Sàng lọc tác dụng sinh học từ cao chiết của lá cẩm (dicliptera tinctoria (nees) kostel )

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC CHU THỊ THANH SÀNG LỌC TÁC DỤNG SINH HỌC TỪ CAO CHIẾT CỦA LÁ CẨM (Dicliptera tinctoria (Nees) Kostel.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƢỢC HỌC Hà Nội - 2023 ĐẠI QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC Người thực hiện: CHU THỊ THANH SÀNG LỌC TÁC DỤNG SINH HỌC TỪ CAO CHIẾT CỦA LÁ CẨM (Dicliptera tinctoria (Nees) Kostel.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC (NGÀNH DƢỢC HỌC) Khóa : QH.2018.Y Ngƣời hƣớng dẫn : PGS.TS NGUYỄN MINH KHỞI TS HOÀNG LÊ SƠN Hà Nội – 2023 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới PGS.TS Nguyễn Minh Khởi - Trưởng môn Dược liệu dược học cổ truyền; TS Hoàng Lê Sơn - Cán bộ môn Dược liệu dược học cổ truyền Đại học Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội định hướng, tận tâm bảo tạo điều kiện tốt giúp em hồn thành đề tài Khóa luận Các thầy khơng truyền đạt kiến thức học thuật cho em mà cung cấp, trang bị thêm cho em thêm nhiều kĩ quan trọng khác sống Em xin cảm ơn tới chị Nguyễn Thị Lý, anh chị Khoa Dược lý Viện Dược liệu, quý thầy cô môn Dược liệu Dược học cổ truyền tạo điều kiện dẫn cho em nhiều q trình thực Khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn đến Quý thầy cô Ban Giám hiệu Trường Đại học Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội cán bộ, giảng viên trực thuộc Trường Đại học Y Dược tận tình dạy, giúp đỡ cho em suốt năm học tập nghiên cứu trường Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình, anh, chị bạn bè ln bên, động viên, giúp đỡ em suốt thời gian học tập nghiên cứu, thực Khóa luận Trong q trình làm khóa luận khơng tránh khỏi thiếu xót, em mong nhận góp ý Thầy để khóa luận em hoàn thiện Lời cuối, em xin phép kính chúc Q thầy, người ln hạnh phúc, khỏe mạnh thành công sống! Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2023 Sinh viên CHU THỊ THANH DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT, KÍ HIỆU Chữ viết tắt D tinctoria P bivalvis P roxburghiana Syn AChE AD Cox Cox-1 Cox-2 DPPH DMSO UV-VIS Tên đầy đủ Dicliptera tinctoria (Nees) Kostel Peristrophe bivalvis (L) Merr Peristrophe roxburghiana (Schult) Tên đồng nghĩa Acetylcholinesterase Alzheimer Cyclooxygenase Cyclooxygenase-1 Cyclooxygenase-2 2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl Dimethyl sulfoxide Phương pháp quang phổ thụ phân tử (Ultraviolet- Visible Spectroscopy) DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Trang thiết bị sử dụng nghiên cứu 14 Bảng 2.2 Dung mơi, hố chất sử dụng nghiên cứu 15 Bảng 2.3 Các phần mềm, công cụ sử dụng 15 Bảng 3.1 Hiệu suất chiết cao cẩm 24 Bảng 3.2 Độ hấp thụ quang dung dịch chuẩn acid gallic nồng độ .25 Bảng 3.3 Nồng độ hàm lượng tổng polyphenol cao chiết cẩm 25 Bảng 3.4 Độ hấp thụ quang dung dịch chuẩn quercetin nồng độ .26 Bảng 3.5 Nồng độ hàm lượng tổng flavonoid cao chiết cẩm 27 Bảng 3.6 Kết sàng lọc nồng độ 100 µg giếng số mơ hình enzym: DPPH, ức chế tyrosinase, α-glucosidase, acetylcholinesterase 28 Bảng 3.7 Khả ức chế enzym acetylcholinestease cao chiết ethanol từ cẩm tím cẩm đỏ 29 Bảng 3.8 Các protein liên quan đến acetycholinesterase chọn để chạy docking với hoạt chất 30 Bảng 3.9 Kết sau chạy docking .32 DANH MỤC HÌNH VẼ Hình 1.1 Hình ảnh cẩm tím (A) cẩm đỏ (B) theo kinh nghiệm dân gian Hình 1.2 Hình ảnh D tinctoria phân bố vùng nhiệt đới cận nhiệt đới châu Á Hình 1.3 Cấu trúc hóa học alkaloid phân lập xác định cấu trúc Hình 1.4 Cấu trúc hóa học flavonoid phân lập xác định cấu trúc từ cẩm .5 Hình 1.5 Một số cấu trúc hóa học khác phân lập xác định cấu trúc từ cẩm Hình 2.1 Tiêu cẩm đỏ (A) cẩm tím (B) lưu mơn Dược liệu Dược cổ truyền trường Đại học Y Dược, Đại học quốc gia Hà Nội .14 Hình 2.2 Cơ chế phản ứng α-glucosidase 18 Hình 3.1 Hình ảnh soi kính hiển vi 4x 10x vi phẫu thân cẩm đỏ (A1, A2) cẩm tím (B1, B2) Đặc trưng xác định (1) Biểu bì, (2) Mơ mềm vỏ, (3) Trụ bì, (4) Nội bì, (5) Gỗ cấp 1, (6) Tầng phát sinh libe- gỗ, (7) Mô mềm tủy 21 Hình 3.2 Hình ảnh soi kính hiển vi 4x 10x vi phẫu lá cẩm đỏ (A3, A4) cẩm tím (B3, B4) Đặc trưng xác định (1) Lơng che chở, (2) Biểu bì trên, (3) Bó dẫn hình cung, (4) Biểu bì dưới, (5) Phiến 21 Hình 3.3 Hình ảnh soi bột phận rễ (A5) cẩm đỏ (B5) cẩm tím.