Nghiên cứu xác định một số đặc điểm dịch tễ, bệnh lý, gen kháng nguyên vp2 và xác định nguồn gốc của virus gumboro gây bệnh trên gà tại hà nội

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM ĐINH THỊ NHƯỜNG “NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ, BỆNH LÝ, GEN KHÁNG NGUYÊN VP2 VÀ XÁC ĐỊNH NGUỒN GỐC CỦA VIRUS GÂY BỆNH GUMBORO TRÊN GÀ TẠI HÀ NỘI” Ngành: Thú y Mã số ngành: 8.64.01.01 LUẬN VĂN THẠC SĨ THÚ Y Người hướng dẫn khoa học: TS Đặng Thị Mai Lan TS Lê Thị Kim Xuyến Thái Nguyên - 2022 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu người hướng dẫn khoa học Các số liệu kết nghiên cứu Luận văn hồn tồn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Mọi giúp đỡ cho việc thực đề tài cảm ơn Mọi thơng tin trích dẫn Luận văn rõ nguồn gốc TÁC GIẢ Đinh Thị Nhường ii LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS Đặng Thị Mai Lan - Đại học Nông Lâm Thái Nguyên TS Lê Thị Kim Xuyến - Cán phịng Miễn dịch học, Viện Cơng nghệ sinh học Việt Nam người trực tiếp hướng dẫn, tận tình bảo tạo điều kiện tốt cho tơi suốt q trình nghiên cứu hồn thành Luận văn Tơi xin trân trọng cảm ơn giúp đỡ tạo điều kiện to lớn sở vật chất, nhân lực, vật lực Ban Giám đốc, Ban Đào tạo - Đại học Thái Nguyên; Đảng ủy, Ban Giám hiệu, Phòng Đào tạo, Ban chủ nhiệm Khoa Chăn nuôi thú y, Bộ môn Thú y trường Đại học Nông Lâm - Đại học Thái Nguyên Lãnh đạo, cán Phịng Miễn dịch học, Viện Cơng nghệ Sinh học Việt Nam ln tận tình bảo, động viên cho lời khuyên quý báu nghiên cứu hoàn thành Luận văn Tôi xin gửi lời cám ơn Quỹ Phát triển Khoa học Công nghệ Quốc gia (NAFOSTED) tài trợ đề tài “Nghiên cứu đa dạng di truyền phân loại virus viêm túi truyền nhiễm (IBDV) Việt Nam thuộc chi Avibirnavirus (họ Birnaviridae) gia cầm”, mã số: 106.02-2020.03 TS.Lê Thị Kim Xuyến làm chủ nhiệm để thực luận văn Tôi xin cảm ơn Ban lãnh đạo Chi cục Chăn nuôi Thú y Hà Nội; Trạm Chăn nuôi huyện Quốc Oai, Phúc Thọ, Chương Mỹ Hà Nội; Ban lãnh đạo Chi cục Chăn nuôi Thú y tỉnh Hà Giang; Thường trực UBND thành phố Hà Giang đồng nghiệp giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành khố học nghiên cứu hồn thành Luận văn Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn vơ hạn đến Bố, Mẹ tồn thể người thân gia đình ln hỗ trợ, động viên, khuyến khích tơi suốt thời gian qua Tơi xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, ngày tháng 10 năm 2022 Học viên Đinh Thị Nhường iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH TỪ CÁC TỪ VIẾT TẮT… …………………………… ……… vi DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU vii DANH MỤC CÁC HÌNH ix MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu nghiên cứu Ý nghĩa đề tài Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Cơ sở khoa học vấn đề nghiên cứu 1.1.1 Nguyên nhân gây bệnh 1.1.2 Cơ chế sinh bệnh 1.1.3 Triệu chứng lâm sàng bệnh tích 1.1.4 Chẩn đốn phịng bệnh 10 1.2 Cơ sở pháp lý vấn đề nghiên cứu 12 1.2.1 Đặc điểm cấu trúc hệ gen IBDV 12 1.2.2 Hình thái virus Gumboro 15 1.2.3 Phân loại virus gây bệnh Gumboro 16 1.2.4 Tầm quan trọng việc giải mã hệ gen virus Gumboro 17 1.3 Tổng quan tình hình nghiên cứu giới 19 1.4 Tổng quan tình hình nghiên cứu Việt Nam 21 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.1 Đối tượng phạm vi, địa điểm, thời gian nghiên cứu 27 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 27 iv 2.1.2 Phạm vi nghiên cứu 27 2.1.3 Địa điểm thời gian nghiên cứu 27 2.2 Nội dung nghiên cứu 27 2.2.1 Tình hình chăn ni gà số địa phương có mẫu dương tính với vi rút Gumboro địa bàn Hà Nội……………………………… ………27 2.2.2 Kết điều tra tình hình mắc bệnh Gumboro gà nuôi số địa phương địa bàn Hà Nội ……………………………….