Xây dựng quy trình nuôi thu sinh khối loài tảo biển skeletonema costatum grev cleve trong phòng thí nghiệm

ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ THÀNH ĐỒN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CHƢƠNG TRÌNH VƢỜM ƢƠM SÁNG TẠO KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TRẺ * BÁO CÁO NGHIỆM THU XÂY DỰNG QUY TRÌNH NI THU SINH KHỐI LOÀI TẢO BIỂN SKELETONEMA COSTATUM (GREV.) CLEVE TRONG PHỊNG THÍ NGHIỆM PHẠM THANH LƢU THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 05/2011 ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ BÁO CÁO NGHIỆM THU (Đã chỉnh sửa theo góp ý Hội đồng nghiệm thu) XÂY DỰNG QUY TRÌNH NI THU SINH KHỐI LỒI TẢO BIỂN SKELETONEMA COSTATUM (GREV.) CLEVE TRONG PHỊNG THÍ NGHIỆM CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI: CN PHẠM THANH LƢU CỐ VẤN KHOA HỌC: PGS TS ĐOÀN CẢNH THÀNH VIÊN THAM GIA ĐỀ TÀI: KS ĐỖ THỊ BÍCH LỘC CN PHAN DOÃN ĐĂNG CN NGUYỄN XUÂN ĐỒNG CN THÁI THỊ MINH TRANG CƠ QUAN QUẢN LÝ (Ký tên/đóng dấu xác nhận) CƠ QUAN CHỦ TRÌ (Ký tên/đóng dấu xác nhận) THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 05/2011 BÁO CÁO NGHIỆM THU Tên đề tài: Xây dựng quy trình ni thu sinh khối loài tảo biển Skeletonema costatum (Grev.) Cleve phịng thí nghiệm Chủ nhiệm đề tài: CN Phạm Thanh Lƣu Cơ quan chủ trì: Trung tâm Phát triển Khoa học Công nghệ trẻ Thời gian thực đề tài: 12 tháng (từ tháng 01/2010 đến tháng 01/2011) Kinh phí đƣợc duyệt: 80.000.000 (tám mƣơi triệu đồng) Kinh phí cấp: 80.000.000 theo TB số: TB-SKHCN ngày / /2010 Mục tiêu: - Phân lập loài tảo Skeletonema costatum - Ni giữ giống phịng thí nghiệm Nội dung: - Phân lập loài Skeletonema costatum số thuỷ vực Tp Hồ Chí Minh (ven biển Cần Giờ), ƣơng ni tạo dịng làm nguồn giống - Xây dựng quy trình ni: Nghiên cứu ảnh hƣởng yếu tố nhiệt độ, pH, DO, nồng độ muối, tới sinh trƣởng phát triển loài Skeletonema costatum tìm điều kiện mơi trƣờng thích hợp cho phát triển chúng Nuôi thu sinh khối tƣơi lồi tảo quy mơ phịng thí nghiệm Nghiên cứu, theo dõi biến động số lƣợng tế bào loài tảo theo chế độ dinh dƣỡng theo thời gian nuôi cấy - Giữ giống Skeletonema costatum bình thuỷ tinh, lƣu giữ phịng thí nghiệm - Khảo sát tình hình thực tiễn việc sử dụng tảo làm thức ăn để ƣơng nuôi số đối tƣợng thủy sản số trang trại thuộc đồng Sông Cửu Long (trung tâm giống hải sản quốc gia Nam bộ, trung tâm giống thủy sản Tp.HCM Trung tâm quốc gia giống thủy sản nƣớc Nam bộ, số trại giống Vũng Tàu, Cần Giờ,…) - Đánh giá chất lƣợng sản phẩm tảo Skeletonema costatum đƣợc sản xuất qui mơ phịng thí nghiệm thơng qua tiêu chất lƣợng nhƣ thành phần dinh dƣỡng, bệnh,…và đối chiếu với tảo Skeletonema costatum thƣơng mại đƣợc sử dụng thị trƣờng Bảng công việc dự kiến thực TT Cơng việc dự kiến Tổ chức thu mẫu ngồi thực địa Công việc thực Đã tổ chức đợt thu mẫu vị trí ven biển Cần Giờ Phân lập tảo phịng thí nghiệm Đã phân lập khoảng 80 tập đoàn Skeletonema costatum cho việc ƣơng ni Ni lồi tảo Skeletoenma costatum lơ thí nghiệm tìm điều kiện mơi trƣờng thích hợp cho phát triển lồi tảo Đã ƣơm ni thành cơng tìm đƣợc điều kiện mơi trƣờng thích hợp cho phát triển loài tảo Tạo sinh khối loài tảo Tiếp tục ƣơng nuôi điều kiện mà lồi mức độ thí nghiệm (nhỏ), sinh phát triển thích hợp tạo sinh khối lồi khối bình tam giác tảo quy mơ phịng thí nghiệm (nhỏ) 500 – 1000mL