Đặc điểm di truyền, hình thái và hiện trạng phân bố của ba loài hopea đang bị đe dọa ở việt nam sao hải nam (hopea hainanensis merr chun), sao hòn gai (hopea hongayensis tardieu) và sao mặt quỷ (hopea mollissima c y wu)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC Tên đề tài: Đặc điểm di truyền, hình thái trạng phân bố ba lồi Hopea bị đe dọa Việt Nam Sao Hải Nam (Hopea hainanensis Merr & Chun), Sao Hòn Gai (Hopea hongayensis Tardieu) Sao Mặt Quỷ (Hopea mollissima C.Y.Wu) Họ tên học viên : Trần Thu Hƣơng Ngƣời hƣớng dẫn : TS.Nguyễn Thị Phƣơng Trang Chuyên ngành Mã số : Sinh học thực nghiệm : 60420114 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Tai ngay!!! Ban co the xoa dong chu nay!!! Hà Nội, 2014 Mở đầu Hiện nay, Việt Nam, họ Dầu biết có sáu chi (Anisoptera, Hopea, Parashorea, Vatica, Dipterocarpus, Shorea), hầu hết loài địa đặc hữu Các loài họ Dầu gặp khu bảo tồn quy hoạch năm qua, chiến tranh tàn phá, giá trị thương mại nhu cầu người dân địa phương khai thác q mức mà diện tích rừng nói chung rừng hỗn giao họ Dầu nói riêng bị suy giảm nghiêm trọng Trong loài họ Dầu, Sao hải nam, Sao gai Sao mặt quỷ lồi phân bố hẹp, có Việt Nam Trung Quốc, Đây lồi có nhiều giá trị mặt khoa học, giá trị kinh kinh tế giá trị y học Tuy nhiên hiê ̣n ba loài này đứng trước nguy tuyệt chủng mức độ suy giảm nơi sống viê ̣c khai thác không hợp lý Mă ̣c dù vâ ̣y , cho đế n chưa có cơng trình nghiên cứu riêng lồi Việt Nam Cho đến nay, chưa có số liệu cụ thể, thông tin di truyền, yếu tố ảnh hưởng xấu đến tồn ba loài liên quan đến tác động người chưa Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn nghiên cứu, khó để nâng cao hiệu cơng tác bảo tồn phát triển bền vững chúng Chính vì v ậy, đề xuất thực nghiên cứu “Đặc điểm di truyền, hình thái trạng phân bố ba loài Hopea bị đe dọa Việt Nam: Sao hải nam (Hopea hainanensis Merr & Chun), Sao gai (Hopea hongayensis Tardieu) Sao mặt quỷ (Hopea mollissima C.Y.Wu)”như bước nghiên cứu nhằm cung cấp thông tin cần thiết cho di truyền, bổ sung sở liệu di truyền ba lồi Việt Nam, đồng thời góp phần phục vụ công tác bảo tồn sử dụng bền vững loài cộng đồng dân cư địa phương Mục tiêu nghiên cứu Xây dựng sở liệu di truyền ba loài Hopea quý Việt Nam Nội dung nghiên cứu  Khảo sát, điều tra trạng phân bố, cấu trúc quần thể ba lồi Sao Hịn gai (Hopea hongayensis Tardieu) hai đảo Ba Mùn đảo Cái Lim, VQG Bái Tử Long, tỉnh Quảng Ninh, Sao Mặt Quỷ (Hopea mollissima C.Y.Wu) phân khu Khe Rỗ, Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn khu BTTN Tây Yên Tử, tỉnh Bắc Giang Sao Hải nam (Hopea hainanensis Merr & Chun) VQG Bến En, tỉnh Thanh Hóa  Xác định đặc điểm di truyền ba vùng gen lục lạp bao gồm matK, psbA – trnH rbcL phân tích trình tự gen  Xác định mối quan hệ di truyền ba loài với số loài họ Dầu khác Việt Nam sở trình tự ba vùng gen lục lạp nêu Ý nghĩa khoa học thực tiễn luận văn Kết nghiên cứu góp phần bổ sung sở liệu di truyền cho danh lục loài thực vật quý bị đe dọa tuyệt chủng Việt Nam, góp phần cho cơng tác bảo tồn nguồn gen, làm sở khoa học cho công