+ Dung địch đối chiếu: Lấy khoảng 3g hột lá khơ trinh nữ hồng cung, làm thử, bắt đầu từ “ thêm 50 mi ethanol 96%...duge dung dich ol ky” Chấm riêng biệt lần lugt 20 yl dung dich thit va
Trang 1BỘ Y TẾ
| conc Ty cP DUQC LIEU TW2 BO KHOA HQC VÀ CÔNG NGHỆ
SÂN PHẢM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ DỰ ÁN SẢN XUẤT THỦ NGHIỆM CÁP NHÀ NƯỚC
Mã số: KC.10.DA17
1, Quy trình công nghệ chiết xuất alealoid từ dược liệu lá cây Trinh nữ hoàng cung (200kg được ligu/mé)
2 Quy trình sản xuất viên nang Crila từ bán thành phẩm của Trinh ni hoàng cung (200.000viên/mề)
3 Tiêu chuẩn kiểm nghiệm:
- Lá Trinh nữ hoàng cung
+ Cao khô Trinh nữ hoàng cưng - Viên nang Crila
Chủ nhiệm dyin: TS.NGUYÊN THỊNGỌC TRÂM
Cơ quan chữ trì: CÔNG TY CP DƯỢC LIỆU TW2
TP.HCM, tháng 09 năm 2007
@&M-Á4
Trang 2Trang
CONG TY QUY TRINH SAN XUAT | Số:
CP DƯỢC LIỆU TW2 CAO KHÔ TNHC Ngày bau hành: - Dạng dùng; TRUNG TAM - Quy cách: NCFTSX DP CRINA — | - Hạn dùng: # A cong iv Người biên soạn Người kiểm tra /?“ có ljghời đuyệt Q er N DƯỢC LEU _/ plies TỔI A
agit c am DS DAM THAN BON
weal Sham 2007 ngayZthing anim 2007 nngay9 théng 4ném 2007 1 Công thức chơ một lỗ sản xuất 50kg cao khô TNHC Lá khô TNHC: 200 kg Ethanol 70%: 1.800 lt Acid acetic: 36 kg Lactose: 16-20 kg 2 Máy móc thiết bị
Sit Tên thiết bị Số lượng, Công suất Nước 9X
1_| May cit a OLcéi | 120-180lan/phit Việt Nam
2 | Hệ thống xữ lý nước 01ihệ “[250I/giờ Việt Nam
thôn:
| 3 |Hệthốngbinhngẩmkit | 12bình |220:250k; Việ Nam
4ˆ | Hệ thống cô chân không và Tốc độ thu hồi côn và {| Việt Nam
thu héi dung môi tach nude SOlit/gio
[5 [N —— | 20 1iVgiờ _— | ViệNam
6 [Nỗi cô cách thuỷ_ 10 li/piờ Việt Nam
7_ | Bồn Inox chứa dich, con 1200 lít Việt nam
3 | Bồn Inox chúa dịch, côn 500 lit Việt Nam
9 | Thiing hda cao, 300 lít Việt Nam _|
10_ | Nỗi đụn nước 800 lit Việt Nam
11 | Máy xay được liệu 30kgigiờ ‘Viet Nam
12 | May Aj — 25-30kg/ï lẫn sấy Việt Nam
13 ˆ] May trộn ướt Dung tích 35 lít, dung | VietNam
tích sử dụng 25 lít,
'TTốc độ cách trộn 20-
Trang 34, Sơ đồ các giai đoạn sản xu: ất cao khô
Trang 44 Mô tả quy trình săn xuất
4.1.Chuẩn bị:
- Dụng cụ pha chế như: Máy, rây, bình ngắm kiệt, khay được rửa sạch sẽ
- Dung môi: Pha ethanol 70% tir ethanol 96% bằng nước tính khiết, thêm 2%
acid acetic
- Cân 200kg bột dược liệu khô (lá TNHC khô, sy, xay qua mặt sàng 10 mm)
4.2 Pha chế:
Cân nguyên liệu, làm 4m nguyên Hiệu bằng đung môi pha ở trên, tỷ lệ dược liệu dung mới là 1:1, để ủ 1 giờ
~ Nạp vào bình ngắm kiệt, mỗi bình 50kg bột lá TNHC - Nạp dung môi cho ngập được liệu khoảng 20cm
- Đậy nếp và ngâm trong 24 giờ
~ Rút địch chiết với tốc độ 50M1/giờ
~ Luu ý trong quá trình rút địch chiết phải luôn giữ mức dung mỗi ngập cao hơn
mức được liệu 20cm bằng cách bổ sung dung môi liên tục bằng tốc độ dịch rút ra
~ Dịch chiết rút ra được lọc qua vải lọc, để lắng ở nhiệt độ phỏng 24 giờ Sau đó
gộp dịch chiết 1, 2, 3, khuấy đêu, đề lắng, lọc lấy dịch lọc thêm acid acetic 2%, điều chỉnh pH=4 khuấy đều, để lắng rồi lọc lấy dịch trong đem cô cách thủy, bốc
hơi acid acetic Dịch chiết thu được dem cô cách thủy, cô đến cao lỏng 1:1 Đề cao lòng nguội, cân xác định khối lượng vả tiến hành xác định các thông số kỹ thuật sau:
- Xác định tỉ trọng cao lông
- Định lượng alcaloid toàn phần của cao
-Cô tiếp cao lòng đến cao đặc bằng phương pháp cô cách thủy Xác định tỷ lệ
cắn sau khi bốc hơi theo phương pháp trong được điển Việt Nam II, định lượng
alealoid toàn phẩn trong cao đặc
Thêm lượng lactose vừa đủ vào cao đặc, tạo hạt trên máy xát hạt và sấy khô trên
may tang sdi
- Cao khô được chuyển vào máy xay, cho qua rây 0,5mm Sản phẩm thu được là
bột cao khô
- Bảo quản cao khô trong 2i4n túi PE sạch để chồng âm Để nơi khô muát c định cắn khô theo DĐVNIH,PL142
~ Định lượng alcaloid: Xem mục 5 của TCCS cao Trinh nữ hoàng cung
4.3 Kiểm nghiệm: Cao khô được chuyển mẫu lên phỏng kiểm nghiệm, kiểm tra
theo TCCS, khi có kết quả đạt tiêu chuẩn mới chuyển sang đóng gói
4.4 Đồng gói: Cao khô được đóng gói 10kg trong 2 lẫn tui PE, han kín, cho vào
thùng carton, đỏng kín, dán nhẫn ghi rõ họ tên, số lượng cao, ngày sản xuất, người sản xuất, điều kiện bảo quản
Trang 5
5 Vệ sinh an toàn lao độn + Từng máy móc thiết bị có máy và cho người
+ Từng chặng sản xuất công nhân đứng máy phải được học cách sử dụng thiết bị một cách an toàn và nắm vững quy trình sản xuất theo đúng yêu câu kỹ thuật
+ Người trực tiếp sản xuất và cán bộ kỹ thuật phải ghỉ chép tỷ mỹ các diễn bid trong toàn chặng sản xuất vào hồ sơ một cách đây đủ, chính xác, kịp thời từng lê mẻ
sản xuẤt
+ Thường xuyên kiểm tra việc thực hiện các quy trình sản xuất của công nhân + Công nhân sản xuất phải được trang bị đây đủ bảo hộ lao động theo quy định:
quần áo, mũ, gidy dép, ging tay
+ Máy móc phải được vệ sinh thường xuyên
