Xây dựng quy trình nhân nhanh sinh khối rễ bất định cây đảng sâm codonopsis javanica có giá trị dược liệu bằng phương pháp nuôi cấy bioreactor và nuôi cấy ngập chìm tạm thời

ỦY BAN NHÂN DÂN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CƠNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP THÀNH PHỐ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN NHANH SINH KHỐI RỄ BẤT ĐỊNH CÂY ĐẢNG SÂM (Codonopsis javanica) CÓ GIÁ TRỊ DƯỢC LIỆU BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY BIOREACTOR VÀ NUÔI CẤY NGẬP CHÌM TẠM THỜI Cơ quan chủ trì nhiệm vụ: Trường ĐH Công nghiệp Thực phẩm Chủ nhiệm nhiệm vụ: TS Trịnh Thị Hương Thành phố Hồ Chí Minh - 2021 ỦY BAN NHÂN DÂN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CƠNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP THÀNH PHỐ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN NHANH SINH KHỐI RỄ BẤT ĐỊNH CÂY ĐẢNG SÂM (Codonopsis javanica) CÓ GIÁ TRỊ DƯỢC LIỆU BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY BIOREACTOR VÀ NI CẤY NGẬP CHÌM TẠM THỜI (Đã chỉnh sửa theo kết luận Hội đồng nghiệm thu ngày 27/5/2021) Chủ nhiệm nhiệm vụ: Trịnh Thị Hương Cơ quan chủ trì nhiệm vụ Thành phố Hồ Chí Minh - 2021 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc TP.HCM, ngày tháng năm 2021 BÁO CÁO THỐNG KÊ KẾT QUẢ THỰC HIỆN NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KH&CN I THÔNG TIN CHUNG Tên nhiệm vụ: Xây dựng quy trình nhân nhanh sinh khối rễ bất định đảng sâm (Codonopsis javanica) có giá trị dược liệu phương pháp nuôi cấy bioreactor nuôi cấy ngập chìm tạm thời Thuộc: Chương trình/lĩnh vực (tên chương trình/lĩnh vực): Nông, lâm, ngư nghiệp Chủ nhiệm nhiệm vụ: Họ tên: Trịnh Thị Hương Ngày, tháng, năm sinh: 20/03/1987 Nam/ Nữ: Nữ Học hàm, học vị: Tiến Sĩ Chức danh khoa học: Giảng viên; Chức vụ: Điện thoại: Tổ chức: (028) 3816 1673 Nhà riêng: Mobile: 0982406187 Fax: E-mail: trinhthihuongdhcntp@gmail.com Tên tổ chức công tác: Trường Đại học Công Nghiệp Thực Phẩm TP.HCM Địa tổ chức: 140 Lê Trọng Tấn, Phường Tây Thạnh, Quận Tân Phú, TP.HCM Địa nhà riêng: 19/43 Lam Sơn, P.5, Q Phú Nhuận, TP.HCM Tổ chức chủ trì nhiệm vụ: Tên tổ chức chủ trì nhiệm vụ: Trường Đại học Cơng Nghiệp Thực Phẩm Điện thoại: 028 3816 1673 Fax: (028) 3816 3320 E-mail: info@hufi.edu.vn Website: https://hufi.edu.vn Địa chỉ: 140 Lê Trọng Tấn, Phường Tây Thạnh, Quận Tân Phú, TP HCM Họ tên thủ trưởng tổ chức: PGS.TS Nguyễn Xuân Hoàn Số tài khoản: 9523.1.1054145/9527.1.1054145 Kho bạc: Kho bạc Nhà nước Tân Phú, TP.Hồ Chí Minh Tên quan chủ quản đề tài: Bộ cơng thương II TÌNH HÌNH THỰC HIỆN Thời gian thực nhiệm vụ: - Theo Hợp đồng ký kết: từ 13 tháng 05 năm 2019 đến 13 tháng 05 năm 2021 - Thực tế thực hiện: từ 13 tháng năm 2019 đến tháng năm 2020 - Được gia hạn (nếu có): - Lần từ tháng… năm… đến tháng… năm… - Lần … Kinh phí sử dụng kinh phí: a) Tổng số kinh phí thực hiện: 788 tr.đ, đó: + Kính phí hỗ trợ từ ngân sách khoa học: 788 tr.đ + Kinh phí từ nguồn khác: tr.đ b) Tình hình cấp sử dụng kinh phí từ nguồn ngân sách khoa học: Theo kế hoạch Thực tế đạt Số Thời gian Kinh phí Thời gian Kinh phí TT (Tháng, năm) (Tr.đ) (Tháng, năm) (Tr.đ) năm 788 năm 788 (5/2019(5/20195/2020) 5/2020) Ghi (Số đề nghị toán) c) Kết sử dụng kinh phí theo khoản chi: Đối với đề tài: Đơn vị tính: Triệu đồng Số TT Nội dung khoản chi Theo kế hoạch Tổng NSKH Trả công lao 578,893 578,893 động (khoa học, phổ thông) Nguyên, vật 169,200 69,200 liệu, lượng Thiết bị, máy móc Xây dựng, sửa chữa nhỏ Chi khác 39,907 39,907 Tổng cộng 788 788 - Lý thay đổi (nếu có): Thực tế đạt Nguồn khác 578,893 Nguồ n khác 578,893 0 169,200 69,200 Tổng NSKH 39,907 788 39,907 788 Đối với dự án: Đơn vị tính: Triệu đồng Số TT Nội dung khoản chi Thiết bị, máy móc mua Nhà xưởng xây dựng mới, cải tạo Kinh phí hỗ trợ cơng nghệ Chi phí lao động Nguyên vật liệu, lượng Theo kế hoạch Tổng NSKH Nguồn khác Thực tế đạt Tổng NSKH Nguồn khác Thuê thiết bị, nhà xưởng Khác Tổng cộng - Lý thay đổi (nếu có): Các văn hành q trình thực đề tài/dự án: (Liệt kê định, văn quan quản lý từ công đoạn xét duyệt, phê duyệt kinh phí, hợp đồng, điều chỉnh (thời gian, nội dung, kinh phí thực có); văn tổ chức chủ trì nhiệm vụ (đơn, kiến nghị điều chỉnh có) Số Số, thời gian ban Tên văn Ghi TT hành văn Tổ chức phối hợp thực nhiệm vụ: Tên tổ chức Tên tổ chức Nội dung Sản phẩm Số đăng ký theo tham gia thực tham gia chủ chủ yếu đạt TT Thuyết minh yếu Viện Sinh học Viện Sinh học Nội dung Báo cáo Nhiệt đới Nhiệt đới 2,3,4,5,6 chuyên đề, sinh khối rễ - Lý thay đổi (nếu có): Ghi chú* Cá nhân tham gia thực nhiệm vụ: (Người tham gia thực đề tài thuộc tổ chức chủ trì quan phối hợp, khơng q 10 người kể