tác bảo tồn phát triển bền vững ba loài gỗ quý Việt Nam Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn CHƢƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU Tổng quan họ Dầu ba loài nghiên cứu Họ Dầu (Dipterocarpaceae) bao gồm 17 chi khoảng 680 loài chia thành ba phân họ: Dipterocarpoideae gồm 13 chi khoảng 600 loài vùng nhiệt đới châu Á Malesia; Pakaraimoideae đặc hữu vùng cao Guaianan – vùng nhiệt đới Nam Mỹ Monotoideae với chi 30 loài vùng nhiệt đới Châu Phi Nam Mỹ Các chi lớn họ Dầu Shorea (khoảng 250 loài), Hopea (105 loài), Dipterocarpus (70 loài) Vatica (65 loài) Các loài họ Dầu tạo nên họ thực vật độc đáo tiếng vùng nhiệt đới Hiện gỗ loài họ Dầu chiếm thị phần lớn thị trường gỗ Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn giới nên rõ ràng chúng đóng vai trị quan trọng nhiều nước, nước Châu Á mà đặc biệt nước Đông Nam Á Tuy nhiên, khai thác mức chuyển đổi mục đích sử dụng đất mà diện tích rừng nói chung họ Dầu nói riêng bị suy giảm nghiệm trọng Có khoảng 45 lồi họ Dầu với chi tìm thấy Việt Nam, chúng rừng phổ biến đóng vai trò quan trọng giá trị sinh thái kinh tế Phần lớn họ Dầu Việt Nam địa đặc hữu Do giá trị thương mại nhu cầu người dân địa phương, loài họ Dầu bị khai thác mức Hơn nữa, nhiều năm, áp lực tăng trưởng kinh tế nhanh hậu suy giảm diện tích rừng tăng mức độ phân cắt mảnh rừng lại Kết làm ảnh hưởng đến nơi sống họ Dầu Sao hải nam(Hopea hainanensis Merr et Chun), Sao hòn gai (Hopea hongayensis Tardieu), Sao mặt quỷ (Hopea mollissima C.Y.Wu) loài đặc hữu, có đặc điểm hình thái gần giống nhau, phân bố rải rác khắp Việt Nam Ba loài nằm Sách đỏ Việt Nam tổ chức IUCN xếptrong mức phân hạng khác Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Tổng quan ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử nghiên cứu phân loại di truyền thực vật Phân loại học phân tử phương pháp phân loại sử dụng sai kháctrong cấu trúc phân tử để có thơng tin sai khác di truyền loài.Phân loại học phân tử dựa nguyên lý sinh vật sống mang vật chất di truyền phân tử DNA(ở số virus RNA),các sinh vật có họ hàng gần gũi có mức độ tương đồng cao cấu trúc phân tử, ngược lại sinh vật có họ hàng xa cho thấy đặc điểm cấu trúc khác nhau.Kỹ thuật sinh học phân tử áp dụng rộng rãi, có hiệu nghiên cứu tiến hóa, phân loại đa dạng di truyền, cơng cụ hỗ trợ đắc lực cho nhà nghiên cứu việc phát loài mới, giải mối nghi ngờ phân loại Các kết nghiên cứu mức độ DNA góp phần đánh giá đa dạng sinh học, định hướng khoa học cho việc bảo tồn khai thác cách hợp lý nguồn tài nguyên sinh vật giới Việt Nam Tổng quan hệ gen lục lạp sử dụng nghiên cứu Trong số gen lục lạp matK gen tiến hóa nhanh nhất, có kích thước khoảng 1550bp mã hóa cho enzyme maturase liên quan đến trình loại bỏ in-tron loại Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn hai trình phiên mã RNA Do matK tiến hóa nhanh có mặt hầu hết loài thực vật nên sử dụng thị nghiên cứu mối quan hệ di truyền loài phát sinh loài thực vật CBOL (Consortium for the Barcode of Life) thử nghiệm matK 550 loài thực vật thấy 90% mẫu thực vật hạt kín