……………27 2.2.3 Những triệu chứng lâm sàng gà mắc bệnh Gumboro 27 2.2.4 Những biến đổi bệnh lý gà mắc bệnh Gumboro 27 2.2.5 Kết nghiên cứu gen kháng nguyên VP2 xác định nguồn gốc virus gây bệnh Gumboro gà Hà Nội 28 2.2.6 Phân tích thành phần gen mối quan hệ nguồn gốc phả hệ chủng Gumboro Việt Nam giới dựa gen kháng nguyên VP2.……28 2.3 Vật liệu nghiên cứu 29 2.3.1 Nguyên liệu 28 2.3.2 Các dụng cụ thiết bị……………………………………….…………… 28 2.3.3 Hóa chất…………………………………………………………… ……….29 2.4 Phương pháp nghiên cứu 30 2.4.1 Phương pháp điều tra dịch tễ học 30 2.4.2 Phương pháp khảo sát triệu chứng lâm sàng 30 2.4.3 Phương pháp thu thập bệnh phẩm xác định bệnh tích đại thể, vi thể 30 2.4.4 Phương pháp tách chiết ARN tổng số 32 2.4.5 Phương pháp chuyển đổi cADN 33 2.4.6 Phương pháp PCR 34 2.4.7 Phương pháp kiểm tra sản phẩm RT-PCR/PCR điện di thạch agarose 35 2.4.8 Phương pháp tinh sản phẩm PCR 36 2.4.9 Phương pháp giải trình tự 37 v 2.4.10 Phương pháp xử lý số liệu sử dụng phần mềm tin - sinh học 39 Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 41 3.1 Tình hình chăn ni gà số địa phương có mẫu dương tính với virus gumboro địa bàn Hà Nội………………………………….………41 3.2 Tình hình mắc bệnh Gumboro gà nuôi số địa phương địa bàn Hà Nội……………………………………………………………… …42 3.2.1 Tỷ lệ gà mắc bệnh Gumboro theo đàn theo cá thể địa bàn Hà Nội 42 3.2.2 Tỷ lệ gà mắc bệnh Gumboro theo lứa tuổi 43 3.2.3 Tỷ lệ gà mắc bệnh Gumboro theo nhóm tiêm phòng chưa tiêm phòng vaccine…………………………………………… …… 44 3.2.4 Tỷ lệ gà mắc bệnh Gumboro theo hình thức chăn ni 45 3.3 Những triệu chứng lâm sàng gà mắc bệnh Gumboro 45 3.4 Những biến đổi bệnh lý gà mắc bệnh Gumboro 47 3.4.1 Biến đổi bệnh lý đại thể gà mắc bệnh Gumboro 47 3.4.2 Biến đổi bệnh lý vi thể gà mắc bệnh Gumboro .49 3.5 Kết nghiên cứu gen kháng nguyên VP2 xác định nguồn gốc virus gây bệnh Gumboro gà Hà Nội 52 3.5.1 Kết tách ARN tổng số từ mẫu bệnh phẩm .52 3.5.2 Kết giải trình tự gen kháng ngun VP2…………………………….55 3.5.3 Phân tích thành phần gen mối quan hệ nguồn gốc phả hệ chủng Gumboro Việt Nam giới dựa gen kháng nguyên VP2….…61 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 72 TÀI LIỆU THAM KHẢO 744 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN 87 vi DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT avIBDV antigenic variant IBDV IBDV biến thể kháng nguyên/độc lực thay đổi cvIBDV classical virulent IBDV IBDV cường độc cổ điển/độc lực yếu cv/atIBDV classical variant/attenuated variant IBDV IBDV cường độc cổ điển/ Nhược độc/độc lực yếu dIBDV distinct IBDV dNTP deoxynucleotide triphosphate ddNTP dideoxynucleotide triphosphate dsARN double stranded ARN ARN sợi đôi ELISA Enzyme-linked Immunosorbent assay Xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzyme