụng chống ung thư của UA đã được ghi nhận đối với nhiều loại ung thư, bao gồm ung thư nội mạc tử cung, tụy, phổi, tuyến tiền liệt, buồng trứng, bàng quang, dạ dày và gan.
Hệ thống phân loại dược phẩm sinh học (BCS) phân loại UA là thuốc nhóm
IV có tác dụng dược lý hạn chế do khả năng hòa tan trong nước thấp và khó thấm qua một số màng sinh học Các thuốc trong nhóm này không chỉ hòa tan chậm mà còn hạn chế thấm qua niêm mạc đường tiêu hóa, dẫn đến sinh khả dụng đường uống thấp Để cải thiện tác dụng dược sinh học của UA, nhiều nhà nghiên cứu đã phát triển các chiến lược mới như nạp vào các công thức nano hoặc sửa đổi cấu trúc của nó.
Axit ursolic có tác dụng chống viêm, chống oxy hóa và kháng vi-rút, giúp giảm sự giải phóng cytokine gây viêm và cải thiện cytokine chống viêm Nó cũng ức chế sản xuất các loại oxy phản ứng (ROS), nhờ đó giảm thiểu các biến chứng do nhiễm SARS-CoV-2 gây ra.
Các thành phần hóa học từ M speciose có thể đóng vai trò quan trọng trong việc phát triển thuốc chống viêm và điều trị bệnh tiểu đường, mở ra hướng nghiên cứu mới đầy hứa hẹn.
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận
Sau quá trình nghiên cứu thực nghiệm đề tài khóa luận đã thu được một số kết quả như sau:
Đã phân lập được 03 thành phần hóa học trong phân đoạn dịch chiết ethylacetat từ rễ củ cây Cát sâm
Đã xác định được cấu trúc 03 thành phần hóa học đã phân lập là hợp chất rutin, acid margaric và acid ursolic
Tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa học và phân lập các hợp chất từ rễ củ cây Cát sâm qua nhiều phân đoạn khác nhau như n-hexan, ethanol và phân đoạn nước để khám phá tiềm năng dược lý của loại cây này.
Nghiên cứu tác dụng sinh học và đánh giá xác định hợp chất tiềm năng trong rễ củ cây Cát sâm
[1] Banzouzi, J., et al., Traditional uses of the African Millettia species (Fabaceae) 2008
Nguyễn Ngọc Tuấn, Nguyễn Thị Hương, Lê Thị Mỹ Châu, Tăng Xuân Hải, Trần Trung Hiếu, Nguyễn Thị Kim Anh, Nguyễn Tân Thanh, Lê Văn Tân, Nguyễn Quốc Cường, Trần Quang, Ping-Chung Kou, Lê Đăng Quang, và Trần Đình Thắng là những cá nhân tiêu biểu trong lĩnh vực nghiên cứu và phát triển.
Inhibition of α-Glucosidase, Acetylcholinesterase, and Nitric Oxide Production by Phytochemicals Isolated from Millettia speciosa-In Vitro and Molecular Docking Studies Plants (Basel) 2022 Jan 30
[3] Angiosperm Phylogeny Group and et (2016), "An update of the Angiosperm
Phylogeny Group classification for the orders and families of flowering plants: APG IV", Botanical journal of the Linnean Society 181(1), 1-20
[4] Armen Leonovich Takhtadzhian, Leon Arminovich Takhtajan và Armen Takhtajan (1997), Diversity and classification of flowering plants, Columbia
[5] Group, A.P., et al., An update of the Angiosperm Phylogeny Group classification for the orders and families of flowering plants: APG IV 2016
[6] Andrews M, Andrews ME Specificity in Legume-Rhizobia Symbioses Int J
[7] Tucker SC Floral development in legumes Plant Physiol 2003
[8] Trương Thị Đẹp., Thực vật Dược 2007: NXB Giáo dục
[9] Lê Đình Bích, Trần Văn Ơn., Thực vật học 2007: NXB Y học
[10] Jena, R., et al., A review on genus Millettia: Traditional uses, phytochemicals and pharmacological activities 2020 28(12): p 1686-1703
[11] Havyarimana Léopold, Ndendoung Simplice Tatsimo, de Dieu Tamokou Jean, de Théodore Atchadé Alex, Tanyi Joseph Mbafor Chemical constituents of Millettia barteri and their antimicrobial and antioxidant activities Pharm Biol 2012;50(2):141–146
In their 2017 study published in Phytochemistry Letters, Marco Makungu and colleagues investigated the presence of pterocarpans and isoflavones in the root bark of Millettia micans and Millettia dura The research highlights the potential phytochemical benefits of these compounds, contributing to the understanding of the medicinal properties of these plants.