+ Cơ sở sản xuất phải được vệ sinh thường xuyên
+ Cơ sở sân xuất phải được vệ sinh gọn gàng, sạch, riêng biệt, tránh ô nhiễm
chéo
quy, hướng dẫn sử dụng, có thiết bị an toàn cho
6 Phương pháp kiểm tra - kiểm nghiệm
6.1.Phương pháp kiểm soái: Từng chặng sản xuất, KSV của tổ cần theo đối chặt
-_ Vệ sinh máy móc và phòng pha chế ~_ Phiếu kiểm nghiệm nguyên, phụ liệu
-_ Kiểm soát trong pha chế: độ cỗn, thời gian chiết, tỷ trọng cao, hàm lượng cắn khô, hàm lượng A lcaloid toàn phần
Trang 6CÔNG TY CP DƯỢC LIỆU TWZ TRUNG TAM NCPTSX DP CRINA QUY TRINH SAN XUAT - Quy cách: - Hạn dùng: NgàyÖ[ tháng g năm 2007 1 Công thức cho Người kiểm tra dạt DƯỚC HỆ A cÀ [GV Ngày g/ tháng ÉP năm 2007 _— một lô sản xuất 200.000 viên nang DS, PHAN THANH LAY + Cao khô TNHC: 50, 000,000 mg + Tỉnh bột: 12.640.000 mg + Aerosil: 1.440.000 mg + Sodium starch glycalate: 7.200.000 mg +Tale: 360.000 mg + Magnesi stearate: 360.000 mg 2 Máy móc thiết bj Stt | Tên thiết bị Công suất [ NướcSX | L]
Mây sửa hạt ướt _| 300-400k; |
2_[ May sf 28khay, 100kg/lan
3 | Méy xay bia 100-300kp/h, | Việt Nam
3625 vòng/phút
LH | Máy rây hai tầng 50kp/giờ Việt Nam
5 “| Máy trộn lập phương 25 vòng/phút Việt Nam 6_ | Máy đóng nang bán tự động 20-21vòng /h Trung Quốc
7_ | Máy lau nang '7000viên/phút Trưng Quốc
F $_ | Máy hút bụi công nghiệp 110m” khí/giờ' Trung Quốc,
Trang 73 Sơ để các giai đoạn sản xuất viên nang Crila
Trang 84 Mô tả quá trình sản xuất,
4.1.Chuẩn bị sản xuất:
+ Dụng cụ, phòng ốc: được vệ sinh phù hợp với cấp vệ sinh cần cỏ
+ Nguyên phụ liệu: được kiểm tra đúng quy cách, chất lượng
+ Nhiệt độ phòng: 20 ~ 25%C, độ Âm tương đối: 35-559
4.2 Pha chế:
+ Cân nguyên liệu theo công thức của lô sản xuất
+ Trộn đều bột cao khô Trinh nữ hoàng cung với aerosil trong máy trộn lập phương thời gian: 15 phút
+ Ngừng máy, cho tiếp tỉnh bột sấy khô và sodium starch giycolat vào hỗn hợp
đã trộn ở trên, trộn tiếp 20 phút
+ Ngừng máy, cho tiếp talc và magnesi stearate vào trộn tiếp 10 phút
+ Hỗn hợp bột được đóng vào 2 lần túi PE, buộc chặt miệng lái để tránh m và
lấy mẫu kiểm nghiệm bản thành phẩm: hàm lượng alcaloid, độ ẩm, giới han vi
khuẩn của hỗn hợp bột, có kết quả đạt mới chuyển sang tô đóng gói
4.3, Đóng nang:
+ Căn cứ vào kết quả kiểm nghiệm bán thành phẩm tính khối lượng bột thuốc
trong 1 nang, sao cho 1 viên có chứa 1,25mg alealoid toàn phần
+ Cho máy hứt Am hoạt động từ khi đóng gói cho đến lúc thuốc nang đã được ép
vi vào vi hoặc các nắp chai chứa thuốc đã được đóng kín + Bột thuốc được đóng vào nang số 0, màu xanh,
+ Kiểm tra bán thành phẩm: nang thuốc phải đạt tiêu chuẩn cơ sở
+ Đông chai nhựa 40 viên, hộp 4 chai hoặc ép vỉ 1 viên, 10 vỉ đóng trong 1 tai thiếc hàn kín, đựng trong hộp carton, đơn hướng dẫn đặt trong hộp
4.4 Kiểm nghiệm thành phẩm: Theo tiêu chuẩn cơ sở Khi có phiếu kiểm nghiệm thành phẩm đạt tiêu chuẩn, thuốc mới được nhập kho 5 Vệ sinh an toàn lao động 5.1.Kỹ thuật an toàn
- _ Máy móc đều phải có nội qui sử dụng, đâm bảo an toàn cho người sử dung
-_ Công nhân sử dụng máy phải được huấn luyện về an toàn vả kỹ thuật máy một
cách cụ thể Huần luyện phải định kỳ nhắc lại
- _ Công nhân phải thực hiện đúng quy trình đã được hướng dẫn
-_ Cán bộ và công nhân ở từng giai đoạn sản xuất phải ghỉ lại các số liệu, nhận xét
của hỗ sơ lô như biểu mẫu đã quy định 3.2 Vệ sinh công nghỉ
-_ Thực hiện đúng chế độ bảo hộ lao động: quân áo, mũ, khẩu trang, trang bị đầy
đủ
-_ Máy móc, dụng cụ trước và sau khi sản xuất được vệ sinh thật sạch Trước khi
sản xuất lau bằng côn 70”,
Trang 9-_ Nơi làm việc phải gọn gàng, sạch sẽ, không để các đồ vật không cần thiết cho sản xuất - _ Thực hiện đúng chương trình vệ sinh hằng ngày, tuân cho nơi sản xuất và chế độ kiểm tra
6 Phương pháp kiểm tra - kiểm nghiệm
~ _ Nguyên phụ liệu phải đạt tiêu chuẩn:
+ Cao khô lã trình nữ hoang cung (Extraction Folium Crini latifolii siccum)
+ Tinh bot (Amylum)
Aerosil (colloidal silicon dioxide) + Sodium starch glycolat + Tale (Talcum) + Magnesi stearat + Vò nang cứng Đạt TCCS Đạt DĐVN II, tập 3 Đạt USP 26 Dat USP 26 Đạt DĐVN II Đạt DĐVN II Dat tiêu chuẩn nhà sản xuất
~ _ Kiểm nghiệm thành phẩm và bán thành phẩm theo tiêu chuẩn cơ sở
« uy đình các giai đoạn kiểm tra: | Phuong pháp kiém tra ác giai đuạn Nội dung kiểm tra Yêu cầu phải đạt Người kiểm tra
Ch bị - Câm quan đối | - Đúng|- Người thao
nguyênliệu |-Múức chấlượng |chiếuvớiP.KN |nguyênliệu | tác
- Đạt tiêu | - Tổ trưởng
chuẩn - Kiểm nghiệm lên
2| Cấn” "nguyên | - Cái cần ~ Kiếm ira sơ bộ |- Tốt đã định |-~ Người thao
liệu - Số lượng cân - Kiểm mưa dếi | chuẩn tác
chiếu quy trình |- Tỉnh toán | - Tế trưởng
~ Phiếu KN đúng - Kiểm nghiệm Cân - chính | viên
xác
Trang 10
~ Số lượng cân ~ Cảm quan - Công thức [- Nguoi thao - Thời gian rộn |- Kiểm tra đối| -Đủ tác
- Su déng déu chiến quy trình | - Dat ~ Tổ trưởng