H-E Hematoxilin - Eosin Nhuộm mô học H-E IDB Infection bursal disease Bệnh Gumboro IBDV Infection bursal disease virus Virus gây bệnh Gumboro MCA Monoclonal antibodies Kháng thể đơn dịng MEGA Molecular Evolutionary Genetics Analysis Phân tích di truyền tiến hóa phân tử msf multiple sequence file NTP nucleotide triphosphate PCR Polymerase-Chain-Reaction Phản ứng chuỗi polymerase v/c-recIBDV variant/classical recombinant IBDV IBDV tái tổ hợp nhóm “cổ điển” “biến thể kháng nguyên” vvIBDV very virulent IBDV VLP virus-like particle IBDV độc/cường độc cao Phần tử tương tự virus vii DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Bảng 2.1 : Các bước tách chiết ARN tổng số 33 Bảng 2.2: Thành phần phản ứng chuyển đổi cADN từ ARN tổng số 34 Bảng 2.3: Thành phần phản ứng PCR 34 Bảng 2.4: Chu trình nhiệt phản ứng PCR 35 Bảng 2.5: Các mồi sử dụng phản ứng RT-PCR giải trình tự nghiên cứu virus Gumboro 35 Bảng 2.6: Các bước tinh sản phẩm PCR 36 Bảng 2.7: Thành phần phản ứng chu trình nhiệt giải trình tự 38 Bảng 3.1 Quy mô chăn nuôi gà nông hộ địa bàn huyện Chương Mỹ, Quốc Oai Phúc Thọ - Hà Nội 41 Bảng 3.2 Tỷ lệ đàn gà mắc bệnh Gumboro số địa phương địa bàn Hà Nội 42 Bảng 3.3 Tỷ lệ đàn gà mắc bệnh Gumboro theo lứa tuổi 43 Bảng 3.4 Tỷ lệ đàn gà mắc bệnh Gumboro theo nhóm tiêm phịng khơng tiêm phịng vắc xin 44 Bảng 3.5 Tỷ lệ đàn gà mắc bệnh Gumboro theo hình thức chăn nuôi 46 Bảng 3.6 Biểu triệu chứng lâm sàng gà mắc bệnh Gumboro 47 Bảng 3.7 Biến đổi bệnh lý đại thể gà mắc bệnh Gumboro 48 Bảng 3.8 Biến đổi bệnh lý vi thể gà mắc bệnh Gumboro 49 Bảng 3.9: Kết thu thập xét nghiệm mẫu virus Gumboro 53 Bảng 3.10: Danh sách thông tin chủng Gumboro Việt Nam giới cung cấp vùng “siêu biến đổi” gen kháng nguyên VP2 để phân tích chuỗi phả hệ phân định nhóm di truyền chủng phân lập năm 2021 Hà Nội 61 Bảng 3.11: Danh sách thông tin 27 chủng Gumboro Việt Nam giới cung cấp gen kháng nguyên VP2 để phân tích chuỗi viii phân định nhóm di truyền chủng phân lập năm 2021 Hà Nội 67 Bảng 3.12: Tỷ lệ (%) đồng nucleotide (trên đường chéo) tương đồng amino acid (dưới đường chéo) gen kháng nguyên VP2 chủng Gumboro Việt Nam giới 68 Bảng 3.13: Vị trí amino acid epitope kháng nguyên vùng “siêu biến đổi” VP2 chủng thuộc phân nhóm di truyền khác 70 ix DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Bệnh tích túi Fabricius hệ Hình 1.2: Ảnh tế bào đại thực bào bị virus Gumboro công 10 Hình 1.3: Hệ gen virus Gumboro bao gồm phân đoạn A B nhìn kính vi điện tử 13 Hình 1.4: Sơ đồ hệ gen số vùng quan trọng IBDV serotype I II 14 Hình 1.5: Cấu trúc hạt IBDV kính hiển vi điện tử 15 Hình 1.6: Virus Gumboro thường tập hợp thành cụm nằm tế bào lympho B bị nhiễm 16 Hình 2.1: Sơ đồ nghiên cứu tổng quát để thu nhận chuỗi gen 32 Hình 3.1: Niêm mạc túi Fabricius thối hố, long tróc viêm 50 Hình 3.2: Vùng tuỷ nang diễn trình hoại tử, xâm nhập bạch cầu 50 Hình 3.3: Cầu thận viêm tăng sinh 51 Hình 3.4: Cầu thận giãn to, ống thận thoái hoá 51 Hình 3.5: Các nang Lympho tổ chức lách teo, tổ chức lưới tăng sinh 51 Hình 3.6: Trong mơ Lympho thấy nhiều Bạch cầu đa nhân trung tính, đại thực bào, tương bào 51 Hình 3.7: Tổ chức gan bị thoái hoá, xâm nhập nhiều tế