Xác nhận độ chụm và độ đúng của phương pháp xét nghiệm định lượng ft4, tsh, t3 huyết tương trên máy miễn dịch dxi 800 tại khoa sinh hóa bệnh viện e

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC VŨ THỊ NHUNG XÁC NHẬN ĐỘ CHỤM VÀ ĐỘ ĐÚNG CỦA PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHIỆM ĐỊNH LƯỢNG FT4, TSH, T3 HUYẾT TƯƠNG TRÊN MÁY MIỄN DỊCH DXI 800 TẠI KHOA SINH HĨA BỆNH VIỆN E KHỐ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM Y HỌC HÀ NỘI – 2023 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC VŨ THỊ NHUNG XÁC NHẬN ĐỘ CHỤM VÀ ĐỘ ĐÚNG CỦA PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHIỆM ĐỊNH LƯỢNG FT4, TSH, T3 HUYẾT TƯƠNG TRÊN MÁY MIỄN DỊCH DXI 800 TẠI KHOA SINH HĨA BỆNH VIỆN E KHỐ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM Y HỌC Khoá: QH.2019.Y Người hướng dẫn: ThS.BSNT Hán Minh Thủy ThS.BSCKII Nguyễn Thị Bình Minh HÀ NỘI – 2023 LỜI CẢM ƠN Lời em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới Ban Giám hiệu, Phòng ban môn, Trường Đại học Y Dược - Đại học Quốc gia Hà Nội tạo hội cho em học tập, rèn luyện trường suốt thời gian học tập Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Ban Giám đốc Bệnh viện E tất anh chị Khoa Sinh hóa, Bệnh viện E ln nhiệt tình hướng dẫn, giúp đỡ để em thực hồn thành khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới ThS.BSNT Hán Minh Thủy Giảng viên trường Đại học Y Dược - Đại học Quốc gia Hà Nội ThS.BSCKII Nguyễn Thị Bình Minh, Trưởng Khoa Sinh Hóa - Bệnh viện E ln tận tình hướng dẫn, động viên tạo điều kiện giúp đỡ em suốt thời gian thực khóa luận Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn đến bố mẹ, người thân gia đình bạn bè ln bên động viên, giúp đỡ, chỗ dựa tinh thần vững cho em học tập thật tốt Dù cố gắng để thực khóa luận cách hồn chỉnh nhất, lần đầu thực nghiên cứu kiến thức cịn hạn chế nên khóa luận em cịn thiếu sót Em mong nhận ý kiến đóng góp quý báu thầy để khóa luận hồn thiện Em xin chân thành cảm ơn ! Hà Nội, ngày 20 tháng 05 năm 2023 Sinh viên Vũ Thị Nhung DANH MỤC VIẾT TẮT AMPPD - methoxy - - (3 - phosphatephenyl) - spiro - (1,2 dioxetane - 3,2 - adamantine) - chất hóa phát quang CLIA Chemiluminescence Immuno Assay - Miễn dịch hóa phát quang CLSI Clinical and Laboratory Standards Institute - Viện Tiêu chuẩn Lâm sàng Xét nghiệm y học CV Coefficient of Variation - Hệ số biến thiên DCLIA Direct Chemiluminescence Immuno Assay - Hóa phát quang trực tiếp ELISA Enzym Linked Immuno Sorbent Assay - Miễn dịch gắn enzym FIA Fluoro Immuno Assay - Miễn dịch huỳnh quang FT3 Free Triiodothyronin FT4 Free Thyroxin QC Quality Control - Kiểm tra chất lượng RIA Radio Immuno Assay - Miễn dịch phóng xạ RLU Relative Light Unit - Đơn vị ánh sáng tương đối SD Standard Deviation - Độ lệch chuẩn TSH Thyroid Stimulating Hormon - Hormon kích khích tuyến giáp T3 Triiodothyronin - Hormon tuyến giáp T4 Thyroxin - Hormon tuyến giáp TV True value - Giá trị UVL Upper Verification