(Luận Văn) Đánh Giá Khả Năng Sinh Kháng Sinh Của Xạ Khuẩn Nội Cộng Sinh Trên Cây Quế Thu Thập Tại Tỉnh Yên Bái

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - - a lu n n va HỒNG THỊ TRỊN tn to p ie gh Tên đề tài: ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG SINH KHÁNG SINH CỦA XẠ KHUẨN d oa nl w NỘI CỘNG SINH TRÊN CÂY QUẾ THU THẬP TẠI TỈNH YÊN BÁI a lu f an nv KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC oi lm ul Hệ đào tạo at nh : Chính quy z Chun ngành : Cơng nghệ sinh học : CNSH - CNTP @ : 2011 - 2015 om l.c gm Khóa học z Khoa an Lu Thái Nguyên - 2015 n va ac th si ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - - a lu HỒNG THỊ TRỊN n n va tn to Tên đề tài: p ie gh ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG SINH KHÁNG SINH CỦA XẠ KHUẨN NỘI CỘNG SINH TRÊN CÂY QUẾ THU THẬP TẠI TỈNH YÊN BÁI oa nl w d KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC f an nv a lu Hệ đào tạo oi lm ul : Chính quy : Cơng nghệ sinh học Khoa : CNSH - CNTP at : 2011 - 2015 z Khóa học nh Chuyên ngành z Giảng viên hƣớng dẫn : TS Phí Quyết Tiến om l.c gm @ TS Trần Văn Chí an Lu Thái Nguyên - 2015 n va ac th si i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian thực đề tài nghiên cứu này, nhận giúp đỡ tận tình thầy cán khoa học Phịng Cơng nghệ lên men, Viện Cơng nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Với lịng biết ơn sâu sắc tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới thầy giáo TS Phí Quyết Tiến - Trưởng phịng Cơng nghệ lên men, Viện Công nghệ a lu sinh học, người hướng dẫn cách tiếp cận vấn đề suốt trình n thực đề tài va n Đồng thời gửi lời cảm ơn ThS Vũ Hạnh Nguyên, ThS Quách tn to Ngọc Tùng cán Phịng Cơng nghệ lên men, người tận tình p ie gh bảo, giúp đỡ, tạo điều kiện cho tơi suốt q trình thực tập tốt nghiệp Tôi xin gửi lời cảm ơn thầy giáo TS Trần Văn Chí thầy oa nl w cô giáo Khoa Công nghệ sinh học Công nghệ thực phẩm, thầy cô, cán trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên giúp đỡ trang d f an nghiên cứu nv a lu bị kiến thức hữu ích đồng hành tơi suốt thời gian học tập oi lm ul Cuối cùng, tơi xin gửi lời tri ân tới gia đình, bạn bè, người giúp đỡ động viên tạo điều kiện cho tơi suốt q trình thực tập at nh z Thái Nguyên, ngày 25 tháng năm 2014 z om l.c gm @ Sinh viên Hồng Thị Trịn an Lu n va ac th si ii DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1: Các kháng sinh từ xạ khuẩn nội cộng sinh dược liệu 11 Bảng 3.1: Các thiết bị sử dụng nghiên cứu 19 Bảng 3.2: Trình tự cặp mồi sử dụng phản ứng PCR khuếch đại gen 16S rDNA 24 Bảng 4.1: Số liệu thống kê khả kháng vi sinh vật kiểm định 105 chủng xạ khuẩn nội cộng sinh 26 Bảng 4.2: Khuếch đại gen mã hóa PKS-I, PKS-II, NRPS khả sinh a lu n anthracyline 36 chủng xạ khuẩn nội cộng sinh 31 n va Bảng 4.3: Đặc điểm hình thái chủng YBQ75 mơi trường nuôi cấy tn to khác 34 p ie gh Bảng 4.4: Khả đồng hóa nguồn cacbon, nitơ chủng YBQ75 sau 7-10 ngày nuôi cấy 30ºC 36 oa nl w Bảng 4.5: Ảnh hưởng nồng độ muối, nhiệt độ, pH đến sinh trưởng chủng YBQ75 37 d a lu Bảng 4.6: Phân tích trình tự gen mã hóa gen mã hóa 16S rDNA chủng xạ f an nv khuẩn YBQ75 40 oi lm ul at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th si (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi iii DANH MC HÌNH Hình 2.1: Ảnh qt hiển vi điện tử bề mặt dưa chuột sau ngày gây nhiễm với Streptomyces sp MBCu-56 (A) Hệ sợi bề mặt (B) Hệ sợi xạ khuẩn xâm nhập phát triển trên, bề mặt lớp biểu bì Hình 4.1: Hoạt tính kháng P vulgaris (A), S epidermidis ATTC 12228 (B) số chủng xạ khuẩn nội cộng sinh 28 Hình 4.2: Điện di đồ sản phẩm PCR khuếch đại gen pks-I số chủng a lu xạ khuẩn đại diện 29 n Hình 4.3: Điện di đồ sản phẩm PCR khuếch đại gen pks-II số chủng n va xạ khuẩn đại diện 29 tn to Hình 4.4: Điện di đồ sản phẩm PCR khuếch đại gen nrps số chủng xạ p ie gh khuẩn đại diện 30 Hình 4.5: Sự thay đổi màu sắc theo pH môi trường chủng YB50 YB80 oa nl w thời điểm trước (A, C) sau (B, D) thử phản ứng màu d Hình 4.6: Hình thái khuẩn lạc (A) mơi trường ISP2 hình ảnh bề mặt nv a lu 20.000 lần (C) chủng YBQ75 35 f an Hình 4.7: Điện di đồ sản phẩm PCR gel agarose 1,0% 38 oi lm ul at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi si (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi iv DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT STT Tên đầy đủ Từ viết tắt a lu n n va rDNA ADN ribosome Bp Cặp bazơ (base pair) DNR Daunorubicin DNA Deoxyribonucleic acid DOX Doxorubicin EPI Epirubicin IDA Idarumycin KTCC Khuẩn ty chất KTKS Khuẩn ty khí sinh p ie gh tn to Kb Kilo bazơ NRPS Nonribosomal peptide synthetase 12 PCR 13 PKS-II 14 PKS-I 15 VSV d 11 oa nl w 10 f an nv a lu Phản ứng chuỗi polymerase (polymerase chain reaction) oi lm ul Polyketide synthase II Polyketide synthases I nh at Vi sinh vật z z om l.c gm @ an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi si (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi v MC LC PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Ý nghĩa đề tài PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Xạ khuẩn nội cộng sinh thực vật a lu 2.1.1 Xạ khuẩn nội cộng sinh mối tương tác xạ khuẩn với chủ n 2.1.2 Đặc điểm sinh học phân loại xạ khuẩn n va 2.1.3 Tiềm ứng dụng xạ khuẩn nội cộng sinh tn to 2.2 Khả sinh chất kháng sinh xạ khuẩn nội cộng sinh số gen p ie gh chức liên quan 11 2.2.1 Khả sinh chất kháng sinh xạ khuẩn nội cộng sinh 11 oa nl w 2.2.2 Một số gen chức liên quan đến sinh tổng hợp kháng sinh 12 2.2.3 Kháng sinh thuộc nhóm anthracycline 13 d nv a lu 2.3 Tình hình nghiên cứu xạ khuẩn nội cộng sinh 14 f an 2.3.1 Tình hình nghiên cứu giới 14 oi lm ul 2.3.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 16 2.4 Cây quế tiềm khai thác xạ khuẩn nội cộng sinh quế 17 at nh PHẦN 3: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 18 z 3.1 Vật liệu nghiên cứu 18 z 3.1.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 18 gm @ 3.1.2 Hóa chất 18 om l.c 3.1.3 Thiết bị 18 3.1.4 Môi trường nuôi cấy 19 an Lu 3.2 Địa điểm thời gian tiến hành 19 n va ac th (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi si (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi vi 3.3 Nội dung nghiên cứu 19 3.4 Phương pháp nghiên cứu 20 3.4.1 Tuyển chọn chủng xạ khuẩn có hoạt tính kháng vi sinh vật 20 3.4.2 Xác định khả sinh anthracyline 21 3.4.3 Khuếch đại gen mã hóa PKS-I, PKS-II, NRPS xạ khuẩn 21 3.4.4 Nghiên cứu đặc điểm sinh học chủng xạ khuẩn 22 3.4.5 Phân loại chủng xạ khuẩn YBQ75 dựa phân tích trình tự gen 16S rDNA 24 a lu PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 26 n 4.1 Tuyển chọn chủng xạ khuẩn có hoạt tính kháng vi sinh vật 26 n va 4.2 Xác định gen mã hóa PKS-I, PKS-II, NRPS tham gia sinh tổng hợp tn to kháng sinh 28 p ie gh 4.3 Sàng lọc xạ khuẩn sinh kháng sinh thuộc nhóm anthraycycline 33 4.4 Đặc điểm sinh học phân loại chủng xạ khuẩn YBQ75 33 oa nl w 4.4.1 Đặc điểm hình thái bề mặt chuỗi bào tử xạ khuẩn YBQ75 34 4.4.2 Đặc điểm sinh hóa xạ khuẩn YBQ75 35 d nv a lu 4.4.3 Khuếch đại phân tích trình tự gen 16S rDNA xạ khuẩn YBQ75 f an 38 oi lm ul PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 40 5.1 Kết luận 41 at nh 5.2 Kiến nghị 41 z TÀI LIỆU THAM KHẢO 41 z om l.c gm @ PH LC an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi si (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi PHN M U 1.1 t đề Vi khuẩn gây bệnh có khả kháng thuốc vấn đề vô nghiêm trọng mối quan tâm lớn cộng đồng Vì vậy, việc nghiên cứu, lựa chọn tác nhân kháng khuẩn từ tự nhiên ưu tiên hàng đầu nhà khoa học công ty dược phẩm giới Để đáp ứng nhu cầu tại, nhà khoa học khơng ngừng tìm kiếm nguồn phân lập a lu nhằm thu nhận hợp chất tự nhiên để phát triển, bào chế loại n kháng sinh chống lại bệnh vi sinh vật gây va n Nhiều nghiên cứu chứng minh thực vật nguồn tự nhiên quan trọng tn to điều trị bệnh gây vi sinh vật Một số loài thực vật p ie gh sử dụng phổ biến quế tinh dầu quế Cây quế (Cinamomum loureirii) chứa dược chất tinh dầu lá, vỏ với 90% oa nl w cinnamaldehyde có hoạt tính kháng khuẩn cao vi khuẩn Gram (+) vi khuẩn Gram (-) (Staphylococcus, Micrococcus, Bacillus, Enterobacter) d nv a lu Các nghiên cứu chứng minh tinh dầu quế cịn có tính chất chống f an đau, co mạch, làm tăng tiết, tăng nhu động ruột, chống oxy hóa với hiệu oi lm ul 55,94 66,9% dùng nồng độ 100 200 ppm [2] Ngoài số hoạt chất eugenol, cinnamaldehyde, carvacrol tinh dầu quế có khả at nh kháng vi sinh vật gây bệnh như: methicillin-resistant Staphylococcus z aureus, Klebsiella pneumoniae Ngoài giá trị dược lý thành phần z mang lại, quế cịn mơi trường sinh trưởng xạ khuẩn nội sinh Xạ gm @ khuẩn nội cộng sinh xạ khuẩn từ vùng rễ xâm nhập vào rễ, thân, om l.c mà không gây hại hay cạnh tranh dinh dưỡng với chủ [24] Các hợp chất có hoạt tính sinh học từ xạ khuẩn nội cộng sinh chứng minh l rt a an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi si (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi dng v mt s lng v hot tính sinh học như: chất kháng sinh, kháng ung thư, chống oxy hóa, chất diệt cỏ [19] Polyketide nhóm chất đại diện cho sản phẩm trao đổi chất bậc hai sản xuất vi khuẩn, nấm, xạ khuẩn thực vật [38] Trong đó, polyketide synthase II (PKS-II) tham gia tổng hợp cấu trúc chuỗi polyketide polyketide synthase I (PKS-I) chịu trách nhiệm tạo khung polyketide hoàn chỉnh Và nonribosomal peptide synthetase (NRPS) sinh tổng hợp sản phẩm trao đổi chất bậc hai không thông qua ribosome tạo dạng a lu peptide nhờ trình tổng hợp protein acid amin n Cho đến nay, số lượng nghiên cứu xạ khuẩn nội cộng sinh n va quế nói riêng dược liệu nói chung cịn hạn chế Đồng thời, tn to nghiên cứu gen mã hóa PKS-I, PKS-II, NRPS nhằm sàng lọc, đánh p ie gh giá khả sinh tổng hợp sản phẩm thứ cấp từ xạ khuẩn nội cộng sinh Việt Nam bỏ ngỏ Xuất phát từ định hướng trên, oa nl w thực nghiên cứu đề tài: "Đánh giá khả sinh kháng sinh xạ khuẩn nội cộng sinh quế thu thập tỉnh Yên Bái" d nv a lu 1.2 Mục tiêu nghiên cứu f an Đánh giá khả kháng vi sinh vật kiểm định xác định có mặt oi lm ul gen liên quan đến tổng hợp kháng sinh chủng xạ khuẩn nội công sinh phân lập quế tỉnh Yên Bái at z * Ý nghĩa khoa học nh 1.3 Ý nghĩa đề tài z Đề tài kế thừa kết số nghiên cứu trước nhóm nghiên @ gm cứu, kế thừa kết nghiên cứu nước lĩnh vực khai om l.c thác nguồn tài nguyên vi sinh vật, nguồn hợp chất kháng sinh, kháng ung thư Đề tài chọn đối tượng thực vật nghiên cứu quế nhiều an Lu nghiên cứu trước đây, đặc biệt liên quan đến nghiên cứu tách chit tinh du n va ac th (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi si (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi 37 L-Histidine monohydrate, L-Valin, L-Lysin, amino hydroxy-methyl 1,3 promo 4.4.2.2 Ảnh hưởng nồng độ muối, pH, nhiệt độ đến sinh trưởng chủng xạ khuẩn YBQ75 Sinh trưởng chủng YBQ75 môi trường Bennett điều kiện thí nghiệm thay đổi nồng độ muối, pH nhiệt độ thể bảng 4.5 Bảng 4.5: Ảnh hƣởng nồng độ muối, nhiệt độ, pH đến sinh trƣởng a lu chủng YBQ75 n n va Khả sinh trƣởng 15 – 40 Sinh trƣởng tối ƣu 30 Nồng độ muối (%) 0–5 pH ban đầu – 10 p ie gh tn to Điều kiện sinh trƣởng Nhiệt độ (oC) Bảng 4.5 cho thấy, chủng YBQ75 sinh trưởng tốt dải nhiệt độ từ oa nl w 15-40ºC tối thích 30ºC Có thể kết luận chủng thuộc nhóm ưa ấm d kết phù hợp với nguồn gốc phân lập mẫu (tỉnh Yên Bái) nv a lu Trong mơi trường có nồng độ muối cao, xảy tượng nước f an tế bào làm thay đổi khả trao đổi chất tế bào, ức chế khả oi lm ul sinh trưởng hay tổng hợp sản phẩm trao đổi chất xạ khuẩn Chủng YBQ75 sinh trưởng tốt dải nồng độ muối từ – 5% phát tiển tối thích at nh nồng độ 2% z Chủng YBQ75 phát triển mơi trường có dải pH từ 5-10, z gm @ phát triển tốt pH Điều phù hợp với nghiên cứu trước cho xạ khuẩn thuộc nhóm vi sinh vật phát triển tốt môi trường om l.c trung tính Các giá trị pH cần cho sinh trưởng sinh sản tương ứng với giá trị pH cần