Đặc trưng bột phận rễ xác định: Màu nâu nhạt.Có mảng bần, mảng mô mềm, mành mạch, mảng xylem, tinh thể hình trụ 22 Hình 3.4 Hình ảnh soi bột phận mặt đất cẩm đỏ (A6) cẩm tím (B6) Đặc trưng bột phận mặt đất xác định: Mảng mạch mạng, bó sợi, mảnh mạch mơ mềm, lớp bần, lơng che chở, tinh thể hình que, mạch xoắn 23 Hình 3.5 Hình ảnh 2D dự đốn liên kết hoạt chất protein .33 Hình 3.6 Các cấu trúc hóa học có khả gắn với protein: (1) allantoin, (2) phenoxazin, (3) coumarin 33 Hình 3.7 Khung cấu trúc co- enzyme (1) dihydrotanshinone I, (2) huperzine a, (3) acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose 34 Hình 4.1 Khung cấu trúc anthacyanin 36 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT, KÍ HIỆU DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH VẼ MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG 1- TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan cẩm 1.1.1 Tên khoa học 1.1.2 Đặc điểm thực vật .2 1.1.3 Phân bố .3 1.1.4 Thành phần hóa học 1.1.5 Công dụng 1.2 Tổng quan sàng lọc thuốc 1.2.1 Tổng quan nhóm chất hóa học 1.2.2 Các phương pháp để sàng lọc thuốc gồm kĩ thuật: in vitro in silico CHƢƠNG 2- ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Đối tượng nghiên cứu .14 2.2 Trang thiết bị, dung mơi, hóa chất, phần mềm .14 2.2.1 Trang thiết bị nghiên cứu 14 2.2.2 Dung mơi, hóa chất 15 2.2.3 Các phần mềm, công cụ 15 2.3 Phương pháp nghiên cứu 16 2.3.1 Phương pháp làm vi phẫu 16 2.3.2 Phương pháp soi bột 16 2.3.3 Chuẩn bị cao thử tác dụng sinh học 16 2.3.4 Định lượng hàm lượng tổng polyphenol phương pháp đo quang UV - VIS 17 2.3.5 Định lượng hàm lượng flavonoid toàn phần phương pháp đo quang UV-VIS .17 2.3.6 Thử nghiệm DPPH 18 2.3.7 Khả ức chế Tyrosinase 18 2.3.8 Khả ức chế α-glucosidase 18 2.3.9 Khả ức chế enzym acetylcholinesterase 19 2.3.10 Các phương pháp thực máy tính 19 2.4 Xử lý số liệu 20 CHƢƠNG 3- KẾT QUẢ 21 3.1 Vi phẫu soi bột 21 3.1.1 Vi phẫu .21 3.1.2 Soi bột dược liệu 22 3.2 Định lượng tổng Polyphenol Flavonoid phương pháp đo quang UVVIS 24 3.2.1 Hiệu suất chiết cao 24 3.2.2 Xác định hàm lượng tổng polyphenol theo acid gallic 24 3.2.3 Xác định hàm lượng tổng flavonoid theo quercetin 26 3.3 Khả thu dọn gốc tự DPPH, ức chế tyrosinase, α-glucosidase, acetylcholinesterase 27 3.3.1 Sàng lọc tác dụng số mơ hình enzym: DPPH, ức chế tyrosinase, α-glucosidase, acetylcholinesterase) 27 3.3.2 Xác định IC50 cao chiết ethanol 70% có tác dụng ức chế enzym acetylcholinestease 28 3.4 Sàng lọc hoạt chất dựa phương pháp Molecular docking .29 CHƢƠNG 4- BÀN LUẬN 35 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO 36 MỞ ĐẦU Cây cẩm thân thảo lâu năm với tên khoa học Dicliptera tinctoria (Nees) Kostel thuộc họ ô rô (Acanthaceae) Cây phân bố chủ yếu vùng cận nhiệt đới nhiệt đới Trung Quốc, Thái Lan Việt Nam Theo y học cổ truyền, cẩm vị đắng, tính bình có tác dụng nhiệt, giải độc, tiêu thũng, huyết với công dụng chữa viêm họng, thấp khớp, nhiễm trùng đường tiết niệu, kinh phong trẻ em, lao hạch, mụn nhọt Cao chiết nước, chiết cồn methanol từ D tinctoria (syn:P.roxburghiana) chứng minh có khả giảm huyết áp giảm lipid máu chuột tăng huyết áp L-NAME Một số hoạt chất từ cẩm phân lập xác định cấu trúc thuộc nhóm alcaloid, anthocyanidin flavonoid phenol Theo kinh nghiệm dân gian, cẩm sử dụng tạo màu cho ăn số nhà khoa học quan tâm nghiên cứu để chế tạo phẩm mầu từ tự nhiên Mặc dù, cẩm xác định phân loại thực vật lồi nhiên người dân có thói quen phân thành nhóm gồm cẩm tím, cẩm đỏ cẩm vàng dựa sản phẩm thu sau nhuộm Với mong muốn tìm kiếm hoạt tính sinh học khác với xác định liệu có tồn khác biệt nhóm cẩm vừa đề cập, đề tài ―Sàng lọc tác dụng sinh học từ cao chiết cẩm (Dicliptera tinctoria (Nees) Kostel.)