Tóm tắt: Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam

Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.Nghiên cứu mức độ biểu hiện và tính đa hình của gen PKLR, UGT1A1 ở người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam.

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y HÀ VĂN QUANG NGHIÊN CỨU MỨC ĐỘ BIỂU HIỆN VÀ TÍNH ĐA HÌNH CỦA GEN PKLR, UGT1A1 Ở NGƯỜI PHƠI NHIỄM DIOXIN CÓ NGUỒN GỐC TỪ CHẤT DA CAM Ngành: Y học Quân Mã số: Thí điểm TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỘI - 2023 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI HỌC VIỆN QUÂN Y Người hướng dẫn khoa học: PGS TS NGUYỄN BÁ VƯỢNG PGS TS HOÀNG VĂN TỔNG Phản biện 1: PGS TS Phạm Ngọc Châu Phản biện 2: GS TS Nông Văn Hải Phản biện 3: PGS TS Lê Văn Đông Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án cấp trường Vào hồi: ngày tháng năm 2023 Có thể tìm hiểu luận án tại: Thư viện Quốc gia Thư viện Học viện Quân y ĐẶT VẤN ĐỀ Dioxin gây tổn thương đa dạng, phức tạp, làm phát sinh nhiều loại bệnh lý như: bệnh lý ung thư, bệnh lý máu quan tạo máu, bệnh lý rối loạn chuyển hoá, dị tật bẩm sinh Tuy nhiên, chế tác động dioxin thể người chưa rõ ràng, chưa xác định triệu chứng lâm sàng cận lâm sàng đặc trưng dioxin gây ra, gây khó khăn cho việc chẩn đốn điều trị Vì vậy, việc nghiên cứu để làm rõ chế tác động dioxin cấu trúc, chức gen sản phẩm chúng (protein/enzyme) q trình chuyển hố dioxin gen PKLR, UGT1A1 cần thiết Gen PKLR gen mã hóa cho pyruvate kinase, enzyme đóng vai trị quan trọng q trình chuyển hố đường Phơi nhiễm với TCDD có liên quan đến giảm mức độ biểu gen PKLR hoạt độ pyruvate kinase Gen UGT1A1 gen mã hóa cho enzyme UGT1A1, enzyme có vai trị quan trọng chuyển hố chất độc gan, có dioxin Mức độ biểu gen UGT1A1 hoạt độ enzyme UGT1A1 liên quan với TCDD thơng qua thụ thể AhR Các đa hình gen UGT1A1 rs10929303, rs1042640 rs8330 có liên quan đến mức độ biểu gen UGT1A1 hoạt độ enzyme UGT1A1 Từ thực tế chúng tơi tiến hành nghiên cứu với mục tiêu sau: Xác định số lượng copy, đa hình rs3020781, mức độ biểu gen PKLR, hoạt độ pyruvate kinase đánh giá mối liên quan với nồng độ dioxin máu người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam Xác định đa hình rs10929303, rs1042640, rs8330, mức độ biểu gen UGT1A1, nồng độ enzyme UGT1A1 đánh giá mối liên quan với nồng độ dioxin máu người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam Những đóng góp luận án: - Đây nghiên cứu mức độ biểu tính đa hình gen PKLR gen UGT1A1 đối tượng phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam có nồng độ dioxin máu cao Kết nghiên cứu có khác số lượng copy, mức độ biểu mRNA gen PKLR, hoạt độ pyruvate kinase; phân bố kiểu gen vị trí đa hình rs10929303, rs1042640, rs8330, mức độ biểu mRNA gen UGT1A1 nồng độ enzyme UGT1A1 người phơi nhiễm dioxin so với người không phơi nhiễm - Kết nghiên cứu cho thấy tổng đương lượng độc TCDD, PCDDs PCDD/Fs có liên quan với số lượng copy, đa hình rs3020781, mức độ biểu mRNA gen PKLR, hoạt độ pyruvate kinase; đa hình rs10929303, rs1042640, rs8330, mức độ biểu mRNA gen UGT1A1, nồng độ enzyme