(Luận văn) nghiên cứu một số đặc điểm dịch tễ và biến đổi bệnh lý của gà mắc bệnh viêm phế quản truyền nhiễm tại vùng phụ cận hà nội

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM VÕ VĂN HIỂU lu an va NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ VÀ BIẾN ĐỔI n BỆNH LÝ CỦA GÀ MẮC BỆNH VIÊM PHẾ QUẢN tn to p ie gh TRUYỀN NHIỄM TẠI VÙNG PHỤ CẬN HÀ NỘI Thú y oa nl w Chuyên ngành: Mã số: 60 64 01 01 d oi lm ul nf va an lu Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Bá Hiên z at nh z m co l gm @ an Lu NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP - 2016 n va ac th si LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu thu thập kết nghiên cứu luận văn hoàn toàn trung thực chưa sử dụng để bảo vệ học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ c\ho việc thực luận văn cảm ơn thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng năm 2016 Tác giả luận văn lu an n va p ie gh tn to Võ Văn Hiểu d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th i si LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn thạc sĩ tơi nhận hướng dẫn tận tình quan tâm PGS.TS Nguyễn Bá Hiên Đồng thời nhận đóng góp vơ q báu thầy, cô giáo Bộ môn Vi Sinh Vật – Truyền nhiễm, Bộ môn Bệnh lý thú y, Phịng thí nghiệm trọng điểm cơng nghệ sinh học Thú y, Khoa Thú Y, Ban Đào tạo Đại học, Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam Tôi xin bày tỏ biết ơn chân thành sâu sắc đến giúp đỡ thầy, cô giáo Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể lãnh đạo công ty DABACO công ty lu RTD giúp đỡ tơi suốt q trình thực luận văn an va Tôi xin chân thành cảm ơn gia đình, đồng nghiệp bạn bè ln bên động n viên, tạo điều kiện thuận lợi để giúp đỡ tơi hồn thành q trình học tập tn to nghiên cứu gh Tôi xin chân thành cảm ơn./ p ie Hà Nội, ngày tháng năm 2016 d oa nl w Tác giả luận văn lu oi lm ul nf va an Võ Văn Hiểu z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th ii si MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục viết tắt v Danh mục bảng vi Danh mục hình vii Trích yếu luận văn viii lu an Thesis abstract ix va Phần Mở đầu n 1.1 Đặt vấn đề 1.3 Ý nghĩa khoa học gh tn to 1.2 Mục tiêu đề tài p ie 1.4 Ý nghĩa thực tiễn Phần Tổng quan tài liệu nl w 2.1 bệnh viêm phế quản truyền nhiễm gà oa 2.1.1 Đặc điểm địa dư bệnh d 2.1.2 Đặc điểm dịch tễ học lu an 2.1.3 Phương pháp phòng điều trị bệnh nf va 2.2 Virus gây bệnh viêm phế quản truyền nhiễm gà (IBV) .11 oi lm ul 2.2.1 Đặc điểm bệnh 11 2.3 Một số phương pháp chẩn đoán gà nhiễm IBV 21 2.3.1 Phương pháp chẩn đoán dựa vào đặc điểm lâm sàng 21 z at nh 2.3.2 Chẩn đoán virus học 21 2.3.3 Phản ứng huyết học 21 z @ 2.3.4 Kỹ thuật sinh học phân tử ứng dụng để chẩn đoán IBV 22 gm Phần Nội dung, nguyên liệu phương pháp nghiên cứu 27 l 3.1 Nội dung nghiên cứu 27 m co 3.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 27 3.3 Nguyên liệu 27 an Lu 3.4 Phương pháp nghiên cứu 28 n va ac th iii si 3.4.1 Phương pháp lấy mẫu 28 3.4.2 Phương pháp mổ khám gà chết 28 3.4.3 Phương pháp tiến hành phản ứng RT-PCR 30 3.4.4 Phương pháp làm tiêu vi thể 32 3.4.5 Phương pháp nghiên cứu dịch tễ học 33 3.4.6 Phương pháp xác định tỷ lệ mắc Viêm phế quản truyền nhiễm thông qua triệu chứng lâm sàng, dịch tễ mổ khám bệnh tích 33 3.4.7 Phương pháp xử lý số liệu 34 Phần Kết thảo luận 35 lu an 4.1 Một số đặc điểm dịch tễ học gà mắc bệnh IB vùng phụ cận Hà