‖ tiến hành với mục tiêu: - Thu thập mẫu cẩm tím cẩm đỏ nghiên cứu đặc điểm vi phẫu soi bột - Nghiên cứu xác định hàm lượng tổng polyphenol flavonoid với cao chiết Ethanol 70% chiết nước Nghiên cứu sàng lọc tác dụng sinh học cao chiết dựa mơ hình in vitro Nghiên cứu sàng lọc tác dụng sinh học hoạt chất dựa molecular docking CHƢƠNG 1- TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan cẩm 1.1.1 Tên khoa học Tên tiếng Việt: Cẩm, cẩm Tên khoa học: Dicliptera tinctoria (Nees) Kostel Tên tiếng anh: Magenta plant Tên đồng nghĩa: Peristrophe bivalvis (L) Merr In Interpr Herb Amboin.: 476 (1917) Peristrophe roxburghiana (Schult) Bremek In Index Nom Gener., Card: [s.p.] (1955) [1] Phân loại khoa học theo WFO(2023) [2] Giới: Plantae Ngành: Angiosperms Bộ: Lamiales Họ: Acanthaceae Chi:Dicliptera Loài: Dicliptera tinctoria Kostel 1.1.2 Đặc điểm thực vật (A) (B) Hình 1.1 Hình ảnh cẩm tím (A) cẩm đỏ (B) theo kinh nghiệm dân gian Lá cẩm bụi lâu năm thân thảo, phát triển chủ yếu quần xã sinh vật nhiệt đới ẩm ướt Cây thường cao khoảng 30 - 60cm, cành non có lơng sau nhẵn, thân thường cạnh, có rãnh dọc sâu Lá đơn, mọc đối; hình bầu dục hay trứng thn mũi giáo, thường có bớt màu trắng dọc gân; kích thước khoảng - 10cm x 1,2 - 3,6cm; hai mặt có lơng hay khơng, gốc thn nhọn; chóp nhọn hay có có mũi hay tù trịn Cụm hoa chùm hay nách lá, chùm ngắn; bắc cụm hoa thường hình trứng Đài dính nửa dưới, kích thước ngắn bắc hoa Tràng màu tím hay hồng, phân mơi, mơi có thuỳ cạn, ống hẹp kéo dài Nhị 2, thị khỏi ống tràng Buồng trứng ơ, nhẵn; Bảng 3.9 Kết sau chạy docking Docking Scores Tên liên kết Tên chất Tên protein -7.73372 LC31B41 Phenoxazin 1B41 Vị trí (kiểu liên kết) Tyr337A (Hydro) Trp86A (pi-stacking) Asp74A, Trp86A, His447A (Van der waals) -6.86883 -6.39294 -6.33107 LC34EY5 Phenoxazin 4EY5 LC51B41 Allantoin LC54MOE Allantoin Ala412A (Hydro) Cys529A (Van der waals) 1B41 Ser203A (Hydro) Tyr124A (Hydro) 4MOE Tyr503B( Hydro) Ala412B( Hydro) Asn533B( Hydro) Gln508B( Hydro) Arg534B( Hydro) -6.40159 LC64MOE Comarin 4MOE Gln508B( Hydro) Leu524B( Hydro) Tyr503B( Hydro) Cys529B , Ala412B( Van der waals) 32 Hình ảnh dự đốn tương tác thể hình 3.5 Hình 3.5 Hình ảnh 2D dự đốn liên kết hoạt chất protein Các cấu trúc hóa học có khả gắn với protein: Hình 3.6 Các cấu trúc hóa học có khả gắn với protein: (1) allantoin, (2) phenoxazin, (3) coumarin Nhận xét: Kết cho thấy có hoạt chất: Phenoxazin, Allantoin, Coumarin cẩm dự đốn có khả thành thuốc, tiềm ức chế enzyme acetylcholinesterase dựa giá trị docking score ≤ -6 Vị trí docking vùng khơng gian co-enzyme 1B41( NAG: 2acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose), 4EY5 (HUP:huperzine a), 4M0E (1YL: dihydrotanshinone I) Từ enzyme này, tiến hành docking vùng xung quanh co- enzyme: 2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose, huperzine a, dihydrotanshinone I Sau chạy docking thấy chất gắn với protein mà vị trí gắn ligand giống chất biết có tác dụng 2acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose, huperzine a thạch tùng cưa có tác dụng bảo vệ thần kinh [85] tác nhân triển vọng alzheimer điều trị 33 dihydrotanshinone I từ đan sâm có tác dụng chống ung thư, viêm, alzheimer [86] Liên kết chất với protein chủ yếu dựa liên kết hydro Van der waals Hình 3.7 Khung cấu trúc co- enzyme (1) dihydrotanshinone I, (2) huperzine a, (3) acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose Tra cứu tài liệu thấy phenoxazin có đặc tính chống bệnh alzheimer, thư giãn bắp, kháng sinh, chống viêm, chống lao, chống oxy hóa kháng khuẩn Thuốc chống sốt rét, thuốc chống ung thư, thuốc trị đái tháo đường thuốc kháng vi-rút [87] Allantoin có tác dụng chống oxy hóa, chống viêm bảo vệ thần kinh [88] Cải thiện nhớ không gian được, giảm huyết sắc tố glycosyl hóa tăng mức độ dẫn truyền thần kinh Giảm hoạt động acetylcholinesterase peroxid hóa lipid tăng enzyme chống oxy hóa từ cải thiện tình trạng suy giảm nhận thức bệnh tiểu đường chuột [89] Coumarin dẫn xuất có nhiều hoạt tính sinh học chống tiểu đường chống trầm cảm [90], chống oxy hóa [91], chống ung thư [92] chống tăng sinh [93], chống nhiễm trùng [94], kháng khuẩn chống lao [95], bảo vệ gan, chống dị ứng, chống HIV-1, kháng vi-rút, kháng nấm, kháng khuẩn chống hen suyễn [96] Hợp chất benzopyrone nhân coumarin biết đến tảng cho việc thiết kế phân tử lai đồng thời ức chế AChE AChE gây tích