cho hoạt động nhiều enzyme, biến đổi dù nhỏ an Lu nồng độ ion H+ OH- ảnh hưởng mạnh đến vi sinh vt Do vy vic n va ac th (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi si (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi 38 xỏc nh pH thớch hp ban u việc trì pH cần thiết thời gian sinh trưởng vi sinh vật cần thiết Ảnh hưởng pH lên trình hoạt động vi sinh vật kết tác động qua lại ion H+ enzyme nội bào Đây đặc điểm có ý nghĩa quan trọng việc ứng dụng xạ khuẩn lên men thu nhận hợp chất có hoạt tính kháng sinh, kháng u Đối chiếu đặc điểm phân loại chủng xạ khuẩn YBQ75 dựa vào khóa định tên lồi xạ khuẩn Nomomura 1976 Gause 1983 cho thấy a lu YBQ75 thuộc chi Streptomyces n 4.4.3 Khuếch đại phân tích trình tự gen 16S rDNA xạ khuẩn n va YBQ75 tn to 4.4.3.1 Khuếch đại gen 16S rDNA p ie gh Để phân loại chủng YBQ75 đến lồi, nghiên cứu giải phân tích trình tự 16S rDNA thực DNA tổng số chủng xạ khuẩn YBQ75 oa nl w (Phụ lục 2) sử dụng làm vật liệu di truyền cho nghiên cứu khuếch đại gen 16S rDNA, kết thể hình 4.7 d f an nv a lu oi lm ul Băng M: thang DNA chuẩn (Thermo scientific, Mỹ); Băng 1: at nh Đối chứng âm; Băng 2: Sản phẩm z PCR sử dụng khuôn DNA z om l.c gm @ gen chủng YBQ75 an Lu Hình 4.7: Điện di đồ sản phẩm PCR trờn gel agarose 1,0% n va ac th (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi si (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi 39 Kt qu khuch i gen 16S rDNA ca chủng YBQ75 cho thấy, sản phẩm PCR cho băng rõ nét có kích thước khoảng 1,4kb (Hình 4.7) Như vậy, sản phẩm PCR thu thí nghiệm đặc hiệu, đáp ứng yêu cầu cho tinh giải trình tự gen 16S rDNA 4.4.3.2 Phân tích trình tự gen 16S rDNA Trình tự gen 16S rDNA chủng YBQ75 nhận từ nghiên cứu trình bày (phụ lục 4) Kết phân tích trình tự gen 16S rDNA chủng xạ khuẩn trình bày bảng 4.6 Bảng 4.6: Phân tích trình tự gen mã hóa gen mã hóa 16S rDNA a lu n n va tn to chủng xạ khuẩn YBQ75 Trình tự gen 16S rDNA chủng xạ Mã số truy cập khuẩn đƣợc so sánh GenBank Streptomyces cavourensis NRRL 2740 NR 043851.1 Độ tƣơng đồng (%) 100 NR 112345.1 100 Streptomyces albolongus NBRC 13465 NR 041144.1 99 NR 074561.1 99 p ie gh Streptomyces cavourensis NBRC 13026 oa nl w Streptomyces sp SirexAA-E d Kết phân tích trình tự gen 16S rDNA so sánh với trình tự gen a lu nv công bố Genbank công cụ BLAST (NCBI) cho thấy: gen 16S rDNA f an chủng YBQ75 có độ tương đồng cao (100%) so với gen tương ứng rDNA ul oi lm chủng Streptomyces cavourensis (Bảng 4.6) Dựa vào kết nghiên cứu đặc điểm hình thái, sinh lý-sinh hóa phân tích trình tự gen 16S rDNA, nh at chủng xạ khuẩn YBQ75 định danh Streptomyces cavourensis YBQ75 z Theo công bố trước đây, loài Streptomyces cavourensis phát z gm @ lần vào năm 1978, nhóm xạ khuẩn phổ biến tự nhiên, om l.c thường phân lập từ đất vùng rễ loại thực vật hay mơi trường nước Ngồi ra, chủng xạ khuẩn cịn có khả sinh chromomycin, vi khuẩn nấm, ung thư [42] an Lu flavensomycin-loại kháng sinh sử dụng rộng rãi điều trị bệnh gây n va ac th (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi si (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi 40 PHN KT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận - Đã đánh giá khả kháng VSV kiểm định 105 chủng xạ khuẩn nội cộng sinh quế Từ đó, tuyển chọn 36 chủng xạ khuẩn có khả kháng loại VSV số loại VSV kiểm định - Đã xác định có mặt gen pks-I, pks-II, nrps tham gia sinh a lu tổng hợp kháng sinh 36 chủng xạ khuẩn tuyển chọn Trong đó, chủng n n va mang gen pks-I (chiếm 25%), 19 chủng mang gen pks-II (chiếm 52,8%), 13 tn to chủng xuất gen nrps (chiếm 36,1%); 04 chủng xạ khuẩn ký hiệu: YBQ59, YBQ63, YBQ75, YBQ94 mang ba gen mã hóa PKS-I, PKS-II, p ie gh NRPS oa nl w - Đã xác định 30 chủng tổng số 36 xạ khuẩn nghiên cứu có khả sinh kháng sinh thuộc nhóm anthracyline d - Chủng YBQ75 có khả sinh kháng sinh phổ rộng, hoạt tính cao nv a lu phân loại thuộc loài Streptomyces cavourensis dựa phân tích đặc f an điểm sinh học trình tự gen 