Nội 35 va 4.1.1 Tình hình gà mắc bệnh IB theo phương thức chăn nuôi 35 n 4.1.2 Tình hình gà mắc bệnh IB theo lứa tuổi địa bàn nghiên cứu 36 4.2 Một số biến đổi bệnh lý gà mắc IB 41 gh tn to 4.1.3 Tình hình gà mắc bệnh IB theo mùa địa bàn nghiên cứu .39 p ie 4.2.1 Một số triệu chứng lâm sàng điển hình gà mắc bệnh IB .41 4.2.2 Một số biến đổi bệnh lý đại thể gà mặc bệnh IB 43 nl w 4.2.3 Một số biến đổi bệnh lý vi thể gà mặc bệnh IB 47 d oa Phần Kết luận đề nghị 52 lu 5.1 Kết luận 52 va an 5.2 Đề nghị 52 Tài liệu tham khảo .54 oi lm ul nf z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th iv si DANH MỤC VIẾT TẮT lu an n va p ie gh tn to ARN Acid Ribo Nucleic IB Infectious bronchitis IBV Infectious bronchitis virus RT-PCR Reverse transcription polymerase chain reaction HI Hemagglutinin inhibition CPE Cytopathic effect ELISA Enzyme-Linked Immunosorbent Assay VNT Viral neutralization test SPF Specific pathogen free d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th v si DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Sự lưu hành chủng huyết khác giới IBV .12 Bảng 3.2 Thành phần phản ứng PCR 31 Bảng 3.3 Nhiệt độ thời gian giai đoạn chu kỳ nhiệt phản ứng RT-PCR 31 Bảng 4.1 Tỷ lệ mắc bệnh IB gà chăn nuôi theo phương thức công nghiệp số trại công ty DABACO Bắc Ninh 35 lu Bảng 4.2 Tỷ lệ mắc bệnh IB gà chăn nuôi theo phương thức thả đồi xã an huyện Yên Thế, tỉnh Bắc Giang 36 n va Bảng 4.3 Tỷ lệ gà mắc bệnh IB theo lứa tuổi nuôi số trại công nghiệp công Bảng 4.4 Tỷ lệ gà mắc bệnh IB theo lứa tuổi nuôi thả đồi Yên Thế, Bắc Giang 37 Bảng 4.5 Tỷ lệ gà mắc bệnh IB theo mùa với phương thức chăn nuôi công nghiệp ie gh tn to ty DABACO Bắc Ninh 37 p công ty DABACO .39 Bảng 4.6 Tỷ lệ gà mắc bệnh IB theo mùa với phương thức chăn nuôi thả đồi Yên w oa nl Thế, Bắc Giang 39 Bảng 4.7 Một số triệu chứng lâm sàng đặc trưng gà mắc bệnh IB 41 d an lu Bảng 4.8 Một số bệnh lý đại thể đặc trưng gà mắc bệnh IB 43 Bảng 4.9 Ứng dụng kỹ thuật RT-PCR chấn đoán gà mắc bệnh IB 49 oi lm ul nf va z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th vi si DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Cấu trúc gen IBV 14 Hình 2.2 Mơ hình cấu trúc protein IBV 15 Hình 2.3 Sự nhân lên IBV tế bào vật chủ 19 Hình 4.1 Tỉ lệ gà nghi mắc bệnh IB theo lứa tuổi 38 Hình 4.2 Biểu đồ thể tỷ lệ gà nghi mắc bệnh IB theo mùa 40 Hình 4.3 Biểu đồ thể triệu chứng lâm sàng đặc trưng gà mắc bệnh IB 42 lu Hình 4.4 Đầu phù thũng .42 an Hình 4.5 Viêm kết mạc mắt 42 n va Hình 4.6 Gà bị báng bụng, có dáng đứng chim cánh cụt 43 Hình 4.8 Biểu đồ thể số bệnh lý đại thể đặc trưng gà mắc bệnh IB 45 Hình 4.9 Khí quản xuất huyết .46 ie gh tn to Hình 4.7 Gà tiêu chảy phân loãng nhiều nước 43 p Hình 4.10 Xoang mũi chưa nhiều dịch 46 Hình 4.11 Buồng trứng biến dạng .46 w oa nl Hình 4.12 Báng nước xoang bụng .46 Hình 4.13 Thận sưng, chứa Urate .47 d an lu Hình 4.14 Vỏ trứng nhạt màu, hình dạng trứng giống trái xồi 47 Hình 4.15 Phổi xuất huyết, hồng cầu tràn ngập phế nang (10X) 47 va nf Hình 4.16 Thấm nước phù hạ niêm mạc khí quản (10X) 47 oi lm ul Hình 4.17 Xuất huyết kẽ thận (14X) 48 Hình 4.18 Tế bào ống thận thối hóa không bào (40X) 48 z at nh Hình 4.19 Kết xác định IBV xét nghiệm RT-PCR 50 Hình 4.20 Kết phản ứng RT-PCR xác định có mặt IBV mẫu bệnh z phẩm cặp mồi đặc hiệu (P: đối chứng dương IBV; M: thang DNA chuẩn 1kb m co l gm @ (Fermentas)) 