(Luận văn) nghiên cứu thành phần hóa học và khảo sát hoạt tính sinh học loài san hô mềm sinularia erecta

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - NGUYỄN THỊ HƯỜNG lu an n va tn to KHẢO SÁT HOẠT TÍNH SINH HỌC LỒI SAN HƠ MỀM p ie gh NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ d oa nl w SINULARIA ERECTA u nf va an lu ll LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC oi m z at nh z m co l gm @ Hà Nội – 2020 an Lu n va ac th i si ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - NGUYỄN THỊ HƯỜNG lu an n va NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ tn to KHẢO SÁT HOẠT TÍNH SINH HỌC LỒI SAN HÔ MỀM p ie gh SINULARIA ERECTA Chuyên ngành: Hóa hữu d oa nl w Mã số : 8440112.02 an lu ll u nf va LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC oi m z at nh NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC TS NGUYỄN HOÀI NAM z PGS.TS TRẦN MẠNH TRÍ m co l gm @ Hà Nội – 2020 an Lu n va ac th i si LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan : Luận văn cơng trình nghiên cứu riêng em, thực hướng dẫn TS Nguyễn Hồi Nam TS Trần Mạnh Trí Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa cá nhân nhóm tác giả cơng bố cơng trình khác Em xin hoàn toàn chịu trách nhiệm nghiên cứu lu HỌC VIÊN CAO HỌC an n va tn to p ie gh Nguyễn Thị Hường d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th i si LỜI CẢM ƠN Trước hết, em xin gửi lời cám ơn chân thành sâu sắc tới thầy cô giáo Khoa Hóa Học - Trường Đại học Khoa học tự nhiên, tận tình giảng dạy, truyền đạt cho em kiến thức, kinh nghiệm quý báu suốt thời gian học tập Đặc biệt, em xin chân thành cảm ơn thầy TS Nguyễn Hồi Nam TS Trần Mạnh Trí tận tình hướng dẫn, hết lịng bảo, tạo điều kiện giúp đỡ em suốt thời gian làm luận văn Đồng thời, em xin gửi lời cảm ơn đến tập thể cán phòng Dược liệu biển, Viện Hóa sinh biển, Viện Hàn lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam tận tình giúp lu đỡ, trực tiếp bảo, hướng dẫn em suốt trình làm luận văn tốt nghiệp an bổ ích mà học tập tinh thần làm việc, thái độ nghiên cứu khoa học nghiêm n va Trong thời gian làm việc, em không ngừng tiếp thu thêm nhiều kiến thức chuyên môn to tn túc, hiệu quả, điều cần thiết cho em trình học tập ie gh công tác sau p Luận văn giúp đỡ mặt kinh phí thực khuôn khổ nội dung nl w Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam VAST-FEB RAS chuyến thám oa hiểm Akademik Oparin thứ [VAST.HTQT.NGA.15–04/16–17] d Em xin chân thành cảm ơn ! nf va an lu z at nh oi lm ul HỌC VIÊN CAO HỌC z m co l gm @ Nguyễn Thị Hường an Lu n va ac th ii si MỤC LỤC MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH viii ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu san hô mềm 1.1.1 Khái quát chung san hô mềm 1.1.2 Giới thiệu san hô mềm Sinularia 1.1.3 Giới thiệu san hô mềm Sinularia erecta 1.2 Tình hình nghiên cứu hóa học hoạt tính sinh học số lồi san hơ mềm lu điển hình thuộc giống Sinularia an 1.2.2 Tình hình nghiên cứu hóa học hoạt tính sinh học số lồi san hơ mềm điển hình thuộc giống Sinularia Việt Nam 15 n va 1.2.1 Tình hình nghiên cứu hóa học hoạt tính sinh học số lồi san hơ mềm điển hình thuộc giống Sinularia giới tn to gh CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG, MỤC