bào viêm 51 Hình 3.8: Tế bào gan thối hoá, Trung tâm tiểu thuỳ gan xâm nhập nhiều tế bào viêm 51 Hình 3.8: Tế bào viêm xâm nhập lớp mạc dày 52 Hình 3.9: Tế bào viêm xâm nhập lớp mạc dày 52 Hình 3.10: Dạ dày tuyến tăng sinh 52 Hình 3.11: Niêm mạc tuyến thối hố, long tróc viêm 52 Hình 3.12: Ảnh điện di ARN tổng số thạch agarose 0.8% 54 79 44 Jackwood D J, Sommer-Wagner S E (2007), “Genetic characteristics of infectious bursal disease viruses from four continents”, Virology, 365(2), pp 369 - 375 45 Jackwood D J., Sommer-Wagner S E., Crossley B M., Stoute S T., Woolcock P R., Charlton B R (2011b), “Identification and pathogenicity of a natural reassortant between a very virulent serotype infectious bursal disease virus (IBDV) and a serotype IBDV” Virology, 420(2), pp 98 - 105 46 Jackwood D J., Schat K A., Michel L O., de Wit S (2018), “A proposed nomenclature for infectious bursal disease virus isolates”, Avian Pathology, 47(6), pp 576 - 584 47 Jackwood D J., Sreedevi B., LeFever L J., Sommer-Wagner S E (2008), “Studies on naturally occurring infectious bursal disease viruses suggest that a single amino acid substitution at position 253 in VP2 increases pathogenicity”, Virology 377(1), pp 110 - 116 48 Jeon W J , Lee E K., Joh S J., Kwon J H., Yang C B., Yoon Y S., Choi K S (2008), “Very virulent infectious bursal disease virus isolated from wild birds in Korea: Epidemiological implications”, Virus Research, 137(1), pp 153 - 156 49 Jeurissen S H., Janse E M., Lehrbach P R., Haddad E E., Avakian A., Whitfill C E (1998), “The working mechanism of an immune complex vaccine that protects chickens against infectious bursal disease”, Immunology, 95, pp 494 - 500 50 Kasanga C J., Yamaguchi T., Wambura P N., Maeda-Machang'u A D., Ohya K., Fukushi H (2007), “Molecular characterization of infectious bursal disease virus (IBDV): diversity of very virulent IBDV in Tanzania”, Archives of Virology, 152(4), pp 783 - 790 51 Kasanga C J., Yamaguchi T., Wambura P N., Munang'andu H M., Ohya K., Fukushi H (2008), “Detection of infectious bursal disease virus 80 (IBDV) genome in free-living pigeon and guinea fowl in Africa suggests involvement of wild birds in the epidemiology of IBDV”, Virus Genes, 36(3), pp 521 - 5299 52 Kibenge F S B., Mckenna P K., Dybing J K (1991), “Genomic cloning and analysis of the large RNA segment (segment A) of a naturally avirulent serotype infectious bursal disease virus”, Virology, 184, pp 437 - 440 53 Kibenge F S B., Nagarajan M M, Qian B (1996), “Determination of the 5' and 3' terminal noncoding sequences of the bisegmented genome of the avibirnavirus infectious bursal disease virus”, Archives of Virology, 141, pp 1133 - 1141 54 Kibenge F S., Qian B., Nagy E., Cleghorn J.R., Wadowska D (1999), “Formation of virus-like particles when the polyprotein gene (segment A) of infectious bursal disease virus is expressed in insect cells”, Canadian Journal of Veterinary Research, 63, pp 49 - 55 55 Kim, I J., You S K., Kim H., Yeh H Y., Sharma J M (2000), “Characteristics of bursal T lymphocytes induced by infectious bursal disease virus”, Journal of Virology., 74, pp 8884 - 8892 56 Kim S J., Sung H W., Han J H., Jackwood