chủ nhiệm) Tên cá nhân Tên cá nhân Nội dung Sản phẩm Số Ghi đăng ký theo tham gia tham gia chủ yếu đạt TT chú* Thuyết minh thực TS Trịnh Thị TS Trịnh Thị Tất nội Báo cáo tổng Hương Hương dung hợp TS Nguyễn TS Nguyễn Thư ký khoa Báo cáo Minh Phương Minh Phương học đề tài, chuyên đề thực nội dung 1.2; 1.3; 1.4; 1.5; 5.3; 5.6; TS Đỗ Đăng TS Đỗ Đăng ND 3; 4; 5.1; Báo cáo Giáp Giáp 5.2 chuyên đề ThS Phạm Văn ThS Phạm ND 1.1 Báo cáo Lộc Văn Lộc chuyên đề ThS Đặng Thị ThS Đặng Thị ND 2; ND Báo cáo Kim Thúy Kim Thúy chuyên đề, sinh khối rễ ThS Lại Đình ThS Lại Đình 5.4; 5.5 Báo cáo Biên Biên chuyên đề ThS Trần Thị Anh Thoa ThS Trần Thị Anh Thoa ND 1.1; 1.2, 1.3; 1.4; 5.3; 5.4; 5.5; 5.6 TS Trần Trọng TS Trần Trọng ND 2; 3; 4; Tuấn Tuấn 5.1; 5.2; Báo cáo chuyên đề Báo cáo chuyên đề, sinh khối rễ Tình hình hợp tác quốc tế: Theo kế hoạch Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, kinh phí, (Nội dung, thời gian, kinh phí, Số Ghi địa điểm, tên tổ chức hợp tác, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, TT chú* số đoàn, số lượng người tham số đoàn, số lượng người tham gia ) gia ) - Lý thay đổi (nếu có): Tình hình tổ chức hội thảo, hội nghị: Theo kế hoạch Thực tế đạt Số (Nội dung, thời gian, kinh phí, (Nội dung, thời gian, Ghi chú* TT địa điểm ) kinh phí, địa điểm ) - Lý thay đổi (nếu có): Tóm tắt nội dung, công việc chủ yếu: (Nêu mục 15 thuyết minh, không bao gồm: Hội thảo khoa học, điều tra khảo sát nước nước ngồi) Thời gian Các nội dung, cơng (Bắt đầu, kết thúc Người, Số việc - tháng … năm) quan TT chủ yếu thực Theo kế Thực tế hoạch đạt Nội dung 1: Nghiên 05/2019- 05/2019- Trịnh Thị Hương cứu nhân nhanh sinh 10/2019 10/2019 Phạm Văn Lộc khối rễ bất định Trần Thị Anh Thoa nuôi cấy lỏng lắc Nguyễn Minh Phương - Đại học CNTP TP.HCM Nội dung Nhân 10/2019- 10/2019- Trịnh Thị Hương nhanh sinh khối rễ bất 01/2020 01/2020 Đặng Thị Kim Thuý định hệ thống Trần Trọng Tuấn ngập chìm tạm thời - Đại học CNTP TP.HCM; (TIS) - Viện Sinh học Nhiệt đới Nội dung 3: Nhân 01/2020- 01/2020- Trịnh Thị Hương nhanh sinh khối rễ 4/2020 4/2020 Đỗ Đăng Giáp bioreactor lít Trần Trọng Tuấn - Đại học CNTP TP.HCM; - Viện Sinh học Nhiệt đới Nội dung 4: Nhân 04/2020- 04/2020- Trịnh Thị Hương nhanh sinh khối rễ với quy mô lớn bioreactor 30 lít 07/2020 07/2020 Nội dung 5: Đánh giá chất lượng sinh khối rễ bất định đảng sâm 07/202012/2020 07/202012/2020 Nội dung 6: Thực sản xuất sinh khối theo sản phẩm đề tài 10/202004/2021 10/202004/2021 4/2021 4/2021 Nội dung 7: Tổng hợp số liệu viết báo cáo tổng kết - Lý thay đổi (nếu có): Đỗ Đăng Giáp Trần Trọng Tuấn - Đại học CNTP TP.HCM; - Viện Sinh học Nhiệt đới Trịnh Thị Hương Đỗ Đăng Giáp Trần Trọng Tuấn Trần Thị Anh Thoa Nguyễn Minh Phương Lại Đình Biên - Đại học CNTP TP.HCM; - Viện Sinh học Nhiệt đới Trịnh Thị Hương Đặng Thị Kim Thuý Trần Trọng Tuấn - Đại học CNTP TP.HCM; - Viện Sinh học Nhiệt đới Trịnh Thị Hương Nguyễn Minh Phương - Đại học CNTP TP.HCM III SẢN PHẨM KH&CN CỦA NHIỆM VỤ Sản phẩm KH&CN tạo ra: a) Sản phẩm Dạng I: Tên sản phẩm Số Đơn Theo kế tiêu chất Số lượng TT vị đo hoạch lượng chủ yếu Sinh khối rễ Kg 15-20 kg 15-20 kg rễ đảng sâm rễ tươi tươi hoặc 1-2 1-2 kg rễ kg rễ khô khô Thực tế đạt - kg rễ khô - Sinh khối rễ có chứa polysaccharide, lobetyolin khơng chứa dư lượng auxin - Lý thay đổi (nếu có): b) Sản phẩm Dạng II: Số TT Yêu cầu khoa học cần đạt Tên sản phẩm Ghi Theo kế Thực tế hoạch đạt Quy trình sản xuất sinh 1 Khối lượng mẫu cấy: g khối rễ bất định Tần suất bơm: bơm đảng sâm hệ lần thống ngập chìm tạm Thời gian lần bơm: thời (TIS) phút Quy trình sản xuất sinh 1 Khối lượng mẫu cấy: 15 g khối rễ bất định Lưu lượng khí thích hợp đảng sâm 0,5 lít/phút bioreactor lít Quy trình sản xuất sinh khối rễ bất định đảng sâm bioreactor 30 lít - Lý thay đổi (nếu có): 1 c) Sản phẩm Dạng III: Yêu cầu khoa học cần đạt Số Tên sản TT phẩm Theo Thực tế kế hoạch đạt Bài báo - báo báo - Tạp chí Tạp nước, chí có số nước, có ISSN hay số Hội thảo, ISSN Hội nghị tồn quốc có số ISSN Khối lượng mẫu cấy: 120 g Lưu lượng khí thích hợp 1,0 lít/phút Số lượng, nơi cơng bố (Tạp chí, nhà xuất bản) Tên bài: Ảnh hưởng loại đường khác đến trình nhân nhanh sinh khối rễ bất định đảng sâm (Codonopsis javanica) in vitro điều kiện nuôi cấy lỏng lắc - Tên tác giả: Trịnh Thị Hương, Phạm Văn Lộc, Trần Thị Anh Thoa, Nguyễn Minh Phương, Trương Quỳnh Yến Yến, Trần Trọng Tuấn - Tạp chí: Khoa học Công nghệ Thực phẩm, Tập 21 số (2) (2021); số ISSN: 0866-8132 Tên bài: Induction and evaluation secondary metabolite and antioxidant activity in adventitious root of Codonopsis javanica - Tên tác giả: Trinh Thi Huong, Nguyen Quoc Tuan, Nguyen Thi Huyen Trang, Do