~ Đằng hà - Kiểm nghiệm
viên
Dong nang |- Hàm lượng - Kiểm tra đổi|- Đạt tiêu|- Kiểm nghiệm ~ Trọng lượng viên | chiếu quy trình | chuẩn viên
- Độ rã
- Độ nhiễm khuẩn
- Độ âm,
Đồng gói - §ã lượng viên |- Cảm quan |: [- Người thao
/chai, chai/ hộp - Đẹp the - Hình thức chai - Tổ trưởng - Kiểm nghiệm viên Nhãn -§ÐK - Cảm quan - Đúng quy|- Người thao - Số lô định tác - Số lượng, - Tổ trưởng - Trọng lượng - Kiểm nghiệm viên
Thành phẩm |- Hình thức > Theo tiêu |- Đạt - Người thao
~ Nội dùng chuẩn — phiếu tác
Trang 11'TIÊU CHUẨN CƠ SỞ
TỔNG CÔNG ?Y DƯỢC VN Số 03-P,-002-07
—| LÁTRINHNỮHOẢNG CUNG ———]
(oliem crini ladfoli) Có hiệu lực từ:
CÔNG TY CP DƯỢC LIỆU TW2
Ban hành theo Quyết định số: /QĐ.-ĐL2-TCngày tháng năm 200
Dược liệu là lá đã phơi hay sấy khô của cây Trinh nữ hoàng cung (Crimim Jatifolium I.) ho Thily tién (Amaryllidaceae)
L Yêu cầu kỹ thuật
1.1 Mô tả:
Lá tỉnh nữ hồng cung khơ có dạng thuôn hình mác, đài từ 60 ~ 90 cm, rộng 5 - 10cm, màu nâu nhạt hoặc vàng nhạt, lá mỏng, rất nhẹ, ở giữa lá dày, càng ra mép phiến lá cầng mỏng, mép lá gựn sóng Trên phiến lá có rất nhiễu gần lá song song với nhau, mặt xé có nhiều sợi tơ màu trắng Lá khô có mùi hơi hắc, vị hơi
đắng
1.2.Vi phẫu
Phiến lá cắt ngang lỗi ở mặt dưới, hơi lỗi ở mặt trên Biểu bì trên và biểu bì dưới được cấu tạo bởi những tế bào nhỏ hình vuông, xếp sít nhau tạo thành hàng, có
nhiều lỗ khí Trên mặt biếu bì có những u lổi, mô giậu không rõ Các gân phụ được
Trang 121.3.6øi hột
Bột màu vàng nâu, mùi hơi hắc, vị hơi đắng
Quan sát dưới kính hiển vi thấy: Bột có rất nhiều mạch xoắn rời nhau hoặc đan xen vào nhau, mạch vòng, mảnh mô mm, mảnh biểu bì với những tế bào hình chữ
nhật mang lỗ khí, Tinh thể calei oxalat hình kim (hình 2)
Hình 2: Soi bột lí Trinh Nữ Hoàng Cung
1- MạchXoắn 4- Tinh thé calc? oxalat hinh kim 2- — Mạch vòng 5- Mảnh biểu bì mang lỗ khí 3- _ Mạch mạng 6-_ Mảnh biểu bì có cutin lỗi 1.4, Thử tỉnh khiết 1.4.1.Độ Ẩm: Khơng q 12,0% 1.4.2.Tro tồn phần: Không quá 12,0% Tạp chất: Không quá 0,5% 1.8 Định tính: Phải thể hiện phép thử định tính của trính nữ hoàng cung 1.6.Định lượng :
- Hàm lượng alcaloid toàn phân tính theo Lycorin (C¡zH›; NO, } không được ft hơn 0,2% (kl/kD) tính trên dược liệu khô kiệt
- Hàm lượng Crinamidin (Ci7HisNOs) kh6ng ít hơn 0,085% (kI⁄41) tính theo
dươc liệu khô kiệt
II Phương pháp thử
2,1.Mô tả: Thử bằng cảm quan, dược liệu phải đạt yêu âu đã nêu
2.2.Vi phẫu, soi bột: Thử theo ĐĐVN IHI, nhụ lục 9.8 (Định tính được liệu và các chế phẩm bằng kính hiển vi)
2.3.Thử tình khiết:
Trang 132.3.2.Tro toàn phần: Thứ theo DĐVN LHI, phụ lục 76 (Xác định tro tan phiin), phương pháp I
2.3.3.Tạp chất: Thử theo DĐVN II, phụ lục 9.4 (Xác định tạp chất lẫn trong được diện)
2.5.Định tính : Đun sôi nhẹ 1 g bột dược liệu với 20 mí ethanol 96% (TT) trong 5 phút, gạn lọc qua bông được dung dich A ding lam ede phan ing sau:
2.5.1 Dinh tinh flavonoid:
Ống 1: Cho vào ống nghiệm 1 ml dung địch A, thém vai gigt dung dich natri hydroxyd 5% (TT) dung dịch chuyển từ màu vàng nhạt đần sang mầu cam
Ống 2: Cho vao 6ng nghiém 1 ml dung dich A, thém 0,5 ml acid hydrochloric đậm đặc (TT), thêm một ít bột magncsi kim loại (TT) dung địch có màu đồ,
2.5.2.Dinh tinh coumarin
Cho vào ống nghiệm 1 ml dung dich A, thém 2ml dung dich natri carbonat 10% (TT) và !mi nước cất (TT), đun hồi lưu 10 phút, để nguội Sau đó cho thém 3 — 5 giot P— nitro anilin dịazo hóa (TT) sẽ có màu đỏ,
2,5.3.Dinh tính afcaloi4: Phương pháp sắc ký lớp mỏng (DĐVN III, phụ lục 4.4) 3.5.3.1.Hóa chất, thuốc th:
+ Bản mồng silicagel G, dày 025mm, đã được hoạt hóa ở 105°C trong 1 giờ
+ Ethanol 96%, cloroform, acid sulfuric 5%, ameniac đậm đặc (TT) 02)
+ Thuốc thử hiện màu: Thuốc thử Dragendorlf, dưng dịch acid sulfuric 10%
2.5.3.2.Cách tiến hành :
+ Dung dịch thử: Lấy 3g bột dược liệu, thêm 50ml ethanol 96%, đun trên cách thủy 30 phút, gạn lọc qua bông Cơ dịch lọc trên ếch thủy tới cần Hòa tan cắn bằng 30ml dung địch acid sulfurie 5%,lọc qua giấy lọc Kiềm hóa dịch acid bằng ammoniac đậm đặc đến pH =10, sau đó lắc địch kiềm với 30 ml cloroform, Gin lấy
địch cloroform, cô trên cách thủy tới cắn Hòa cắn trong 1 mí eloroform được đung
dịch chấm sắc ký
+ Dung địch đối chiếu: Lấy khoảng 3g hột lá khơ trinh nữ hồng cung, làm thử, bắt đầu từ “ thêm 50 mi ethanol 96% duge dung dich ol ky”
Chấm riêng biệt lần lugt 20 yl dung dich thit va dung dịch đối chiếu lên 2
Trang 14Kết quả: Trên sắc ký đồ, mẫu thử phải cho các vết cùng màu, cùng RÝ với
các vết của mẫu đối chiếu
3.5.4 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao: (DĐVN TII, phụ lục 4.3)
Ở phản định lượng crinamidin, sic ki 46 của dung địch thử phải có píc có cùng thời gian lưu với píc crinamidin trong sắc kí đồ của dung dich chuẩn, 3.6 Định lượng 2.6.1.Dịnh lượng alcaloid toàn phần 2.6.1.4.Thuốc thats - Ethanol 96% (TT) - Dung địch acid acetic 5% (TT) - Thuốc thử Maycr (TT) - Dung dich acid sulfuric 5% (TT) ~ Amoniac đậm đặc (TT) - Clorolom (TT)