Lƣu giống tảo Skeletonema costatum phịng thí nghiệm Đã lƣu giữ giống tảo Skeletonema costatum môi trƣờng bán lỏng điều kiện nhiệt độ 5oC Phân tích chất lƣợng sản phẩm sinh khối tảo Skeletonema costatum Mẫu sinh khối tảo Skeletonema costatum đƣợc phân tích thành phần dinh dƣỡng axit amin Trung tâm Dịch vụ Phân tích Thí nghiệm Khảo sát tình hình thực tiễn việc sử dụng tảo làm thức ăn số trang trại nuôi Khảo sát thu thập thông tin liên quan trại tơm giống Hai Nhọn, Bình Khánh, Cần Giờ, Tp HCM, doanh nghiệp tơm giống Sáu Quốc, Bình Đại, Bến Tre Trung tâm Quốc gia Giống Hải sản Nam Bộ, 167 Thuỵ Vân, Tp Vũng Tàu LỜI CẢM ƠN Để thực hoàn thành tốt đề tài, xin gởi lời cảm ơn chân thành đến Trung tâm Phát triển Khoa học Công nghệ trẻ, Sở Khoa học Công nghệ Tp Hồ Chí Minh tạo điều kiện thuận lợi cung cấp nguồn kinh phí cho thực đề tài Xin chân thành cảm ơn thầy Đoàn Cảnh đồng nghiệp thuộc Phòng Công Nghệ Quản lý Môi trường, Viện Sinh học Nhiệt đới tham gia thực có nhiều ý kiến đóng góp quý báu cho đề tài Xin chân thành cảm ơn Th.S Hồ Văn Thệ-Viện Hải Dương Học Nha Trang, TS Hoàng Thị Bích Mai-Đại học Thuỷ sản Nha Trang TS.Trần Sương Ngọc-Đại học Cần Thơ có chia góp ý quý giá cho đề tài Xin gởi lời cảm ơn chân thành đến Doanh nghiệp tôm giống Hai NhọnCần Giờ, Tp Hồ Chí Minh, Doanh nghiệp tôm giống Sáu Quốc, Bình Đại, Bến Tre Trung tâm Quốc gia Giống Hải sản Nam Bộ-Tp Vũng Tàu cho phép tham quan trại giống chia thông tin bổ ích cho đề tài Xin chân thành cảm ơn cô, chú, anh, chị nhận xét phản biện đóng góp nhiều ý kiến quý báu cho đề tài Tp Hồ Chí Minh, tháng 03/2011 Thay mặt người thực Chủ nhiệm đề tài Phạm Thanh Lưu TĨM TẮT Trong nghiên cứu này, bên cạnh xây dựng quy trình phân lập nuôi cấy thu sinh khối tảo S costatum quy mơ phịng thí nghiệm, yếu tố mơi trƣờng nhƣ pH, nhiệt độ, độ muối nhƣ hàm lƣợng nitơ đƣợc xem xét nghiên cứu nhằm tìm ngƣỡng mơi trƣờng hàm lƣợng thích hợp cho phát triển loài tảo Ngoài ra, thành phần acid amin sinh khối tạo đƣợc phân tích nhằm đánh giá giá trị dinh dƣỡng sinh khối S costatum Kết nghiên cứu cho thấy tảo S costatum phát triển đƣợc ngƣỡng pH, nhiệt độ nồng độ muối khác Tuy nhiên, mức pH thích hợp cho phát triển 8,0; nhiệt độ từ 28 – 30oC, độ mặn từ 15 – 20‰ hàm lƣợng nitơ từ 100mg/L – 140 mg/L Hầu hết mẫu khảo sát tảo S costatum phát triển qua pha sau 12 ngày nuôi cấy Pha chậm từ ngày thứ đến ngày thứ 4, pha tăng trƣởng từ ngày thứ đến ngày thứ 8, pha dừng từ ngày thứ đến ngày thứ 10, pha chết sau ngày thứ 10 Thành phần acid amin tế bào S costatum tƣơng đối cao với 15 loại acid amin khác acid amin có hàm lƣợng nhiều Glutamic acid, Aspartic acid Leucine ABSTRACT In this study, the microalgae S costatum not only be isolated and cultured invitro for biomas but also the effects of pH, temperature, salinity concentration and nitrogen concentration on the growth of diatom S costatum cultured in vitro were examined Moreover, amino acids content for biomass were also analysed The results showed that S costatum could grow in various pH, salinity, temperature levels and nitrogen concentration However, the optimum of pH was 8.0; the optimum of temperature was from 28oC to 30oC, the optimum of salinity was from 15 to 20‰ and the optimum of nitrogen concentration was from 100mg/L to 140 mg/L The S costatum grew through phases after