Dang Giap, Tran Trong Tuan - Tạp chí: Vietnam Journal of Science, Technology and Engineering, Vol 63 No (2021); ISSN: 2615-9759 - Lý thay đổi (nếu có): d) Kết đào tạo: Số TT Cấp đào tạo, Chuyên ngành đào tạo - Thạc sỹ - Chuyên ngành công nghệ sinh học Số lượng Theo kế hoạch Thực tế đạt - Lý thay đổi (nếu có): đ) Tình hình đăng ký bảo hộ quyền sở hữu công nghiệp: Ghi (Thời gian kết thúc) Nơi đào tạo: Trường ĐH Công nghiệp Thực phẩm TP.HCM Số TT Tên sản phẩm đăng ký Giải pháp hữu ích Kết Theo Thực tế kế hoạch đạt 1 Ghi (Thời gian kết thúc) Chấp nhận đơn hợp lệ ngày 13/4/2021 - Lý thay đổi (nếu có): e) Thống kê danh mục sản phẩm KHCN ứng dụng vào thực tế Địa điểm Số Tên kết (Ghi rõ tên, địa Kết Thời gian TT ứng dụng nơi ứng sơ dụng) 2 Đánh giá hiệu nhiệm vụ mang lại: a) Hiệu khoa học công nghệ: (Nêu rõ danh mục công nghệ mức độ nắm vững, làm chủ, so sánh với trình độ cơng nghệ so với khu vực giới…) Công nghệ nuôi cấy rễ bioreactor công nghệ nuôi cấy rễ bất định tiên tiến không Việt Nam mà giới, nhiên để nắm bắt công nghệ cách đầy đủ, chi tiết hiệu tương đối khó Thông qua nghiên cứu ảnh hưởng số yếu tố thành phần môi trường dinh dưỡng, thiết bị nuôi cấy, điều kiện nuôi cấy… giúp cho việc nắm bắt làm chủ quy trình ni cấy bioreactor đối tượng đảng sâm, đồng thời tăng cường hiểu biết ảnh hưởng số yếu tố đến khả sinh tổng hợp hợp chất thứ cấp quan trọng b) Hiệu kinh tế xã hội: (Nêu rõ hiệu làm lợi tính tiền dự kiến nhiệm vụ tạo so với sản phẩm loại thị trường…) Đảng sâm nguồn dược liệu quý có giá trị kinh tế, việc cung cấp nguồn sinh khối cần thiết cho sản xuất nguồn dược liệu tiêu thụ nước Ngày nay, đảng sâm trồng tự nhiên vùng núi cao thuộc địa bàn tỉnh Kontum, Quảng Nam số vùng khác Tuy nhiên, việc trồng tự nhiên, suất hàm lượng hợp chất có bị tác động yếu tố cảnh điều kiện khí hậu, thổ nhưỡng Việc tạo quy trình nhân sinh khối rễ bất định phương pháp ni cấy mơ tế bào thực vật khắc phục nhược điểm Bên cạnh đó, việc nhân sinh khối rễ bất định thành cơng làm giảm việc khai thác quần thể tự nhiên Trong đề tài này, nhóm tác giả nghiên cứu thành cơng quy trình nhân sinh khối rễ bất định đảng sâm hệ thống nuôi cấy khác hệ thống ngập chìm tạm thời (TIS), hệ thống bioreactor lít bioreactor 30 lít Nhóm tác gỉả đánh giá so sánh hiệu quy trình thời gian sản xuất (105 ngày) cho thấy: giá thành sản xuất kg sản phẩm rễ hệ thống 934.521, 1.299.049, 1.681.113 đồng Hàm lượng lobetyloline - hợp chất đảng sâm quy quy trình sử dụng bioreactor 30 lít có hàm lượng cao gần đảng sâm trồng tự nhiên 2-3 năm tuổi Mặc dù giá thành sản phẩm tạo từ quy trình cao so với với trồng tự nhiên, sản phẩm sinh khối sản xuất liên tục năm khơng bị ảnh hưởng điều kiện bên ngồi điều kiện thổ nhưỡng vùng Trong bảng tính giá thành sản phẩm đây, tính sản phẩm quy trình cụ thể để sản xuất kg thành phẩm, sản xuất với sinh khối lớn thời gian phân bổ liên tục, hợp lý cho quy trình sau giá thành sản phẩm giảm xuống nhiều Khi so sánh hiệu quy trình ni cấy, quy trình bioreactor 30 lít giá thành sản phẩm cao sơ với quy trình cịn lại sản phẩm có hàm lượng hợp chất cao sinh khối thu sau chu trình cao so với quy trình cịn lại Bảng Bảng tính tóm tắt giá thành sản phẩm quy trình ni cấy rễ bất định đảng sâm sau 105 ngày thực Đơn giá: đồng STT 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1.6 1.7 1.8 1.9 1.10 1.10.1 1.10.2 1.10.3 1.10.4 1.10.5 Các giai đoạn tạo nhân rễ Giai đoạn chuẩn bị vật liệu Số mẫu/bình Số mẫu đạt được/bình (bình 100 ml) Hệ số nhân mẫu Số mẫu cần có Số bình 100 ml cần có Số lít mơi trường/chai (ml/bình) Tổng số mơi trường cần (lít) Đơn giá (đồng/lít) Tổng số tiền cho môi trường nuôi cấy Tổng số tiền điện giai đoạn = (d x e) Số kệ cần (200 chai 100ml/kệ) Số bóng đèn/kệ (a) Số bóng đèn cần Công suất (w) (b) Thời gian chiếu sáng Hệ thống TIS Hệ thống bio lít Hệ thống bio 30 lít Thời gian thực (ngày) 30,00 3,00 3,00 3,00 12,00 12,00 12,00 4,00 6,66 19,99 4,00 6,09 18,26 4,00 7,35 22,04 20,00 20,00 20,00 0,40 0,37 0,44 17.000,00 17.000,00 17.000,00 6.796,67 6.207,16 7.494,47 131,09 119,72 144,55 0,10 0,09 0,11 2,00 0,20 36,00 12,00 2,00 0,18 36,00 12,00 2,00 0,22 36,00 12,00 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Nội dung 1: Nghiên cứu nhân nhanh sinh khối rễ hệ thống lỏng lắc Mơi trường thích hợp cho q trình nhân nhanh sinh khối rễ bất định Đảng sâm hệ thống lỏng lắc mơi trường SH có bổ sung 0,5 mg/L IBA; 50 g/L sucrose, pH 5,8 ni cấy điều kiện tối Thời gian thích hợp để thu nhận sinh khối rễ 35 ngày nuôi cấy Nội dung 2: Nghiên cứu nhân nhanh sinh khối rễ hệ thống ngập chìm tạm thời (TIS) Tần suất bơm thích hợp bơm lần với thời gian ngập chìm phút, khối lượng mẫu cấy ban