- Natri sulfat khan (TT)
- Dung dich acid hydrochloric 0,02N (CD) - BS methyl (CT)
~ Dung địch natri hydroxyd 0,02N (CD) 2.6.1.2,Tién hank:
Cân chính xác khoảng 1Ơg bột thơ dược liệu (đã tính trừ hàm ẩm) cho vào bình nón nút mài 250 ml, thêm 100ml ethanol 96% đã acid hóa bằng dung dịch acid
acetic 5%, dun sôi hồi lưu 30 phút, gạn lọc qua bông, tiếp tục chiết như vậy cho đến
khi dịch chiết không cồn phẩn ứng với thuốc thử alcaloid nữa (không còn tủa với
thuốc thử Mayer)
Gộp các dịch lọc, bốc hơi trên cách thủy đến cắn Dùng 40ml dụng dịch acid
sulfuric 5% chia làm nhiều lần để hòa tan cắn và lọc vào bình lắng gạn, rửa giấy lọc
bằng 10ml acid sulfuric 5% Kiém hda dung địch acid bằng ammoniac đậm đặc đến pH =I0 rồi chiết alcaloid base bằng cloroform 5 lần, mỗi lần 30ml Lấy 15 ml nước
cất cho vào bình gạn, rửa lần lượt từng dịch chiết cloroform một và lọc từng dịch chiết cloroform qua một phễu lọc chứa nari sulfat khan Gộp địch chiết cloroform dã lầm khan vào bình nón dung tích 250ml Rửa phễu loc và natri sulfat khan bằng 20
mi cloroform chia làm nhiều lần, gộp địch rửa vào dịch chiết cloroform, bốc hơi trên
cách thay đến cấn khô
Trang 15Iml dung dich acid hydrocloric 0,J2N tưởng đương với 0,0057464g lyoorin
(CigHi7 NOs, M=287, 32)
: 4
Cí- 900564 iu
m
“Tính kết quả theo công thức:
N-—s6 ml acid hydrochloric da si dung,
m — Khối lượng mẫu thử đã trừ độ 4m (g)
C(#) - TI lệ phần trăm alcaloid toần phần (tính theo Iycorin) tính trên dược liện khô 2.6.2 Định lượng crinamidin: Phương pháp sắc kỹ lòng hiệu năng cao (DDVN IH, phụ lục 4.3) 2.6.2,1.Thuốc thử và dụng cục
- Acetonitrii: loại dùng cho sắc ký lỏng
- Kali dihydrophosphat, triethylamin, acid hydrocloric, cloroform, methanol, amoniac: loại tinh khiết phân tích
Trang 16Tốc độ dòng : L,0- 1,5 ml phút (điều chỉnh tốc độ đồng để thời gian lưu của
crinamidin khoảng 30 phút) Thể tích tiêm : SỐ pH
* Dém phosphat 100 mM, pH 3,0: Pha dụng dịch kalidihydro phosphat trong nước có
trên, lắc đều, điều chỉnh
nơng độ 10ƠmM, thêm 3m triethylamin cho 1 lit dung
pH = 3,0 bing acid phosphoric dic Lọc qua màng lọc 0,45m
2.6.2.3 Chuẩn bị các đụng địch chuẩn và thử Đừng dịch chuẩn:
Dung dich crinamidin trong acid hydrocloric 0,1 N có nồng độ chính xác
khoảng 0,1 mg/ml
Dung dich thir:
Cân chính xác khoảng 3 g bột lá trình nữ† hòang cung, Jam am bang amoniac đặc, đậy kín, để yên trong lgiờ Thêm 50 ml hỗn hợp dung môi cloroform — methanol @ : 1), lắc siêu âm 30 phút, dễ lắng, lọc qua giấy lọc Bã được chiết như trên 4 lần nữa, mỗi lần với 40 ml hỗn hợp dung môi Gộp các dịch chiết hỗn hợp dung môi, cô trên cách thủy đến cạn Hòa tan và chuyển tòan bộ cắn vào bình định mire 20 ml bang dung dich acid hydrocloric 0,1 N, thém acid hydrocloric 0,1 N dén vạch, lắc đếu, lọc qua giấy lọc thường rồi lọc tiếp qua màng lọc 0,45 im
2.6.2.4 Tiến hành
- Kiểm tra độ ôn định của hệ thống sắc ký,
jém 6 lẫn dung dịch chuẩn vào hệ thống sắc ký, tiến hành phân tích theo điều kiện như trên, ghi sắc kĩ đổ Hệ thống sắc ký chỉ đạt yêu câu khi độ lệch chuẩn tương đối (#) của điện tích pic crinammidín không quá 2,0%, hệ số bắt đối xứng trung binh cua pic erinamidin khéng qua 1,5, số đĩa lý thuyết trung bình của cột tính theo pic crinamidin Không dưới 10 000
- Tiển hành:
Tiêm riêng biệt dung dich thi va dung địch chuẩn vào hệ thống sắc ký, tiến hành sắc ký theo điều kiện mô tả, ghỉ sắc ký đề
- Tĩnh toán kết quả:
Trang 17A, x€ x20 x10
A, x M(00—b)
Trong dé:
~ A, va A, lin lượt là diện tích pic canamidin trong mẫu thử và mẫu chuẩn
~C: nồng độ crinamiđin trong mẫu chuẩn (mg/m])
~M: khối lượng chế phẩm cân để định lượng (g)
~ b: Độ âm của được liệu (%)
Tầm lượng crinamidin (Cr;HNO;) trong lá trình nữ hồng cung khơng được dưới 0,085% (kl/kl) tính theo được liệu khô
'V.Thu hái, chế biến bão quản:
Trang 18CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự do - Hạnh phúc mi, oom 48 Hai Hà Trưng - Hà Nội ĐT: (04) 825 3701 - Fax: (04) 825, 6911
PHIẾU KIỂM NGHIỆM
{Kết quả kiện nghiệm chỉ có giá trị với mẫu đem thử) VILAS 087
L& TRINH NOU HỒNG CUNG
Noi stin xudi Cơng ty cổ phần Dược liệu TH 2
Sẽ lỏ, hạn dùng:
Người và nơi gi mà Công ty cổ phần Dược Liệu TH 2
Yêu cẩu KN (shỉ rõ nội dung, số, ngày, thắng, năm của công văn hay giấy lờ kèm Kiểm tra chất lượng, xét sỹ tiêu
Ngày, tháng, năm nhận mẫu: 10/08/2007 — Số
Người nhận mẫu: Hoàng Khánh Hoà
Thit theo: Tiêu chuẩn cơ
Tink trang mau khí nhận va mở niềm phong để, § Lo _ KẾT QUÁ J
1 Mô tẢ : Phái đạt yêu cầu gui ping |
| 2 va phdu ¡ Phải đạt yêu cầu gui j Đúng 3 Soi bột : Đăng | Đúng 4 Đạt [9,2%] LẾ patil, (xắn¢ cơ Lap! m phổi thể hiện phép Lhử định tính cung Dang