dễ dàng khuếch đại trình tự cách sử dụng cặp mồi đơn kiến nghị sử dụng matK thị chuẩn cho việc phân loại thực vật Ngoài ra,vùng gen lục lạp rbcL, vùng psbA-trnH gần trở thành công cụ phổ biến nghiên cứu phát sinh loài phân tử thực vật cấp độ phân loại thấp phù hợp cho nghiên cứu DNA Vùng có kích thước xấp xỉ 450bp, xác suất nhân thành công cao (100% loài nghiên cứu) CHƢƠNG II NỘI DUNG, ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu TT Tên khoa học Tên Việt Nam Địa điểm thu mẫu Tọa độ thu mẫu Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 8 10 Hopea hongayensis Hopea hongayensis Hopea hainamensis Hopea mollissima Hopea odorata Dipterocarpus intricatus Sao Hịn gai Sao Hải nam VQG Bến Thanh Hóa 21o09’N-21o13’E, Sao Mặt quỷ Phân khu Khe Rỗ, khu BTTN Tây Yên Tử, Bắc Giang Sao Đen VQG Bến Thanh Hóa En, 19°35’N105°30’E, 100m Dầu Lơng Khu BTTN Bình Châu-Phước Bửu, Bà Rịa-Vũng Tàu 10°28’N107°35’E, 100m dyeri Nàng Dipterocarpus tuberculatus Parashorea 120m Sao Hòn gai Dầu Song costatus 21°02’N107°35’E, Đảo Cái Lim, VQG Bái Tử Long, Quảng Ninh Dipterocarpus Dipterocarpus Đảo Ba Mùn, VQG Bái Tử Long, Quảng Ninh En, Tân Cửu, Vĩnh Cửu, Đồng Nai 21°06’N107°33’E, 150m 19°35’N105°30’E, 100m 130m 11°12’N107°09’E, 129m 10°56’N106°59’E, 130m Dầu Mít VQG Bù Gia Mập, Bình Phước Dầu Đồng VQG York Đơn, Bn Đơn, Đắk Lắk 12°47’N107°35’E, 150m VQG Phương, 20°19’N- Chò Chỉ Cúc Ninh Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Bình chinensis 105°36’E, 150m Trình tự mồi sử dụng Bảng 2.3 Trình tự cặp mồi dùng nghiên cứu Vùng gene Mồi xuôi Mồi ngƣợc Nhiệt độ bắt cặp mồi(0C) Độ dài sản phẩm PCR 50 900 56 700 CGA TCT ATT CAT TCA ATA TTT C TCT AGC ACA CGA AAG TCG AAG T rbcLa TCT AGC ACA CGA AAG TCG AAG T CTT-CGG-CAC-AAA ATA CGA AAC GAT CTC TCC A rbcLc TGA AAA CGT GAA TTC CCA ACC GTT TAT GCG GCA GCA GCT AGT TCC GGG CTC CA 56 700 GTT ATG CAT GAA CGT AAT GCT C CGC GCA TGG TGG ATT CAC AAT CC 48 300 matK trnHpsbA Phương pháp nghiên cứu Khảo sát thu mẫu Phương pháp tách chiết DNA tổng số Phương pháp PCR với mồi nghiên cứu Phương pháp điện di DNA gel agarose Đọc trình tự Phân tích số liệu Phân tích mối quan hệ di truyền-xây dựng phát sinh chủng loại Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 10 3.2.1 Đặc điểm vùng gen matK Gen matK ba loài nghiên cứu sáu loài họ Dầu khác thu thập trình thu mẫu khuyếch đại cặp mồi đặc hiệu matK-F matK-R Phản ứng PCR thực máy PCR system 9700 Kết PCR sau điện di kiểm tra gel Agarose 1%.Kết điện di kiểm tra cho thấy sản phẩm PCR băng đậm, sắc nét có kích thước khoảng 900bp dự kiến, chứng tỏ phản ứng PCR thực tốt, mồi sử dụng có độ đặc hiệu cao Để kiểm tra độ xác sản phẩm PCR phân tích đặc điểm phân tử gen matK, sản phẩm PCR sau tinh tiến hành đọc trình tự máy ABI 3100, sử dụng kit Bigdye terminator.Kết giải trình tự sau kiểm tra chức Blast NCBI Kết kiểm tra chứng tỏ sản phẩm PCR chúng tơi thu xác đoạn DNA tương ứng với vùng gen matK Vùng gen matK dài 900 bp ba loài Hopea nghiên cứu sau cắt bỏ hai đầu lại kích thước 843bp dùng để so sánh sai khác phần mềm Mega 5.0.Kết