đầu g Hệ số tăng sinh sinh khối rễ đạt nuôi cấy hệ thống TIS 4,37 lần Nội dung 3: Nghiên cứu nhân nhanh sinh khối rễ bioreactor lít Trong bình bioreactor lít với 1,5 lít mơi trường, khối lượng mẫu cấy ban đầu thích hợp 15 g lưu lượng khí 0,5 lít/phút Hệ số tăng sinh sinh khối rễ đạt ni cấy hệ thống bioreactor lít 4,88 lần Nội dung 4: Nghiên cứu nhân nhanh sinh khối rễ bioreactor 30 lít Trong bình bioreactor 30 lít với 15 lít mơi trường, khối lượng mẫu cấy ban đầu thích hợp 120 g lưu lượng khí 1,0 lít/phút Hệ số tăng sinh sinh khối rễ đạt nuôi cấy hệ thống bioreactor 30 lít 3,87 lần Nội dung 5: Đánh giá chất lượng sinh khối rễ bất định Đảng sâm Độ ẩm, độ tro độ tro không tan acid mẫu rễ bất định rễ củ tự nhiên Đảng sâm nằm tiêu chuẩn Dược điển Việt Nam V Trong sinh khối rễ bất định Đảng sâm có chứa số nhóm hợp chất hố học hữu ích như: alkaloid, carbohydrate, phenolic, flavonoid, dầu chất béo Rễ bất định Đảng sâm thu nhận từ ba hệ thống nuôi cấy khác (TIS, biorector lít, biorector 30 lít) khơng chứa dư lượng auxin; không phát dư lượng Hg, hàm lượng Pb, Cd, As mức cho phép theo tiêu chuẩn Dược điển Việt Nam V 78 Hàm lượng polysaccharide rễ bất định thu nhận ba hệ thống 12,32% (hệ thống TIS); 12,68% (hệ thống bioreactor lít); 12,80% (hệ thống bioreactor 30 lít), củ Đảng sâm tự nhiên năm tuổi 16,59% Hàm lượng lobetyolin rễ bất định thu nhận ba hệ thống là: 0,262% (hệ thống TIS); 0,383% (hệ thống bioreactor lít); 0,454% (hệ thống bioreactor 30 lít), củ Đảng sâm tự nhiên năm tuổi 0,565% KIẾN NGHỊ Trong thời gian năm, đề tài hoàn thành tất mục tiêu đề thuyết minh thu kết khả quan Tuy nhiên, nghiên cứu nuôi sinh khối rễ bất định Đảng sâm để làm nguồn dược liệu hay thực phẩm chức năng, đề tài cần thực thêm số nghiên cứu để nâng cao hàm lượng hợp chất thứ cấp, đặc biệt hàm lượng polysaccharide lobetyolin sinh khối rễ bất định Đảng sâm; đồng thời nghiên cứu thu nhận dòng rễ bất định Đảng sâm có chứa hàm lượng hợp chất thứ cấp ổn định, từ tiến tới sản xuất thương mại thành phẩm sinh khối rễ sản phẩm từ rễ bất định Đảng sâm Vì vậy, chủ nhiệm nhiệm vụ kính đề xuất Sở Khoa học Công nghệ TP.HCM hỗ trợ thêm kinh phí để nhóm nghiên cứu có điều kiện tiếp tục thực nội dung 79 quy Đốt thân từ Đảng sâm in vitro Cảm ứng tạo rễ bất định mơi trường có bổ sung agar 30 ngày Nhân nhanh sinh khối rễ bất định môi trường lỏng lắc Đốt thân: cắt đoạn cm Môi trường MS có bổ sung 0,5 mg/L IBA, 30 g/l sucrose, g/L agar, pH=5,8 Điều kiện nuôi cấy: đặt tối Mơi trường SH có bổ sung 0,5 mg/L IBA, 50 g/L sucrose, pH= 5,8 Điều kiện nuôi cấy: máy lắc với tốc độ 120 vòng/phút, đặt tối Khối lượng mẫu ban đầu g 30 ngày Thu nhận sinh khối Đánh giá chất lượng sinh khối Sinh khối thu nhận rửa nước bảo quản tủ đông hay sấy khô nhiệt độ 50oC Sinh khối thu nhận đánh giá dư lượng auxin hàm lượng kim loại nặng theo tiêu chuẩn Dược điển Việt Nam Sinh khối thu nhận khơng có dư lượng auxin hàm lượng kim loại nặng đạt tiêu chuẩn Dược điển Việt Nam Sinh khối Quy trình ni cấy rễ bất định điều kiện lỏng lắc 80 Đốt thân từ Đảng sâm in vitro Cảm ứng tạo rễ bất định mơi trường có bổ sung agar 30 ngày Nhân nhanh sinh khối rễ bất định môi trường lỏng lắc 15 ngày Nhân nhanh sinh khối hệ thống ngập chìm tạm thời (TIS) Đốt thân: cắt đoạn cm Mơi trường MS có bổ sung 0,5 mg/L IBA, 30 g/L sucrose, g/L agar, pH 5,8 Điều kiện nuôi cấy: đặt tối Mơi trường SH có bổ sung 0,5 mg/L IBA, 50 g/L sucrose, pH 5,8 Điều kiện ni cấy: máy lắc với tốc độ 120 vịng/phút, đặt tối Khối lượng mẫu ban đầu: g Mơi trường SH có bổ sung 0,5 mg/L IBA, 50 g/L sucrose, pH 5,8 Hệ thống TIS chứa 250 ml môi trường Khối lượng mẫu ban đầu: g Tần suất bơm: giờ/lần Thời gian bơm: phút/lần 35 ngày Sinh khối Sinh khối thu nhận khơng có dư lượng auxin hàm lượng kim loại nặng thấp tiêu chuẩn Dược điển Việt Nam Có chứa polysaccharide lobetyolin Quy trình ni cấy rễ bất định hệ thống ngập chìm tạm thời (Temporary Immersion System - TIS) 81 Đốt thân từ Đảng sâm in vitro Cảm ứng tạo rễ bất định mơi trường có bổ sung agar 30 ngày Nhân nhanh sinh khối rễ bất định môi trường lỏng lắc Đốt thân: cắt đoạn cm Mơi trường MS có bổ sung 0,5 mg/L IBA, 30 g/l sucrose, g/l agar, pH 5,8, đặt tối Mơi trường SH có bổ sung 0,5 mg/L IBA, 50 g/L sucrose, pH 5,8 Điều kiện nuôi cấy: máy lắc với tốc độ 120 vòng/phút, đặt tối Khối lượng mẫu ban đầu g 15 ngày Nhân nhanh sinh khối hệ thống bioreactor lít 35 ngày Sinh khối Hệ thống bioreactor lít chứa 1,5 lít mơi trường: SH có bổ sung 0,5 mg/L IBA, 50 g/L sucrose, pH 5,8 Khối lượng mẫu ban đầu: 15 g Lưu lượng khí: 0,5 lít/phút Sinh khối thu nhận khơng có dư lượng IBA hàm lượng kim loại nặng thấp tiêu chuẩn Dược điển Việt Nam Có