raloid toda pin tinh theo Lycorin (CyfNC)
Trang 19HỘ Y TẾ TIEU CHUAN Cd sé Nhóm R 'TỔNG CÔNG TY DƯỢC VIỆT NAM CAO KHÔ Số: 07.P4.055-06 CÔNG TY Cr DƯỢC LIỆU TW2 TRINH NŨ HOÀNG CUNG: | Có hiệu lực từ:
Ban hành theo quyết định số: / QĐ-DL2-TC ngày tháng năm 2006
I YÊU CÂU KỸ THUẬT
1 Công thức điều chế: Công thức sản xuất 25kg cao khơ trinh nữ hồng cưng
Lá khơ trình nữ hồng cung, 100 kg
Ethanol 70% 900 lit
Acid acetic 18 kg
Lactose #-10 kg
2 Nguyên liệu
Lá khô trinh nữ hoàng cung (Fofiưem Crinaim latifolium) đạt TCCS
Ethanol 70% (Bthanolum 70%) đạt tiêu chuẩn DĐVN HI Acid acetic (Acid acetic) đạt tiêu chuẩn DĐVN II
Lactose (Lactosum) đạt tiêu chuẩn DĐVN II]
3 Chất lưựng sân phẩm
3.1 Tính chất: Bột màu nân đen, mùi thơm đặc trưng, vị hơi mặn ngọt 3.2 Mất khối lượng do làm khô: Không quá 5%
3.3 Tro toản phẩm: Không quá 35% Dùng 1g chễ phẩm
Trang 20s# Nấm và mốc: Không quá 100 KL⁄g
“ Escherichia coli: Khong duge có
Pseudomonas aoruginosa: Không được có, # Slaphylococeus anreus: Không được có $* Salmonelfa: Không được có
1I PHƯƠNG PHÁP THỨ
1.Tính chất:
Kiểm tra bằng cầm quan, chế phẩm phải đạt các yêu cầu trên
2.Mất khối lượng do làm khô
Cân chính xác khoăng Lạ chế phẩm sấy ở 70C đến khối lượng không đổi,
áp suất thường (tiến hành theo Dược điển Việt Nam 1I1, 2002, phụ lục 5 l6) 3 Tro toàn phần
Cân chính xác khoảng [z chế phẩm và tiến hành theo Dược điển Việt Nam
I, 2002, (phy luc 7.6) 4, Dink tinh:
4.1.Phương pháp sắc ký lấp méng (DBVN ITT, phy luc 4.4) a.) Thude thit:
- Ban méng silicagel GF 254 wang sn (Merck), hoat hoa 6 110°C trong 1 giờ
-_ Hệ dung môi: Chlorolorm - Methanol ~ Amoniae 25% (7: 1 ' 1) -_ Chlarofomm P.A
- Ethanol 90%
~ _ Thuốc hiện màu: Dragendorff (TT), ~_ Bột tá khô cây trình nữ hoàng cung, %,) Mẫu thất
Trang 21c.) Mẫu đốt chiếu:
Lấy 4g bột lá khô cây trình nữ hoàng cung cho vào một bình nón dung
tích 100ml Chiết 3 lân mỗi lẫn 15ml ethanol 90% bằng cách đun hồi lưu trong cách
thủy, gộp các dịch chiết và lọc; cô dịch lọc đến khô trên cách thủy Hòa tan cắn với 3ml hỗn hợp Chlorofonn — Methanol (9:1) ta có dung địch mẫu đối chiếu
4.) Tiến hành:
Chấm lẫn lượt riêng rẽ dung địch mẫu thử và mẫu đối chiếu lên bản mồng Silieagel GF 254 (mỗi mẫu 20 ¿l), để khơ ngồi khơng khí Triển khai sắc ký theo chỉ dẫn của Dược điển Việt Nam II, 2002 (phụ lục 4.4, PL 86) với hệ dung môi Chloroform — Methanol — Amoniac 25% (7 : 1: 1)
'Thuốc thử hiện màu: DragendorfF &) Kết quả:
Trên sắc ký đổ, mẫu thử phải cho các vết có trị số Rf và cường độ mau
sắc tương ứng với các vết của mẫu đối chiếu
4.2 Phương pháp sắc kỹ lãng hiệu năng cao (DĐVN HH, phụ lục 4.3)
Õ phần định lượng crinauidin, sắc ký đồ của dung dịch thứ phải có píc có cùng, thời gian lưu với píe erinamidin trong sắc ký đỗ của dung địch chuẩn
5 Định lượng _
3.1.Định lượng alcaloid loàn phẩn : Cân chính xác khoẵng 3g cao khô Trinh nữ hoàng cung vào bình nón nút mài, thêm vào mẫu thử 3Ø :nl dung dich acid sulfuric 2 %, đưn cách thủy ở 60°C trong 15 phút thỉnh thoảng lắc cho tan đều, ly tâm, tập
trung cặn ly tâm, làm lại lần 2, lần 3, vdi 20ml acid sulfuric 2% cho đến khi dịch chiết không còn phán ứng alcaloid với thuốc thử Mayer, Kiểm hoá dịch lọc bằng
Trang 22Hàm lượng % alcaloid toàn phần được tính theo công thức sau, hiết rằng
1ml dung dịch acid hydroeloric 0,02N rương đường với 0,0057464g lycorin (¥, — Vị) x0/0057464 x 100 X#= m đây
Vị: Số ml đụng địch Natrihydroxyd 0,02N đã dùng cho mẫu trắng, Vz: $6 ml dung dich Natrihydroxyd 0,02N da ding cho mau thit m: Khối lượng mẫu thử (đã trừ ẩm) đem định lượng (g)
X%: Hàm lượng % của alcalojd toàn phần tính theo lyeorin của cao 3.2,Định lượng crirahnidin: Phương pháp sắc Ký lông hiệu năng cao (DĐVN UL, nhụ lục 4.3) 3.2,1.Thuấc thứ và đụng cụ
~ Aeetonitril: loại đùng cho sắc ký lỏng,
- Kati dihydrophosphat, triethylamin, acid hydroelorie, cloroform, methanol, amoniac: loai tinh khiết phần Gch
~ Máy sắc ký lông hiệu năng cao có khả ning chay gradient dung mdi 3.2.2 Điều kiện sắc ký Cz: Cột phân tích pha dão RP18 (250 x 4.6mm; 5jum) Detector: UV 28Snm Pha déng: Acctonitril - Đệm phosphat 100 mM, pH 3,0 với chương trình rửa giải như sau “Thời gian (phút) % Acetonitril % đệm phoaphaL pH 3,0 - 040 man _ 90 40—41 10540 90x60 _ 1 41-960 40 o | 6061 40-910 60-90 : 61365 —_ 1Ô _ 90 i ñe độ dòng : 1,- 1,5 mì/ phút (điều chỉnh tốc độ dòng để thời gian lưu của crinamidin khoảng 30 phú) Thể im : 30 Ì
* Đệm phosphat 100 mM, pli 3,0: Phá dụng dịch kalidihydro phosphat trong nude
có nông độ 100mM, thém 3m! triethylamin cho 1 lit dung dịch trên, lắc đều, điều
Trang 23
Dung dich chudn: Dung địch crinamidin trong acid hydrocloric 0,1 N có nồng
độ chính xác khoảng 0,1 mg/ml,
Dung dich thie: Can chính xác khoảng 3 g chế phẩm, làm ẩm bằng amoniac đặc,