culturing for 12 days The lag phase was from the first day to the day 4th The exponential phase was from day 4th to day 8th The stationary phase was from day 8th to day 10th and the death phase was after day 10th 15 amino acids were found in the material content of S costatum and the three most variant were Glutamic acid, Aspartic acid and Leucine MỤC LỤC TÓM TẮT ABSTRACT .2 MỤC LỤC DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT .5 DANH SÁCH HÌNH DANH SÁCH BẢNG I TỔNG QUAN I.1 Tình hình nghiên cứu nƣớc I.2 Tình hình nghiên cứu nƣớc 13 II NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 II.1 Nội dung nghiên cứu 18 II.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 18 II.2.1 Phƣơng pháp thu mẫu tự nhiên 18 II.2.2 Phƣơng pháp phân lập 20 II.2.3 Phƣơng pháp nuôi lấy sinh khối 20 II.2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu ảnh hƣởng yếu tố Nhiệt độ, pH, nồng độ muối, hàm lƣợng nitơ, tới sinh trƣởng phát triển 22 II.2.5 Phƣơng pháp theo dõi mật độ tế bào 23 II.2.6 Phƣơng pháp bảo quản nguồn giống 23 II.2.7 Đánh giá chất lƣợng sản phẩm tảo S costatum 24 II.2.8 Tốc độ tăng trƣởng tảo S costatum 24 III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 25 III.1 Kết khảo sát thông số mơi trƣờng ngồi thực địa 25 III.2 Mật độ tế bào tảo Skeletonema tự nhiên 25 III.3 Nghiên cứu ảnh hƣởng nhiệt độ, pH, nồng độ muối, hàm lƣợng nitơ đến phát triển tảo S costatum 25 III.3.1 Ảnh hƣởng pH .25 III.3.2 Ảnh hƣởng nhiệt độ .27 III.3.3 Ảnh hƣởng nồng độ muối 28 III.3.4 Ảnh hƣởng hàm lƣợng nitơ 31 III.4 Xây dựng quy trình ni 33 III.4.1 Phân lập tạo dòng .33 III.4.2 Nhân nuôi thu sinh khối .34 III.5 Tốc độ tăng trƣởng tảo Skeletonema 36 III.6 Thành phần dinh dƣỡng sinh khối tảo S costatum 38 IV KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 39 IV.1 Kết luận 39 IV.2 Đề nghị .40 PHỤ LỤC 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO 45 DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT VIẾT TẮT THUẬT NGỮ TIẾNG VIẾT AA Arachidonic acid AL Ấu trùng bào ngƣ AT-T Ấu trùng tôm BL Ấu trùng nhuyễn thể hai mảnh vỏ BP Hậu ấu trùng nhuyển thể hai mảnh vỏ BS Tôm nƣớc mặn (Artemia) BV Bivalvia DHA Docosahexaenoic acid DVPD Động vật phù du EPA FZ Eicosapentaenoic acid Động vật phù du nƣớc HĐTC Hố đơn tài HĐTK Hợp đồng th khốn J–A Bào ngƣ ML Ấu trùng tơm nƣớc MR Luân trùng (Brachionus) PL Ấu trùng tôm he SC Copepods nƣớc mặn SGR Tỉ lệ tăng trƣởng TLK Trọng lƣợng khơ Mật độ tế bào trung bình (tb/mL) 450000 400000 350000 300000 250000 200000 150000 100000 50000 Ngày 20 mg/L 140 mg/L 60 mg/L 180 mg/L 10 11 12 100 mg/L 220 mg/L Mật độ tế bào trung bình (tb/mL) Hình Mật độ tế bào trung bình tảo S costatum thí nghiệm nitơ 200000 180000 160000 140000 120000 100000 80000 60000 40000 20000 20 mg/L 60 mg/L 100 mg/L 140 mg/L 180 mg/L 220 mg/L Hàm lượng Ni tơ Hình 10 Mật độ tế bào trung bình độ lệch chuẩn thí nghiệm nitơ Ở hàm lƣợng nitơ 180 mg/L, tảo S costatum phát triển nhanh, pha logarit pha cân xảy ngày thứ 3, sau tảo S costatum tàn lụi nhanh Mặc dù tảo S costatum phát triển nhanh nhƣng mật độ tế bào pha logarit không cao, thấp so với ngƣỡng 100 mg/L 140 mg/L Tuy nhiên hàm lƣợng 220 mg/L tảo S costatum phát triển chậm mật độ tế bào pha cân thấp so với mật độ tế bào ngƣỡng 60 – 180 mg/L 32 Dựa vào độ lệch chuẩn cho thấy tảo S costatum