(Luận văn) nghiên cứu chiết tách thành phần hoá học và khảo sát khả năng kháng vi sinh vật của cao chiết vỏ lá lô hội (aloe vera) trồng tại tỉnh bà rịa – vũng tàu

TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÀ RỊA-VŨNG TÀU VIỆN KỸ THUẬT - KINH TẾ BIỂN lu an n va NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH THÀNH PHẦN HOÁ HỌC p ie gh tn to BÁO CÁO ĐỀ TÀI VÀ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHÁNG VI SINH VẬT oa nl w CỦA CAO CHIẾT VỎ LÁ LÔ HỘI (ALOE VERA) d TRỒNG TẠI TỈNH BÀ RỊA – VŨNG TÀU nf va an lu z at nh oi lm ul Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên z Hướng dẫn khoa học: ThS Vũ Thị Hồng Phượng l gm @ m co BÀ RỊA-VŨNG TÀU - NĂM 2019 an Lu n va ac th si MỤC LỤC DANH MỤC VIẾT TẮT i DANH MỤC BẢNG ii DANH MỤC HÌNH iii MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Lô hội 1.1.1 Nguồn gốc đặc tính thực vật Lơ hội 1.1.1.1 Nguồn gốc[1][3][10] 1.1.1.2 Đặc tính thực vật 1.1.2 Phân loại[10][13] 10 lu 1.1.2.1 Aloe Barbadensis 10 an va 1.1.2.2 Aloe Perryi (Aloe perryi Baker) 11 n 1.1.2.3 Aloe Ferox 11 to 1.1.3 Thành phần hóa học[16][24][28] 12 p ie gh tn 1.1.2.4 Aloe Aborecens 12 1.1.4 Một số hợp chất tiêu biểu từ Lô hội 14 nl w 1.1.4.1 Các hợp chất Anthraquinone .14 d oa 1.1.4.2 Hợp chất Anthrone 15 Tác dụng dược lý 16 nf va 1.2 an lu 1.1.4.3 Hợp chất Flavonoid 16 1.2.1 Y học dân gian Việt Nam 16 lm ul 1.2.2 Y học đại[3][11] 16 1.3 z at nh oi 1.2.3 Hóa sinh học đại 16 Các phương pháp chiết tách Lô hội[43] 18 z 1.3.1 Phương pháp ngâm kiệt 19 gm @ 1.3.2 Phương pháp chiết Soxhlet .19 l 1.3.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến hiệu suất chiết 19 co 1.3.3.1 Nguyên liệu 19 m 1.3.3.2 Dung môi 19 an Lu 1.3.3.3 Tỷ lệ dung môi nguyên liệu 20 n va 1.3.3.4 Nhiệt độ 20 ac th si 1.3.3.5 Thời gian tách chiết 20 1.4 Giới thiệu số loài vi khuẩn phương pháp khảo sát khả kháng vi sinh vật[44] 21 1.4.1 Giới thiệu số loài vi khuẩn 21 1.4.1.1 Escherichia coli 21 1.4.1.2 Bacillus cereus .22 1.4.1.3 Salmonella 24 1.4.1.4 Staphylococcus aureus 25 1.4.1.5 Pseudomonas aeruginosa .27 1.4.2 Phương pháp khuếch tán đĩa 29 1.5 Phương pháp định danh sắc ký ghép khối phổ GC/MS[41] 29 lu CHƯƠNG 2: PHƯƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU VÀ THỰC NGHIỆM 32 an va 2.1 Phương tiện nghiên cứu 32 n 2.1.1 Địa điểm nghiên cứu 32 to 2.1.3 Dụng cụ thí nghiệm 32 p ie gh tn 2.1.2 Nguyên liệu, hóa chất .32 Thực nghiệm 33 nl 2.2 w 2.1.4 Môi trường 32 d oa 2.2.1 Chiết cao vỏ Lô hội phương pháp Soxhlet 33 an lu 2.2.2 Định tính số hợp chất tự nhiên dịch chiết vỏ Lô hội 36 Khảo sát diện hợp chất Anthranoid 36  Khảo sát diện Steroid – triterpenoid 36  Khảo sát diện Flavonoid 37  Khảo sát diện saponin .37 nf va  z at nh oi lm ul 2.2.3 Định danh số hợp chất tự nhiên cao vỏ Lô hội 38 z 2.2.4 Khảo sát khả kháng vi sinh vật cao vỏ Lô hội 38 @ Kết chiết tách cao vỏ Lô hội 40 l 3.1 gm CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 40 m co 3.1.1 Kết định tính số hợp chất hữu có dịch chiết cao vỏ an Lu Lô hội 43 3.1.2 Kết sắc ký ghép khối phổ cao vỏ Lô hội 49 n va ac th si 3.2 Kết khảo sát khả kháng khuẩn phương pháp đo vòng kháng khuẩn 51 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 56 4.1 Kết luận 56 4.2 Kiến nghị .56 TÀI LIỆU THAM KHẢO 58 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC VIẾT TẮT Am: thuốc kháng sinh Amipicillin DK: Đường kính DMSO: Dimethyl sulfoxide - Hợp chất hữu lưu huỳnh với công thức (CH3)2SO DNA: Acid deoxyribonucleic - Phân tử mang thơng tin di truyền mã hóa cho hoạt động sinh trưởng, phát triển, chuyên hóa chức sinh sản sinh vật nhiều loài virus MHA: Mueller Hinton Agar - Môi trường thạch Mueller Hinton MYP Mannitol Egg Yolk Polymixin