51 an Lu n va ac th vii si TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Võ Văn Hiểu Tên Luận văn: ” Nghiên cứu số đặc điểm dịch tễ biến đổi bệnh lý gà mắc bệnh viêm phế quản truyền nhiễm vùng phụ cận Hà Nội” Ngành: Thú Y Mã số: 60 64 01 01 Tên sở đào tạo: Học viện Nơng nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu lu Nghiên cứu đặc điểm dịch tễ học bệnh lý học gà mắc bệnh IB an với việc ứng dụng phản ứng RT-PCR chẩn đoán cung cấp thông tin làm sở va cho việc chẩn đốn nhanh xác bệnh IBV gây thực địa từ đề xuất n biện pháp phịng bệnh có hiệu to tn Phương pháp nghiên cứu gh Đối tượng lấy mẫu gà ISA Brown nuôi hướng trứng nghi mắc IB lứa p ie tuổi chăn nuôi theo hướng tập trung địa bàn tỉnh Bắc Ninh công ty DABACO nuôi thả đồi Yên Thế, Bắc Giang Mẫu bệnh phẩm gà nghi mắc IB lấy dựa nl w TCVN 01 - 83: 2011/BNNPTNT Mổ khám gà theo TCVN… oa Trizol (Roche diagnostics GmbH, Mannheim, Đức) dụng để tách chiết d RNA tổng số mẫu bệnh phẩm theo quy trình nhà sản xuất cDNA phiên an lu mã ngược sử dụng Kit RevertAid First Strand cDNA Synthesis (Thermo Scientific) va cDNA tổng hợp bổ sung trực tiếp vào ống phản ứng PCR sử dụng kit nf GoTaq® Green Master Mix (Promega, Mỹ) Kit chứa DNA Taq-polymerase oi lm ul thành phần cần thiết cho trình khuếch đại DNA Mồi (primer) sử dụng nghiên cứu cặp mồi công bố trước (Feng et al, 2012) Sử dụng phương pháp dịch tễ học mô tả, dịch tễ học thống kê, điều tra hồi z at nh cứu:lập biểu đồ thống kê, điều tra theo phương pháp điều tra ngẫu nhiên Số liệu xử lý theo phương pháp thống kê sinh học phần mềm Minitab z 14.0 Phép thử Khi bình phương sử dụng để so sánh sai khác tỷ lệ @ gm phần trăm Giá trị P < 0,05 sử dụng để số liệu sai khác có ý nghĩa l mặt thống kê m co Kết kết luận Kết nghiên cứu cho thấy tỷ lệ mắc tỷ lệ tử vong gà đẻ bệnh IB theo an Lu phương thức chăn nuôi công nghiệp cao so với chăn ni thả đồi Trong đó: tỷ lệ gà mắc IB theo phương thức chăn nuôi công nghiệp thả đồi tương ứng 15,46% n va ac th viii si 10,40%; tỷ lệ tử vong bệnh IB 14,72% 9,71% tương ứng với phương thức chăn nuôi công nghiệp chăn nuôi thả đồi Gà đẻ mắc bệnh IB tỷ lệ cao vào tháng 10-12 1-3 năm Hầu hết lứa tuổi gà đẻ mắc bệnh IB gà từ 19-23 tuần tuổi có tỷ lệ mắc tỷ lệ chết cao Tỷ lệ mẫu dương tính với cặp mồi đặc hiệu IBV xác định phản ứng RT-PCR trung bình 41,30% (60/145 mẫu) lu Một số đặc điểm triệu chứng lâm sàng gà mắc bệnh IB gồm gồm: sốt, ủ rũ ăn kém; hô hấp khó khăn; sưng đầu; viêm kết mạc; báng nước xoang bụng tiêu chảy phân nhiều nước an n va gh tn to Một số đặc điểm bệnh lý đại thể vi thể quan sát gà mắc bệnh IB gồm phổ biến thận sưng, tiếp đến bệnh tích ghi nhận đường hơ hấp xuất huyết khí quản, phổi tụ huyết xuất huyết viêm túi khí viêm xoang mũi Phổi xuất huyết, hồng cầu tràn ngập phế nang, thấm nước phù hạ niêm mạc khí quản, xuất huyết kẽ thận tế bào ống thận thối hóa khơng bào bệnh tích vi p ie thể phổ biến quan sát gà mắc bệnh IB d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th ix si lu an Hình 4.6 Gà bị báng bụng, có dáng Hình 4.7 Gà tiêu chảy phân lỗng đứng chim cánh cụt nhiều nước n va tn to 4.2.2 Một số biến đổi bệnh lý đại thể gà mặc bệnh IB Để xác định số đặc điểm bệnh lý gà mắc bệnh IB, tiếp tục gh p ie chọn 65 gà tổng số 2824 gà nghi mắc bệnh để mổ khám quan sát bệnh tích điển hình phương pháp mổ khám toàn diện triệt để Kết nl w ghi chép tổng hợp bảng 