Limit - Giới hạn xác nhận MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Thẩm định xác nhận phương pháp 1.1.1 Thẩm định phương pháp 1.1.2 Xác nhận phương pháp (Xác nhận giá trị sử dụng) 1.1.3 So sánh xác nhận thẩm định 1.2 Hướng dẫn EP15-A3 CLSI 1.3 Các thuật ngữ khái niệm liên quan 1.3.1 Độ chụm (Precision) 1.3.2 Độ (Trueness) 1.3.3 Các loại sai số 11 1.3.4 Khoảng tuyến tính (Linearity Range) 12 1.3.5 Khoảng tham chiếu 12 1.4 Các phương pháp định lượng T3, FT4, TSH 13 1.5 Hệ thống máy xét nghiệm miễn dịch tự động Unicel DxI 800 14 1.5.1 Giới thiệu hệ thống máy Unicel DxI 800 14 1.5.2 Phương pháp xét nghiệm định lượng T3 máy Unicel DxI 800 17 1.5.3.Phương pháp xét nghiệm định lượng FT4 máy Unicel DxI 800 18 1.5.4 Phương pháp xét nghiệm định lượng TSH máy Unicel DxI 800 18 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Đối tượng nghiên cứu 20 2.2 Vật liệu nghiên cứu 20 2.3 Trang thiết bị, dụng cụ, hóa chất, thuốc thử 20 2.3.1 Trang thiết bị, dụng cụ 20 2.3.2 Hóa chất, thuốc thử 21 2.4 Địa điểm thời gian nghiên cứu 21 2.5 Đạo đức nghiên cứu 21 2.6 Bộ công cụ nghiên cứu 21 2.7 Sơ đồ nghiên cứu 22 2.8 Phương pháp nghiên cứu 22 2.8.1 Thực nghiệm đánh giá độ chụm 22 2.8.2 Thực nghiệm đánh giá độ 25 CHƯƠNG KẾT QUẢ 27 3.1 Xác nhận độ chụm (Precision) phương pháp xét nghiệm định lượng FT4, TSH, T3 máy miễn dịch DxI 800 27 3.1.1 Đánh giá độ chụm phương pháp xét nghiệm định lượng FT4 27 3.1.2 Đánh giá độ chụm phương pháp xét nghiệm định lượng TSH 29 3.1.3 Đánh giá độ chụm phương pháp xét nghiệm định lượng T3 31 3.2 Xác nhận độ (Trueness) phương pháp xét nghiệm định lượng FT4, TSH, T3 máy miễn dịch DxI 800 33 3.2.1 Đánh giá độ phương pháp xét nghiệm định lượng FT4 33 3.2.2 Đánh giá độ phương pháp xét nghiệm định lượng TSH 34 3.2.3 Đánh giá độ phương pháp xét nghiệm định lượng T3 35 CHƯƠNG BÀN LUẬN 36 KẾT LUẬN 40 KIẾN NGHỊ 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 So sánh thẩm định xác nhận phương pháp .6 Bảng 1.2 Phân loại độ chụm ngắn hạn độ chụm dài hạn Bảng 3.1 Bảng số liệu thực nghiệm đánh giá độ chụm độ xét nghiệm định lượng FT4 mức nồng độ thấp .27 Bảng 3.2 Bảng số liệu thực nghiệm đánh giá độ chụm độ xét nghiệm định lượng FT4 mức nồng độ cao .28 Bảng 3.3 Bảng kết thực nghiệm đánh giá độ chụm phương pháp xét nghiệm định lượng FT4 28 Bảng 3.4 Bảng số liệu thực nghiệm đánh giá độ chụm độ xét nghiệm định lượng TSH mức nồng độ thấp 29 Bảng 3.5 Bảng số liệu thực nghiệm đánh giá độ chụm độ xét nghiệm định lượng TSH mức nồng độ cao .30 Bảng 3.6 Bảng kết thực nghiệm đánh giá độ chụm phương pháp xét nghiệm định lượng TSH 30 Bảng 3.7 Bảng số liệu thực nghiệm đánh giá độ chụm độ xét nghiệm định lượng T3 mức nồng độ thấp .31 Bảng 3.8 Bảng số liệu thực nghiệm đánh giá độ chụm độ xét nghiệm định lượng T3 mức nồng độ cao 32 Bảng 3.9 Bảng kết thực nghiệm đánh giá độ chụm phương pháp xét nghiệm định lượng T3 32 Bảng 3.10 Bảng kết thực nghiệm đánh giá độ phương pháp xét nghiệm