lu an PDA: Potato Dextrose Agar Môi trường dinh dưỡng PDA n va RNA: Acid ribonucleic to gh tn rpm: tốc độ vòng/ phút p ie Te: thuốc kháng sinh Tetracycline w TSB: Tryptone Soy Broth - Môi trường dinh dưỡng TSB d oa nl TT: Thuốc thử nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th i si DANG MỤC BẢNG Bảng 1: Độ phân cực dung môi 20 Bảng 1: Môi trường Trypticase Soy Broth .33 Bảng 2: Môi trường Mueller Hinton Agar 33 Bảng 1: Khối lượng cao vỏ Lô hội thu từ dung môi chiết 40 Bảng 2: Khối lượng cao chiết vỏ Lô hội với dung môi Ethanol nồng độ khác 41 lu Bảng 3: Khối lượng cao chiết vỏ Lô hội với Ethanol 70% tỉ lệ khác 42 an Bảng 4: Khối lượng cao chiết vỏ Lô hội với dung môi Ethanol 70% khoảng n va thời gian khác 42 tn to Bảng 5: Kết định tính thành phần dược liệu cao Ethyl Acetate 44 gh Bảng 6: Kết định tính thành phần dược liệu cao Ether 45 p ie Bảng 7: Kết định tính thành phần dược liệu cao Methanol .46 w Bảng 8: Kết định tính thành phần dược liệu cao Ethanol 47 oa nl Bảng 9: Kết định tính thành phần dược liệu cao Hexan 48 d Bảng 10: Kết phân tích thành phần hóa học cao vỏ Lơ hội 49 nf va an lu Bảng 11: Đường kính vịng kháng khuẩn cao vỏ Lơ hội (mm) 51 z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th ii si DANH MỤC HÌNH Hình 1: Lơ hội phân bố Thế Giới Hình 2: Cánh đồng Lơ hội Hình 3: Cấu tạo sinh học Lô hội Hình 4: Thân rễ Lơ hội Hình 5: Lá Lơ hội Hình 6: Cấu tạo Lơ hội Hình 7: Hoa Lơ hội Hình 8: Quả Lơ hội Hình 9: Cây Lơ hội 10 lu Hình 10: Aloe Barbadensis .11 an Hình 11: Aloe Perryi 11 n va Hình 12: Aloe Ferox 12 tn to Hình 13: Aloe Aborecens 12 gh Hình 14: Cơ chế khử gốc tự Vitamin C 13 p ie Hình 15: Cơng thức cấu tạo Emodin 14 w Hình 16: Cơng thức cấu tạo Aloe Emodin 15 oa nl Hình 17: Cơng thức cấu tạo Aloe Barbendol .15 d Hình 18: Cơng thức cấu tạo Aloin A 15 an lu Hình 19: Cơng thức cấu tạo Aloin B 16 nf va Hình 20: Cơng thức cấu tạo Apigenin 16 lm ul Hình 21: Vi khuẩn Escherichia coli kính hiển 22 z at nh oi Hình 22: Vi khuẩn Bacillus cereus kính hiển vi 23 Hình 23: Vi khuẩn Salmonella kính hiển vi 24 Hình 24: Vi khuẩn Staphylococus aureus kính hiển vi 25 z Hình 25: Vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa kính hiển vi .27 @ gm Hình 26: Đĩa petri có sẵn môi trường vi khuẩn 29 m co l Hình 27: Sơ đồ sắc ký khí ghép khối phổ (GC/MS) 30 an Lu Hình 1: Sơ đồ khảo sát chiết cao vỏ Lô hội phương pháp Soxhlet .34 Hình 2: Hệ thống chiết cao phịng thí nghiệm 35 n va ac th iii si Hình 1: Biểu đồ ảnh hưởng dung môi đến khối lượng cao chiết vỏ Lô Hội 40 Hình 2: Biểu đồ ảnh hưởng nồng độ Ethanol đến khối lượng cao chiết vỏ Lô Hội 41 Hình 3: Biểu đồ ảnh hưởng tỉ lệ dung môi/nguyên liệu đến khối lượng cao chiếtvỏ Lô Hội 42 Hình 4: Biểu đồ ảnh hưởng thời gian đến khối lượng cao chiết vỏ Lơ Hội 43 Hình 5: Sắc ký đồ cao vỏ Lô hội 49 Hình 6: Khả kháng E.coli cao vỏ Lô Hội 52 Hình 7: Khả kháng B cereus cao vỏ Lô Hội 52 Hình 8: Khả kháng S typhi cao vỏ Lô Hội 53 lu Hình 9: Khả kháng P aeruginosa cao vỏ Lô hội 53 an n va Hình 10: Khả kháng S aureus cao vỏ Lơ Hội 54 to Hình 11: Biểu đồ thể khả kháng khuẩn cao vỏ Lô hội p ie gh tn chủng vi khuẩn 55 d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th iii si Trường Đại Học Bà Rịa - Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật - Kinh Tế Biển, Ngành CNKT Hóa Học Nghiên Cứu Khoa Học MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Đặt vấn đề Trong thập kỷ qua, thuốc chữa bệnh có nguồn gốc tổng hợp sử dụng nhiều, song người ta ngày nhận thấy mặt trái chúng tác dụng phụ, tượng kháng thuốc, Xu hướng giới Việt Nam trung tâm nghiên cứu loại thuốc có nguồn gốc tự nhiên Kết năm gần có nhiều thuốc chữa bệnh có nguồn gốc thảo dược đời có góp phần khơng nhỏ vào việc bảo vệ nâng cao chất lượng sống người.