lũy-amyloid Từ cho thấy rễ cẩm có tiềm nguồn cung cấp hợp chất có khả ức chế AchE 34 CHƢƠNG 4- BÀN LUẬN Dựa đặc điểm thực vật thấy có khác khả bắt màu nhuộm cẩm đỏ sắc nét so với cẩm tím (cùng lúc, thời điểm) Đề tài chưa thực cắt vi phẫu rễ có soi bột vi phẫu rễ Theo tài liệu [95] có vi phẫu rễ Hàm lượng tổng polyphenol flavonoid rễ cẩm chiết dung môi ethanol cao 25.4% Trong cao chiết với ethanol hàm lượng tổng polyphenol rễ cẩm đỏ cao Hàm lượng tổng flavonoid rễ cẩm tím cao Sàng lọc in vitro thấy rễ cẩm đỏ chiết ethanol có khả ức chế enzyme acetycholinesterase mạnh 36.43% Dựa sàng lọc molecular docking thấy có thành phần gồm phenoxazine, allantoin, coumarin có khả gắn với AchE với vị trí docking giống chất biết có tác dụng 2acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose, huperzine a Huperzine a alkaloid tìm thấy thạch tùng cưa với tác dụng bảo vệ thần kinh nhiều nghiên cứu quan tâm phát triển thành thuốc điều trị alzheimer Dihydrotanshinone I thành phần phân lập từ đan sâm có tác dụng chống ung thư, viêm, alzheimer Từ kết in vitro molecular docking thấy cẩm đỏ cần nghiên cứu sau tác dụng ức chế enzyme acetylcholinesterase, đề xuất làm nghiên cứu sâu tác dụng dược lý thần kinh trung ương Hàm lượng polyphenol flavonoid cao nhiên đánh giá khả ức chế DPPH tyrosine lại khơng có tác dụng Để lý giải cho vấn đề này, nghĩ đến mơ hình đánh giá tác dụng chống oxi hóa trường hợp DPPH Do thành phần tổng flavonoid có nhóm anthocyanin có khung cấu trúc hình 3.8, độ ổn định anthocyanin bị ảnh hưởng số yếu tố pH, nhiệt độ, ánh sáng oxy [97] Markakis (1982) sắc tố anthocyanin (đỏ, tím blue) phân tử khơng ổn định có thay đổi nhiệt độ, độ pH, oxy, ánh sáng đường Dựa vào phân tích cho thấy anthocyanin có màu đỏ độ pH thấp (điều kiện axit), giá trị pH cao anthocyanin màu hay nói pH quan trọng với màu sắc anthocyanin Lý giải cho ảnh hưởng cấu trúc anthocyanin (vòng tròn màu đỏ) gọi flavylium cation lý do, độ pH thấp, phân tử cyanidin bị proton hóa tạo thành ion dương cation, độ pH tăng lên, phân tử trở nên bị khử liên kết, độ pH cao, phân tử tạo thành điện cực âm ion anion[98] dẫn đến DPPH âm tính tổng polyphenol flavonoid có 35 Hình 4.1 Khung cấu trúc anthocyanin Đề tài cho thấy khác biệt chút vi phẫu lá, thành phần hóa học sàng lọc in vitro cẩm đỏ cẩm tím Trong đó, nhân dân cịn phân loại thêm loại cẩm vàng nhóm nghiên cứu chưa thu thập Nhưng sơ cho thấy cần thiết phải nghiên cứu thêm cẩm vàng Đồng thời, phân biệt hình thái nhân dân ghi nhận cộng thêm tác dụng in vitro có hai giả thiết đặt ra: Có khác biệt sinh tổng hợp DNA quy định khác biệt yếu tố môi trường Với quan sát nhỏ nhóm nghiên cứu cho thấy cẩm đỏ cẩm tím thu thập mẫu mọc hai cụm khác không mọc trộn lẫn Điều gợi ý khác biệt thổ nhưỡng khác biệt DNA Về khía cạnh phát triển sản phẩm, cẩm quan tâm để làm chất màu thực phẩm tự nhiên an toàn thường nhóm anthocyanin quy định Và điều chỉnh trình canh tác để thu loại cẩm có màu sắc mong muốn Tuy nhiên cần làm nghiên cứu sâu điều mức độ giả thiết Với tác dụng dược lý, qua nghiên cứu molecular docking cho thấy nhóm tiềm alcaloid đề xuất cần nghiên cứu sâu nhóm cẩm 36 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Kết luận Sau trình nghiên cứu làm thực nghiệm, để tài thu kết sau: Đề tài có kết tiêu bản, vi phẫu soi bột nhận thấy loại cẩm tím cay cẩm đỏ theo dân gian loài với tên khoa học Dicliptera tinctoria (Nees) Kostel Từ thấy có khác đặc điểm hình thái, khả bắt màu nhuộm lá cẩm đỏ không rõ nét lá cẩm tím Xác định hàm lượng tổng polyphenol flavonoid cao chiết nước chiết cồn từ phận cẩm tím cẩm đỏ Xác định hàm lượng tổng polyphenol rễ cẩm đỏ cao 25.40% Hàm lượng tổng flavonoid rễ cẩm tím cao 49.03% Đánh giá tác dụng dược lý phương pháp in vitro (DPPH, ức chế Tyrosinase, α-glucosidase, Acetylcholinesterase) Thấy mẫu cao chiết với ethanol 70% có khả ức chế enzyme Acetylcholinesterase cẩm đỏ có khả ức chế mạnh cẩm tím Trên in silico xác định chất hóa học: phenoxazin, allatoin, coumarin cẩm dự đốn có khả gắn với protein có khả thành thuốc Đề xuất: Tiếp tục nghiên cứu in vivo rễ cẩm đỏ với cao chiết cồn ethanol 70 C để tiếp tục nghiên cứu tác