(Luận án tiến sĩ) nghiên cứu mức độ biểu hiện của micro RNA 29a, micro RNA 146a và micro RNA 147b tự do huyết tương ở bệnh nhân đái tháo đường týp 2

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO HỌC VIỆN QUÂN Y BỘ QUỐC PHÒNG PHAN THẾ DŨNG NGHIÊN CỨU MỨC ĐỘ BIỂU HIỆN CỦA MICRO-RNA 29A, MICRO-RNA 146A VÀ MICRO-RNA 147B TỰ DO HUYẾT TƯƠNG Ở BỆNH NHÂN ĐÁI THÁO ĐƯỜNG TÝP LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỘI - 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO HỌC VIỆN QUÂN Y BỘ QUỐC PHÒNG PHAN THẾ DŨNG NGHIÊN CỨU MỨC ĐỘ BIỂU HIỆN CỦA MICRO-RNA 29A, MICRO-RNA 146A VÀ MICRO-RNA 147B TỰ DO HUYẾT TƯƠNG Ở BỆNH NHÂN ĐÁI THÁO ĐƯỜNG TÝP Chuyên ngành: Nội khoa Mã số: 9.72.01.07 LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC Hướng dẫn khoa học: PGS.TS Đoàn Văn Đệ GS.TS Nguyễn Lĩnh Toàn HÀ NỘI - 2021 LỜI CẢM ƠN Bằng tất lịng kính trọng biết ơn tơi xin gửi tới PGS TS Đoàn Văn Đệ, GS TS Nguyễn Lĩnh Toàn - người thầy tâm huyết tận tình dạy dỗ, dìu dắt cho tơi q trình học tập! Tôi xin chân thành bày tỏ lời cảm ơn tới: Đảng ủy, Ban Giám đốc, Phòng Đào tạo Sau Đại học, Bộ môn Khớp - Nội tiết - Học viện Quân Y tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu hồn thành luận án! Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn tới PGS TS Nguyễn Thị Phi Nga chủ nhiệm môn Khớp - Nội tiết Học viện Quân y đóng góp ý kiến quý báu, chia sẻ giúp đỡ suốt q trình học tập! Tơi xin cảm ơn Ban Giám đốc Sở Y tế Nghệ An, Ban giám đốc bệnh viện khoa lâm sàng, cận lâm sàng Bệnh viện Nội tiết Nghệ An tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình học tập Tơi xin gửi cảm ơn tới tồn thể Người bệnh nhiệt tình giúp đỡ tơi suốt trình lấy số liệu để thực luận án này! Tôi xin trân trọng cảm ơn thầy, cô hội đồng chấm luận án đóng góp nhiều ý kiến q báu để tơi hồn thiện bảo vệ luận án! Tôi xin gửi lời cảm ơn tới bạn bè, đồng nghiệp sát cánh bên tôi, động viên, giúp đỡ suốt trình học tập! Cùng với tất tình u, lịng biết ơn sâu sắc xin gửi lời cảm ơn tới Cha, Mẹ kính yêu, vợ con, người thân gia đình ln chỗ dựa tinh thần tạo động lực lớn để vượt qua tất khó khăn thử thách! Hà nội, tháng 11 năm 2021 Phan Thế Dũng MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa Lời cam đoan Mục lục Danh mục chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục hình ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ ĐÁI THÁO ĐƯỜNG TÝP 1.1.1 Định nghĩa, dịch tễ học 1.1.2 Chẩn đoán đái tháo đường týp 1.1.3 Bệnh sinh đái tháo đường týp .4 1.2 TỔNG QUAN VỀ MICRO-RNA 12 1.2.1 Nguồn gốc sinh học .13 1.2.2 Cấu trúc phân tử trình hình thành micro-RNA 13 1.2.3 Cơ chế hoạt động micro-RNA 15 1.2.4 Các đặc tính yếu tố ảnh hưởng đến biểu microRNA 17 1.2.5 Vai trò micro-RNA bệnh đái tháo đường 18 1.2.6 Phương pháp định lượng micro-RNA 30 1.3 MỘT SỐ NGHIÊN CỨU TRONG VÀ NGOÀI NƯỚC VỀ MICRO-RNA Ở BỆNH NHÂN ĐÁI THÁO ĐƯỜNG 33 1.3.1 Một số nghiên cứu giới 33 1.3.2 Một số nghiên cứu nước 34 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 36 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 36 2.1.1 Tiêu chuẩn lựu chọn 36 2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ 36 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 37 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu .37 2.2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu .37 2.2.3 Cỡ mẫu phương pháp chọn mẫu .37 2.2.4 Phương pháp thu thập số liệu 37 2.3 CÁC CHỈ TIÊU NGHIÊN CỨU 51 2.3.1 Đặc điểm