chứa polysaccharide lobetyolin Quy trình nuôi cấy rễ bất định hệ thống bioreactor lít 82 Đốt thân từ Đảng sâm in vitro Cảm ứng tạo rễ bất định mơi trường có bổ sung agar 30 ngày Nhân nhanh sinh khối rễ bất định môi trường lỏng lắc Đốt thân: cắt đoạn cm Mơi trường MS có bổ sung 0,5 mg/L IBA, 30 g/L sucrose, g/L agar, pH 5.8 Điều kiện nuôi cấy: đặt tối Môi trường SH có bổ sung 0,5 mg/L IBA, 50 g/L sucrose, pH 5,8 Điều kiện nuôi cấy: máy lắc với tốc độ 120 vòng/phút, đặt tối Khối lượng mẫu ban đầu g 15 ngày Nhân nhanh sinh khối hệ thống bioreactor 30 lít Hệ thống bioreactor 30 lít chứa 15 lít mơi trường: SH có bổ sung 0,5 mg/L IBA, 50 g/L sucrose, pH 5,8 Khối lượng mẫu ban đầu: 120 g Lưu lượng khí: 1,0 lít/phút 35 ngày Sinh khối Sinh khối thu nhận khơng có dư lượng IBA hàm lượng kim loại nặng thấp tiêu chuẩn Dược điển Việt Nam Có chứa polysaccharide lobetyolin Quy trình ni cấy rễ bất định hệ thống bioreactor 30 lít 83 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Bộ Khoa học Công nghệ, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam (2007) Sách Đỏ Việt Nam – Phần II, Thực vật, NXB Khoa học Tự nhiên Công nghệ, Hà Nội Bộ Y Tế (2017) Dược Điển Việt Nam V - Tập 2, Nhà Xuất Bản Y Học, Hà Nội, tr 1156 Bùi Văn Thắng, Cao Thị Việt Nga, Vùi Văn Kiên, Nguyễn Văn Việt (2016) Nhân giống Đảng sâm (Codonopsis javanica (Blume) Hook F et Thomson) kỹ thuật ni cấy mơ, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ lâm nghiệp, 3-9 Cung Hoàng Phi Phượng, Nguyễn Văn Hiếu, Nguyễn Quốc Thiện, Nguyễn Quốc Bình, Dương Hoa Xô (2010) Bước đầu ứng dụng hệ thống nuôi cấy ngập chìm tạm thời cho nhân giống lan Hồ Điệp lai - Phalaennopis huybrid, Hội nghị khoa học công nghệ sinh học thực vật nhân giống chọn tạo giống hoa, NXB Nông nghiệp, - 16 Đinh Thị Hoa Đoàn Thị Thuỳ Linh (2013) Đặc điểm phân bố loài Đảng sâm (Codonopsis javanica (Blume) Hook F et Thoms, 1855) Khu Bảo tồn thiên nhiên Copia, huyện Thuận Châu, tỉnh Sơn La, Báo cáo Hội nghị toàn quốc sinh thái tài nguyên sinh vật lần thứ Đỗ Huy Bích (2003) Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, tập Đồn Trọng Đức (2014) Quy trình kỹ thuật nhân giống Đảng sâm phương pháp nuôi cấy mô Tạp san Xuân Giáp Ngọ, Sở Khoa học Công nghệ tỉnh Kom Tum, 53-55 Đoàn Trọng Đức Trần Văn Minh (2015) Nghiên cứu ảnh hưởng nguồn giống, phương thức trồng đến sinh trưởng, phát triển suất Đảng sâm Việt Nam Kon Tum, Tạp chí Dược liệu, (20) 394-400 Hà Thị Loan, Dương Hoa Xô (2017) Ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy đến nhân nhanh sinh khối rễ tóc sâm Ngọc Linh hệ thống Plantima®, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nơng nghiệp Việt Nam, (79) 45 - 49 10 Hoàng Minh Chung Phạm Xuân Sinh (2002) Bước đầu nghiên cứu thành phần saponin Đảng sâm Việt Nam, Tạp chí Dược liệu, (6) 163 - 165 11 Nguyễn Kim Phi Phụng (2007) Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, NXB TPHCM 12 Nguyễn Phúc Trường (2010) Ứng dụng hệ thống nuôi cấy ngập chìm tạm thời nhân giống kiểng lá, Báo cáo nghiệm thu Trung tâm công nghệ 84 Sinh học Tp HCM, NXB Nông nghiệp, - 15 13 Nguyễn Thị Tường Vi, Hồ Lê Diễm Trinh, Phan Thị Á Kim (2018) Nhân giống in vitro Đảng sâm (Codonopsis javanica (Blume) Hook.f et Thomson) từ mô sẹo, Science and Technology development journal: natural sciences, (4) 56-61 14 Nguyễn Trung Thành, Paek Kee Yoeup (2008) Nhân nhanh rễ bất định Nhân sâm Panax ginseng C.A Meyer: Ảnh hưởng số nhân tố lý hóa lên tăng trưởng sinh khối sản phẩm trao đổi chất ginsenosides Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, Khoa học Tự nhiên Công nghệ, 24 318-323 15 Trần Công Định, Huỳnh Kim Tân, Nguyễn Văn Lợi, Trần Minh Đức (2017a) Đặc điểm sinh thái phân bố loài Đảng sâm (C javanica (Blume) Hook.f.) huyện Tây Giang, tỉnh Quảng Nam, Tạp chí Khoa học đại học Huế: Nơng nghiệp Phát triển nông thôn, 126 (3D) 153 - 164 16 Trần Công Định, Trương Trịnh Nguyễn, Nguyễn Văn Lợi, Trần Minh Đức (2017b) Kiến thức địa loài Đảng sâm (C javanica Blume Hook F.) cộng đồng người Cơ Tu huyện Tây Giang, tỉnh Quảng Nam, Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Nơng nghiệp, 1(2): 257-264 17 Trần Minh Đức, Trần Công Định, Phạm Minh Toại (2016) Ảnh hưởng độ cao so với mặt biến đến sinh trưởng sản lượng Đảng sâm Việt Nam (Codonopsis javanica (Blume) Hook.f.) trồng huyện Tây Giang, tỉnh Quảng Nam, Tạp chí Nơng nghiệp phát triển nông thôn, 22 124-129 18 Trần Thanh Hà, Đỗ Thị Hà, Nguyễn Minh Khởi, Nguyễn Thị Hà, Nguyễn Văn Nghị (2014) Thành phần hóa học rễ Đảng sâm, Tạp chí Dược liệu, 19(4) 35-89 19 Trịnh Thị Hương, Hồ Thanh Tâm, Hà Thị Mỹ Ngân, Ngô Thanh Tài, Nguyễn Phúc Huy, Hoàng Xuân Chiến, Nguyễn Bá Nam, Vũ Quốc