dụng dược lý o 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO Dicliptera tinctoria Kostel Accessed May 22, 2023 Dicliptera tinctoria (Nees) Kostel | Plants of the World Online | Kew Science Plants of the World Online Accessed May 19, 2023 Hu J, Deng Y, Thomas FD Peristrophe nees in wallich Flora China 2011;19:463-467 Do TX, Nguyen TPT Some results of study on Peristrophe bivalvis (Acanthaceae) In: The 2nd National Scientific Conference on Ecological and Biological Resources, Ha Noi ; 2007:292-294 Dicliptera tinctoria (Nees) Kostel | Plants of the World Online | Kew Science Plants of the World Online Accessed May 7, 2023 Evitasari RT, Rahayuningsih E, Mindaryani A Dyeing of cotton fabric with natural dye from peristrophe bivalvis extract AIP Conf Proc 2019;2085(1):020055 Zhuang X, Lü J, Yang W, Yang M Effects of Peristrophe roxburghiana on blood pressure NO and ET in renal hypertensive rats Zhong Yao Cai Zhongyaocai J Chin Med Mater 2003;26(4):266-268 Aluko EO, Adejumobi OA, Fasanmade AA Peristrophe roxburghiana leaf extracts exhibited anti-hypertensive and anti-lipidemic properties in L-NAME hypertensive rats Life Sci 2019;234:116753 Quiñones M, Miguel M, Aleixandre A Beneficial effects of polyphenols on cardiovascular disease Pharmacol Res 2013;68(1):125-131 10 Michalska M, Gluba A, Mikhailidis DP, et al The role of polyphenols in cardiovascular disease Med Sci Monit 11 Vita JA Polyphenols and cardiovascular disease: effects on endothelial and platelet function Am J Clin Nutr 2005;81(1):292S-297S 12 Mukhtar H, Ahmad N Tea polyphenols: prevention of cancer and optimizing health Am J Clin Nutr 2000;71(6):1698S-1702S 13 Maleki Dana P, Sadoughi F, Asemi Z, Yousefi B The role of polyphenols in overcoming cancer drug resistance: a comprehensive review Cell Mol Biol Lett 2022;27(1):1 14 Dembinska-Kiec A, Mykkänen O, Kiec-Wilk B, Mykkänen H Antioxidant phytochemicals against type diabetes Br J Nutr 2008;99(E-S1):ES109-ES117 15 Xiao J, Högger P Dietary Polyphenols and Type Diabetes: Current Insights and Future Curr Med Chem 2014;22 16 Scalbert A, Johnson IT, Saltmarsh M Polyphenols: antioxidants and beyond Am J Clin Nutr 2005;81(1):215S-217S 17 Perron NR, Brumaghim JL A Review of the Antioxidant Mechanisms of Polyphenol Compounds Related to Iron Binding Cell Biochem Biophys 2009;53(2):75-100 18 Williamson G, Manach C Bioavailability and bioefficacy of polyphenols in humans II Review of 93 intervention studies Am J Clin Nutr 2005;81(1):243S255S 19 Perry EK, Tomlinson BE, Blessed G, Bergmann K, Gibson PH, Perry RH Correlation of cholinergic abnormalities with senile plaques and mental test scores in senile dementia Br Med J 1978;2(6150):1457-1459 20 Khan MTH, Orhan I, Şenol FS, et al Cholinesterase inhibitory activities of some flavonoid derivatives and chosen xanthone and their molecular docking studies Chem Biol Interact 2009;181(3):383-389 21 Sheng R, Lin X, Zhang J, et al Design, synthesis and evaluation of flavonoid derivatives as potent AChE inhibitors Bioorg Med Chem 2009;17(18):6692-6698 22 Kurumbail RG, Stevens AM, Gierse JK, et al Structural basis for selective inhibition of cyclooxygenase-2 by anti-inflammatory agents Nature 1996;384(6610):644-648 23 D’MELLO P, Gadhwal M, Joshi U, SHETGIRI P, Pharmacy P, Mumbai Modeling of COX-2 inhibotory activity of flavonoids Int J Pharm Pharm Sci 2011;3:33-40 24 Dapkevicius A, van Beek TA, Niederländer HAG Evaluation and comparison of two improved techniques for the on-line detection of antioxidants in liquid chromatography eluates J Chromatogr A 2001;912(1):73-82 25 Glavind J, Holmer G Thin-layer chromatographic determination of antioxidants by the stable free radical , -diphenyl-picrylhydrazyl J Am Oil Chem Soc 1967;44(9):539-542 26 Xue YL, Miyakawa T, Hayashi Y, et al Isolation and Tyrosinase Inhibitory Effects of Polyphenols from the Leaves of Persimmon, Diospyros kaki J Agric Food Chem 2011;59(11):6011-6017 27 Lin D, Xiao M, Zhao J, et al An Overview of Plant Phenolic Compounds and Their Importance in Human Nutrition and Management of Type Diabetes Molecules 2016;21(10):1374 28 Lee