[3] Từ lâu, Lô hội cịn gọi Nha đam, có tên khoa học Aloe veraL Hay Aloe lu barbadensis, thuộc họ Aoaceae Lơ hội có tác dụng nhuận tràng, kháng khuẩn, giúp an n va đẩy nhanh trình làm lành vết thương, nhuận gan, lợi mật, giảm loét dày, tác nghiên cứu gần cho thấy gel Lơ hội có khả chống oxy hóa kháng gh tn to nhân chống ung thư, kháng khuẩn, kháng nấm Trên giới nhiều cơng trình ie số lồi vi sinh vật Tuy nhiên vỏ Lô hội chưa tận dụng, để tận dụng hết p nguồn vỏ bị loại bỏ từ quy trình chế biến sản phẩm từ Lô hội Đề tài “Nghiên nl w cứu chiết tách thành phần hoá học khảo sát khả kháng vi sinh vật cao d oa chiết vỏ Lô Hội (Aloe Vera) trồng tỉnh Bà Rịa – Vũng Tàu” tiến hành nf va dược – mỹ phẩm an lu vỏ Lô hội nhằm đánh giá hợp chất góp phần làm phong phú cho lĩnh vực lm ul Tầm quan trọng Ngày nay, thành phần dược liệu có nguồn gốc từ thiên nhiên đóng vai trị mỹ phẩm z Ý nghĩa đề tài z at nh oi quan trọng nhiều lĩnh vực khoa học y dược, công nghệ thực phẩm, sản xuất Nguồn nguyên liệu rộng rãi, dễ tìm - Khai thác hết nguồn nguyên liệu sẵn có - Phương pháp chiết tách hiệu co l gm @ - m Lý chọn đề tài an Lu Lô hội (Aloe vera) nguồn tài nguyên cỏ có giá trị cao n va mặt kinh tế y học nghiên cứu sử dụng rộng rãi Cây Lô hội có Trang ac th HDKH: ThS Vũ Thị Hồng Phượng Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên si Trường Đại Học Bà Rịa - Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật - Kinh Tế Biển, Ngành CNKT Hóa Học Nghiên Cứu Khoa Học chủng loại phong phú, thành phần hoá học phức tạp, chất so với loại thực vật khác Nhiều cơng trình nghiên cứu chứng minh Lơ hội có 200 thành phần có hoạt tính sinh học khác nhau, có 75 thành phần mang lại lợi ích sức khỏe chất dinh dưỡng cần thiết cho thể người Trong nghiên cứu này, định tính định lượng loại hợp chất hữu có Lơ hội trồng địa phương Quan trọng hơn, chiết tách phân lập hợp chất Aloin (barbaloin), hợp chất có giá trị cao mặt y học sử dụng điều chế thuốc Tình hình nghiên cứu Nhiều nghiên cứu nhà khoa học cho thấy Lơ Hội có nhiều lu tác dụng như: trị vết thương, ngăn ngừa chữa bệnh, làm thức uống, dưỡng da, an dầu gội,… Do ngày Lô Hội sử dụng để làm nguyên liệu chế biến va n loại mỹ phẩm, thực phẩm dược phẩm hữu dụng bổ ích cho sống tn to Tuy nhiên, tính hiệu sản phẩm Lô Hội phụ thuộc vào độ tinh khiết gh sản phẩm phương pháp sản xuất cách bảo quản Chúng ta biết p ie trình chế biến, việc làm khô phần ruột Lô Hội để làm thành dạng bột w làm hầu hết đặc tính y học nó, để trì đặc tính có oa nl lợi thời gian dài sản phẩm phải giữ ổn định mặt d hóa học Đây cơng việc phức tạp, khó khăn điều thơi lu an thúc nhà khoa học giới tập trung vào nghiên cứu.[7] nf va Nhận thức tính hữu ích Lô Hội, nhà nghiên cứu không lm ul ngừng nỗ lực tìm kiếm cách thức để trích ly, bảo quản nhằm hạn chế tối đa thay Mục tiêu nghiên cứu z at nh oi đổi phẩm chất chất gel phần nhựa Lơ Hội Xây dựng quy trình chiết tách cao vỏ Lô Hội - Xác định khả kháng khuẩn cao vỏ Lô hội theo phương pháp xác z - @ Nhiệm vụ nghiên cứu l gm định đường kính vịng vơ khuẩn Phương pháp chiết cao từ vỏ Lô hội - Định tính thành phần hóa học có cao vỏ Lô hội - Đánh giá khả kháng số vi sinh vật cao vỏ Lô hội an Lu n va Trang ac th HDKH: ThS Vũ Thị Hồng Phượng m Cấu trúc báo cáo đề tài co - Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên si Trường Đại Học Bà Rịa - Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật - Kinh Tế Biển, Ngành CNKT Hóa Học Nghiên Cứu Khoa Học Bảng 8: Kết định tính thành phần dược liệu cao Ethanol Phản Nhóm chất ứng Màu sắc thuốc thử Phản Anthranoid Kết ứng + Borntraeger Kết luận Có chứa Anthranoid Lie bermann – + lu