thích hợp phát triển hàm lƣợng 100mg/L 140 mg/L, hai ngƣỡng nitơ phát triển tảo S costatum tƣơng đƣơng Từ kết cho thấy nitơ đóng vai trị quan trọng cho sinh trƣởng phát triển tảo, mổi lồi tảo có ngƣỡng nitơ thích hợp cho phát triển Ở khoảng hàm lƣợng nitơ định đó, thƣờng phát triển tế bào tảo tỉ lệ thuận với hàm lƣợng nitơ bổ sung vào môi trƣờng Tuy nhiên hàm lƣợng nitơ môi trƣờng cao làm hạn chế phát triển tảo III.4 Xây dựng quy trình ni III.4.1 Phân lập tạo dịng Chuẩn bị dụng cụ: Bảng 11 Các dụng cụ sử dụng để phân lập tảo S costatum Stt Tên dụng cụ Micropipet Pipet 1mL Lam kính (2x6cm) Ống nghiệm 15 mL Đĩa petri Đèn cồn Khăn giấy Số lƣợng (cái) 30 03 30 25 05 01 cuộn Ghi Đã hấp khử trùng - Pha môi trƣờng: pha 500 mL môi trƣờng Walne theo tỉ lệ dung dịch mẹ pha sẵn nhƣ định mức bảng 8, điều chỉnh pH môi trƣờng 8.0, độ mặn 20 ‰, dùng pipet cho vào mổi ống nghiệm 5mL môi trƣờng, đậy ống nghiệm bơng giấy bạc, sau cho vào hấp khử trùng 121oC, at 20 phút Các bƣớc thực hiện: - Mẫu tảo S costatum thu tự nhiên, dùng pipet lấy mL mẫu cho vào đĩa petri, quan sát dƣới kính hiển vi, dùng micropipet hút chuỗi tế bào tảo S costatum sang lam kính thứ nhất, đƣa lam lên quan sát dƣới kính hiển vi, tiếp tục dùng micropipet hút chuỗi tế bào S costatum sang lam kính thứ hai, lập lại bƣớc vài lần thu đƣợc chuỗi tế bào S costatum, 33 cuối hút chuỗi tế bào S costatum cho vào ống nghiệm, ghi kí hiệu đặt lên giá ni Tiếp tục phân lập vào ống nghiệm - Nhiệt độ phịng ni đƣợc điều chỉnh mức 28oC - Quan sát ống nghiệm ngày, sau khoảng – 10 ngày nuôi cấy, chọn lọc ống nghiệm có tảo phát triển tốt khơng bị tạp nhiểm để sử dụng làm nguồn giống cho nhân nuôi thu sinh khối III.4.2 Nhân nuôi thu sinh khối Chuẩn bị: - Pha lít mơi trƣờng Walne, điều chỉnh pH = 8,0, độ mặn 20‰, bình tam giác thể tích lít, ống van sục khí, pipet, đèn cồn, 500 mL cồn khử trùng 70o, tủ cấy vô trùng - Cho 600 mL mơi trƣờng vào bình tam giác, bịt bơng giấy bạc, hấp khử trùng 121 oC, at 20 phút Các bƣớc thực hiện: - Khử trùng hai tay cồn 70o - Đốt đèn cồn tủ cấy vô trùng - Lấy – mL dung dịch tảo giống S costatum từ ống nghiệm cho vào bình tam giác - Đặt bình tam giác lên giá ni, sục khí nhẹ 24/24 giờ, chiếu sáng theo pha sáng tối 12/12 giờ, điều chỉnh nhiệt độ phịng ni 28oC - Sau khoảng – 10 ngày nuôi cấy tảo phát triển tốt có màu nâu sẫm pha dừng, thời điểm thích hợp để thu lấy sinh khối Quy trình ni đƣợc mơ tả hình sau: 34 Mẫu thu tự nhiên Phân lập - Thời gian nuôi cấy: – ngày - Môi trƣờng Walne, pH = 8,0, độ mặn 20‰, nhiệt độ phịng ni 28oC, chiếu sáng/tối 12/12 Chọn lọc cấy chuyền - Thời gian nuôi cấy: – ngày - Môi trƣờng Walne, pH = 8,0, độ mặn 20‰, nhiệt độ phịng ni 28oC, chiếu sáng/tối 12/12 Cấy chuyền Sục khí - Thời gian ni cấy: – ngày - Môi trƣờng Walne, pH = 8,0, độ mặn 20‰, nhiệt độ phịng ni 28oC, chiếu sáng/tối 12/12 giờ, sục khí 24/24 - Lƣu giữ giống: mơi trƣờng bán lỏng 5oC Hình 11 Quy trình phân lập nuôi cấy tảo S costatum 35 III.5 Tốc độ tăng trƣởng tảo Skeletonema Ở thí nghiệm pH, tốc độ tăng trƣởng gia tăng từ ngày thứ đạt cao vào ngày thứ pH = pha lơgarit Sau tốc độ tăng trƣởng giảm dần pha dừng pha chết Tốc độ tăng trưởng (%) 12 10 Ngày pH = 6.0 pH = 8.0 pH = 6.5 pH = 8.5 10 pH = 7.0 pH = 9.0 11 12 pH = 7.5 Hình 12 Tốc độ tăng trƣởng thí nghiệm pH Tốc độ tăng trưởng (%) 14 12 10 Ngày 