TIÊU, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 p ie 2.1 Đối tượng nghiên cứu 18 w 2.2 Mục tiêu nội dung nghiên cứu 18 oa nl 2.2.1 Mục tiêu luận văn 18 2.2.2 Các nội dung nghiên cứu 18 d an lu 2.3 Phương pháp nghiên cứu 19 nf va 2.3.1 Phương pháp xử lý mẫu, tạo dịch chiết, phân lập hợp chất 19 2.3.2 Xác định cấu trúc hợp chất sử dụng phổ cộng hưởng từ hạt nhân 21 lm ul 2.3.3 Phương pháp nghiên cứu thử nghiệm hoạt tính diệt tế bào ung thư 22 z at nh oi 2.3.4 Phương pháp đánh giá hoạt tính kháng viêm 23 3.1 Phân lập hợp chất từ san hô mềm Sinularia erecta 25 3.1.1 Phân lập hợp chất 25 z @ 3.1.2 Hằng số vật lý liệu phổ hợp chất phân lập 27 l gm 3.2 Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào ung thư hợp chất phân lập 28 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 co m 4.1 Kết xác định cấu trúc hợp chất phân lập 29 an Lu 4.1.1 Hợp chất 1: 3β,5α-dihydroxyeudesma-4(15), 11-diene (chất mới) 29 4.1.2 Hợp chất 2: 4(15)-Eudesmene-1β,6α-diol 35 n va ac th iii si 4.1.3 Hợp chất : 6-Hydroxy-eudesm-4(15)-ene-1-one 40 4.1.4 Hợp chất 4: 4β,15-Epoxyeudesmane-1β,6α-diol 45 4.1.5 Hợp chất 5: Aromadendrane-4,10-diol 49 4.1.6 Hợp chất 6: Aromadendrane-4,10-diol 54 4.1.7 Hợp chất 7: Aromadendrane-4,10-diol 58 IV.1.8 Hợp chất 8: Alloaromadendrane-4,10-diol 63 4.2 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào ung thư hợp chất phân lập 69 KẾT LUẬN 72 PHỤ LỤC 79 Phụ lục phổ 79 lu Cơng trình cơng bố 96 an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th iv si DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu H-NMR 13 Tiếng Anh C-NMR H-1H COSY Tiếng Việt Proton Magnetic Resonance Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Spectroscopy proton Carbon-13 Nuclear Magnetic Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Resonance Spectroscopy cacbon 13 Phổ tương tác proton-proton H-1H Chemical Shift Correlation Spectroscopy lu an Lung carcinoma cancer Ung thư phổi CC Column Chromatography Sắc ký cột DEPT Distortionless Enhancement by Phổ DEPT Polarisation Transfer n va A-549 to Dimethyl sulfoxide gh tn DMSO EC50 Nồng độ tác dụng hiệu Effective concentration of 50% ie p 50% Phổ khối ion hóa phun điện tử Electron Spray Ionization Mass nl w ESI-MS oa Spectra Cervical adenocarcinoma cancer HMBC Heteronuclear Multiple Bond Ung thư cổ tử cung d Hela lu nf va an Phổ tương tác dị hạt nhân qua nhiều liên kết High-performance liquid Sắc ký lỏng hiệu cao HR-ESI-MS Hight Resolution Electron Spray Phổ khối ion hóa phun điện tử Ionization Mass Spectra phân giải cao Phổ tương tác dị hạt nhân qua @ Heteronuclear Single Quantum z HSQC z at nh oi chromatography lm ul HPLC Connectivity liên kết IC50 Inhibitory concentration of 50% Nồng độ ức chế 50% MPLC Medium pressure liquid Sắc ký lỏng trung áp m co l gm Coherence an Lu chromatography n va ac th v si PANC-1 Epithelioid carcinoma cancer Ung thư biểu mô tuyến tụy RAW264.7 Murine macrophage cell line Đại thực bào chuột ROESY Rotating-frame nuclear Overhauser effect correlation spectroscopy TLC Sắc ký lớp mỏng Thin Layer Chromatography lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th vi si DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Các lồi san hơ mềm thuộc chi Sinularia 06 Bảng 4.1 