định lượng FT4 33 Bảng 3.11 Bảng kết thực nghiệm đánh giá độ phương pháp xét nghiệm định lượng TSH 34 Bảng 3.12 Bảng kết thực nghiệm đánh giá độ phương pháp xét nghiệm định lượng T3 35 DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Biểu đồ đánh giá độ chụm độ phương pháp xét nghiệm định lượng FT4 mức nồng độ thấp .27 Biểu đồ 3.2 Biểu đồ đánh giá độ chụm độ phương pháp xét nghiệm định lượng FT4 mức nồng độ cao 28 Biểu đồ 3.3 Biểu đồ đánh giá độ chụm độ phương pháp xét nghiệm định lượng TSH mức nồng độ thấp 29 Biểu đồ 3.4 Biểu đồ đánh giá độ chụm độ phương pháp xét nghiệm định lượng TSH mức nồng độ cao .30 Biểu đồ 3.5 Biểu đồ đánh giá độ chụm độ phương pháp xét nghiệm định lượng T3 mức nồng độ thấp .31 Biểu đồ 3.6 Biểu đồ đánh giá độ chụm độ phương pháp xét nghiệm định lượng T3 mức nồng độ cao 32 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Mối liên hệ độ chụm, độ độ xác 10 Hình 1.2 Hạt thuận từ phủ kháng thể .15 Hình 1.3 Quá trình phản ứng xét nghiệm miễn dịch cạnh tranh 15 Hình 1.4 Phức hợp hạt thuận từ phủ KT - KN mẫu phân tích Phức hợp hạt thuận từ phủ KT - KN gắn chất phát quang AMPPD xét nghiệm miễn dịch cạnh tranh .16 Hình 1.5 Quá trình phản ứng xét nghiệm miễn dịch sandwich .16 Hình 1.6 Phức hợp Hạt thuận từ phủ KT - KN mẫu - KT gắn chất phát quang xét nghiệm miễn dịch sandwich 16 Hình 1.7 Máy xét nghiệm miễn dịch tự động Unicel DxI 800 17 ĐẶT VẤN ĐỀ Ngày nay, xét nghiệm cận lâm sàng đóng vai trị có ý nghĩa vô quan trọng Một kết xét nghiệm đáng tin cậy giúp chẩn đốn xác bệnh, theo dõi diễn biến đánh giá hiệu điều trị tiên lượng bệnh Vì vậy, kết xét nghiệm địi hỏi phải có xác cao, sai sót xét nghiệm dẫn đến hậu nghiêm trọng Bên cạnh đó, để đáp ứng yêu cầu ngày cao, hệ thống máy móc tiên tiến, phương pháp xét nghiệm mới, đại đời, đồng thời phịng xét nghiệm ln khơng ngừng đổi nâng cao chất lượng Tuy nhiên, câu hỏi cần đặt thiết bị, phương pháp liệu có đạt chất lượng mong đợi hay có phù hợp với điều kiện phịng xét nghiệm khơng? Trả lời cho câu hỏi này, nhà sản xuất tiến hành thẩm định để đánh giá đặc tính kỹ thuật định xây dựng phát triển phương pháp Theo đó, phịng xét nghiệm nơi tiến hành xác nhận phương pháp trước đưa vào sử dụng thiết bị mới, kỹ thuật để xác minh xem tiêu chuẩn kỹ thuật mà nhà sản xuất cơng bố có phù hợp với điều kiện phịng xét nghiệm hay khơng [1,2] Kết xác nhận giá trị sử dụng dùng để đánh giá sai số xảy đảm bảo việc trả kết đáng tin cậy cho bệnh nhân bác sĩ lâm sàng Tại khoa Sinh hóa Bệnh viện E, hệ thống máy miễn dịch DxI 800 đưa vào sử dụng thời gian gần Đây hệ thống phân tích miễn dịch tối ưu với thời gian phân tích rút ngắn Trước đưa vào sử dụng, hệ thống cần xác nhận giá trị sử dụng phương pháp hay nói cách khác kiểm tra để xác nhận thông số kỹ thuật đủ tin cậy phù hợp với điều kiện phòng xét nghiệm Nghiên cứu tập trung vào hai thực nghiệm xác nhận độ chụm độ phương pháp Đây hai thực nghiệm bản, yêu cầu tối thiểu để đưa phương pháp vào