16S rDNA Do đó, chủng YBQ75 định 5.2 Kiến nghị oi lm ul danh Streptomyces cavourensis YBQ75 at nh Tiếp tục nghiên cứu tối ưu thành phần môi trường, điều kiện lên men z nhằm thu nhận kháng sinh chủng Streptomyces cavourensis YBQ75 z om l.c gm @ an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi si (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi 41 TI LIU THAM KHO Ti liu ting Việt Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty (2007) Vi sinh vật học NXB Giáo dục Nguyễn Minh Khởi, Đào Văn Đơn, Hồng Văn Lương, Trần Minh Ngọc, “Chiết xuất phân lập số phenollic glycosid từ quế chi Việt Nam (cinnamomum cassia blume)” a lu Quách Ngọc Tùng, Khiếu Thị Nhàn, Chu Kỳ Sơn, Phạm Thanh Huyền, Vũ n Thị Hạnh Nguyên, Trương Quốc Phong, Nguyễn Tiến Thành, Vũ Thu va n Trang, Phí Quyết Tiến (2014), “Đa dạng di truyền xạ khuẩn nội cộng p ie gh tn to sinh phân lập từ quế tỉnh Hịa Bình”, Tạp chí Khoa học Công nghệ, 52 (5B), 577-582 Quách Ngọc Tùng, Khiếu Thị Nhàn, Chu Kỳ Sơn, Vũ Thị Hạnh Nguyên, oa nl w Vũ Thu Trang, Phí Quyết Tiến (2014), “Đánh giá sang lọc xạ khuẩn nội cộng sinh quế có khả kháng vi sinh vật gây bệnh”, Tạp chí d nv a lu Công nghệ Sinh học, 12 (2), 365-371 f an Văn Thị Phương Như, Cao Ngọc Điệp (2013), “Phân lập đặc tính vi oi lm ul khuẩn nội cộng sinh lúa (Oryza sativa L.) trồng đất tỉnh Phú Yên, Việt Nam”, Hội nghị Khoa học Cơng nghệ sinh học tồn quốc, at z Tài liệu tiếng Anh nh (2), 450-454 z gm @ Abebe B, Feleke M, Berhanu A (2013), “Isolation and screening of antibiotic producing actinomycetes from soils in Gondar town, North West om l.c Ethiopia”, Asian Pac J Trop Dis 3(5), 375-381 Ajit K, Passari, Vineet K, Mishra, Ratul S, Vijai K, Gupta and Bhim P, an Lu Singh (2015), “Isolation, abundance and phylogenetic affiliation of n va ac th (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi si (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi 42 endophytic actinomycetes associated with medicinal plants and screening for their in vitro antimicrobial biosynthetic potential”, Front Microbiol (273), 1-13 Bacon CW, White JF (2000) Microbial endophytes, New York, Marcel Dekker Bérdy J (2005), “Bioactive microbial metabolites”, J Antibiot, (58),1-26 10 Cane DE (1997), “A special thematic issue on polyketide and nonribosomal polypeptide biosynthesis, Chem Rev, (97), 2463-2706 a lu 11 Compant S, Duffy B, Nowak J, Clément C, Barka EA (2005), “Use of n plant growth-promoting bacteria for biocontrol of plant diseases: va n principles, mechanisms of action, and future prospects”, Appl Environ p ie gh tn to Microbiol, (71), 4951-4959 12 Duong Minh Lam, Nguyen Dinh Viet and Tong Thi Mo (2014), “Screening for anticancer producing endophytic actinomycetes in three oa nl w mangrove plant species”, Chemical and Biological Sci, 59(9), 114-122 13 Franco C, Michelsen P, Percy N, Conn V, Listiana E, Moll S, Loria R, d nv a lu Coombs J (2007), “Actinobacterial endophytes for improved crop f an performance”, Australas Plant Pathol, (36), 524-531 oi lm ul 14 Gangwar M, Dogra S and Sharma N (2011), “Antagonistic Bioactivity of Endophytic Actinomycetes Isolated from Medicinal Plants”, Journal of at nh Advanced Laboratory Research in Biology, 2(4), 154-157 z 15 Gewirtz DA (1999), “A critical evaluation of the mechanism of action z @ proposed for the antitumor effects of the anthracycline antibiotics gm adriamycin and daunorubicin”, Biochem Pharmacol, (57), pp 727-741 om l.c 16 Giorgio M, Pierantonio M, Emanuela S, Gaetano C, Luca G (2004), “Anthracycline: Molecular Advances and pharmacologic developments in an Lu antitumor activity and cardiotixicity”, Pharmacol Rew, (56), 185-229 n va ac th (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi si (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi 43 17 Gontang EA, Gaudencio SP, Fenical W, Jense PR (2010), “Sequencebased analysis of secondary-metabolite biosynthesis in marine actinobacteria”, Appl