Burchard an va Steroid Có - chứa Steroid n triterpenoid - to triterpenoid + p ie gh tn Salkowski d oa nl w TT Wagner + Có chứa Alkaloid nf va an lu Alkaloid lm ul FeCl3 hịa H2SO4 đậm gm Flavonoid Khơng l NaOH - m co Saponin - @ TT HCl 0.1N TT Không chứa z đặc - z at nh oi Flavonoid bão Saponin an Lu 0.1N chứa n va Trang 47 ac th HDKH: ThS Vũ Thị Hồng Phượng Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên si Trường Đại Học Bà Rịa - Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật - Kinh Tế Biển, Ngành CNKT Hóa Học Nghiên Cứu Khoa Học Bảng 9: Kết định tính thành phần dược liệu cao Hexan Phản Nhóm chất ứng Màu sắc thuốc thử Phản Anthranoid Kết ứng + Borntraeger Liebermann chứa Anthranoid Có lu - an triterpenoid Có + – Burchard Steroid Kết luận chứa Steroid + triterpenoid n va Salkowski - ie gh tn to p Không TT Wagner - nl w Alkaloid chứa d oa Alkaloid bão hịa đậm gm Khơng l NaOH co TT + @ TT HCl 0.1N Saponin chứa z đặc Có Flavonoid z at nh oi H2SO4 + lm ul Flavonoid nf va an lu FeCl3 - m 0.1N chứa an Lu Saponin n va Trang 48 ac th HDKH: ThS Vũ Thị Hồng Phượng Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên si Trường Đại Học Bà Rịa - Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật - Kinh Tế Biển, Ngành CNKT Hóa Học Nghiên Cứu Khoa Học 3.1.2 Kết sắc ký ghép khối phổ cao vỏ Lô hội Sắc ký ghép khối phổ GC/MS cao Lơ hội thể hình Kết xác định thành phần hoá học cao vỏ Lô hội bảng 10: lu an n va gh tn to p ie Hình 5: Sắc ký đồ cao vỏ Lô hội w Nhận xét: Qua kết sắc ký đồ, nhận thấy có giá trị có thời gian lưu khác oa nl nhau, điều có nghĩa mẫu cao Lô hội thu cấu tử, ứng với hợp chất d Các cấu tử điểm peak: 13.634; 17,162; 30.770; 34.475 có thời gian lưu lu an cách xa có hàm lượng cao cao Lơ hội Các cấu tử cịn lại có nf va cường độ tương đối thấp nên có hàm lượng không đáng kể cao Lô hội Cũng lm ul có số cấu tử có thời gian lưu gần nhau, chúng đồng phân z at nh oi cấu tử peak: 31.618 31.865; 33.042, 33.883 33.987 Bảng 10: Kết phân tích thành phần hóa học cao vỏ Lô hội Rt Hàm Tên chất Dibutyl-2,7- an Lu octadiene m tetramethyl-3,5- co 6.036 l 13.634 gm (3E,5E)-4,51 Công thức cấu tạo @ lượng z TT n va Trang 49 ac th HDKH: ThS Vũ Thị Hồng Phượng Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên si Trường Đại Học Bà Rịa - Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật - Kinh Tế Biển, Ngành CNKT Hóa Học Nghiên Cứu Khoa Học 17.162 13.10 Phytol 24.580 1.150 29.716 1.620 -Tocopherol 30.770 30.73 Heptacosane 31.618 3.711 (+)--Tocopherol 31.865 1.092 (Z)-7Hexadecenal lu an n va 17,21-28,30- p ie gh tn to Bisnorhopane 33.883 1.416 10 33.987 1.519 1.298 Ursodiol d oa nl w 33.042 nf va an lu C22H46O z at nh oi 34.475 1-Docosanol lm ul 23.83 11 Heptacosane -Sitosterol z co l gm @ m Nhận xét: Theo bảng phân tích thành phần hóa học mẫu cao Lơ hội cho thấy có an Lu tổng cộng 11 cấu tử định danh, sắc ký đồ thể điểm peak có tên biểu đồ Có thể nguyên nhân điểm peak cấu tử lại có va n cường độ q thấp nên khơng thể tên cấu tử lên biểu đồ Kết bảng Trang 50 ac th HDKH: ThS Vũ Thị Hồng Phượng Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên si Trường Đại Học Bà Rịa - Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật - Kinh Tế Biển, Ngành CNKT Hóa Học Nghiên Cứu Khoa Học phân tích cho thấy thành phần cao Lơ hội Xã Long Phước gồm 11 cấu tử thành phần chủ yếu là: (3E,5E)-4,5-Dibutyl-2,2,7,7-tetramethyl-3,5-octadiene chiếm 6.036%; Phytol chiếm 13.10%; Heptacosane chiếm 32.146%;  -Sitosterol chiếm 23.83% Kết chạy sắc ký phổ cho thấy diện tích peak Heptacosane thành phần chủ yếu 3.2 Kết khảo sát khả kháng khuẩn phương pháp đo vịng kháng khuẩn Khả kháng khuẩn cao Lơ hội Bảng 11: Đường kính vịng kháng