Nghiên cứu xác định một số đột biến gen gây bệnh tăng huyết áp bằng phương pháp giải trình tự gen sanger

Bộ GIÁO DỰC VÀ DÀO TẠO Bộ Y TÉ TRƯỜNG DẠI HỌC Y HÀ NỘI • •• *** ••• DƯƠNG THỊ THUỲ TRANG NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH MỌT SỎ ĐỘT BIẾN GEN GÂY BỆNH TÀNG HUYÉT ÁP BÁNG PHƯƠNG PHÁP GIẢI TRÌNH TỤ GEN SANGER KHĨA LUẬN TĨT NGHIỆP NHN Y KHOA KHểA 2019 2023 H NI-2023 -ãc ô4 ugc V Hl BỌ GIÁO DỤC VÀ DÀO TẠO Bộ Y TÉ TRƯỜNG DẠI HỌC Y HÀ NỘI vMHOc> HA NƠI J»» C đột biền T thành c vị trí 786 vũng sườn 5' cua gen NOS3 ngàn chận quâ trinh phiên mà gen NOS3 Việc giam phiên mà NOS3 dần đển giam sán xuất NO nội mò bệnh ^H «4 ugc V Hl 55 nhân mang alen -786 c Nghiên cứu cua Matthew cộng trẽn 705 người khỏe mạnh mật lâm sàng (2002) so sánh bệnh nhãn vơs.? cc cỏ huyết áp tâm thu cao vả có bị THA gấp 2,16 so NOS'3 TT Tỳ lộ mang NOS3 TT chiếm 39%% NOS3 TC chiếm 46% NOS3 cc chiềm 15% dó có 22.6% đỗi tượng có kiêu gen WS3 cc bị THA so với 12.4% 14.8% đỗi tượng có kiêu gen NOS TT AYZS’TC tương ứngfỈS) Đây nghiên cứu Việt Nam VC dột biển E298D NOS3 vã - 786T-C NOS3 ánh hương den THA Tuy nhicn với cờ inảu bệnh nhàn nên chưa thê kháng định dược ty lệ phát dột biến gen NOS3 Cỏ mầu dột biền GNB3 825C-T dạng dồng hợp tứ chiêm 20% mầu dạng dị hợp tư chiêm 60% Đột bicn GNB3 825C-T gây xóa bo 123 nucleotide khung exon cua gen GNB3 dẫn đến tạo phân tứ G[Ỉ3 bị cắt cụt (G|ỉ3s) thiếu 41 axit amin lãm thay dối cấu trúc ba chiều cùa gen GNB3 Kết nối sai lệch dần dến kích kích hoạt mạnh dường truyền tin hiệu G-protein gây thòng qua thụ thê kết hợp với protein (ỉ lề bào khác chàng hạn tề bão lympho B T bạch cầu trung tinh vả tế bào mờ Từ làm tảng độ nhạy cam với hormone tảng áp vận mạch truyền tin hiệu thông qua protein G03 dần đến THA Nghiên cứu cùa Nevccn Salah El Đin Henumi vả cộng 222 người binh thường vã 216 bệnh nhàn THA so sánh nguy THA nhùng người mang kiểu gen GNB3 TT cao gắp dôi so với người mang kiêu gen GNB3 cc vã GNB3 CT Và 216 bệnh nhân THA ti lộ bệnh nhản mang G.NB3 TT chiếm 25% 45.4% bệnh nhãn dị hợp tư với G.NB3 CT 29.6% bộnh nhân dồng hợp tư với GNB3 cc -9\ Đây lã nghiên cứu dầu tiên ỡ Việt Nam VC dột biền GNB3 825C-T Tuy nhiên với lan số 0.466123 (T) toàn cầu, cần quan tám nghiên cứu sâu nừa anh hưởng vã tý lộ mắc bệnh cua đột biển gcn đê phòng ngừa vã giám thiếu nhùng biến chửng THA gây .^H «4 ugc V Hl 56 KÉT LUẬN VÀ KIÊN NGHỊ KÉT LUẬN Hoàn thiện quỵ trinh phát sổ đột biến gáy tảng huyết áp bang kỹ thuật giãi trinh tự gen Thiết kề vả lựa chọn dược mồi phú hựp diều kiện phan ứng PCR để khuếch dại gen OP5.-15 gen NOS3 sen G.XB3 chửa diêm dội biến CYP3AS 6096A-G (C.7O81 AXj): NOS3 786T-C (C.1975 OT): GNB3 E298D (C.8OO7 T>G): NOS3 - 825C-T (c.4787 c> T), giai trinh tự gcn đe xác dinh cảc dột biến vã dựa nghiên cửu với mầu DNA chững Xây dựng quy trinh thu thập, bao quan mẫu máu tách chiết DNA bao dam chat lượng Thực phân tích 05 màu bệnh nhân cho thấy kết giái trinh tự thu dtrợc chửa diem dột biến CỈP?.-15 NOS3 6096A-G (c.7081 A>G); E298D (c.8007 T>G): NOS3 -786T-C (c 1975 C>T): G.XB3 S25C- T (c.4787 c> T) KIẾN NGHỊ Tiếp tục nghiên cửu trẽn nhóm bệnh nhân có nguy cao THA với số lượng người tham gia nghiên cứu lớn đe có so liệu khoa học tin cậy Cần thực nghiên cứu ticp theo dột biến gcn gây bệnh THA dối tượng có yểu tổ nguy yếu tố gia dinh mẳc bệnh THA vỏ cân với cỡ mầu lớn .