4.8 hình 4.8 d oa Bảng 4.8 Một số bệnh lý đại thể đặc trưng gà mắc bệnh IB Số gà mổ Số gà có bệnh Tỷ lệ khám (con) tích (con) (%) 65 22 33,85 65 36 55,38 65 52 80,00 65 40 61,54 65 40 61,54 65 12 18,46 11 16,92 6,15 lu Bệnh tích Viêm xoang mũi Xuất huyết khí quản Phổi tụ huyết, xuất huyết Viêm túi khí Buồng trứng viêm, teo Ống dẫn trứng teo 65 Báng nước bụng 65 Thận sưng 65 61 93,85 10 Thận sưng tích urat 65 1,54 11 Nhiễm khuẩn kế phát 65 15 23,08 oi lm ul z at nh z gm @ m co Viêm kết mạc nf l va an STT an Lu n va ac th 43 si Bệnh tích tập trung chủ yếu viêm quan đường hô hấp, thận số quan khác Các bệnh tích phổ biến quan sát gồm có thận sưng (93,85%), tiếp đến bệnh tích ghi nhận đường hơ hấp xuất huyết khí quản, phổi tụ huyết xuất huyết viêm túi khí viêm xoang mũi 80%, 61,54% 61,54% Bệnh tích ghi nhận quan khác xuất với tần suất thấp viêm kết mạc, nhiễm khuẩn kế phát Các bệnh tích xuất với tần suất thấp bệnh tích liên quan tới quan sinh dục (viêm teo buồng trứng teo ống dẫn trứng) thận tích urat Ngồi ra, trứng từ gà nghi mắc bệnh IB có biểu lu an đặc trưng vỏ trứng nhạt màu, hình dạng trứng giống trái xoài va Những nghiên cứu trước đặc điểm bệnh tích gà mắc bệnh IB n mơ tả bệnh tích viêm xuất dịch thẩm xuất quan Levine, 1957) Ngồi ra, bệnh tích khác quan sát liên quan tới ie gh tn to hô hấp gồm khí quản, phế quản phổi (Broadffoot et al., 1956; Sevoian and p quan sinh dục dịch nỗn hồng tìm thấy xoang bụng gà d oa nl w giai đoạn đẻ trứng oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 44 si an n va p ie gh tn to d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z 45 Hình 4.8 Biểu đồ thể số bệnh lý đại thể đặc trưng gà mắc bệnh IB lu m co l gm @ an Lu n va ac th si Hậu là, trứng bị dị hình ảnh hưởng tới suất chăn nuôi gà đẻ Gà mắc IBV cịn có biểu thận căng phồng nhạt màu Bên thận, ống nhỏ niệu quản căng phồng chứa đầy urat - dạng tinh thể axit uric (Cumming, 1963; Crinion, 1971; Julian and Willis, 1969) Có thể giải thích khả gây bệnh tích thơng qua chế sinh bệnh, vị trí xâm nhập virus biểu mô đường hô hấp, sinh dục thận Kết nghiên cứu cho thấy, gà mắc bệnh IB có biểu nặng quan niêm mạc đường hơ hấp, sinh dục thận Có thể bước đầu kết luận rằng, chủng virus IB gây bệnh gà đẻ virus cường độc tương tự với số chủng gây bệnh IB lu gà đẻ lưu hành số nước giới an n va p ie gh tn to d oa nl w an lu Hình 4.9 Khí quản xuất huyết oi lm ul nf va Hình 4.10 Xoang mũi chưa nhiều dịch z at nh z m co l gm @ Hình 4.11 Buồng trứng biến dạng Hình 4.12 Báng nước xoang bụng an Lu n va ac th 46 si lu an Hình 4.13 Thận sưng, chứa Urate n va Hình 4.14 Vỏ trứng nhạt màu, hình dạng trứng giống trái xồi Cùng với việc chẩn đốn bệnh dựa vào đặc điểm bệnh tích đại thể, khí quan gà nghi mắc bệnh IB thu thập tiến hành làm tiêu để xác định số đặc điểm bệnh tích vi thể Từ mẫu bệnh phẩm có biến đổi đại thể lấy mẫu ngâm formol 10% để làm tiêu vi thể Xác định bệnh tích vi thể chủ yếu bệnh Phương pháp làm tiêu vi thể theo quy trình tẩm đúc parafin, nhuộm Haematoxilin – Eosin (HE) Các biểu vi thể quan sát tập trung đường hô hấp gồm: thấm nước phù hạ nêm mạc khí quản; phổi xuất huyết , hồng cầu tràn ngập phế nang Bệnh tích thận mức độ nặng rõ nét gồm xuất huyết kẽ thận tế bào ống thận thối hóa khơng bào p ie gh tn to 4.2.3 Một số biến đổi bệnh lý vi thể gà mặc bệnh IB d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu Hình 