SG, Karadeniz F, Seo Y, Kong CS Anti-Melanogenic Effects of Flavonoid Glycosides from Limonium tetragonum (Thunb.) Bullock via Inhibition of Tyrosinase and Tyrosinase-Related Proteins Molecules 2017;22(9):1480 29 Mandel AL, Breslin PAS High Endogenous Salivary Amylase Activity Is Associated with Improved Glycemic Homeostasis following Starch Ingestion in Adults J Nutr 2012;142(5):853-858 30 Peyrot des Gachons C, Breslin PAS Salivary Amylase: Digestion and Metabolic Syndrome Curr Diab Rep 2016;16(10):102 31 carbohydrate-active enzymes database (CAZy) in 2013 | Nucleic Acids Research | Oxford Academic Accessed May 21, 2023 32 Unusual Enzymatic Glycoside Cleavage Mechanisms | Accounts of Chemical Research Accessed May 21, 2023 33 Dyer J, Wood IS, Palejwala A, Ellis A, Shirazi-Beechey SP Expression of monosaccharide transporters in intestine of diabetic humans Am J PhysiolGastrointest Liver Physiol 2002;282(2):G241-G248 34 Bischoff H The mechanism of alpha-glucosidase inhibition in the management of diabetes Clin Investig Med Med Clin Exp 1995;18(4):303-311 35 Hedrington MS, Davis SN Considerations when using alpha-glucosidase inhibitors in the treatment of type diabetes Expert Opin Pharmacother 2019;20(18):2229-2235 36 Zhang X, Li G, Wu D, et al Emerging strategies for the activity assay and inhibitor screening of alpha-glucosidase Food Funct 2020;11(1):66-82 37 Sozmen EY, Sezer ED Methods for Determination of α-Glycosidase, βGlycosidase, and α-Galactosidase Activities in Dried Blood Spot Samples In: Öllinger K, Appelqvist H, eds Lysosomes: Methods and Protocols Methods in Molecular Biology Springer; 2017:255-264 38 Maehle AH Historische Grundlagen des Rezeptor-Konzepts in der Pharmakologie Gesnerus 2004;61(1-2):57-26 39 Wright CI, Geula C, Mesulam MM Neuroglial cholinesterases in the normal brain and in Alzheimer’s disease: Relationship to plaques, tangles, and patterns of selective vulnerability Ann Neurol 1993;34(3):373-384 40 Polinsky RJ, Holmes KV, Brown RT, Weise V CSF acetylcholinesterase levels are reduced in multiple system atrophy with autonomic failure Neurology 1989;39(1):40-40 41 The spectrum of mutations causing end‐plate acetylcholinesterase deficiency - Ohno - 2000 - Annals of Neurology - Wiley Online Library Accessed May 21, 2023 42 Soreq H, Seidman S Acetylcholinesterase — new roles for an old actor Nat Rev Neurosci 2001;2(4):294-302 43 Bigbee JW, Sharma KV, Chan ELP, Bögler O Evidence for the direct role of acetylcholinesterase in neurite outgrowth in primary dorsal root ganglion neurons Brain Res 2000;861(2):354-362 44 Bigbee JW, Sharma KV, Chan ELP, Bögler O Evidence for the direct role of acetylcholinesterase in neurite outgrowth in primary dorsal root ganglion neurons Brain Res 2000;861(2):354-362 45 Grifman M, Galyam N, Seidman S, Soreq H Functional redundancy of acetylcholinesterase and neuroligin in mammalian neuritogenesis Proc Natl Acad Sci 1998;95(23):13935-13940 46 Koenigsberger C, Chiappa S, Brimijoin S Neurite Differentiation Is Modulated in Neuroblastoma Cells Engineered for Altered Acetylcholinesterase Expression J Neurochem 1997;69(4):1389-1397 47 Darboux I, Barthalay Y, Piovant M, Hipeau-Jacquotte R The structurefunction relationships in Drosophila neurotactin show that cholinesterasic domains may have adhesive properties EMBO J 1996;15(18):4835-4843 48 Scheiffele P, Fan J, Choih J, Fetter R, Serafini T Neuroligin Expressed in Nonneuronal Cells Triggers Presynaptic Development in Contacting Axons Cell 2000;101(6):657-669 49 Acetylcholinesterase Enhances Neurite Growth and Synapse Development through Alternative Contributions of Its Hydrolytic Capacity, Core Protein, and Variable C Termini | Journal of Neuroscience Accessed May 21, 2023 50 Non‐cholinergic, trophic action of recombinant acetylcholinesterase on mid‐brain dopaminergic neurons - Holmes - 1997 - Journal of Neuroscience Research - Wiley Online Library Accessed May 21, 2023 51 Inestrosa NC, Alvarez A, Pérez CA, et al Acetylcholinesterase Accelerates Assembly of Amyloid-β-Peptides into Alzheimer’s Fibrils: Possible Role of the Peripheral Site