^H «4 ugc V Hl TÀI LIỆU THAM KHÁO Zhou B Carrillo-Larco RM Danaei G Riley LM Paciorek CJ Stevens GA et al Worldwide trends in hypertension prevalence and progress UI treatment and control from 1990 to 2019: a pooled analysis of 1201 population-representative studies with 104 million participants The Lancet 2021 Sep:398(10304):957 80 Minh HV Poulter NR Viet NL Sinh CT Hung PN Ngoe NTM et al Blood pressure screening results from May Measurement Month 2019 in Vietnam Eur Heart J Suppl 2021 May:23(Suppl B):B154 rs776746 Bão cáo RefSNP - dbSNP - NCBI [Internet], [cited 2023 May 31] Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/snp /rs776746#frcquency_tab rsl799983 RefSNP Report - dbSNP - NCB1 [Internet], [cited 2023 May 31] Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/snp/ rs1799983 rs2070744 RefSNP Report - dbSNP - NCBI [Internet], [cited 2023 May 31] Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/snp/ rs2070744 rs5443 RefSNP Report - dbSNP - NCBI [Internet], [cited 2023 May 31] Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/snp/rs5443 High blood pressure (hypertension) - Symptoms and causes [Internet] Mayo Clinic, [cited 2023 May 25] Available from: https://www.mayoclinic.org/diseases-conditions/liigli-bloodpressiưe/symptoms-causes/syc-20373410 Forouzanfar MH Liu p Roth GA Ng M Biryukov s Marczak L et al Global Burden of Hypertension and Systolic Blood Pressure of at Least no to 115 mm Hg 1990-2015 JAMA 2017 Jan 10;317(2):165-82 Son PT Quang NN Viet NL Kliai PG Wall s Weinehall L et al Prevalence, awareness, treatment and control of hypertension in -ãc ^H ô4 ugc V Hl Vietnam-results from a national survey J Hum Hypertens 2012 Apr:26(4):268 so 10 Nguyen TPL Nguyen TBY Nguyen TT, Vinh Hac V I.e HH Schuiling-Veninga c et al Direct costs of hypertensive patients admitted to hospital in Vietnam' a bottom-up micro-costing analysis BMC Health Services Research 2014 Oct 28:14(1):514 11 Cần quan tâm VC hoạt dộng quan lỳ bệnh không lây nhiễm rối loạn sức khóe tâm thần tuyền y tể sớ - Hoạt dộng Cua lành đạo - Cịng thơng tin Bộ Y tế [Internet], [cited 2023 May 29] Available from: https://moh.gov vn/hoat-dong-cua-lanh-dao-bo//asset_publislier/TW6LTp ZtwaN/content/can-quan-tam-hon-vehoat-ong-quan-ly-benh-khong-lay-nhiem-va-roi-loan-suc-khoe-tamtlian-tai-tuyen-y-te-co-so 12 Schena FP Management of patients with clưonic kidney disease Intent Emerg Med 2011 Oct:6 Suppl 1:77-83 13 Mokhtari T, Hassani F Ghaffari N, Ebrahimi B Yarahmadi A Hassanzadeh G COVID-19 and multiorgan failure: A narrative review on potential mechanisms J Mol Histol 2020:51(6):613-28 14 Hopkins PN Hunt sc Genetics of hypertension Genetics in Medicine 2003 Nov 1;5(6):413 29 15 Liu X Jin L Zltang H Ma w Song L Zhou X et al A Chinese pedigree with glucocorticoid remediable aldosteronism Hypertens Res 2021 Nov:44(l 1): 1428 33 16 Rensel MA, Schlinger BA 11B hydroxysteroid dehydrogenases regulate circulating glucocorticoids but not central gene expression Gen Comp Endocrinol 2021 May 1:305:113734 17 Rosler /V Wlritc PC Mutations in human 11 beta-hydroxylase genes: 11 beta-hydroxylase deficiency in Jews of Morocco and corticosterone methyl-oxidase