sử dụng Mặt khác, xét nghiệm FT4, TSH, T3 xét nghiệm thường sử dụng xét nghiệm cận lâm sàng Bộ xét nghiệm có ý nghĩa quan trọng việc chẩn đoán theo dõi điều trị bệnh lý tuyến giáp - bệnh gây rối loạn nội tiết thường gặp Tất lần chạy đưa kết nằm dải QC nên giá trị đủ điều kiện tham gia thực nghiệm Giá trị trung bình thu từ thực nghiệm mức nồng độ thấp 12,4824 pmol/L không thuộc khoảng xác nhận 13,13 - 14,15 (pmol/L) nên cần tiến hành tính độ chệch Bias Tương tự, giá trị trung bình thu từ thực nghiệm mức nồng độ cao 42,32 pmol/L không thuộc khoảng xác nhận 45,48 - 48,51 (pmol/L) nên cần tiến hành tính độ chệch Bias Độ chệch tính tốn hai mức nồng độ 8,49% 9,95 % nhỏ so với giá trị độ chệch cho phép 10 % Vậy thực nghiệm cho thấy độ phương pháp xét nghiệm định lượng FT4 phòng xét nghiệm xác nhận phù hợp với công bố nhà sản xuất 3.2.2 Đánh giá độ phương pháp xét nghiệm định lượng TSH Bảng 3.11 Kết thực nghiệm đánh giá độ phương pháp xét nghiệm định lượng TSH QC mức thấp QC mức cao 0,2573 27,977 Sai số trung bình SEx̅ 3,57×10−3 0,57 Sai số chuẩn kết hợp SEc 3,57×10−3 0,57 Bậc tự kết hợp dfc 4 Giá trị m 3,5 3,5 Giá trị TV (µIU/mL) 0,24 28,6 Khoảng xác nhận VI (µIU/mL) 0,23 - 0,25 26,605 - 30,595 Độ chệch Bias (B) (%) 7,22 Độ chệch cho phép (%) 8,3 Trung bình thực nghiệm ̅ X (µIU/mL) Tất lần chạy đưa kết nằm dải QC nên giá trị đủ điều kiện tham gia thực nghiệm Ở mức nồng độ cao, giá trị trung bình thu từ thực nghiệm 27,977 µIU/mL thuộc khoảng xác nhận 26,605 30,595 (µIU/mL) Tuy nhiên, mức nồng độ thấp, giá trị trung bình thu từ thực nghiệm 0,2573 µIU/mL khơng thuộc khoảng xác nhận mức 0,23 - 0,25 (µIU/mL) nên cần tiến hành tính độ chệch Bias Độ chệch tính toán mức nồng độ thấp 7,22 % nhỏ so với giá trị độ chệch cho 34 phép 8,3 % Vậy thực nghiệm cho thấy độ phương pháp xét nghiệm định lượng TSH phịng xét nghiệm xác nhận phù hợp với cơng bố nhà sản xuất 3.2.3 Đánh giá độ phương pháp xét nghiệm định lượng T3 Bảng 3.12 Kết thực nghiệm đánh giá độ phương pháp xét nghiệm định lượng T3 QC mức thấp QC mức cao Trung bình thực nghiệm ̅ X (nmol/L) 1,0664 3,6776 Sai số trung bình SEx̅ 0,0433 0,103 Sai số chuẩn kết hợp SEc 0,0433 0,103 Bậc tự kết hợp dfc 4 Giá trị m 3,5 3,5 Giá trị TV (nmol/L) 1,07 3,4 Khoảng xác nhận VI (nmol/L) 0,92 - 1,22 3,03 - 3,76 Tất lần chạy đưa kết nằm dải QC nên giá trị đủ điều kiện tham gia thực nghiệm Giá trị trung bình thu từ thực nghiệm mức nồng độ thấp 1,0664 nmol/L thuộc khoảng xác nhận mức nồng độ 0,92 - 1,22 (nmol/L) Tương tự, giá trị trung bình thu từ thực nghiệm mức nồng độ cao 3,6776 nmol/L thuộc khoảng xác nhận mức nồng độ 3,03 - 3,76 (nmol/L) Vậy, thực nghiệm cho thấy độ phương pháp xét nghiệm định lượng T3 phòng xét nghiệm xác nhận phù hợp với cơng bố nhà sản xuất mà khơng cần tính độ chệch Bias 35 CHƯƠNG BÀN LUẬN Ngày nay, xác nhận giá trị sử dụng phương pháp xét nghiệm việc làm cần thiết cho phòng xét nghiệm trước đưa phương pháp vào sử dụng Kết xác nhận