khuẩn cao vỏ Lô hội (mm) P lu Nồng độ mg/ml E.coli B cereus S typhi 1600 8.6  0.4 10.5  0.3  0.2 - - 800 8.5  0.3 9.3  0.4  0.2 - - 400 8.2  0.3 8.3  0.4 - - - 200 - - - - - 20.1  0.3 16.9  0.3 13.1  0.2 14.4  0.4 - 13.4  0.3 - - - - - - - - an STT n va gh tn to 17.2  p ie Tetracycline 0.2 nl w Chloramphenicol DMSO 5% d oa aeruginosa S aureus an lu nf va Trên chủng E.coli khảo sát nồng độ cho thấy ba nồng độ 1600 lm ul mg/ml, 800 mg/ml 400 mg/ml khác nhau, kết nồng độ mm Nồng độ lại 200 mg/ml không thấy tượng kháng lại vi khuẩn E.coli z at nh oi Kết cho thấy hoạt tính kháng khuẩn cao Lô hội chủng E.coli tương đối ổn định, nhận thấy cao vỏ Lô hộ có khả kháng chủng z m co l gm @ an Lu n va Trang 51 ac th HDKH: ThS Vũ Thị Hồng Phượng Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên si Trường Đại Học Bà Rịa - Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật - Kinh Tế Biển, Ngành CNKT Hóa Học Nghiên Cứu Khoa Học Hình 6: Khả kháng E.coli cao Lô Hội 1: 1600 mg/ml 5: chứng (+) tetracyline lu an va 2: 800 mg/ml 6: chứng (+) chloramphenicol 3: 400 mg/ml 7: chứng (-) DMSO 5% n 4: 200 mg/ml to tn Trên chủng vi khuẩn B cereus khảo sát nồng độ nhận thấy hai ie gh nồng độ 1600 mg/ml 800 mg/ml có chênh lệch đáng kể, kết 4.5 p mm mm Các nồng độ lại 400 mg/ml 200 mg/ml kết thu nl w nồng độ là: 2mm mm Kết cho thấy hoạt tính kháng khuẩn oa cao Lô hội chủng B cereus tương đối cao, nhận thấy dịch chiết từ Lô d hội có khả kháng chủng tốt nf va an lu z at nh oi lm ul z l gm @ Hình 7: Khả kháng B cereus cao Lô Hội co 5: chứng (+) tetracyline 2: 800 mg/ml 6: chứng (+) chloramphenicol 3: 400 mg/ml 7: chứng (-) DMSO 5% m 1: 1600 mg/ml an Lu va Trang 52 ac th HDKH: ThS Vũ Thị Hồng Phượng n 4: 200 mg/ml Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên si Trường Đại Học Bà Rịa - Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật - Kinh Tế Biển, Ngành CNKT Hóa Học Nghiên Cứu Khoa Học Trên chủng S typhi khảo sát nồng độ trên, nhận thấy hai nồng độ đầu 1600 mg/ml 800 mg/ml có kết ghi nhận mm mm khơng có khác Mặt khác, hai nồng độ 400 mg/ml 200 mg/ml khơng có tượng kháng lại vi khuẩn lu an n va 1: 1600 mg/ml 5: chứng (+) tetracyline 2: 800 mg/ml 6: chứng (+) chloramphenicol 3: 400 mg/ml 7: chứng (-) DMSO 5% p ie gh tn to Hình 8: Khả kháng S typhi cao Lô Hội nl w 4: 200 mg/ml d oa Trên chủng P aeruginosa tiến hành khảo sát với nồng độ trên, nhận an lu thấy tất nồng độ khơng có khả kháng lại vi khuẩn chủng Dựa nf va theo kết nhận thấy với chủng P aeruginosa, cao Lô hội nồng độ cao (1600 mg/ml) khơng có khả kháng kể nồng độ thấp z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va Hình 9: Khả kháng P aeruginosa cao Lô hội Trang 53 ac th HDKH: ThS Vũ Thị Hồng Phượng Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên si Trường Đại Học Bà Rịa - Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật - Kinh Tế Biển, Ngành CNKT Hóa Học Nghiên Cứu Khoa Học 1: 1600 mg/ml 5: chứng (+) tetracyline 2: 800 mg/ml 6: chứng (+) chloramphenicol 3: 400 mg/ml 7: chứng (-) DMSO 5% 4: 200 mg/ml Cuối chủng S aureus, tương tự chủng P aeruginosa, nhận thấy nồng độ khảo sát khơng có khả kháng khuẩn từ nồng độ cao đến nồng độ thấp lu an n va ie gh tn to p Hình 10: Khả kháng S aureus cao Lô Hội 5: chứng (+) tetracyline 2: 800 mg/ml 6: chứng (+) chloramphenicol 3: 400 mg/ml 7: chứng (-) DMSO 5% d oa nl w 1: 1600 mg/ml an lu lm ul Nhận xét: nf va 4: 200 mg/ml z at nh oi DMSO 5% mẫu chứng âm kháng khuẩn Thuốc kháng sinh Tetracyline có hoạt tính kháng chủng khuẩn cao tốt so với dịch chiết cao Lô hội Dịch chiết cao vỏ Lơ hội có hoạt tính kháng z chủng khuẩn (E.coli, B.cereus S.typhi) @ gm Với nồng độ 1600 mg/ml 800 mg/ml em nhận thấy vòng kháng sinh