UGT1A1 Cấu trúc luận án - Tổng cộng 130 trang gồm: Phần đặt vấn đề; chương (Chương 1: Tổng quan; Chương 2: Đối tượng phương pháp nghiên cứu; Chương 3: Kết nghiên cứu; Chương 4: Bàn luận); Phần kết luận Kiến nghị - Luận án có: 31 bảng, 21 hình, 150 tài liệu tham khảo CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Khái niệm, nguồn ô nhiễm dioxin 1.1.1 Khái niệm dioxin hợp chất tương tự Dioxin hợp chất tương tự dioxin nhóm bao gồm hàng trăm hợp chất hữu độc hại tồn bền vững mơi trường, có nhóm hợp chất là: polychlorinated dibenzo-p-dioxin (PCDDs, gọi tắt dioxin), polychlorinated dibenzofuran (PCDFs, gọi tắt furan) polychlorinated biphenyl đồng phẳng (coplanar PCBs hay dioxin-like PCBs, gọi tắt dl-PCBs) 1.1.2 Hệ số đương lượng độc tổng đương lượng độc dioxin Độ độc dioxin biểu thị dạng hệ số TEF, tính theo chất độc TCDD (quy định theo WHO-1998; 1,2,3,7,8 - penta CDD, có nguyên tử clo, có TEF 1) Tổng lượng độc tất dioxin (TEQ) tính theo cơng thức sau: n TEQ = ∑ (Ci x TEFi) i=1 1.1.7 Dioxin vùng nghiên cứu Vùng nghiên cứu (Sân bay Biên Hoà Sân bay Đà nẵng) vùng chứng có dioxin mơi trường (đất trầm tích), thực phẩm thể người (máu sữa mẹ) Tuy nhiên, mức độ ô nhiễm, thời gian ô nhiễm tỷ lệ TCDD tổng số TEQ PCDD/PCDFs vùng khác rõ rệt Trong đó, vùng nghiên cứu (Sân bay Biên Hồ Sân bay Đà nẵng) môi trường (đất trầm tích), thực phẩm người bị nhiễm dioxin nặng; thời gian bị ô nhiễm kéo dài hàng chục năm; tỷ lệ TCDD tổng số TEQ PCDD/PCDFs cao, có mẫu lên đến gần 100% Trong đó, vùng chứng nồng độ dioxin môi trường, thực phẩm thể người thấp (hầu hết mẫu nằm giới hạn tiếp xúc cho phép WHO), thời gian tiếp xúc ngắn, tỷ lệ TCDD tổng số TEQ PCDD/PCDFs thấp 1.2 Gen PKLR Pyruvate kinase 1.2.1 Gen PKLR Gen PKLR nằm nhiễm sắc thể 1q21, điều hồ q trình phiên mã đặc hiệu cho isoenzyme gan (LPK) isoenzyme hồng cầu (RPK) cách sử dụng vùng gen khởi động thay 1.2.2 Pyruvate kinase Pyruvate kinase enzyme xúc tác cho giai đoạn cuối trình đường phân Ở động vật có vú, pyruvate kinase có bốn loại isoenzyme L, R, M1 M2, isozyme R L điều hòa gen PKLR 1.3 Gen UGT1A1 Enzyme UGT1A1 1.3.1 Gen UGT1A1 Gen UGT1A1 nằm nhánh dài nhiễm sắc thể (2q37), dài khoảng 160 kb chứa exon Gen UGT1A1 bao gồm vùng promoter exon (exon đầu tiên: 3, 11 12) nối với exon chung để tạo enzyme UGT1A1 khác 1.3.2 Enzyme UGT1A1 UGT1A1 enzyme chuyển hóa gan giai đoạn II, xúc tác phản ứng glucuronid hóa để kiểm sốt chuyển hóa xenobiotic hợp chất nội sinh 1.4 Tình hình nghiên cứu mối liên quan mức độ biểu tính đa hình gen PKLR UGT1A1 với dioxin 1.4.1 Mối liên quan mức độ biểu tính đa hình gen PKLR với dioxin Hsia M T CS (1985), cho 3,3’,4,4’tetrachloroazoxybenzene (TCAOB: chất tương tự TCDD) chuột làm giảm đáng kể hoạt tính pyruvate kinase gan Hoffman J.B CS (2020), cho tiếp xúc với PCBs làm giảm đáng kể mức độ biểu gen PKLR chuột cho ăn cellulose, mức độ biểu gen PKLR không bị ảnh hưởng chuột cho ăn isulin 1.4.2 Mối liên quan mức độ biểu tính đa hình gen UGT1A1, enzyme UGT1A1 với dioxin Yueh M-F CS (2003) cho tế bào u gan HepG2 người, gen UGT1A1 cảm ứng với phối tử thụ thể AhR