D., Kwon H M (2004), “Protection against very virulent infectious bursal disease virus in chickens immunized with DNA vaccines”, Veterinary Microbiology, 101(1), pp 39 - 51 57 Kong L L., Omar A R., Hair-Bejo M., Aini I., Seow H F (2004), “Sequence analysis of both genome segments of two very virulent infectious bursal disease virus field isolates with distinct pathogenicity”, Archives of Virology, 149(2), pp 425 - 434 58 Kulkarui D D., Deshpande B B., Gujar M B., Kulkarui M N (1982), “Histopathologycal boservations in bursa of fabricius of chick infected with infectius bursal disease”, Indian Journal of Veterinary Pathology, 6, pp 13 - 15 81 59 Le X T K., Doan H T T., Do R T., Le T H (2019), “Molecular characterization of field isolates of infectious bursal disease virus from three decades, 1987 - 2018, reveals a distinct genotypic subgroup in VietNam”, Archives of Virology, 164(8), pp 2137 - 2145 60 Lange H., Müller H., Käufer I., Becht H (1987), “Pathogenic and structural properties of wild type infectious bursal disease virus (IBDV) and virus grown in vitro”, Archives of Virology, 92, pp 187 - 196 61 Letzel T., Coulibaly F., Rey F A., Delmas B., Jagt E., Van Loon A A., Mundt E (2007), Molecular and structural bases for the antigenicity of VP2 of infectious bursal disease virus, Journal of Virology, 81(23), pp 12827 - 12835 62 Li K., Courtillon C., Guionie O., Allée C., Amelot M., Qi X., Gao Y., Wang X., Eterradossi N (2015), “Genetic, antigenic and pathogenic characterization of four infectious bursal disease virus isolates from China suggests continued evolution of very virulent viruses”, Infect Genet Evol 30, pp 120 - 127 63 Liu Y., Wei Y., Wu X., Yu L (2005), “Preparation of ChIL-2 and IBDV VP2 fusion protein by baculovirus expression system”, Cell Mol Immunol., 2(3), pp 231 - 235 64 Leong J C., Brown D., Dobos P., Kibenge F., Ludert J E., Müller H., Mundt E., Nicholson B (2000), Birnaviridae In: M H V Regenmortel C M., Fauquet D H L., Bishop E B., Carstens M K., Estes S.,M., Lemon J., Maniloff M A., Mayo D J., McGeoch C R., Pringle R B., Wickner (Eds.), “Virus Taxonomy Classification and Nomenclature of Viruses”, Academic Press., pp 481-490, ISBN 0-12-370200-3 65 Lupini C., Giovanardi D., Pesente P., Bonci M., Felice V., Rossi G., Morandini E., Cecchinato M., Catelli E (2016), “A molecular epidemiology study based on VP2 gene sequences reveals that a new genotype of infectious bursal disease virus is dominantly prevalent in Italy”, Avian Pathology, 45(4), pp 458 - 464 82 66 Mahmood M S., Hussain I., Siddique M., Akhtar M., Ali S (2007), “DNA vaccination with VP2 gene of very virulent infectious bursal disease virus (vvIBDV) delivered by transgenic E coli DH5alpha given orally confers protective immune responses in chickens”, Vaccine, 25(44), pp 7629 - 7635 67 McFerran J B., McNulty M S., McKillop E R., Connor T J., McCracken R M., Collins D S., Allan G M (1980), “Isolation and serological studies with infectious bursal disease viruses from fowl, turkeys and ducks: demonstration of a second serotype”, Avian Pathology, 9(3), pp 395 - 404 68 Michel L O., Jackwood D J (2017), “Classification of infectious