l to, rõ ràng có chênh lệch Các nồng độ cịn lại 400 mg/ml, 200 mg/ml có m co chênh lệch khác rõ rệt, nồng độ 400 mg/ml có vịng kháng an Lu nồng độ 200 mg/ml khơng có có vịng kháng Vì nồng độ cao vỏ Lơ hội thấp hoạt tính kháng giảm n va Trang 54 ac th HDKH: ThS Vũ Thị Hồng Phượng Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên si Trường Đại Học Bà Rịa - Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật - Kinh Tế Biển, Ngành CNKT Hóa Học Nghiên Cứu Khoa Học lu Hình 11: Biểu đồ thể khả kháng khuẩn cao vỏ Lô hội chủng vi an khuẩn n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va Trang 55 ac th HDKH: ThS Vũ Thị Hồng Phượng Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên si Trường Đại Học Bà Rịa - Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật - Kinh Tế Biển, Ngành CNKT Hóa Học Nghiên Cứu Khoa Học CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Qua quy trình thực nghiệm chiết tách cao vỏ Lô Hội, điều kiện để thu hiệu suất cao chiết cao là: Dung môi sử dụng là: Ethanol 70o Tỷ lệ dung môi : nguyên liệu : 1:25 (g/ml) Nhiệt độ trích ly 70 ℃ Thời gian trích ly Định tính số chất hữu cao Lô hội qua dung môi khác: lu Kết luận: Hầu hết tất bột Lô hội chiết với dung môi khác an phản ứng dương tính với Anthranoid, Steroid – triterpenoid Nhưng Ethanol có n va đầu phân cực hòa tan nhiều ion K, Mg, Cu, Fe đầu tn to không phân cực để hòa tan hoạt chất Anthranoid, Steroid – triterpenoid gh Khảo sát khả kháng vi sinh vật cao vỏ Lô hội: p ie Kết luận: w Kết khảo sát khả cao vỏ láLô hội chủng vi khuẩn oa nl thử nghiệm cho thấy nồng độ cao 1600 mg/ml 800 mg/ml đạt đường kính d vòng kháng khuẩn cao loại chủng khuẩn Ở hai nồng độ 200 mg/ml cao an lu Lơ hội cịn hoạt tính kháng 100 mg/ml cao vỏ Lơ hội khơng cịn khả nf va kháng chủng vi khuẩn lm ul Ngoài ra, nồng độ 1600 mg/ml nhận thấy cao vỏ Lơ hội có khả 4.2 Kiến nghị z at nh oi kháng tốt kháng sinh Chloramphenicol Quá trình nghiên cứu thực quy mơ phịng thí nghiệm z với thời gian hạn chế Do đó, em xin đưa số kiến nghị sau: @ Nghiên cứu thêm phương pháp chiết cao vỏ Lô hội sử dụng loại gm - m Định danh số hợp chất khác Lô hội để đánh giá khả dược liệu an Lu - co khác để trình chiết đạt hiệu cao l enzyme, dùng sóng siêu âm hay vi sóng, với tỉ lệ nguyên liệu/dung môi n va Trang 56 ac th HDKH: ThS Vũ Thị Hồng Phượng Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên si Trường Đại Học Bà Rịa - Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật - Kinh Tế Biển, Ngành CNKT Hóa Học - Nghiên Cứu Khoa Học Nghiên cứu điều chế nano bạc từ chiết xuất Lô hội phục vụ lĩnh vực mỹ phẩm lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va Trang 57 ac th HDKH: ThS Vũ Thị Hồng Phượng Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên si Trường Đại Học Bà Rịa - Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật - Kinh Tế Biển, Ngành CNKT Hóa Học Nghiên Cứu Khoa Học TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt [1] Bộ Y Tế Bộ Giáo Dục Đào Tạo, 1998, Bài giảng dược liệu tập Nhà xuất Hà Nội [2] Cao Minh Trí; Bùi Văn Hậu; Lê Tiến Dũng Khảo sát thành phần hóa học lơ hội (Aloe vera L var chinensis (Haw.) Berger) Số 9, tháng 6/2013 [3] Đỗ Tất Lợi 1990 Những thuốc vị thuốc Việt Nam Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật 458 - 460 [4] Đỗ Thị Việt Hương, Nguyễn Thị Huệ Xác định ứng dụng thành phần hóa học gel lơ hội Tạp chí phân tích Hóa, Lý Sinh học - Tập 19, Số 3/2014 lu [5] Phạm Hoàng Hộ 1999 Cây cỏ Việt Nam Vol III, 738 Nhà xuất trẻ an va [6] Tiến sĩ Chompoosor.