4.15 Phổi xuất huyết, hồng cầu Hình 4.16 Thấm nước phù hạ niêm tràn ngập phế nang (10X) mạc khí quản (10X) n va ac th 47 si lu an n va Hình 4.17 Xuất huyết kẽ thận (14X) Hình 4.18 Tế bào ống thận thối hóa khơng bào (40X) quan sinh dục nơi xâm nhập IBV Tại đó, virus ký sinh nhân ie gh tn to Các nghiên cứu trước khẳng định biểu mô đường hô hấp, thận p lên nhanh chóng thối hóa làm chết tế bào Virus có khả phá hủy thành w mạch làm tăng tiết dịch thẩm xuất thâm nhiễm tế bào lympho (Cavanagh, nl 2003) Một số bệnh tích phổ biến gà mắc IBV quan sát thường bao gồm d oa phù lớp màng nhầy khí quản, tế bào biểu mơ co trịn Sau khoảng tuần nhiễm lu bệnh, tế bào lympho tế bào mầm có biểu tăng sinh, xoang khí phù va an tích nước, viêm kẽ thận Virus có khả gây thối hóa hạt hình thành nf hốc nhỏ bong tróc (Riddell, 1987; Siller, 1981) oi lm ul Một số chủng IBV có khả gây bệnh tích thận gây viêm thận IBV thể viêm thận gà báo cáo nhiều nước giới Úc, Italia, z at nh Mỹ, Bỉ, Pháp số nước khác Ở Châu Âu, chủng virus gây viêm thận gà trở nên phổ biến hẳn Các chủng virus gây tỷ lệ chết biến z động từ 5-80% thí nghiệm gây nhiễm gà SPF (specific gm @ pathogenic free) (Meulemous et al., 1987; Wang et al., 1996) Để giải thích chế sinh bệnh này, số nghiên cứu cho rằng, virus có khả thâm nhập l gây ảnh hưởng tới tế bào biểu mô thận (epithelial cells) gây cản trở trình m co hấp thu thải trừ nước chất điện giải, hậu gây suy thận gây an Lu chết gà (Chen and Itakura, 1996) Đối với bệnh tích đường hô hấp, nghiên cứu trước gây nhiễm IBV gà thể rằng, có n va ac th 48 si tượng bong tróc phù biểu mơ đường hơ hấp gây kích ứng tế bào hình cầu (Cavanagh and Naqi, 2003) Các chủng IBV gây bệnh lý thận thường phát gà hướng thịt giai đoạn xuất truồng gây tỷ lệ chết cao, đặc biệt làm giảm khả tăng trọng (Ambali and Jones, 1987; Casais et al., 2003) Nghiên cứu cho thấy biến đổi bệnh lý đại thể vi thể phù hợp với đặc điểm bệnh lý gây chủng IBV gây giới Đặc biệt hơn, chủng IBV Việt Nam có khả gây bệnh tích viêm kẽ thận, tế bào ống thận thối hóa khơng bào gà đẻ, thay thường thấy gà lu an nuôi hướng thịt giai đoạn xuất truồng n va 4.3 ỨNG DỤNG KỸ THUẬT RT-PCR CHẨN ĐOÁN GÀ MẮC IBV gà có bệnh tích điển hình, tiến hành phản ứng RT-PCR Từ làm sở gh tn to Dựa vào triệu chứng lâm sàng đặc trưng mổ khám, lấy mẫu bệnh phẩm từ để xác định gà bệnh chẩn đoán dịch tễ học p ie Trước sử dụng phản ứng RT-PCR để xác định có mặt IBV w mẫu bệnh phẩm, chúng tơi tiến hành tối ưu hóa xác định độ đặc oa nl hiệu cặp mồi sử dụng nghiên cứu (Feng et al., 2012) d Để khẳng định gà nhiễm IBV, tiến hành lấy mẫu bệnh phẩm lu an gà đẻ nghi mắc IB số sở chăn nuôi công nghiệp thuộc công ty va DABACO xã thuộc huyện Yên Thế , Bắc Giang với số lượng mẫu tương ul nf ứng 80 mẫu 65 mẫu Sau đó, tiến hành phản ững RT-PCR với cặp mồi có oi lm sẵn Kết trình bày bảng 4.9 hình 4.18 Bảng 4.9 Ứng dụng kỹ thuật RT-PCR chấn đoán gà mắc bệnh IB z at nh Số mẫu xét Số mẫu dương Tỷ lệ chăn ni nghiệm tính (%) Cơng nghiệp 80 Thả đồi 65 23 Tổng 145 60 z Phương thức @ 44,05 35,38 m co l gm 37 an Lu 41,30 n va ac th 49 si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w lu an Hình 4.19 Kết xác định IBV xét nghiệm RT-PCR nf va Kết kiểm tra giám định phản ứng RT-PCR cho thấy, tỷ lệ mẫu ul dương tính với IBV theo phương thức chăn nuôi công nghiệp (44,05%) cao oi lm phương thức chăn ni thả đồi (35,38%) (bảng 