Luận, Vũ Thị Hiền, Nguyễn Thị Thúy Hường, Phạm Bích Ngọc, Chu Hồng Hà, Dương Tấn Nhựt (2012) Ảnh hưởng nguồn mẫu, kích thước mẫu số loại auxin lên khả tái sinh rễ bất định sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) nuôi cấy in vitro, Tạp chí Cơng nghệ Sinh học 10(4A) 877-886 20 Trương Hoàng Duy, Lê Phạm Tấn Quốc, Trần Thị Hồng Cẩm, Phạm Thị Kim Ngọc, Đống Thị Anh Đào (2015) Tối ưu hố trích ly thu nhận dịch saponin từ Đảng sâm C javanica (Blume) Hook f enzyme alpha - amylase, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, (99) - 21 Trương Thị Bích Quân, Lê Bửu Thạch, Nguyễn Lê Xuân Bách, Nguyễn Thế Văn, Đặng Minh Trí, Lưu Hồng Trường (2017) Đánh giá trữ lượng đảng sâm (Codonopsis javanica) vườn quốc gia Bidoup-Núi bà, Lâm Đồng, Hội nghị 85 khoa học toàn quốc sinh thái tài nguyên sinh vật lần thứ 7, 1408-1415 22 Trương Thị Đẹp (2007) Thực vật dược, Nhà xuất Giáo dục Hà Nội 23 Võ Thị Bạch Mai (2004) Sự phát triển chồi rễ, Nhà xuất Đại học Quốc gia Tp Hồ Chí Minh 24 Võ Văn Chi (2012) Từ điển thuốc Việt Nam, NXB Y học, Hà Nội 25 Võ Văn Chi Trần Hợp (2002) Cây cỏ có ích Việt Nam, tập 2, NXB Giáo dục Tài liệu tiếng Anh 26 Ahn C.H., Bea K.H., Yi J.S., Choi Y.E (2008) Induction and growth of adventitious roots and bioreactor culture in C lanceolata, Journal of Plant Biotechnology, 35 155 - 161 27 Aitken - Christie J., Davies H.E (1995) Development of asemiautomated micropropagation system, Acta Horticulture, 230 81 ˗ 87 28 Akdemir H., Suzerer V., Onay A., Tilkat E., Ersali Y., Ciftci Y.O (2014) Micropropagation of the pistachio and its rootstocks by temporary immersion system, Plant Cell Tissue and Organ Culture, 117 65 -76 29 Alvard D., Cote F., Teisson C (1993) Comparision of methods of liquid medium culture for banana micropropagation, Plant Cell Tiss Org Cult., 32 55 60 30 Cha A., Choi Y., Jin Y., Sung M.K., Koo Y.C., Lee K.W., Park T (2012) Antilipogenic and anti-inflammatory activities of Codonopsis lanceolata in mice hepatic tissues after chronic ethanol feeding, J Biomed Biotechnol, 30 141395 31 Chen K.N., Peng W.H., Hou C.W., Chen C.Y., Chen H.H., Kuo C.H., Korivi M (2013) C javanica root extracts attenuate hyperinsulinemia and lipid peroxidation in fructose fed insulin resistant rats, Journal of Food and Drug Analysis, 21 (4) 347 - 355 32 Chen M, Xiong YJ, Li XJ, Shen SK, Chen JD (2000) Effect of clematis asiabell (Codonopsis clematidea) and pilose asiabell (Codonopsis pilosula) on SOD and MDA of mouse brain, Chin Tradit Herb Drugs, 31 280-281 33 Cynthia L.M.M., Nurita T.M., Reflini., Condro., Tony L (2015) Micropropagation of embryogenic callus of oil palm (Elaeis guineensis Jacq.) Using Temporary Immersion System, Procedia Chemistry, (14) 122 - 129 34 Druege U., Zerche S., Kadner R., Ernst M (2000) Elation between nitrogen status, carbohydrate distribution and subsequent rooting of chrysanthemum cuttings as affected by preharvest nitrogen supply and cold storage, Annals of 86 botany, 85 687 - 701 35 Escalona M., Lorenzo J.C., González B., Daquinta M., González J.L., Desjardins Y., Borroto C.G (1999) Pineapple (Ananas comosus L Merr) micro propagation in temporary immersion systems, Plant Cell., 18 743 - 748 36 Fett-Neto G., Janette P.F., Luíz W.V.G., Giancarlo P., Regina R.T., Alfredo G.F (2001) Distinct effects of auxin and light on adventitious root development in Eucalyptus saligna and Eucalyptus globulus, Tree physiology, 21 457 - 464 37 Fu PP, Hong T, Yang Z (2008) Effect of polysaccharides from Radix Codonopsis on insulin resistance in diabetic mice, Lishizhen Med Mater Med Res, 19 2414-2416 38 Fu Y.P., Li L.X., Zhang B.Z., Paulsen B.S., Yin Z.Q., Huang C., Feng B., Chen X.F., Jia R.R., Song X., Ni W.Q., Jing B., Wu F.M., Zou Y.F (2018), Characterization and prebiotic activity in vitro of inulin-type fructan from C pilosula roots, Carbohydrate Polymers, 193 212-220 39 Geiss G., Gutierrez L., Bellini C (2009) Adventitious root formation: new insights and perspectives, Annual plant reviews 37 127 - 156 40 Hahn E.J., Bea J.H., Kim Y.S., Yu K.W., Joeng C.S., Paek K.Y (2003) Adventitious root cultures of Panax ginseng C.A Meyer and ginsenoside production through large scale bioreactor system, J Plant Biotechnol, (1) 41 Han L (2010) Experimental study of polysaccharides of Sinkiang lanceolata on mice with cancer cachexin.,J N Pharm, 17-18 42 He, Q., Zhu, E Y., Wang, Z T., Xu, L S., Hu, Z B (2005) Determination of lobetyolin in Radix Codonopsis by high-performance liquid chromatography, Chinese Pharmaceutical Journal, 40(1), 56-58 43 Jeong G.T., Park D.H., Ryu H.W., Lee W.T., Park K., Kang C.H., Hwang B., Woo J.C (2002) Optimum conditions for transformed Panax ginseng hairy roots in flask culture, Faculty of Chemical Engineering, 1134 – 1135 44 Ji J.J., Feng Q., Sun H.F., Zhang X.J., Li X.X., Li J.K., Gao J.P (2019) Response of bioactive metabolite and biosynthesis related genes to methyl jasmonate elicitation in Codonopsis pilosula, Molecules, 24(3) 533-549 45 Jing Y., Li A., Liu Z., Yang P., Wei J., Chen X., Zhao T., Bai Y., Zha L., Zhang C (2018) Absorption of Codonopsis pilosula saponins by coexisting polysaccharides alleviates gut microbial dysbiosis with dextran sulfate sodiuminduced colitis in model mice, BioMed Research International, 1-18 46 Jing Y.H, Shu Z and Katsuko K (2014) HPLC/UV analysis of polyacetylenes, phenylpropanoid and pyrrolidine alkaloids in medicinally used C species, 87 47 48 49 50 51 Phytochem Anal., 25 213-219 Jing Y.H., Na M., Shu Z., Katsuko K., Zhi Y.L., Wei M.F (2015) The genus C (Campanulaceae): A review of phytochemistry, bioactivity and quality control, Journal Nat Med, 69 - 21 Ket N.V., Anh T.T.L., Dung N.H.U (2012) Effecting of sucrose concentrations and inoculum density on adventitiuos root growth in cell suspension culture of Panax vietnamensis and initially growth in a bioreactor, Sout heast - Asian Journal of Sciences, 215 - 222 Kim J.A., Park E.J., Choi Y.E (2012) Induction and proliferation of adventitious roots in Codonopsis spp., Korean Journal of Medicinal Crop Science, 20 (6) 493 - 499 Krishna P.R., Chari M., Kim M.K., Kalaiselvi S., Yang D (2007) Induction of adventitious roots and extraction of codonoposide from C lanceolata, Natural products: An Indian Journal, (3) 129 - 131 Liu C , Chen J, Li E, Fan Q, Wang D, Li P, Li X, Chen X, Qiu S, Gao Z, Li H, Hu Y (2015) The comparison of antioxidative and hepatoprotective activities of Codonopsis pilosula polysaccharide (CP) and sulfated CP, International Immunopharmacology, 24(2) 299-305 52 Liu Y, Zou X, Sun G, Bao Y (2017) Codonopsis lanceolata polysaccharide CLPS inhibits melanoma metastasis via regulating integrin signaling, Int J Biol Macromol, 103 435-440 53 Mitsuhashi K.M., Shibaoka H., Shimokoriyama M (1978) Anatomical and physiological aspects of developmental processes of adventitious root formation in Azukia cuttings, Plant and Cell physiology, 19 867 - 874 54 Moncousin C (1991) Rooting of microcuttings: fundamental aspects, International symposium on plant biotechnology and its contribution to plant development, Multiplication and Improvement, 311 - 318 55 Mordocco A M., Brumbley J A., Lakshmanan P (2009) Development of a temporary immersion system (RITA) for mass production of sugarcane (Saccharum spp interspecific hybrids), In vitro Cellular & Developmental Biology – Plant, 45 (4) 450-457 56 Murashige T., Skoog F (1962) A reivsed medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures, Physioly Plant, 15 473-497 57 Nguyen P.H., Luu D.C., Nguyen Q.B (2014) A survey of traditional medicinal plants used by K’ho people in the buffer zone of Chu Yang Sin National Park, Vietnam, Journal of Vietnamese Environment, 276-280 58 Pavlova A., Georgieva M., Thomas B - Batch and Fed (2007) Batch production of betalains by red beet (Beta vulgaris) hairy roots in a Bubble, 88 Column Reactor, Z Naturforsch, (62) 439 - 446 59 Peak K Y., Murthy H.N., Hahn E.J., Zhong J.J - Large scale culture of ginseng adventitious roots for production of ginsenoside, Biotechnology in China I, (2009) 151-176 60 Phan Xuan Huyen and Dieu-Hien Truong (2015) Effect of culture media on in vitro germination rate and shoot-forming potential of Codonopsis javanica (Blume) Hook f & Thomson artificial seeds, African Journal of Agricultural Research, 10 (52) 4755-4761 61 Robert M.L., Herrera J.L., Contreras F., Cooper K.N (1988) In vitro propagation of agave fourcroydes Lem, Plant Cell tissue and Organ Culture, 37 - 48 62 Schenk R.U., Hildebrandt A (1972) Medium and techniques for induction and growth of monocotyledonous and dicotyledonous plant cell cultures, Canadian Journal Botany 50 199-204 63 Schwambac J., Luciano R.C., Daniel C.P (2005) Carbohydrates as regulatory factors on the rooting of Eucalyptus saligna Smith and Eucalyptus globulus Labill, Plant growth regulation, 45 63 - 73 64 Song D., Wang Z.T., Li L.Y., Zhong G.Y (2008) Protective effect of Lobetyolin on gastric mucosa of experimental gastric ulcer in rats, J Emerg Tradit Chin Med, 17 963-964 65 Syklowska-Baranek K., Furmanowa M (2005) Taxane production in suspension culture of Taxus × Media var Hicksii carried out in flasks and bioreactor, Biotechnology Letters, 27 1301–1304 66 Teisson C., Alvard D (1995) A new concept of plant