22oC 25oC 28oC 30oC 10 32oC Hình 13 Tốc độ tăng trƣởng thí nghiệm nhiệt độ 36 11 12 35oC Ở thí nghiệm nhiệt độ độ muối, tốc độ tăng trƣởng bắt đầu tăng mạnh vào ngày thứ đạt cao ngày 6, 7, 8, Một số mẫu tốc độ tăng trƣởng tiếp tục trì sau 12 ngày ni cấy 14 Tốc độ tăng trưởng (%) 12 10 Ngày 10‰ 12‰ 15‰ 20‰ 23‰ 26‰ 10 11 12 18‰ Hình 14 Tốc độ tăng trƣởng thí nghiệm độ muối Ở thí nghiệm nitơ, tốc độ tăng trƣởng gia tăng từ ngày thứ đạt cao ngày 5, Sau tế bào bắt đầu tàn lụi pha dừng pha chết tốc độ sinh trƣởng giảm xuống 14 Tốc độ tăng trưởng (%) 12 10 Ngày 20 mg/L 140 mg/L 60 mg/L 180 mg/L 10 11 100 mg/L 220 mg/L Hình 15 Tốc độ tăng trƣởng thí nghiệm nitơ 37 12 III.6 Thành phần dinh dƣỡng sinh khối tảo S costatum Kết phân tích thành phần acid amines từ sinh khối tảo S costatum cho thấy có 15/18 loại acid amines phổ biến với hàm lƣợng từ 0,03 – 0,55 % TLK Acid Glutamic có thành phần cao (0,55%) Serine có thành phần thấp (0,03%) Không phát acid amines 4-Hydroxyproline, Hydroxylysine Cystine mẫu So với thành phần acid amin số loài tảo Chlorella vulgaris, Dunaliella bardawil, Spirulina platensis, Aphanizomenon flos-aquae, nhƣ đậu nành, thịt sữa hầu hết acid amin diện thành phần protein tảo S costatum (Phụ lục 3) Bảng 12 Thành phần acid amines sinh khối tảo S costatum Stt Hàm lƣợng (% TLK) Acid amines Alanine 0.16 Glycine 0.21 Valine 0.25 Leucine 0.33 Isolecine 0.20 Threonine 0.08 Serine 0.03 Proline 0.20 Aspartic acid 0.35 10 Methionine 0.07 11 4-Hydroxyproline 0.00 12 Glutamic acid 0.55 13 Phenylalanine 0.28 14 Lysine 0.20 15 Histidine 0.06 16 Hydroxylysine 0.00 17 Tyrosine 0.18 18 Cystine 0.00 38 IV KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ IV.1 Kết luận Loài S costatum thƣờng xuyên diện thành phần loài sinh vật phù du ven biển Cần Giờ, thuận lợi cho việc phân lập ƣơng ni lồi tảo phịng thí nghiệm Lồi tảo phát triển tốt môi trƣờng Walne Nhiệt độ, pH nồng độ muối mơi trƣờng ni có ảnh hƣởng lớn đến phát triển tảo S costatum Kết từ thí nghiệm cho thấy tảo S costatum phát triển tốt mức pH = 8,0, nhiệt độ từ 28 – 30oC độ mặn từ 15 – 20‰ Hầu hết mẫu khảo sát tảo S costatum phát triển qua pha sau 12 ngày nuôi cấy, pha chậm từ ngày thứ đến ngày thứ 4, pha tăng trƣởng từ ngày thứ đến ngày thứ 8, pha dừng từ ngày thứ đến ngày thứ 10, pha chết sau ngày thứ 10 Ở số ngƣỡng nhiệt độ, pH nồng độ muối thấp cao, tảo S costatum thƣờng có pha chậm kéo dài để thích nghi đƣợc với điều kiện mơi trƣờng Do mà tế bào phát triển chậm pha phát triển thƣờng kéo dài 12 ngày nuôi cấy Ngồi hàm lƣợng nitơ mơi trƣờng ni có ảnh hƣởng định đến sinh khối suất nuôi Kết nghiên cứu cho thấy tảo S costatum thích hợp phát triển mơi trƣờng có hàm lƣợng nitơ 100mg/L 140 mg/L Thành phần acid amin tế bào S costatum tƣơng đối cao với 15 loại acid amin khác acid amin có hàm lƣợng nhiều Glutamic acid, Aspartic acid Leucine Từ kết nghiên cứu cho thấy để hồn thiện quy trình ni tảo S costatum bên cạnh hàm lƣợng dinh dƣỡng môi trƣờng nuôi, yếu tố khác nhƣ pH, nhiệt độ độ mặn có ảnh hƣởng khơng nhỏ đến sinh khối suất ni lồi tảo 39 IV.2 Đề nghị Tế bào S costatum có thành phần dinh dƣỡng tốt cần tiến hành mở rộng quy mơ thí nghiệm dạng pilot nhỏ để thu hoạch sinh khối tƣơi với số lƣợng lớn, trƣớc triển khai quy mô công nghiệp Nghiên cứu quy trình thu sinh khối bảo quản sinh khối tƣơi, sấy