giá trị sử dụng phương pháp sử dụng để đánh giá chất lượng độ tin cậy kết phân tích Xác nhận giá trị sử dụng phương pháp phần khơng thể thiếu để có kết xét nghiệm đáng tin cậy [1,2] Trong thực nghiệm để xác nhận phương pháp thực nghiệm xác nhận độ chụm độ hai thực nghiệm vô quan trọng Ở nghiên cứu này, tiến hành thực nghiệm xác nhận độ chụm độ phương pháp xét nghiệm định lượng FT4, TSH, T3 máy miễn dịch DxI 800 Kết nghiên cứu cho thấy phương pháp xét nghiệm đạt tiêu chuẩn độ chụm độ theo tiêu chuẩn CLSI EP15-A3 Trong thực nghiệm đánh giá độ chụm độ phương pháp, nghiên cứu áp dụng hướng dẫn EP15-A3 CLSI - hướng dẫn cung cấp quy trình để giúp phịng xét nghiệm thực xác nhận công bố nhà sản xuất cho độ chụm độ CLSI có hướng dẫn khác quy trình đánh giá độ chụm độ như: EP05 (đánh giá độ chụm), EP09 (đánh giá độ đúng), EP15-A2 (đánh giá độ chụm độ đúng) Việc sử dụng hướng dẫn EP15-A2 EP15-A3 đánh giá độ chụm độ xác nhận phương pháp việc tính tốn thống kê gặp khó khăn so với EP05 EP09, nhiên việc tiến hành thực nghiệm đơn giản nhiều, tiết kiệm thời gian chi phí mà đảm bảo độ tin cậy Mặt khác, so sánh với EP15-A2 EP15-A3 sử dụng thực nghiệm dùng số liệu cho độ chụm độ đúng, đơn giản thân thiện với người dùng Bên cạnh đó, hệ thống máy DxI 800 với phương pháp định lượng miễn dịch hóa phát quang mang lại nhiều ưu điểm: tăng diện tích tiếp xúc kháng nguyên kháng thể, độ nhạy cao, giảm thời gian phản ứng Vì mà sử dụng rộng rãi ❖ Độ chụm (Precision) Thực nghiệm xác nhận độ chụm cho phép đánh giá sai số ngẫu nhiên phương pháp sử dụng Thực nghiệm đánh giá độ chụm phương pháp xét nghiệm định lượng FT4, T3, TSH máy miễn dịch DxI 800 tiến hành 36 hai mức nồng độ sử dụng mẫu nội kiểm Thermo Scientific Theo hướng dẫn EP15-A3 CLSI, phòng xét nghiệm tiến hành thực nghiệm đánh giá độ chụm ngày, hai mức nồng độ phân tích lặp lặp lại lần ngày khoảng thời gian ngày [8] Từ số liệu thu được, tính tốn SD CV phòng xét nghiệm so sánh với giá trị nhà sản xuất Tiêu chuẩn chấp nhận độ chụm SD CV phòng xét nghiệm nhỏ giá trị mà nhà sản xuất công bố Trong trường hợp giá trị thực nghiệm tính tốn lớn so với nhà sản xuất, tiến hành tính giá trị giới hạn UVL (Upper verification limit) để so sánh Nếu SD CV phòng xét nghiệm nhỏ giá trị giới hạn UVL tính tốn độ chụm xác nhận • Đối với xét nghiệm định lượng FT4 Bảng 3.3 cho thấy mức nồng độ thấp, hệ số biến thiên CVR CVWL 2,94 % 3,71 %, hai giá trị nhỏ so với giá trị CVR CVWL mà nhà sản xuất công bố 7,5 % 10 % Tương tự, mức nồng độ cao, hệ số biến thiên CVR CVWL 3,48 % 3,866 %, hai giá trị nhỏ so với giá trị CVR CVWL mà nhà sản xuất công bố 7,5 % 10 % Vì vậy, thực nghiệm cho thấy độ chụm xét nghiệm định lượng FT4 phòng xét nghiệm xác nhận phù hợp với giá trị công bố nhà sản xuất • Đối với xét nghiệm định lượng TSH Bảng 3.6 cho thấy mức nồng độ thấp, hệ số biến thiên CVR CVWL 3,03 % 4,12 %, hai giá trị nhỏ so với giá trị CVR CVWL mà nhà sản xuất công bố 6,25 % 8,3 % Tương