The study conducted by Yenesew Abiy et al (2003) investigates the anti-plasmodial activities and X-ray crystal structures of rotenoids derived from the Millettia usaramensis subspecies usaramensis Published in Phytochemistry, the research highlights the potential of these compounds in combating malaria, emphasizing their significance in the development of new therapeutic agents The findings contribute valuable insights into the chemical properties and biological efficacy of natural products against parasitic infections.
A study by Zingue et al (2016) investigated the estrogenic and cytotoxic properties of compounds extracted from Millettia macrophylla Benth, a member of the Fabaceae family The research aims to enhance the understanding of the mechanisms underlying these biological activities, contributing valuable insights into the potential applications of this plant in complementary and alternative medicine.
[15] Huang, Z., et al., A novel polysaccharide from the roots of Millettia speciosa
Champ: preparation, structural characterization and immunomodulatory activity
[16] Mohod Smeeta M., Bodhankar Subhash L Antiulcer activity of aqueous extract of leaves of Madhuca indica J F Gmel against naproxen induced gastric mucosal injury in rats J Acute Dis 2013;2(2):127–133
Recent research by Ren et al focused on isolating bioactive compounds, specifically rotenoids and isoflavonoids, from the fruits of Millettia caerulea The findings, published in Planta Med, highlight the potential health benefits of these compounds, emphasizing their significance in pharmacological applications This study contributes to the understanding of the medicinal properties of Millettia caerulea and underscores the importance of further exploration into its bioactive constituents.
[18] Ayal, G., A Belay, and W.J.W.M Kahaliw, Evaluation of wound healing and anti-inflammatory activity of the leaves of Calpurnia aurea (Ait.) Benth (fabaceae) in mice 2019 25(1): p 100151.
[19] Tu, Y., et al., Bioactivity-guided identification of flavonoids with cholinesterase and β-amyloid peptide aggregation inhibitory effects from the seeds of Millettia pachycarpa 2019 29(10): p 1194-1198
[20] Suthiphasilp V, Rujanapun N, Kumboonma P, Chaiyosang B, Tontapha S, Maneerat T, Patrick BO, Andersen RJ, Duangyod T, Charoensup R, Laphookhieo
S Antidiabetic and Cytotoxic Activities of Rotenoids and Isoflavonoids Isolated from Millettia pachycarpa Benth ACS Omega 2022 Jul 6
[21] Đỗ Tất Lợi., Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam 2007: NXB Hồng Đức
[22] Phạm Hoàng Hộ., Cây cỏ Việt Nam 2003: NXB Trẻ.
[23] Bộ Y Tế, Dược điển Việt Nam V 2018: NXB Y học
[24] Ding, P., et al., Chemical constituents of Millettia speciosaMillettia speciosa
[25] Nasiruddin, Chen G, Li X, Minghui J, Masood T, Safir W, Khan MA, Numan
M, Khan A, Zeeshan M, Zeb S Comparison of Phytochemical Constituents and
Pharmacological Activities of Various Solvent Extracts Obtained from Millettia speciosa Stem Powder Biomed Res Int 2022 Nov 16
[26] Zhang M, Cui C, Lin Y, Cai J Ameliorating effect on glycolipid metabolism and chemical profile of Millettia speciosa champ extract J Ethnopharmacol 2021
[27] Wei Y., Wu F., Zeng H., Lu S., Chen Y The overview on the research of radix Millettia speciosa Journal of Guangxi Academy of Sciences 2010;26:380–
[28] Nery, M , Ferreira, P S , Gonỗalves, D R , Spolidorio, L C , Manthey, J
A , & Cesar, T B (2021) Physiological effects of tangeretin and heptamethoxyflavone on obese C57BL/6J mice fed a high‐fat diet and analyses of the metabolites originating from these two polymethoxylated flavones Food
A study by Gautam et al (2017) published in the British Journal of Nutrition reveals that formononetin, an isoflavone, plays a significant role in activating AMP-activated protein kinase/β-catenin signaling pathways This activation helps inhibit adipogenesis and effectively rescues C57BL/6 mice from obesity and bone loss induced by a high-fat diet.
[30] Uchiyama, T., M Furukawa, and S.J.H Isobe, New oleanane-type triterpene saponins from Millettia speciosaMillettia speciosa 2003 60(3): p 655-661
[31] Ahmad, A., et al., Therapeutic potential of flavonoids and their mechanism of action against microbial and viral infections—A review 2015 77: p 221-235.