in vitro cultivation liquid medium: Temporary immersion, current issues in plant molecular and cellular biology, Kluver Academic Publishers, Dordrecht, The Netherlands 105 - 110 67 Ueda J., Tezuka Y., Banskota A.H., Le T.Q., Kim T.Q., Harimaya Y., Saiki I., Kadota S (2002) Antiproliferative activity of Vietnamese medicinal plants, Pharmaceutical society of Japan, 25 (6) 753 - 760 68 Wang J.H., Yuan H., Li X.H (2012) Antioxidant and antifatigue activities of flavonoid from Codonopsis clematidea (Schrenk), Nat Prod Res Dev, 24 10351039 69 Wojciech S., Bogna T., Adam M (2011) Microppagation of Codonopsis pilosula (Franch.) Nannf by axillary shoot multiplication, Acta Biologica Cracoviensia Seres Botanica, 52 (2) 87-93 70 Wu C.H., Dewir Y.H., Hahn E.J., Paek K.Y (2006) Optimization of culturing 89 conditions for the production of biomass and phenolics from adventitious roots of Echinacea angustifolia, Journal of Plant Biology, 49 (3) 193 - 199 71 Xiao Y.H., Fu Y.Q., Xi F.L., Lan S.Z., Yong X.C (2018) Three new polyynes from C pilosula and their activities on lipid metabolism, Molecules, 23 (4) 887 72 Xu A.X., Zhang Z.M., Ge B., Pu J.F (2006) Study effect and its mechanism on resisting senility of Codonopsis pilosula Nannf, Chin J Mod Appl Pharm, 23 729-731 73 Yan H., Liang C., Li Y (2010) Improved growth and quality of Siraitia grosvenorii plantlets using a temporary immersion system, Plant Cell Tissue Organ Cultural, (103) 131 - 135 74 Yang F.R., Li Z.M., Gao J.P (2011) Separation and structural characterization and anti-tumor effect in vitro of polysaccharides from Radix Codonopsis, Lishizhen Med Mater Med Res, 22 2876-2878 75 Yosephine S., Wulan M., Dannis Y.K., Rafika L.K.S., Alfinda N.K (2017) Biomass production of gynura procumbens adventitious roots in different type of liquid culture, Biosaintifika Journal of Biology & Biology Education, (3) 523-529 76 Yu L., Chen H., Lou F.M (2010) Determination of Total Polysaccharide in C tangshen, Guizhou Agricultural Sciences, 190 - 191 77 Yu T.A., Yeh S.D., Cheng Y.H., Yang J.S (2000) Efficient rooting for establishment of papaya plantlets by micropropagation, Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 61 (1) 29-35 78 Yu X., Li L., Han C.J., Zhang Q.G (2011) Effects of C lanceolata total sanponin on apoptosis in HepG - cells, Journal of Jilin University Medicine, 37 (6) 1090 - 1093 79 Zhang M.Z., Peng J.H., Yu Y.J (2010) Study on tissue culture and plantlet regeneration of Codonopsis lanceolata, Acta Botanica Boreali-Occidentalia Sinica, 30 (1) 184-189 80 Zhao J., Zhu W.H., Hu Q (2001) Enhanced catharanthine production in Catharanthus roseus cell cultures by combined elicitor treatment in shake flasks and bioreactors, Enzyme Microbial Technology, 28 (7-8) 673-681 81 Zou Y.F., Zhang Y.Y., Fu Y.P., Inngjerdingen K.T., Paulsen B.S., Feng B., Zhu Z.K., Li L.X., Jia R.Y., Huan C., Song X., Lv C., Ye G., Liang X.X., He C.L., Yin L.Z., Yin Z.Q (2019) A Polysaccharide isolated from Codonopsis pilosula with immunomodulation effects both in vitro and in vivo, Molecules, 24 3632-3645 90 PHỤ LỤC Mơi trường MS (Murashige & Skoog, 1962) Khống đa lượng NH4NO3 KNO3 CaCl2.2H2O MgSO4.7H2O KH2PO4 Khoáng vi lượng KI H3BO3 MnSO4.4H2O ZnSO4.4H2O Na2MoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoCl2.6H2O Na2.EDTA FeSO4.7H2O Vitamin chất hữu khác Myo-Inositol Nicotinic acid Pyridoxine HCl (B6) Thiamine HCl (B1) Glycine mg/l 1650 1900 440 370 170 mg/l 0.83 6.20 22.30 8.60 0.25 0.025 0.025 37.30 27.80 mg/l 100 0.5 0.5 0.1 2.0 Thành phần môi trường SH (Schenk & Hilderant, 1972) Khoáng đa lượng (NH4)H2PO4 KNO3 CaCl2.2H2O MgSO4.7H2O Khoáng vi lượng KI H3BO3 MnSO4.H2O ZnSO4.7H2O NaMoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoCl2.6H2O Na2.EDTA FeSO4.7H2O Vitamin chất hữu khác Myo-Inositol Nicotinic acid Pyridoxine HCl (B6) Thiamine HCl (B1) mg/l 300 2500 200 400 mg/l 1.0 5.0 10.0 1.0 0.10 0.20 0.10 20 15 mg/l 1000 5.0 0.5 5.0 91 Môi trường WPM Đa lượng NH4NO3 Ca(NO3)2.H2O K2SO4 MgSO4 KH2PO4 CaCl2 mg/l 400 386.34 990 180.69 170 72.5 Vi lượng H3BO3 MnSO4.H2O ZnSO4.7H2O Na2MoO4 2H2O CuSO4 5H2O FeSO4 7H2O Na2EDTA 6.2 22.3 8.6 0.25 0.025 27.8 37.3 Vitamin Myo-Inositol Nicotinic acid Thiamine HCl (B1) Pyridoxine HCl (B6) Glycine 100 0.5 1.0 0.5 2.0 Thành phần môi trường B5 Thành phần vi lượng CaCl2 KNO3 MgSO4 NaH2PO4 (NH4)2SO4 Thành phần vi lượng CoCl2.6H2O CuSO4.5H2O FeNaEDTA H3BO3 KI MnSO4.H2O NaMoO4.2H2O ZnSO4.7H2O Vitamin Myo-Inositol Nicotinic acid Thiamine HCl (B1) Pyridoxine HCl (B6) mg/l 113.23 2500.00 121.56 130.44 134.00 mg/l 0.025 0.025 36.70 3.00 0.75 10.00 0.25 2.00 mg/l 100 1.0 10.0 1.0 92