giải trình tự sau kiểm tra chức Blast NCBI Kết Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 14 kiểm tra chứng tỏ sản phẩm PCR chúng tơi thu xác đoạn DNA tương ứng với vùng gen matK Vùng gen matK dài 900 bp ba loài Hopea nghiên cứu sau cắt bỏ hai đầu lại kích thước 843bp dùng để so sánh sai khác phần mềm Mega 5.0 Bảng sai khác di truyền ba loài Hopea nghiên cứu đưa sở so sánh trình tự Nucleotide đoạn gen matK dài 843bp, loài Dầu Monotes madagascariensisAB246478được sử dụng làm lồi ngồi nhóm (outgroup).Kết cho thấy khơng có sai khác tìm thấy đoạn gen matK dài 843 nucleotide hai mẫuH hongayensis thu đảo Cái Lim đảo Ba Mùn Khoảng cách di truyền hai loài H mollissima H hongayensis nhỏ (0,1%).Khoảng cách di truyền giữaH hainanensis H hongayensislà 0,2% Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 15 Hình Mối quan hệ di truyền ba lồi Hopea sở so sánh trình tự gen matK theo phƣơng pháp NJ 3.2.2 Vùng gen psbA-trnH ba lồi Hopea nghiên cứu Một đoạn gen psbA-trnH có kích thước lý thuyết 300bpcủa ba lồi Hopea sáu loài Dầu khác Việt Nam khuếch đại PCR sử dụng cặp mồi đặc hiệu psbA-trnH-F psbA-trnH-R, bắt cặp mồi 480C, kéo dài chuỗi 720Ctrong 30 giây Kết PCR điện di kiểm tra gel Agarose 1% (hình 3.12) Hình Kết điện di sản phẩm PCR vùng gen psbA – trnH gel Agarose 1% Ghi chú: M: DNA ladder 100bp (Fermentas) Ghi chú: 1- Sao hải nam; 2- Sao mặt quỷ; 3- Sao gai Ba Mùn; 4- Sao gai Cái Lim; 5- Sao đen; 6- Chò chỉ; 7- Dầu cát; 8Dầu lơng; 9- Dầu mít; 10- Dầu song nàng Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 16 Kết kiểm tra sản phẩm PCR khuếch đại gen psbA-trnH gel agarose 1% cho thấy xuất băng DNA rõ nét có kích thước khoảng 300bp dự kiến, chúng tỏ việc khuếch đại gen psbA-trnH thành công Để kiểm tra tính xác sản phẩm PCR phân tích sai khác nucleotide mẫu nghiên cứu đoạn gen psbA-trnH, tiến hành tinh sản phẩm PCR cột sepadex G50 đọc trình tự máy ABI 3100 So sánhmức độ sai khác di truyền hai loài H.hongayensis H.hainanensis 0.5% Khơng có nucleotide saikhác tìm thấy hai mẫu Sao Hòn gai thu Cái Lim Ba mùn nhưgiữa hai lồi H.hongayensis vàH.mollissima Hình Mối quan hệ di truyền ba loàiHopea dựa so sánh trình tự gen psbA-trnH theo phƣơng pháp NJ Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 17 3.2.3 Trình tự gen rbcL ba lồi Hopea nghiên cứu Đoạn gen rbcLcó chiều dài 1400bp cắt thành đoạn (rbcLa rbcLc), đoạn có kích thước 700bp Phản ứng PCR khuếch đại hai vùng gen rbcLa rbcLc ba loài Hopea nghiên cứu sáu loài họ dầu khác Việt Namđược tiến hành máy PCR system 9700, bắt cặp 560C, kéo dài chuỗi phút, phản ứng PCR thực tổng số 35 chu kỳ Sản phẩm PCR đoạn DNA sau kiểm tra điện di gel Agarose 1% (hình 3.16 a, b) Hình5a Kết kiểm tra điện di sản phẩm PCR đoạn gen rbcLa gel Agarose1% Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 18 Hình5b Kết kiểm tra điện di sản phẩm PCR đoạn gen rbcLa gel Agarose1% So sánhcho thấy mức độ sai khác di truyền mẫuHopea thấp, khơng có sai khác hai mẫu H Hongayensis thu Ba Mùn Cái Lim Hình Mối quan hệ di truyền ba lồi Hopea dựa so sánh trình tự gen rbcL