II deficiency in Jews of Iran J Steroid Biochem Mol Biol 1993 Api"45(1 3):99 106 -ãc ^H ô4 ugc V Hl 18 Fan YS Sasi R Lee c Winter JS Waterman MR Lin cc Localization of the human CYP17 gene (cytochrome P450(17 alpha)) to 10q24.3 by fluorescence in situ hybridization and simultaneous chromosome banding Genomics 1992 Dec; 14(4): 1110-1 19 Lu J Hu F Zhou Y NR3C2-Related Transcriptome Profile and Clinical Outcome in Invasive Breast Carcinoma Biomed Res Int 2021:2021:9025481 20 Nystrom AM Bondeson ML Skanke N Martensson J Stromberg B Gustafsson J et al A novel nonsense mutation of the mineralocorticoid receptor gene in a Swedish family with pseudohypoaldosteronism type I (PHA1) J Clin Endocrinol Metab 2004 Jan;89(l):227 31 21 Secondary hypertension - Symptoms and causes [Internet] Mayo Clinic, (cited 2023 May 25] Available from: https://www mayoclinic.org/diseases-conditions/secondaryhypertension/symptoms-causes/syc-20350679 22 King AW, Tille E Sun B Pojoga L Williams J Cliamarthi B et al Lysine-specific demet hylase-1 modifies the age effect on blood pressure sensitivity to dietary salt intake Age (Dordr) 2013 Oct:35(5): 1809-20 23 Hypertension: MedlinePhis Genetics [Internet], [cited 2023 May 25], Available from: https://medlineplus.gov/genetics/condition/hy pertension/ 24 Liu J Willems HME Sansevere EA Allert s Barker KS Lowes DJ et al A variant ECE1 allele contributes to reduced pathogenicity of Candida albicans during vulvovaginal candidiasis PLoS Pathog 2021 Sep 10:17(9) :e 1009884 25 Dasgupta s Ghosh T, Dliar J Bhuniya A Nandi p Das A et al RGS5 TGFfl -Smad2/3 axis switches pro- to anti-apopt otic signaling in tumor-residing pericytes, assisting tumor growth Cell Death Differ 2021 Nov;28(l l):3O52 76 -•c ^H «4 ugc V Hl 26 Butler MG PEDIATRIC 2010:58(3): 175-8 HYPERTENSION J Med Liban 27 Lamba J Hebert JM Schuetz EG, Klein I E Altman RB PhannGKB summary: very important pharmacogene information for CYP3A5 Phannacogenet Genomics 2012 Jul:22(7):555-8 28 RAIS N HUSSAIN A CHAWLA YK KOHLI KK Association between urinary 6p-hydroxycoitisol/coi1isol ratio and CYP3A5 genotypes in a normotensive population Exp Ther Med 2013 Feb:5(2):527-32 29 Seyedrezazadeh E Faramarzi E Bakhtiyari N Ansarin A Gilani N Amiri-Sadeghan A et al Association of NOS3-C.894G>T transversion with susceptibility to metabolic syndrome in Azarcohort population: A case-control study and in silico analysis of the SNP molecular effects Iran J Basic Med Sei 2021 Mar:24(3):408 19 30 NOS3 Gene - GeneCards NOS3 Protein I NOS3 Antibody [Internet], [cited 2023 May 25] Available from: https:/Avww.genecards.org/cgibin/carddisp.pl?gene=NOS3 31 Martin G Asensi V Montes AH Collazos J Alvarez V Pẽrez-Is L et al Endothelial (NOS3 E298D) and inducible (NOS2 exon 22) nitric oxide synthase polymorphisms, as well as plasma NOx influence sepsis development Nitric Oxide 2014 Nov 15:42:79- 86 32 Schutte AE Jafar TH Poulter NR Damasceno A Khan NA Nilsson PM et al Addressing global disparities in blood pressure control: perspectives of tile International Society of Hypertension Cardiovasc Res 2022 Oct 11 :cvac 130 33 High Blood Pressure - Treatment I NHLBI NIH [Internet], [cited 2023 May 31] Available from: https://www.nhlbi.nih.gov/health/ higli-blood-pressure/treatment 