4.9 hình 4.20) z at nh Các phương pháp sử dụng rộng rãi chẩn đoán xác định IBV chủ yếu phân lập qua phôi trứng phản ứng huyết học ELISA, phản ứng miễn dịch huỳnh quang Phản ứng RT-PCR sử dụng z @ để chẩn đốn có mặt IBV mẫu tách chiết từ dịch khí quản gm dịch niệu nang phôi gà Các kỹ thuật kết có mức độ tin cậy cao l áp dụng rộng rãi để chẩn đốn xác định type IBV (Cavanagh, m co 2003; Cavanagh, 2005) Các nghiên cứu trước xác định tỷ lệ mẫu dương tính với IBV kỹ thuật RT-PCR, tỷ lệ gà thịt thương phẩm 36,36% an Lu (Jahantigh et al., 2013) Nghiên cứu rằng, có 4/91 chủng gây bệnh n va thuộc serotype Massachusetts ac th 50 si lu an n va p ie gh tn to nl w d oa Hình 4.20 Kết phản ứng RT-PCR xác định có mặt IBV mẫu bệnh phẩm cặp mồi đặc hiệu (P: đối chứng dương IBV; M: thang an lu DNA chuẩn 1kb (Fermentas)) oi lm ul nf va Ở nghiên cứu khác, tỷ lệ mẫu dương tính từ gà nghi nhiễm với IBV ghi nhận từ năm 2002-2006 Tây Âu 59%, bật serotype Massachusetts Kết chẩn đoán cho thấy mẫu bệnh phẩm nghi mắc bệnh IB z at nh cho kết dương tính với IB, sản phẩm thu có kích thước 403 bps, hồn tồn với kích thước cơng bố (Feng et al., 2012) Kết thể hình 3.5 cho thấy, mẫu dương tính thể sản phẩm PCR thu có kích thước 403 z bps giếng số 1,2, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 13, 14, 15, 17 18 m co l gm @ an Lu n va ac th 51 si PHẦN KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu trình bày trên, rút số kết luận sau: Tỷ lệ mắc tỷ lệ tử vong gà đẻ bệnh IB theo phương thức chăn nuôi công nghiệp cao so với chăn nuôi thả đồi Trong đó: tỷ lệ gà mắc IB theo phương thức chăn nuôi công nghiệp thả đồi tương ứng 15,46% lu 10,40%; tỷ lệ tử vong bệnh IB 14,72% 9,71% tương ứng với phương an thức chăn nuôi công nghiệp chăn nuôi thả đồi va n Gà đẻ mắc bệnh IB tỷ lệ cao vào tháng 10-12 1-3 tỷ lệ mắc tỷ lệ chết cao gh tn to năm Gà đẻ mắc IB hầu hết lứa tuổi gà gà từ 19-23 tuần tuổi có p ie Tỷ lệ mẫu dương tính với cặp mồi đặc hiệu IBV xác định phản ứng RT-PCR trung bình 41,30% (60/145 mẫu) nl w Một số đặc điểm triệu chứng lâm sàng gà mắc bệnh IB gồm gồm: sốt, ủ oa rũ ăn kém; hơ hấp khó khăn; sưng đầu; viêm kết mạc; báng nước xoang bụng d tiêu chảy phân nhiều nước lu va an Một số đặc điểm bệnh lý đại thể vi thể quan sát gà mắc nf bệnh IB gồm phổ biến thận sưng, tiếp đến bệnh tích ghi nhận oi lm ul đường hơ hấp xuất huyết khí quản, phổi tụ huyết xuất huyết viêm túi khí viêm xoang mũi Phổi xuất huyết, hồng cầu tràn ngập phế z at nh nang, thấm nước phù hạ niêm mạc khí quản, xuất huyết kẽ thận tế bào ống thận thối hóa khơng bào bệnh tích vi thể phổ biến quan sát gà mắc bệnh IB z gm @ 5.2 ĐỀ NGHỊ Trong năm gần đây, tình hình chăn ni gà đẻ ngày phát triển l nước nói chung đặc biệt địa bàn nghiên cứu nói riêng Mặc dù sử m co dụng vacxin phòng bệnh, bệnh IB gây IBV thường xuyên xảy gây an Lu hậu nghiêm trọng thể qua tỷ lệ nhiễm tỷ lệ tử vong ảnh hưởng tới khả sinh sản gà mắc bệnh Chính vậy, cơng tác thú y n va ac th 52 si tiêm phòng vacxin ngày phải quan tâm trú trọng đề phòng tránh bệnh virus gây ra, đặc biệt bệnh IB Cần có nghiên cứu chuyên sâu bệnh IB IBV gà đẻ Nghiên cứu chế tạo vacxin phòng bệnh từ chủng virus gây bệnh thực địa cho hiệu phòng bệnh cao loại vacxin nhập ngoại lu an n va p ie gh tn to d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 53 si TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt: Bùi Trần Anh Đào (1999) Kiểm soát cảm nhiễm virus gây bệnh Newcastle, Gumboro viêm phế quản truyền nhiễm gà thịt Hiệu phòng bệnh hiệu kinh tế chương trình vaccin phịng bệnh thành phố Hồ Chí Minh Luận văn thạc sĩ, Đại học nông lâm TPHCM lu Nguyễn Bá Hiên Huỳnh Thị Mỹ Lệ (2013) Bệnh truyền nhiễm động vật an nuôi biện pháp khống chế, NXB Nông nghiệp, tr-379 va n Võ Thị Trà An (2012) Phân lập, định serotype virus viêm phế quản truyền nhiễm Trần Thanh Vân (1996) Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng biến chủng gây ie bệnh viêm phế quản truyền nhiễm tỉ lệ chết sản xuất trứng đàn gà bố mẹ gh tn to từ gà thịt Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Thú y, tập 19, số p giống thịt Hubbard High – Yield Luận văn thạc sĩ, Trường Đại học Nông lâm Tiếng Anh: lu Ambali, A.G., Jones, R.C., (1990) Early pathogenesis in chicks of infection with va an d oa nl w TPHCM an enterotropic strain of infectious bronchitis virus Avian Dis 34, 809-817 nf Beaudette, F R., and Hudson, C D (1936) Cultivation of the virus of infectious oi lm ul bronchitis J Am Vet Med Assoc 90:51-58 Broadfoot, D I., Pomeroy, B.S and Smith, W.M (1956) Effects of infectious z at nh bronchitis in baby chicks Poultry Science 35: 757-762 Callison, S.A., Jackwood, M.W., Hilt, D.A., (2001) Molecular characterization of z @ with United States isolates Avian Dis 45, 492-499 Casais, R., Dove, B., Cavanagh, D., Britton, P., (2003) Recombinant avian m co l gm infectious bronchitis virus isolates foreign to the United States and comparison infectious bronchitis virus expressing a heterologous spike gene demonstrates that an Lu the spike protein is a determinant of cell tropism J Virol 77, 9084-9089 n va ac th 54 si 10 Casler, J.G., Cook, J.R., 1999 Cognitive performance in space and analogous environments Int J Cogn Ergon 3, 351 -372 Cavanagh, D., Naqi, S.A., (2003) Infectious bronchitis Iowa State University 11 Press, Iowa 12 Cavanagh, D Coronavirus avian infectious bronchitis virus Vet Res 38:281297 2007 13 Coria, M.R (1969) Stabilizing Effect of Magnesium Sulfate on Avian Infectious Bronchitis Virus Propagated in Chicken Embryo Kidney Cells Cook, J.K.A (1984) The classification of new serotypes of infectious bronchitis lu 14 an virus isolated from poultry flocks in Britain between 1981 and 1983 Avian va n Pathol., 13, 733–741 chickens following exposure to infectious bronchitis virus at one day old Avian p ie gh tn to Crinion, R A P., Ball, R.A and Hofstad, M S (1971) Abnormalities in laying 15 Cumming, R.B (1963) Infectious avian nephrosis (uraemia) in Australia w 16 Diseases 15: 42-48 Darbyshire, J.H., Cook, J.K.A & Peter, R.W (1978) Growth comparisons of avian d 17 oa nl Australian Veterinary Journal 39: 145-147 an lu infectious bronchitis virus strains in organ cultures of chicken tissues Arch Da Silva Martins, N R., Mockett, A P A., Barrett, A D T., and Cook, J K A ul nf 18 va Virol., 56, 317–325 oi lm (1991) IgM responses in chicken serum to live and inactivated infectious bronchitis virus vaccines Avian Dis 35:470-475 z at nh 19 Gillette, K G (1973) Plaque formation by infectious bronchitis virus in chicken embryo kidney cell cultures Avian Diseases, 7: 370-378 z Guo, X., A J M Rosa, D G Chen, and X Wang Molecular mechanisms of @ 20 gm primary and secondary mucosal immunity using avian infectious bronchitis virus 21 m co l as a model system Vet Immunol Immunopathol 121:332-343 2008 Gonzalez, J.M., Gomez-Puertas, P., Cavanagh, D., Gorbalenya, A.E & Enjuanes, family Coronaviridae Arch Virol 148(11), 2207-35 an Lu L (2003) A comparative sequence analysis to revise the current taxonomy of the n va ac th 55 si 22 Hogue, B & Machamer, C (2008) Coronavirus structural proteins and virus assembly In: S Perlman, et al (Eds.) Nidoviruses Washington, D.C.: ASM Press pp 179-200 Jordan, F T W and Nassar, T.J (1973) The survival of infectious bronchitis (IB) 23 virus in water Avian Pathology, 2: 91-101 24 Jungherr, E L., T W Chomiak, and R E Luginbuhl (1956) Immunologic differences in strains of infectious bronchitis virus In: Proc 60th Ann Meet U.S Livestk Sanit Ass pp 203-209 Jahantigh M, Salari S, and Hedayati M (2013) Detection of infectious bronchitis lu 25 an va virus serotypes by reverse transcription polymerase chain reaction in broiler n chickens Springerplus (1): 36 Julian, R.J and Willis, N.G (1969) The nephrosis-nephritis syndrome in chickens caused by Holte strain of infectious bronchitis virus Canadian Veterinary Journal, p ie gh tn to 26 Lai, M.M., (1987) Molecular biology of coronavirus 1986 Adv Exp Med Biol w 27 10: 18-2 Loomis, L N., Cunningham, C H., Gray, M L and Thorp F (1950) Pathology d 28 oa nl 218, 7-13 lu nf Mo, M., Huang, B., Wei, P., Wei, T., Chen, Q., Wang, X., Li, M & Fan, W oi lm ul 29 va 11:245-251 an of the chicken embryo infected with infectious bronchitis virus Am J Vet Res (2012) Complete genome sequences of two chinese virulent avian coronavirus 30 z at nh infectious bronchitis virus variants J Virol 86(19), 10903-4 Otsuki K and Tsubokura M (1981) Plaque formation by avian infectious z bronchitis virus in primary chick embryo fibroblast cells in the presence of Raj, G D., and Jones, R C (1997) Infectious bronchitis l 31 gm @ trypsin Arch Virol 70(4):315-20 virus: 32 m co immunopathogenesis of infection in the chicken Avian Pathol 26:677-706 Riddell, C (1987) Avian Histopathology Kennett Square, PA: American an Lu Association of Avian Pathologists n va ac th 56 si 33 van Roeckel, H., Bullis, K L., Flint, O S and Clarke, M K (1942) Poultry disease control service Massachusetts Agricultural Experiment Station, MA Annual Report Bulletin 388:99-103 Sevoian, M and Levine, P P (1957) Effects of infectious bronchitis on the 34 reproductive tracts, egg production, and egg quality of laying chickens Avian Diseases 1: 136-164 35 Siller, W.G (1981) Renal pathology of the fowl-A review Avian Pathology, 10, 187-262 lu 36 Sjaak de Wit, J.J., Cook, J.K & van der Heijden, H.M (2011) Infectious an bronchitis virus variants: a review of the history, current situation and control va n measures Avian Pathol 40(3), 223-35 Yachida, S , Aoyama, A., Takahashi N , Iritani Y., Katagiri, K (1979) Effects on tn to 37 gh biological properties of embryo‐adapted beaudette strain of infectious bronchitis p ie virus of passage through chick embryo trachea organ culture Avian Pathology, 8: You, J.H., Reed, M.L & Hiscox, J.A (2007) Trafficking motifs in the nl w 38 313-324 an 39 lu 1015-20 d oa SARScoronavirus nucleocapsid protein Biochem Biophys Res Commun 358(4), de Wit, J.J (2000) Detection of infectious bronchitis virus Avian Pathol 29(2), oi lm ul nf va 71 -93 z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 57 si