bursal disease virus into genogroups”, Archives of Virology, 162(12), pp 3661 - 3670 69 Moody A., Sellers S., Bumstead N (2000), “Measuring infectious bursal disease virus RNA in blood by multiplex real-time quantitative RT-PCR”, Journal of Virology Methods, 85(1-2), pp 55 - 64 70 Morgan M N., Macreadie I G., Harley V R., Hudson P J., Azad A A (1998), “Sequence of a small double stranded RNA genomic segment of infectious bursal disease virus and its deduced 90-kDa product”, Journal of Virology, 163, pp 240 - 242 71 Müller H., Scholtissek C., Becht H (1979), “The genome of infectiousbursal disease virus consists of two segments of double-stranded RNA”, Journal of Virology, 31, pp 584 - 589 72 Müller H., Lange H (1985), „Interfering of avian infectious bursitis virus“, Berichtdes 16 Kongresses der Deutsche Veterinar Medizinischen gesellschaft, 17-20, pp 127 - 130 73 Müller H., Islam M R., Raue R (2003), Research on infectious bursal disease-the past, the present and the future, Veterinary Microbiology, 97(1-2), pp 153 - 165 83 74 Nicholas K B., Nicholas H B (1999), Genedoc: a tool for editing and annotating multiple sequence alignments Distributed by the author 75 Perozo F., Villegas P., Estevez C., Alvarado I R., Purvis L B., Williams S (2008), “Protection against infectious bursal disease virulent challenge conferred by a recombinant avian adeno-associated virus vaccine”, Avian Diseases, 52(2), pp 315 - 319 76 Petkov D., Linnemann E., Kapczynski D R., Sellers H S (2007), “Fulllength sequence analysis of four IBDV strains with different pathogenicities”, Virus Genes 34(3), pp 315 - 326 77 Phenix K V., Wark K., Luke C J., Skinner M A., Smyth J A., Mawhinney K A., Todd D (2001), “Recombinant Semliki Forest virus vector exhibits potential for avian virus vaccine development”, Vaccine, 19, pp 3116 - 3123 78 Pitcovski J., Gutter B., Gallili G., Goldway M., Perelman B., Gross G., Krispel S., Barbakov M., Michael A (2003), “Development and large-scale use of recombinant VP2 vaccine for the prevention of infectious bursal disease of chickens”, Vaccine, 21(32), pp 4736 - 4743 79 Rautenschlein S., Yeh H Y., Njenga M K., Sharma J.M (2002), “Role of intrabursal T cells in infectious bursal disease virus (IBDV) infection: T cells promote viral clearance but delay follicular recovery”, Archives of Virology, 147, pp 285 - 304 80 Rong J., Cheng T., Liu X., Jiang T., Gu H., Zou G (2005), “Development of recombinant VP2 vaccine for the prevention of infectious bursal disease of chickens”, Vaccine, 23(40), pp 4844 - 4851 81 Samy A., Courtillon C., Briand F X., Khalifa M., Selim A., Arafa A E S., Hegazy A., Eterradossi N., Soubies S M (2019), “Continuous circulation of an antigenically modified very virulent infectious bursal disease virus for fifteen years in Egypt”, Infect Genet Evol 78, pp 104099 84 82 Sharma J M., Kim I J., Rautenschlein S., Yeh H Y (2000), Infectious bursal disease virus of chickens: pathogenesis and immunosuppression, Dev Comp Immunol., 24(2-3), pp 223 - 235 Review 83 Shaw I., Davison T F (2000), “Protection from IBDV-induced bursal damage by a recombinant fowlpox vaccine, fpIBD1, is dependent on the titre of