34 Barberato SH Romano MMD Beck AL de s Rodrigues ACT de Almeida ALC Assunẹăo BMBL et al Position statement on -ãc ^H ô4 ugc V Hl Indications of Echocardiography in Adults - 2019 Arq Bras Cardiol 2019 Juhl 13(1): 135 81 35 ter Haar cc Peters RJG Bosch J, Sbrollini A Gripenstedt s Adams R el al An initial exploration of subtraction electrocardiography to detect myocardial ischemia in the prehospital setting Aim Noninvasive Electrocardiol 2019 Nov 10;25(3):el2722 36 Givens RC Lin YS Dowling ALS Thummel KE Lamba JK Schuetz EG et al CYP3A5 genotype predicts renal CYP3A activity and blood pressure in healthy adults J Appl Physiol (1985) 2003 Sep:95(3): 1297-300 37 Sư HX Khao sát mối liên quan liều, nồng độ tacrolimus, mức lọc cầu thận với da hình kiều gen CYP3A5 người bệnh ghép thận Journal of 108 - Clinical Medicine and Phamarcy (Internet] 2023 Feb [cited 2023 May 31]; Available from: https://tcydls 1os.benhvien 108.vn/index.php/YDLS/article/view/1629 38 Hyndman ME Parsons HG Verina s Bridge PJ Edworthy s Jones c et al The T-786->C mutation in endothelial nitric oxide synthase is associated with hypertension Hypertension 2002 Apr:39(4):9I922 39 El Din Hemimi NS Mansour AA Abdelsalam MM Prediction of the Risk for Essential Hypertension among Carriers of C825T Genetic Polymorphism of G Protein (53 (GNB3) Gene Biomark Insights 2016 May 17:11:69 -75 -•c ^H «4 ugc V Hl PHỤ LỤC Danh sách bệnh nhân tham gia nghiên cửu I STT Tên bệnh nhân mẫu Tuổi Giói tinh Mã bệnh nhàn SOI NTT 67 Nừ 23048635 SO2 TTC 70 Nữ 23048713 SO3 NTL 65 Nừ 23048673 SO4 NĐT 70 Nam 23048699 SO5 LVN 73 Nam 23048638 II Triệu chứng thuốc điều trị cua bệnh nhân tham gia nghiên cứu Bệnh nhân Giá trị HA SOI 150/85 Triệu chứng Bệnh nhân khó thờ vận động, da niêm Thuổc diều trị Saw I.osatan 50 mạc hổng nhạt S02 155/86 Bệnh nhãn thinh thoang đau dầu lức ngực, phổi ri Savi Losatan 50 rào phê nang rò S03 142/89 Bệnh nhân thinh thoang Telzid 40/12.5 đau đầu lức ngực, phôi ri rào phế nang rỏ S04 147/91 Bệnh nhân mệt moi ăn Telzid 40/12.5 tê bi tay chân, hồi hộp trồng ngực S05 144/90 Bệnh nhân dau ngục, hồi hộp khó thơ hụt hi -ãc ^H ô4 ugc V Hl Savi Losatan 50 HI Kct qua giãi (rình tự mẫu bệnh nhân Bệnh nhân SOI: Đột biến CYP3A5 6986A-G đồng họp từ ■■■■■■■■■■■G| Dột biền NOS3 E298D dồng hợp từ c * «Kr *B®C CACA1GACCCCCCACAACTC 'Vỳv».aM Dột biến GXB3 825T c đồng họp tư Dột biến NOS3 -786T c dị họp tư T c c c T c|c|g ccĩcaccctỊ TCCCTCflc|TCGCICACCCT| jM4ẾMÁ^>ư Bệnh nhân S02: Dột bicn CYP3A5 6986A-G đồng hợp tư Dột biến VƠ.V.Ỉ E298D họp tư T T c AịCịT ATCTCT TCCCTGT T i«UK1UẶXỀỈ Dột biến GNB3 8251 c (I; hợp tư Dột biển NOSỈ -786T-C đồng hợp tư r c A ^Gịt cg.GRc c c c T r ệ T i » T c A c G T c|g TGGCCtTCT Bệnh nhân S03: Dột biến CYP3A5 69S6A-G đồng họp tư Dột bicn NOS3 E298D đồng họp tư :agatga[ĨỊcccccạgaac ĩ c CAGA IGAGCCCCCAGAACTC 1» »19 »Ó'Ũ ĩ ĨA G A r G Ap|BMBS5A< A A jfiTa Dột biến GNB3 X25T-C dị họp tử -W -.ÍH «4 HCC V Hk Hỉ: Bệnh nhân S04 Dột hiến CYP3A5 6986A-G đồng họp tử Dột hiến NOS3 F.298D đồng hợp tư CCCA A T a[t|cCCCC A, AA TTCACTATCTCT ĨCCCĨ Đột bicn NOS3 -7S6T-C đồng họp tư Dột bion GNB3 825T-C dị hợp tứ Bệnh nhân S05 Dột hiến CYP3A5 6986A-G đòng họp tư Dột biến NOS3 F.29XD đồng họp tư I c ĩ T ĩ c a[a]t A T c r c T ĩ C c c r