khô, phát triển thành dạng thƣơng phẩm làm thức ăn cho nuôi trồng thuỷ sản.Hiện chƣa có sản phẩm thƣơng mại có nguồn gốc từ tảo Skeletonema costatum thị trƣờng 40 PHỤ LỤC Phụ lục Một số hình ảnh khảo sát ngồi thực địa (Ngƣời chụp: Phạm Thanh Lƣu, 2010) Địa điểm thu mẫu ven biển Cần Giờ Thu mẫu tự nhiên Trại ƣơm ni tơm giống 41 Phụ lục Hình ảnh ni cấy tảo Skeletonema costatum phịng thí nghiệm (Ngƣời chụp: Phạm Thanh Lƣu, 2010) Phân lập S costatum vào ống nghiệm Sinh khối bình tam giác Ảnh chụp sinh khối S costatum dƣới kính hiển vi 42 Phịng ni Phụ lục 4: Bảng số liệu mật độ tế bào trung bình độ lệch chuẩn Mật độ tế bào trung bình thí nghiệm pH Ngày 10 11 pH = 6.0 3885 4035 9360 12425 15825 59850 54580 pH = 6.5 3250 3617 6483 15573 49703 100067 pH = 7.0 4325 5660 9570 78620 223380 pH = 7.5 5020 4405 14285 120775 pH = 8.0 5425 6000 55545 pH = 8.5 4365 5975 pH = 9.0 3770 27075 12 19925 6440 2795 170 82000 39607 30487 8263 370 210 244450 191000 138800 69500 32810 649 745 204300 184700 174830 164250 78975 4755 6335 695 204250 499140 509150 416375 198150 136285 16490 9970 6330 14935 175600 215650 148230 63910 46070 29600 36800 6890 590 51785 81420 113855 129900 131485 104590 88555 53800 43455 35270 10 11 12 Độ lệch chuẩn thí nghiệm pH Ngày pH = 6.0 304 389 pH = 6.5 397 pH = 7.0 2744 3924 3571 22415 32555 24855 6901 3953 240 785 465 1220 21855 40145 39887 22999 30001 7204 344 267 615 1245 5558 15175 34818 14779 63640 56710 3536 45976 892 856 pH = 7.5 679 1492 13598 105918 13576 40588 36869 75448 106808 4533 8506 403 pH = 8.0 2376 17458 8839 31905 37972 166347 21708 32223 8075 1937 1442 pH = 8.5 700 2835 12792 52184 41931 71432 64219 43459 19233 29698 9291 240 pH = 9.0 933 31671 32364 31000 1633 14213 2100 28864 37399 51195 58754 49116 11 12 Mật độ tế bào trung bình thí nghiệm nhiệt độ Ngày 10 o 3253 3340 5753 15267 52160 92313 142000 157300 156367 152117 143990 118823 o 4315 10985 47615 146205 165470 193650 250675 198115 173430 163205 111460 89485 o 6247 31417 223897 339133 344000 372590 260983 234333 158600 135900 68200 6767 o 30 C 4743 41133 56917 114803 256197 346380 371380 299913 184143 153380 98730 64347 32 oC 4955 9030 33505 194975 273480 297675 291070 266640 150955 81540 31150 8825 3750 41320 77650 198760 231230 227650 177800 137600 139500 100500 89000 56000 22 C 25 C 28 C o 35 C Độ lệch chuẩn thí nghiệm nhiệt độ Ngày 10 11 12 22oC 712 814 992 6097 30851 43063 39887 42299 30489 35388 32154 54268 25 oC 629 9426 28235 95099 69197 63710 63604 163 25456 20428 46471 62487 o 4553 14488 20586 35834 34395 17287 47531 44409 16865 2955 11122 1750 o 539 11897 4932 2472 18387 37329 20269 11637 32872 22416 4370 18159 o 898 6322 78 26128 33545 14389 18639 29713 51937 88784 42978 12480 o 647 20184 41960 119142 156235 180582 172698 156113 117057 69006 17735 56348 28 C 30 C 32 C 35 C 43 Mật độ tế bào trung bình thí nghiệm độ mặn Ngày 10 11 12 10‰ 5420 52400 94857 182613 214113 215367 243983 239033 233137 209730 179667 148440 12‰ 5700 6713 16183 37217 55193 129550 180200 215373 288727 248030 237767 166547 15‰ 6210 15193 48047 265567 431170 478233 421180 365770 312447 252670 194223 177563 18‰ 7440 16675 53905 156570 224495 237895 454280 380520 361885 342880 309225 251065 20‰ 6457 20197 143750 221247 285667 331717 415077 390793 275793 202937 180340 152123 23‰ 6163 