challenge virus and chicken genotype”, Vaccine, 18(28), pp 3230 - 3241 84 Simoes E A., Sarnow P (1993), “An RNA hairpin at the extreme 5' end of the poliovirus RNA genome modulates viral translation in human cells”, Journal of General Virology, 74, pp 661 - 668 85 Skeeles J K., Slavik M E., Beasley Y N., Brown H., Meinecke C F., Maruca S., Weich (1980), “An age-related coagulation disorder associated with experimental infection with infectious bursal disease virus”, American Journal of Veterinary Research., 41(9), pp 458 - 461 86 Stockle M Y., Shaw M W., Chopin P W (1987), “Segment specific and common nucleotide sequences in the noncoding region of influenza B virus genome RNA”, Proc Natl Acad Sci USA, 84, pp 2703 - 2707 87 Stoute S T., Jackwood D J., Sommer-Wagner S E., Cooper G L., Anderson M L., Woolcock P R., Bickford A A., Sentíes-Cué C G., Charlton B R (2009), “The diagnosis of very virulent infectious bursal disease in California pullets”, Avian Diseases, 53(2), pp 321 - 316 88 Tamura, K., Stecher, G., Peterson, D., Filipski, A., Kumar, S., (2013) “MEGA6: Molecular evolutionary genetics analysis version 6.0” Molecular Biology and Evolution, 30(12): pp 2725 - 2729 89 Tarpey I., Van Loon A A., De Haas N., Davis P J., Orbell S., Cavanagh D., Britton P., Casais R., Sondermeijer P., Sundick R (2007), “A recombinant turkey herpesvirus expressing chicken interleukin-2 increases the protection provided by in ovo vaccination with infectious bursal disease and infectious bronchitis virus”, Vaccine, 25(51), pp 8529 - 8535 85 90 Terasaki K., Hirayama H., Kasanga C J., Maw M T., Ohya K., Yamaguchi T., Fukushi H (2008), “Chicken B lymphoma DT40 cells as a useful tool for in vitro analysis of pathogenic infectious bursal disease virus” Journal of Veterinary Medical Science, 70(4), pp 407 - 410 91 To H., Yamaguchi T., Nguyen N T., Nguyen O T., Nguyen S V., Agus S., Kim H J., Fukushi H., Hirai K (1999), “Sequence comparison of the VP2 variable region of infectious bursal disease virus isolates from Vietnam”, Journal of Veterinary Medical Science, 61(4), pp 429 - 432 92 Tomás G., Marandino A., Techera C., Olivera V., Perbolianachis P., Fuques E., Grecco S., Hernández M., Hernández D., Calleros L., Craig M I., Panzera Y., Vagnozzi A., Pérez R (2019b), “Origin and global spreading of an ancestral lineage of the infectious bursal disease virus”, Transbound Emerg Dis 2019 Dec 13 doi: 10.1111/tbed.13453 93 Tsukamoto K., Saito S., Saeki S., Sato T., Tanimura N., Isobe T., Mase M., Imada T., Yuasa N., Yamaguchi S (2002), “Complete, long-lasting protection against lethal infectious bursal disease virus challenge by a single vaccination with an avian herpesvirus vector expressing VP2 antigens”, Journal of Virology, 76, pp 5637 - 5645 94 Van den Berg T P., Morales D., Enterradossi N., Rivallan G., Toquin D., Raue R et al (2004), “Assessment of genetic antigenic and pathotypic criteria for the characterization of IBDV strains”, Avian Pathology, 1, pp 470 - 476 95 Wang Y., Sun H., Shen P., Zhang X., Xia X., Xia B (2009), “Effective inhibition of replication of infectious bursal disease virus by miRNAs delivered by vectors and targeting