Environ Microbiol, 76(8), 2487-2499 18 Hadacek F, Greger H (2000), “Testing of antifungal natural products: Methodologies, comparability of results and assay choice”, Phytochem Anal, (11), 137-147 19 Higashide E, Asai M, OotsuK TS, Kozay Y, Hasegawa T, Kishi T, Sugino Y, Yoneda M (1977), “Ansamitocins, a group of novel a lu maytansinoid antibiotics with antitumour properties from Nocardia”, n Nature (270), 721-722 n va 20 Igarashi Y (2004), “Screening of novel bioactive compounds from plant- p ie gh tn to associated actinomycetes”, Actinomycetologica (18), 63-66 21 Jeffrey EJ and Guy TC “Biosynthetic (2010), Potential of Phylogenetically Unique Endophytic Actinomycetes from Tropical Plants”, oa nl w Applied and environmental Microbiology p, 4377-4386 22 Kakadumycins, “Novel antibiotics from Streptomyces sp NRRL d f an (234), 183-190 nv a lu 30566, an endophyte of Grevillea pteridifolia”, FEMS Microbiol Lett oi lm ul 23 Kupchan SM, Komoda Y, Court WA, Thomas GJ, Smith RM, Karim A, Gilmore CJ, Haltiwanger RC, Bryan RF (1972), “Maytansine, a novel z (94), 1355-1356 at nh antileukaemic ansa macrolide from Maytenus ovatus”, J Am Chem Soc z @ 24 Li J, Zhao GZ, Chen HH, Wang HB, Qin S, Zhu WY,Xu LH, Jiang CL, gm Li WJ (2008), “Antitumour and antimicrobial activities of endophytic Microbiol (47), 574-580 om l.c Streptomycetes from pharmaceutical plants in rainforest”, Lett Appl an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi si (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi 44 25 Li Y , Kam SL , Wang H , Wong EY , Ooi VE (2006), “Antimicrobial activities of cinnamon oil and cinnamaldehyde from the Chinese medicinal herb Cinnamomum cassia Blume”, Am J Chin Med 34(3), 511-522 26 Loria R, Bukhalid RA, Fry BA, King RR (1997), “Plant pathogenecity in the genus Streptomyces”, Plant Dis (81), 836-846 27 Lu CH, Shen YM (2007), “A novel ansamycin, naphthomycin K from Streptomyces sp J”, Antibiot (60), 649-653 28 Mahera MS, Sulaiman AA, Ismet A, Milton W (2013), “Evaluation of a lu antibiotic producing genes in Streptomyces isolated from a desert n environment of Saudi Arabia”, Life Sci J 10(4), 974-980 n va 29 Marahiel MA, Stachelhaus T, and Mootz HD (1997), “Modular pep-tide p ie gh tn to synthetases involved in nonribosomal peptide synthesis”, Chem Rev (97), 2651-2673 30 Matsukuma S, okuda T, Watanabe J (1994), “Isolation of actinomycetes oa nl w from pine litter layers”, Actinomycetologica (8) 57-65 31 Meguro A; Ohmura Y, Hasegawa S, Shimizu M, Nishimura T & Kunoh H d nv a lu (2006), “An endophytic actinomycete, Streptomyces sp MBR-52, that f an accelerates emergence and elongation of plant adventitious roots”, oi lm ul Actinomycetologica (20), 1-9 32 Munumbicins, “Wide-spectrum antibiotics produced by Streptomyces at nh NRRL 30562, endophytic on Kennedia nigriscans”, Microbiology, (148), z 2675-2685 z 33 Nduka O (2007),“Modern Industrial Microbiology and Biotechnology”, gm @ Science, Enfield, pp 429-453 om l.c 34 Nimnoi P, Pongsilp N, Lumyong S (2010), “Endophytic actinomycetes isolated from Aquilaria crassna Pierre ex Lec and screening of plant growth an Lu promoters production”, World J Microbiol Biotechnol (26), 193-203 n va ac th (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi si (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi 45 35 Priham TG and Tenser HD (1974), ”Streptomyces Waksman and first and second studies”, Int J Syst Bacteriol (18,) 279 36 Pullen C, Schmitz P, Meurer K, Bamberg DD, Lohmann S, Franc SDC, Groth I, Schlegel B, Möllmann U, Gollmick F, Gräfe U, Leistner E (2002), “New and bioactive compounds from Streptomyces strains residing in the wood of Celastraceae”, Planta (216), 162-167 37 Qin S, Xing K, Jiang JH, Xu LH, Li WJ (2011), “Biodiversity, bioactive natural products and biotechnological potential of plant-associated a lu endophytic actinobacteria”, Appl Microbiol Biotechnol (89), 457-473 n 38 Rojas DJ, Sette