lâm sàng đối tượng nghiên cứu 51 2.3.2 Các số xét nghiệm đối tượng nghiên cứu .51 2.3.3 Biểu micro-RNA 52 2.3.4 Đánh giá mối liên quan mức độ biểu miR với số yếu tố 52 2.4 MỘT SỐ TIÊU CHUẨN SỬ DỤNG TRONG NGHIÊN CỨU 52 2.4.1 Tiêu chuẩn chẩn đoán đái tháo đường týp tiền đái tháo đường 52 2.4.2 Tiêu chuẩn chẩn đoán hội chứng chuyển hóa .53 2.4.3 Đánh giá chức tế bào beta chí số kháng insulin theo mơ hình HOMA-2 .54 2.4.4 Phân độ béo phì 54 2.4.5 Phân loại tỷ số eo – hông 55 2.4.6 Phân loại huyết áp .55 2.4.7 Tiêu chuẩn chẩn đoán rối loạn lipid máu 55 2.4.8 Tiêu chuẩn đánh giá mức độ albumin niệu bệnh nhân đái tháo đường 56 2.4.9 Tiêu chuẩn chẩn đoán nghiện rượu theo ICD 10 56 2.4.10 Tiêu chuẩn chẩn đoán nghiện thuốc theo DSM IV (1994) 56 2.5 PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ SỐ LIỆU 57 2.6 ĐẠO ĐỨC NGHIÊN CỨU 58 SƠ ĐỒ NGHIÊN CỨU 60 CHƯƠNG KẾT QUẢ .61 3.1 ĐẶC ĐIỂM CHUNG CỦA ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 61 3.1.1 Đặc điểm lâm sàng đối tượng nghiên cứu 61 3.1.2 Đặc điểm cận lâm sàng đối tượng nghiên cứu 64 3.2 MỨC ĐỘ BIỂU HIỆN CỦA MICRO-RNA 29A, MICRO-RNA 146A, MICRO-RNA 147B HUYẾT TƯƠNG Ở BỆNH NHÂN ĐÁI THÁO ĐƯỜNG TÝP 68 3.3 MỐI LIÊN QUAN GIỮA MỨC ĐỘ BIỂU HIỆN CỦA MIR-29A, MIR-146A, MIR-147B HUYẾT TƯƠNG VỚI MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM LÂM SÀNG, CẬN LÂM SÀNG Ở BỆNH ĐÁI THÁO ĐƯỜNG TÝP 73 3.3.1 Mối liên quan mức độ biểu miR-29a, miR-146a, miR-147b huyết tương với số đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng 73 3.3.2 Tương quan mức độ biểu miR-29a, miR-146a, miR-147b huyết tương với số đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng 76 3.3.3 Giá trị chẩn đoán miR-29a, miR-146a, miR-147b huyết tương 88 CHƯƠNG BÀN LUẬN 93 4.1 ĐẶC ĐIỂM CHUNG CỦA ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 93 4.1.1 Tuổi, giới thời gian bị bệnh 93 4.1.2 Đặc điểm số nhân trắc nhóm bệnh nhân đái tháo đường týp 94 4.1.3 Đặc điểm tăng huyết áp nhóm bệnh nhân đái tháo đường týp .96 4.1.4 Đặc điểm thuốc điều trị kiểm soát glucose máu bệnh nhân đái tháo đường týp 96 4.1.5 Đặc điểm rối loạn lipid máu bệnh nhân đái tháo đường týp 97 4.1.6 Đặc điểm microalbumin niệu bệnh nhân đái tháo đường týp 98 4.1.7 Kháng insulin bệnh nhân đái tháo đường týp 99 4.1.8 Chức tế bào beta bệnh nhân ĐTĐ týp 101 4.2 MỨC ĐỘ BIỂU HIỆN CỦA CÁC MICRO-RNA HUYẾT TƯƠNG Ở BỆNH NHÂN ĐÁI THÁO ĐƯỜNG TÝP 103 4.3 MỐI LIÊN QUAN GIỮA MỨC ĐỘ BIỂU HIỆN CỦA MICRORNA VỚI MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM LÂM SÀNG, CẬN LÂM SÀNG Ở ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU .109 4.3.1 Liên quan mức độ biểu miR huyết tương với giới 109 4.3.2 Liên quan mức độ biểu miR huyết tương với tuổi 110 4.3.3 Liên quan biểu miR huyết tương với thời gian phát bệnh 111 4.3.4 Liên quan miR huyết tương với tăng huyết áp 111 4.3.5 Liên quan biểu miR huyết tương với BMI 112 4.3.6 Liên quan biểu miR huyết tương với số lipid máu 113 4.3.7 Liên quan biểu miR huyết tương với glucose máu .114 4.3.8 Liên quan biểu miR huyết tương với chức tế bào beta .116 4.3.9 Liên quan biểu miR huyết tương với số kháng insulin 118 4.3.10 Liên quan miR huyết tương với nồng độ microalbumin niệu 120 4.3.11 Tương quan miR-29a, miR-146a, miR-147b huyết tương 121 4.3.12 Giá trị chẩn đoán miR-29a, miR-146a, miR-147b huyết tương 122 4.3.13 Hạn chế đề tài 123 KẾT LUẬN 124 KIẾN NGHỊ 126 TÀI LIỆU THAM KHẢO ĐẶT VẤN ĐỀ Đái tháo đường (ĐTĐ) týp bệnh lý không lây