of the Enzyme Neuron 1996;16(4):881-891 52 Paoletti F, Mocali A, Vannucchi AM Acetylcholinesterase in Murine Erythroleukemia (Friend) Cells: Evidence for Megakaryocyte-like Expression and Potential Growth-Regulatory Role of Enzyme Activity Blood 1992;79(11):28732879 53 Lev-Lehman E, Deutsch V, Eldor A, Soreq H Immature Human Megakaryocytes Produce Nuclear-Associated Acetylcholinesterase Blood 1997;89(10):3644-3653 54 Rotundo RL Nucleus-specific translation and assembly of acetylcholinesterase in multinucleated muscle cells J Cell Biol 1990;110(3):715719 55 Shohami E, Kaufer D, Chen Y, et al Antisense prevention of neuronal damages following head injury in mice J Mol Med 2000;78(4):228-236 56 Kaufer D, Friedman A, Seidman S, Soreq H Acute stress facilitates longlasting changes in cholinergic gene expression Nature 1998;393(6683):373-377 57 Ashani Y, Shapira S, Levy D, Wolfe AD, Doctor BP, raveh lily Butyrylcholinesterase and acetylcholinesterase prophylaxis against soman poisoning in mice Biochem Pharmacol 1991;41(1):37-41 58 Enhanced Hemicholinium Binding and Attenuated Dendrite Branching in Cognitively Impaired Acetylcholinesterase‐Transgenic Mice - Beeri - 1997 - Journal of Neurochemistry - Wiley Online Library Accessed May 21, 2023 59 Stable Complexes Involving Acetylcholinesterase and Amyloid-β Peptide Change the Biochemical Properties of the Enzyme and Increase the Neurotoxicity of Alzheimer’s Fibrils | Journal of Neuroscience Accessed May 21, 2023 60 Acetylcholinesterase Is Increased in the Brains of Transgenic Mice Expressing the C‐Terminal Fragment (CT100) of the β‐Amyloid Protein Precursor of Alzheimer’s Disease - Sberna - 1998 - Journal of Neurochemistry - Wiley Online Library Accessed May 21, 2023 61 Lev-Lehman E, Evron T, Broide RS, et al Synaptogenesis and myopathy under acetylcholinesterase overexpression J Mol Neurosci 2000;14(1):93-105 62 Ellman GL, Courtney KD, Andres V, Featherstone RM A new and rapid colorimetric determination of acetylcholinesterase activity Biochem Pharmacol 1961;7(2):88-95 63 Wang M, Gu X, Zhang G, Zhang D, Zhu D Convenient and Continuous Fluorometric Assay Method for Acetylcholinesterase and Inhibitor Screening Based on the Aggregation-Induced Emission Anal Chem 2009;81(11):4444-4449 64 Fluorometric System Employing Immobilized Cholinesterase for Assaying Anticholinesterase Compounds | Analytical Chemistry Accessed May 21, 2023 65 Use of a novel radiometric method to assess the inhibitory effect of donepezil on acetylcholinesterase activity in minimally diluted tissue samples Kikuchi - 2010 - British Journal of Pharmacology - Wiley Online Library Accessed May 21, 2023 66 Winteringham FPW, Disney RW Radiometric Acetylcholinesterase Nature 1962;195(4848):1303-1303 Assay of 67 Acetylcholine and Choline in Neuronal Tissue Measured by HPLC with Electrochemical Detection - Potter - 1983 - Journal of Neurochemistry - Wiley Online Library Accessed May 21, 2023 68 Du D, Tao Y, Zhang W, Liu D, Li H Oxidative desorption of thiocholine assembled on core–shell Fe3O4/AuNPs magnetic nanocomposites for highly sensitive determination of acetylcholinesterase activity: An exposure biomarker of organophosphates Biosens Bioelectron 2011;26(10):4231-4235 69 Lengauer T, Rarey M Computational methods for biomolecular docking Curr Opin Struct Biol 1996;6(3):402-406 70 Zoete V, Grosdidier A, Michielin O Docking, virtual high throughput screening and in silico fragment-based drug design J Cell Mol Med 2009;13(2):238-248 71 Lục P MỤC LỤC (Các phụ lục) 72 Giáo trình: Thực hành Thực vật - Dược liệu - Dược học cổ truyền (Sách dành cho đào tạo dược sĩ đại học) | ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI Accessed May 7, 2023 73 Feduraev P, Chupakhina G, Maslennikov P, Tacenko N, Skrypnik L Variation in Phenolic Compounds Content and Antioxidant Activity of Different Plant Organs from Rumex crispus L and Rumex obtusifolius L at Different Growth Stages Antioxidants 2019;8(7):237 doi:10.3390/antiox8070237 74 Marinova D, Ribarova F, Atanassova M TOTAL PHENOLICS AND TOTAL FLAVONOIDS IN BULGARIAN FRUITS AND VEGETABLES