[32] Sasaki, T., et al., Antioxidant lignoids from leaves of Ribes nigrum 2013 95: p 333-340
[33] Viện y dược học dân tộc., Cát sâm vị thuốc quý
[34] Trung tâm dược liệu., Cát sâm
[35] Fu, M.-q., et al., Chemical constituents from roots of Millettia speciosa 2016 8(4): p 385-389
[36] Zong, X.-K., et al., Studies on chemical constituents of root of Millettia speciosaMillettia speciosa 2009 32(4): p 520-521.
[37] Wang Y, Z.Z., Study on steroids from the stem of Croton caudatus Geisel.var tomentosus Hook Chin Pharm J 2008
[38] Zor M, Aydin S, Güner ND, Başaran N, Başaran AA Antigenotoxic properties of Paliurus spina-christi Mill fruits and their active compounds BMC
[39] Başaran E, ệztỹrk AA, Şenel B, Demirel M, Sarica Ş Quercetin, Rutin And
Quercetin-Rutin Incorporated Hydroxypropyl β-Cyclodextrin Inclusion Complexes Eur J Pharm Sci 2022 May 1
[40] Ganeshpurkar A, Saluja AK The Pharmacological Potential of Rutin Saudi Pharm J 2017 Feb
Rutin has been shown to prevent cognitive impairments by reducing oxidative stress and neuroinflammation in a rat model of sporadic Alzheimer's dementia, according to a study by Javed et al (2012).
[42] Hsu C.Y., Shih H.Y., Chia Y.C., Lee C.H., Ashida H., Lai Y.K., Weng C.F
Rutin potentiates insulin receptor kinase to enhance insulin-dependent glucose transporter 4 translocation Mol Nutr Food Res 2014;58(6):1168–1176
[43] Lin J.P., Yang J.S., Lin J.J., Lai K.C., Lu H.F., Ma C.Y., Sai-Chuen Wu R.,
Wu K.C., Chueh F.S., Gibson Wood W., Chung J.G Rutin inhibits human leukemia tumor growth in a murine xenograft model in vivo Environ Toxicol 2012;27(8):480–484
[44] Jenkins B, West JA, Koulman A A review of odd-chain fatty acid metabolism and the role of pentadecanoic Acid (c15:0) and heptadecanoic Acid (c17:0) in health and disease Molecules 2015 Jan 30
[45] Sami R, Lianzhou J, Yang L, Ma Y, Jing J Evaluation of fatty acid and amino acid compositions in okra (Abelmoschus esculentus) grown in different geographical locations Biomed Res Int 2013
[46] Pfeuffer M, Jaudszus A Pentadecanoic and Heptadecanoic Acids: Multifaceted Odd-Chain Fatty Acids Adv Nutr 2016 Jul 15
[47] Imamura F, Fretts A, Marklund M, Ardisson Korat AV, Yang WS, Lankinen
M, Qureshi W, Helmer C, Chen TA, Wong K, Bassett JK, Murphy R, Tintle N,
A pooled analysis of prospective cohort studies conducted by Yu CI and colleagues, published in PLoS Medicine, investigates the relationship between fatty acid biomarkers of dairy fat consumption and the incidence of type 2 diabetes The research, involving multiple contributors from the InterAct Consortium and the Fatty Acids and Outcomes Research Consortium (FORCE), highlights the potential impact of dairy fat on diabetes risk, providing valuable insights for nutritional guidelines and public health recommendations.
[48] Jenkins B, de Schryver E, Van Veldhoven PP, Koulman A Peroxisomal 2- Hydroxyacyl-CoA Lyase Is Involved in Endogenous Biosynthesis of Heptadecanoic Acid Molecules 2017 Oct 13
[49] Khwaza V, Oyedeji OO, Aderibigbe BA Ursolic Acid-Based Derivatives as
Potential Anti-Cancer Agents: An Update Int J Mol Sci 2020 Aug 18
[50] Angeles M.L., Navin R., Kim S.M Therapeutic Interventions Using Ursolic
Acid for Cancer Treatment Med Chem 2016;6:339–344
[51] Woźniak Ł., Skąpska S., Marszałek K Ursolic acid-A pentacyclic triterpenoid with a wide spectrum of pharmacological activities Molecules 2015;20:20614–20641
[52] Al-Kuraishy HM, Al-Gareeb AI, Negm WA, Alexiou A, Batiha GE Ursolic acid and SARS-CoV-2 infection: a new horizon and perspective Inflammopharmacology 2022 Oct;30(5):1493-1501.