Số liệu phổ NMR hợp chất 31 Bảng 4.2 Số liệu phổ NMR hợp chất 37 Bảng 4.3 Số liệu phổ NMR hợp chất 42 Bảng 4.4 Số liệu phổ NMR hợp chất 47 Bảng 4.5 Số liệu phổ NMR hợp chất 52 Bảng 4.6 Số liệu phổ NMR hợp chất 56 Bảng 4.7 Số liệu phổ NMR hợp chất 61 lu Bảng 4.8 Số liệu phổ NMR hợp chất 65 an Bảng 4.10 Kết thử sàng lọc hoạt tính ức chế sản sinh NO mẫu…… 70 n va Bảng 4.9 Kết thử sàng lọc độc tế bào mẫu 69 p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th vii si DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Sơ đồ phả hệ giống Sinularia 04 Hình 2.1 San hơ mềm Sinularia erecta Tixier-Durivault, 1945 18 Hình 3.1 Sơ đồ chiết tách hợp chất từ mẫu Sinularia erecta 24 Hình 3.2 Sơ đồ phân lập hợp chất từ phân đoạn n-Hexan (H) 25 Hình 4.1.1a Phổ HR-ESI-MS hợp chất 28 Hình 4.1.1b Phổ 1H-NMR hợp chất 28 Hình 4.1.1c Phổ 13C-NMR hợp chất 29 Hình 4.1.1d Phổ HSQC hợp chất 30 Hình 4.1.1e Phổ HMBC hợp chất 31 lu Hình 4.1.1f Phổ NOESY hợp chất 32 an Hình 4.1.2a Phổ 1H-NMR hợp chất 34 n va Hình 4.1.1g Các tương tác HMBC cấu trúc hóa học hợp chất 33 to tn Hình 4.1.2b Phổ 13C-NMR hợp chất 34 ie gh Hình 4.1.2c Phổ HSQC hợp chất 35 p Hình 4.1.2d Phổ HMBC hợp chất 36 nl w Hình 4.1.2e Các tương tác HMBC cấu trúc hóa học hợp chất 37 oa Hình 4.1.3a Phổ 1H-NMR hợp chất 38 d Hình 4.1.3b Phổ 13C-NMR hợp chất 38 lu nf va an Hình 4.1.3c Phổ HSQC hợp chất 39 Hình 4.1.3d Phổ HMBC hợp chất 40 lm ul Hình 4.1.3e Các tương tác HMBC cấu trúc hóa học hợp chất 41 z at nh oi Hình 4.1.4a Phổ 1H-NMR hợp chất 42 Hình 4.1.4b Phổ 13C-NMR hợp chất 42 Hình 4.1.4c Phổ HSQC hợp chất 43 z @ Hình 4.1.3d Phổ HMBC hợp chất 44 l gm Hình 4.1.4e Các tương tác HMBC cấu trúc hóa học hợp chất 45 Hình 4.1.5a Phổ 1H-NMR hợp chất 46 co m Hình 4.1.5b Phổ 13C-NMR hợp chất 46 an Lu Hình 4.1.5c Phổ HSQC hợp chất 47 Hình 4.1.5d Phổ HMBC hợp chất 48 n va ac th viii si lu an n va p ie gh tn to Phổ HSQC hợp chất d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ n va ac th 91 an Lu Phổ HMBC hợp chất si 1.7 Phụ lục phổ hợp chất lu an n va tn to p ie gh Phổ 1H-NMR hợp chất d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu Phổ 13C-NMR hợp chất n va ac th 92 si lu an n va p ie gh tn to Phổ HSQC hợp chất d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ n va ac th 93 an Lu Phổ HMBC hợp chất si 1.8 Phụ lục phổ hợp chất lu an n va gh tn to p ie Phổ 1H-NMR hợp chất d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu Phổ 13C-NMR hợp chất n va ac th 94 si lu an n va p ie gh tn to Phổ HSQC hợp chất d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ n va ac th 95 an Lu Phổ HMBC hợp chất si Công trình cơng bố lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th 96 si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th 97 si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th 98 si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th 99 si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th 100 si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th 101 si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th 102 si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th 103 si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th 104 si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th 105 si