TCDD, βnaphthoflavone chất chuyển hóa benzo[a]pyrene Bên cạnh đó, số nghiên cứu khác cho thấy dioxin gây hoạt hóa phiên mã gen UGT1A1 thông qua thụ thể trung gian AhR Ton N D CS, (2018) thực giải trình tự toàn bộ gen cựu chiến binh Việt Nam có nồng độ dioxin cao huyết thanh, với vợ/chồng họ Tổng cộng, 846 đột biến điểm denovo, 26 đột biến thêm /mất đoạn denovo, đột biến cấu trúc denovo biến thể số lượng denovo xác định CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng, địa điểm thời gian nghiên cứu 2.1.1 Nhóm phơi nhiễm Gồm 100 người sinh sống xung quanh khu vực Sân bay Đà Nẵng, Sân bay Biên Hòa: - Thời gian sống cư trú đối tượng phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam khu vực xung quanh Sân bay Đà Nẵng Sân bay Biên Hòa liên tục năm (Tính từ thời điểm đối tượng phơi nhiễm lấy máu xét nghiệm nồng độ dioxin (tháng năm 2015) đến thời điểm lấy máu để thực nội dung nghiên cứu đề tài (tháng năm 2019) - Tổng đương lượng độc PCDD/PCDFs máu 10ppt (pg TEQ/g mỡ) Trong đó, tỷ lệ TEQ TCDD/ PCDD/PCDFs 30% (kết xét nghiệm 17 đồng phân dioxin thuộc đề tài nghiên cứu KHCN33.13 /11-15) 2.1.2 Nhóm chứng Gồm 100 người khơng có tiền sử phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam chiến tranh đáp ứng tiêu chuẩn lựa chọn, cụ thể sau: - Sinh lớn lên miền Bắc, không tham gia kháng chiến chiến trường miền Nam, Việt Nam, không sống khu vực bị phun rải chất diệt cỏ chiến tranh không sinh sống khu vực điểm nóng dioxin - Tuổi đời tương đương với nhóm nghiên cứu - Khơng mắc bệnh liên quan đến dioxin 2.1.2 Địa điểm nghiên cứu Nghiên cứu tiến hành khu vực Đà Nẵng, Biên Hoà miền Bắc 2.1.3 Thời gian nghiên cứu Thời gian nghiên cứu từ 3/2019 đến tháng 10/2022 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Thiết kế nghiên cứu Nghiên cứu hồi cứu kết hợp với mô tả cắt ngang có nhóm chứng so sánh 16 TEQTCDD Mức độ 0,536 < 0,01 Y = 0,13X + 22,125 biểu TEQPCDDs 0,52 < 0,01 Y = 0,114X + 21,188 gen TEQPCDFs 0,150 = 0,138 PKLR TEQPCDD/Fs 0,506 < 0,01 Y = 0,106X + 20,878 Mức độ biểu mRNA gen PKLR có mối tương quan thuận mức độ vừa với TEQ TCDD, PCDDs PCDD/PCDFs, với hệ số tương quan r=0,536; r = 0,52 r = 0,506, với p < 0,01 Bảng 3.16 Mối tương quan hoạt độ pyruvate kinase với tổng đương lượng độc dioxin máu Chỉ tiêu nghiên cứu TEQTCDD TEQPCDDs TEQPCDFs TEQPCDD/Fs Hoạt độ enzyme PK r -0,52 Phương trình hồi quy < 0,01 Y = -0,035 + 20,728 p -0,514 < 0,01 Y = -0,031X + 21,048 -0,293 < 0,01 Y = -0,11X + 18,866 -0,518 < 0,01 Y = -0,029X + 21,185 Hoạt độ enzyme PK có mối tương quan nghịch mức độ vừa với TEQ TCDD, PCDDs PCDD/PCDFs, với hệ số tương quan r = -0,52; r = -0,14 r = -0,518, với p < 0,01 3.3 Đa hình rs10929303, rs1042640, rs8330, mức độ biểu gen UGT1A1, nồng độ enzyme UGT1A1 mối liên quan với nồng độ dioxin máu người phơi nhiễm dioxin có nguồn gốc từ chất da cam 3.3.1 Đa hình rs10929303, rs1042640, rs8330, mức độ biểu gen UGT1A1, nồng độ enzyme UGT1A1 17 Hình 3.16 Mức độ biểu mRNA gen UGT1A1 Mức độ biểu mRNA gen UGT1A1 nhóm phơi nhiễm (trung vị: 10,67 (2^-ΔCt)) cao khoảng 2,5 lần so với nhóm chứng (trung vị: 4,13 (2^-ΔCt)), với p