đậy kín, để yên trong !giờ Chuyển toản bộ lượng bột chế phẩm đã làm âm trên vào túi
giấy lọc và cho vào bình Soxhlet, thêm khoảng 100 ml hỗn hợp dung môi cloroform = methanol 3 : 1), ngâm qua đêm Sau đó, thêm khoảng 80mi hỗn hợp dung môi
cloroform ~ methanol (3 : 1) vào bình chiết, đun sôi hồi lưu trên cách thủy trong 5 giờ
kể từ khi địch bắt đầu sôi Dịch chiết Soxhlet được cô trên cách thủy đến cạn Thêm vào cắn 20 mÏ dung dich acid hyđrocloric 0,1 N, lắc siêu âm 15 phút, lọc qua bông vào
bình gan và tiếp tục tiến hành như trên 3 lần nữa, mỗi lần với 10m! dung địch acid
hydrocloric 0,1 N Dang 10mi dung djch acid hydrocloric 0,1 N để rửa phếu lọc và
bông Gộp các dịch chiết acid và dịch rửa vào bình gan, kiểm hỏa bằng amoniac đặc đến pH=10-11, lắc với cloroform 5 lần, mỗi lần 60 ml trong 10 phút Gộp các dịch chiết ciorofbrm, cô trên cách thủy đến cạn Hòa tan và chuyển toàn bộ cần vào bình
định mức 20 ml bằng dưng dich acid hydrocloric 0,1 N, thém acid bydrocloric 0,1 N
đến vạch, lắc đều, lọc qua giấy lọc rồi lọc tiếp qua màng lọc 0,45 pm 3.2.4 Tiền hành:
- Kiểm tra độ ổn định của hệ thống sắc lợi: Tiêm 6 lần dung dịch chuẩn vào bệ thỗng
sắc ký, tiến hành phân tích theo điều kiện đã nêu trên, ghí sắc ky dd Hệ thống sắc ký
chỉ dạt yêu cầu khí độ lệch chuẩn tương đối (%) của điện tích pic crinamidin không quá 2,0%, hệ số bất đối xứng trung bình của plc crinatnidin không quá J,5, số đĩa lý
thuyết trung bình của cột tinh theo pic crinamidin khéng dudi 10 000
- Tiến hành; Tiêm riêng biệt dụng dich thir va dung dich chuẩn vào hệ thống sắc kỷ,
tiến hảnh sắc ký theo điều kiện đã mô tả, ghi sắc ký đỗ ~ Tĩnh toán két quả: Hàm lượng % (kW/ki)crinamidin (C17H,sNOs) trong chế phẩm được tính tieo công thức: Ai xC x20 x 100 x 100 Xe = Á, x M(100—b) x 1000 Trong đó:
- A, và A, lần lượt là diện tích pi crinamidin trong mẫu thử và mẫu chuẩn
- C: nỗng độ crinamidin trong mẫu chuẩn (mg/m))
~M: khối lượng chế phẩm cân để định lượng (8) : Độ ấm của chế phẩm (%)
6 Độ nhiễm khuẩn
Cân chính xác khoảng 5 ø chế phẩm đã nghién mịn vào bình nón nút mài 200ml đã được tiệt trùng và đã biết khối lượng Thêm dung dịch natri clorid 0,9% vô trùng vừa
Trang 241/100, 1/1000 Sau đó tiển hành thử theo DĐVN II - phụ lục 10.7 (Thử giới hạn nhiễm khuẩn),
II ĐÓNG GÓI, GHI NHAN, BAO QUAN
Cao được đóng trong bao bi kin Nhân rõ rằng
Bảo quản nơi khơ ráo, thống mát
Cơng ty cổ phần dược liệu TW2
Phòng Khoa Học Công Nghệ Tổng Giám Đốc ee ‘ Ex cone ty E oO Pid {_ ĐƯỢC LIEU
GIAM BOC KHON
ps, NGUYEN VAN PHAN P TỔNG GIÁM ĐỐC
DS DAM THAN BON
Trang 25
BT: (04) 825 2791 » Fax: (04) 825.6910 VKN/BM/01.2 —Trg.1/1 'Độc lập - Tự do ‹ Hạnh phúc ˆ 4N Hai Bà Trøng - Hà Nội PHIẾU KIỂM NGHIỆM
CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM
(Kết quả kiễm nghiệm Chỉ có giá tei với mẫu đem thử) ý: 550 —TCH VILAS 087
Mau dé kiém nghiém: Cao khô TRINH NỮ HOÀNG CUNG
Nơi sản xuất: Công ty cổ phẩn Dược liệu TW 2 Số lô, kan dùng: 86 SK ; 020707; NSK : 20/09/2007
Người và noi gửi mẫu: Công ty cổ phân Dược liệu TW 2
Yêu cầu KN (hi rõ nội dụng, xố, ngày, tháng, năm của công sân hay giấy tờ kèm thề
Kiểm tra chất lượng, xét ` tiêu
ở Năm
Ngày, tháng, ném nhận mẫu: 25/09/2007 Sé fling 83
Người nhận mẫu: Hoàng Khánh Hoà
Thử theo: Tiêu chuẩn cơ ở
Tình trạng mẫu khi nhận và mở niềm phong để
Mẫu đóng gội lọ nhựa nút kín, s pen tế `” hơi mặn ngọt Đúng l2 Đài (4,248) 3 Dat (35,98) 4 thể hiên phep thir dich : Đúng 5 4 toàn phén tính theo Lycorin phải đạt È tữa chế phẩm khơ Đạt (0, 598) đ Ẩnamidin (C- HẠNG) không được dưới 0,035 tính theo khô Đạt (0, 0498) ¡ Phẩi đất yêu cầu gu Bat - R J_ KẾTQUẢ 1 Tính chất ¡ Bột màu nâu đen, tqi thơi đàế trưng, vị
KếtHuận: 1— Nhất trí với tiêu chị
2- Mẫu thử đat yêu cẩu chất lượng theo tiêu chuẩn cơ sở
Hà nội ngày “28 (tháng 9 năm 2007
op ORS
sĩ I He Che Toe:
Trang 26TLEU CHUAN CO _ Nhóm R TÔNG CÔI 'Viên nang Ị 98 - P4 -421- 07 VIET NAM — | CÔNG TY CP DƯỢC LIỆ CRILA Có hiệu lực từ ngày ký TW2
Ban hành theo quyết định số: ngày - tháng - năm 200
1, YÊU CÂU KỸ THUẬT
1.1 Công thức điều chế cho 1 viên nang:
Cao khô lá trình nữ hoàng cung _ Hai trăm năm mươi milieam 250,0mg
(Tương duong 1.25mg alcaloid toan phan)
Tính bột Sáu mươi ba phẩy hai miligam 63/2 mg
Aerosil Bay phy hai miligam 7,2 mg
Sodium starch glycolat Ba mươi sáu miligam 36 mg
Tale Mội phẩy lám miligam 1,8 mg
Mapnesi stearaL Một phây tám miliaam 1,8 mg 1.2, Nguyên phụ liệu: Cao khơ lá trình nữ hồng cung (vat #ofiwm Crimi ĐạtTCC§ latifolti siccum) “Tĩnh bột (Amylum) Dat DPN HT, tập 3
Acrosil (colloidal silicon dioxide) Dat USP 26
Sodium starch glycolat Dat USP 26
Tale (Talcum) Dat DDVN Ill
Magnesi stearat Dat DDVN Ili
Trang 271.3 Chất lượng thành phẩm: 1.3.1, Hình thức; Viên nang cứng số 0 bên trong chứa bột thuốc màu nâu, vị đặc biệt, mùi thơm đặc trưng 1.4.2 Mắt khất lượng do lam khé: Khong qua 9,0% +