LD, Araujo WL, Lopes MSG, Silva LF, Furlan RLA, va n Padilla G (2012), “The diversity of polyketide synthase genes from p ie gh tn to sugarcane-derived fungi”, Microb Ecol (63), 565-577 39 Sambrook J, Russell DW (2001), “Molecular cloning A laboratory manual, 3rded”, Cold Spring Harbor laboratory, NY oa nl w 40 Shimizu M, Yazawa S, Ushijima Y (2009), “A promising strain of endophytic Streptomyces sp for biological control of cucumber d nv a lu anthracnose”, J Gen Plant Pathol (75), 27-36 f an 41 Shirling EB, Gotilieb D (1972), “Cooperative deription of type cultures oi lm ul of Streptomyces” V.Additional descriptions, International journual of systematic Bacteriology (22), 265-394 at nh 42 Skarbek JD, Brady LR (1978), “Streptomyces cavourensis sp nov (nom z Rev.) and Streptomyces cavourensis subsp Washingtonensis subsp Nov., a z Bacteriology 28(1), 45-53 gm @ Chromomycin-producing subspecies”, International Journal of Systematic om l.c 43 Snipes CE, Duebelbeis DO, Olson M, Hahn DR, Dent WH, Gilbert JR, Werk TL, Davis GE, Lee-Lu R, Graupner PR (2007), “The endophytes in an Lu the stems and roots of rice”, Microb Ecol (53), 700-707 n va ac th (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi si (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi 46 44 Sun Y, Cheng Z, Glick BR (2009), “The presence of a 1aminocyclopropane-1-carboxylate (ACC) deaminase deletion mutation alters the physiology of the endophytic plant growth promoting bacterium”, Burkholderia phytofirmans PsJN FEMS Microbiol Lett (296), 131-136 45 Suwanborirux K, Chang CJ, Spjut RW, Cassady JM (1990), “Ansamitocin P-3, a maytansinoid from Claopodium crispifolium and Anomodon attenuatus or associated actinomycetes”, Experientia (46), 117-120 46 Suzuki T, Shimizu M, Meguro A, Hasegawa S, Nishimura T, Kunoh H a lu (2005), “Visualization of infection of an endophytic actinomycete n Streptomyces galbus in leaves of tissue-cultured rhododendron”, va n Actinomycetologica (19),7-12 tn to 47 Thomson CJ, Bialphos SH (1995), “Genetics and Biochemistry of p ie gh antibiotic production”, 197-222 48 Trease GE, Evans WC (1996), “A textbook of Pharmacognosy 14th ed oa nl w Bailliere Tindall Ltd, London”, 832 49 Trenser HD and Danga F (1958), “Hydrogen sulfide production by d f an nv a lu Streptomyces as criteria for species differentiation”, J Bacteriol (76), 239 oi lm ul at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi si (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi PH LC Ph lc 1: Mụi trng nuụi cy - Môi trường YIM 38 (g/L): Cao malt 4; cao men 4; glucose 4; agar 20; H2O 1L; pH 7,2 - Môi trường LBA (Luria-Bertani) (g/L): Cao nấm men 5; Tryptone 10; NaCl 10; agar 15; H2O 1L; pH= 6,5-7,0 - Môi trường MPA (g/L): Cao thịt 3; peptone 10; NaCl 5; agar 18g; H2O 1L; pH a lu - Môi trường Hansen (g/L): Glucose 20; peptone 10; KH2PO4 2; MgSO4 n n va 2; cao nấm men 3; agar 18g; H2O 1L; pH 6,5 tn to - Môi trường Bennett (g/L): Cao thịt 1; glucose 10; cao men 1; Casamino p ie gh acid 2; agar 18-20; H2O 1L; pH 7,3-7,5 - Môi trường Gause-I (g/L): Tinh bột tan 20; K2HPO4 0,5; oa nl w MgSO4.7H2O 0,5; NaCl 0,5; (NH4) 2SO4 2; KNO3 0,5; FeSO4 0,01; agar 18g; H2O 1L; pH 7-7,4 d - Môi trường Gause-II (g/L): Nước chiết thịt 30ml; peptone 5; NaCl 5; a lu nv glucose 10; agar 18g; H2O 1L; pH 7-7,4 f an - Môi trường ISP-1 (g/L): Tryptone 5; cao nấm men 3; agar 18g; H2O ul oi lm 1L; pH - Môi trường ISP-2 (g/L): Cao nấm men 3, cao malt 10; dextrose 4; agar at nh 20g; H2O 1L; pH 7-7,2 z - Môi trường ISP-3 (g/L): Bột kiều mạch 20; muối A 1ml; agar 20g; H2O z @ 1L; pH 7,2 gm om l.c - Môi trường ISP-4 (g/L): Tinh bột tan 10; K2HPO4 1; MgSO4.7H2O 1; NaCl 1; (NH4)2SO4 2; CaCO3 2; muối A 1ml; agar 18g; H2O 1L; pH 1ml; agar 20g; H2O 1L; pH 7-7,4 an Lu - Môi trường ISP-5 (g/L): Asparagin 1; glixerin 10; K2HPO4 1; muối A n va ac th (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi si (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi - Mụi trng ISP-6 (g/L): Peptone 10; cao nấm men 1; xitrat sắt 0,5; agar 18g; H2O 1L; pH 7-7,2 - Môi trường ISP-7 (g/L): Glycerol 15; L-tyrosine 0,5; L-asparagine 1; FeSO4.7H2O 0,01; K2HPO4 0,5; MgSO4.7H2O 0,5; NaCl 0,5; muối A 1ml; agar 20g; H2O 1L; pH 7,2-7,4 - Môi trường ISP-9 (g/L): (NH4)2SO4 2,64; KH2 PO4 2,38; K2HPO4 5,65; MgSO4 1; dung dịch muối B 1ml, nguồn cacbon 10; agar 20g; H2O 1L; pH 6,8-7 a lu - Dung dịch muối A (%): FeSO4 0,1; ZnSO4 0,15; MnCl2 0,1; H2O n 100ml va n - Dung dịch muối B (%): CuSO4 0,64; FeSO4 0,11; MgCl2 0,79; H2O tn to 100ml p ie gh Phụ lục 2: DNA tổng số chủng xạ khuẩn d oa nl w f an nv a lu oi lm ul at nh z z @ gm Hình Điện di đồ sản phẩm tách chiết DNA tổng số số chủng xạ om l.c khuẩn nội cộng sinh gel agarose 1% Trong đó: 1:YBQ128; 2:YBQ56; 3:YBQ40; 4:YBQ108; 5:YBQ26; 6:YBQ44; 7:YBQ80; 8:YBQ59; 9: 15: YBQ65; 16: YBQ50; 17: YBQ1 an Lu YBQ118; 10: YBQ107; 11: YBQ88; 12: YBQ21; 13: YBQ19; 14: YBQ47; n va ac th (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi si (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi Ph lc 3: Bng s liệu khả kháng loại vi sinh vật kiểm định 36 chủng xạ khuẩn Đƣờng kính vịng kháng khuẩn (D-d, mm) a lu Ký hiệu chủng YBQ01 0 0 0 0 YBQ02 0 0 0 7,2 ±0.16 0 YBQ19 15,9 ±0.1 0 0 0 11,3 ±0.12 YBQ21 0 0 16,5 ±0.35 0 YBQ25 0 0 12,8 ±0.28 14 ±0.17 0 YBQ36 0 0 ±0.17 YBQ40 0 15,7 ±0.12 YBQ44 0 ±0.05 0 YBQ46 9,2 ±0.13 17,3 ±0.12 8,8 ±0.08 0 15 ±0.05 10,1 ±0.05 21,3 ±0.12 22,7 ±0.12 0 20 ±0.26 19,3 ±0.12 9,1 ±0.07 22 ±0.12 0 0 0 18,7 ±0.06 15,8 ±0.49 n STT n va p ie gh tn to 10,8 ±0.18 4,7 ±0.15 8,2 ±0.15 16 ±0.35 2,6 ±0.07 19,1 ±0.32 11 YBQ50 0 12 YBQ56 13 YBQ59 12 ±0.26 14 YBQ63 15 YBQ65 16 YBQ75 17 YBQ76 0 18 YBQ80 14,5 ±0.06 22,9 ±0.31 16,7 ±0.21 17,7 ±0.15 8,5 ±0.13 23,3 ±0.12 19 YBQ88 0 20 YBQ90 14,2 ±0.07 14,6 ±0.45 0 0 21,5 ±0.11 0 0 8,5 ±0.21 23 ±0.21 21,3 ±0.14 18,8 ±0.3 d oa nl w YBQ47 10 15 ±0.1 18,8 ±0.46 1,2 ±0.04 15,5 ±0.28 16,7 ±0.12 f an nv a lu 16,6 ±0.42 14,9 ±0.14 0 7,3 ±0.21 12,3 ±0.06 17,3 ±0.12 13 ±0.14 23,2 ±0.08 22 ±0.35 5,1 ±0.13 17,6 ±0.16 0 oi lm 0 6,3 ±0.06 16,7 ±0.12 15 ±0.14 19 ±0.42 0 11,7 ±0.08 0 nh 10,3 ±0.06 at 18,8 ±0.33 16,3 ±0.28 ul 0 12,3 ±0.23 19,5 ±0.13 ±0.17 19,3 ±0.15 15 ±0.26 5,3 ±0.03 0 z z gm @ om l.c an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi si (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi STT Ký hiu chng ng kớnh vũng kháng khuẩn (D-d, mm) a lu n n va 13,8 ±0.14 12,5 ±0.94 4,9 ±0.40 9,8 ±0.46 14,7 ±0.14 17,5 ±0.05 0 0 0 23 YBQ101 0 0 0 24 YBQ104 1,5 ±0.05 0 0 0 14,5 ±0.26 20 ±0.35 14,7 ±0.32 2,1 ±0.14 12,1 ±0.1 25 YBQ105 26 YBQ106 0 0 0 0 7,2 ±0.13 27 YBQ107 0 12 ±0.53 10 ±0.14 12,3 ±0.25 12,3 ±0.23 0 28 YBQ108 0 0 0 0 7,8 ±0.08 21 YBQ92 22 YBQ94 p ie gh tn to 30 YBQ116 11,2 0 ±0.03 11,2 13 ±0.09 ±0.14 5,8 5,7 16 ±0.2 ±0.04 ±0.07 31 YBQ118 32 YBQ119 33 YBQ121 11,4 ±0.05 34 YBQ122 35 YBQ125 1.21 ±0.13 1.7 ±0.13 36 YBQ128 0 oa nl w 6,8 ±0.08 d 29 YBQ115 7,8 ±0.28 6,8 ±0.44 0 0 7,8 ±0.03 0 9,6 ±0.12 7,9 ±0.04 10,5 0 ±0.05 11,6 4,2 ±0.23 ±0.09 18 7,4 ±0.1 ±0.14 ±0.40 17,5 ±0.09 15 ±0.42 9,7 ±0.15 15,7 ±0.06 0 0 0 15,8 ±0.28 15,5 ±0.09 12,3 ±0.06 19,3 ±0.42 0 0 7,5 ±0.09 1.2 ±0.14 2.07 ±0.42 1.6 ±0.21 1.83 ±0.21 1.64 ±0.34 0 0 0 f an nv a lu 0 ul oi lm 1.43 ±0.06 0.33 ±0.18 0 at nh z z Ghi chú:1 Escherichia coli ATCC 11105; Proteus vulgaris CNLM; @ gm Salmonella enterica ATCC 14028; Enterobacter aerogenes ATCC 13048; om l.c Pseudomonas aeruginosa CNLM; Sarcina lutea CNLM; Staphylococcus epidermidis ATCC 12228; Bacillus cereus ATCC 1177; an Lu Candida albicans ATCC 10231 n va ac th (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi si (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi (Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi(Luỏưn.vn).Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.sinh.khĂng.sinh.cỏằĐa.xỏĂ.khuỏân.nỏằi.cỏằng.sinh.trên.cÂy.quỏ.thu.thỏưp.tỏĂi.tỏằnh.yên.bĂi