theo phƣơng pháp NJ Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 19 Cùng với ba loài Hopea nghiên cứu (Hopea mollissima C.Y.Wu, Hopea hongayensis Tardieu, Hopea hainanensis Merr et Chun), sáu loài họ Dầu khác Việt Nam bao gồm Parashorea chinensis Wang Hsie, Hopea odorata Roxb., Dipterocarpus tuberculatusRoxb., Dipterocarpus intricatus Dyer, Dipterocarpus dyeri Pierre, Dipterocarpus costatus C.F.Gaertn tiến hành đọc trình tự ba vùng gen matK, psbA-trnH rbcL Trình tự vùng gen matK rbcL chín lồi họ Dầu phổ biến Việt Nam đăng ký ngân hàng Gen (bảng 2) Bảng Tên lồi số hiệu Genbank trình tự gen rbcL, matK chín lồi họ Dầu phổ biến Việt Nam STT Tên loài Địa điểm thu mẫu Parashorea chinensis Wang Hsie Hopea odorata Roxb Hopea mollissima C.Y.Wu Hopea hongayensis Tardieu Hopea hainanensis Merr et Chun Dipterocarpus tuberculatus Roxb Dipterocarpus intricatus Dyer VQG Cúc Phương, Ninh Bình VQG Bến En, Thanh Hóa Khu bảo tồn thiên nhiên Khe Rỗ, Bắc Giang Đảo Ba Mùn, VQG Bái Tử Long, Quảng Ninh VQG Bến En, Thanh Hóa VQG York Đôn, Buôn Đôn, Đắk Lắk Khu BTTN Bình ChâuPhước Bửu, Bà Rịa-Vũng Số hiệu Genbank gen rbcL KM267143 Số hiệu Genbank gen matK KJ611235 KM267144 KM267145 KJ611238 KJ611237 KM267146 KJ611239 KM267147 KJ611240 KM267148 KJ611232 KM267150 KJ611230 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 20 Dipterocarpus dyeri Pierre Dipterocarpus costatus C.F.Gaertn Tàu Tân Cửu, Vĩnh Cửu, Đồng Nai VQG Bù Gia Mập, Bình Phước KM267151 KJ611231 KM267152 KJ611241 Các vùng gen sau kết hợp cặp với kết hợp thành đoạn DNA dài 2359bp Các đoạn DNA kết hợp chín lồi họ Dầu sau tiến hành so sánh để tìm vùng gen hiệu phân biệt loài họ Dầu Việt Nam Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 21 Hình Kết so sánh phân loại chín lồi họ Dầu Việt Nam dựa so sánh vùng gen (matK, rbcL, trnH-psbA) kết hợp chúng Kết so sánh phân loại vùng gen sựa kết hợp cặp đối chúng cho thấy vùng gen trnH-psbA không sai khác nucleotide hai loài H hongayensis H mollissima hai loài D intricatus D costatus, kết hợp cặp đôi vùng gen trnH-psbA với vùng gen khác cho kết không rõ ràng phân loại lồi gần gũi Trong đó, hai vùng gen matK rbcL bộc lộ khả phân loại tốt Cả hai vùng gen sai khác nucleotide loài, nhiên với kích thước 900bp hiệu suất PCR 100%, vùng gen matK chứng tỏ hữu hiệu so với vùng gen rbcL dài 1400bp hiệu suất PCR 85,7% Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 22 Hình8 Sơ đồ mối quan hệ di truyền chín lồi họ Dầu phổ biến Việt Nam dựa phân tích trình tự gen matK (A) trình tự kết hợp gen matK + rbcL (B) Tuy vậy, xây dựng phát sinh chủng loại (NJ) chín lồi họ dầu phổ biến Việt Nam dựa trình tự gen matK (hình 3.21A) trình tự kết hợp gen matK gen rbcL (hình 3.21B) cho thấy giá trị boostrap mối quan hệ di truyền dựa trình tự kết hợp gen matK gen rbcL cao hẳn so với giá trị bootstrap sử dụng gen matK để so sánh Do ba thị phân tử matK, rbcL trnH-psbA Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 23 vùng gen matK vùng gen hữu hiệu phân loại loài họ Dầu kết có độ tin cậy cao chúng tơi khuyến khích