Độ tan rõ; Không quả 30 phút
1.3.4 Ðộ dồng đều khối lượng: Khối lượng trung bình bột thuốc trong nang + 7,5%
hai thể hiện phép thử định tính của trinh nữ hoàng cung 1.3.6, Định lưpng:
- Ham lượng alealoid toàn phần (tính theo lycorin) trong mỗi viên phải từ 1,125 - 1,375 mg/viên tính theo khối lượng trung binh bột thuốc trong nang
- Hiâm lượng Crinamidin (C;I,¿NO;) không được dưới 70 wgiviên tinh theo khối
lượng trưng bình bột thuốc trong nang
1.3.7 Độ nhiễm khuẨn:
- Tổng số vi khuẩn hiểu khí không quá 10” trong 1 g - Tang s6 Enterobacteria không quá 500 trong 1g, ~ _ Nấm và mốc không quá I00 trong l8
- Không được có Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus
2 PHƯƠNG PHÁP THỬ
2.1, Hình thức: Kiểm tra bằng cám quan, chế phẩm phải đạt các yêu cầu đã nêu
2.2, Mất khỗi lượng đơ làm khô: Cân chính xác khoảng 1 g bột chế phẩm đã được nghiễn ịn, tiến hành thử theo DDVN II, phụ lục 5.16, phương pháp sẩy trong tủ sấy ở 80C, áp suất thường trong 4 giờ
mi
2.3, D6 tan ra: Thir theo DVN TI, phy lục 8.6
2.4 Độ đồng đều khối lượng: Thử theo DĐVN IHI, phụ lục 8.3
3.5 Định tỉnh:
2.5%.1 Phương pháp sắc ký tép máng: (DĐVN UL, phụ lục 4.4)
3.3.1.1 Thuấc thử, dụng cu:
+ Bản mông siliea gel Œ tráng sẵn (Merck), đã hoạt hóa & 110°C trong 1 giờ - Ethanol 50%, amoniae dic, cloroform, methanol, ethanol tuyệt đổi (TT)
~ Dung môi triển khai sắc ký: Cloroform - methanol - amoniac đặc (7: 1 : 0,2)
- Thuốc thứ hiện màu: Thuốc thử Dragendorff, dung dich acid sulfuric 10%
| ĐÃ THẤM ĐỊNH
Trang 282.5.1.2, Cách thứ
Đừng dịch thứ: Lấy khoảng 1g bột chế phẩm chơ vào bình nón nút mài đung tích
100ml, thém 50m! ethanol 50%, dun sôi hồi lưu trong 1 giờ Để nguội, lọc Cô dịch lọc trên
cách thủy đến cạn Hòa tan cắn trong 10ml nước cất, kiểm hoa dung dịch thu được bằng amoniac đặc đến pH = 10-11 rồi lắc kỹ với 30ml cloroform Gạn lấy lớp clorofom, bốc bơi trên cách thủy đến cạn, Hòa cầu trong | ml ethanol tuyét đối được dung dịch chấm sắc ký
Dung dich doi chiếu: Lẫy 4g bột lá trình nữ hoàng cung cho vào bình nón nút mải
dung tích 100ml rồi tiếp tục tiến hành như mẫu thử, bắt đầu tir “thém 50m! ethanol 50% được dong dich chấm sắc ký *
Chấm riêng biệt lên bản mỏng 20u1 mỗi đụng dịch thử và dung dịch đối tại hai
điểm A và B Triển khai sắc ký cho đến khí dung môi đi được khoáng 12 - 13em, lấy bản
mỏng ra, để khô ở nhiệt độ phòng rồi phun thuốc thử Dragendorff, phun tiếp dung dịch acid
sulfuric 10% dén khi các vết hiện rõ
Kết quã: Dung dịch thử phải có các vết cùng màu, cũng R¿ với các vết của dung dịch
đối chiều
2.5.2 Phương pháp sắc ký lông hiệu năng cao:
© phan định lượng crinamidin, sắc ký đồ của dung dịch thử phải có píc có củng thời gian lưu với píc crinamidin trong sắc ký đỗ của dung địch chuẩn 2.6 Định lượng: 2.6.1 Định lượng dlcaloid toàn phân: 3.6.1.1 Thuốc thừ, dụng cụ
- Dung dich acid sutfuric 2% (TT),
= Thude thir Mayer (TT)
- Amoniae đặc, ctoroform, natri sulfat khan (TT)
chuẩn độ acid hydrocloric 0,02N, natri hydroxyd 0,02N (CB)
= Dung di
- Dung dịch chi thj dé methyl (TT) Tiến hành:
Lấy 50 viên nang, cân và xác định khối lượng trung bình thuốc trong nang, nghiễn mịn và trộn đều Cân chính xác một lượng bột chế phẩm tương đương với khoảng I0 viên nang
vào bình nón nút mãi, thêm 30ml dung địch acid snlfurie 2%, dun each thủy ở 60” trong 15 phút, thỉnh thoảng lắo Để nguội, ly tâm với tốc độ 5000 vòng / phút trong 5 phút, gạn lấy dịch ly tâm Cấn còn lại tiếp tục chiết như trên lẫn 2, lẫn 3, mỗi lẫn với 20ml dung dịch
acid sulfuric 2% cho đến khi dịch chiết không còn phản ứng alcaloid (thứ với thuốc thử Mayer) Gap các địch chiết acid, kiểm hóa bằng amoniac đặc đến pH — 10-11, lắc với cloroform 5 25ml va lic trong 5 phút Rửa mỗi dịch chiết cloroform bằng cách
lắc với nước cất, mỗi lần 20m] cho đến Khi nước rửa trung tính với giấy quỳ Lọc dịch chiết
Trang 29thêm chính xác 10,0ml đung dịch acid hydroeloric 0,02N (CĐ) và 3 - 4 giọt chỉ thị đỏ methyl (CD), lắc đêu Chuẩn độ acid hydrocloric 0,02N dư bằng dung dịch natri hydroxyd 0,02N
(CĐ) cho đến khi màn của đung địch chuyển từ đỏ sang vàng Song song làm một mẫu trắng trong cùng điều kiện
Iml dụng dịch acid hyđoclorie 0,02N tương đường với 5,7464 mg alcaloid toàn phan tinh theo Iycorin (C¡eHizNOx, phân từ lượng 287,32)
Hàm lượng alealoid toân phả thức: tinh theo lycorin trong mỗi viên được tính theo công K (V1 - V2) x 5/7464 x my P(mgiviên) = - Trong đủ ~ Vị: số ml dung dich natri hydroxyd 0,02N da ding cho mẫu trắng,
~_ Vạ: số ml dung địch natri hydroxyd 0,02N đã đùng cho mẫu thử ~_ K:; Hệ số hiệu chỉnh của dung dịch natti hydroxyd 0,02N
~ Mt khối lượng bột viên đem thứ (§)
~ my: Khối lượng trung bình bột thuốc trong nang (B)
2.6.2 Định lượng crinainidin: Phương pháp sắc ký lông hiệu nẵng cao (DĐVN TT, phụ lục 43)