the VP2 gene”, Journal of Virological Methods, 90(6), pp 1417 - 1422 96 Whitfill C E., Haddad E E., Ricks C A., Skeeles J K., Newberry L A., Beasley J N., Andrews P D., Thoma J A., Wakenell P S (1995), “Determination of optimum formulation of a novel infectious bursal 86 disease virus (IBDV) vaccine constructed by mixing bursal disease antibody with IBDV”, Avian Diseases, 39, pp 687 - 699 97 Wu C C., Rubinelli P., Lin T L (2007), “Molecular detection and differentiation of infectious bursal disease virus”, Avian Diseases, 51(2), pp 515 - 526 Review 98 Yehuda H., Goldway M., Gutter B., Michael A., Godfried Y., Levi B.Z., Pitcovski J (2000), “Transfer of antibodies elicited by baculovirus derived VP2 of very virulent infectious bursal disease virus strains to progeny of commercial breeder chickens”, Avian Pathology, 29, pp 13 - 19 99 Yuwen Y., Gao Y., Gao H., Qi X., Li T., Liu W., Wang X (2008), “Sequence analysis of the VP2 hypervariable region of eight very virulent infectious bursal disease virus isolates from the northeast of China”, Avian Diseases, 52(2), pp 284 - 290 100 Zhang G., Guo J., Wang X (2009), Immunochromatographic lateral flow strip tests, Methods Mol Biol., 504, pp 169 - 183 101 Zorman-Rojs O., Barlic-Maganja D., Mitevski D., Lübke W., Mundt E (2003), Very virulent infectious bursal disease virus in southeastern Europe, Avian Diseases, 47(1), pp 186 - 192 III Tài liệu Internet 102 vir.sgmjournals.org/ /vol86/issue8/cover.shtml 103 210.36.18.48/gxujingpin/dwwswx/ev/16.htm 104 www.ncbi.nlm.nih.gov 105 www.vemedim.vn/benhvadieutri) 106 www.medvet.umontreal.ca/ /OrigiInfect/ 107 www.anova.com.vn/contents/article 108 ss.niah.affrc.go.jp/disease/EM/em_en/virus0.html 87 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN Đinh Thị Nhường, Đỗ Thị Roan, Đặng Thị Mai Lan, Đoàn Thị Thanh Hương, Lê Thị Kim Xuyến (2022), “Đặc điểm Gen VP2, phả hệ nhóm di truyền virus Gumboro chủng năm 2021 gây bệnh gà Hà Nội”, Kỷ yếu Hội nghị Cơng nghệ sinh học tồn quốc 2022 Tây Nguyên 88 PHỤ LỤC MỘT SỐ HÌNH ẢNH CỦA ĐỀ TÀI Biểu triệu chứng gà mắc bệnh Gumboro Ảnh Đàn gà ủ rũ, xù lông Ảnh Gà xã cánh, đầu chúc xuống Ảnh Gà ủ rũ, đầu chúc xuống Ảnh Phân gà loãng vàng Ảnh Phân gà màu vàng xanh 89 Bệnh tích đại thể gà mắc bệnh Gumboro Ảnh Túi Fabricius sưng to, Ảnh Túi Fabricius sưng to, xuất huyết xuất huyết Ảnh Túi Fabricius sưng to, xuất huyết Ảnh Phần tiếp giáp dày tuyến xuất huyết Ảnh 10 Thận sưng Ảnh 11 Thận sưng 90 Ảnh 12 Lách phì đại Ảnh 13 Ruột non sưng to, xuất huyết Ảnh 14 Ruột non sưng to, xuất huyết Ảnh 15 Ruột non sưng to, xuất huyết Ảnh 16 Cơ đùi xuất huyết Ảnh 17 Cơ đùi xuất huyết 91 Q trình phân tích mẫu mang gen VP2 Ảnh 18 Máy PCR Gene Atlas hãng ASTEC Ảnh 20 Máy pcr MJ Research máy PCR Gene Atlas hãng ASTEC Ảnh 22 Máy soi gel Dolphin-DOC Ảnh 19 Máy ly tâm Beckman Couter Ảnh 21 Bể điện di Ảnh 23 Điện di sản phẩm 92 Ảnh 24 Khay đổ gel điện di Ảnh 25 Tra mẫu vào giếng điện di Ảnh 26 Điện di kiểm tra sản phẩm PCR Ảnh 27 Cài đặt chu trình nhiệt máy PCR Ảnh 28, 29 Tách RNA tổng số, ngâm mẫu bể ổn nhiệt 93 Ảnh 30, 31 Thực phản ứng PCR Ảnh 31, 32 Kiểm tra sản phẩm điện di với máy soi gel Ảnh 33 Đọc kết sản phẩm điện di