tự, mức nồng độ cao, hệ số biến thiên CVR CVWL 5,37 % 6,62 %, hai giá trị nhỏ so với giá trị CVR CVWL mà nhà sản xuất công bố 6,25 % 8,3 % Vì vậy, thực nghiệm cho thấy độ chụm xét nghiệm định lượng TSH phòng xét nghiệm xác nhận phù hợp với giá trị cơng bố nhà sản xuất • Đối với xét nghiệm định lượng T3 Bảng 3.9 cho thấy mức nồng độ cao, hệ số biến thiên CVR CVWL 2,751 % 6,74 %, hai giá trị nhỏ so với giá trị CVR CVWL mà nhà sản xuất công bố 6,25 % 8,3 % 37 Tuy nhiên, mức nồng độ thấp, hệ số biến thiên CVR CVWL 2,6 % 9,4 % Giá trị CVR thực nghiệm nhỏ so với giá trị CVR mà nhà sản xuất cơng bố 6,25 %, cịn giá trị CVWL thực nghiệm 9,4 % lại lớn so với giá trị CVWL mà nhà sản xuất công bố 8,3 % Lúc này, cần tiến hành tính giới hạn xác nhận UVLWL để so sánh Giá trị UVLWL tính tốn 11,537 % lớn so với giá trị CVWL thực nghiệm 9,4 % Vì vậy, thực nghiệm cho thấy độ chụm xét nghiệm định lượng T3 phòng xét nghiệm xác nhận phù hợp với giá trị công bố nhà sản xuất Kết nghiên cứu tương đồng với nghiên cứu Phạm Ngọc Mai Ly năm 2019 tiến hành nghiên cứu đánh giá giá trị sử dụng xét nghiệm định lượng FT4, TSH hệ thống Atellica Solution nghiên cứu Nguyễn Thị Phương Cúc cộng năm 2020 tiến hành xác nhận quy trình định lượng TSH hệ thống máy Perkin Elmer [2,23] ❖ Độ (Trueness) Thực nghiệm đánh giá độ cho phép đánh giá sai số hệ thống phương pháp Hướng dẫn EP15-A3 CLSI hướng dẫn việc sử dụng số liệu chạy thực nghiệm đánh giá độ chụm để đánh giá độ Dựa vào kết thực nghiệm đánh giá độ chụm, tính giá trị trung bình quan sát được, sai số chuẩn trung bình (SEx̅ ), khoảng xác nhận Tiêu chuẩn chấp nhận độ giá trị trung bình thực nghiệm nằm khoảng xác nhận Nếu giá trị trung bình quan sát nằm ngồi khoảng xác nhận tiến hành tính độ chệch Bias so sánh với độ chệch cho phép, độ chệch tính tốn nhỏ độ chệch cho phép độ phương pháp xác nhận [8] • Đối với xét nghiệm định lượng FT4 Bảng 3.12 cho thấy giá trị trung bình thu từ thực nghiệm mức nồng độ thấp 12,4824 pmol/L không thuộc khoảng xác nhận 13,13 - 14,15 (pmol/L) nên cần tiến hành tính độ chệch Bias Tương tự, giá trị trung bình thu từ thực nghiệm mức nồng độ cao 42,32 pmol/L không thuộc khoảng xác nhận 45,48 - 48,51 (pmol/L) nên cần tiến hành tính độ chệch Bias Độ chệch tính tốn hai 38 mức nồng độ 8,49 % 9,95 % nhỏ so với giá trị độ chệch cho phép 10 % Vậy thực nghiệm cho thấy độ phương pháp xét nghiệm định lượng FT4 phòng xét nghiệm xác nhận phù hợp với cơng bố nhà sản xuất • Đối với xét nghiệm định lượng TSH Bảng 3.15 cho thấy mức nồng độ cao, giá trị trung bình thu từ thực nghiệm 27,977 µIU/mL thuộc khoảng xác nhận 26,605 30,595 (µIU/mL) Tuy nhiên, mức nồng độ thấp, giá trị trung bình thu từ thực nghiệm 0,2573 µIU/mL khơng thuộc khoảng xác nhận mức 0,23 - 0,25 (µIU/mL) nên cần tiến hành tính độ chệch Bias Độ chệch tính tốn mức nồng độ thấp 7,22 % nhỏ so với giá trị độ chệch cho phép 8,3 % Vậy thực nghiệm cho thấy độ phương pháp xét nghiệm định lượng TSH phòng