nhiễm, có tốc độ phát triển nhanh Theo Liên đồn đái tháo đường quốc tế (IDF) năm 2019 , giới có khoảng 463 triệu người tuổi từ 20-79 mắc bệnh ĐTĐ (8,8%) dự đoán tăng lên 700 triệu người vào năm 2045 Trong loại ĐTĐ, ĐTĐ týp chiếm tỷ lệ khoảng 90% Cơ chế bệnh sinh bệnh ĐTĐ týp đề kháng insulin, suy giảm chức tế bào β, làm khả điều hoà glucose máu thể Tuy nhiên chế tham gia đề kháng insulin suy giảm chức tế bào β chưa hiểu biết đầy đủ Các micro-RNA (miR) RNA có kích thước phân tử 19-24 nucleotid, khơng mã hóa protein, có chức điều hịa biểu gen cấp sau phiên mã cách ức chế trình phiên mã phá hủy RNA thơng tin (mRNA) MiR tiết vào dịch ngoại bào vận chuyển đến tế bào đích thực chức thông qua túi exosom, cách liên kết với protein Các miR ngoại bào báo cáo đóng vai trị phân tử tín hiệu để làm trung gian cho liên lạc tế bào Trong thập kỷ qua, với phát miR, nghiên cứu lĩnh vực chức miR sinh bệnh học nhiều bệnh khác có bệnh ĐTĐ chủ đề nóng nhiều người quan tâm Biểu miR chứng minh có thay đổi mơ đích insulin, chuyển hóa glucose lipid Ngồi ra, thay đổi miR ghi nhận có liên quan với q trình tái tạo điều tiết chức tế bào beta (β) Những nghiên cứu cho thấy miR trực tiếp gián tiếp liên quan đến sinh bệnh học bệnh ĐTĐ týp phương pháp trị liệu có tiềm cho bệnh ĐTĐ, cách khơi phục ức chế biểu miR có liên quan Một số nghiên cứu gần cho thấy miR-29a, miR-146a tham gia vào chế bệnh sinh bệnh ĐTĐ nhiên chưa nghiên cứu đầy đủ Trong miR-147b chứng minh liên quan đến trình chết tế bào theo chương trình có thơng tin nghiên cứu miR-147b bệnh nhân ĐTĐ týp Ở Việt Nam, chưa thấy nghiên cứu đề cập đến vai trò miR đặc biệt miR-29a, miR-146a miR-147b huyết tương bệnh lý ĐTĐ týp Nghiên cứu trạng thái biểu miR tìm thay đổi có ý nghĩa bệnh sinh ĐTĐ týp định hướng nghiên cứu cần thiết, có ý nghĩa khoa học thực tiễn Chính vậy, tiến hành đề tài: “Nghiên cứu mức độ biểu micro-RNA 29a, micro-RNA 146a micro-RNA 147b tự huyết tương bệnh nhân đái tháo đường týp 2” với mục tiêu sau: Khảo sát mức độ biểu micro-RNA 29a, micro-RNA 146a, micro-RNA 147b huyết tương bệnh nhân đái tháo đường týp 2 Đánh giá mối liên quan mức độ biểu micro-RNA 29a, micro-RNA 146a, micro-RNA 147b huyết tương với số đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng, tình trạng kháng insulin bệnh nhân đái tháo đường týp 114 mẫu huyết bệnh nhân ĐTĐ tiền ĐTĐ không không thấy có tương quan biểu miR-146a với số lipid máu bệnh nhân Một số nghiên cứu gần đánh giá vai trò miR với rối loạn chuyển hóa lipd nhiên khơng phải đối tượng bệnh nhân ĐTĐ: nghiên cứu Huang R.Q cs (2016) 170 đối tượng tham gia cho thấy miR-29a huyết có tương quan thuận với nồng độ LDL-cho có liên quan đến dày lớp nội trung mạc động mạch cảnh Cũng có chứng cho ức chế biểu miR-29a làm giảm nồng độ lipid máu ức chế trình tạo mỡ gan Ở mơ xương mơ hình người chuột bị ĐTĐ có chứng cho thấy biểu mức miR-29a ức chế q trình oxy hóa lipid 4.3.7 Liên quan biểu miR huyết tương với glucose máu Nồng độ glucose trực tiếp liên quan với tình trạng kháng insulin chức tế bào β Khi suy giảm chức tế bào β tăng tình trạng kháng insulin dẫn đến glucose máu cao Các yếu tố tác động đến hai chế ảnh hưởng đến nồng độ glucose máu bệnh nhân Nhằm gián tiếp đánh giá chức tế bào β tình trạng kháng insulin, chúng tơi đánh giá mối tương quan nồng độ glucose máu với biểu miR tự huyết tương Kết Bảng 3.20 cho thấy có mối tương quan thuận mức độ trung bình biểu miR-29a huyết tương với glucose máu lúc đói (p