“Tổng hợp nano bạc từ chiết xuất Nha đam” Số 11 năm n 2017 Tạp chí khoa học cơng nghệ Việ Nam tn to [7] Viện Dược liệu 2006 Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam Nhà xuất ie gh Khoa học Kỹ thuật Hà Nội 171-173 p [8] Cây thuốc - Lô Hội Dược điển Việt Nam IV, chuyên luận dược liệu Năm 2017 nl w Tài liệu Tiếng Anh oa [9] B Vogler and E Ernst "Aloe vera: a systematic review of its clinical d effectiveness" Br J Gen Pract Vol 49, pp 823-828, 1999 lu nf va an [10] C A Newall, L A Anderson, and J D Phillipson, Herbal medicines A guide for healthcare professionals: The pharmaceutical press 1996 lm ul [11] Coopoosamy, R.M and Magwa, M.L., 2006 Antibacterial activity of Aloe Biotechnology, 5: 1279 – 1282 z at nh oi vera edmodin and Aloin A isolated from Aloe excels African Journal of [12] C M d C X Holanda, M B d Costa, N C Z d Silva, S Júnior, V S d A z @ Barbosa, R P d Silva, et al "Effect of an extract of Aloe vera on the l gm biodistribution of sodium pertechnetate (Na99mTcO4) in rats" Acta Cirurgica co Brasileira Vol 24, pp 383-386, 2009 m [13] Chandan, A.B.K., Saxena, Z.A.K., Sukla, S., Sharma, N., Gupta, D.K., Suri, an Lu K.A., Suri, J., Bahauria, M., and Singh, B., 2007 Hepatoprotective potential of va Aloe barbedensis Mill Against carbon tetrachloride induced hepatotoxicity J Trang 58 ac th HDKH: ThS Vũ Thị Hồng Phượng n Ethnopharmacol, 11: 560 – 569 Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên si Trường Đại Học Bà Rịa - Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật - Kinh Tế Biển, Ngành CNKT Hóa Học Nghiên Cứu Khoa Học [14] Gabriella Roda; Cristina Marinello; Anita Grassi; Claudia Picozzi; Giancarlo Aldini; Marina Carini and Luca Regazzoni Ripe and Raw Pu-Erh Tea LC-MS Profiling, Antioxidant Capacity and Enzyme Inhibition Activities of Aqueous and Hydro-Alcoholic Extracts 2019, 24, 473 [15] Grindlay D.; ReynoldsT.J.Ethnopharmcol.The Aloe vera phenomenon: A review of the properties and modern uses of the leaf parenchyma gel Vol 16, 117 151 (1986) [16] Kulveer Singh Ahlawat; Bhupender Singh Khatkar Processing, food applications and safety of aloe vera products: a review 525–533 (2011) lu [17] Josias H.H 2008 Composition and Application of Aloe vera Leaf Gel an Molecules, 13, 1599 – 1616 va n [18] Lisa, B., Francois, H., Westhuizen, VD, and Loots, D.T., 2008 Phytochemical tn to Content and Antioxidant Capacties of Two Aloe greatheadii var Davyana Extracts gh Molecules 13: 2169-2180 p ie [19] Duangporn, W., Sitikorn, L., Kessarin, T., Kanjana, S., Naruemon, K., w Rungsun, R And Prasong, S., 2014 Aloe vera attenuated liver injury in mice with d 14: 229-239 oa nl acetaminophen-induced hepatitis BMC Complementary and Altemative Medicine lu an [20] Masatoshi, Y., M Toshio, S Kiyoshi, Y Masami, N Kazuya and N Hiroyuki, lm ul 1629 nf va 1991 Anti-inflammatory Active Constituents of Aloe arborescens Miller, 55, 1627- z at nh oi [21] M Nagaraju1; Suhas Ramulla And N.Y.S Murthy Extraction and Preliminary Analysis of Aloin Obtained from Aloe barbadensis Miller Vol 23, No (2011), 2421-2423 z [22] Mulabagal, V., Shih-hua, F., Chan, Z And Hsin Sheng, T., 2006 Modulation @ gm of activated Murine Peritoneal Macrophages Function by Emodin, Aloe-emodin l and Barbaloin Isolated from Aloe barbadensis Journal of Food and Drug Analysis, m co 14(1): 7-11 an Lu [23] Ninad R Jawade; Abhjeet R Chavan Ultrasonic-Assisted Extraction of Aloin from Aloe Vera Gel 2013, 487– 493 n va Trang 59 ac th HDKH: ThS Vũ Thị Hồng Phượng Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên si Trường Đại Học Bà Rịa - Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật - Kinh Tế Biển, Ngành CNKT Hóa Học Nghiên Cứu Khoa Học [24] Pecere T., Gazzola, M.V., Muciganat, C., Vecchia, F.D., Cavaggion, A., Baso, G., Diaspro, A., Salvato, B., Carli, M And Palu, G., 2000 Aloe emodin is a new