11740 30397 62980 84357 338930 250967 155923 130130 76413 31967 14220 26‰ 6010 6355 7715 17935 29915 60300 72890 120545 132345 139835 141665 144000 Độ lệch chuẩn thí nghiệm độ mặn Ngày 10 11 12 10‰ 825 23166 8396 46111 31744 23068 11735 39830 62219 59936 76276 63443 12‰ 1375 863 6882 9756 19571 39018 57807 34271 39387 53995 47470 49241 15‰ 498 2098 635 88353 25924 28379 11227 44083 40866 39513 64528 79233 18‰ 141 1421 32067 12572 11250 7856 34521 21001 5508 9914 26396 74084 20‰ 1462 5117 29576 21636 40950 7727 5116 5119 25206 6367 22083 13654 23‰ 579 5920 18980 47267 49320 25785 24028 22551 28295 33549 24893 4053 26‰ 2390 2623 5282 20400 26425 3818 4398 1068 2341 7304 8960 9899 Mật độ tế bào trung bình thí nghiệm nitơ Ngày 20 mg/L 3280 3549 5756 10 11 12 11933 22160 33647 78017 81633 74700 45120 8990 490 60 mg/L 2949 3947 6680 13523 118657 194193 226853 194967 84537 45173 12920 8127 100 mg/L 4959 22549 85089 119237 381493 378497 284683 128300 132600 80153 49303 39193 140 mg/L 5115 7932 58756 126890 344693 379497 332807 260717 130083 87997 42910 28150 180 mg/L 5363 18943 170557 287173 277428 148543 92170 34493 17382 4517 1290 426 220 mg/L 5559 4980 7353 27330 78872 163547 169460 155573 126963 65507 31070 14042 10 11 12 Độ lệch chuẩn thí nghiệm nitơ Ngày 20 mg/L 710 669 60 mg/L 1370 100 mg/L 60 1769 9413 11125 11778 5253 8702 12402 7293 223 1323 927 801 17675 45053 9020 28312 11507 12359 9560 5372 611 18895 8301 17487 96766 59868 8516 87168 44610 41284 24316 22986 140 mg/L 236 1870 26526 11141 75270 39155 28346 26144 14478 9822 2922 12937 180 mg/L 826 796 4480 68792 22091 11361 3978 8817 4676 2774 1858 738 220 mg/L 499 1557 1220 14050 17388 30677 21032 18071 11338 5675 3957 3082 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Anderson, I., The veterinary approach to matine prawns, In: Aquaculture for veterinarians: fish husbandry and medicine (Editor Brown L.), 1993, 447 pp [2] Anne D., Laurence J M., Cesline C., and Yannick D R., Free amino acid analysis of five microalgae, Journal of Applied Phycology 10, 1998, 131 – 134 [3] Brown M R., Nutritional Value and Use of Microalgae in Aquaculture, CSIRO Marine Research, 2002 [4] Daniel C O Thornton and Brenda Thake, Effect of temperature on the aggregation of Skeletonema costatum (Bacillariophyceae) and the implication for carbon flux in coastal waters, Marine Ecology Progress Series, Vol 174, 1998, 223 – 231 [5] Diana Sarno, Wiebe H C F Kooistra, Linda K Medlin, Isabella Percopo and Adriana Zingone, Diversity in the genus Skeletonema (bacillariophyceae) An Assessment of the taxonomy of S costatum-like species with the description of four new species, J Phycol 41, 2005, 151–176 [6] Dipen Patel, Brenda Thake and Daniel C O Thornton, Effect of light and turbulent mixing on the growth of Skeletonema costatum (Bacillariophyceae), Marine Biology, 146, 2005, 633–644 [7] Hallegraeff G.M., D.M Anderson and A.D Cembella, Manual on Harmful Marine Microalgae, UNESCO Publishing, 2004, 793 pp [8] Hồng Thị Bích Mai, Sinh sản, sinh trưởng sở khoa học quy trình kỹ thuật nuôi thu sinh khối tảo Silic Skeletonema costatum, Chaetoceros sp làm thức ăn cho ấu trùng tôm Sú (P monodon), Luận án thạc sĩ khoa học ngành nuôi trồng thuỷ sản, Trƣờng Đại Học Thủy Sản, 1995, 26 – 48 [9] Hồ Văn Thệ, Phân lập nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ, độ mặn lên tốc độ sinh trưởng hai loài tảo silic Chaetoceros didymus Skeletonema cf.marinoi (Bacillariophyceae), Đề tài nghiên cứu khoa học sở CS 04, Viện Hải dƣơng học Nha Trang, 2008 [10] Kitto M.R., C Regunathan and Alphonse Rodrigues, An industrial photosynthetic system for Skeletonema costatum in arid Regions, Journal of Applied Phycology 11, 1999, 391–397 [11] Laing, Cultivation of marine, unicellular algae, Ministry of Agriculture, Fisheries and Food Directorate of fisheries research, 1991, 31 pp [12] Lavens, P and Sorgeloos, P (eds.), Manual on the production and use of live food for aquaculture, FAO Fisheries Technical Paper, No 361, Rome, FAO, 1996, 295pp [13] Lê Đức Ngoan cs., Giáo trình dinh dưỡng thức ăn thuỷ sản Đại học Nông lâm Huế, 2009 45 [14] Lê Viễn Chí, Nghiên cứu số đặc điểm sinh học công nghệ nuôi tảo Silic Skeletonema costatum (Grevilei) Cleve làm thức ăn cho ấu trùng tôm biển, Luận án PTS, Viện nghiên cứu hải sản Hải Phòng, 1996, 140 tr [15] Mauricio G., P., and Graciela Ferrari, Skeletonema tropicum (Bacillariophyceae) present in Uruguayan southern coastal waters, IHERINGIA, Sér Bot., Porto Alegre, v 64, n 2, 2009, 145-149 [16] Nguyễn Thanh Mai, Trịnh Hoàng Khải, Đào Văn Trí Nguyễn Văn Hùng, Nghiên cứu phân lập, nuôi cấy In vitro tảo silic nước mặn Chaetoceros calcitrans Paulsen 1905 ứng dụng sinh khối tảo làm thức ăn cho tơm he chân trắng Penaeus vannamei, Tạp chí Phát triển Khoa học Công nghệ Vol 12, No 13, 2009, 28 – 36 [17] Richmond A., Handbook of Microalgal Culture, Blackwell Publishing, 2004, 545 pp [18] Stasa P., and Anne M T., Physiology of diatom Skeletonema costatum (Grev.) Cleve photosynthetic extracellular release: evidence for a novel coupling between marine bacteria and phytoplankton, Journal Of Plankton Research, Number 10, 2003, 1227 – 1235 [19] Takabayashi M., K Lew, A Johnson, A Marchi, R Dugdale and F P Wilkerson, The effect of nutrient availability and temperature on chain length of diatom, Skeletonema costatum, Journal of Plankton Research, Volume 28, 2006, 831-840 [20] Tôn Nữ Mỹ Nga, Ảnh hưởng hàm lượng nitơ khác lên phát triển tảo Chaetoceros Gracilis Pantocsek 1892 (Schütt), Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Thuỷ sản số 03, 2008, – 14 [21] Tôn Nữ Mỹ Nga, Nghiên cứu ảnh hưởng độ mặn lên phát triển quần thể tảo Chaetoceros gracilis Pantocsek 1892 (Schütt), Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Thuỷ sản số 02, 2008, 10 – 15 [22] Tracy A., Hugh L., Sandra M., Stuart G., Richard J., Photoacclimation in the marine diatom Skeletonema costatum, Limnol Oceanogr., 45(8), 2000, 1807–1817 [23] Trần Văn Đan cs, Sinh học kỹ thuật sản xuất giống tôm he Nhật Bản Penaneus japonicas Bate, 1881, Viện Nghiên cứu Hải sản, 2000, – [24] Trƣơng Ngọc An, Phân loại tảo Silic phù du biển Việt Nam, Nxb Khoa học kỹ thuật, Hà Nội, 1993, 315 tr [25] Umur Onal, İhsan CELİK, Sebahattin ERGUN, The performance of a small-scale, high-density, continuous system for culturing the rotifer Brachionus plicatilis, Turk J Vet Anim Sci, 2010, 34(2), 187-195 [26] Wiebe H.C.F Kooistra, Diana Sarno, Sergio Balzano, Haifeng Gu, Robert A Andersen, and Adriana Zingone, Global Diversity and Biogeography of Skeletonema Species (Bacillariophyta), Protist, Vol 159, 2008, 177—193 46