Published online 2005 75 de Menezes BB, Frescura LM, Duarte R, Villetti MA, da Rosa MB A critical examination of the DPPH method: Mistakes and inconsistencies in stoichiometry and IC50 determination by UV–Vis spectroscopy Anal Chim Acta 2021;1157:338398 76 Thring TS, Hili P, Naughton DP Anti-collagenase, anti-elastase and antioxidant activities of extracts from 21 plants BMC Complement Altern Med 2009;9(1):27 77 Desmiaty Y, Saputri FC, Hanafi M, Prastiwi R, Elya B Anti-Elastase, Anti-Tyrosinase and Anti-Oxidant of Rubus Fraxinifolius Stem Methanolic Extract Pharmacogn J 2020;12(2):271-275 78 Jiratchayamaethasakul C, Ding Y, Hwang O, et al In vitro screening of elastase, collagenase, hyaluronidase, and tyrosinase inhibitory and antioxidant activities of 22 halophyte plant extracts for novel cosmeceuticals Fish Aquat Sci 2020;23(1):6 79 Li H, Zhai B, Sun J, et al Ultrasound-Assisted Extraction of Total Saponins from Aralia taibaiensis: Process Optimization, Phytochemical Characterization, and Mechanism of α-Glucosidase Inhibition Drug Des Devel Ther 2022;16:83-105 80 Ellman GL, Courtney KD, Andres V, Featherstone RM A new and rapid colorimetric determination of acetylcholinesterase activity Biochem Pharmacol 1961;7(2):88-95 81 Nguyễn BH Đán giá tá d ng ức chế Enzym Acetylcholinesterase In Vitro p ân đoạn dịch chiết hoàng liên (Coptis Chinensis Franch) Thesis H. : ĐHQGHN, Khoa Y - Dược; 2017 Accessed May 7, 2023 82 Hoàng TT Đán giá tá d ng ức chế enzym Acetylcholinesterase tác d ng chống oxy hóa dịch chiết bơ (Persea ameri ana Mi ) Thesis H. : ĐHQGHN, Khoa Y - Dược; 2019 Accessed May 7, 2023 83 Neuroprotective Effects of Huperzine A | Neurosignals | Karger Publishers Accessed May 22, 2023 84 Chen X, Yu J, Zhong B, et al Pharmacological activities of dihydrotanshinone I, a natural product from Salvia miltiorrhiza Bunge Pharmacol Res 2019;145:104254 85 Sadhu C, Mitra AK Synthetic, biological and optoelectronic properties of phenoxazine and its derivatives: a state of the art review Mol Divers Published online February 9, 2023 86 Tzeng CY, Lee WS, Liu KF, et al Allantoin ameliorates amyloid βpeptide-induced memory impairment by regulating the PI3K/Akt/GSK-3β signaling pathway in rats Biomed Pharmacother 2022;153:113389 87 Semol M, Razdan R, Minaz N, Upadhye D Ameliorative Effect of Allantoin, Beta cyclodextrin and Combination of Both against Diabetic Cognitive Impairment RGUHS J Pharm Sci 2018;8(3) 88 Sashidhara KV, Kumar A, Chatterjee M, et al Discovery and synthesis of novel 3-phenylcoumarin derivatives as antidepressant agents Bioorg Med Chem Lett 2011;21(7):1937-1941 89 Kostova I, Bhatia S, Grigorov P, et al Coumarins as Antioxidants Curr Med Chem 2011;18(25):3929-3951 90 Sashidhara KV, Kumar A, Kumar M, Sarkar J, Sinha S Synthesis and in vitro evaluation of novel coumarin–chalcone hybrids as potential anticancer agents Bioorg Med Chem Lett 2010;20(24):7205-7211 91 Kawaii S, Tomono Y, Ogawa K, et al Antiproliferative effect of isopentenylated coumarins on several cancer cell lines Anticancer Res 2001;21(3B):1905-1911 92 De Almeida Barros TA, De Freitas LAR, Filho JMB, et al Antinociceptive and anti-inflammatory properties of 7-hydroxycoumarin in experimental animal models: potential therapeutic for the control of inflammatory chronic pain J Pharm Pharmacol 2010;62(2):205-213 93 KhanYusufzai S, Osman H, Khan MS, et al Design, characterization, in vitro antibacterial, antitubercular evaluation and structure–activity relationships of new hydrazinyl thiazolyl coumarin derivatives Med Chem Res 2017;26(6):11391148 94 Vasconcelos JF, Teixeira MM, Barbosa-Filho JM, et al Effects of umbelliferone in a murine model of allergic airway inflammation Eur J Pharmacol 2009;609(1-3):126-131 95 Gao Y, Zhang K The Microstructure of Peristrophe roxburghiana Med Plant 2014;5(7):12 96 Clydesdale FM Color: origin, stability, measurement, and quality Food Storage Stab 1998;1:175-190 97 Wahyuningsih S, Wulandari L, Wartono MW, Munawaroh H, Ramelan AH The Effect of pH and Color Stability of Anthocyanin on Food Colorant IOP Conf Ser Mater Sci Eng 2017;193(1):012047