type of anticanger agent with selective activity against neuroectodermal tours Cancer Res 60: 2800-2804 [25] Pilar Preto, Manuel, Miguel Aguilar Spectrophotometric Quantition of Antioxidant Capacity through the F ormation of a P hosphomolybdenum Complex: Specific Application to the Determination of Vitamin E1 [26] Pankaj K.S, Deen, D.G., Ritu, S., Priyanka, P., Sharmistha, G., Atul, K.S., Ajay, K and Kapil, D.P., 2013 Therapeutic and Medicinal Uses of Aloe vera: A Review Pharmacology & Pharmacy 4: 599-610 lu [27] R Rajeswari; M Umadevi; C Sharmila Rahale; R.Pushpa; S Selvavenkadesh; an K P Sampath Kumar; Debjit Bhowmik Aloe vera: The Miracle Plant Its va n Medicinal and Traditional Uses in India Vol No 2012 tn to [28] Rubeena, S., Faizi, S., Deeba, F., Siddiqui, B.S and Qazi, M.H., 1997 gh Athrone from Aloe barbadersis Phytochemistry 45(6): 1279 – 1282 p ie [29] R J E Grindlay D."The Aloe vera phenomenon: A review of the properties w and modern uses of the leaf parenchyma gel" Vol 16, pp 117-151, 1986 oa nl [30] Singh, S., Sharma, P.K., Kumar, N And Dudhe, R., 2010 Biological activities d of Aloe vera International Journal Of Pharmacy & Technology, 2(3): 259 – 280 lu an [31] S Joshi "Chemical constituents and biological activity of Aloe barbadensis-A nf va review.J Med Aromat.Plant Sci 20" Pp 768-773, 1998 lm ul [32] S Jayakumari; Prabhu K; Mudiganti Ram Krishna Rao; Bhupes; D.Kumaran; z at nh oi Aishwariya Ramesh The GC MS Analysis of a Rare Medicinal Plant Aloe barbadensis Vol 9(7), 2017, 1035-1037 [33] Tian, B, Hua, Y.J., Ma, X.Q and Wang, G.L., 2003 Relationship between z antibacterial activity of Aloe and is anthraquinone compounds Department of @ m co [34] Tom Reynolds Aloe: the Genus Aloe l University, Hangzhou 310029, Zhejiang, China gm Applied Bioscience, Insitute of Nuclear – Agricultural Sciences, Zhejiang an Lu [35] Yun, Nasi, N., Lee, Chan – Ho, C.H., Lee and Sun – Meec, S.M., 2009 Aloe vera could be a potential therapeutic agent for the clinial treatment of sepsis Food n Trang 60 ac th HDKH: ThS Vũ Thị Hồng Phượng va Chem Toxicol 47: 1341: 1350 Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên si Trường Đại Học Bà Rịa - Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật - Kinh Tế Biển, Ngành CNKT Hóa Học Nghiên Cứu Khoa Học Tài liệu website [36] Lê Thị Bích Uyển Nghiên cứu khả chống oxy hóa kháng vi sinh vật gây bệnh cao chiết lơ hội Năm 2007 trích từ URL: https://vi.scribd.com [37] Nguyễn Thành Tài Nghiên cứu khả chống oxy hóa kháng vi sinh vật gây bệnh cao chiết lơ hội Năm 2014, trích từ URL: https://app.box.com [38] PGS.TS Nguyễn Ngọc Hạnh ThS Phan Nhật Minh Nghiên cứu quy trình chiết tách aloin từ lơ hội Năm 2007, Viện cơng nghệ hóa học TP.HCM (Viện KH&CN Việt Nam) trích từ URL: http://www.khoahocphothong.com.vn [39] Nguyễn Thanh Tú Báo cáo dược liệu sắc ký lớp mỏng, trích từ URL: https://www.slideshare.net lu [40] Phướng pháp quang phổ hấp thụ phân tích UV – VIS, trích từ URL: an https://www.sbc-vietnam.com va n [41] Nguyên lý hoạt động sắc ký khí ghép khối phổ (GCMS – Gas Chromatography tn to Mass Spectrometry), trích từ URL: http://vinaquips.com gh [42] Đại cương phương pháp quang phổ, trích từ URL: p ie https://www.slideshare.net w [43] Các phương pháp chiết xuất hợp chất thiên nhiên, trích từ URL: oa nl https://text.xemtailieu.com d [44] Trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên Giới thiệu số phương pháp đánh lu Chi a s nf va an giá hoạt tính sinh học hợp chất thiên nhiên, trích từ URL: http://tuaf.edu.vn z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va Trang 61 ac th HDKH: ThS Vũ Thị Hồng Phượng Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên si