Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam

Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y HÀ VĂN QUANG NGHIÊN CỨU MỨC ĐỘ BIỂU HIỆN VÀ TÍNH ĐA HÌNH CỦA GEN PKLR, UGT1A1 Ở NGƯỜI PHƠI NHIỄM DIOXIN CÓ NGUỒN GỐC TỪ CHẤT DA CAM LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÀ NỘI - 2023 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y HÀ VĂN QUANG NGHIÊN CỨU MỨC ĐỘ BIỂU HIỆN VÀ TÍNH ĐA HÌNH CỦA GEN PKLR, UGT1A1 Ở NGƯỜI PHƠI NHIỄM DIOXIN CÓ NGUỒN GỐC TỪ CHẤT DA CAM Ngành: Y học Qn Mã sớ: Thí điểm LUẬN ÁN TIẾN SĨ NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC 1- PGS.TS NGUYỄN BÁ VƯỢNG 2- PGS.TS HOÀNG VĂN TỔNG HÀ NỘI - 2023 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận án này, Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Đảng ủy, Ban giám đốc Học viện Quân y; Ban giám đốc Bệnh viện Quân y 103, Trung tâm Đào tạo, Nghiên cứu Độc học Phóng xạ - Học viện Quân y, Bộ môn Trung tâm Nội Dã Chiến – Bệnh viện Quân y 103 - Học viện Quân y, Viện nghiên cứu Y dược học Quân - Học viện Quân y Phòng Sau Đại học Học viện Quân y, cho phép tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ suốt trình học tập, nghiên cứu; Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành sâu sắc tới Phó Giáo Sư, Tiến sĩ Nguyễn Bá Vượng Phó giáo sư, Tiến sĩ Hoàng Văn Tổng người thầy dành nhiều thời gian, công sức, trực tiếp hướng dẫn suốt q trình học tập, nghiên cứu hồn thành luận án; Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Tiến sĩ Hoàng Anh Tuấn, Giám đốcTrung tâm Đào tạo, Nghiên cứu Độc học Phóng xạ - Học viện Quân y người trực tiếp đạo, tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ q trình học tập nghiên cứu; Tơi xin trân trọng cảm ơn Thầy Cô giáo, người bệnh, Bố mẹ, vợ con, anh chị em gia đình, bạn bè đồng nghiệp ln động viên, khích lệ, tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu hoàn thành luận án Hà Nội, ngày 16 tháng 10 năm 2023 Tác giả Hà Văn Quang LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam số liệu đề tài luận án là phần số liệu đề tài nghiên cứu có tên: “Nghiên cứu bổ sung ảnh hưởng tổng hợp chất da cam/dioxin Mỹ sử dụng chiến tranh môi trường người Đề xuất giải pháp khắc phục” Kết đề tài này là thành nghiên cứu tập thể mà là thành viên Tơi đã Chủ nhiệm đề tài và toàn thành viên nhóm nghiên cứu đồng ý cho phép sử dụng đề tài (công trình) này vào luận án để bảo vệ lấy tiến sĩ Các số liệu, kết nêu luận án là trung thực và chưa cơng bớ cơng trình nào khác Hà Nội, ngày 16 tháng 10 năm 2023 Tác giả Hà Văn Quang MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa Lời cảm ơn Lời cam đoan Mục lục Danh mục chữ viết tắt luận án Danh mục bảng Danh mục hình LỜI CAM ĐOAN ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan dioxin 1.1.1 Khái niệm dioxin và hợp chất tương tự 1.1.2 Hệ số đương lượng độc và tổng đương lượng độc dioxin 1.1.3 Độc động học 1.1.4 Cơ chế tác động dioxin thông qua thụ cảm thể AhR 1.1.5 Khả gây bệnh dioxin đối với người 1.1.6 Nguồn ô nhiễm dioxin Việt Nam 11 1.1.7 Dioxin vùng nghiên cứu 13 1.1.8 Dioxin vùng chứng 17 1.2 Gen PKLR và Pyruvate kinase 19 1.2.1 Gen PKLR 19 1.2.2 Pyruvate kinase 21 1.3 Gen UGT1A1 và Enzyme UGT1A1 22 1.3.1 Gen UGT1A1 .22 1.3.2 Enzyme UGT1A1 .25 1.4 Tình hình nghiên cứu mối liên quan mức độ biểu và tính đa hình gen PKLR và UGT1A1 với dioxin .27 1.4.1 Mối liên quan mức độ biểu và tính đa hình gen PKLR, hoạt độ pyruvate kinase với dioxin .27 1.4.2 Mối liên quan mức độ biểu và tính đa hình gen UGT1A1, enzyme UGT1A1 với dioxin 28 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 32 2.1 Đối tượng nghiên cứu 32 2.1.1 Nhóm phơi nhiễm .32 2.1.2 Nhóm chứng 33 2.2 Địa điểm, thời gian nghiên cứu .34 2.3 Phương pháp nghiên cứu 35 2.3.1 Thiết kế nghiên cứu 35 2.3.2 Cỡ mẫu nghiên cứu 35 2.3.3 Phương tiện nghiên cứu .35 2.3.4 Cách thức tiến hành nghiên cứu 37 2.3.5 Các tiêu nghiên cứu .50 2.4 Phân tích và xử lý sớ liệu 53 2.5 Đạo đức nghiên cứu 54 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU .56 3.1 Đặc điểm đối tượng nghiên cứu 56 3.2 Sớ lượng copy, đa hình rs3020781, mức độ biểu gen PKLR, hoạt độ pyruvate kinase và mối liên quan với nồng độ dioxin máu người phơi nhiễm dioxin có nguồn gớc từ chất da cam 57 3.2.1 Số lượng copy, đa hình rs3020781, mức độ biểu gen PKLR, hoạt độ pyruvate kinase 57 3.2.2 Mối liên quan sớ lượng copy, đa hình rs3020781, mức độ biểu gen PKLR, hoạt độ pyruvate kinase với nồng độ dioxin máu người phơi nhiễm dioxin có nguồn gớc từ chất da cam 71 3.3 Đa hình rs10929303, rs1042640, rs8330, mức độ biểu gen UGT1A1, nồng độ enzyme UGT1A1 và mối liên quan với nồng độ dioxin máu người phơi nhiễm dioxin có nguồn gớc từ chất da cam .77 3.3.1 Xác định đa hình rs10929303, rs1042640, rs8330, mức độ biểu gen UGT1A1, nồng độ enzyme UGT1A1 77 3.3.2 Mới liên quan đa hình rs10929303, rs1042640, rs8330, mức độ biểu gen UGT1A1, nồng độ enzyme UGT1A1 với nồng độ dioxin máu người phơi nhiễm dioxin có nguồn gớc từ chất da cam 92 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 98 4.1 Đặc điểm chung đối tượng phơi nhiễm dioxin có nguồn gớc từ chất da cam 98 4.1.1 Một sớ đặc điểm chung nhóm nghiên cứu 98 4.1.2 Đặc điểm môi trường đối tượng nghiên cứu 100 4.2 Số lượng copy, đa hình rs3020781, mức độ biểu gen PKLR, hoạt độ pyruvate kinase và mối liên quan với nồng độ dioxin máu người phơi nhiễm dioxin có nguồn gớc từ chất da cam 102 4.2.1 Sớ lượng copy, đa hình rs3020781, mức độ biểu gen PKLR, hoạt độ pyruvate kinase 102 4.2.2 Mới liên quan sớ lượng copy, đa hình rs3020781, mức độ biểu gen PKLR, hoạt độ pyruvate kinase với nồng độ dioxin máu người phơi nhiễm dioxin có nguồn gớc từ chất da cam 110 4.3 Đa hình rs10929303, rs1042640, rs8330, mức độ biểu gen UGT1A1, nồng độ enzyme UGT1A1 và mối liên quan với nồng độ dioxin máu người phơi nhiễm dioxin có nguồn gớc từ chất da cam 115 4.3.1 Đa hình rs10929303, rs1042640, rs8330, mức độ biểu gen UGT1A1, nồng độ enzyme UGT1A1 115 4.3.2 Mối liên quan đa hình rs10929303, rs1042640, rs8330, mức độ biểu gen UGT1A1, nồng độ enzyme UGT1A1 với nồng độ dioxin máu người phơi nhiễm dioxin có nguồn gớc từ chất da cam 121 KẾT LUẬN 128 KIẾN NGHỊ 130 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CÔNG BỐ KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI LUẬN ÁN TÀI LIỆU THAM KHẢO BỆNH ÁN NGHIÊN CỨU PHỤ LỤC HÌNH ẢNH DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN ÁN TT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 Phần viết tắt 2,3,7,8-TCDF 2,4 – D 2,4,5-T AhR Phần viết đầy đủ 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-furan 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid 2,4,5-Trichlorophenoxyacetic acid Aryl hydrocarbon receptor (thụ thể hydrocacbon AhRR thơm) Gen mã hóa yếu tớ ức chế thụ thể hydrocarbon thơm ARNT ADP BH CB CDD CDF CNV CS DNA DRE Hp HSP90 Hx IARC AhRR (Aryl Hydrocarbon Receptor Repressor) AHR nuclear translocator (AHR nhân) Adenosine triphosphate Biên Hoà Chlorobiphenyl Chlorodibenzodioxin Chlorodibenzofuran Copy number variation (Số lượng copy) Cộng Deoxyribonucleic acid Dioxin-responsive element (yếu tố đáp ứng dioxin) Hepta heat shock protein 90 (protein sốc nhiệt 90) Hexa International Agency for Research on Cancer (Tổ LD50 mRNA NA Nxb O PCBs PCDD PCDFs PCR chức Nghiên cứu Ung thư Quốc tế) Lethal dose (liều gây chết 50% sớ vật thí nghiệm) Messenger ribonucleic acid (RNA Thông tin) Not applicable (Không áp dụng) Nhà xuất Octa Polychlorinated biphenyls Polychlorinated dibenzo-p-dioxin Polychlorinated dibenzofurans Polymerase chain reaction (Phản ứng chuỗi Pe Pg PKLR Ppt RNA RT-PCR polymerase) Penta Picogram Pyruvate kinase liver and red blood cell Parts per trillion Ribonucleic acid Real time - Polymerase chain reaction TT Phần viết tắt 35 SNP Phần viết đầy đủ single nucleotide polymorphism (đa hình nucleotide 36 T 37 TCDD 38 TEF đơn) Tetra 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin Toxic EquivAllellecy Factor (hệ số đương lượng 39 TEQ độc) Toxic EquivAllellecy Quotients (tổng đương lượng 40 UGT1A1 độc) Uridine diphosphate glucuronosyltransferase family 41 WB 42 WHO member A1 Wash Buffer World Health Organization (tổ chức Y tế giới) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Tên bảng Trang Bảng 1.1 Giá trị TEF dioxin và chất tương tự Bảng 1.2 Số lượng chất diệt cỏ (lít) quân đội Mỹ sử dụng miền Nam Việt Nam thời gian chiến tranh 11 Bảng 2.1 Trình tự mồi và probe gen tham chiếu ALB và gen đích PKLR 42 Bảng 2.2 Trình tự mồi sử dụng phản ứng Real time PCR xác định mức độ biểu gen PKLR và UGT1A1 .46 Bảng 2.3 Thành phần thể tích phản ứng 49 Bảng 3.1 Tuổi và giới đối tượng nghiên cứu 56 Bảng 3.2 Tổng đương lượng độc dioxin nhóm phơi nhiễm 56 Bảng 3.3 Tỷ lệ nhóm sớ lượng copy làm trịn gen PKLR nhóm nghiên cứu .57 Bảng 3.4 Phân bố kiểu gen và giá trị dị hợp tử vị trí đa hình rs3020781 gen PKLR nhóm chứng 58