xét nghiệm xác nhận phù hợp với công bố nhà sản xuất Kết nghiên cứu tương đồng với nghiên cứu Nguyễn Thị Phương Cúc cộng năm 2020 tiến hành xác nhận quy trình định lượng TSH hệ thống Perkin Elmer [2] • Đối với xét nghiệm định lượng T3 Bảng 3.18 cho thấy giá trị trung bình thu từ thực nghiệm mức nồng độ thấp 1,0664 nmol/L thuộc khoảng xác nhận mức nồng độ 0,92 - 1,22 (nmol/L) Tương tự, giá trị trung bình thu từ thực nghiệm mức nồng độ cao 3,6776 nmol/L thuộc khoảng xác nhận mức nồng độ 3,03 - 3,76 (nmol/L) Vậy thực nghiệm cho thấy độ phương pháp xét nghiệm định lượng T3 phịng xét nghiệm xác nhận phù hợp với cơng bố nhà sản xuất mà khơng cần tính độ chệch Bias 39 KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu “Xác nhận độ chụm độ phương pháp xét nghiệm định lượng FT4, TSH, T3 huyết tương máy miễn dịch DxI 800 Khoa Sinh hóa Bệnh viện E” cho thấy: - Độ chụm phương pháp xác nhận phù hợp với điều kiện phòng xét nghiệm Khoa Sinh hóa Bệnh viện E - Độ phương pháp xác nhận phù hợp với điều kiện phịng xét nghiệm Khoa Sinh hóa Bệnh viện E 40 KIẾN NGHỊ Có thể tiếp tục thực thêm thực nghiệm xác định khoảng tham chiếu khoảng tuyến tính để hồn thiện quy trình xác nhận phương pháp định lượng Hướng dẫn EP15-A3 Viện Tiêu chuẩn Lâm sàng Cận Lâm sàng Y học cách tiếp cận đơn giản khả thi, nên khuyến cáo cho phòng xét nghiệm sử dụng việc xác nhận giá trị sử dụng phương pháp xét nghiệm trước đưa phương pháp vào sử dụng 41 10 11 12 13 14 15 16 TÀI LIỆU THAM KHẢO Trần Cao Sơn, Phạm Xuân Đà Thẩm định phương pháp phân tích hóa học vi sinh vật 2018:103 Nguyễn Thị Phương Cúc, Trần Thị Chi Mai Áp dụng hướng dẫn EP15A3 CLSI xác nhận phương pháp định lượng TSH sàng lọc sơ sinh Tạp chí nghiên cứu y học 2020 p 26 An Ngọc Nâng cao chất lượng xét nghiệm thẩm định phương pháp Tạp chí YDLS 108 2/11 2018; Phd James O Westgard Basic Method Validation, 3rd Edition Westgard QC Third Edition Trần Thị Chi Mai Tổng quan thẩm định/xác nhận phương pháp 2022 Quản Lý Chất Lượng Và Đảm Bảo Chất Lượng Yêu cầu chung lực phòng thử nghiệm hiệu chuẩn TCVN ISO/IEC 17025 : 2007 2008; Phan Thị Thanh Hải Xác nhận giá trị sử dụng so sánh phương pháp số xét nghiệm hai hệ thống máy hóa sinh miễn dịch 2020; Clinical Laboratory Standard Institute EP15-A3 User Verification of Precision and Estimation of Bias; Approved Guideline-Third Edition 2014;Approved Guideline—Third Edition CLSI document EP15A3 Đặng Minh Châu Áp dụng hướng dẫn EP15A3 CLSI xác nhận độ tập trung độ xác cho số số miễn dịch máy ROCHE COBAS 8000 Tạp chí nghiên cứu y học 2020; Clinical and Laboratory Standards Institute Evaluation of Detection Capability for ClinicalLaboratory Measurement Procedures; Approved Guideline - Second Edition CLSI document EP17A2 2012; Clinical and Laboratory Standards Institute (Clsi) Defining, Establishing, and Verifying Reference Intervals in the Clinical Laboratory; Approved Guideline—Third Edition CLSI EP28-A3C 2008; Ph.D R Neill Carey