3.6.2.1 Thuốc thừ và dụng cụ:
- Acetonitri]: loại dùng cho sắc ký lỏng
+ Kali dihydrophosphat, tríethylamin, acid hydroclorie, cloroform, methanal, amoniac: loại
tinh khiết phân tích
~ Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao có khá năng chạy gradient dung mồi 2.6.2.2 Diễu kiện sắc kỷ: Cái: Cột phân tích pha đào RP18 (250 x 4,6mm; 5m), Detector: UV 285m Pha động: Acelonitril - Đệm phosphat 100 mM, pH 3,0 với chương trình rửa giải như sau: [ %Aeeoniril | % đệmphospharpH3,0 10 90 1040 9060 40 l 60 [ 40910 60390 61365 Ỉ 10 90 Tắc đó đông _: 1,0- 1,5 mÙ phút (điều chỉnh tốc độ dòng để thời gian lưu của crinamidin Khoảng 30 phat) Thể tích tiém : 50 yd
* Dém phosphat 100 mM, pH 3.0: Pha dung dich kalidihydro phosphat trong nude cd néng do 100mM, thêm 3ml triethylamin cho 1 lít dung dịch trên, lắc đều, điều chính pI1 = 3.0 bằng
acid phosphoric dic Lọc qua mảng lọc 0
Trang 302.6.2 3 Chuẩn bị các dụng dịch chuẩn và thử:
Dung dich chuẩn: Dung dịch crínamidin trong avid hydrocloric 0,1 N có nỗng độ chính xác khoảng 0,1 mg/ml
Dung dich thie: Lay 50 viên nang, cân và xác định khối lượng trung bình bột thu:
trong nang, nghiễn min và trộn đều, Cân chỉnh xác một lượng bột chế phẩm tương đương với khoảng 10 viên nang, làm Âm bằng amoniae đặc, đậy kín, để yên trong Igiờ Chuyển toàn bộ lượng bột chế phẩm đã làm ẩm trên vào túi giấy lọc và cho vào binh Soxhlet, thêm khoảng 100 m] hỗn hợp dụng môi cloroform — methanol (3 : 1), ngâm qua đêm Sau đó, thêm khoảng,
§0ml hỗn hợp dung môi cloroform — methanol (3 : 1) vào bình chiết, đun sôi hồi lưu trên cách
thủy trong 5 giờ kế từ khi dịch bất đầu sôi Dich chiết Soxhlet được cô trên cách thủy đến cạn Thêm vào cần 20 ml dung dich acid hydrocloric 0,1 N, Ide siêu âm [$ phút, lọc qua bông vào tình gạn và tiếp tục tiến hành như trên 3 lẫn nữa, mỗi lần với 10ml dung dich acid hydroclaric 0,1 N Ding LŨm! dung địch acid hydroclorie 0,1 N để rửa phốu lọc và bông Gộp các địch chiết acid và địch rửa vào bình gạn, kiểm hóa bằng amoniac đặc đến pH~10-11, lắc vi cloroform 5 lần, mỗi lần 60 ml trong 18 phút Gộp các dịch chiết cloroform, cô trên
đến cạn Hòa tan và chuyển toàn bộ cắn vào bình định mức 20 ml bằng dung
hydroelorie 0,1 N, thêm acid hydrocloric 0,4 N đến vạch, lắc đều, lọc qua giấy lọc rồi lọc tiếp qua màng lọc 9,45 pm,
2.6.3.4 Tiến hành
- Kiểm tra dp ôn định của hệ hông sắc ký: Tiêm 6 lần dung dịch chuẫn vào hệ thông sắc ký, tiến hành phân tích theo điền kiện đã nêu trên, phi sắc ký đỗ Hệ thống sắc ký chỉ dạt yêu câu khi độ lệch chuẩn tương đối (4) của diện tích pic crinarnidin không quá 2,0%, bắt đổi xứng trưng bình của pic crinamidin không quá 1,5, số đĩa lý thuyết trung bình của cột tính theo pie crinamidin không đưới 10 000,
- điền hành: Tiêm riêng biệt dung dich thử và đụng dich chuẩn vào hệ thống sắc ký
sắc kỹ theo điều kiện đã mô tả, ghí sắc ký đỏ,
~ Tĩnh toán kết quả:
Hàm lượng crinamidin (C¡;HyoNOs) trong một viên tính theo khối lượng trung bình viên được tính theo công thức: A, xC x20 xmy ến hành X (pgviên) A;xM Trong đó:
- Ái và A, lần lượt là điện tích píc crínamidin trong mẫu thử và mẫu chuẩn
~ C: néng 8 crinamidin trong mau chudn (ug/ml)
~M: khối lượng chế phẩm cân để định lượng (g)
~ my: khối lượng trung bình bột thuốc trong nang (g)
Cân chính xác khoảng 5 g chế phẩm đã nghiền mịn vào bình nón nút mải 200ml đã
được tiệt trùng và đã biết khối lượng Thêm dung dịch natri clorid 0,9% vô trùng vừa đủ để có néng độ 1/10, lắc k$ Từ dung địch trên, pha loãng tiếp để được các nồng độ 1/100, 1/1000
Trang 313 DONG GOI - BAO QUAN - HAN DUNG
Trang 32CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Doc lap - Tự do - Hạnh phúc BOY TẾ,
VIÊN KIỂM NGHIỆM THUỐC TRUNG UONG 48 Hai Bà Trung - Hà Nội
BI: (04) 825, 2791 - Fax: (04) 825, 6912
PHIEU KIEM NGHIEM (Kế quả kiển nghiệm chỉ có gid ri với mẫu đem thử)
So: 183 - TCH VILAS 087
Mdu dé kiém nghiém: Viên nang CRILA
Nơi sản guấi- Công ty cổ phần Dược liệu TW 2
Số ló, han ding: lô SK : 010906 ; NSX : 04/12/2006 ; HD : 12/2008
Người và nơi gửi mẫu: Công ty cổ phẩn Dược liệu TW 2
Yêu cẩu KN (ghỉ rõ nội dụng, số, ngày, thắng, năm của cáng văn hay giáp 12 KG (he
Kiểm tra chất lượng, xét duyệt tiêu chì
Ngày, thẳng, năm nhận mẫu: 21/02/2007 — Số đãng ký KN: TCH Người nhận mẫu: Hoàng Khánh Hoà
Thủ theo: Tiêu chuẩn cơ sở
Tình trạng mẫu khi nhận và mở niêm phong để kiểm nghiệm:
lọ x 40 viên, nhãn iyNõ sàng, YÊU CÀ
1 Hình thức : Viện nang cing số 0, bên xug xế thuốc mầu nêu, vị đặc biệt, mùi thơn đặc
Mất khối lượng do lắm khổ : ⁄-:ÐRg quá $0 Mẫu đóng KET QUA nv 8 § 5 ä ¡ Không quá 3Ù phút 5 F Ỹ lối lượRg Ízung oình bột thuốc trong i thử định thớt của | sến _,375mg/viện, tính theo khố: Luong trung Ị lếc trong narg i
GG Crinamidis (CyHNO:) Không được đướ: 70g/ i (81,5 08/3 wee \