kết hợp phân tích hai vùng gen matK rbcL Chỉ thị phân tử (DNA barcoding) cơng cụ cơng nghệ sinh học xác, đáng tin cậy sử dụng nhiều phân loại loài động thực vật Việc sử dụng hay kết hợp nhiều thị phân tử để phân loại nhiều nhà khoa học giới quan tâm tiến hành nghiên cứu Kress (2007) giới thiệu năm thị phân tử vùng gen lục lạp bao gồm matK, rbcL, trnH-psbA, rpoCl ycf5 thị phân tử tin cậy hữu hiệu phân loại lồi thực vật cạn Nhóm nghiên cứu thực vật giới (plant working group) giới thiệu ba thị phân tử lục lạp hữu hiệu để phân loại cho nhóm thực vật bậc cao matK, rbcL trnH-psbA (CBOL, 2009), đặc biệt kết hợp hai thị phân tử matK rbcL coi hữu hiệu cho hầu hết loài thực vật Trong nghiên cứu chúng tôi, matK chứng tỏ thị phân tử hữu hiệu cho phân loại loài họ Dầu Việt Nam cấp độ loài Sự kết hơp hai thị matK rbcL Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 24 cho kết với độ tin cậy cao (boostrap >76%) tất gốc nhánh Kết phân tích mối quan hệ di truyền chín lồi họ dầu phổ biến Việt Nam cho thấy chi Parashorea có quan hệ gần gũi với chi Hopea so với chi Dipterocarpus Kết nghiên cứu khẳng định lại kết nghiên cứu Kamiya cs (1998) Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 25 Kết luận - Khảo sát thu mẫu ba lồi nghiên cứu nhận thấy số lượng kích thước lớn cịn ít, có kích thước trung bình nhỏ tái sinh Khơng tìm thấy tái sinh lồi Sao mặt quỷ phân khu Khe Rỗ, khu BTTN Tây Yên Tử, Bắc Giang Q trình thu mẫu cho thấy hai lồi Sao mặt quỷ Sao hịn gai có nhiều đặc điểm hình thái giống chứng minh di truyền cho thấy chúng hai loài khác - Đưa đặc điểm di truyền ba vùng gen lục lạp matK, rbcL psbA – trnH ba lồi nghiên cứu Kết cho thấy khơng có sai khác nucleotide mẫu Sao gai đảo Ba Mùn mẫu Sao gai đảo Cái Lim, nhiều khả hai quần thể có chung nguồn gốc - Kết phân tích mối quan hệ di truyền chín lồi họ Dầu phổ biến Việt Nam cho thấy chi Parashorea có quan hệ gần gũi với chi Hopea so với chi Dipterocarpus -Việc sử dụng trình tự ba thị gen lục lạp phổ biến dùng phân loại bao gồm matK, rbcL trnH-psbA Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 26 nghiên cứu chứng minh matK thị hữu hiệu ba thị phân tử việc phân loại cấp độ loài loài họ Dầu Việt Nam - Trình tự nucleotide gen matK rbcL chín lồi họ Dầu phổ biến Việt Nam bao gồm Parashorea chinensis Wang Hsie, Hopea odorata Roxb., Hopea mollissima C.Y.Wu, Hopea hongayensis Tardieu, Hopea hainanensis Merr et Chun, Dipterocarpus tuberculatusRoxb., Dipterocarpus intricatus Dyer, Dipterocarpus dyeri Pierre, Dipterocarpus costatus C.F.Gaertn đăng ký Genbank Kiến nghị Lồi Sao hịn gai lồi q có nhiều hữu ích, lại lồi đặc hữu Việt Nam, việc quần thể Sao Hòn gai đảo Ba Mùn Cái Lim có chung nguồn gốc cộng với việc phân bố đảo biệt lập với quần thể khác có nguy dẫn đến việc cá thể quần thể tự thụ phấn qua nhiều hệ, điều làm giảm tính đa dạng di truyền, dẫn đến giảm khả thích nghi lồi Chúng tơi kiến nghị cần có thêm nghiên cứu sâu cho quần thể loài Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 27 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 28