Xác minh độ xác ước tính độ chệch 2015; R Confalonieri, M.Foi Development of an app for estimating leaf area index using a smartphone Trueness and precision determination and comparison with other indirect methods ELSEVIER 2013:8 Minoru Sanda, Keita Miyoshi, Kazuyo Baba Trueness and precision of digital implant impressions by intraoral scanners: a literature review International Journal of Implant Dentistry 2021/07/27 2021;7(1):97 doi:10.1186/s40729-021-00352-9 Phạm Thị Minh Đức Sinh Lý Học (Dùng Cho Đào Tạo Cử Nhân Điều Dưỡng).254 Mohammad Azim, Mizanul Hasan, Israque Ansari Chemiluminescence Immunoassay: Basic Mechanism and Applications Bangladesh Journal of Nuclear Medicine 01/10 2018;18:171 17 18 19 20 21 22 23 Phương pháp miễn dịch định lượng 2014; L Cinquanta, D E Fontana, N Bizzaro Chemiluminescent immunoassay technology: what does it change in autoantibody detection? Auto Immun Highlights Dec 2017;8(1):9 doi:10.1007/s13317-017-0097-2 Beckman Coulter Access Immunoassay System In-Lab Training Manual 2017:119 Beckman Coulter Total T3 2020; Beckman Coulter Free T4 2021; Beckman Coulter TSH (3rd IS) 2020; Phạm Ngọc Mai Ly Xác nhận giá trị sử dụng phương pháp xét nghiệm định lượng FT4, TSH hệ thống Atellica Solution 2019; PHỤ LỤC Bảng tra cứu p 𝒅𝒇𝑾𝑳 cho lần chạy xét nghiệm (Bảng EP15-A3) lần chạy p 𝒅𝒇𝑾𝑳 2,74 2,06 1,78 1,62 1,51 1,43 10 1,37 11 1,32 12 1,28 13 1,24 14 1,21 15 1,19 16 1,16 17 1,14 18 1,12 19 1,1 20 1,08 21 1,05 22 1,03 23 24 PHỤ LỤC Bảng tra cứu giới hạn xác minh UVL (F) tương ứng với bậc tự DF (Bảng EP15-A3) Số lượng mẫu đánh giá DF 1,49 1,60 1,66 1,71 1,74 1,76 1,45 1,55 1,61 1,65 1,67 1,70 1,42 1,51 1,56 1,60 1,62 1,65 1,39 1,48 1,53 1,56 1,58 1,60 1,37 1,45 1,50 1,53 1,55 1,57 10 1,35 1,43 1,47 1,50 1,52 1,54 11 1,34 1,41 1,45 1,48 1,50 1,52 12 1,32 1,39 1,43 1,46 1,48 1,49 13 1,31 1,38 1,42 1,44 1,46 1,47 14 1,30 1,37 1,40 1,42 1,44 1,46 15 1,29 1,35 1,39 1,41 1,43 1,44 16 1,28 1,34 1,38 1,40 1,41 1,43 17 1,27 1,33 1,36 1,39 1,40 1,41 18 1,27 1,32 1,35 1,37 1,39 1,40 19 1,26 1,31 1,34 1,36 1,38 1,39 20 1,25 1,31 1,34 1,36 1,37 1,38 21 1,25 1,30 1,33 1,35 1,36 1,37 22 1,24 1,29 1,32 1,34 1,35 1,36 23 1,24 1,29 1,31 1,33 1,35 1,36 24 1,23 1,28 1,31 1,32 1,34 1,35 25 1,23 1,28 1,30 1,32 1,33 1,34 26 1,22 1,27 1,30 1,31 1,32 1,34 27 1,22 1,26 1,29 1,31 1,32 1,33 28 1,22 1,26 1,28 1,30 1,31 1,32 29 1,21 1,26 1,28 1,30 1,31 1,32 30 1,21 1,25 1,27 1,29 1,30 1,31 31 1,20 1,25 1,27 1,29 1,30 1,31 32 1,20 1,24 1,27 1,28 1,29 1,30 33 1,20 1,24 1,26 1,28 1,29 1,30 34 1,20 1,24 1,26 1,27 1,28 1,29 PHỤ LỤC Bảng tra cứu hệ số Grubbs (G) 𝒏𝟎 cho lần chạy (Bảng EP15-A3) lần chạy N G 𝒏𝟎 23 3,087 4,565 24 3,112 4,792 25 3,135 PHỤ LỤC BIỂU MẪU THU THẬP SỐ LIỆU Bệnh viện E Khoa Sinh hóa Máy: Xét nghiệm miễn dịch tự động Beckman Coulter Unicel DxI 800 Tên xét nghiệm: Đơn vị kết : Mức nồng độ QC Số lô Dải QC Lần thực QC mức thấp LIA24091A QC mức cao LIA24093A Kết thực / ./ ./ ./ ./